JPH03503719A - 生体液中のジアミンの検出 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生体液中のジアミンの検出 本発明は、ジアミン、特に腟分泌物中のプトレッシン及びカダベリンの同定方法 、ある種の臨床状態の診断におけるこの使用、及びこの方法を日常的に使用可能 とする診断キットに関する。

膣炎は実際問題として一般的な問題である。膣炎の一般的形状はＣａｒｄｎｅｔ 及びＤｕｋｅｓらにより特徴付けられ（ＨｏＬ、　Ｇａｒｄｎｅｒａｎｄ　Ｃ， Ｄ、Ｄｕｋｅｓ、　Ａｍ、Ｊ、０ｂｓｔｅｔ、Ｇｙｎｅｃｏｌ、、　１９５５． ６９．９６２〜９７６）、彼らは５．０〜５．５０ｐＨを有する灰色の均質分泌 物が関係し、わずかな炎症を伴なう状態を記載している。この状態この状態の臨 床診断は、「手掛り細胞」　（粘着性表面細菌を有する腕上皮細胞）、高いｐＨ ，及び分泌物にアルカリを加えた際に生ずるｒ魚のような」臭気（「アミン」テ スト）の同定により促進される（）１．　Ｌ、　Ｇａｒｄｎｅｒ　ａｎｄ　Ｃ０ Ｄ、　Ｄｕｋｅｓ、上記；Ｔｈｅ　Ｗｏｒｋｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　”Ｔｈ ｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ〜３日かかる。簡単な、速 い診断方法はない。ジアミンプトレッシン及びカダベリンはＧａｒｄｎｅｒｅｌ ｌａに関係する膣炎に高の共生増殖により形成される。従来の研究はジアミンの 存在が患者の９６％において臨床的徴候に相関することが示した（Ｋ、　Ｃ，Ｓ 、Ｃｈｅｎ　ら、Ｊ、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、、　　１９ｇ２．　１４５．３３ ７〜３４５）。

従来、ジアミンの検出は、専門の装置及び人を必要とする電気分解又は薄層クロ マトグラフィーに依存していた（Ｋ、　Ｃ，Ｓ。

Ｃｈｅｎら、前記）。本発明の目的は、実験室、診療室、手術室、又は家庭にお いて化学分析もしくは微生物学的手段に熟練していない人によって行なうことが できるようにジアミンの存在を確認する方法を提供することである。

本発明は、ジアミン、プトレッシン及びカダベリンと反応し過酸化水素を与える 選ばれたジアミンオキシダーゼを用いる。これは好適な色素産生システム及びペ ルオキシダーゼにより形成される色反応により検出される。好適なジアミンオキ シダーゼ（Ｂ、　Ｃ，１，４，３，６＞はエントウ苗木より単離され（Ｒ，Ｅ、 ＭｃＧｏｗａｎ　ａｎｄ　Ｒ，Ｍ、Ｍｕｉｒ、　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ、 、　１９７１．４７゜６４４〜６４９）、これは高特異性でプトレッシン及びカ ダベリンを酸化する。他のジアミンオキシダーゼ、例えば豚腎臓からのオキシダ ーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）を同様に用いてよい。

ペルオキシダーゼは市販入手可能な公知の酵素である。色素産生システムに対し 、多くの異なる試薬が用いられる。過酸化水素を検出するためＢａｒｈａｍ及び Ｔｒｉｎｄｅｒにより導入された４−アミノアンチピリンと３．５−ジクロロ− ２−ヒドロキシベンゼンスルホン酸の混合物（Ｄ、　Ｂａｒｈａｍ　ａｎｄ　Ｐ 、Ｔｒｉｎｄｅｒ。

Ａｎａｌｙｓｔ、　１９７２．９７．１４２〜１４５）は十分であるが、他のフ ェノール性成分、例えばクロモトロープ酸又は２．４．６−）リブクモ−３−ヒ ドロキシ安息香酸も満足に用いられる。

十分作用する他の色素産生システムは、３．３’　　、５．５’−テトラメチル ベンジジン及び２．２′−アジノービス−（３−エチルベンズチアゾリン−６− スルホネート）を含む。

