JPH04506562A

JPH04506562A - 医療目的の人体の乳頭腫ヴィールス（ｈｐｖ）防止方法

Info

Publication number: JPH04506562A
Application number: JP1511118A
Authority: JP
Inventors: ディルナー，ヨアキム; ディルナー，レーナ
Original assignee: フェリング　アーベー
Priority date: 1988-10-28
Filing date: 1989-10-30
Publication date: 1992-11-12
Anticipated expiration: 2015-12-18
Also published as: WO1990004790A1; FI97426B; FI912050A0; JP3117695B2; FI97426C; EP0440700A1; EP0440700B1; AU639666B2; DE68912342T2; SE8803870D0; AU4481589A; US5629146A; DE68912342D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】医療目的の人体の乳頭腫ヴイールス（ＨＰＶ）防止方法。

この発明は医療目的の人体の乳頭腫ヴイーノレス（ＨＰＶ）感染の防止方法に関するものである。

頚部の乳頭腫ヴイールス感染は頚部のガン腫を伴うものであるｏ５０タイプを超えるＨＰＶが既に識別されている。ＨＰＶタイブ６、１１、１６、１８、３１、３３および５１が生殖器官を感染することが発見されている。タイブ６、１１は生殖器官やコンジローム状鋭点に緩やかな増殖病巣を引き起こし、タイブ１６、１８、３１および３３は前ガン病巣や多くの場合頚部のガン種に発見されている。牛科の乳頭腫やいずれのグループのヴイールスとも反応する抗血清６ご免疫学的に関係する人体の乳頭騰は容易に準備できる。ヴイールスタンパク保護膜に対して形成されたグループ特定抗血清を用いることにより、乳頭腫タンパク質保護膜抗原は前ガン病系やフンジローム筋肉にに認められる。生殖器イボ、生殖器内部上皮腫瘍（ＣＩＮ）および生殖器の腫を持った患者はグループ特定タンパク保護膜抗体に対し比較グループより高い血清ＩｇＧ抗体レベルを持っていることが報告され、ている。

この発明の目的は上記のような方法を提供して、ガン腫、特に頚部のまたは前ガン症状の発見を早期に可能とし、ガン腫の培養の危険を回避することにある。

この発明の他の目的は、ＨＰＶに対する体液中の，抗体の存在を探知することにより、ガン腫または前ガン症状またはガン腫の培養の危険を簡単迅速に確認する方法を提供することにある。

このためこの発明においては請求範囲１．１１．２１および３１に記載するような特徴を有するものである。

以下図面によりさらに詳細にこの発明について説明する。

第１図は頚部分泌物中の乳頭腫ヴイールスに対するＩｇＡ抗体の探知を示すグラフ、第２図は血清および頚部分泌物中の乳頭腫ヴイールスに対するＩｇＡ抗体の相関関係を示すグラフ、第３図は血清および生殖器分泌物中の乳頭腫ヴイールスに対するＩｇＧ抗体の比較を示すグラフ、第４図は生殖器分泌物中の乳頭腫ヴイールスに対するＩｇＧ抗体およびＩｇＡ抗体の比較を示すグラフ、第５．６図は免疫プロッティング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）によるＩｇＧ抗体およびＩｇＡ抗体の探知を示すグラフ、第７図は通常人口中におけるｐｖに対する血清ＩｇＡ抗体の年齢性別分布を示すグラフ、第８図は通常人口中におけるＰｖに対する血清ＩｇＧ抗体の年齢性別分布を示すグラフ、第９図はＣＩＮまたは頚部ガン腫を有した患者からの血清中のＰｖに対するＩｇＡ抗体の探知を示すグラフ、第１０図はＣＩＮまたは頚部ガン腫を有した患者からの血清中のＰＶに対するＩｇＧ抗体の探知を示すグラフ、第１１図はＣＩＮまたは頚部ガン腫を冑した患者からの血清中のＰｖに対するＩｇＭ抗体の探知を示すグラフ第１２図は病気との関係でＰｖに対するＩｇＡとＩｇＧとの間の反応の差を示すグラフ、第１３図はＬ１タンパクに対するＩｇＡ反応性を示すグラフ、第１４図はＬ２タンパクに対するＩｇＡ反応性を示すグラフ、第１５図はＬ１タンパクに対するＩｇＡ反応性を示すグラフ、第１６図はＬ２タンパクに対するＩｇＧ反応性を示　すグラフ、第１７図はＬｌタンパクに対する１ｇＭ反応性を示すグラ第１８図はＬ２タンパクに対する１ｇＭ反応性を示すグラ第１９図は合成ペプチドの病気を伴った反応性を示すグラフ、第１Ａ表は血清および頚部分泌物中のｐｖに対するＩｇＡＳ　ＩｇＧ抗体の比較を示すグラフ、第１表は頚部ガン腫を伴った抗体の探知を示すグラフ、第２表は合成ペプチドに用いられる式を説明するグラフ、第３表は合成ペプチドのアミノ酸順列を示すグラフ、乳頭腫に対するＩｇＧ抗体が存在するか否かおよび悪化進行に関係あるか否か調査するには、フンジロームおよびＣＩＮを持った患者からのヴアギナ分泌物を変更ＥＬ　Ｉ　ＳＡ方法により検査した。

２０〜５０歳の女性４２人が研究に参加した。彼女らは前に異常なヴアギナの汚染またはフンジロームを持っていたかスクリーンプログラムに参加していた。全ての患者はフルボスコープ（ｃｏｌｓｃｏｐｅ）検査に掛けられた。フルボスコープの日に方形の汚染を採り、場合によってはコルボスコープにより確認された病巣からバイオプシー（ｂｉｏｐｕｓｙ）が採られた。細胞学および組織医学的な検査が行なわれ、最後にＥＬＩＳＡ結果と照合された。ＨＰＶ感染の形態学的判断はマイセル他（１９７９年）により行なわれた。陽性乳頭腫ヴイールス感染がコイロシトチック（ｋｏｉｌｏｃｙｔｏｔｉｃ）細胞により示唆された。この典型的なコイロシトチック細胞は拡大したハイパークロマチックな核が明かなシトプラズミックな領域により囲まれている。ヴアギナ頚部病巣がエンドエクト（ｅｎｄｏ−ｅｃｔｏ）頚部から小さな消毒綿とともに採取された。この消毒綿は０．５ｍｌのＰＢＳを入れたガラス管に入れられ、渦巻ミキサーにより混合された。使用するまで試料を２０℃で貯蔵した。採取の前後に管を秤量することにより正確な量の分泌物が推定された。使用前にこれらを遠心処理して屑片を除いた。実際の月経の日を除く月経サイクル中の日に関係なく試料を採取した。血で汚染された試料は破棄された。

ＢＰＶは以下のようにして純化された。生材の皮膚コブをグリセロールフォスフェート緩衝塩水（１：　１）中で、＋４℃で貯蔵してウルトラタラツクスミキサ −中で０．１モルトリス−ＨＣｌ中で均質にした。１０％のサスベンジ旙ンを用意し、タレオシルとフレオンを加えた後サスベンジ璽ンをツルバール５Ｓ−３４０−ターにより　１１．９５０ｇで３０分遠心処理した。得られたものをさらにＭＳＥＳクチタンローター中　５．　ＯＯＯｒ　ｐｍで５０分遠心処理した。このペレットをＯ，ＩＭ）リス）ＩＣＩ中で懸濁させ、ＣｓＣ１と混合した。平衡のために３５．ＯＯＯｒｐｍでＭＳＥＩ：ｌ−ター中で終夜溶液を遠心処理した。ヴイールスバンドを採取し、ＴＥ緩衝液（０，ＯＩＭ）リスＨＣＩ、Ｏ，ＯＯＯＩＭＥＤＴＡ）に対してダイアライズし、−７０℃で冷凍貯蔵した。皮膚コブの抽出物を２回のＣａＣ１平衡遠心処理により純化し他。２種の異なるバンドが成分中に認められた。軽いほうのバンドは浮遊密度１．２９１７’ｍｌであり、電子顕微鏡（ＥＭ）で確認したところ空のヴイールス粒子が含まれていた。

