JPH0762153B2

JPH0762153B2 - 酵素含有洗浄剤組成物

Info

Publication number: JPH0762153B2
Application number: JP24678586A
Authority: JP
Inventors: 輝久皐月; 潔諸原; 信博森
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1986-10-17
Filing date: 1986-10-17
Publication date: 1995-07-05
Anticipated expiration: 2010-07-05
Also published as: JPS63101494A

Description

【発明の詳細な説明】

技術分野本発明は、優れた洗浄力を有する酵素を含有する洗浄剤
組成物に関する。従来技術従来、衣類の汚れに対する洗浄力をより向上させた洗浄
剤組成物を得るために、アミラーゼ、プロテアーゼ、セ
ルラーゼなどの酵素を配合することがよく知られている
（特公昭47-45802号公報、同48-30646号、特開昭47-373
3号公報、同52-128904号公報、同53-56204号公報、同56
-129298号公報）。その中でも特にバチルス属（Bacillu
s）から生産されるアルカリプロテアーゼが一般に使用
されており、ノボ・インダストリー社の「アルカラー
ゼ」（Alcalase）、「エスペラーゼ」（Esperase）、
「サビナーゼ」（Savinase）、ギスト・ブロカーズ社の
「マキサターゼ」（Maxatase）、ナガセ生化学工業
（株）の「ビオプラーゼ」等の商品名で市販されてい
る。しかながら、これらの酵素を配合した洗浄剤組成物は、
酵素による洗浄力向上効果はある程度あるものの、いま
だ不十分であり、よりいっそうの洗浄力向上効果を発揮
する酵素含有洗浄剤組成物の開発がまたれていた。発明の目的本発明は、洗浄力向上効果に優れた酵素含有洗浄剤組成
物を提供するものである。発明の構成本発明の酵素含有洗浄剤組成物は、バチルス・エスピー
（Bacillus sp.）Ｙ株（微工研条寄第1029号）から生産
されるアルカリプロテアーゼと、該アルカリプロテアー
ゼ以外の他種の酵素とを含有することを特徴とする。以下、本発明についてさらに詳細に説明する。本発明で用いられるアルカリプロテアーゼは新規な酵素
であり、広く自然界よりアルカリプロテアーゼ産生菌を
検索した結果見い出された、バチルス属（Bacillus）に
属する１菌種、バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ
株から産生されたものである。バチルス・エスピーＹ株は、微工研条寄第1029号（FERM
BP-1029）として工業技術院微生物工業技術研究所に寄
託されている。また、バチルス・エスピーＹ株について
は、特願昭60-123021号として既に出願された出願明細
書に記載されている。以下にその箘学的詳細を説明する。なお、箘学的性質および分類方法は、Bergey′s Manual
of Determinative Bacteriology第８版（1974）、R.E.
Gordenの検索表（1972）に準じて行なった。pH10の培地
は、炭酸ナトリウム１％を加えて調製した。温度および
pHに関する成育最適範囲の測定は、温度勾配バイオフォ
トレコーダーで行なった。 A.形態的性質肉汁寒天培地上で35℃にて２日間培養したとき、以下の
形態的特徴が観察される。１）細胞の形および大きさ：桿菌、0.4-0.5μｍ×1.7-1.9μｍ。２）多形性：なし。３）運動性：周鞭毛を有し運動性あり。４）胞子：胞子を形成し、形成途上で細胞は先端近くか
ら膨張する。成熱した胞子はレモン型であり、大きさ
は、0.7-0.9μｍ×1.0〜1.2μｍ。５）グラム染色性：陽性。６）抗酸性：陰性。 B.培養的性質１）肉汁寒天平板培養： pH7.0にて生育して、円形、偏平状、全縁のコロニーを
形成する。該コロニーの表面は滑らかで光沢有り、該周
辺部は淡褐色、該中心部は半透明の淡褐色。 pH10.0にて生育して、円形、偏平状、全縁のコロニーを
形成する。該コロニーの表面は滑らかで光沢有り、クリ