最初の形状の診断テストは、腟綿棒を取り出し、これをジアミンオキシダーゼ、 ペルオキシダーゼ、及び発色体化合物を含む溶液中で撹拌することを含む。発色 システムとして４−アミノアンチピリンと３．５−ジクロロ−２−ヒドロキシベ ンゼンスルホン酸の混合物を用いる場合、２分間で明確なマゼンタ色があられれ 、１時間以上安定である。定量的測定は溶液の光学密度より得られるが、これは 臨床診断テストには必要ない。陰性サンプルは色を示さず、又はせいぜいとても 薄い色を示すのみである。この形状のテスト用の試薬の溶液は、好適な容器内で 製造したすべての成分の凍結乾燥した混合物に水を加えることにより製造される 。この凍結乾燥した混合物はその効力を損うことなしに貯蔵できる。この他に、 試薬を他の方法、例えば錠剤形状に又は紙もしくは他の表面層に吸収させて形成 してよい。

１８３個の腟分泌物の臨床サンプルをテストし、結果は現在の診断法、すなわち 「アミン」テスト、「手掛り細胞」及びＧ、　ｖａｇｉｎａｌｉｓの培養と相関 した。この相関、並びに感受性及び特異性を例７に示す。ジアミンテストの結果 は微生物学的培養並びに２つのサイドルーム方法、「手掛り細胞」及び「アミン 」テストと密接に相関する。「手掛り細胞Ｊと「アミン」テストの比較における 一致は、Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌａｂｏ−ｒａｔｏｒｙ　５ｅｒｖｉｃ ｅからの微生物学的結果との比較より良い。この３つの比較すべてにおいて、ジ アミンテストは感受性よりも特異性がわずかに劣っていた。微生物学的、「手掛 り細胞」及び「アミン」テストの感受性はそれぞれ８６％、９６％、及び９３％ であった。新規テストは診断法として十分作用する。

プトレッシンの濃度の増加に対するジアミンオキシダーゼ／染料システムの応答 の直線性 方法 各インキュベーションは以下の試薬を含んでいた。

４−アミノアンチピリン（５■／ｍｊｉ！　：　０．１艷）：３．５−ジクロロ −２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホン酸（３５■／ｄ；０．１ｍｆｆ１）　　； ペルオキシダーゼ（１■／ｍｊ？；０．１ｍＩり；ジアミンオキシダーゼ（５〜 １５ユニット／ｍｆ　；　０．０２ｍｆ）　　；プトレッシン（０〜１．２５ｍ Ｍ　；　０．１１ｎｌ）緩衝液（０，１Ｍトリス−ＨＣｌｌ　、　ｐＨ７，５； 　２　ｄ）この試薬を混合し、１０分間インキュベーションした後５１５ｎｍで の吸収を記録した。この吸収は加えたプトレッシンの量に比例し、このアッセイ における吸収とプトレッシンの量の間の関係は調べた範囲（０〜１２５ｎｍｏ　 ！プトレッシン）において直線であることが明らかとなった。

表 ０　　　　　　　０　　　　　　　２５　　　　　　０、２９２１　　　　　　 　０．０１２　　　　　５０　　　　　　０．５８４２．５　　　　　　０．０ ２８　　　　　７５　　　　　　０．８８５５　　　　　　　０．０５８　　　 　１００　　　　　　１．１６０？、５　　　　　　０．０８８　　　　１２５ 　　　　　　１．４４６１０　　　　　　　０、１１３ 例２ ２種のジアミン、プトレッシン及びカダベリンに対するジアミンオキシダーゼ／ 染料システムの応答の加成性方法は例１（！：同じであるが、プトレッシンもし くはカダベリンのいずれか、又はプトレッシン及びカダベリンの両方の混合物を 用いる。プトレッシン及びカダベリンはモル基準で同じ吸収を与え、インキュベ ーション内に共に存在する場合吸収は２つのジアミンを別々に測定した吸収を単 に加えることにより予言された。

表 吸収５１５ｎｍ カラム１　カラム２　　カラム３　　カラム４１ｎｍｏｌ　　　　Ｏ，０１１０ ，００９０，０１８０，０２０Ｏ２０１Ｏｎ　　　　Ｏ，１１３０，０９６０， ２２５０，２０９１００ｎｍｏｌ　　　　１．１０５　　１．１０４　　　２． １６３　　　２．２０９（カラム４はカラム１とカラム２の吸収の和として計算 する）例３ 他のアミンもしくはジアミンに対するジアミンオキシダーゼ／染料システムの応 答 方法は例１と同じであるが、プトレッシンを他の生物学的に重要なアミンと換え た。他のアミンは、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、アルギニン、シ スティン、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソ ロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プ ロリン、セリン、トレオニン、チロシン、トリプトファン、バリン、４−アミノ ブチル酸、ヒスタミン、フェネチルアミン、スペルミン、及びチラミンを含む。