重いはうバンドは浮遊密度が１．３４ｇ／ｍｌでＥＭで検査したら典型的な乳頭腫ヴイールス形態を有した完全なヴイールス粒子を含んでいた。

フロイドの完全な補助薬中に懸濁させたほぼ１００μｇの純化されたヴイールスの筋肉内接種により純化した生材の乳頭腫ヴイールスに対するｌ＼イパー免疫の血清が兎に用意された。同様なヴイールスを用い補助薬なしで２週間間をおいて続いて２回の接種が行なわれた。兎は１週間後最後の接種の後採血された。

前記したＥＬＩＳＡ方法を変更して用いた。ＢＰＶヴイールスをＰＢＳ中で希釈して９６ウエルチトレーシ１ンプレートに加え０．０６μＧ／ウエルの一定の濃度で＋４℃で終夜保持した。０．０５％ツイーンを含むＰＢＳで３回洗浄した後、プレートを４％ヴイールス歯科血清アルビウム（江場）とＯ，１％ゼラチンで６時間室温でブロックした。その後＋４℃で終伎放置した。使用前にプレートをＰＥＳツイーンで５回洗浄した。ヴアギナ分泌物を１／４０に希釈し、血清は４％ＢＳＡ、０．１％ツイーン中で１／１００希釈した。抗体を探知するために、快適純化ビオチン化した抗人体ＩｇＡおよびＩｇＧを１／１０００で４時間室温で希釈して用いた。

バーオキサイドアビヂンを１／４００希釈で２時間室温で加えた。生地としては０．４％オーフェタニ！ンジアミン、０゜０２％Ｈ，Ｏ□を５０ｍＭフォスフェートエシトレート緩衝液、ＰＨ５０中に用いた。ポジチブ比較としては兎抗血清対ＢＰＶヴイールスおよび／または兎抗血清対エルク乳頭腫ヴイールスを用いた。人体の新しく生まれた血清と兎の前免疫血清とがネガテブ比較として用いられた。

ＢＰＶピリオン（ＶＩＩＩＩＯＮ）を５〜２０％ポリアクリルアミド成分ゲル上に電子フォレーズした。約５μｇのピリオンを各試料に施した。トービン他の方法によりニトロセルローズシートに移した。このシートを帯に切断して２％トイーン８０で５０ｍＭ）リスＰＨ１０，２，１５０ｍＭＮａＣ１，５ｍ　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｎ　ｓ中で１５分間放置した。ニトロセルローズ帯ハ終夜患者の緩衝液で１／Ｚｏｏに希釈した血清中に置いた。

−晩過ぎた後プロットを同じ緩衝液中で洗浄した。Ｐｖに対する兎の抗血清がポジチブ比較として用いられ、兎の前免疫血清がネガテブ比較として用いられた。

結合抗体の探知のためには山羊の抗人体またはＩｇＧが緩衝液に１／１０００に希釈して用いられた。ついでプロットはパーオキサイドアヴイジン希釈１７４０Ｇ緩衝液中で放置された。兎の抗血清については山羊抗兎１ｇＧパーオキジドーズが緩衝液に１／１００ｏ希釈して用いられた。全てのプロットは５０ｍＭソジウムアセテートＦ’ｌ（５０中でカルバゾールにより培養された。

第１図に乳頭腫ヴイールスに対するＩｇＡ抗体の探知を示す。頚部分泌物１／４０を純化ピリオンでコーチングしたＥＬＩＳＡプレーとに施した。ＩｇＡ抗体はＩｇＡ特定箪２抗体およびアビジンパーオキシドーゼコンジ１ゲートにより探知した。生地を加えた後、４９０ｎｍにおける吸収が１５分後に記録された。背景上の吸収値〉０．１がポジチブと記録された。

Ｐｖに対するＩｇＡ抗体が１７〜４２の女性の頚部分泌物から発見された。第１図のグラフにおいて各点は患者からの試料の平絢吸収を示す。ＣｌＮ５を有した９人の女性が頚部分泌物中にＩｇＡ抗体を有していた。Ｐａｐ汚染中のコイシトチックおよびフルボスコープにより確認された非ＣｒＮ症状が９人の患者に認められ、これらの３人がＩＺＡ抗体を有していた。２４人の女性中６人が正常な検査結果であって、ＩｇＡ抗体を有していた。ＩｇＡＥＬＩＳＡ吸収がこれらのグループ間の顕著な差異について検査された。３通りの非パランメトリックテストにおいて、正常なグループに比べてＣＩＮグループは顕著に高い吸収値を示した。ＩｇＡポジチブ頚部分泌物の比率もまたＣＩＮグループにおいて正常グループより顕著に高いことが認められた。この比較により、シンドローム／フィロシトチックを有したグループ都正常グループとの間には差がないことが認められた（ｐ＞０．０５；吸収平均＝０．１０９対０．１０４）。

１５人の患者について血清および分泌物中のＩｇＡ、ＩｇＧ　レベルを比較した。第２図に示すようにＩｇＡ抗体レベルはには比較的相関関係があった。第３図に示すようにＩｇＧ抗体レベルはあまり相関関係がなかった。第４図に示すように両レベル間には相関関係は認められなかった。

いずれのポリペプチドにＰｖ抗体が向けられるかを調べるために、純化ＢＰＶピリオンの免疫プロッチングが行なわれた。

第５．６図において純化ＢＰＶピリオンは５〜２０％ポリアクリルアミド上で電子フォレーズされて、ニトロセルローズに移された。帯は純化ボビンピリオン、人体新生血清および１０患者血清に対する兎ハイパー免疫血清中に入れられた。

山羊抗人体ＩｇＧ（第５図）または山羊抗人体１ｇＡ（第６図）およびパーオキシド−ゼアビジにより結合抗体が探知された。ｒｇＡテストにおいては血清Ｎｏ、２〜９の患者の帯はＮ００１と同じにネガテブであった。第５．６図において矢印は主たる探知されたＰｖタンパクを示し、Ｋ＝重雪Ｋｇ１ＭＷ＝マーカーの分子量である。マーカーの分子量は２００；１１６；９２；６６；４４および２９キロダルトンであった。

純化ボビンピリオンに対して用意された兎ハイパー免疫血清は４種のポリペプチド（１４ｋＤａタンパク、２８ｋＤａタンパク、６４にタンパクおよび５４ｋＤａタンパク）を探知した。５４ｋＤａタンパクに対しては１０人のテストされた患者のうち１０人が血清ＩｇＧ抗体を有していた。２人が血清ＩｇＧ抗体を６４ｋＤａタンパクに対して有していた。

２人が血清ＩｇＧ抗体を２８ｋＤａタンパクに対して有していた。ＩｇＡ％定フンジニゲートについてテストした結果では、１０人中１人のみが探知できるＩｇＡ抗体レベルを免疫プロッチングで示した（第６図）。ＥＬ　Ｉ　ＳＡによったところこの血清は例外的に高いＩｇＡ抗ＢＰＶ反応性を示した。

