JPH024301B2

JPH024301B2 -

Info

Publication number: JPH024301B2
Application number: JP60162048A
Authority: JP
Inventors: Tooru Kuroda; Naokuni Yamawaki
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1985-07-24
Filing date: 1985-07-24
Publication date: 1990-01-26
Also published as: JPS6222659A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、血漿脂質の増加に起因する各種疾患
と密接な関係を持つと考えられている低比重リポ
蛋白質を選択的に吸着除去する低比重リポ蛋白質
吸着材の再生方法に関する。

周知の如く、血液中の脂質、特に低比重リポ蛋
白質の増加は、動脈硬化の原因あるいは進行と密
接な関係を持つていると考えられている。動脈硬
化が進むと心筋梗塞、脳梗塞等循環器系の重篤な
症状に陥る可能性が非常に高くなり、死亡率も高
い。

そこで、血液、血漿等の体液成分から低比重リ
ポ蛋白質を選択的に吸着除去することによつて、
上記の如き疾患の進行を防止し、症状を軽減せし
め、さらには治ゆを早めることが期待されてい
た。

（従来の技術）上記目的に使用可能な既存の技術には、アガロ
ースゲルにヘパリンを固定化した吸着材による吸
着（Lupien、Ｐ−Ｊ、et.al.：Ａ new
approach tn the management of familial
hypercholesterolemia.Removal of plasma−
cholesterol based on the principle of affinity
chromatography.Lancet、２：1261〜1264、
1976.）およびガラスパウダーまたはガラスビー
ズを用いたクロマトグラフイー（Carlson、L.
A.：Chromatographic separation of serum
lipoproteins on glass powder colums.
Description of the method and some
applications.Clin.Chim.Acta、５：528〜538、
1960.）がある。

また、最近になつて、体外循環による低比重リ
ポ蛋白質の吸着除去に適した改良発明（特開昭59
−102436）や、低比重リポ蛋白質の吸着能力をさ
らに高めた吸着材の発明（特願昭58−80777、特
願昭58−80778）がなされるようになり、技術的
には進歩してきた。

また、これらの吸着材で体液を処理し、低比重
リポ蛋白質を吸着除去した後、該吸着材から低比
重リポ蛋白質を脱着させ、吸着材を再生し、再使
用しようとする試みもなされてきた。

例えば、ヘパリンを固定化した吸着材の場合
は、５％塩化ナトリウムにより、リポ蛋白を洗浄
する方法（Ddwin A.Burgstaler et.al.：
Labolatory Study、Removal of plasma
lipoproteins from circulating blood with ａ
Heparin−Agarose column.Mayo Clin Proc
55：180−184、1980）であり、ガラスを用いる場
合には、potassium bicarbonate−carbonate
buffer（PH8.8、9.6、9.8およびCO₃）でリポ蛋白を
溶出する方法（Carlson、L.A.：
Chromatographic separation of serum
lipoproteins on glass powder column.
Description of the method and some
applications.Clin.Chim.Acta、５：528〜538、
1960.）がある。

（発明が解決しようとする問題点）しかしながら、これらの吸着材再生方法は、従
来の吸着性能があまり高くない吸着材に対する再
生手段としては充分であつたとしても、最近の低
比重リポ蛋白質吸着性能の向上したポリアニオン
系吸着材に対して、上記したような吸着材再生方
法を適用してみても、吸着材は充分には再生され
ず、改良が望まれていた。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは、上記した問題を解決し、簡便で
安全な、効率の良い吸着材再生方法を提供するた
め鋭意研究した結果、溶離液として金属イオンと
反応して金属キレートを作る性質のある物質を含
む液体を用いることにより、驚くほど高い効率で
簡単に、しかも安全に吸着材の再生ができること
を見出し、本発明を完成するに至つた。

すなわち、本発明は、体液中の低比重リポ蛋白
質を吸着した、表面にポリアニオン部を有する低
比重リポ蛋白質吸着材を、少なくとも１種類のキ
レート化剤を含む溶液で洗浄することを特徴とす
る低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法である。

