JPH02104593A - 医薬化合物とジホスホン酸誘導体の結合体を含有する医薬用製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ この発明は医薬化合物とジホスホン酸誘導体の結合体（
以下、′結合体」という）、さらに詳しくは分子中にカ
ルボキシ基を有する医薬化合物またはその塩と、ジホス
ホン酸誘導体とを適当なスペーサーを介して結合した結
合体に関するものであり、医療の分野で利用される。

［従来の技術およびその問題点］ 従来、骨疾患たとえば関節リウマチなどの治療のために
抗炎症剤を投与する際に、骨の患部へ高濃度の抗炎症剤
を送りこむには、注射により関節内へ直接投与すること
が行なわれている。しかしながら、関節内に注射投与さ
れた抗炎症剤は速やかに投与部位から排泄きれるために
、抗炎症効果を長時間にわたって持続することができな
かった。

関節内注射投与後の投与部位での薬物濃度を持続させる
ために、薬物を難水溶性にする試みがなされている［ク
リニカル　ファーマフキネティックス（Ｃ１１ｎｉｃａ
ｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）　、　８　、
４９６〜５２２、１９８３年コが、その目的を十分に達
成するものはまだ開発されていない。

また癌の骨への転移を防ぐために、制癌剤を骨組織へ高
濃度に送りこむ必要性も指摘きれているが、その目的を
十分に達成したものもまだ開発きれていない。

一方、関節炎の診断のために、ジホスホン酸誘導体とテ
クネシウムの複合体を合成して、これを用いることが報
告されている［ジャーナル・才プ・ヌクレアー・メデイ
シン（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＮｕｃｌｅａｒ　Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ）　、　　１８巻Ｎｏ、１０．９７３〜９７６
頁。

１９７７年］。

また骨の主成分であるハイドロキシアパタイト［分子式
：　ｃａｔｏ（ｐｏ４）ｓ（ｏＨ）ｚコを、薬物の保持
体として用いる考え方もすでに報告されている。

［カルシファイド・ティシュ・インターナショナル（Ｃ
ａ１ｃｉｆｉｅｄ　Ｔｉ５ｓｕａ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ　）　、　４０巻。

３４４〜３４８頁、　１９８７年］。

［問題点を解決するための手段］ この発明の発明者は、医薬化合物の骨中濃度を長時間に
わたって持続できる医薬化合物の誘導体を得るために鋭
意研究した。その結果、分子中にカルボキシ基を有する
医薬化合物またはその塩と、ジホスホン酸誘導体とを種
々のスペーサーを介して合成した結合体が、生体に投与
した場合に、選択的に骨組織に取り込まれ、骨中濃度を
高い水準で長時間にわたって持続することを見出した。

さらにこの結合体が、骨組織中でジホスホン酸誘導体と
の結合が切れて、上記医薬化合物に徐々に変換され、そ
の骨中濃度を高い水準で長時間にわたって持続でき、さ
らには、その医薬化合物の血中濃度をも長時間にわたっ
て持続できることを見出して、この発明を完成した。

この発明の結合体は新規であり、−形式（式中、Ａ−Ｃ
ｏ−は医薬化合物の残基、Ｒは一冊一または−０−１ｍ
は０または１、ｎは１〜１０の整数をそれぞれ意味する
）で示される。

結合体［Ｉ］において、その残基がＡ−Ｃｏ−で表わさ
れる医薬化合物とは、分子中にカルボキシ基を有する医
薬化合物またはその塩であり、例えばジクロツェナフナ
トリウム、イブプロフェン、フルフェナム酸、メフェナ
ム酸、アスピリン、サリチル酸ナトリウム、アルクロフ
エナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、ケトプロ
フェン、フエンブフエン、インドメタシン、クリダナク
、スリンダクなどの抗炎症剤、メルフアラン、メトトレ
キサートなどの抗腫瘍剤、カルシトニン、インスリン様
成長因子夏などのホルモン剤などが挙げられる。

この発明の結合体およびその塩は、医薬化合物とジホス
ホン酸誘導体を結合させるスペーサーの種類に応じて、
それぞれ下記の方法により製造することかできる。

製造法１ ［Ｉ［］ 製造法２ ［１［］ ［Ｉｂコ 製造法３ ［■］ ［式中、Ａ−Ｃｏ−およびｎはそれぞれ前と同じ意味で
あり、ＯＲ１は保護されたヒドロキシ基、Ｙはハロゲン
原子を意味するコ 上記製造法の原料［１［［］および［■］は次の製造法
で製造することができる。

聚盗豊Ａ ［ＩＫ］ ＮＨ（Ｃ１（）　　Ｒ ２２ｎ　２ 加水分解 一−−−−→Ａ−Ｃｏ−Ｎ）ｔ（ＣＩ（２）ｎＣＯＯＩ
（［■コ （式中、Ａ−ＣＯ−１Ｙ、ＯＲ１およびｎはそれぞれ前
と同じ意味であり、Ｒ２は低級アルフキジカルボニル基
を意味する］ 上記の各定義について以下に詳細に説明する。

保護されたヒドロキシ基としては、例えばメトキシ、エ
トキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、第二
級ブトキシ、イソブトキシ、第三級ブトキシ、ペンチル
オキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等の低級
アルコキシ基が挙げられ、さらに好ましいものとしては
０１〜Ｃ４アルフキシ基が挙げられる。

ハロゲン原子としては、塩素、臭素、沃素およびフッ素
が挙げられる。

低級アルコキシカルボニル基としては、例えばメトキシ
カルボニル ポキシカルボニル、インプロポキシカルボニル、ブトキ
シカルボニル、第三級ブトキシカルボニル等が挙げられ
る。