免疫プロッチングにおいてこれは１４ｋＤａ、２８ｋＤａおよび５４ｋＤａと反応し、６４ｋＤａとは弱く反応した。

局部的な生殖器収線乳頭腫ヴイールス抗体が存在しかつ用意に探知測定できることが明らかにされた。頚部分泌物中のＰｖに対するＩｇＡ抗体とＣＩＮの組織額的な診断との間に強い相関関係があることが明らかになった。しかし２４人中６人の正常なＰａｐ汚染とフルボスコ−プ体を有していた。ＩｇＡ抗体を有しているがＣＩＮは有していない患者が組織学的に探知できないＣＩＮ病巣を有しているか否かは未知である。これまでの研究によると乳頭層ヴイールスグループ特定抗原に対するＩｇＧ抗体がＣＩＮ中で高くなることを示唆している。しかしＰｖに対する血清ＩｇＧ抗体レベルは皮膚のコブを有した患者においても高くなる。

この問題は、ここに記載されたＩｇＡを測定して生殖器収縮Ｐｖ感染に関係のある抗体を測定することにより、解決される。ここに記載したテストは前記したＩｇＧを用いたテストとは相関関係のないことを強調したい。このことは、血清中のＨＰＶに対するＩｇＡ抗体と分泌物との間に相関関係があり（第２図）　、ＨＰＶに対する分泌物または血清中のＩｇＡ、ＩｇＧ抗体間には簡易は相関関係がない（第４図、箪１表）ことから結論される。血清中のＩｇＡ抗体のレベルと分泌物との間には相関関係があった。したがって血清中のＩｇＡ抗体が生殖器収縮特定テストを与え、これが日常の医療に応用できるという可能性がある。

正常な主体とヴイールス写しを有した患者が正常な主体と同様なＩｇＡ抗体レベルを有しているということは驚くべきことである。しかしこのような状況はエプスタインバー（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ヴイールスについても見られるもので、ここでは抗ヴイールスタンパク保護膜ＩｇＡ抗体がヴイールス生産レベルには関係なく、ヴイールスを伴ったガンにのみ関係がある。免疫ブロッチングは４個のピリオンを伴ったポリペプチドを探知した。５４ｋＤａに対するＩｇＧ抗体の存在は前の研究と合致する。５６ｋＤａ１ｇＧ免疫タンパクコード１１オーブンリーヂングフレームがタンパク保護膜の主たる成分として識別された。はぼ７０ｋＤａのタンパク保護膜タンパクはフードＬ２オープンリーデングフレームである。このタンパクは我々が探知した６４ｋＤａタンパクに相当する。

２８ｋＤａタンパク１４ｋＤａタンパクの身元は知られていない。単独のＩｇＡポジチプ血清は５４．２ｇ、および１４ｋＤａポリペプチドに対してＩｇＡ反応を有していたが、この血清のＩｇＧ反応は５４ｋＤａポリペプチドにのみ向けられた。このことからしてＩｇＡ、ＩｇＧを高（するＰｖ選択は常に同じではないことが分かる。

グループ特定ＰＶタンパク保護膜抗原に対する血清抗体の反応を分析すべく、正常で健康な患者ｐｖに対する血清抗体の割り合いをＣＩＮまたは頚部ガン腫を持った女性のそれと比較した。

健康な性女性から合計１３９の比較血清を得た。産婦人科の女性から６２を得た。いずれの女性も病理上の発見はなくまたはコンジロームを持っていたが、ＣＩＮの組織学的な証拠はなかった。５９の血清を年間定期検査を受けた健康な女性実験室従業員から得た。

処置してない組織学的に確認された頚部腫瘍を持った１１４の女性からなるグループ、１３の病巣がＣＩＮＩとして分類され、１６の病巣がＣｌＮ２として分類され、１６の病巣がＣｌＮ３として分類され、残りの６９の病巣が侵略性の頚部ガン腫として分類された。種々の年齢の児童および男女の成人から８３の血清が得られた。

ヴイールスの隔離と純化とは上記のように行なった。

ボビン乳頭腫ヴイールスの用意は第５．６図に示す。４個のタンパクは全て免疫プロツチングで示すように人体血清を免疫反応性のエビトーぺを含んでいた。

純化されたＢＰＶを５回の冷凍ソーイング（ｔｈｏａ冒ｉｎｇ）により分裂させ、１０ｍＭカーボネイト緩衝液ＰＨ９，６により希釈し、ハーフアジア９６ウエルミクロチタープレーとに０．１５μｇ／ウェルの一定濃度で加えた。ＢＰＶを含んだプレートを室温で終夜保ち、その後０．０５ＰＥＳ）ライ−ｎ２０で洗浄し、プレートをＰＥＳ中の１０％ラム血清中に入れ、３７℃で６０分放置した。

この溶液を廃棄してプレートを紙で完全に包んだ。人体血清を１０％ラム血清／ＰＥＳで１：２０に希釈し、プレートに加え３７℃で１２０分間反応させた。それからプレーとをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄した。

結合抗体を探知するために、プレート上に１２０分３７℃で放置したｌＯ％ラム血清／ＰＢＳに希釈した人体１ｇＡに対する西洋わさびバーオキシドーゼモノコナル抗体を用いた。

ついでプレーとをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄し、０．１Ｍシトレイトアンシ１ウエキニｌ：５０希釈した２０ｍｇ／ｍ１２゜２−アジノージ（３−エチルベンゾチアジンンーサルフオナット（６））ジアンモニア塩により培養させた。吸収は３０分後（第７．８図）または６０分後（第９〜１２図）で４１５ｎｍであった。ＩｇＧの探知のためにプレートを洗浄してから１０ラム血清ＰＢＳで６０分間３７ ℃で放置した。

ついで１０％ラム血清ＰＥＳまたは人体１ｇＧに対するモノクロナル抗体ホースラデイシ１パーオキシダーゼコンジ１ゲートで１　：　１０００に３０℃で１２０分希釈された兎抗人体１ｇＧアルカリフォスフェートコンジ１ゲートが使用された（第９〜１２図）。０．１ＭジェタノールアミンＰＨ９゜６／１ｍＭＭｇＣｌ緩衝中のＰＢＳ−Ｔ１ｍｇ／ｍｌフォスファターゼ生地で洗浄してから、プレートを９ｇ分後に４０５ｎｍで読んだ。バーオキシイダーゼ抗体が用いられたときには、プレートはＩｇＡコンジコゲートのために３０分培養された。ＩｇＭ抗体の探知のためにププレートは上記のように放置して抗人体１ｇＭオキシダーゼとともに１０％ラム血清／ＰＢＳ中に１：８００希釈で１２０分放置された。６０分後プレートは４１５ｎｍで読まれた。全てのＥＬ　Ｉ　ＳＡについて０．１５以上の吸収がポジチブ反応と考えられた。

反応性の知られている２個のＣＩＮ患者血清を内部標準として全てのテストに用いた。ネガテブ比較としてはコーチングされないウェルが複数用いられた。

患者グループと健康な比較グループとの間の確率的に顕著な差異について液吸収の平均を分析した。

結果は以下のようであった。

児童と男女の成人とからなる８３の血清から２４がＩｇＡ抗体を、４６がＩｇＧ抗体を有していた。ＩｇＡ抗ＢＰＶチテルス（ｔｉ　ｔａｒｓ）が健康な女子に比べて健康な男子について上がったことが認められた（第７図）。この図は正常な対象中における血清ＩｇＡ抗体の年齢性別分布を示す。血清は１：２０に希釈され、ＩｇＡ抗体はアルファチェイン特定バーオキシダー−ゼ抗体について探知された。生地の追加に続ずいて、３０分後に４１５ｎｍの吸収が記録された。各点は各患者についての平均比較とともに試料の平均吸収を示している。男女いずれの場合もＩｇＡ抗体レベルは成人に比べて児童において非常に同じであった。

