JPH0710734A

JPH0710734A - 化粧料

Info

Publication number: JPH0710734A
Application number: JP5173788A
Authority: JP
Inventors: Masayuki Iwata; 雅之岩田; Kenta Tabuchi; 健太田淵; Makiko Yanagisawa; 真樹子柳沢
Original assignee: Dowa Mining Co Ltd
Current assignee: Dowa Holdings Co Ltd
Priority date: 1993-06-21
Filing date: 1993-06-21
Publication date: 1995-01-13

Abstract

(57)【要約】【目的】日焼けによる色黒やシミ、ソバカス等の原因
となるメラニンの生成を抑え、皮膚に適用したときに沈
着した色素の淡色化の効果を持つ成分を配合して、色白
な美肌をつくることのできる化粧料を提供すること。【構成】牛乳成分を主成分とする培地に、ケフィア粒
から分離したサッカロマイセス属酵母を接種し培養を行
ない、得られた培養液から酵母菌体を除去することによ
って調製される発酵液を配合して化粧料とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、優れた皮膚美白効果、
活性酸素消去効果および細胞賦活効果を有する化粧料に
関し、さらに詳しくは、サッカロマイセス属酵母培養液
から得られた発酵液を有効成分として配合した化粧料に
関する。・

【０００２】

【従来の技術】一般に、日焼けによる色黒、シミ、ソバ
カス等は、黒褐色の色素であるメラニンの生成により生
じるものと考えられており、このメラニンは、皮膚が紫
外線などの外的刺激を受けると、皮膚のメラニン細胞中
に存在するチロシナーゼ（チロシン酸化酵素）が活性化
し、たんぱく質構成アミノ酸の一種であるチロシンが酸
化されて生成する。このことから、メラニン生成に関与
するチロシナーゼの活性を抑制することにより肌を白く
する効果が期待されるため、チロシナーゼ活性抑制成分
の化粧料への配合が提唱されていた。

【０００３】しかしながら、チロシナーゼ活性抑制効果
を示すものの、Ｂ１６メラノーマ培養細胞においてメラ
ニン生成抑制効果が弱かったり、実際に皮膚に適用した
場合、沈着した色素の淡色化の効果が充分でない化粧料
が多かった。

【０００４】実際に化粧料を皮膚に適用した場合に美白
効果を発揮させるためには、上述のチロシナーゼ活性抑
制効果やメラニン生成抑制効果のみでは不充分であり、
これらの効果の他、活性酸素を消去することによる色素
沈着の抑制や表皮細胞の賦活によるメラニン排泄の促進
などの効果も必要とされている。

【０００５】一方、酵母を利用する化粧料として特開昭
６１−５３２０８号公報「皮膚化粧料」、特開昭６１−
２６０００９号公報「酵母抽出液」、特開昭６２−２３
４００７号公報「酵母の生産する抗菌物質を含有する皮
膚化粧品」、特開昭６３−２７７６０５号公報「化粧
料」、特開昭６４−６３５０５公報「化粧料」や特開平
３−１６３１６８号公報「赤色色素とその製造方法なら
びに飯食品または化粧料」などによって公知であるが、
これら従来の酵母を利用した化粧料は、ビール酵母、パ
ン酵母の抽出物を利用したものが多く、美白効果を持た
ないものが多いのが現状である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上述の従来
の技術の問題点を解決し、チロシナーゼ活性抑制、メラ
ニン生成抑制、活性酸素消去や細胞賦活に基づく優れた
皮膚美白効果を有し、且つ安全な化粧料を提供すること
を目的とするものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者等は斯かる課題
を解決するために鋭意研究したところ、サッカロマイセ
ス属酵母培養液から得られた発酵液が上述に示す諸効果
を併せ有することを見出し、本発明を提供することがで
きた。