結合体［１］の塩としては、例えば酢酸塩、マレイン酸
塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン
酸塩、トルエンスルホン酸塩等の有機酸塩または塩酸塩
、臭化水素塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩のような酸
付加塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マ
グネシウム塩等の金属塩、アンモニウム塩、トリメチル
アミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミ
ン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。

ここで結合体［Ｉａ］〜［　Ｉ　ｃｌは結合体［Ｉ］の
範囲内に包含されるので、これらの結合体［１ａ］〜［
ＩＣ］の塩については、上記結合体［Ｉ］について例示
した塩を参照することができる。

目的化合物［１］およびその塩の製造法を以下に詳細に
説明する。

製造法１ 目的化合物［Ｉａ］およびその塩は、医薬化合物［１［
］またはその塩に化合物［ＩＩＩ］を反応許せて、得ら
れる化合物［ＩＶ］を、ヒドロキシ保護基の脱離反応に
付すことによって製造することができる。

医薬化合物［ＩＩ］の好適な塩については、上記結合体
［Ｉ］について例示した塩を参照することができる。

医薬化合物［Ｉ［］またはその塩に化合物［１１１］を
反応移せて化合物［ＩＶ］を得る反応は、通常、水、メ
タノール、エタノール、プロパツール、テトラリン、テ
トラヒドロフラン、アセトニトリル、ジオキサン、クロ
ロホルム、トルエン、ジメチルホルムアミド、ジメチル
スルホキシドのような溶媒中で行われるが、反応に悪影
響を及ぼさない溶媒であれば、その他のいかなる有機溶
媒中でも反応を行うことができる。

反応温度は特に限定きれないが、通常は室温ないし加熱
下に反応が行われる。

なお、この反応は例えば水素化ナトリウム、水素化カリ
ウム等のアルカリ金属水素化物、水素化カルシウム、水
素化マグネシウム等のアルカリ土類金属水素化物、水酸
化ｒトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化
物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭
酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアル
カリ金属炭酸水素塩、フッ化カリウム、フッ化セシウム
等のアルカリ金属フッ化物、ナトリウムメトキシド、ナ
トリウムエトキシド、カリウム第三級ブトキシド等のア
ルカリ金属アルコキシド、トリメチルアミン、トリエチ
ルアミン等のトリアルキルアミン、ピコリン、１．５−
ジアザビシクロ［４。

３、０〕ノン−５−エン、１．４−ジアザビシクロ［　
２，２．２コオクタン、１．５−ジアザビシクロ［　５
，４．０］ウンデセン−５等の無機または有機塩基の存
在下に行うのが好ましい。

化合物［ＩＶ］のヒドロキシ保護基を脱離して、目的化
合物［１ａ］またはその塩を得る反応は加水分解、還元
等の常法によって行われる。

加水分解は塩基、ルイス酸を含めた酸、またはハロシラ
ン化合物の存在下に行うのが好ましい。

塩基としては、上述のような無機塩基および有機塩基が
挙げられ、酸としては、例えば義酸、酢酸、プロピオン
酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸およ
び塩酸、臭化水素酸、硫酸、塩化水素、臭化水素等の無
機酸が挙げられる。

ハロシラン化合物としては、例えばヨードトリメチルシ
ラン、ブロモトリメチルシラン等のハロトリ（低級）ア
ルキルシランが挙げられる。

なお、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等のトリハロ
酢酸のようなルイス酸を使用する脱離反応は、例えばア
ニソール、フェノール等の陽イオン捕捉剤の存在下に行
うのが好ましい。

この反応は通常、水、メタノール、エタノール等のアル
コール、塩化メチレン、アセトニトリル、クロロホルム
、テトラクロロメタン、テトラヒドロフランあるいはこ
れらの混合溶媒中で行われるが、反応に悪影響を及ぼさ
ない溶媒であればその他のいかなる溶媒中でも反応を行
うことができる。なお、液状の塩基、酸またはハロシラ
ン化合物も溶媒として使用することができる。

反応温度は特に限定されず、通常冷却下ないし加熱下に
反応が行われる。

他方、ヒドロキシ保護基の脱離反応に適用される還元法
としては、化学的還元および接触還元が挙げられる。

化学的還元に使用きれる好適な還元剤は、例えばすｙ、
亜鉛、鉄等の金属または塩化クロム、酢酸クロム等の金
属化合物と、装機、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ
酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸等の
有機酸または無機酸との組合わせである。

接触還元に使用される好適な触媒は、例えば白金板、白
金海綿、白金黒、コロイド白金、酸化白金、白金線等の
白金触媒、パラジウム海綿、パラジウム黒、酸化パラジ
ウム、パラジウム−戻素、コロイドパラジウム、パラジ
ウム−硫酸バリウム、パラジウム−炭酸バリウム等のパ
ラジウム触媒、還元ニッケル、酸化ニッケル、ラネーニ
ッケル等のニッケル触媒、還元コバルト、ラネーコバル
ト等のコバルト触媒、還元鉄、ラネー鉄等の鉄触媒、還
元銅、ラネー銅、ウルマン鋼等の銅触媒のような慣用の
触媒である。

化学的還元による脱離反応は通常、水、メタノール、エ
タノール、プロパツール、Ｎ、Ｎ−’、；メチルホルム
アミドのような反応に悪影響を及ぼきない常用の溶媒中
、またはこれらの混合溶媒中で行われる。なお、化学的
還元に使用きれる酸が液状である場合には、それらを溶
媒として使用することもできる。