ーム色。２）肉汁寒天斜面培養： pH7.0およびpH10.0にて拡帯状に生育し、光沢のあるク
リーム色ないし淡褐色のコロニーを形成する。赤褐色の
色素を僅かに生成する。３）肉汁液体培養： pH7.0にて生育するが、菌膜は形成しない。 pH10.0にて生育が良好で、菌膜は形成しない。４）肉汁ゼラチン穿刺培養： pH7.0にて僅かに液化する。 pH10.0にて液化する。５）リトマス・ミルク pH7.0にて生育が非常に悪い。 pH10.0にて生育する。ミルクの凝固は見られない。培地がアルカリ性のため、
リトマスの変色は不明。 C.生理的性質１）硝酸塩の還元：陽性。２）脱窒反応：陰性。３）MRテスト：陰性。４）VRテスト：陰性。５）インドールの生成：陰性。６）硫化水素の生成：陰性。７）デンプンの加水分解：陽性。８）クエン酸の利用:Koserの培地では利用しない。Chri
stensenの培地では僅かに利用する。９）無機窒素源の利用：硝酸塩は利用しない。アンモニ
ウム塩は利用しない。 10）色素の生成：水溶性の赤褐色の色素を菌体組成物と
に生産する。 11）ウレアーゼ：陽性。 12）オキシダーゼ：陽性。 13）カタラーゼ：陽性。 14）生育の温度範囲:33ないし35℃付近（20ないし47
℃）が良好。 15）生育のpH範囲:10.0付近（60ないし12.0）が良好。 16）酸素に対する態度：好気性下でも嫌気性下でも生育
する。 17）Ｏ−Ｆテスト：陰性。 18）糖類から酸およびガスの生成:D−グリコース、Ｄ−
マンノース、Ｄ−フラクトース、麦芽糖、ショ糖、トレ
ハロース、Ｄ−マンニット、デンプンから酸を生成する
が、ガスは生成しない。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロ
ース、Ｄ−ガラクトース、乳糖、イノシット、グリセリ
ンからは酸もガスも生成しない。 D.その他の性質１）塩化ナトリウムに対する耐性:10％NaCl下で生育す
る。以上の性質を総括すると、まず、本菌株は、カラターゼ
陽性、通性好気性で耐熱胞子を有するグラム陽性の桿菌
であることにより、バチルス属の細菌である。本菌株が、バチルス・アルカロフィルスに属すると思わ
れるため、理研、堀越らのバチルス・アルカロフィルス
No.221（ATCC 21522）、No.58（特公昭48-2792号、50-1
6435号参照）、およびNo.D−６（特公昭56-4236参照）
と菌学的性質を比較した。本菌株とバチルス・アルカロ
フィルスNo.21、No.58、No.D−６とは、アルカリ性の培
地（pH10）で良く生育する点で一致するが、無機窒素源
の利用に関して、本菌株が、硝酸塩およびアンモニウム
塩を利用できないのに対して、上記公知の菌株らは、利
用できる。また、生育pHの範囲において、本菌株がpH6
からpH12であるのに対して、No.221は、pH7からpH11で
あり、No.58、No.D−６は、pH7.5からpH11であり、上記
公知の菌株は、pH7.0以下では生育できない点で異な
る。生育温度の範囲においても、本菌株が20℃から47℃
であり、最適温度範囲が33℃から35℃であるのに対し
て、No.221は55℃、No.58は45℃まで生育でき、最適温
度が37℃から40℃であり、No.D−６も最適温度が35℃か
ら40℃と高く、本菌株と異なる。また、本菌株と、糖類
からの酸の生成をNo.D−６と比較すると、本菌株がＬ−
アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−ガラクトース、グ
リセリンから酸を生成しないのに対して、No.D−６は生
成する。更に、本菌株は、10％食塩下でも成育し、上記
公知の菌株とは区別される。このように本菌株は公知のバチルス・アルカロフィルス
の菌株とは異なるが、上述の菌学的性質からバチルス・
アリカロフィルス類緑菌と判断することが妥当である。バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株を培養して得
られるアルカリプロテアーゼは、Ya酵素とYb酵素との２
種類であり、それぞれ特願昭60-123022号および特願昭6
0-286944号に記載されている。バチルス・エスピーＹ株の培養は、例えば次のようにし
て行なうことができる。まず、可溶性デンプン２％、硫