【０００８】すなわち、本発明は、牛乳成分を主成分と
する培地に、ケフィア（Kefir ）粒から分離したサッカ
ロマイセス（Saccharomyces ）属酵母を接種し培養を行
い、得られた培養液から酵母菌体を除去することによっ
て調製された発酵液を配合して成ることを特徴とする化
粧料に関するものである。

【０００９】

【作用】本発明で使用する酵母は、コーカサス地方が発
祥の地と考えられている伝統的な発酵乳ケフィアのスタ
ータであるケフィア粒から分離した酵母であり、醸造用
酵母やパン酵母と同様に人類が長期間に渡って食用に供
して来た安全性の高い酵母である。

【００１０】本発明においては、クリスチャン・ハンセ
ン社製の市販ケフィア粒から分離した乳糖資化性サッカ
ロマイセス属の酵母を用いることにした。

【００１１】この場合、上記酵母を培養するための培地
としては、牛乳、あるいは５〜２０％還元脱脂乳を使用
し、次いで、該酵母を接種して２０〜３０℃の温度で、
２〜７日間攪拌培養あるいは通気攪拌培養する。

【００１２】次いで得られた培養液をそのままただちに
遠心分離機や濾過によって酵母菌体やカゼイン等の不溶
成分を除き、目的の発酵液を得るが、この場合、得られ
た培養液１容量部に対して０．５〜２容量部のメタノー
ルやエタノールを単独あるいは混合液とした溶剤を添加
して２０〜４０℃の温度で、２〜２４時間攪拌した後、
遠心分離機や濾過によって酵母菌体やガゼイン等の不溶
成分を除いて、目的の発酵液を得てもよい。

【００１３】このようにして得られた発酵液は、チロシ
ナーゼ活性抑制効果、Ｂ１６メラノーマ細胞におけるメ
ラニン生成抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活効果
および茶色モルモットの皮膚における沈着色素の淡色化
効果を有することが、本発明者の試験によって確認され
ている。

【００１４】この発酵液を、化粧水、クリーム、乳液、
パック等の中に０．０５〜１０％配合することによっ
て、皮膚美白効果、活性酸素消去効果および細胞賦活効
果を有する化粧料を得ることができる。

【００１５】以下、実施例により本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるもので
はない。

【００１６】

【実施例１】ケフィア粒からサッカロマイセス属酵母の
分離。

【００１７】クリスチャン・ハンセン社（デンマーク国
コペンハーゲン）により入手したケフィア粒を、１０５
℃で２０分間殺菌した１０％還元脱脂乳に接種し、２０
〜２２℃で毎日植え継ぎ、ケフィア粒を活性化させた。
次いで、活性化したケフィア粒２ｇを滅菌した乳鉢に採
取し、滅菌生理食塩水２mlを加え、ケフィア粒を充分に
摩砕した。

【００１８】次に、微細化したケフィア粒を含む懸濁液
を滅菌生理食塩水で１０段階に希釈し、適当な希釈段階
の希釈液０．１mlをあらかじめ作製しておいたＹＭ寒天
培地（理化学研究所発行微生物株カタログ第５版、１９
９２年、３９６ページ記載）上に塗布し、２５℃で４日
間培養した。

【００１９】光学顕微鏡を用いて、生じたコロニーの中
から楕円形を示す酵母菌を２０株分離し、それぞれ、あ
らたなＹＭ寒天培地でシングルコロニーアイソレーショ
ンを３回繰り返して純化した。このようにして得られた
分離株のうち、任意の１株を代表株サッカロマイセス属
酵母菌Ｙ１４株（工業技術院生命工学工業技術研究所寄
ＦＥＲＭＰ−１３６２７号）として用いることとした。