また、接触還元に使用される溶媒としては、前記のよう
な溶媒のほか、ジエチルエーテル、ジオキサン、テトラ
ヒドロフラン等の慣用の溶媒、またはこれらの混合溶媒
等が挙げられる。

これらの反応の反応温度は特に限定されず、通常冷却下
ないし加熱下に反応が行われる。

製造法２　　　　　　′ 目的化合物［Ｉｂ］およびその塩は、医薬化合物［１［
］またはその塩に化合物［Ｖ］もしくはそのアミン基に
おける反応性誘導体またはその塩を反応させて得られる
化合物［ＶＩ］を、ヒドロキシ保護基の脱離反応に付す
ことによって製造することができる。

化合物［Ｖ］の塩については結合体［Ｉ］について例示
した塩を参照することができる。

化合物［Ｖ］のアミノ基における反応性誘導体としては
、アミド化反応に使用きれる常用の誘導体、例えば、化
合物［Ｖ］とカルボニル化合物との反応によって生成す
るシッフ塩基型イミノまたはそのエナミン型互変異性体
、化合物［Ｖ］とトリフチルシリルアセトアミド、ビス
（トリメチルシリル）アセトアミド等のシリル化合物と
の反応によって生成するシリル誘導体、化合物［ｖコと
三塩化溝またはホスゲンとの反応によって生成する誘導
体等が挙げられる。

医薬化合物［１１］またはその塩に化合物［Ｖ］もしく
はそのアミン基における反応性誘導体またはその塩を反
応させて化合物［ＶＩ］を得る反応は通常、水、メタノ
ール、エタノール、プロパツール、テトラリン、テトラ
ヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルム、トルエン、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロ
ルメタンのような常用の溶媒中で行われるが、反応に悪
影響を及ぼさない溶媒であればその他のしかなる有機溶
媒中でも反応を行うことができる。

反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下、常温ま
たは加温下に反応が行われる。

なお、この反応は、Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジ
イミド、オキシ塩化燐、三塩化溝、五塩化溝、塩化チオ
ニル、塩化オキザリル、１−（ｐ−’７０口ベンゼンス
ルホニル才キシ）−６−クロロ−ＩＨ−ベンゾトリアゾ
ール、ジメチルホルムアミドと塩化チオニルまたはホス
ゲンとの反応によって生成する塩化（クロロメチレン）
ジメチルアンモニウム、ジメチルホルムアミドとオキシ
塩化燐との反応によって生成する化合物等のいわゆるビ
ルスマイヤー試薬等の常用の縮合剤の存在下に行うのが
好ましい。

化合物［ＶＩ］のヒドロキシ保護基を脱離して、目的化
合物［Ｉｂ］またはその塩を得る反応は、製造法１の場
合と同様に行なうことができる。

１産豊ユ 目的化合物［Ｉｃ］およびその塩は、化合物［■］また
はその塩に化合物［Ｖ］もしくはそのアミン基における
反応性誘導体またはその塩を反応させて得られる化合物
［■］をヒドロキシ保護基の脱離反応に付すことによっ
て製造することができる。

化合物［■］の塩としては、結合体［Ｉ］について例示
した塩を参照することができる。

これらの反応は製造法２の場合と同様に行なうことがで
きる。

製造法１〜３で得られた化合物は、常法により上述のよ
うな塩にすることができる。

次に、原料化合物［１１１］ならびに原料化合物［■］
およびその塩の製造法を、以下に詳細に説明する。

製造法人 原料化合物［Ｉ［［］は、化合物［ＩＸ］もしくはその
カルボキシ基における反応性誘導体またはその塩に、化
合物［Ｖ］もしくはそのアミノ基における反応性誘導体
またはその塩を反応きせることによって製造することが
できる。化合物［ＩＸ］の塩については、結合体［Ｉ］
について例示した塩を参照することができる。

化合物［ＩＸ］のカルボキシ基における反応性誘導体と
しては、酸ハロゲン化物、酸無水物、活性化アミド、活
性化エステル等が挙げられる。

そのような反応性誘導体の好適な例としては、酸塩化物
、酸アジド、ジアルキル燐酸、フェニル燐酸等の置換さ
れた燐酸、ピバリン酸、酢酸、トリクロロ酢酸等の脂肪
族カルボン酸等の酸との混合酸無水物、対称型酸無水物
、イミダゾール、トリアゾールまたはジメチルピラゾー
ルとの活性化アミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、
Ｎ−ヒドロキシフタルイミドまたは１−ヒドロキシ−６
＝クロロベンゾトリアゾールとの活性化エステル等が挙
げられる。

この反応は製造法２に記載の化合物［ＶＩ］を得る方法
と同様に行なうことができる。

１菫豊１ 原料化合物［■コおよびその塩は、医薬化合物［Ｉ］ま
たはその塩と化合物［Ｘ］もしくはそのアミノ基におけ
る反応性誘導体またはその塩を反応させて得られる化合
物［ＸＩ］を加水分解反応に付すことにより製造するこ
とができる。

化合物［Ｘ］の塩については、結合体［Ｉ］について例
示した塩を参照することができる。

医薬化合物［ＩＩ］またはその塩と、化合物［Ｘ］もし
くはそのアミノ基における反応性誘導体またはその塩を
反応させて化合物［ＸＩ］を得る反応は、製造法２にお
ける化合物［ＶＩ］を得る方法と同様に行うことができ
、また化合物［ＸＩ］を加水分解して原料化合物［■コ
またはその塩を得る反応は、製造法１の加水分解反応と
同様に行うことができる。

