JPH01502665A - 不妊症の治療方法および該方法に使用するための試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不妊症の治療方法および該方法に使用するための試薬本発明は高等確乳動物又は ヒトの不妊症の治療方法に関する。この発明はまたその方法に使用するための試 薬に関する。

雌の高等−乳動物およびヒトは、多数の卵母、細胞を伴って生れる。女性では卵 細胞の数は各卵巣で約２００．０００である。誕生後、多くの卵細胞は思春期前 に失われ、新しいものは形成されない。

卵母細胞は上皮細胞の輪いわゆる粒状細胞により包囲されわゆるゴナドトロピン により支配される。これらは、卵巣成熟を引き起こす卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ ）および排卵を引き起こす間質細胞刺激ホルモン（黄体ホルモン）（ＬＨ）を含 む。

各月経の開始において、卵巣はＦＳＨホルモンにより影響され複数の卵胞が成長 し粒状細胞のいくつかの層が形成され、そして卵胞もまた包囲している組織から 形成された細胞、膜細胞により包囲される。

徐々に１つの卵胞が優位にたち、他は退化する。通常この１の卵胞の成熟は１０ から１２日かかる。膜細胞の量もまた卵胞成熟の間増加する。エストロゲンはこ れらの細胞から形成され、したがってエストロゲンの増加する分泌は卵胞成熟の 結果でありしたがって尺度である。

月経周期の半分で成熟卵胞は下垂体から放出されたＬＨの作用下で破れ、卵が放 出される、排卵。卵は腹腔へと通過し１卵管により捕えられ、それを通して子宮 に運ばれる。

する。黄体は続く日の間に充分に発達しプロゲステロンおよびエストロゲンを製 造する。プロゲステロンは黄体においてのみ製造されるので、プロゲステロンの 検出は黄体の形成を伴う排卵を暗示する。

黄体は約１２−１４日の限られた寿命を有する。したがって、それは非常に迅速 に機能を終え、エストロゲンおよびプロゲステロンの血液含量は突然落ちる。こ の下落は子宮の内層の壊死を引き起こし、月経は通常排卵の１３又は１４日後に 生じる。

下垂体によるＦＳＨおよびＬＨの製造および放出は、部分的にはゴナドトロピン 放出ホルモン（Ｇ　ｎ　ＲＨ）の放出により視床下部からおよび部分的には卵巣 でのエストロゲン製造を条件としてのフィードバック機構を介して制御される。

増加されたエストロゲン製造および従って血中の増加され゛たエストロゲン濃度 は卵胞成熟と歩調を合せて生じるので、ＧｎＲＨの放出および活性はいわゆるネ ガティブフィードバック機構により修飾（ｓｏｄｉｆ’ｙ）される。増加された エストロゲン濃度は下垂体からのＦＳＨおよびＬＨの分泌を害する（すなわちネ ガティブ効果を有する）。対応して、低いエストロゲン濃度はＧｎＲＨ分泌を害 せず、そして視床下部からのＧｎＲＨの放出は下垂体からのＦＳＨおよびＬＨの 放出を刺激する。

女性の不妊症の原因は次のものを含む：１）異常な卵巣機能（−次（ｐｒｉ■ａ ｒｙ　）卵巣不全）２）低下した視床下部−下垂体機能、すなわち排卵不全を引 き起こす下垂体不全（第２の（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　）卵巣不全）３）卵管損傷 （癒着、閉塞等） ４）エンドメトリオーシス（骨盤の空洞中の他の場所での子宮を内張りする柾類 の膜物質の存在）。

ゴナドトロピンの注射は下垂体機能不全による不妊症を治療するために使用され ている。通常排卵のない場合最初に尿又はプラズマ中のプレ排卵（ｐｒｅ−ｏｖ ｕｌａｔｌｏｎ　）エストロゲン含量が検出されるまで毎日ＦＳＨ活性を有する ：Ａ製物例えばメツトロピンの注射が施される。　゛ 、そして１又は２のコリオニック （ｃｈｏｒｌｏｎｌｃ　）ゴナドトロピンの注射が施され、それが排卵および黄 体の形成および機能を引起こす。

治療された女性のあるパーセントは妊娠しないので、ゴナドトロピン調製物の使 用は不妊症の確かな治療方法ではない。

さらに過度の刺激が容易に生じ、これは大きい卵巣のう胞、腹腔における液又は 血液の蓄積、および胸腔内の液体蓄積をもたらすことができるから、該治療は顕 著な危険を含む。さらに複数妊娠（双子、３つ子、４つ子等）の危険がある。