酸マグネシウム0.02％を含む液体培地と、乾燥酵母１
％、リン酸水素カリウム0.1％を含む液体培地とを、そ
れぞれ121℃にて20分間別々に滅菌した後、各20mlを500
mlの坂口フラスコに分注し、更に滅菌済みの炭酸ナトリ
ウムを終濃度１％となるように該フラスコに加え、50ml
の培養液を調製する。該培養液にバチルス・エスピー
（Bacillus sp.）Ｙ株を接種し、該培養液を30℃で15時
間培養し、種培養液を調製する。該種培養液100mlを同
じ組成の培地3.5lの入った酵素タンクに加え、該タンク
に30℃で毎分3.5lの空気を送りながら70時間通気撹拌培
養して微生物液を得る。 Ya酵素とYb酵素との分離・製造法は第１図に示した通り
である。まず、微生物培養液を、10000rpmで５分間遠心
分離し上清を得た。次に上清液を70％飽和の硫安塩析に
かけた。更に得られた沈殿物を20mMトリス−塩酸緩衝液
（Caイオン2mM添加、pH7.2）に溶解し、同緩衝液に対し
て透析し、Ｙ粗酵素（以下、単にＹ酵素と称す）を得
た。続いてＹ酵素溶液を、ジエチルアミノエチル（DEA
E）‐53セルロースのアニオン交換クロマトグラフィー
にかけ10mMホウ酸緩衝液（pH9.3）で溶出させ、非吸着
画分を得た。さらに続いて該非吸着画分を、再び70％飽
和の硫安塩析にかけた。得られた沈殿物を再び20mMトリ
ス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.2）に溶解し、
同緩衝液に対して透析した。更にまた該溶液を、トロパ
ールHW-55のゲル過クロマトグラフィーにかけ、20mM
トリスー塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.2）で溶出
させ、活性のある画分を集めた。さらに該画分を70％飽
和の硫安塩析にかけ、得られた沈殿物を20mMトリス−塩
酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.2）に対して透析し
た。最後に変性蛋白質を除去するために、透析後の活性
画分をミリポアフィスターで過し、精製Ya酵素（以
下、単にYa酵素と称す）を得た。一方、得られたＹ酵素溶液をジエチルアミノエチル（DE
AE）‐53セルロースのアニオン交換クロマトグラフィー
にかけ20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH
7.2）で非吸着画分としてYa酵素を溶出あせた後、０〜
0.5M塩化ナトリウムを含む同緩衝液を用い、直線濃度勾
配で溶出し、Yb酵素の粗画分を得た。該クロマトグラフ
ィーの溶出曲線を第２図に示す。さらに続いて該Yb粗画
分を、再び70％飽和の硫安塩析にかけた。得られた沈殿
物を50mMリン酸緩衝液（pH7.0）に溶解し、同緩衝液に
対して透析した。さらに該溶液をヘモグロビン−アガロ
ース、アフィニティーカラムクロマトグラフィーにか
け、50mMリン酸緩衝液（pH7.0）で溶出させ、活性のあ
る画分を集めた。さらに該画分を70％飽和の硫安塩析に
かけ、得られた沈殿物を20mMトリス−塩案緩衝液（Caイ
オン2mM添加、pH7.2）に溶解し、同緩衝液に対して透析
した。さらに該溶液をトロパールHW-55のゲル過クロ
マトグラフィーにかけ、20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイ
オン2mM添加、pH7.2）で溶出させ、活性のある画分を集
めた。さらに該画分を70％飽和の硫安塩析にかけ、得ら
れた沈殿物を20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添
加、pH7.2）に溶解し、同緩衝液に対して透析し、精製Y
b酵素（以下、単にYb酵素と称す）を得た。精製済みのYa酵素およびYb酵素を試料としたゲル過ク
ロマトグラフィーの溶出曲線を、それぞれ第12図および
第13図に示す。樹脂としてトヨパールHW-55を用い、溶
出液として20mMトリス塩酸緩衝液（pH7.2,Caイオン2mM
を含む）を用い、展開を上昇法により実施した。また、
精製済みのYa酵素を試料とした高速液体クロマトグラフ