目的化合物［Ｉ］に分子内の不斉炭素原子、二重結合等
に基づく１個以上の光学異性体や幾何異性体のような立
体異性体がある場合、目的化合物［Ｉ］のそのような異
性体およびそれらの混合物もすべて目的化合物［Ｉ］の
範囲内に包含されるものとする。

この発明の結合体［Ｉ］は常法により、可溶化製剤、エ
マルジョン製剤、リポソーム製剤等とした後、例えば注
射投与（例えば静脈注射、筋肉内注射、関節内注射等）
、経口投与、直腸投与等により生体内に投与されるが、
注射による投与が最も好ましい。

この発明の結合体［Ｉ］は、生体に投与きれた後、選択
的に骨組織に取り込まれ、骨中濃度を高い水準で長時間
にわたって持続し、きらに骨組織中でジホスホン酸誘導
体との結合が切れて、元の医薬化合物に徐々に変換きれ
て、骨組織における元の医薬化合物の濃度を長時間にわ
たって持続することができる。

なお、分子中に２個以上のカルボキシ基を有する医薬化
合物またはその塩において、薬理活性を示すカルボキシ
基の方に、ジホスホン酸誘導体が、スペーサーを介して
結合していない場合には、結合体自身でも薬理活性が発
揮されることがあり、また分子中に１個のカルボキシ基
を有する医薬化合物またはその塩であっても、この発明
により得られる結合体自身に十分な薬理活性のある場合
もある。

この発明の結合体［Ｉ］は、骨組織に選択的に取り込ま
れるので、抗炎症剤に適用すれば、慢性関節リウマチ、
変形性関節症、腰痛症などの治療に利用でき、骨疾患治
療剤（例えばインスリン様成長因子Ｉ等）に適用すれば
、骨疾患（例えば骨粗耀症、バジェットの骨疾患、骨溶
解等）の治療に利用でき、また、制癌剤に適用すれば、
癌の骨への転位防止の目的にも利用できる。

また、結合体［Ｉ］を一旦骨組織に分布きせた後、そこ
から医薬化合物を徐々に放出させることにより、血中濃
度を長時間にわたり持続することもできるので、微量の
血中濃度の維持が、治療の改善に反映される医薬化合物
（例えばホルモン、生理活性を有するポリペブタイド等
）にも適用できる。

この発明の結合体［Ｉ］およびその塩は通常１０尾〜１
０００ｍｇの単位投与量で１〜１５日に１回投与される
が、投与量は医薬化合物の種類、患者の年齢、体重、症
状、投与方法、他剤との併用等により適宜増減きれる。

［発明の効果］ 以下、本発明の効果を試験例により説明する。

ス１ｕ【１惣 （ｉ） 以下の試験例において、ｒカルボキシフルオレセインＪ
とは上記の等ｔｉ合物のことをいう。

（ｉ） （後記の実施例１−（ｉ）で得られる結合体）以下の試
験例において「後記の実施例１−（ｉ）で得られる結合
体」とは、上記の等景況合物のことをいう。

基１Ｌ星法 ラット血漿０．９５ｍｕに後記の実施例１−（ｉ　）で
得られる結合体の水溶液（ｆｉ度：２００μＭ　）　Ｏ
，０５ｍ１を添加し、３７°Ｃで培養した。結合体の水
溶液を添加後、１．２．４．６時間経過時にそれぞれＱ
、１ｍＱずつサンプルを採取した。採取したサンプルを
蒸留水Ｑ、４ｍＱで希釈し、直ちに、カラムガード（ミ
リボア５ＪＨＶＯＯ４ＮＳ、　０．４５ｐ　）で濾過後
、残存する結合体の濃度および生成するカルボキシフル
オレセインの濃度を高速液体クロマトグラフィーにより
定量した。

メｊ０九困 上記の試験結果から、この発明の結合体は血漿中で徐々
にカルボキシフルオレセインに変換されることがわかる
。

試験例２ 慧澄ｊぼり１払１塵 に盈Ｊ韮 後記の実施例１−（ｉ）で得られる結合体のｐＨ７，４
のリン酸緩衝液溶液（ａ度：　１．６３ｍｇ／　ｍＱ　
）およびカルボキシフルオレセインのｐ）１７．４リン
酸緩衝液溶液（ａ度：　０．９４ｍｇ／　ｍｌｌ　）を
それぞれＱ、５ｍ１ｌずつＳＤ系雌雄性ラット体重約２
５０ｇ）の尾静脈に注射し、結合体を投与した方は投与
後１時間、１日、２日、４日、７日および１４日経過時
、カルボキシフルオレセインを投与した方は投与後１時
間および１日経過時にそれぞれ大腿骨を採取し、肉片を
取り除いて凍結乾燥し、乾燥重量を測定した。

次いで大腿骨に塩化ナトリウムで飽和した６Ｎ塩酸を、
大腿骨１００ｍｇあたりｌｌ１ＩＱ加え、室温で４時間
放置する。振盪、遠沈後、大腿骨の溶解液１−にインア
ミルアルコール１．２５１１１を加え抽出する。有機層
を０．５誰ずつ２つに分け、一方の有機層Ｑ、５ｍＱに
ｐＨ７，４のリン酸緩衝液１．５−を加え、振盪、遠沈
し、水層中の結合体濃度を高速液体クロマトグラフィー
により測定した。