ＩｇＡ抗体についててテストされた同じ血清が第８図に示すようにＩｇＧについてもテストされた。これは健康な対象中における年齢および性別の血清ＩｇＧ分布を示す。同じ血清をＩｇＧの存在について第７図のようにテストした。ただし抗ｆｇＧホースラディッシュパーオキシダゼモノクロナル抗体が用いられた。成人に比べて児童においてＩｇＧ抗体が強く上がった。しかし顕著ではないものの、ＩｇＧ抗体チテルスが女性よりも正常な弾性において上がる傾向が認められた。

儂康な成人女性からの１３９血清、ＣＩＮグレード１０女性からの工３血清、ＣＩＮグレード２の女性からの１６血清、ＣＩＮグレード３の女性からの１６血清および頚部の侵略性細胞ガン腸の女性からの６９血清をＩｇＡ、ＩｇＧおよび■ ｇＭ抗体について分析した。確率的な分析のためにＣＩＮおよびＳＣＣグループを１この単独頚部腫瘍グループに組合せた。年齢および性別が合致するＣＩＮを持たない比較に比べて、第９図に示すようにＩｇＡ抗体レベルはＣＩＮまたはガン腫患者グループにおいて顕著に上がった。この図はＣＩＮを持ったかまたは頚部のガン腸を持った患者からの血清中のｒｇＡ抗体の探知を示すものである。血清は１：２Ｑに希釈されてＢＰＶでコーチングシタプレーとに加えられた。ホースラディツシュパーオキシダーゼモノクロナル抗体でＩｇＡ抗体は探知された。

生地を加えた後６０分後に４１５　ｎｍで吸収が読まれた。各点は平均吸収を示す。ＣＩＮなしのグループに比べて、ＣＩＮおよびガン腫グループのチテルスが上がった（ｐ＜０．０２５）。

第１０図に示すように比較に比べて頚部腫瘍患者においては対ＰＶＩｇＧ抗体チテルスが顕著に減少した（ｐ＜０．。

０１）。この図はＣＩＮまたは頚部ガン腫を持った患者からの血清中のＩｇＧ抗体の探知を示す。兎抗人体ＩｇＧアルカリフォスファターゼを用いて対ＢＰＶＩｇＧ抗体の存在について第９図と同じ血清をテストした。生地を加えた後９ｏ分後に４０５で吸収を記録した。

第１１図によれば比較グループに比べて頚部腫瘍患者グループの対ＰＶＩｇＭチテルスにおいて顕著な減少が認められた。この図はＣＩＮまたは頚部ガン腫を持った患者からの血清中の対ＰＶＩｇＭ抗体の探知を示す。第９図を同じ血清をＩｇＭ抗体の存在に関してテストした。抗人体ＩｇＭグルコーゼオキシダーズコンジコゲートを用い、培養の後プレートを６０分後に４１５ｎｍで読んだ。ＩｇＡ反応とＩｇＧ反応との間の差異をＣＩＮまたはガン層グループと比較したところ、ＣＩＮまたはガン腫グループに驚くべき上昇が認められた。第１２図は病気との関係で上記の反応の差を示すものである。第９．１０図の場合と同じ吸収値がＩｇＧで引かれたＩｇＡとして記録された。

全てのＨＰＶジェノメス（Ｈｅ１ｌｏ■ｅｓ）が８個のタンパクと認められる領域、オープンリーディングフレームを有している。２この０ＲＦＳＬｌとＬ２とがタンパク保護膜タンパクをコードするものとして示された。Ｌ１タンパクは約５４ｋＤａ余分なタンパク保護膜タンパクで、ＩｇＧとＩｇＡの両抗体に対して免疫性である。Ｌｌタンパクに対する抗体は少なくともＢＰＶ−１についてはヴイールス中立活性を有している。モノクロナルなどを用いた従来からの種々の研究により、Ｌ１タンパクが全てのタイプのＰＶに対して共通にいわゆるグループ特定エビトーベ（ａｐｌｔｏｐｅ）を有しており、各ＨＰＶタイプについてもエピトーベを有している。小さな溶融タンパクを用いて、１グループ特定および１タイプ特定エピトーベがマツプされた。Ｌ２０ＲＦはほぼ７０ｋＤａタンパク保護膜タンパクをコードし、我々によってほぼ６４ｋＤａタンパクと呼ばれた。これは比較的余分が低いものである。

Ｌ２タンパクはタイプ特定エピトーベを持っていると報告されてきた。ＨＰＶ１６主タンパク保護膜タンパクの線形エピトーぺの完全なマツプを得るためにこれら２種のタンパクのアミノ酸順列を５アミノ酸重複を有した２０アミノ酸合成ペプチドとして合成した。ＨＰＶ１６頚部腫瘍を有した患者の血清からのＩｇＡ、ＩｇＧまたはＩｇＭ抗体と反応した順列特定エピトーぺの位置を第１３〜１９図に示す。

ＨＰＶ１６のＬｌおよびＬ２０ＲＦの推論されたアミノ酸順列によって５個のアミノ酸重複を有した６６個の２０アミノ酸タンパクの合成を行なった。タンパク中の位置を表示するために、推定の監視フードがアミノ酸Ｎｏ、１とされた。

合成ペプチド番号１はＬ１０ＲＦ中のアミノ酸２−２１に相当し、ペプチド番号２はアミノ酸１７〜３６に対応し、番号３はアミノ酸３２〜５１に対応し、Ｌ１カーボキシターミナルペプチド（３５番）はアミノ酸５１２〜５３１に対応する。

ペプチド番号３６はＬ２０ＲＦ　（アミノ酸２〜２１）アミノターミナルに対応する。番号３７はアミノ酸１７〜３６に対応する。Ｌ２カーボキシテルミナス（番号６５．６６）における２個のペプチドは２１残基ペプチドとして合成された。

これによりこれらのアミノ酸位置が４３２７〜４５７および４５３〜４７３となる。多くの免疫活性ペプチドのアミノ酸順列を第１表に示す。そこの記号は箪２表に説明されている。

第１３〜１９図に用いられた全てのペプチドのアミノ酸順列を第１３〜１９図に示す。ペプチドはｔ−ＢＯＣアミノ酸（バハム　アーゲー、ブーベンドルフ、スイス）とｐ−メチルベンジハイトリアミン樹脂（フルカアーゲ、バッハ、スイス）を用いて複固相ペプチド合成法により合成された。フォルミルトリベトファンおよびメチオニンサルフオキサイド残基からの保護グループの除去は２５％ハイドロゲンフロライドにより分裂させることにより達成された。それからペプチドは液体ハイドロジェンフルオダイドとともに複槽装置を用いて樹脂から分裂された。

ガン腫（ＣＩＮグレード３）または侵略性頚部ガン腫を持った患者からの６２個の血清を得た。クローンＨＰＶＩ　６およびＨＰＶ１８のソーザンプロット（３２ケース）またはドツトプロット（３２ケース）により対応する頚部ビオプレ− （ｂｉｏｐｓｉｅｓ）がＨＰＶＤＮＡの存在について分析された。