本発明で対象とする吸着物質は、低比重リポ蛋
白質であるが、より詳細に説明すると、分子量が
2.2×10⁶から3.5×10⁶、水和密度が1.003から1.034
（ｇ/ml）、浮上係数（1.063）が０から20×10^-13
cm・sec^-1・dyh^-1・g^-1、直径が20.0から30.0nｍ
のリポ蛋白（SCANU、A.M.：plasma
lipoproteins：an introduction.“The
Biochemistry of Atherosclerosis”ed.by
SCANU Ａ≧M.、1979、P.3〜８、による）を
言う。

次に、本発明で対象とする吸着材の構成要件に
ついて詳細に説明する。

本発明で言う低比重リポ蛋白質吸着材のポリア
ニオン部とは、１分子の分子量が600以上であり、
１分子中に負電荷を示す官能基、すなわち、カル
ボキシル基（COOH、COO^-）、スルホン酸基
（SO₃H、SO₃ ^-）など血漿中で負電荷を示す官能
基を多数個持つものを言う。例示すると、ポリア
クリル酸、ポリビニルスルホン酸、ポリビニルリ
ン酸、ポリメタクリル酸等のビニル系合成ポリア
ニオン、ポリスチレンスルホン酸、ポリ−α−メ
チルスチレンスルホン酸、ポリスチレンリン酸等
のスチレン系ポリアニオン、ビニル系アニオンの
共重合体、例えば、スチレンマレイン酸共重合体
のようなポリアニオン、ポリグルタミン酸、ポリ
アスパラギン酸等の合成ペプチド系ポリアニオ
ン、poly Ｕ、poly Ａ等の合成核酸系ポリアニオ
ンやポリリン酸、ポリホスフエイトエステル、ア
ルギン酸、ヘパリン等の天然ポリアニオンがあげ
られる。

中でも合成ポリアニオンは、その化学的安定性
に優れ、高圧蒸気滅菌、γ線滅菌、エチレンオキ
サイド滅菌等に対しても安定なものを得易く、ま
た、分子量の調節も比較的簡便に行なえる等の点
で天然の物より優れ、推奨できる。また、合成に
より得られるポリアニオンの場合、天然の多糖類
にみられるような補体の活性化を起こし難いポリ
アニオンが容易に得られるため好ましい。さら
に、ビニル系アニオンのように、担体に対して直
接グラフト重合を行えるものは、担体に対して分
子量の大きいポリアニオンを高保持量で固定する
ことができる点で、より好ましい結果を与える。

また、吸着目的物質である低比重リポ蛋白質
は、直径が約200Åという巨大なリポ蛋白である
ため、ポリアニオン部の構造は鎖状構造であるこ
とが好ましく、吸着材表面から長く伸びている方
が好ましい。また、ポリアニオン部中の負電荷密
度は、分子量300当りに少なくとも１個あるのが
好ましい。さらに好ましくは、分子量200当りに
１個以上であり、分子量70から150の単位に１個
あるのが望ましい。ここで言う分子量には、負電
荷を示す官能基の分子量も含む。ポリアニオン部
の分子量は、小さくなると低比重リポ蛋白質をあ
まり吸着しなくなるので、少なくとも600は必要
である。好ましいのは2500以上であり、１万から
500万の範囲が好ましい。

ポリアニオン部が持つ多数個の負電荷を示す官
能基が、低比重リポ蛋白質の多数点を認識するこ
とにより、強いクーロン力で低比重リポ蛋白質を
結合すると考えられる。

負電荷を示す官能基の中では、カルボキシル基
（COOH、COO^-）が特に好ましい結果を与える。
スルホン酸基（SO₃H、SO₃ ^-）に比べて弱酸であ
るため、アルブミンのような有用蛋白質に対する
吸着性が小さい。また、血液凝固系蛋白の吸着も
少なく、活性化も起こし難い。さらに、補体系蛋
白も吸着し難い。