もう一方の有機層０．５−にはＩＮ水酸化ナトリウム１
．５ｍ１ｌを加え、室温で３０分間放置後、振盪、遠沈
し、水層中の総カルボキシフルオレセイン濃度を高速液
体クロマトグラフィーにより測定した。大腿骨中のカル
ボキシフルオレセイン濃度は下式に従って計算した。

（カルボキシフルオレセイン濃度）−１カルボキシフル
オレセイン濃廃）−（結合体濃度）上記試験結果から、
この発明の結合体は、カルボキシフルオレセインを投与
した場合に比べて、著しく高い骨中濃度を示すことがわ
かる。そして、結合体は骨中で徐々に結合が切れてカル
ボキシフルオレセインに変換されることがわかる。

また生成した骨中のカルボキシフルオレセインの濃度は
、次の試験例３で示す血中のカルボキシフルオレセイン
濃度を比べると著しく高く、約１０００倍の濃度を１４
日まで持続することがわかる。

きらに、結合体投与後１時間の骨中濃度１．６０用量％
／大腿骨は、ラット全骨中に換算すると、投与量の６２
％が骨に分布していることになり、（同様にカルボキシ
フルオレセイン投与後１時間の骨中濃度０．０３用量％
／大腿骨は、ラット全骨中に換算すると、投与量の１．
１％が骨に分布していることになる）この発明の結合体
はきわめて骨に分布しやすいことがわかる。

試験例３ 紋企生立血土１１ 試験方法 後記の実施例１−（ｉ）で得られる結合体のｐｉ（７，
４リン酸緩衝液溶液（濃度：　８．１４ｍｇ／鶴）およ
びカルボキシフルオレセインのｐＨ７，４リン酸緩衝液
溶液（ａ度：　４．７ｍｇ／　ｍｆｌ　）をそれぞれＱ
、５ｍＱずツＳＤ系雄性ラット（体重的２５０ｇ）の尾
静脈に注射し、結合体を投与したラットは投与後、３０
分、１時間、４時間、１日、２日、４日、７日および１
４日経過時に、カルボキシフルオレセインを投与したう
ｙトは投与後５分、１５分、３０分、１時間、および２
時間経過時に頚部静脈より採血し、遠心分離後、血漿０
．１ｍＱを採取し、蒸留水ｇ、ＩｍＱを加えてサンプル
とした。血中のカルボキシフルオレセイン濃度は高速液
体クロマトグラフィーにより測定した。

上記の試験結果から、この発明の結合体を注射投与した
場合、カルボキシフルオレセインは血中に１４日間も残
存し、カルボキシフルオレセイン体を注射投与した場合
（計算より求めた半減期約２０分）に比べて、著しく血
中濃度が持続することがわかる。

延１九土 後記の実施例６−（１）で得られるフルフェナム酸とジ
ホスホン酸誘導体の結合体 およびフルフェナム酸の生理食塩水溶液をＩＣＲ系雄性
マウス（体重：約４０ｇ）にそれぞれ４０μｍｏｌ／ｋ
ｇおよび１００μｍｏｌ／ｋｇとなるように尾静注し、
投与後１５分、３０分、１．２．４および２４時間経過
時に大腿骨を採取した。採取試料中の薬物濃度は高速液
体クロマトグラフィーにより測定した。

（詠千宗セ） 上記の試験結果から、この発明の結合体は、元の医薬化
合物に比べて骨組織に取り込まれやすいことがわかる。

［実施例］ 以下、製造例および実施例により、この発明をさらに詳
細に説明する。

１１贋ユ （アミノメチレン）ビス（ホスホン酸）テトラエテル（
２，２５ｇ）のジクロルメタン（２０ｍＪｌ　）溶液に
、α−ブロモ酢酸（０，９７３ｇ　）を水冷下に加え、
さらにＮ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイミド（１，
４５ｇ）のジクロルメタン（５ｍ１１）溶液を加え、０
℃で１時間攪拌した後、室温で２０時間攪拌する。生じ
るジシクロへキシルウレアを濾去した後、溶媒を留去す
る。残渣に水および酢酸エチルを加えて抽出し、有機層
を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去して、（α−
ブロモアセトアミトメプレン）ビス（ホスホン酸）テト
ラエチル（２，４２ｇ）を得る。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｓ、８　）　’　１．２５　（１
２Ｈ１ｔ）、３．９５〜４．２０（１０Ｈ，ｍ）、　　
４．６５〜４．９５　（ＬＨ，ｍ＞製ｊ１１又 製造例１と同様にして、以下の化合物を得る。

（１）（６−プロモヘキサノアミドメテレン）ビス（ホ
スホン酸）テトラエチル ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６．δ）　：　１．１５〜１．９
０　（１８８，ｍ）、　２．２６（２Ｈ，ｔ）、　３．
５２　（２Ｈ，ｔ＞、　３．８５〜４．２０　（８Ｈ，
ｍ）。

４．７０〜５．１０　（ＩＨ，ｍ） （２）（１１−ブロモウンデカノアミドメチレン）ビス
（ホスホン酸）テトラエチル ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６．８　）　ｉ　１．１０〜１．
８５　（１８Ｈ，ｍ）、　２．２２（２Ｈ，ｔ）、　３
．５５　（２Ｈ，ｔ）、　４．０＝４．２０　（８Ｈ，
ｍ）。