ＨＰＶ１６は３２ケース中４：ＨＰＶ１８は４ケース中に探知された。ｈｐｖ１６感染頚部腫瘍を持った患者からの３０個の血清を採れば全ての翼なる合成ペプチドについてテストには充分であった。

他の腫瘍を持った患者から２２個の血清が得られた。３８個の血清が健康な女性から得られた。

合成ペプチドは１０ｍＭカーボネイト緩衝中で希釈され、２０μｇペプチド／ｍｌの濃度でハーフアジア９６ウエルミクロフイルタープレートに加えられた。プレートは室温で終夜保持された。ＰＰＢ５０．０５％トイーンによる１回の洗浄の後、プレートはＰＢＳ中の１０％ラム血清でブロックされた。その後６０分３７℃で放置された。ブロック用溶液をそのご廃棄し、プレートを紙で完全に包んだ。１０％ラム血清／ＰＢＳで人体血清を１：３０に希釈し、３７℃で１２０分間反応させた。ついでＰＢＳ−Ｔでプレートを５回洗浄した。結合抗体の探知のために、１０％ラム血清／ＰＢＳ中で抗人体１ｇＡホースラディシ１パーオキシダーゼモノクロナル抗体を１：５００に希釈し、プレート上で３７℃で１２０分放置した。それからＰＢＳ−Ｔでプレートを５回洗浄し、２０　ｍ　ｇ　／　ｍ　１の２．２′−アジノージ（３−エチルベンズチアソリｎ−サルフォナット（６））ジアンモニア塩（０゜１Ｍシトレート緩衝中でｌ；５０希釈）で培養した。

吸収は４１５ｎｍで６０分後に記録された。ＩｇＧの探知のためにプレートを洗浄して１０％ラム血清−ＰＢＳで３７℃で６０分ブロックした。その後兎抗人体ＧＧアルカリコンジュゲート（１０％ラム血清−ＰＢＳ中でｌ　：　１０００希釈）を３７℃で１２０分施した。ＰＢＳ−Ｔで５回と０．１Ｍジェタノールアミン緩衝で１回洗浄した後、０．１Ｍジエタノルアミン緩衝中の１　ｍ　ｇ　／　ｍ　１フオスフアターゼ生地を加え、プレートを９０分後に４０４ｎｍで読んだ。

ＩｇＭ抗体の探知のために、プレートを洗浄し上記のようにブロックしてから１０％ラム血清−ＰＢＳＩ：８０Ｇ希釈中抗人体１ｇＭグルコーズオキシダーゼコンジコゲートで１２０分放置した。生地としては０．３６ｍｇ／ｍｌのＡＢＴＳ２．４％グルコーゼ、０．１Ｍフォスフェート緩衝中の８μｇ　／　ｍ　ｌホースラディシュパオキシダーゼを用いた。プレートを６０分後に４１５ｎｍで読んだ。０．１以上の吸収をポジチブ反応とした。内部基準として、１６ポジチブ血清が各テストにおいてＨＰＶＩ　６のＥ２０ＲＦからの抗原ペプチドＨＫＳｓｌＶＴＬＹＹＤＳＥＩＱＲＤＱＣと反応した０ＥＬＩＳＡ吸収は内部基準にあわせて調製して分析物間の変動を補償した。

ＨＰＶ感染顕部履瘍を有した患者グループと比較グループととの間の確率的に顕著な差異についてＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸収を、コーチングされてないウェル生地と反応した同じ血清の吸収とともに、分析した。

一連の６６合成ペプチド、２０アミノ酸長で５残基重複としてＨＰＶタイプ１６のＬｌ、Ｌ２タンパクのアミノ酸順列を合成した。全てのペプチドが、ＨＰＶ１６感染頚部腫瘍患者からの３０血清中のＩｇｋまたはＩｇＧ抗体との反応性について、ＥＬＩＳＡでテストされた。第１３図に示すようにＬ１タンパクのいくつかの領域は反応性を示した。この図はＬ１タンパクに対するＩｇｋ反応性を示す。各点は横軸上に示した番号のペプチドと反応した１この血清についての吸収値を示す。コーチングされないウェルと反応したときの同じ血清の吸収値を差し引いた。）（ＰＶ１６感染頚部腫瘍を持つた患者からの３０個の血清を１：３０希釈し、ＨＰＶＩ６のＬＩＯＲＦの全てのアミノ酸順列を代表する３５個の２０残基合成ペプチドと反応させた。ＩｇＡ特定特定エンジ−ムコンジ−ゲートモノクロナル抗体り結合ａ抗体が探知された。

タンパク展開アミノ酸１６７〜２７１（ペプチド１２−１８に対応する）の内部領域からのペプチドに対してはＩｇｋ反応が特に強かった。この主たる免疫活性領域外には、いくつかの追加的な免疫活性なエピトーぺがあった。特にタン、ｆりのアミノ端末（ペプチドｌ）、ペプチド８（アミノ酸１０２〜１２１）およ主たる免疫活性領域のカルボキシル端末に位置するいくつかのエビトーベ、ペプチド２１と３！　（アミノ酸３０２〜３２１．４５２〜４７１に対応する）などが認められた。

これに比較してＬ２タンパクから引きだされたペプチドｉｔ第１４図に示す血清中のＩｇＡ抗体とはほとんど反応しなかった。この図はＬ２タンパクに対するＩｇｋ反応性を示す。

ＨＰＶのＬ２０ＲＦの全てのアミノ酸順列を代表する３１個の２０残基合成ペプチドと血清が反応した点を別とすれば、た第１３図と同様な実験が行なわれた。

主たるエピトーぺがタンパク（ペプチド４９、アミノ酸１９７〜２１６）の中間に位置していた。他のエビトーぺはタンノくり（ペプチド３７〜３８、アミノ酸１７〜４１）のアミノ端末部分に位置していることが探知された。Ｌ２のカルボキシル端末は反応性がより低いものであった。　Ｌ１タンノくりのＩｇＧ反応性！ｔ　Ｉｇｋ反応性よりも低い。第１５図にＬ１タンノくり１こ対するＩｇＧ反応性を示す。第１３図の実験と同様に実験が行なわれたが、ＩｇＧ（ガンマ−鎖）特定エンシームコンジュゲート兎抗体が用いられた点を別とする。主たるＩｇＡ免疫活性領域（ペプチド１２〜１ｇ）がＩｇＧ抗体と免疫活性であり、ＩｇＧ反応性はこの領域外（例えばペプチド２４（アミノ酸３４７〜３６６））のい（つかのエビトーベと同じであった。

Ｌ２タンパクは第１６図に示すように僅かにＩｇＧ反応性エピトーベを有していた。この図はＬ２に対するＩｇＧ反応性を示す。ＩｇＧ（ガンマ−鎖）特定エンシームコンジュゲート兎抗体を用い、血清を全てのＨＰＶのＬ２０Ｒのアミノ酸順列を代表するＦ３１個の２０残基合成ペプチドと反応させた点を別として、第１３図と同じ実験を行なった。この結果はこのタンパクのＩｇｋ反応性について発見したものと類似であった。このタンパクの主たるＩｇｋ反応性エビトーペであるペプチド４９喪主たるＩｇＧ反応性エピトーベであることが確認された。Ｌ２（ペプチド３７〜３８）のアミノ端末におけるＩｇＡ反応性エビトーベコマタＩｇＧ反応性であることが確認された（第４図）。

Ｌ１タンパクに対するＩｇＭ反応性は第１７図に示すようにタンパクの全長に沿っていくつかのエビトーベに分散されていた。この図はＬ１タンパクに対するＩｇＭ反応性を示す。