これらの他のアミンによる色形成は検出されず、又はとても遅かった。

従って、分泌物又は分泌液中に存在するであろうこれらの生物学的に重要なアミ ンに対するジアミンオキシダーゼ／染料システムの応答は、プトレッシン及びカ ダベリンにより形成される色より容易に区別できる。

例４ ジアミンオキシダーゼと共に用いられる他の染料システム方法は、インキュベー ションが４−アミノアンチピリン及び３．５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼ ンスルホン酸のかわりに２．２′−アジノービス−（３−エチルベンズチアゾリ ン−６−スルホネー））（１４■／ｒｎｌ；０．１ｍｆ）を含むことを除き例１ と同じである。吸収は室温で６０分間インキュベーション後６４６ｎｍで測定し た。

表 ０　　　　　　　０　　　　　　　２５　　　　　　０、１７２１　　　　　　 　０．００８　　　　　５０　　　　　　０．３３６２．５　　　　　　０．０ １８　　　　　７５　　　　　　０．４９０５　　　　　　　０．０３５　　　 　１００　　　　　　０．６４３７．５　　　　　　０．０５４　　　　１２５ 　　　　　　０．８０１１０　　　　　　　０、０７０ この他の染料システムはプトレッシン濃度に比例した吸収を与え、従ってこの方 法が例１で引用した染料システムに依存せず、他の過酸化水素検出システムによ り行なってよいことを示している。

例５ 乾燥形状での試薬の安定性 透明なポリスチレンチューブに、乾燥形状で以下の成分を加えた。

４−アミノアンチピリン（０，５■）；３・５−ジクロロ−２−ヒドロキシベン ゼンスルホン酸（３，５■）： ベルオキシダーゼ（０，１■）ニ ジアミンオキシダーゼ（０，２ユニツト）；トリス−ＨＣｌ、　ｐｉ（７，５（ ０，２ｍｍｏｌ＞凍結乾燥した混合物は例１と同じ量の試薬を含んでいたが、プ トレッシンは含んでいなかった。

各チューブを４℃で６週間貯蔵抜水２．３ばで再構成し、反応性を同じ組成の新 鮮な溶液と比較した。各テストにプトレッシン（５０ｎｍｏｌ）を加え、吸収を 比較した。

表 吸収　５１５ｎａ＋　　　　　　平均 新鮮　０．５８８　０．５８７　０．６１２　０．５９６再構成　　　０．６０ ８　　０．６０７　　０．６０９　　０．６０８成分を乾燥形状で貯蔵した場合 、ジアミンオキシダーゼ／染料システムによる反応性は損失しなかった。同様に 、同じ成分をＷｈａｔｍａｎ　Ｎα１クロマトグラフ紙上で乾燥しこの紙をプト レッシンを含む溶液に浸漬した場合、マゼンタ色が表われた。

例６ 腟分泌物の分析に対するジアミンオキシダーゼ／染料システムの適用 腟綿棒を （ｉ）膣炎患者、 （ｉｉ）子宮頚部スミア又は家族計画アドバイスをうけている患者、 （■）健康診断をうけている女性 より取り出した。各綿棒を０．１Ｍ−）リス／ＨＣｆ緩衝液１７！で２回洗った 。洗浄液中のすべての粒状物質を遠心及び／又は濾過により除去した。少量（０ ，５ｄ）をトリス／ＨＣＩ！緩衝液（ｐＨ７，５、０，１Ｍ、１．５ｍ１）　　 ：３．５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼンスルホン酸（３５■／ＩＩＬ１． ０．ＩＷｌｌ）；４−アミノアンチピリン（５■／献、０．１ｍ１）；ペルオキ シダーゼ（１ｍｇ／ｗｄｌ　、　０．１　ｍｌり　　；ジアミンオキシダーゼ（ １０ユニット／ｍｆｆ１　、０．０２Ｗｄｌ）含む混合物に加えた。

