JPH0670019B2

JPH0670019B2 - 新抗生物質ｓｆ２１９７ｃ物質およびその製造法

Info

Publication number: JPH0670019B2
Application number: JP18728389A
Authority: JP
Inventors: 昭一天野; 徹佐々木; 慎二宮道; 喬庄村; 正次瀬崎; 重治井上
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1989-07-21
Filing date: 1989-07-21
Publication date: 1994-09-07
Anticipated expiration: 2009-09-07
Also published as: JPH0353891A

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は新抗生物質SF2197C物質，およびアクチノマデ
ュラ属に属する微生物による新抗生物質SF2197C物質の
製造法に関するものである。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］従来，微生物が生産する種々の抗生物質が知られてお
り，医薬品，動物薬，農薬等の分野で実用化されてい
る。しかしながら，耐性菌の出現等の問題から現在も新
規な抗生物質の出現が常に求められている。

［課題を解決するための手段］本発明者らは，先に特定の微生物を培養することによ
り，強い抗菌作用を有する物質が培養液中に生産，蓄積
されることを見いだし，その有効物質を採取することに
成功し,SF2197A物質およびＢ物質と命名し特許出願を行
った（特開昭60-83585および特開昭61-141889）。本発
明者らはこれと同一菌株の培養液中に他の新規な有効物
質が生産されていることを見いだし，該物質を単離し抗
生物質SF2197C物質と命名した。

本発明は上記の知見に基づいて完成されたものである。

即ち，本発明の第１の要旨は，新抗生物質SF2197C物質
に関する発明であって，本物質の理化学的および生物学
的性状は次の通りである。

（１）SF2197C物質の理化学的性状１）外観：無色針状結晶２）融点:54℃ ３）比旋光度：▲〔α〕²⁰ _D▼＝−37.2°（cl,メタノー
ル）４）元素分析値：炭素59.6％，水素9.3％，窒素11.3％５）質量分析:FD−MSにより分子イオンピークm/z440
(M⁺)が認められた。

６）分子式：C₂₂H₄₀N₄O₅ ７）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さない。

８）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである。

９）¹H−NMRスペクトル：第２図に示す通りである。

10）¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す通りである。

11）溶解性：メタノール，クロロホルム，アセトン，酢
酸エチルに可溶。水,n−ヘキサンに不溶 12）呈色反応：レミュー，ヨウ素試薬および塩化第二鉄
試薬に陽性。ニンヒドリン試薬に陰性。

13）薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層（メルク社製,Art5714）を使用し，展開
溶媒がクロロホルム−メタノール（10:1）の場合 Rf値
0.39,トルエン−アセトン（1:1）の場合 Rf値0.44 上記の理化学的性状およびNMRなどによる構造解析の結
果，本物質の構造は下式のごとく決定された。

（２）SF2197C物質の生物学的性状本発明によるSF2197C物質の好気性細菌に対する最小発
育阻止濃度（MIC）を第１表に，嫌気性細菌に対するMIC
を第２表に，またキャンピロバクターに対するMICを第
３表に示す。これらの表が示すように,SF2197C物質は種
々のグラム陽性菌，グラム陰性菌，マイコプラズマ，ト
レポネーマ等に抗菌活性を有し，特に嫌気性菌およびキ
ャンピロバクターに対して優れた抗菌力を示す。従っ
て，これらの細菌に起因する人，動物の疾病の予防及び
治療に用いることが出来る。

（３）SF2197C物質の急性毒性マウスに対する急性毒性試験では,100mg/kgの腹腔内投
与で全例生存し，何らの異常も認められなかった。

本発明の第２の要旨とすることろは，アクチノマデュラ
属に属する新抗生物質SF2197C生産菌を培養し，その培
養物から新抗生物質SF2197C物質を採取することを特徴
とする新抗生物質SF2197C物質の製造法にある。