ＩｇＭ（ｍｕ鎖）特定エンジ−ムコフジ１ゲート山羊抗体が用いられた点を別として、第１３図と同様な実験が行なわれた。興味あることには、ＩｇＧまたはＩｇＡ抗体に対してあまり免疫活性でないペプチドに対して主たる１ｇＭ反応性が確認された。

Ｌ２タンパクの１ｇＭ免疫活性はＬ２ペプチドがＬ１ペプチドより反応性が低いＩｇＡおよびＩｇＧについてと似ていた。第１８図にＬ２タンパクに対する１ｇＭ反応性を示す。

１　ｇＭ　（ｍｕ鎖）特定エンジ−ムコフジ１ゲート山羊抗体が用いられかっ血清がＨＰＶ１６のＬ２０ＲＦの全てのアミノ酸順列を代表する３１個の２０残基合成ペプチドと反応した点を別とすれば第１３図と同様な実験が行なわれた。

３０血清からの４個以上において１個のＬ２ペプチドもＩｇＭとは免疫活性ではなかった。７個の最も免疫活性なペプチド（８，１２，１３，１４，１６，１７および２４）を■ｇＡ、ＩｇＧおよび１ｇＭ反応性を６０比較血清のパネルを用いてテストした。このうち２２は関係のない腫瘍を持った患者から３８は健康な対象から得られた。これらの患者のほとんどは顕著な免疫活性を示した。比較血清については１０％以下であった。第１９図は合成ペプチドの病気対反応性を示す。

東１９図に示すように高度に免疫活性な合成ペプチドの４個が、３０ＨＰＶ１８惑染頚部腫瘍血清（ＨＰ’Ｖ１６ＳＣＣ）と他の腸瘍を持った患者からかまたは健康な対象からの６０個の血清からなる比較グループとの間で、反応性の非常な差異を示した。各点はフーチングされないウェルの吸収値を差し引いたＥＬ　Ｉ　ＳＡ中の吸収値を示す。ペプチド８ニア０％に対する１ｇＭ反応性とともに、ＨＰＶ１６感染頚部腫瘍探知について高度な感度が認められた。このテストのスペシフイシティ（ｓｐｅｅｆｆｉｃｉｔｙ）は９５％（３／６０比較血清が反応性でありた）。ペプチド２４に対する１ｇＭ反応性は高度なスペシフィシティを示した＝９７％（２／６０比較血清が反応性であった）。しかし感度は低かった＝５３％（１６／３０患者血清が反応した）。ペプチド１４．１６に対スるＩｇＡ反応性は感度的６０％でスペシフィシティが９０％より若干上であった（箪１９図）。ポジチブ血清中の免疫活性は最も高く探知されたものの中にあった（第１〜６図と比較）。

ペプチドが免疫活性であることを示すことにより、人体血清と反応するエピトーベを含んでいるとし他のである。このペプチド順列に含まれたエピトーベはペプチドの正確な順列に絶対的に依存するものではないが、当初のペプチドの若干変態したものに長歯まれ得るものである。このような変態としては伸長、収縮収縮、環化およびアミノ酸の置換などがある。時にはそのように変態されたペプチドが新しいエビトーペを含んだ新しいペプチドと考えられる野ではないかという疑問がある。当初のペプチドと変態ペプチドとの比較免疫分析により、変態ペプチドが当初のペプチドに抗体に対して実質的に免疫活性でありしたがって同じエピトーベを含んでいるか否かを決定するのは簡単である。ペプチドは種々な方法で製造できる点は強調されるべきである。有機化学的方法によるペプチド合成が採用用されてきたが、同じペプチドを他の方法、例えば再結合ＤＮＡ表現システムなどでも製造できるのである。

この発明は以上の記載に限定されるものではない。免疫分析は例えば種々の方法で行なうことができる。特定の抗原に結合された抗体の探知は例えば種々の抗体対抗体（抗抗体）やペプチドＡやペプチドＢなどのような抗体に親和性を有した他の化合物を用いても達成できる。　これらの反応剤のラベリング（１ａｂｅｌ　１　ｉｎｇ）も、例えばフルオレセイｎ（フルオロ免疫分析）やエンシマ的（エンシーム連結免疫分性、ＥＬＩＳＡまたはＥＩＡ）にラジオアクティヴイティ（ラジオ免疫分析）などドによってもできるのである。特殊なエンシーム免疫分析としては、抗原−抗体複合体が筋肉上に探知される場合がある。このような手法は免疫染または免疫組織化学などと呼ばれているが、その原理はＥＬ　Ｉ　ＳＡと同じである。

ＥＬＩＳＡ法は種々のフォーマットで行なうことができる。

複層の抗抗体、アビジンビオチン複合体およびエンシーム抗エンシーム複合体を用いた方法が公知である。抗体を固定する剛性の支持体は通常プラスチックである。しかしその他にもラテックスやアガローゼも使われている。また抗体を直接剛性の支持体に固定する必要はない。例えばキャッチングまたはサンドイッチＥＬ　Ｉ　ＳＡと呼ばれる固相固定抗原抗体を用いてもよい。

シート状の剛性支持体二抗原をプロットする免疫分析は免疫ブロッチングと呼ばれている。典型的にはこの剛性の支持体はニトロセルローズまたはナイロンシートであるが、他の支持体を用いてもよい。この場合にはブロッチング前に抗原を寸法に応じてゲルエレクトロフォーレイスにより分けてやる。シート上の特定の抗原に対する抗体の結合の探知は免疫分析の場合と同じに行なう。

診断方法は一般にい（つかの方法を組合せることにより感度とスペシフィシティのよりよい方法が生み出されるのであるから、以上記載した種々の手法は適宜組合せることが可能である。

第１Ａ表ＩｇＧ　血清　分泌物１９０８４　、３６８　、１８４１９０ｇ５　、５９２　、１７３１９０Ｂ６　１．０４１　、３０６１９０８７　．２３０　．０）３１９０ｇ！１　．７７０　．１１１ｇ１９０８９　、２４０　、１８０１９０９０　、２５３　、２９４１９０９１　．２１０　．０３２１９０９２　．１９８　．０６０１９０９３　、６６０　、１９５１９Ｇ９４　．９４５　．２ａ１１９０９５　、２２４　、２２８１９０９６　．２８０　．２７８１９０９７　、２５９　、２２６１９０９ｇ　、２２２　．１３４ＩｇＡ　血清　分泌物１９０８４　、２９８　、０９０１９０８５　、１９９　、０７２１９０８Ｂ　、　３２７　、１３１１９０ｇ？　、１３７　．０５６１９０８８　、２３５　、１１８１９０ｇ９　、１４０　．０５３１９０９０　、１５３　、０７０１９０９１　、１２！　、　（１７６１９０９２、１１９、０５２１９０９３１，０２１、３９４１９０９４、１４０、０６８１９０９５、０７３、０９９１９０９６，１３６，０９８１９０９７、１２８、０９６１９０９１１、０９８、０５０血清および分泌物中の対ＰＶＩｇＡＳ　ＩｇＧ抗体の測定。

ＥＬ　Ｉ　ＳＡからの消去係数は１５患者を基礎とする。この情報の一部は第２．３．４図に示す。データの確率的分析によると対ＰＶＩｇＡ抗ＩｇＡ血清中であろうと分泌物中であろうと、対ＰＶ　Ｉ　ｇＧ抗体テストの結果と相関関係なし。