室温で１０分間インキュベーション後、５１５ｎｍでの吸収を測定し、ジアミン の量を標準検量線より計算した。１８３個の綿棒の調査より、各綿棒中のジアミ ンの量を調べた。この値は０〜５４０ｎｍｏｌジアミン／綿棒であった。

例７ １８３個の腟綿棒を例６に記載の方法により定量的にアッセイし、結果をＰｕｂ ｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　５ｅｒｖｉｃｅによる微生物培 養及びＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａに関係する膣炎の診断法と比較した。

「アミン」テスト、「手掛り」細胞の同定、並びに綿棒の取り出し、貯蔵、輸送 及び培養の詳細は記載されている（Ｔ、ｃ。

微生物学的比較 Ｔｈｅ　Ｐｕｂｌｉｃ　）ｌｅａｌｔｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　５ｅｒｖｉｃ ｅは５７個の綿棒をＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ腟炎陽性と、残りの１膣炎個の綿棒 をＧａｒｄｎｅｒｅ１１ａ腟炎陰性と判定した。Ｇａｒｄｎｅｒｅｌ　ｌａ陽性 群の綿棒あたりの測定したジアミンの平均量は１６１ｎｍｏｌジアミン（＋　１ ４６ｎｍｏ　Ｉｓ、ｄ、）であり、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ陰性群では３７ｎｍ ｏｌジアミン（＋８６ｎｍｏｌ　ｓ、ｄ、）であった。この差は有意であった。

ジアミンオキシダーゼ／染料アッセイにおいて陽性と陰性の間の分割ラインとし て２５ｎｍｏ　１のジアミン／綿棒のラインを選んだ場合、ジアミンテストの感 受性は４９１５７＝８６％であり、すなわち８個は「偽陰性」であり、ジアミン テストの特異性は１００／１２６　＝７９％であり、すなわち２６個が「偽陽性 」である。

「手掛り細胞」比較 １７１個の綿棒を「手掛り細胞」について調べた。５２個の綿棒が「手掛り細胞 陽性」き、１７個の綿棒が「手掛り細胞不確定」と、及び１０２個の綿棒が「手 掛り細胞陰性」とされた。

ジアミンテストの結果はこれら３群に対しそれぞれ２００ｎ＊ｏｌジアミン（＋ １４１ｎａ＋ｏｌ　ｓ、ｄ、）　／綿棒、５４ｒｏｓｏｌジアミン（＋　１０３ ｎｏ＋ｏｌ　ｓ、ｄ、）／綿棒、及び２２ｎｍｏｌジアミン（＋６０ｎｍｏｌ　 ｓ、ｄ、）／綿棒であった。この３群の統計的評価により、「手掛り細胞不確定 」群のサンプルが「手掛り細胞陽性」群のサンプルと十分差があるが「手掛り細 胞陰性」群のサンプルとは差がないことが明らかとなった。従って、「手掛り細 胞不確定」及び「手掛り細胞陰性」群は１つの群と考えられた。

ジアミンオキシダーゼ／染料アッセイの陽性及び陰性の間の分割ラインとして２ ５ｎｍｏｌジアミン／綿棒のラインを選んだ場合、ジアミンテストの感受性は５ ０１５２＝９６％であり、すなわち２個が「偽陰性」であり、特異性は９７／１ １９　＝８２％であり、すなわち２２個が「偽陽性」である。

「アミン」テスト比較 ジアミンオキシダーゼ／染料システムアッセイにおける２５ｎｍｏ　］ジアミン ／綿棒の同じカットラインを用い、「アミンコテストにおいて陽性と判定された ４２個の綿棒のうち４０個がジアミンテストにより陽性と判定された。同様に「 アミン」テストによりたぶん陽性と判定された１５個の綿棒のうち１３個及び「 アミン」で陰性と判定された８７個の綿棒のうち１４個はジアミンテストにおい て陽性であった。たぶん陽性と考えられた綿棒が陽性である場合、相対感受性は ５３１５７＝９３％であり、すなわち４個が「偽陰性」であり、相対特異性は７ ３／８７＝８４％であり、すなわち１４個が「偽陽性」である。