ィーの溶出曲線を第14図に示す。機種はウオーターズWI
SP-710Bを用い、I-125カラムを２本直列させ、50mMリン
酸緩衝液で溶出させた。以上から明らかなように、Ya酵
素およびYb酵素は完全に精製された。すなわち、バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株を
培養することによって得られるアルカリプロテアーゼで
あるＹ酵素は、はYa酵素とYb酵素との混合物であり、そ
の比率はYa酵素/Yb酵素＝90/10〜50/50である。次に前述した方法に従って得られたYa酵素、Yb酵素およ
びＹ酵素について説明する。〔１〕基質特異性 Ya酵素およびYb酵素の作用は、蛋白質の加水分解であ
る。その酵素の基質特異性を第１表に示す。また、バチ
ルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株より同時に生産さ
れるYa酵素およびYb酵素との混合物の基質特異性も同様
に評価し、比較した。Ａ酵素［バチルス・リケニフォルミス（Bacillus Liche
niformis）より単離されたアルカリプロテアーゼ（商品
名アルカラーゼ、ノボ社）の活性を100としたときの相
対分解率を次の条件で測定した。条件：温度 35℃ pH 10.5（50mMホウ酸緩衝液）反応時間 60分基質温度１％ただしヘモグロビンは0.4％酵素使用量 100APU/mlただし卵白は500APU/ml 蛋白質分解率すなわち活性の測定は、アンソン−萩原の
変法に従った。反応後過した反応溶液の吸光度を275n
mにて測定した。１分間にチロシン１μｇを遊離させる
酵素活性を１アルカリプロテアーゼ単位（APU）とし
た。この表から、Ya酵素はケラチンに対して特異性が強く、
Yb酵素は卵白に対する特異性が強く、不溶性蛋白質であ
るケラチンに対しては弱いことが分かる。また、Ya酵素
とYb酵素の混合物であるＹ酵素は、公知のＡ酵素より広
範な基質に対して強く作用する特徴を有する。〔２〕至適pHおよび安定pH領域 Ya酵素およびYb酵素の至適pHおよび安定pH領域のグラフ
図を第３図および４図に示す。用いた緩衝液は以下のと
おりである。 pH領域緩衝液 3.5- 5.5 酢酸 4.5- 7.0 クエン酸 6.0- 8.0 リン酸 7.5- 9.0 トリス‐HCl 8.0- 9.0 ホウ酸‐HCl 9.0-10.5 グリシン−NaOH 9.5-11.0 ホウ酸−NaOH 11.0-12.0 リン酸−NaOH 12.0-13.0 KCl-NaOH 至適pHを調べるに当っては、カゼイン0.6％を含む20mM
の各緩衝液に各酵素を約400APU/mlとなるように加え、3
5℃で10分間反応させ活性を測定した。至適pHでの活性
を100とするときの各pHでの相対活性を求めた。安定pH
領域を調べるに当っては、20mMの各緩衝液に各酵素を約
400APU/mlとなるように加え、25℃で24時間インキュー
ベートした後、活性を測定した。インキューベータ前の
活性を100として各pHでの相対活性を求めた。第３図か
ら分かるように、Ya酵素の至適pHは10.0ないし12.5であ
り、安定pH領域は6.5ないし13.0である。第４図から分
かるように、Yb酵素の至適pHは9.0ないし10.0であり、
安定pH領域は6.5ないし12.0である。〔３〕至適温度及び耐熱性 Ya酵素およびYb酵素の至適温度と耐熱性を第５図および
６図に示す。至適温度を調べるに当っては、基質として
0.6％のカゼインを含むpH10.5の緩衝液に各酵素を加
え、10分間各温度で反応させた。35℃での活性を100と
して各温度での相対活性を求めた。耐熱性は次のように
して調べた。50mMホウ酸−NaOH緩衝液（35℃でpH10.5）
に約400APU/mlの酵素を加え、各温度で10分間熱処理
し、氷冷した後、活性を測定した。第５図から分かるよ
うに、Ya酵素の至適温度は70℃であり、55℃の温度まで
活性が維持される。第６図から分かるように、Yb酵素の至適温度は65ないし
70℃の範囲であり、50℃の温度まで100％活性が維持さ
れる。〔４〕紫外線吸収スペクトル Ya酵素およびYb酵素の紫外吸収スペクトルを第７図およ
び第８図に示す。試料を50mMのトリスー塩酸緩衝液（pH