第１表Ｐｅｐペプチド　ＩｇＡ　ＩｇＧ　ＩｇＭタイド順列８　ＮＫＦＧＦＰＤＴＳＦＹＮＰＤＴＱＲＬＶＷ　＜０．０５　＜０．０００１　＜０．０００１１２　ＶＤＮＲＥＣＩＳＭＤＩＩ［ＱＴＱＬＣＬＩＧ　＜０．００２　＜０．０００１　＜０．０１１３　ＬＣＬＩＧＣＫＰＰＩＧＥＨＩＧＫＯＳＰＣ＜０．０２　＜０．０００１　Ｎ５１４　ＫＧＳＰＣＴＮＶＡＶＮＰＧＤＣＰＰＬＥＬ　＜　０．０００５　＜　０．０００１　＜　０．０００１１６　ＶＢＴＧＦＧＡＭＤＦＴＴＬＱＡＮＫＳＥＶ　＜０．０００１　＜０．０００１　＜０．０００１１７　ＮＫＳＥＶＰＬＤＩＣＴＳＩＣＫＹＰＤＹ＋　＜０．０１　ＮＳ　＜０．０００１２４　ＮＧＩＣＷＧＮＱＬＦＶｍＤＴＴＲＳＴ　＜０．００２　＜０．００Ｑ１　＜０．００１１６の頚部所要を有した３０の患者からの血清中の顕著に上がった対ＨＰＶ１６合成ペプチド抗体チテルスを他の腫瘍などを有した患者からの６０血清と比較。図はこれら２個のパラメータ中の顕著な差Ｘｐ値を示すＮＳ＝顕著でない第２表記号　アミノ酸Ｆ　Ｐｈｅ　ＬフェニルアラニンＭ　Ｍｅｔ　ＬメチオニンＡ　Ａｌａ　ＬアラミンＳ　Ｓｅｒ　Ｌセリン１　１１ｅ　ＬイソロイシンＬ　Ｌｅｕ　ＬロイシンＴ　Ｔｈｒ　ＬトレオニンＶ　Ｖａｌ　ＬバリンＰ　Ｐｒｏ　ＬプロリンＫ　Ｌｙｓ　ＬリシンＨＨｉｓ　ＬヒスチジンＱ　Ｇｌｎ　ＬグルタミンＥ　Ｇｌｕ　Ｌグルタミン酸Ｗ　Ｔ　ｒ　ｙ　Ｌ　）リブトファンＲＡｒｇ　ＬアルギニンＤ　Ａｓｐ　Ｌアスパルト酸Ｎ　Ａｓｎ　Ｌ　アスパラギンＣＣｙｓ　Ｌシスチン第３表番号　順列Ｉ　ＱＶＴＦＩＹＩＬＶＩＴＣＹＥ［）ＶＮＶＹ２　ＤＶＮＶＹＨＩＦＦＱＭＳＬＷＬＰＳＥＡ丁３　ＰＳＥＡ丁ＶＹＬＰＰＶＰＶＳＫＶＶＳＴＤ４　ＶＶＳＴＤＥＹＶＡＲＴＮＩＹＹＨＡＧＴＳ５　ＨＡＧＴＳＲＬＬＡＶＧＨＰＹＦＰＩＫｒＰ６　ＰｒＫＫＰＮＷＮｍＶＰＫＶＳＧＬＱＹ７　５ＧＬＱＹＲＶＰＲＩＨＬＰＩ）ＰＮＫＦＧＦ８　ＮＫＦＧＦＰＤＴＳＦＹ？１ＰＤＴＱＲＬＶＷ９　ＱＲＩ、ＶＩＦＡＣＶＧＶＥＶＧＲＧＱＰＬＧＶｌｏ　ＱＰＬＧＶＧＩＳＧＢＰＬＬＮＫＬＤＤＴＥｌｌ　ＬＤＤＴＥＮＡＳＡＹＡＡＮＡＧＶＤＮＲＥ１２　ＶＤＮＲＥＣＩＳＭＤＹＫＯＴＯＬＣＬＩＧ１３　ＬＣＬＩＧＣＫＰＰＴＧＥＨＷＧＫＧＳＰＣ１４１［ＧＳＰＣＴＮＶＡＶＮＰＧＤＣＰＰＬＥＬ１５　ＰＰＬＥＬＩＮＴＶＩＱＤＧＤＭＶＨＴＧＦ１６　ＶＨＴＧＦＧＡＭＤＰＴＴＬＱＡＮ！ｌ５ＥＶ１７　ＮＫＳＥＶＰＬＤＩＣＴＳＩ（ＪＹＴＤＹ１１８　ＹＰＤＹＩ［ＭＶＳＥＰＹＧＤＳＬＦＦＹＬ１９　ＬＦＦＹＬＲＲＥＱＭＰＶＲＩＩＬＦＮＲＡＧ２０　ＦＮＲＡＧＴＶＧＥＮＶＰＤＤＬＹＩＫＯＳ２１　ＹＩＫＧＳＧＳＴＡＮＬＡＳＳＮＹＦＰＴＰ２２　ＹＦＰＴＰＳＧＳＭＶＴＳＤＡＱＩＦＮＫＰ２３　ｒＦＮ■ＰＹＷＬＱＲＡＱＧＨＮＮＧＩＣＦ２４　ＮＧＩＣＩＧＮＱＩ、ＦＶＴＶＶＤＴＴＲ３Ｔ２５　ＴＴＲ５ＴＮＭＳＬＣＡＡＩＳ丁５ＥＴＴＹ２５　５ＥＴＴＹＩＮＴＮＦＸＥＹＬＲＨＧＥＥＹ２７　ＨＧＥＥＹＤＬＱＦＩＦＱＬＣＫＩＴＬＴＡ２ｇ　１ＴＬＴＡＤＶＭＴＹＩＨＳＭＮＳＴＩＬＥ２９　ＳＴＩＬＥＤＷＮＥＧＬＱＰＰＰＧＧＴＬＲＥ３０　ＧＧＴＬＥＤＴＹＲＦＶＴＱＡＩＡＣＱＫＩＩＩ３１　ＡＣＱＫＨＴＰＰＡＰＫＥＤＤＰＬ■ＹＴ３２　ＬＩＨＹＴＦＷＥＶＮＩＪＥＫＦＳＡＤＬＤ３３　５ＡＤＬＤＱＦＰＬＧＲＫＦＬＬＱＡＧＩＪ３４　ＱＡＧＩＪＡＫＰＫＦＴＬＧＫＲＫＡＴＰＴ３５　ＫＡＴＰＴＴＳＳＴＳＴＴＡＫＲＫＫＲＫＬ３６　ＲＨＫＲＳＡＫＲＴＫＲＡＳＡＴＯＬＹＫＴ３７　ＱＬＹＩＴＣＫＱＡＧＴＣＰＰＤＩＩＰＫＶ３ｇ　＋１ＰＩＶＥＧＫＴＩＡＥＱＩＬＱＹＧＳＭ３９　ＱＹＧＳＭＧＶＦＦＧＧＬＧＩＧＴＧＳＧＴ４０　ＴＧＳＧＴＧＧＲＴＧＹＩＰＬＧＴＲＰＰＴ４１　ＴＲＰＰＴＡＴＤＴＬＡＰＶＲＰＰＬＴＶＤ４２　ＰＬＴＶＤＰＶＧＰＳＤＰＳＩＶＳＬＶＥＥ４３　５ＬＶＥＥＴＳＰＩＤＡＧＡＰＴＳＶＰＳＩ４４　５ＶＰＳＩＰＰＤＶＳＧＦＳＩＴＴＳＴＤＴ４５　ＴＳＴＤＴＴＰＡＩＬＤＩＮＮＹＶＹＹＶＴ４６　ＶＴＴＶＴＴＩＩＩＮＮＰＴＦＴＤＰＳＶＬＱＰ４７　５ＶＬＱＰＰＴＰＡＥＴＧＧＨＦＴＬＳＳＳ４８　ＴＬＳＳＳＴＩＳＴＨＮＹＥＥＩＰＭＤ丁Ｆ４９　ＰＭＤＴＦＩＶＳＴＮＰＮＴＶＴＳＳＴＰＩＳｏ　５ＳＴＰ＋ＰＧＳＲＰＶＡＲＬＧＬＹＳＲＴ５１　ＬＹＳＲＴＴＱＱＶＫＶＶＤＰＡＦＶＴＴＰ５２　ＦＶＴＴＰＴＫＬＩＴＹＤＮＰＡＹＥＧＩＤ５３　ＹＥＧＩＤＶＤＮＴＬＹＦＳＳＮＤＮＳＩＮ５４　ＤＮＳＩＮＩＡＰＤＰＤＦＬＤＩＶＡＬＨＲ５５ＶＡＬＩＩＲＰＡＬＴＳＲＲＴＧＩＲＹＳＲＩ５６　ＲＹＳＲＩＧＮＫＱＴＬＲＴＲＳＧＫＳＩＧ５７　ＧＫＳＩＧＡＫＶ［（ＹＹＹＤＬＳＴＩＤＰＡ５８　ＴＩＤＰＡＥＥＩＥＬＱＴＬＴＰＳＴＹＴＴ５９　５ＴＹＴＴＴＳＨＡＡＳＰＴＳＩＮＮＧＬＹ６０　ＮＮＧＬＹＤＩＹＡＤＤＦＩＴＤＴＳＴＴＰ６１　ＴＳＴＴＰｖＰＳＶＰＳＴＳＬＳＧＹＩＰＡ６２　ＧＹＩＰＡＮＴＴ［ＰＦＧＧＡＹＮＩＰＬＶ６３　ＮＩＰＬＶＳＧＰＤＩＰＩＮＩＴＤＱＡＰＳ６４　ＤＱＡＰＳＬＩＰＩＶＰＧＳＰＣＹＴＩＩＡ６５　ＹＴＩＩＡＤＡＧＤＦＹＬＨＰＳＹＹＭＬＲＫ６６　ＹＭＬＲＫＲＲＫＲＬＰＹＦＦＳＩＶＳＬＡＡ