ジアミンオキシダーゼ／染料システムの結果は微生物学的培養並びに２つの方法 、「手掛り細胞」及び「アミン」テストと一致する。「手掛り細胞」及び「アミ ン」テストの比較の一致はＰｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ 　５ｅｒｖｉｃｅからの微生物学的結果との一致より良い。

この３つの比較すべてにおいて、ジアミンテストは「偽陰性」を示す感受性より 「偽陽性」を示す特異性がわずかに劣っていた。微生物学的、「手掛り細胞」及 び「アミン」テストの感受性はそれぞれ８６％、９６％及び９３％であり、一方 「偽陽性」の範囲は微生物学的、「手掛り細胞」及び「アミン」テストそれぞれ について２１％、１８％及び１６％であった。「アミン」テストとの一致は、ジ アミンテストがサイドルームテストに伴なう特徴的臭気を発するジアミンを測定 するため予想される。

この比較の各々において、ジアミンアッセイの効果は、微生物学的培養又はサイ ドルームテストのいずれかにより与えられる真の答に基づき評価される。しかし 、どのテストも決定的なテストと考えられておらず、診断はこの比較において用 いたいくつかのテストの集合的評価に基づく。従って、ジアミンオキシダーゼ／ 染料システムアッセイの評価は、それが他の方法と同様に正確であるが軽便さ及 び速さの点で利点を有し、当業者でなく、又は訓練をうけていない人でも行って よいことを示している。

例８ 人の血清の存在下でのジアミンの分析に対するジアミンオキシダーゼ／染料シス テムの適用 方法 各インキュベーションは以下の試薬を含んでいた。

４−アミノアンチピリン（５■／ｍｆ、０．ＩＷｄｌ）　　；３．５−ジクロロ −２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホン酸（３５■／ｍｊ！、０．ＩＷ１１）　　 ；ペルオキシダーゼ（１ｒｎｇ／ｍｌ　、　０．１　ｍ）　　；ジアミンオキシ ダーゼ（５〜１５ユニット／ｄ；０．０２ｄ）；プトレッシンもしくはカダベリ ン（０、１０，５０もしくは１００１００ｎ、０．１　ｍｆ）　　　；人血清も しくは緩衝液（０，ＩＭ）リス−ＨＣＡ　、　ｐＨ７，５。

０．５＋＋＋１）； 緩衝液（０，Ｉ　Ｍ　）リス−〇（Ｊ！　、　ｐＨ７，５＞（最終体積を２．１ 　ｒｒｄｌにする） 試薬を混合し、１０分間インキュベーション後５１５ｎｍでの吸収を記録した。

吸収は加えたプトレッシンもしくはカダベリンの量に比例し、従ってアッセイに おける吸収とプトレッシンもしくはカダベリンの量の間の関係が調べた範囲（０ 〜１００ｒ＋ｍジアミン）において人血清の存在下直線であることがわかった。

表（未透析血清） プトレッシン　　Ａ　５１５ｎｍ　　　カダベリン　　Ａ　５１５ｎｍｎｍｏ　 １　　−血清　＋血清　　ｎｍｏ　１　−血清　＋血清１０　　　０．１１１　 ０．０９１　　　１０　　０．１２７　０．０９６５０　　　０．５６２　０． ４２５　　　５０　　０．６１６　０．５０３１００　　　１．１１８　０．９ ４８　　１００　　１．２６５　１．０７８アツセイにおける血清の存在は吸収 を１５〜２０％低下させ、この低下はプトレッシン及びカダベリンの両方とも同 じであった。

２つの同じインキュベーションを調製し、１つは生理食塩水（０，１５４Ｍ　− ＮａＣｌ　）に対し４℃で２４時間透析した人血清を用い、他方は同じインキュ ベーション内にプトレッシン及びカダベリンを用いた。

表（透析した血清） プトレッシン　　Ａ　５１５ｎｍ　　　カダベリン　　Ａ　５１５ｎｍｎｍｏ　 １　　−血清　＋血清　　ｎｍｏ　１　−血清　＋血清１０　　　０．１１１　 ０．０８９　　　１０　　０．１２７　０．１０４５０　　　０．５６２　０． ４８０　　　５０　　０．６１６　０．５４４１００　　　１．１１８　０．９ ４７　　１００　　１．２６５　１．０９６アツセイにおける透析した血清の存 在は未透析血清により示される効果と同じ効果を有し、色形成の低下はプトレッ シン及びカダベリンの両方とも同じであった。