【００２０】このサッカロマイセス属菌Ｙ１４株の菌学
的性質は、下記の通りであった。

【００２１】・形状楕円形・増殖様式出芽・ＹＭ寒天培地状のコロニーの性状円形、白色・乳糖資化性あり

【００２２】

【実施例２】酵母発酵液の調製。

【００２３】１０％還元脱脂乳２リットルを１１０℃で
２０分間高圧滅菌したものを培地とした。次いで該培地
に、予め同様の培地５０mlを用いて前培養しておいたサ
ッカロマイセス属酵母Ｙ１４株の培養液を接種し、２５
℃で５日間通気攪拌培養した（通気量２リットル／分、
回転数２００回転／分）。

【００２４】培養終了後、培養液に３リットルのエタノ
ールを加え、２５℃で１８時間攪拌した。次いで、この
液を遠心分離（８，０００×ｇ、１５分間）により約
４．４リットルの上清を得、さらにこの上清に１規定塩
酸を適量添加することによってｐＨを４．６に調整し、
−２０℃で１８時間放置した後、濾過によって沈殿物を
除き濾液を得た。

【００２５】次いで、この濾液に１規定水酸化ナトリウ
ム水溶液を適量添加することによってｐＨを６．８に調
整し、−２０℃で１８時間放置した後、濾過によって沈
殿物を除き、淡黄色透明な酵母発酵液を４．２リットル
得た。

【００２６】

【実施例３】チロシナーゼ活性抑制率の測定試験。

【００２７】先ず、実施例２で得られた酵母発酵液１m
l、２ml、３ml、４ml、５mlを減圧乾燥した後、それぞ
れに０．１mlの蒸留水を添加して溶解し、これらの溶液
を以下の試験における試験溶液とした。

【００２８】試験管に１００mMコハク酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ５．５）１．８mlと、２７０units ／mlマッシ
ュルームチロシナーゼ（シグマ社製）溶液０．１mlおよ
び上記の試料溶液０．１mlをそれぞれ個別に入れて混合
し、３０℃の恒温水槽で１５分間インキュベートした。

【００２９】次いで、この個別の各試験管に６mM Ｌ−
ＤＯＰＡ溶液（和光純薬工業製：上記１００mMコハク酸
ナトリウム緩衝液に溶解したもの）１mlを加えて攪拌し
た後、この各試験管を３０℃の恒温室中に設置した往復
振とう機に約４５°傾けてセットし、４０分間振とう
（往復回数１５０回／分）した。その後、分光光度計を
用いて４７５nmの吸光度を測定し、その測定値を（Ａ）
とした。

【００３０】一方、対照液として、試料溶液の代わりに
蒸留水を加えたこと以外は上記と同様にして４７５nmの
吸光度を測定し、その測定値を（Ｂ）とした。また、Ｌ
−ＤＯＰＡ溶液の代わりに上記コハク酸ナトリウムを加
えたこと以外は上記と同様にして４７５nmの吸光度を測
定し、その測定値を（Ｃ）とした。

【００３１】なお、試料溶液のチロシナーゼ活性抑制率
の算出は、以下の計算式を用いて行ない、その結果を表
１に示した。チロシナーゼ活性抑制率（％）＝｛１−（Ａ−Ｃ）／
Ｂ｝×１００

【００３２】

【表１】

【００３３】

【実施例４】Ｂ１６メラノーマ細胞におけるメラニン生
成抑制率の測定試験。

【００３４】先ず、実施例２で得た酵母発酵液１ml、２
ml、３ml、４ml、５mlを減圧乾燥した後、それぞれ０．
１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以下の試験にお
ける試料溶液とした。

【００３５】次いで１０％ウシ胎児血清を含むイーグル
ＭＥＭ培地に、メラニンを生成するマウス由来の悪性黒
色腫胞であるＢ１６メラノーマ細胞（Ｂ１６−ＦＯ．Ａ
ＴＣＣＮｏ．ＣＲＵ−６３２２）を終濃度３×１０³
／mlとなるように接種した後、この培地を６ウェルプレ
ート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに６ml入れ、ＣＯ
₂インキュベーター（５％ＣＯ₂、３７℃）内で５日間
培養した。