４．６５〜４．９５　（ＩＨ，ｍ） 聚菫遭ユ （１）α−アミノ酢酸メチル塩酸塩（０，９７５ｇ）お
よびトリエチルアミン（１，０８１１１１１）の乾燥ジ
メチルホルムアミド（２０ｍ１１　）溶液にカルボキシ
フルオレセイン（３’、６’−ジヒドロキシ−３−オキ
ソース１０［フタラン−１，９′−キサンチン］−６−
カルボン酸および３　’、　６　’−ジヒドロキシ−３
−オキソ−スピロ［フタラン−１，９′−キサンチン］
−５−カルボン酸の混合物）　（２，６３ｇ　）を水冷
下に加え、さらにＮ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイ
ミド（１，７７ｇ）の乾燥ジメチルホルムアミド（５ｍ
Ｑ）溶液を加え、０°Ｃで１時間攪拌し、次いで室温で
２２時間攪拌する。生成するジシクロへキシルウレアを
濾去した後、溶媒を留去する。残留物に酢酸エチル（５
０ｍ１１　）を添加し、０．５Ｎ塩酸（３ＱｍＱ　）で
２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去す
る。得られる残渣をシリカゲルカラム（８０ｇ）にイ寸
し、クロロホルムおよびメタノール（５０：１）の混液
で溶出し、溶出液から溶媒を留去して、メチルα−（３
’、６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラ
ン−１，９’−キサンテンコー６−カルボキサミド）ア
セテートおよびメチルα−（３’、６’−ジヒドロキシ
−３−オキソ−スピロ［フタラン−１，９′−キサンテ
ンツー５−カルボキサミド）アセテートの混合物（１，
１ｇ）を得る。

（ｉ）上記の）で得られた化合物（１，１ｇ）に、エタ
ノール（３０ｍ１１　）を加え、水冷下でＩＮ水酸化ナ
トリウム（Ｌｔｍｕ）を加え、０°Ｃで４時間攪拌する
。１０％クエン酸でｐＨを７に調整し、エタノールを留
去し、水冷下に１０％クエン酸でｐＨ３に調整する。沈
殿物を濾取し、乾燥し、メタノールとジイソプロピルエ
ーテルの混液から再結晶して、α−（３’、６’−ジヒ
ドロキシ−３−オキソ−スピロ〔フタラン−１，９′−
キサンチン］−６−カルポキサミド〕酢酸およびα−（
３’、６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタ
ラン−１，９’−キサンテンツー５−カルボキサミド）
酢酸の混合物（０，９２ｇ）を得る。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ、８　）　：３．９５〜４−１
０　（２Ｈ９ｍ＞、６−５０〜６．７５　（６Ｈ，ｍ）
、　７．４（１〜８．５５　（３Ｈ，ｍ）実施例１ （ｉ）カルボキシフルオレセイン（０，１５８ｇ）の乾
燥ンメテルホルムアミド（２ｍＱ）溶液に、トリエチル
アミン（７１ＪＪＱ　）および製造例１で得られた（α
−ブロモアセトアミトメプレン）ビス（ホスホン酸）テ
トラエチル（０，２８ｇ）を加え、７０”Ｃで２時間攪
拌する。得られる反応性混合物を０．５Ｎ塩酸と氷水の
混合物（１００ｍＡ　）中へ注ぐ、酢酸エチル（５０ｍ
Ｑ　）で２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒
を留去する。得られる残渣を調整層クロマトグラフィー
に付し、クロロホルムとメタノール（４：１）の混液で
抽出し、抽出液から溶媒を留去する。残留物に酢酸エチ
ル（３０ｍＱ　）を加え、５０％食塩水で洗浄し、硫酸
マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去して、［α−（３’
、６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン
−１゜９′−キサンチン］−６−カルボニルオキシ）ア
セタミドメチレン］ビス（ホスホン酸）テトラエチルお
よび［α−（３’、６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−
スピロ［フタラン−１，９１−キサンチン］−５−カル
ボニルオキシ）アセタミドメチレンコビス（ホスホン酸
）テトラエチルの混合物（０，２１６ｇ　）を得る。

ＮＭＲ、（ＤＭＳＯ−ｄｓ、Ｓ　）　’　１．０５〜１
．４０　（１２Ｈ劃）、４．０−４．２５　（８Ｈ，ｍ
）、　４．６５〜５．２０　＜３Ｈ，ｍ）、　６．５０
〜６．７５　（６Ｈ，ｍ）、　７．４０−８．５０　（
３Ｈ，ｍ＞（ｉ）上記（ｉ＞で得られた混合物（０，２
０１ｇ）の乾燥アセトニトリル（２ｍＡ）溶液にヨード
トリメチルシラン（０，３１ｍＱ　）を−２０℃で加え
、−２０”Ｃから０°Ｃで３０分間攪拌し、次いで０°
Ｃで２時間攪拌する。溶媒を留去し、残渣に水（２０ｍ
１ｌ　）およびジクロルメタン（２０１ｍ　）を加え、
Ｏ’Ｃで３０分間攪拌する。水層をジクロルメタン（１
２１１１’）で３回洗浄し、水を留去する。得られた残
渣に水および酢酸ナトリウム（０，０８ｇ）を加え、４
０”Ｃで留去する。

水およびエタノールの混液より結晶化して、［α−（３
’、６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラ
ン−１，９′−キサンチン］−６−カルボニルオキシ）
アセタミドメチレン］ビス（ホスホン＃）のジナトリウ
ム塩および［α−（３′。

６′−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−
１，９′−キサンテンコー５−カルボニルオキシ）アセ
タミドメチレンコビス（ホスホン酸）のジナトリウム塩
の混合物（０，１２７ｇ）を得る。

ＮＭＲ（Ｄ２０．Ｓ　）　’　３．９５〜４−２５　（
２）１９ｍ）　、６．６０−７−４０（６Ｈ，ｍ）、　
７．５０〜８．３５　（３Ｈ，ｍ＞叉１１主 実施例１と同様にして、以下の化合物を得る。