前記したポリアニオン部の中では、ポリアクリ
ル酸、ポリメタクリル酸のようなポリカルボン酸
が特に安定であり、推奨できる。

負電荷の密度は吸着材１ml当り1μeqから1meq
の範囲が低比重リポ蛋白質の吸着性能が良く、吸
着選択性が良く、凝固線溶系、補体系への影響が
少ない適当な範囲である。1μeq／mlより負電荷
密度が低くなると、低比重リポ蛋白質の吸着能力
が実用性能に満たず、1meqを越えると非選択的
な吸着が増え、凝固線溶系、補体系に悪影響を与
える。より好ましい範囲は5μeq／mlから
700μeq／ml、さらに好ましいのは10μeq／mlから
500μeq／mlである。

負電荷密度の測定は、通常の陽イオン交換樹脂
のイオン交換容量測定方法に準じて行なうことが
できる。

本発明で言う低比重リポ蛋白質吸着材を製造す
る方法は、例えば、担体を活性化し、ポリアニオ
ンを共有結合させる方法、担体にアニオンモノマ
ーをグラフト重合させ、ポリアニオンのグラフト
鎖を形成させる方法などが挙げられる。

担体は、ポリアニオンを固定できればよく、親
水性担体、疎水性担体いずれも使用できるが、疎
水性担体を用いる場合には、時に担体へのアルブ
ミンの非特異的吸着が生じるため、親水性担体の
方が好ましい結果を与える。

不溶性担体の形状は、粒子状、繊維状、中空糸
状、膜状等いずれの公知の形状も用いることがで
きるが、ポリアニオンの保持量、吸着材としての
取扱い性よりみて、粒子状、繊維状のものが好ま
しい。

担体は、ポリアニオンを固定できれば、どのよ
うな材質のものを用いてもよい。使用できる担体
としては、セルロース系ゲル、デキストラン系ゲ
ル、アガロース系ゲル、ポリアクリルアミド系ゲ
ル、多孔質ガラス、ビニルポリマーゲル等の有機
または無機の多孔体が使用でき、通常のアフイニ
テイークロマトグラフイーに用いられる担体用の
材料は全て用いることができるが、被吸着物質で
ある低比重リポ蛋白質が直径200〜300Å、分子量
が2.2×10⁶〜3.5×10⁶と大きいので、担体の排除
限界分子量は220万以上、孔の直径は200Å以上あ
る方が吸着効率が高い。

前記した担体の中でも、特にビニルアルコール
単位を主構成成分とする架橋共重合体からなる担
体は、その親水性のため、血漿中のタンパク質等
溶質との相互作用が小さく、非特異吸着を最小限
に低下させる。また、血漿中の補体系、凝固系と
相互作用しない等の極めて優れた特性を有する。
物理的特性の面でも、優れか孔径分布を示し、耐
熱性を有し、熱滅菌を可能ならしめ、さらには合
成高分子の特性である物理的機械的強度に優れて
いる。全血用吸着材の担体として用いる場合に
も、血球成分との相互作用が少なく、血栓形成や
血球成分の非特異粘着、残血等を最小限におさえ
る等の極めて優れた特性を併せ持つている。

ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋
重合体は、水酸基を有するモノマーの重合または
ポリマーの化学反応による水酸基の導入により合
成できる。両者を併用して合成することもでき
る。重合方法としては、ラジカル重合法を用いる
ことができる。架橋剤は重合時共重合により導入
してもよいし、またポリマーの化学反応（ポリマ
ー間、ポリマーと架橋剤）で導入してもよく、両
者を併用してもよい。

一例をあげると、ビニル系モノマーとビニル系
またはアリル系架橋剤との共重合により作ること
ができる。この場合のビニル系モノマーとして
は、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等のカルボ
ン酸のビニルエステル類、メチルビニルエーテ
ル、エチルビニルエーテル等のビニルエーテル類
を例示することができる。