【００３６】次いで、この培地を０．０３％ティオフィ
リン（シグマ社製）を含む上記組成の新規イーグルＭＥ
Ｍ培地（６ml）に交換し、各ウェルに上記試料溶液
（０．１ml）、あるいは対照として用いた物質の溶液を
添加した後、さらに３日間培養した。

【００３７】培養終了後、培地を捨てて、各ウェルに１
mlの生理食塩水を加え、スクレーパーを用いてウェルの
底に付着している細胞を書き取るように懸濁させ、次い
でピペットを用いて該細胞懸濁液をマイクロ遠心チュー
ブ（１．５ml容量、エッペンドルフ社製）に移し、遠心
分離（１，０００×ｇ、１５分間）した。

【００３８】次いで遠心分離後の上清を除いた後、終容
量１mlとなるように生理食塩水を加え、ペレットとなっ
た細胞を懸濁し、細胞懸濁液となし、該細胞懸濁液に１
０％ＳＤＳ溶液２０μｌを加えて激しく攪拌し、細胞を
溶解させた。

【００３９】次いで分光光度計を用いて上記の細胞溶解
液の２６０nmの吸光度（Ａ）と４７５nmの吸光度（Ｂ）
とをそれぞれ測定した。一方、対照として試料溶液の代
わりに滅菌水を添加して上記同様の試験を行い、２６０
nmの吸光度（Ｃ）と４７５nmの吸光度（Ｄ）とを測定し
て、以下の計算式を用いてメラニン抑制率の算出を行
い、その結果を表２に示した。

【００４０】メラニン生成抑制率（％）＝｛１−（Ｂ／
Ａ）／（Ｄ／Ｃ）｝×１００

【００４１】

【表２】

【００４２】

【実施例５】茶色モルモットにおける沈着色素の淡色化
効果の測定試験。

【００４３】Ａ−１系茶色モルモット（雄、実験開始時
体重４００ｇ）の背部を剃毛して皮膚を露出させ、紫外
線（波長３１２nm、強度４２０mJ）を１日１回照射し、
これを５日間繰り返した。その後、無処置で飼育を続
け、７日後に皮膚の色素沈着を得た。

【００４４】次に、色素沈着部位を２cm×２cmの正方形
に区画し、１区画に対して、実施例２で得られた酵母発
酵液を１日１回５０μｌ塗布し、これを２０日間繰り返
した。また対照として、６０％エタノール溶液、蒸留水
も同様に塗布して色素沈着の淡色化効果を求めた。

【００４５】この場合、色素沈着の淡色化効果は、上記
塗布試料を２０日間塗布し、以下に示す判定基準にした
がって肉眼判定をすることによって求め、その結果を表
３に示した。

【００４６】判定基準０：無塗布部位と比べ、色素沈着の差が認められな
い。１：無塗布部位と比べ、わずかに沈着色素の淡色化
が認められる。２：無塗布部位と比べ、中程度の沈着色素の淡色化
が認められる。３：無塗布部位と比べ、顕著な沈着色素の淡色化が
認められる。

【００４７】

【表３】

【００４８】

【実施例６】活性酸素消去効果の測定試験。

【００４９】先ず、実施例２で得た酵母発酵液１ml、２
ml、３ml、４ml、５mlを減圧乾燥した後、それぞれ０．
１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以下の試験の試
料溶液とした。

【００５０】活性酸素消去効果の測定法は、スーパーオ
キサイド・ディスムターゼ（ＳＯＤ）の活性測定法のう
ち、チトクロームＣを用いる方法に準じて、以下のよう
に行なった。