8.0）に溶かし、紫外線吸収スペクトルを測定したとこ
ろ、Ya酵素は276nmの波長で極大吸収を示し、その波長
での吸光係数E^1% _1cmは7.4と計算された。一方、Yb酵素
は278nmの波長で極大吸収を示し、その波長での吸光係
数▲^1% _1cm▼は9.5と計算された。〔５〕金属イオンの影響金属イオンのYa酵素およびYb酵素の活性に与える影響を
調べた。その結果を第２表および第３表に示す。20mMホ
ウ酸−NaOH緩衝液（pH10.5）にYa酵素またはYb酵素を約
400APU/mlを加え、更に各種金属塩を1mMの濃度で添加
し、各所定の条件で処理後残存活性を測定した。数値は
０分の活性を100としてその相対活性で表す。この第２表から、Ya酵素は硫酸銅、硝酸銀、塩化第２水
銀、塩化カドミウムの添加により活性は阻害されるが、
塩化カルシウムの添加では活性の熱に対する安定性が増
すことが分かる。また、第３表から、Yb酵素は硫酸銅、硝酸銀、塩化第２
水銀の添加により、活性が阻止されることが分かる。バチルス属に属する菌の生産するアルカリプロテアーゼ
は、一般にCa²⁺によって熱安定性を増すことから、Ca²⁺
の効果をみるため、5mMのCa²⁺を含む50mMホウ酸−NaOH
緩衝液（35℃でpH10.5）に約400APU/mlの酵素を加え、
各温度で10分間熱処理し、氷冷した後活性を測定して残
存活性を求めた。比較のため、Ca²⁺を加えない条件でも
同時に評価した。その結果を第４表に示す。数値は０分
の活性を100としてその相対活性で表す。 Caイオンの添加により、熱に対する安定性がYa酵素では
約５℃、Yb酵素では約10℃向上することが分かった。〔６〕阻害剤の影響 Ya酵素およびYb酵素に対する各種の阻害剤の影響を調べ
た。条件および方法は以下の通りである。50mMトリス−
塩酸緩衝液（pH7.2）でYa酵素またはYb酵素を800APU/ml
になるよう調製した。各阻害剤を添加して、35℃で30分
間インキュベート後、残存活性を測定した。値は、阻害
剤無添加のものを100とした相対活性で示した。その結
果を第５表に示す。この表から分かるように、Ya酵素およびYb酵素は、カゼ
インを基質とした場合、EDTA（エチレンジアミン四酢
酸）およびPCMB（p-クロロマーキュリー安息考酸）、ア
ンチパイン（Antipain）、キモスタチン（Chymostati
n）では活性が阻害されないが、DFP（ジイソプロピルフ
ルオロリン酸）およびPMSF（フェニルメタンスルフィニ
ルフルオリド）では活性が阻害されることより、活性中
心にセリンを有するプロテアーゼである。〔７〕分子量 Ya酵素およびYb酵素の分子量をゲル過クロマトグラフ
ィーにより調べた。充填剤には、トヨパールHW-55を用
い、20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.
2）を溶出液とした。標準蛋白に以下の蛋白（カッコ内
は分子量）を用いて検量線を作成した。蛋白アルブミン
（43,000）、サーモライシン（37,500）、ズブチリシン
（27,600）、キモトリプシノーゲン（25,700）、ミオグ
ロビン（17,200）、チトクロームＣ（11,700）を用い
た。検量線を第９図に示す。この方法により、Ya酵素の
分子量は21,000、Yb酵素の分子量は40,000と決定した。〔８〕等電点 Ya酵素およびYb酵素の等電点を等電点電気泳動法により
調べた。カラム用担体には、ファルマライト３−10を用
いた。Ya酵素およびYb酵素の等電点電気泳動模様を第10
図および11図に示す。この方法によりYa酵素の等電点は
10.1、Yb酵素の等電点は5.1と決定した。

〔９〕アミノ酸組成 Ya酵素およびYb酵素のアミノ酸組成〔アミノ酸分析器JL
C-200A（日本電子）使用〕を調べた。なお、トリプトフ
ァンはアルカリ分解法、システィンは過蟻酸酸化法によ
り測定した。その組成を公知のプロテアーゼのものと比
較して第６表に示す。その結果、他の酵素と比べてYa酵素はトリプトファン、
セリン、バリンなどYb酵素はトリプトファン、ヒスチジ
ン、アルギニン、アスパラギン酸、グリシン、アラニン
などのアミノ酸組成において顕著な相違が見られる。〔10〕元素分析値 Ya酵素およびYb酵素の元素分析値を第７表に示す。最後にまとめとして、Ya酵素およびYb酵素の各種性状を