架橋剤としては、トリアリルイソシアヌレー
ト、トリアリルシアヌレート等のアリル化合物
類、エチレングリコールジメタアクリレート、ジ
エチレングリコールジメタアクリレート等のジ
（メタ）アクリレート類、ブタンジオールビニル
エーテル、ジエチレングリコールジビニルエーテ
ル、テトラビニルグリオキザール等のポリビニル
エーテル類、ジアリリデンペンタエリスリツト、
テトラアリロキシエタンのようなポリアリルエー
テル類、グリシジルメタクリレート等のグリシジ
ルアクリレート類を用いることができる。また、
必要に応じて、他のコモノマーを共重合したもの
を用いることができる。

ビニル系共重合体の場合には、カルボン酸のビ
ニルエステルとイソシアヌレート環を有するビニ
ル化合物（アリル化合物）を共重合し、共重合体
を架水分解して得られるポリビニルアルコールの
トリアリルイソシアヌレート架橋体が、強度、化
学的安定性の面で特に良好な担体を与える。

ポリアニオンを不溶性担体の表面に固定する方
法は、共有結合、イオン結合、物理吸着、包埋あ
るいは重合体表面への沈殿不溶化等あらゆる公知
の方法を用いることができるが、固定化した化合
物の溶出性から考えると、共有結合により、固
定、不溶化して用いることが好ましい。そのため
通常固定化酵素、アフイニテイークロマトグラフ
イーで用いられる公知の担体の活性化方法、リガ
ンドとの結合方法、および担体または活性化担体
を幹ポリマーとし、ポリアニオンを枝とするグラ
フト重合の手法を用いることができる。

活性化方法を例示すると、ハロゲン化シアン
法、エピクロルヒドリン法、ビスエポキシド法、
ハロゲン化トリアジン法、ブロモアセチルプロミ
ド法、エチルクロロホルマート法、１，1′−カル
ボニルジイミダゾール法等をあげることができ
る。本発明の活性化方法は、リガンドのアミノ
基、水酸基、カルボキシル基、チオール基等の活
性水素を有する求核反応基と置換および／または
付加反応できればよく、上記の例示に限定される
ものではないが、化学的安定性、熱的安定性等を
考慮すると、エポキシドを用いる方法が好まし
く、特にエピクロルヒドリン法が推奨できる。

また、シリカ系、ガラス系等のシラノール基を
持つ担体については、γ−グリシドキシプロピル
トリメトキシシラン、γ−アミノプロピルトリエ
トキシシラン、γ−メルカプトプロピルトリメト
キシシラン、ビニルトリクロロシラン等の各種シ
ランカツプリング剤が好ましく用いられる。

グラフト重合法を例示すると、連鎖移動反応を
利用する方法、放射線、紫外線などによる脱水
素、脱ハロゲンなどの反応を利用する方法、過酸
化物の形成を利用する方法などがあげられるが、
水酸基、チオール、アルデヒド、アミンなどの還
元性基を有する担体に、セリウム塩、鉄塩などを
開始剤としてアニオンモノマーをグラフト重合し
て行く方法が簡便であり、推奨できる。また、グ
ラフト重合の系は、比較的分子量の大きいポリア
ニオンを担体の内部まで固定できるので好ましく
用いられる。

担体にポリアニオンを２種類以上結合してもさ
しつかえない。

以上、低比重リポ蛋白質吸着材の製造方法とし
て、担体を活性化した後、ポリアニオンを結合す
る方法について説明したが、これに限定されるも
のではない。

低比重リポ蛋白質吸着器は、前記した低比重リ
ポ蛋白質吸着材を、体液の導出入口を備えた容器
内に充填保持したものである。

本発明において、吸着材は体液の導出入口を備
えた容器内に充填保持されて使用されるのが一般
的である。

第１図において、１は低比重リポ蛋白質吸着材
を納めてなる低比重リポ蛋白質吸着器の一例を示
すものであり、円筒２の一端開口部に、内側にフ
イルター３を張つたパツキング４を介して体液導
入口を有するキヤツプをネジ嵌合し、円筒２の他
端開口部に内側にフイルター３′を張つたパツキ
ング４′を介して体液導出口７を有するキヤツプ
８をネジ嵌合して容器を形成し、フイルター３お
よび３′の間隙に低比重リポ蛋白質吸着材を充填
保持させて吸着材層９を形成してなるものであ
る。