（１）［６−（３’、６’−ジヒドロキシ−３−オキソ
−スピロ［フタラン−１，９′−キサンチン］−６−カ
ルポニルオキシ）ヘキサノアミドメテレンコビス（ホス
ホン酸）のジナトリウム塩および［６−（３’、６’−
ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−１，９
′−キサンチン］−５−カルボニルオキシ ス（ホスホン酸）のジナトリウム塩の混合物ＮＭＲ　（
ＤＭＳＯ−ｄａ．８　）　’　ｔ．　３ｏ〜ｔ．　９５
　（６）１，ｍ）、２．　３０（２Ｈ．ｔ）、　４．１
５〜４．５０　（２Ｈ，ｍ）、　６．６０〜７．３５（
６Ｈ．ｍ）、　７．４５〜８．３５　（３Ｈ．ｍ）（２
）　［　１１−　（　３’．　６　’ージヒドロキシー
３ーオキソースピロ［フタラン−１．９′−キサンチン
］−６−カルボニルオキシ）ウンデカノアミドメチレン
コビス（ホスホン酸）のジナトリウム塩および［１ｔ−
（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フ
タラン−１，９′−キサンチン］ー５ーカルボニルオキ
シ ビス（ホスホン酸）のジナトリウム塩の混合物ＮＭＲ　
（ＮＤ３，Ｓ　）　’　１．０−１．　９５　（６Ｈ，
ｍ）、２．３２　（２Ｈ。

ｔ）、　４．０５−４．５０　＜２８，ｍ）、　６．６
０〜７．２５　（６Ｈ，ｍ）。

７、４０〜８．５０　（３Ｈ，ｍ） 実施例３ （１）カルボキシフルオレセイン（　０．３７６ｇ　）
の乾燥ジメチルホルムアミド溶液（　３１ｄ）中に、（
アミノメチレン）ビス（ホスホン酸）テトラエテル（０
．３２ｇ）およびＮ．Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイ
ミド（０．２２ｇ）の乾燥ジメチルホルムアミド溶液を
０°Ｃで加え、同温度で１時間攪拌し、さらに室温で１
６時間攪拌する．ジシクロへキシルウレアを濾去し、溶
媒を留去する．得られた残渣に、４％炭酸水素ナトリウ
ム（２０＋１１１１　）および酢酸エチル（　２ＱｍＱ
　）を加えて振盪する。水溜を酢酸エチル（　２０ｍＱ
　）で洗浄し、次いでＩＮ＠酸を加えてｐＨ２に調整し
、酢酸エチルで抽出する。有機層を分取し、硫酸マグネ
シウムで乾燥し、溶媒を留去する．得られた残渣を調製
層クロマトグラフィー（メルク５７１７）に付し、クロ
ロホルムとメタノール（４：１）の混液で溶出した後、
酢酸エチル（　３ｏｍａ　）および５０％飽和食塩水を
加えて、振盪する．有機層を分取し、硫酸マグネシウム
で乾燥し、溶媒を留去する．イソプロピルエーテルで処
理して粉末化して、（α−３′，６″−ジヒドロキシ−
３−オキソ−スピロ［フタラン−１．９′−キサンチン
］ー６ーカルポキサミドメデレン）ビス（ホスホン酸）
テトラエチルおよび（α−３′。

６′−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−
１．９′−キサンチン］−５−カルボキサミドメチレン
）ビス（ホスホン酸）テトラエチルの混合物（０．１６
６ｇ）を得る。

ＮＭＲ　（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）　＋　１．０−１．４
　（１２Ｈ．１１１＞、　３．９５〜４、２５　（８Ｈ
．ｍ）、　４．９５〜５．３５　（ＩＨ．ｍ＞、　６．
５〜６．８（６Ｈ．ａ＋）、　７．３〜８．６　（３Ｈ
，ｍ）（ｉ）上記（ｉ）で得られた混合物を実施例１　
−（　ｉ　）と同様に処理して（α−３’，６’−ジヒ
ドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−１．９′−
キサンチン］−６−カルポキサミドメチレン）ビス（ホ
スホン酸）のジナトリウム塩および（α−３’．６’−
ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−１．９
′−キサンテンツー５−カルボキサミドメチレン）ビス
（ホスホン酸）のジナトリウム塩の混合物（０．０９５
ｇ）を得る。

ＮＭＲ　（Ｄ２０．８　）　：６．　６０〜７．　３５
　（６）１．ｍ）、７．　５０−８．　３５（３Ｈ，ｍ
） 夾星■Ｉ Ｎ）製造例３−（ｉ　）で得られたα−（３’，８’−
ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−１、９
′−キサンチンツー６−カルポキサミド）酢酸およびα
−（３’．６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［
フタラン−１．９′−キサンテンツー５−カルボキサミ
ド）酢酸の混合物（０．　８６６　ｇ　＞を用いて、実
施例３−（ｉ）と同様に処理して（α−３’．６’−ジ
ヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラン−１．９′
−キサンテンコー６−カルボニルグリシルアミノメチレ
ン）ビス（ホスホン酸）テトラエチルおよび（α−３’
．６’　−ジヒドロキシ−３−オキソ−スピロ［フタラ
ン−１。

