JPH062068B2

JPH062068B2 - ω６系不飽和脂胞酸含有リン脂質の製造法

Info

Publication number: JPH062068B2
Application number: JP16666988A
Authority: JP
Inventors: 英雄菊次
Original assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Priority date: 1988-07-06
Filing date: 1988-07-06
Publication date: 1994-01-12
Anticipated expiration: 2009-01-12
Also published as: JPH0216989A

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明はω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造法に関
し、詳しくは特定の微生物を用いてω６系不飽和脂肪酸
を高含量で含むω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質を製造
する方法に関する。

［従来の技術及び発明が解決しようとする課題］リン脂質は高等動物をはじめ各種生物中に含まれ、主と
して細胞膜の構成物として生物中で重要な働きをしてい
る。また、各種生物体内で何らかの刺激により、リン脂
質に結合している不飽和脂肪酸が遊離してプロスタグラ
ンジン等の生理活性物質へと変換される。

現在、工業的規模で生産されているリン脂質は大豆リン
脂質と卵黄リン脂質である。これらは天然界面活性剤で
あり、乳化作用，分散作用，湿潤作用などを利用して食
品，医薬品などの分野で使用されている。しかしなが
ら、これらのリン脂質は生理活性が十分でないという欠
点があった。

ところで、生理活性作用を持った脂肪酸としてγ−リノ
レン酸，ビス−ホモ−γ−リノレン酸，アラキドン酸な
どの不飽和脂肪酸が知られている。このような不飽和脂
肪酸を含有するリン脂質の製造方法としては、モルティ
エレラ属に属する微生物を炭水化物を炭素源とする培地
で培養して得た菌体により採取された脂質からγ−リノ
レン酸含有ホスファチジルコリンを分離濃縮する方法
（特開昭62-25989号公報）などが知られている。しか
し、この方法ではγ−リノレン酸含量が少ないものしか
得られず、十分な利用が期待できない。

［課題を解決するための手段］そこで、本発明者はω６系の不飽和脂肪酸を高含量で含
むリン脂質を生産する能力を有する微生物について検索
したところ、ムコール属またはコニディオボラス属に属
する微生物が該能力を有していることを見出し、本発明
に完成した。

すなわち、本発明はムコール属またはコニディオボラス
属に属し、ω６系不飽和脂肪酸含有脂質生産能を有する
微生物を、炭素源を含む培地に培養し、培養物からω６
系不飽和脂肪酸含有リン脂質を採取することを特徴とす
るω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造法を提供する
ものである。

本発明で用いる微生物は、ムコール属またはコニディオ
ボラス属に属し、ω６系不飽和脂肪酸生産能を有する微
生物である。具体的には、ムコール属微生物としてはム
コール・シルシネロイデス(Mucor circinelloides)HUT
1121(FERM P-9359)，ムコール・ジャバニクス(Mucor Ja
vanicus) HUT 1162(FERM P-9360)などが挙げられ、コニ
ディオボラス属微生物としてはコニディオボラス・ヘテ
ロポラス(Conidiobolus heterospores) ATCC12941，コ
ニディオボラス・グロブリフェラス(Conidiobolus glob
uliferous) CBS 218/64，コニディボラス・ナノデス(Co
nidiobolus nanodes) CBS 183/62などが挙げられる。

本発明には上記微生物のほか、これらから誘導される変
異株であって上記のようにω６系不飽和脂肪酸含有脂質
を生産する能力を有するもの等も等しく使用することが
できる。

上記微生物を培養するための培地は、該微生物が良く生
育して目的とするリン脂質を生産しうるものであればよ
く、炭素源，窒素源，無機塩類および必要により微生物
の生育に好適なアミノ酸等の成分を含むものが用いられ
る。炭素源としてはグルコース，でんぷん、廃糖蜜糖の
糖類や酢酸ソーダなどが使用でき、特にグルコース等の
糖類が好適である。さらに、ムコール属の場合にはリノ
ール酸高含有油脂であるサフラワー油，ヒマワリ油など
を、コニディオボラス属の場合にはγ−リノレン酸含有
油脂である月見草油、ムコール属やモルティエレラ属に
属する糸状菌から抽出された微生物油脂、特に炭素数18
以上の不飽和脂肪酸含有油脂等を必要に応じて加える
と、目的とするリン脂質の生産量を増大させることがで
きる。また、窒素源としてはアンモニウム塩，酵母エキ
ス，コーン・スティーブ・リカー，ペプトンなどがあ
り、無機塩類としてはマグネシウム塩，カルシウム塩，
リン酸塩，鉄塩，銅塩などがある。