例２に報告された発見と同様に、プトレッシン及びカダベリンからの色形成は透 析したもしくは未透析血清の存在下加成的であった。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成２年８月７日 特許庁長官　植　松　　　敏　殿 １　特許出願の表示 ＰＣＴ／ＧＢ８９１０　Ｏ１９１ 、発明の名称 生体液中のジアミンの検出 ３　特許出願人 住　所　イギリス国、シーエフ１１エツクスエル。

カーディフ、ピーオー　ボックス　７８名称　　ユニバーシティ　カレッジ　カ ーディフコンサルタンツ　リミティド　（外１名）４代理人 氏名弁理士（６５７９）青米　　朗 （外３名） ５　補正書の提出年月日 １９９０年４月２６日 ６　添付書類の目録 補正書の翻訳文　　　　　　　　　　　　　　　　　１通請求の範囲 １、腟分泌物中にジアミンが表われる腟感染、特にガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅ ｒｅｌｌａ）に関係する細菌性膣炎の検出方法であって、膣液のサンプルにプト レッシン及び／又はカダベリンに対する高特異性を有するジアミンオキシダーゼ 並びに色素産生システムを加え、ジアミンの酸化より生ずる過酸化水素の存在又 は非存在を検出することを特徴とする方法。

２、サンプルが綿棒により得られる、請求項１記載の方法。

３、　ジアミンオキシダーゼがエントウの苗木由来である、請求項１又は２記載 の方法。

４、色素産生システムがペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン、及びフェ ノール性化合物より構成されている、請求項１．２又は３記載の方法。

５、　フェノール性化合物が３．５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼンスルホ ン酸である、請求項４記載の方法。

６、膣液のサンプル中のジアミンの酸化より生ずる過酸化水素の存在又は非存在 を検出するための、プトレッシン及び／又はカダベリンに対し高特異性を有する ジアミンオキシダーゼ並びに色素産生システムを含む、腟感染、例えばガードネ レラに関係する細菌性膣炎を検出するための、膣液の直接テストに有効な診断キ ット。

国際調査報告 、８−１やｓ＋＋ａｌ　Ａｅｓｌｌａａｗ＊　Ｈ０ＰＣＴ／ＧＢ　８９１００１ ９１国際調査報告

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．試験管内で生体液にジアミンオキシダーゼ及び色素産生システムを加え、ジ アミンの酸化より生ずる過酸化水素の存在を検出することを含む、生体内の少な くとも１種のジアミンの検出方法。
2. ２．ジアミンがプトレッシンもしくはカダベリン、又はそれらの混合物である、 請求項１記載の方法。
3. ３．色素産生システムがペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン、及びフェ ノール性化合物より構成されている、請求項１又は２記載の方法。
4. ４．フェノール性化合物が３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼンスルホン 酸である、請求項３記載の方法。
5. ５．ジアミンオキシダーゼがエンドウ豆の苗木由来である、前記請求項のいずれ か記載の方法。
6. ６．ガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）に関係する細菌性腟炎の検出用の 、及び生体液が腟分泌物である、前記請求項のいずれか記載の方法。
7. ７．ジアミンの酸化より得られる過酸化水素の存在を検出するためのジアミンオ キシダーゼ及び色素産生システムを含む、１種以上のジアミンを検出するための 診断キット。
8. ８．カダベリンもしくはプトレッシン又はそれらの混合物を検出するための、請 求項７記載の診断キット。
9. ９．色素産生システムがペルオキシダーゼ、４−アミノアンチビリン、及びフェ ノール性化合物より構成されている、請求項７又は８記載の診断キット。
10. １０．フェノール性化合物が３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼンスルホ ン酸である、請求項９記載の診断キット。
11. １１．ジアミンオキシダーゼがエンドウ豆の苗木由来である、請求項７〜１０の いずれか記載の診断キット。
12. １２．試薬が密閉容器内又は軽便な表面、例えば紙上の凍結乾燥形状である、請 求項７〜１１のいずれか記載の診断キット。
13. １３．ガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅ１１ａ）に関係する細菌性腟炎の検出用 の、及び生体液が腟分泌物である、請求項７〜１２のいずれか記載の診断キット 。