吸着材層９には、低比重リポ蛋白質吸着材を単
独で充填してもよく、他の吸着材と混合もしくは
積層してもよい。他の吸着材としては、例えば、
幅広い吸着能を有する活性炭のようなものを用い
ることができる。これにより吸着材の相乗効果に
よるより広範な臨床効果が期待できる。吸着材層
９の容積は、体外循環に用いる場合、50〜400ml
程度が適当である。この装置を体外循環で用いる
場合には、大略次の二通りの方法がある。一つに
は、体内から取り出した血液を遠心分離器もしく
は膜型血漿分離器を使用して、血漿成分と血球成
分とに分離した後、血漿成分を該装置に通過さ
せ、浄化した後、血球成分と合わせて体内にもど
す方法であり、他の一つは体内から取り出した血
液を直接該装置に通過させ、浄化する方法であ
る。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応
じ、あるいは設備の装置状況に応じて、連続的に
通液してもよいし、また、断続的に通液使用して
もよい。

本発明で言うキレート化剤とは、金属イオンと
反応して金属キレート（一つの配位子が２ケ所ま
たはそれ以上で中心金属に配位し、金属原子を含
む環状構造を形成している錯体）を作る薬剤のこ
とを言い、例示すると、マロン酸、シユウ酸、フ
タル酸、コハク酸、マレイン酸、シトラコン酸、
イタコン酸等のカルボン酸（二塩基酸）、エチレ
ンジアミン、ジエチレントリアミン、プロピレン
ジアミン等の脂肪族アミン、α，α′−ジピリジ
ル、フエナントロリン等の芳香族アミン、アラニ
ン、アスパラギン酸、グリシン、グリシルグリシ
ルグリシン、グルタミン酸等の天然アミノ酸およ
びペプチド、β−アラニン−Ｎ，Ｎ−ジ酢酸、ア
ミノ安息香酸−Ｎ，Ｎ−ジ酢酸、イミノジ酢酸、
アニリンジ酢酸、１，３−ジアミノシクロヘキサ
ン−Ｎ，N′−テトラ酢酸、エチレンジアミンテ
トラ酢酸、ペンタメチレンジアミンテトラ酢酸
等、天然に存在しないアミノ酸、クエン酸、グル
コン酸、グリセリン酸、グリコール酸、リンゴ
酸、５−スルホサリチル酸、酒石酸等のオキシ
酸、ピロリン酸、トリメタリン酸、トリリン酸等
の縮合リン酸、ニトロ酢酸、Ｏ−ニトロ安息香酸
等のニトロカルボン酸、オキサル酢酸、ピルビン
酸等の酸、サリチルアルデヒド、３−クロルサリ
チルアルデヒド、５−スルホサリチルアルデヒド
等サリチルアルデヒドおよびその誘導体、２−オ
キシ−１−ナフトアルデヒド、２−オキシ−３−
ナフトアルデヒド等のオキシアルデヒド、アセチ
ルアセトン、ベンゾイルアセトン、２−フロイル
ベンゾイルメタン、トリフルオルアセチルアセト
ン等のβ−ジケトン、８−オキシキノリン、カテ
コール−３，５−ジスルホン酸等のフエノール誘
導体、エリオクロムブラツク−Ｔ、エリオクロム
ブルーブラツクＲ等のＯ，O′−ジオキシアゾ色
素、アミノベンゼンチオール、Ｏ−アミノフエノ
ール、アセト酢酸エチル等が挙げられる。また、
ポリアクリル酸や、ポリメタクリル酸のようなポ
リカルボン酸、ヘパリン、アルギン酸等の多糖類
も用いることができる。