９′−キサンチン］−５−カルボニルグリシルアミノメ
チレン）ビス（ホスホン酸）テトラエチルの混合物（０
，６９ｇ）を得る。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　　８　）　’　Ｌ、（１４，４
（１２）１．ｍ）、　３．９５〜６゜ ４．２５　（１０Ｂ、ｍ）、　６．５〜６．８　（６Ｈ
，ｍ）、　７．３〜８．６（３Ｈ，ｍ） （ｉ）上記（１）で得られた混合物（０，ｔ２ｇ）を用
いて実施例１−（ｉ　）と同様に処理して、（α−３’
、　６　’−ジヒドロキシー３−オキソースピロ［フタ
ラン−１，９′−キサンテンコー６一カルポニルグリシ
ルアミノメチレン）ビス（ホスホン酸）のジナトリウム
塩および（’ａ−３’、６’ミー３’、６’−ジヒドロ
キシーピロ［フタラン−１゜９′−キサンテンコー５−
カルボニルグリシルアミノメチレン）ビス（ホスホン＃
）のジナトリウム塩の混合物（０，０６ｇ）を得る。

ＮＭＲ（Ｄ２０，８　　）　　’　　３．９５−４．２
５　　（２Ｈ９ｍ）、　６．６０〜７．３５（６Ｈ，ｍ
）、　７．５０〜８．３５　（３Ｈ，ｍ）実施例５ （ｉ）ジクロツェナフナトリウム（０，３８２ｇ）およ
び製造例１で得られた（α−ブロモアセトアミドメチレ
ン）ビス（ホスホン酸）テトラエチル（０、ｓｏ９ｇ）
を乾燥ジメチルホルムアミド（４ｍｌ＋）に加え、室温
で３時間攪拌する。水（５０１１１）および酢酸エチル
（５０ｍ１　）を加えて抽出し、有機層を硫酸マグネシ
ウムで乾燥し、溶媒を留去する。得られた残渣を調製層
クロマトグラフィーに付し、クロロホルムとメタノール
（１０：１）の混液で溶出して、［２−（２，６−ジク
ロロアニリノ）フェニルアセトキシアセタミドメチレン
ツビス（ホスホン酸）テトラエチル゛（０，５８ｇ）を
得る。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６．δ）　：　１．２３　（Ｌ２
Ｈ，ｔ）、　３．９０　（２）１゜ｓ）、　　３．９５
〜４．１８　　＜８Ｈ，ｍ）、　　４．６８　　＜２Ｈ
，ｓ）。

６．８０〜７．６０　（６Ｈ，ｍ） （ｉ）上記（ｉ）で得られた［２−（２，６−ジクロロ
アニリノ）フェニルアセトキシアセタミドメチレンツビ
ス（ホスホン酸）テトラエチル（０，４ｇ）の乾燥ジク
ロルメタン（１０ｍＱ　）　ｇ液にヨードトリメチルシ
ラン（４６８４）を０℃で滴下する。混合物を０°Ｃで
３時間攪拌し、メタノール（５１１１１１）を加えてさ
らに室温で１０分間攪拌する。水（６０１ｄ　）および
ジクロルメタン（６０１１１１１”）を加えて抽出し、
水層をジクロルメタン（５０＋１１１１　）で３回洗浄
する。

溶媒を留去し、残渣をメタノールに溶解し、不溶物を濾
去した後溶媒を留去する。得られた残渣に酢酸ナトリウ
ム（０，１４１ｇ）を加え、濃縮し、水およびエタノー
ルの混液から結晶化して、［２−（２，６−ジクロロア
ニリノ）フェニルアセトキシアセタミドメチレンツビス
（ホスホン酸）のりナトリウム塩 （０，２ｇ）を得る。

ＮＭＲ（Ｄ２０、ｆ；　）　’　４．０２　（２Ｈ，ｓ
）、　４．８０　（２Ｈ，ｓ）。

６．９０〜７．５５　（６Ｈ，ｍ） 亥ＪＬ［ｕ旦 （１）フルフェナム酸（０，２８１ｇ）を用いて、実施
例５と同様に処理して［２−［（３−トリフルオロメチ
ルフェニル）アミノ］ベンゾイルオキシアセタミドメチ
レンコビス（ホスホン酸）のジナトリウム塩（０，２３
５ｇ）を得る。

ＮＭＲ（Ｄ２０．　ｌ；　）　’　４．０〜４．６６　
（ＬＨ９ｍ）、４．８８　（２Ｈ３ｓ）、　６．９６　
（１８，ｔ）、　７．３０〜７．６１　（６Ｈ，ｍ）、
　７．９８（ＩＨ，ｄ）、　８．４０　（ＩＨ，ｄ）（
２）イブプロフェン（０，２０６ｇ）を用いて、実施例
５と同様に処理して［α−メチル−４−（２−メチルプ
ロピル）ベンゼンアセトキシアセタミドメチレンツビス
（ホスホン酸）のジナトリウム塩（０，０８ｇ）を得る
。

ＮＭＲ（Ｄ２０．ｌ；　）　’　ｏ、　８５　（３Ｈ，
ｓ）、　ｏ、　８９　（３Ｈ９ｓ）。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａ−ＣＯ−は医薬化合物の残基、 Ｒは−ＮＨ−または−Ｏ−、 ｍは０または１、 ｎは１〜１０の整数をそれぞれ意味する） で示される医薬化合物とジホスホン酸誘導体の結合体お
   よびその塩。
2. （２）Ｒが−Ｏ−であり、ｍが１である請求項（１）に
   記載の医薬化合物とジホスホン酸誘導体の結合体および
   その塩。
3. （３）医薬化合物が抗炎症剤である請求項（１）または
   （２）に記載の医薬化合物とジホスホン酸誘導体の結合
   体およびその塩。