Ａ酵素、バチルス属の好アルカリ性細菌の生産する公知
のアルカリプロテアーゼのもと比較して後記の第８表に
示す。他の類似した公知のアルカリプロテアーゼ（Ｅ−1,E−
2,API-21,No,221については第８表の注を参照）と比較
すると、至適pHはＡ酵素、Ｅ−1,E−２およびAPI-21が1
0〜11、No.221が11〜12であり、Ya酵素は10〜12.5と領
域が高pH側に広く、Yb酵素の至適pHは９〜10であり、Ya
酵素と他の公知のアルカリプロテアーゼに比べて低い。次に、至適温度がYa酵素およびYb酵素が70℃付近にある
のに対して、Ａ酵素、No.221は60℃、API-21は45〜50℃
と低く、Ｅ−１、Ｅ−２においては、75℃とYa酵素およ
びYb酵素より高く、この点においても異なる。また、Ya酵素およびYb酵素は5mMCa²⁺イオン存在下で、
Ａ酵素、No.221、API-21の酵素と同様に耐熱性が約５〜
10℃向上するが、バチルスNo.D−６株（第８表の注を参
照）の生産するＥ−１、Ｅ−２はCa²⁺イオンによる熱安
定性の増大が認められない点で異なる。更に、Yb酵素の分子量が４万と公知のアルカリプロテア
ーゼに比べて大きく、等電点も5.1と低いことからも、
明らかに別種のものと言える。以上のことから本酵素は従来知られているアルカリプロ
テアーゼのいずれとも異なる。よって本酵素を新規酵素
と判断することが妥当であり、アリカリプロテアーゼYa
およびYbと命名した。本発明のアルカリプロアーゼ（Ｙ酵素）の配合量は特に
限定されないが、好ましくは、洗浄剤組成物1kg当り50
〜10000APU、さらに好ましくは1000〜5000APUである。本発明に用いられる上記アルカリプロテアーゼ以外の他
種の酵素としては、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアー
ゼ、セルラーゼなどが挙げられるが、その中でもバチル
ス属（Bacillus）から生産されるアルカリプロテアーゼ
が好適であり、ノボインダストリー社の「アルカラー
ゼ」（Alcalase）、「エスペラーゼ」（Esperase）、
「サビナーゼ」（Savinase）、ギストブロカーズの「マ
クサターゼ」（Maxatase）、「マクサカール」（Maxaca
l）、ナガセ生化学工業の「ピオプラーゼ」等の商品名
で市販されている。これらの酵素は１種または２種以上で洗浄剤組成物に配
合される。この配合量は特に限定されないが、好ましく
は0.05〜10wt％、さらに好ましくは0.1〜5wt％の範囲で
洗浄剤組成物に配合される。本発明の洗浄剤組成物の中には、さらに必要に応じて任
意成分を配合することができる。任意成分としては、一
般に洗浄剤組成物に用いられる界面活性剤、ビルダー、
再汚染防止剤、漂白剤、酵素、蛍光増白剤、ハイドロト
ロープ、無機塩、香料などがあげられる。界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤、ノニオン
性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤
または双性イオン界面活性剤などが用いられる。アニオ
ン性界面活性剤としては、通常のスルホネート系、サル
フェート系、ホスフェート系のアニオン性界面活性剤お
よび石鹸が使用される。スルホネート系アニオン性界面
活性剤としては、C_8〜22の直鎖または分枝鎖のアルキル
ベンゼンスルホン酸塩、C_8〜22の直鎖アルキルスルホン
酸塩、C_8〜22の長鎖オレフィンスルホン酸塩などが挙げ
られる。また、サルフェート系アニオン性界面活性剤と
しては、C_8〜22の直鎖または分枝鎖のアルキルないしア
ルケニル硫酸エステル塩、C_8〜22のポリオキシエチレン
（EO＝１〜７モル）直鎖または分枝鎖のアルキルない
しアルケニルエーテル硫酸エステル塩、C_8〜22のポリオ
キシエチレン（EO＝１〜７モル）直鎖または分枝鎖の
アルキルフェニルエーテル硫酸エステル塩などが挙げら
れる。ここでEOは、エチレンオキシドの平均付加モル
数を示す。また、ホスフェート系アニオン性界面活性剤
としては、C_8〜22のモノアルキル（またはアルケニ