（１）SF2197C物質の生産菌本発明に使用されるSF2197C物質の生産菌の一例として
は，特開昭60-83585の「新規抗生物質SF2197A物質及び
その製造法」及び特開昭61-141889の「新抗生物質SF219
7B物質及びその製造法」に菌学的性状を記載した放線菌
SF2197株がある。これらの特許明細書の中で本発明者ら
はSF2197株が放線菌の中でミクロビスポラ（Microbispo
ra）属に属するものと判断し，本菌株をミクロビスポラ
・エスピー・SF2197（Microbispora sp.SF2197）と呼称
した。しかし，その後の詳細な分類学的研究の結果,SF2
197株はアクチノマデュラ属の新種であることが判明
し，アクチノマデュラ・アトラメンタリア（Actinomadu
ra atramentaria）と命名された。これらの結果はInt.
J.Syst.Bacteriol.,37:342−346（1987）に掲載され，
本菌名は既に承認名とされている。従って，本発明者ら
はSF2197株の菌学的性状をこの文献に記載の通りとし，
また工業技術院微生物工業技術研究所に受託されている
微工研菌寄第7213号（FERM P−7213）のミクロビスポラ
・エスピー・SF2197をアクチノマデュラ・アトラメンタ
リア・SF2197と改名した。SF2197株は他の放線菌に見ら
れるように，その性状が変化しやすい。例えば,SF2197
株に由来する突然変異株（自然発生または誘発性），形
質接合体または遺伝子組換え体であっても,SF2197C物質
を生産するものは全て本発明に使用出来る。

（２）SF2197C生産菌の培養法本発明の方法では，前記の菌を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としては，
従来放線菌の培養に利用されている公知のものが使用で
きる。例えば，炭素源として，グルコース，水あめ，デ
キストリン，グリセリン，糖みつ，動・植物油等を使用
しうる。また窒素源として，大豆粕，小麦胚芽，コーン
スティープリカー，綿実粕，肉エキス，ペプトン，酵母
エキス，硫酸アンモニウム，硝酸ソーダ，尿素等を使用
しうる。その他，必要に応じ，ナトリウム，カリウム，
カルシウム，マグネシウム，コバルト，塩素，燐酸，硫
酸，およびその他のイオンを生成することができる無機
塩類を添加することは有効である。また菌の発育を助
け,SF2197C物質の生産を促進するような有機および無機
物を適当に添加することができる。

培養法としては，好気的条件での培養法，特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は20℃〜35℃で
あるが，多くの場合,25℃〜32℃で培養する。SF2197C物
質の生産は培地や培養条件による異なるが，振盪培養，
タンク培養のいずれにおいても通常２〜７日の間でその
蓄積が最高に達する。培養中のSF2197C物質の蓄積量が
最高になった時に培養を停止し，培養液から目的物質を
単離精製する。

（３）SF2197C物質の抽出・精製法本発明によって得られるSF2197C物質の培養液からの採
取に当たっては，その性状を利用した通常の分離手段，
例えば，溶剤抽出法，イオン交換樹脂法，吸着または分
配カラムクロマト法，ゲル濾過法，沈澱法等を単独でま
たは適宜組み合わせて抽出精製することができる。例え
ば，培養濾液中のSF2197C物質は合成吸着剤であるダイ
ヤイオンHP−20（三菱化成社製）等に吸着され，アセト
ン水等で溶出される。SF2197C物質を更に精製するに
は，シリカゲル（ワコーゲルＣ−200,和光純薬工業社製
等），アルミナ等の吸着剤やセファデックスLH−20（フ
ァルマシア社製），トヨパールHW−40（東ソー社製）等
を用いるクロマトグラフィーを行うとよい。

以下に本発明の実施例を示すが，これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではない。ここに例示しな
かった多くの変法あるいは修飾手段を用いうることは勿
論のことである。

実施例１種培地として，スターチ2.0％，グルコース1.0％，ポリ
ペプトン0.5％，小麦胚芽0.6％，酵母エキス0.3％，大
豆粕0.2％及び炭酸カルシウム0.2％（殺菌前pH7.0）の
組成からなる培地を用いた。

また，生産培地として，大豆油0.7％，酢酸ナトリウム
0.5％，コーンスティープリカー3.0％，脱脂ぬか1.0
％，硫酸マグネシウム（７水塩）0.2％，硫酸銅（５水
塩）0.001％及び食塩0.2％（殺菌前pH7.0）の組成から
なる培地を用いた。

前記の種培地20mlを分注した100ml容三角フラスコを120
℃で15分間殺菌し，これにアクチノマデュラ・アトラメ
ンタリア・SF2197株（FERM P−7213）の斜面寒天培養の
２〜３白金耳を接種し,28℃で５日間振盪培養し，第１
種培養とした。次いで，種培地80mlを分注した500ml容
三角フラスコを120℃で15分間殺菌し，前記第１種培養4
mlを接種し,28℃で２日間振盪培養し，これを第２種培
養とした。更に，種培地１を分注した5l容三角フラス
コを120℃で30分間殺菌し，第２種培養80mlを接種し,28
℃で１日振盪培養し，これを第３種培養とした。