Claims

【特許請求の範囲】

１．約６４ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白コードＬ２および約５４ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白コードＬ１に対する抗体および約２８ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白諸コードに対する抗体および約１４ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白に対する抗体または【配列があります】からなる群から選ばれた式により表されるアミノ酸順列を有したペプチド、またはこれらの群のいずれかのペプチドの変態であって初期のペプチドに対する抗体と免疫反応性のものに対するＩｇＧ抗体の体液または筋肉中における存在を確認することにより探知を行なうことを特徴とする医療目的の人体乳頭腫ヴィールス（ＨＰＶ）、特に体液または筋肉上のＰＶを伴う腫瘍の防止方法。
２．抗体が人体を源とし、探知されるべき感染がＨＰＶ感染またはＨＰＶを伴う病気であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
３．抗体の存在が免疫分析により行なわれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
４．免疫分析がＥＬＩＳＡであることを特徴とする請求項３に記載の方法。
５．免疫分析が免疫ブロッチング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）であることを特徴とする請求項３に記載の方法。
６．探知が分泌物により行なわれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
７．探知が頸部分泌物について行なわれることを特徴とする請求項６に記載の方法。
８．探知が頸部腫瘍の診断より行なわれることを特徴とする請求項７に記載の方法。
９．分泌物が消毒綿、プラシ、へらなどに採られ、希釈液によりこれから洗われることを特徴とする請求項６に記載の方法。
１０．探知が血清について行なわれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
１１．約２８ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白および約１４ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白に対する抗体または【配列があります】からなる群から選ばれた式により表されるアミノ酸順列を有したペプチド、またはこれらの群のいずれかのペプチドの変態であって初期のペプチドに対する抗体と免疫反応性のものに対するＩｇＧ抗体の体液または筋肉中における存在を確認することにより探知を行なうことを特徴とする請求項１に記載の方法。
１２．抗体が人体を源とし、探知されるべき感染がＨＰＶ感染またはＨＰＶを伴う病気であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
１３．抗体の存在が免疫分析により行なわれることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
１４．免疫分折がＥＬＩＳＡであることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
１５．免疫分折が免疫ブロッチング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
１６．探知が分泌物により行なわれることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
１７．探知が頸部分泌物について行なわれることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
１８．探知が頸部腫瘍の診断より行なわれることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
１９．分泌物が消毒綿、プラシ、へらなどに採られ、希釈液によりこれから洗われることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
２０．探知が血清について行なわれることを特徴とする請求項１１記載の方法。
２１．【配列があります】からなる群から選はれた式により表されるアミノ酸順列を有したペプチド、またはこれらの群のいずれかのペプチドの変態であって初期のペプチドに対する抗体と免疫反応性のものに対するＩｇＧ抗体の体液または筋肉中における存在を確認することにより探知を行なうことを特徴とする請求項１に記載の方法。
２２．抗体が人体を源とし、探知されるべき感染がＨＰＶ感染またはＨＰＶを伴う病気であることを特徴とする請求項２１に記載の方法。
２３．抗体の存在が免疫分析により行なわれることを特徴とする請求項２１に記載の方法。
２４．免疫分析がＥＬＩＳＡであることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
２５．免疫分折が免疫ブロッチング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）であることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
２６．探知が分泌物により行なわれることを特徴とする請求項２１に記載の方法。
２７．探知が頸部分泌物について行なわれることを特徴とする請求項２６に記載の方法。
２８．探知が頸部腫瘍の診断より行なわれることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
２９．分泌物が消毒綿、プラシ、へらなどに採られ、希釈液によりこれから洗われることを特徴とする請求項２６に記載の方法。
３０．探知が血清について行なわれることを特徴とする請求項２１記載の方法。
３１．約２８ｋＤａ乳頭腫ヴィールス蛋白および約１４ｋＤａ乳頭腫イールス蛋白に対する抗体または【配列があります】からなる群から選ばれた式により表されるアミノ酸順列を有したペプチド、またはこれらの群のいずれかのペプチドの変態であって初期のペプチドに対する抗体と免疫反応性のものに対するＩｇＧ抗体の体液または筋肉中における存在を確認することにより探知を行なうことを特徴とする請求項１に記載の方法。
３２．抗体が人体を源とし、探知されるべき感染がＨＰＶ感染またはＨＰＶを伴う病気であることを特徴とする請求項３１に記載の方法。
３３．抗体の存在が免疫分析により行なわれることを特徴とする請求項３１に記載の方法。
３４．免疫分析がＥＬＩＳＡであることを特徴とする請求項３３に記載の方法。
３５．免疫分析が免疫ブロッチング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）であることを特徴とする請求項３３に記載の方法。
３６．探知が分泌物により行なわれることを特徴とする請求項３１に記載の方法。
３７．探知が頸部分泌物について行なわれることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
３８．探知が頸部腫瘍の診断より行なわれることを特徴とする請求項３７に記載の方法。
３９．分泌物が消毒綿、プラシ、へらなどに採られ、希釈液によりこれから洗われることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
４０．探知が血清について行なわれることを特徴とする請求項３１記載の方法。