ル）、ジアルキル（またはアルケニル）あるいはセスキ
リン酸塩、C_8〜22のポリオキシエチレン（EO＝１〜７
モル）モノアルキル（またはアルケニル）、ジアルキル
（またはアルケニル）あるいはセスキリン酸塩などが挙
げられる。石鹸としては、C_8〜24の飽和または不飽和脂
肪酸塩が挙げられる。これらのアニオン性界面活性剤の
対イオンとしての陽イオンは、例えばナトリウム、カリ
ウム、マグネシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ
土類金属イオン、モノエタノールアミン、ジエタノール
アミン、トリエタノールアミンなどのアルカノールアミ
ン、アンモニウムなどである。ノニオン性界面活性剤としては、C_8〜22のポリオキシエ
チレン（EO＝１〜25モル）直鎖または分枝鎖のアルキ
ルまたはアルケニルエーテル、C_8〜18のポリオキシエチ
レン（EO＝１〜25モル）アルキルまたはアルケニルフ
ェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピ
レンブロックコポリマーなどのオキシアルキレン付加化
合物、C_8〜24の飽和または不飽和脂肪酸アルカノールア
ミドまたはそのアルキレンオキサイド付加物、C_12〜14
の第三級アミンオキシドなどが挙げられる。両性界面活性剤としては、ジメチルジアルキル
（C_8〜18）アルキルカルボキシベタイン、ジアルキル
（C_8〜18）アミノアルキレンカルボン酸塩、２−アルキ
ル−１−カルボキシ−１−ヒドロキシエチルイミダゾリ
ウムベタインなどが挙げられる。カチオン性界面活性剤としては、下記の一般式（Ｉ）、
（II）、（III）で表されるものが挙げられる。（式中のR₁、R₂、R₃、R₄の少なくとも１つはC_12〜24の
アルキルまたはアルケニル基であり、その他はC_1〜4の
アルキル基またはヒドロキシアルキル基あるいはベンジ
ル基を表わし、Ｘはハロゲンを表わす。）（式中のR₅とR₆はC_12〜24のアルキル基またはアルケニ
ル基、R₇はC_1〜4のアルキル基またはヒドロキシアルキ
ル基あるいはベンジル基、R₆はＨまたはCH₃、ｎは１〜
５の整数、Ｘはハロゲンを表わす。）（式中のR₉とR₁₀はC_12〜24のアルキル基またはアルケニ
ル基、ｌおよびｍは１〜20の整数、Ｘはハロゲンを表わ
す。）これらの界面活性剤はそれぞれ単独で用いてもよいし、
２種以上組合せてもよく、その配合量は10〜50wt％が適
当であり、好ましくは20〜40wt％である。ビルダーとしては、オルソリン酸塩、ピロリン酸塩、ト
リポリリン酸塩、メタリン酸塩、ヘキサメタリンル酸塩
等のリン酸塩；ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢
酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸、ジエチ
レントリアミン五酢酸等のアミノカルボン酸またはこれ
らの塩；クエン酸、ジグリコール酸、リンゴ酸、シュウ
酸、酒石酸、コハク酸などの多価カルボン酸またはこれ
らの塩；ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、アクリル
酸共重合体、ポリマレイン酸、ポリフマル酸、無水マレ
イン酸共重合体などの高分子電解質またはこれらの塩；
ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、カル
ボキシメチルセルロースなどの非電解離高分子；一般式（IV）で表わされる結晶性または無定形アルミノケイ酸
塩、炭酸塩などの無機塩；トリエタノールアミン、ジエ
タノールアミン、モノエタノールアミンなどのアルカノ
ールアミンが挙げられる。ｘ（M₂O又はＭ′Ｏ）・Al₂O₃・ｙ（SiO₂）・ｗ（H₂O）
…… （IV）（式中のＭはアルカリ金属、Ｍ′はカルシウムと交換可
能なアルカリ土類金属、ｘ、ｙ、ｗは各成分のそれぞれ
のモル数を表わし、一般的には、ｘは0.7〜1.5yは１〜
３、ｗは任意の数である。）これらビルダーは１種または２種以上組合せて用いら
れ、洗浄剤組成物中に好ましくは１〜50wt％、さらに好
ましくは５〜30wt％配合させる。再汚染防止剤として