培養にあたり、炭素源は培地に最初から全量を加えても
よいが、培養開始後適当な時間に追加することによって
γ−リノレン酸等のω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質の
生産量を増大させることができる。グルコース等の炭素
源を培地に最初から加える場合、初発添加量が多過ぎる
と、微生物の生育に悪影響を及ぼすことがあるので、通
常は10〜250g/lとする。また、炭素源を培養中に追加す
る場合、その時期，回数などは適宜決定すればよい。た
とえば、グルコース等の炭素源の初発濃度を100〜200g/
lとして培養を行い、炭素源の大部分が消費されたとき
に50〜100g/l程度の炭素源を追加（１回もしくは数回に
分けて）することにより菌体の増殖を高め、結果的にω
６系不飽和脂肪酸高含量のリン脂質の生産量を増すこと
ができる。

その他の培養条件、たとえば温度，時間等は使用する微
生物の性質等を考えて目的とするリン脂質の生産量が高
くなるような条件を設定すればよい。通常は20〜32℃、
好ましくは25〜30℃、pH３〜７、好ましくは3.5〜６に
て60〜120時間、好ましくは70〜100時間行えばよい。

ω６系不飽和脂肪酸を含有するリン脂質は通常、微生物
菌体中、特に細胞膜に蓄積されるので、遠心分離法等の
常法により培養液を固・液分離し、該脂質を含む菌体を
得る。このようにして得られたリン脂質中のω６系不飽
和脂肪酸含量は38〜56％である。さらに、この菌体を必
要に応じ洗浄，乾燥することもできる。

また、必要により菌体をメタノール，エタノール，ジク
ロロメタン，クロロホルムなどの極性および非極性の有
機溶剤の任意の割合の混合物を用いて脂質抽出を行な
い、分離・精製することもできる。菌体を予めボールミ
ルで粉砕したのち脂質を抽出したり、有機溶媒中で粉砕
してリン脂質を抽出することができる。抽出物を脱溶剤
した後、アセトン分画を行い、アセトンに不溶な物質を
集めれば、リン脂質の粗分画物が得られる。さらに、得
られたすべての画分をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーで再分画すると、ω６系不飽和脂肪酸高含量のリン
脂質組成物が得られる。ただし、ここに示した分別法は
１例であり、本発明のリン脂質組成物の分画法がこれに
限定されるものではない。このようにして得られたリン
脂質中のω６系不飽和脂肪酸含量は80〜90％という高い
値である。

上述の方法により得られるリン脂質組成物は、ホスファ
チジルコリン，ホスファチジルエタノールアミン，リゾ
ホスファチジルコリン，リゾホスファチジルエタノール
アミン，ホスファチジルイノシトール，ホスファチジン
酸などであり、またその構成脂肪酸はγ−リノレン酸，
ビス−ホモ−γ−リノレン酸，アラキドン酸など炭素数
18個以上で二重結合が３個以上のω６系高度不飽和脂肪
酸である。

また、ホスファチジルコリン，ホスファチジルエタノー
ルアミン等はカラムクロマトグラフィー等の常法（特
に、液体クロマトグラフィーが好ましい。）により、さ
らにω６系不飽和脂肪酸を高含量のものとすることがで
きる。例えば、ホスファチジルコリンを分取用液体カラ
ムクロマトグラフィーにより、各ピークごとにフラクシ
ョンコレクターに分画し、得られた画分を各々、常法に
よりケン化分解，メチルエステル化した後、ガスクロマ
トグラフィーで脂肪酸組成を測定し、γ−リノレン酸濃
度の高いものを目的物とする。ホスファチジルエタノー
ルアミンについても、同様にしてγ−リノレン酸濃度の
高いものを得ることができる。また、アラキドン酸，ビ
ス−ホモ−γ−リノレン酸濃度の高いホスファチジルコ
リン，ホスファチジルエタノールアミンについても、同
様にして得ることができる。

［実施例］次に、本発明を実施例により説明する。

実施例１第１表に示したムコール用培地（pH４）６を10容ジ
ャーファーメンターに入れ、この培地にムコール・シル
シネロイデス HUT1121(FERM BP-3883)を接種し、30℃
で３日間通気撹拌培養を行なった。