吸着材のポリアニオン部との相互作用で吸着材
に吸着されている低比重リポ蛋白質、カルシウ
ム、マグネシウム等のカチオン性物質が、高い濃
度のキレート化剤の存在で吸着平衡がずれ、吸着
材から脱離してくるものと考えられる。

キレート化剤の中では、吸着材を体外循環治療
に再使用するものと考えると、クエン酸ナトリウ
ム、ヘパリンナトリウム等が安全性の面で優れて
おり推奨できる。

次に、低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法につ
いて例を挙げて説明する。

前述のように、低比重リポ蛋白質吸着材は、通
常、容器に充填され、第１図のようなリポ蛋白質
吸着器として使用される。この低比重リポ蛋白質
吸着器に体液を流し、体液中の低比重リポ蛋白質
を吸着させる。使用後、再生を始めるわけである
が、通常、先ず、低比重リポ蛋白質吸着器の中に
残留している体液を洗い出すために、吸着器容量
の１〜10倍容量の生理的溶液（例えば、生理食塩
水）を用いて洗浄する。この操作は、この後に用
いる再生液が、体液に対して変性、凝集等の悪影
響を及ぼすものでない場合には、省略してもさし
つかえない。

次に、吸着材の再生液を低比重リポ蛋白質吸着
器に流すのであるが、本発明の再生液、すなわ
ち、キレート化剤を含む溶液は、吸着材に吸着し
ている低比重リポ蛋白質の脱着効率が非常に高い
ので、吸着器容量の２〜５倍容量流せば、ほぼ完
全に脱着できる。流速も極端に速くない限り任意
に選択でき、温度も任意に選択できる。

最後に、次回使用することを考え、生理的溶液
に置換するか、または保存するための殺菌剤のよ
うな保存液に置換する。必要によつては、生理的
溶液に置換してから、湿熱滅菌、γ線滅菌等の滅
菌操作を行なつてもよい。

上記したような操作により低比重リポ蛋白質吸
着材は再生される。

また、必要により、体外循環で血液中の低比重
リポ蛋白質を吸着除去している最中にも低比重リ
ポ蛋白質吸着材を再生できる。この場合には、低
比重リポ蛋白質吸着器を２本あるいは２本以上使
用し、一方を低比重リポ蛋白質吸着用に、他方を
再生用にという具合に２系統に分け、無菌的に操
作するのが好ましい。ただし、１本で間欠的に行
なうことも可能である。

本発明の低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法を
実施するに当り、特に体外循環により血液中の低
比重リポ蛋白質を吸着除去している最中に低比重
リポ蛋白質吸着材を再生するような場合には、低
比重リポ蛋白質の吸着再生用装置として、２系統
の液体導入口および２系統の液体導出口を持つ容
器に、「表面にポリアニオン部を有する低比重リ
ポ蛋白質吸着材」が納められてなるものを使用す
ると、低比重リポ蛋白質の吸着再生操作が非常に
簡便であり、無菌的な取り扱いも簡単にできる。

すなわち、液体導入口の一方と液体導出口の一
方とを低比重リポ蛋白質の吸着用として用い、液
体導入口の他方と液体導出口の他方とを低比重リ
ポ蛋白質吸着材の再生用として用いることによ
り、低比重リポ蛋白質吸着材の吸着、再生が簡便
に、しかも無菌的に行なうことができ、非常に便
利である。

（発明の効果）以上述べてきたように、本発明の低比重リポ蛋
白質吸着材の再生方法によれば、非常に高い吸着
能力を示し、高い選択性を示すポリアニオン系吸
着材の再生を完全に、かつ簡便に、しかも安全に
行なうことができるようになつたので、低比重リ
ポ蛋白質吸着材の再使用が可能となり、１本の低
比重リポ蛋白質吸着器で大量の低比重リポ蛋白質
を吸着することが可能となつた。