予め120℃で30分間殺菌した35lの種培地を含む50l容ジ
ャー・ファーメンターに，前記の第３種培養１を接種
し,28℃で１日間通気（20l/分），攪拌（200rpm）培養
し，これを第４種培養とした。

予め,120℃で30分間殺菌した200lの生産培地を含む300l
容タンク２基に，前記の第４種培養を各10lずつ接種し,
32℃で２日間通気（100l/分），攪拌（120rpm）培養し
た。培養終了後，濾過助剤として珪藻土を加えて濾過
し，濾液350lを得た。

実施例２実施例１で得られた培養濾液350lを，ダイヤインHP−20
（三菱化成社製）17lに吸着させ，水洗後50％メタノー
ル水で予洗した。有効成分を80％アセトン水50lで溶出
し，溶離液を15lまで濃縮後,18lの酢酸エチルで抽出し
た。抽出液を濃縮乾固しSF2197C物質を含む油状物35gを
得た。この油状物をシリカゲルカラム（ワコーゲルＣ−
200,和光純薬社製）300mlのカラムに付し，クロロホル
ム1.5lで洗った後，クロロホルム−メタノール（50:1）
2l,クロロホルム−メタノール（20:1）2lで順次溶出し,
100mlずつ分画した。活性画分を集めて濃縮乾固し,SF21
97C物質を含む油状物15gを得た。この油状物を再度シリ
カゲルカラム（ワコーゲルＣ−200）200mlのカラムに付
し，クロロホルム１，クロロホルム−メタノール（5
0:1）１，クロロホルム−メタノール（20:1）１の
順に溶出した。活性画分を集め濃縮乾固し,SF2197C物質
の粗油状物8gを得た。この粗油状物8gをメタノールで平
衡化したセファデックスLH−20（ファルマシア社製）50
0mlのカラムに付し同溶媒で展開した。活性画分を集め
濃縮乾固し,3gの油状物を得た。この油状物をアセトン5
mlに溶解し，予めｎ−ヘキサンで充填したワコーゲルＣ
−300 100mlのカラムに吸着しせめｎ−ヘキサン−アセ
トン（1:1）の混合溶媒で展開しSF2197C物質を含有する
画分600mlを得た。この活性画分を減圧濃縮し少量のメ
タノールに溶解し，予めメタノールで平衡化したトヨパ
ールHW−40（東ソー社製）300mlのカラムにかけ同溶媒
で展開した。活性画分を集め濃縮乾固し820mgの油状物
を得た。これを3mlのメタノールに溶解し,1mlずつを高
速液体クロマトグラフィー分取用逆相カラムＳ−343
（山村化学研究所製ODS,20×250mm）にチャージし,70％
メタノール水にて流速5ml/minで溶出した。バチルス・
ズブチリス（Bacillus subtilis）に活性を示す分画を
集め濃縮乾固し,SF2197C物質の粗粉末240mgを得た。こ
の粗粉末を少量のアセトンに溶解しｎ−ヘキサンを加え
放置し,SF2197C物質80mgを無色針状結晶として単離し
た。

［発明の効果］本発明の新抗生物質SF2197C物質は各種の細菌に対し優
れた抗菌活性を有するので、抗菌剤としての有用性が期
待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は，抗生物質SF2197C物質の臭化カリウム錠での
赤外部吸収スペクトルを示す。第２図は，抗生物質SF2197C物質のジメチルスルホキシ
ド-d₆溶液中での¹H−NMRスペクトルを示す。第３図は，抗生物質SF2197C物質のジメチルスルホキシ
ド-d₆溶液中での¹³C−NMRスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:03） (72)発明者庄村喬神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者瀬崎正次神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者井上重治神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治製菓株式会社薬品総合研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の化学構造式を有する新抗生物質SF21
97C物質
【請求項２】アクチノマデュラ属に属する新抗生物質SF
2197C物質生産菌を培養し、その培養物から新抗生物質S
F2197C物質を採取することを特徴とする新抗生物質SF21
97C物質の製造法。