は、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコ
ール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンな
どが、蛍光増白剤としては、4,4′−ビス（２−スルホ
スチリル）−ビフェニル塩、4,4′−ビス（４−クロロ
−３−スルホスチリル）−ビフェニル塩、２−（スチル
フェニル）ナフトチアゾール誘導体、4,4′−ビス（ト
リアゾール−２−イル）スチルベン誘導体、ビス（トリ
アジニルアミノ）スチルベンジスルホン酸などが、ハイ
ドロトロープとしては低級アルコール、多価アルコー
ル、低級アリールスルホン酸またはその塩などが挙げら
れ、これらの各成分はいずれもそれぞれ単独で用いても
よいし、２種以上組合せてもよい。発明の効果本発明によれば、バチルス・エスピーＹ株から生産され
る新規なアルカリプロテアーゼとこれ以外の他種の酵素
とを併用して用いることにより、優れた洗浄力向上効果
が発揮され、従来知られていた酵素含有洗浄剤組成物に
比べて顕著に洗浄力が改良された極めて実用性の高い洗
浄剤組成物が実現できる。次に、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
各実施例における評価は、以下の試験方法に従って行な
った。・洗浄力 US.Testing社のTerg-O-Tometerを洗浄装置として使用
し、これにタンパク質配合湿式人工汚垢布10枚とセバム
布、洗浄メリヤス布を入れ浴比30倍に合わせ、120r.p.m
で25℃10分間洗浄する。洗浄後は、所定の洗浄濃度のも
の900mlを用い、すすぎは900mlの水で３分間行なう。使
用水は３°DHのものを用いた。洗浄力は次式で算出す
る。なお、本洗浄力試験法は、油化学30,432（1981）「新し
い人工汚垢に関する研究（第１報）」に準ずる。実施例１ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステルナト
リウム塩（炭素数13、直鎖率50％、EO＝３）20wt％、
ポリオキシエチレンアルキルエーテル（炭素数12〜13、
直鎖率80％、EO＝15）15wt％を基準配合組成とし、こ
れに第９表に示すようにアルカノールアミン、パラトル
エンスルホン酸、酵素を含有させた各種液体洗浄剤組成
物を調製し、それぞれの組成物の洗浄力を評価し、その
結果を第９表に示した。実施例２直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム10wt％、α
−オレフィンスルホン酸ナトリウム10wt％、ケイ酸ナト
リウム（SiO/Na₂Oのモル比２）10wt％、炭酸ナトリウム
10wt％、ポリエチレングリコール（＃6000）1wt％、牛
脂石鹸1wt％、ゼオライト（4A型）15wt％、水5wt％を基
準配合組成とし、第10表に示すように酵素を含有させた
粒状洗浄剤組成物を調製し、それぞれの組成物の洗浄力
の評価し、その結果を第10表に示した。

【図面の簡単な説明】

第１図はYa酵素およびYb酵素の精製段階を示すフローシ
ートである。第２図はＹ酵素のDEAE-53セルロースのアニオン交換ク
ロマトグラフィーにかけた際の溶出曲線を示すグラフで
ある。第３図はYa酵素の至適pHおよび安定pH領域を、第４図は
Yb酵素の至適pHおよび安定pH領域を示すグラフである。第５図はYa酵素の至適温度および耐熱性を、第６図はYb
酵素の至適温度および耐熱性を示すグラフである。第７図はYa酵素の紫外線吸収スペクトル曲線を、第８図
はYb酵素の紫外線吸収スペクトル曲線を示すグラフであ
る。第９図はYa酵素およびYb酵素の分子量決定の際の検量線
を示すグラフである。第10図はYa酵素の、第11図はYb酵素のそれぞれ等電点電
気泳動模様を示すグラフである。第12図はYa酵素の、第13図はYb酵素のそれぞれゲル過
クロマトグラフィー溶出曲線を示すグラフである。第14図はYa酵素の高速液体クロマトグラフィー溶出曲線
を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株
（微工研条寄第1029号）から生産されるアルカリプロテ
アーゼと他種の酵素とを含有することを特徴とする酵素
含有洗浄剤組成物。