【００５１】分光光度計キュベット（４ml容量、光路１
cm）に、１００mMトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．８）を
２．６ml、１mMチトクロームＣ溶液（上記トリス塩酸緩
衝液に溶解したもの）を０．１ml、キサンチンオキシダ
ーゼ溶液（ベーリンガーマンハイム社製、製品番号１１
０４３４を上記トリス塩酸緩衝液で８０倍に希釈したも
の）を０．１ml、試料溶液を０．１ml、および１５mMキ
サンチン溶液（０．０２５規定ＮａＯＨ溶液に溶解した
もの）を０．１ml加え、攪拌した後、３０℃の恒温キュ
ベットホルダーをセットした分光光度計により、５５０
nmの吸光度の変化（増加）を測定し、その増加速度の初
速をＶとした。

【００５２】一方、対照として、試料溶液の代わりに蒸
留水０．１mlを加えた場合についても同様に吸光度の変
化を測定し、そのときの吸光度の増加速度の初速をＶ₀
として、以下の計算式を用いて活性酸素消去率の算出を
行い、その結果を表４に示した。

【００５３】活性酸素消去率（％）＝（１−Ｖ／Ｖ₀）×１００

【００５４】

【表４】

【００５５】

【実施例７】細胞賦活効果の測定試験。

【００５６】先ず、実施例２で得た酵母発酵液１ml、２
ml、３ml、４ml、５mlを減圧乾燥した後、それぞれ０．
１mlの蒸留水に溶解し、これらの溶液を以下の試験の試
料溶液とした。

【００５７】１０％ウシ胎児血清を含むイーグルＭＥＭ
培地に、ヒト由来正常繊維細胞（ＣＣＤ−４５ＳＫ．Ａ
ＴＣＣＮｏ．ＣＲＬ−１５０６）を終濃度１×１０⁴
／mlとなるように接種した後、この培地を６ウェルプレ
ート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに５ml入れ、ＣＯ
₂インキュベーター（５％ＣＯ₂、３７℃）内で２４時
間培養し、次いで、培地を１％ウシ胎児血清を含むイー
グルＭＥＭ培地に交換し、各ウェルに上記試料溶液
（０．１ml）、あるいは対照として蒸留水の０．１mlを
添加し、さらに５日間培養した。

【００５８】培養後、培地を捨て、各ウェルに０．２５
％トリプシン液（コージンバイオ社製）１mlを入れ、細
胞表面を洗った。トリプシン液をを捨て、もう一度新し
いトリプシン液を１ml入れ、同様の操作をした後トリプ
シン液を捨て、プレートをＣＯ₂インキュベーターに入
れ、２０分間保温した後、各ウェルに生理食塩水５mlを
入れ、緩やかにピペッティングし、細胞を懸濁した後、
細胞濃度を測定した。

【００５９】細胞賦活効果は、対照実験区の細胞濃度を
１００とした場合の試料溶液添加実験区の細胞濃度で表
わし、その結果を表５に示した。

【００６０】

【表５】

【００６１】

【実施例８】化粧水の組成。

【００６２】実施例２で得られた酵母発酵液を用い、以
下に示すような配合の化粧水を製造することができる。

【００６３】（重量％）・酵母発酵液１０・グリセリン５・ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート１．５・香料適量・防腐剤適量・色素適量・精製水残部

【００６４】

【発明の効果】上述のように本発明による酵母発酵液
は、チロシナーゼ活性抑制効果、メラニン生成抑制効
果、活性酸素消去効果、細胞賦活効果および茶色モルモ
ットにおける沈着色素の淡色化効果を有しており、この
酵母発酵液を配合した化粧料は優れた皮膚美白効果を発
揮するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 35/72 ＡＤＳ 7431−4ＣＡＥＤ 7431−4ＣＣ１２Ｐ 1/02 Ｚ 7417−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:85）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】牛乳成分を主成分とする培地に、ケフィ
ア（Kefir ）粒から分離したサッカロマイセス（Saccha
romyces ）属酵母を接種し培養を行い、得られた培養液
から酵母菌体を除去することによって調製された発酵液
を配合して成ることを特徴とする化粧料。