再生剤としてキレート化剤を用いているので、
再生効率が良く、たとえ生体に入つても安全なキ
レート化剤を用いることにより、体外循環治療中
における再生をも可能にした。

本発明は、家族性高コレステロール血症治療用
の低比重リポ蛋白質吸着材の再生に有効であり、
従来になく、完全な再生ができ、かつ安全であ
る。

（実施例）以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明
する。

実施例１第１図に示す低比重リポ蛋白質吸着器を用い、
低比重リポ蛋白質の吸着、再生、再吸着実験を行
なつた。

低比重リポ蛋白質吸着器には内径0.8cm、長さ
2.0cm、内容積1.0mlの中に低比重リポ蛋白質吸着
材1.0mlを詰めたものを用いた。

低比重リポ蛋白質吸着材は、以下に述べる方法
で製造した。

酢酸ビニル1000ｇ、トリアリルイソシアヌレー
ト414ｇ、酢酸エチル1000ｇ、ヘプタン1000ｇ、
ポリ酢酸ビニル（重合度500）70ｇおよび２，
2′−アゾビスイソブチロニトリル36ｇよりなる均
一混合液と、ポリビニルアルコール１重量％、リ
ン酸二水素ナトリウム二水和物0.05重量％および
リン酸水素二ナトリウム十二水和物1.5重量％を
溶解した水４とをフラスコに入れ、十分撹拌し
た後、65℃で18時間、さらに75℃で５時間加熱撹
拌して懸濁重合を行い、粒状共重合体を得た。重
合中、撹拌速度は粒径が小さめになるようにコン
トロールした。過、水洗、ついでアセトン抽出
後、カセイソーダ465ｇおよびメタノール20よ
りなる溶液中で、40℃で18時間、共重合体のエス
テル交換反応を行つた。得られた粒子の平均粒径
は40μmであつた。

このゲルを内径7.5mm、長さ120cmのステンレス
製カラムに充填して、種々の分子量を持つデキス
トランやポリエチレングリコールの水溶液および
アルブミン、イムノグロブリンＧ、イムノグロブ
リンＭ、β−リポプロテイン、タバコ、モザイ
ク、ウイルスのリン酸緩衝塩溶液を測定したとこ
ろ、それぞれ分子量の大きい順に溶出された。デ
キストランの拝除限界分子量は約５×10⁶、タン
パク質の排除限界分子量は約２×10⁷であつた。
また、0.3M塩化ナトリウムおよび0.1Mリン酸ナ
トリウムを含む水溶液を溶媒として、ヒト−γ−
グロブリン、ヒト−アルブミンの溶液を流したと
ころ、ほとんど100％の回収率で回収され、ゲル
の非特異的吸着は非常に少なかつた。サンプルの
測定はすべて流速１ml／minで実施した。

つぎにエステル交換され、水で十分に洗浄し、
乾燥したゲル150ｇをジメチルスルホキシド1800
mlおよびエピクロルヒドリン1200mlからなる溶液
中に懸濁し、50％水酸化ナトリウム水溶液150ml
を加え、30℃にて５時間撹拌下反応させる。反応
終了後ガラスフイルターで過し、３のジメチ
ルスルホキシド、ついで20の水で洗浄してエポ
キシ基結合ゲルを得た。

該ゲルのエポキシ基結合量は１mlにつき
0.11mmolであつた。該エポキシ基結合ゲルを用
い、ポリアクリル酸（重量平均分子量９×10⁴、
米国アルドリツチ社製）をリガンドとして結合さ
せ、吸着材を作成した。

ポリアクリル酸4.5ｇを蒸留水で500mlにし、こ
れをリガンド液とした。このリガンド液に前記エ
ポキシ基結合ゲル100mlを加え、50℃で16時間、
振とうしながらリガンドの結合反応を行なつた。

この後、充分に水洗し、吸引脱水した後、0.1
規定の水酸化ナトリウム溶液中に30分間浸し、ポ
リアクリル酸をナトリウム型にし、その後、充分
量の水洗を行ない、低比重リポ蛋白質吸着材とし
た。