第１表ムコールコニディオボラス用培地用培地グルコース 150 g/l 30 g/l 硫酸アンモニウム 19.8 g/l − 酵母エキス 0.6 g/l ５g/l MgSO₄ 1.0 g/l １ g/l FeSO₄ 40 mg/l 0.01g/l ペプトン − 10 g/l KH₂PO₄ 9.0 g/l 3 g/l 培養終了後、培養液を過して菌体の回収し、湿菌体を
得た。この湿菌体を７kgをメタノール20と共に破砕抽
出した。得られた抽出液をエバポレーターで約500mlま
で濃縮し、ジクロロメタン300mlを加えて二層分離し
た。次いで、ジクロロメタン層を回収し、濃縮して約50
mlの濃縮液を得た。これにアセトンを400ml加え、沈澱
物を過した。沈澱物は２回アセトンで洗浄し、約20ｇ
の白色結晶を得た。このものの脂肪酸組成を第３表に示
す。このうち２ｇをクロロホルムに溶解し、シリカゲル
カラムクロマトグラフィー（カラム；ワコーゲル，和光
純薬製）に注入した。展開溶媒はクロロホルム／メタノ
ール＝（Ｉ）４：１，（II）３：２，（III）１：４と
分けて行なった。この結果、（Ｉ）からはホスファチジ
ルエタノールアミンが（II）からはホスファチジルコリ
ンが、（III）からはその他のリン脂質が分画された。

続いて、ホスファチジルコリン１ｇを分取用液体クロマ
トグラフィー（カラム；0DS，溶媒；メタノール：水：
アセトニトリル＝90.5：７：2.5，流速；10ml/min）に
てUV205mmで検出できるピークごとのフラクションを分
取した。薄層クロマトグラフィーでホスファチジルコリ
ンであることを確認した後、ガスクロマトグラフィーに
て脂肪酸組成を調べたところ、分取したものの中からγ
−リノレン酸を95％含有したホスファチジルコリン400m
gを得た。また、ホスファチジルエタノールアミンを分
取用液体クロマトグラフィーで分取したところ、約200m
gのγ−リノレン酸を90％以上含んだホスフアチジルエ
タノールアミンが得られた。この結果を第２表に示す。

実施例２第１表に示したコニディオボラス用培地にγ−リノレン
酸含有油（モルティエレラ属菌体からの抽出油脂；オレ
イン酸43％，リノール酸11％，γ−リノレン酸８％）を
培地にして３vol％となるように加えた培地を作製し
た。この培地にコニディオボラス・ヘテロスボラスATCC
12941を接種し、30℃で２日間振とう培養した。

培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、湿菌体を得
た。この湿菌体から、実施例１と同様の方法でリン脂質
を抽出したところ、20ｇの粗リン脂質が得られた。この
ものの脂肪酸組成を第３表に示す。

得られた粗リン脂質を、実施例１と同様の方法でシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーにて分画したところ、約
５ｇのホスファチジルコリンと約２ｇのホスファチジル
エタノールアミンが得られた。

得られたホスファチジルコリン１ｇを、実施例１と同様
の方法で分取用液体クロマトグラフィーにて分取したと
ころ、ビス−ホモ−γ−リノレン酸を50％以上含有した
ホスファチジルコリン24mgとアラキドン酸を80％以上含
有したホスファチジルコリン203mgが得られた。また、
ホスファチジルエタノールアミン１ｇを分取用液体クロ
マトグラフィーで分取したところ、ビス−ホモ−γ−リ
ノレン酸を50％以上含有したホスファチジルエタノール
アミン12mgとアラキドン酸を80％以上含有したホスファ
チジルエタノールアミン178mgが得られた。この結果を
第４表に示す。

［発明の効果］本発明によれば、ω６系不飽和脂肪酸を高含量で含むリ
ン脂質を得ることができる上に、さらにカラムクロマト
グラフィー等で分画・精製することにより、ω６系不飽
和脂肪酸が高含量のホスファチジルコリン，ホスファチ
ジルエタノールアミン等のリン脂質を容易に得ることが
できる。

得られたリン脂質は生理活性が高く、医薬品，リポソー
ムの原料，食品，化粧品等の分野において利用が期待さ
れる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ムコール属またはコニディオボラス属に属
し、ω６系不飽和脂肪酸含有脂質生産能を有する微生物
を、炭素源を含む培地に培養し、培養物からω６系不飽
和脂肪酸含有リン脂質を採取することを特徴とするω６
系不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造法。
【請求項２】ω６系不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸，ビ
ス−ホモ−γ−リノレン酸およびアラキドン酸のいずれ
かであり、リン脂質がホスファチジルコリンまたはホス
ファチジルエタノールアミンである請求項１記載の製造
法。