吸着実験は、家族性高コレステロール血症患者
の血漿を用いて行なつた。

先ず、低比重リポ蛋白質吸着器を生理食塩水で
プライミングしておき、次に、家族性高コレステ
ロール血症患者血漿を0.17ml／minの流速で低比
重リポ蛋白質吸着器に流した。吸着器から流出し
てくる最初の生理食塩水１mlを捨て、その後に出
てくる血漿は、１mlずつ試験管に受けて行つた。
血漿を12ml流したところで、再生液としてクエン
酸三ナトリウム・二水和物の29.4ｇ／dl溶液（塩
酸でPHを７に調整した）を用い、血漿と同じ流速
で５ml流した。この後、生理食塩水５mlで、再生
液を洗浄した後、再び家族性高コレステロール血
症患者血漿を同流速で12ml流し、再吸着テストを
行なつた。

吸着、再生、再吸着テストの間の流出液全てに
ついて、そのコレステロール濃度を測定した結果
が第２図である。横軸が流出液の量であり、縦軸
は各々の流出液中のコレステロールの濃度であ
る。先ず、第１回目の吸着テストであるが、コレ
ステロール（家族性高コレステロール血症患者血
漿なので、ほとんどが低比重リポ蛋白質コレステ
ロールである）吸着量は、第２図中、斜線部の
面積で表わされ、計算すると25mgとなる。次に、
再生液で流出したコレステロール量は、第２図
中、斜線部の面積で表わされ、計算すると斜
線部の面積に一致し、吸着されたコレステロール
の全てが再生液で脱着し、吸着器外に流出したこ
とがわかる。次に、２回目の吸着テストによるコ
レステロール吸着量は、第２図中、斜線部の面
積で表わされるが、これも斜線部に一致するの
で、低比重リポ蛋白質吸着材は、再生液で完全に
再生したことがわかる。

比較例１再生液として５％食塩水を用いたこと以外は、
全て実施例１と同様に行なつたところ、再生液よ
り脱着したコレステロールは、第１回目のコレス
テロール吸着量の73％であり、第２回目のコレス
テロール吸着量も第１回目の68％と少なかつた。

すなわち、５％食塩水では、低比重リポ蛋白質
吸着材の完全な再生はできなかつた。

実施例２再生液として、エチレンジアミン四酢酸四ナト
リウム四水塩の4.52ｇ／dl溶液（塩酸でPHを7.0
に調整）を用いたこと以外は、全て実施例１と同
様に行なつたところ、第１回目のコレステロール
吸着量、再生液によるコレステロールの脱着量、
第２回目のコレステロール吸着量は、全て一致し
た。すなわち、低比重リポ蛋白質吸着材は完全に
再生された。

実施例３再生液として、分子量2000のポリアクリル酸の
0.72ｇ／dl溶液（水酸化ナトリウムでPHを7.0に
調整）を用いたこと以外は、全て実施例１と同様
に行なつたところ、第１回目のコレステロール吸
着量、再生液によるコレステロール脱着量、第２
回目のコレステロール吸着量は完全に一致し、低
比重リポ蛋白質吸着材が再生液により、完全に再
生されたことがわかつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は表面にポリアニオン部を有する低比重
リポ蛋白質吸着材を充填してなる低比重リポ蛋白
質吸着器を示す断面模式図、第２図は実施例１の
実験結果を示すグラフである。１……低比重リポ蛋白質吸着器、２……円筒、
３，３′……フイルター、４……パツキング、５
……体液導入口、６，８……キヤツプ、９……吸
着材層。

Claims

【特許請求の範囲】

１体液中の低比重リポ蛋白質を吸着した、表面
にポリアニオン部を有する低比重リポ蛋白質吸着
材を、少なくとも１種類のキレート化剤を含む溶
液で洗浄することを特徴とする低比重リポ蛋白質
吸着材の再生方法。