インシユリンおよびいくつかの成長因子がゴナトロピンおよび粒状細胞の作用を 修飾することができることが知られている（１）。それらの研究においてラット およびブタからの粒状細胞は、インシユリン、インシュリン様成長囚子１（ＩＧ Ｆ−１）、形質変換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−らｅ鉢）および表皮成長因子（ ＥＧＦ）の存在下で血清を含まない媒体中でＦＳＨとともに培養された。これら の実験はＦＳＨのこれらの作用をＩＣＦ−１は高めＥＧＦは抑制することを示し た。ＴＧＦ−ベータは粒状細胞アロマターゼ（ａｒｏｍａｔａｓｅ　）活性を増 加することが見出されている（２）。

他の一連の実験において（３）、成長ホルモンでの治療はＩＦＧ−１の卵巣形成 を高めることを示した。

本発明は成長ホルモンがゴナドトロピンに共同（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｌｃ　）作 用を有して卵巣機能を刺激することを驚くべきことに見出したことに基づいてい る。

したがって本発明の方法は、不妊症個体にゴナドトロピンおよび成長ホルモンの 組合わせの注射で治療することを特徴とする。

共同効果により、より確実な結果を得ることができる。すなわち治療後妊娠した 不妊症女性の数はパーセントにおいて増加される。さらにゴナドトロピンの必要 な用量は顕著に低減され、その結果過度用量の危険が大きく減少する。

該治療は、不妊症飼育動物（ｒａｒｓｇ　ａｎｌｍａｌ　）　、例えばウシ、ブ タ、ヒツジおよびミンクに行なうことができる。さらに不妊症の女性は本方法に より治療されることができ、卵巣機能は正常化され妊娠の機会は顕著に増加する 。

本発明によると、該方法は、ゴナドトロピンおよび成長ホルモンそれぞれのある 時間間隔にわたっての（ｏｖｅｒ　ｃｅｒｔａｉｎｌｎｔｅｒｖａｌｓ　ｏｒ　 ｔｉｍｅ　）分離した注射で行なうことができる。

ゴナドトロピンでの標準的治療は毎日のゴナドトロピン調製物の注射で構成され る。この注射が成長ホルモンでの隔日の注射で追加されるとき、卵巣の応答は顕 著に改善される。代わりに、本発明の好ましい態様において、単一の成分の用量 が個々に調整された、ゴナドトロピンおよび成長ホルモンの混合された調製物を 使用することができる。ゴナドトロピンの量はより低い水準に維持され、過度の 用量は避けて最適の効果が提供される。

本発明を行なうために、それ自身注射調製物に関連して既知の種類の生理学上受 容可能なキャリアに分散された最適又は個々に適合された量のゴナドトロピンお よび成長ホルモンを含む試薬又は注射調製物が便法として使用される。

使用される成長ホルモンは問題の種に特定の成長ホルモンであるべきである。従 って、生合成的に製造されることができるヒト成長ホルモン、ｈＧＨ，は女性の ために使用され、ウシのためにはウシＧＨである。

つがいの間の不妊症は人口１，０００毎に年間１．２組の発生率であると評延さ れている（参照４）。これらのカップルの約２０％はアブラトリ（ａｖｕｌａｔ ｏｒｙ　）不全を引き起こす異常なゴナドトロピン分泌による不妊症問題を有す る（低ゴナドトロピン性（ｈｙｐｏｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｃ　）性機能低下 、第２の卵巣不全）。

“ゴナドトロピンおよびｈＧＨを用いた組合わされた治療のための症状は、排卵 を刺激する合成薬（例えばクロζフェン）での治療に抵抗する低ゴナドトロピン 性の性機能低下抵抗、およびゴナドトロピンの高い用量が成熟卵胞および卵を発 達するために必要な場合である。” 正常なゴナドトロピン分泌を有するが異常な卵巣（−次卵巣不全）を有する患者 において、ゴナトロピンおよびｈＧＨによる組合わされた治療は排卵を引起こす ことが期待されない。したがって−次卵巣不全はこの種類の治療のための症状で はない。

ゴナドトロピンおよびｈＧＨでの治療は目的が単一卵胞および卵（卵母細胞）の 成熟を得る“生体内受精”のために使用することができる。自然な道で即ち卵管 でのその卵の受精を伴う。上記治療はまた目的ができるだけ多数の成熟卵胞およ び卵を得ることである“体外受精”のためにも使用することができる。次に最も 良好に見える卵が患者の卵巣から出され（アスピレートされ）実験室において卵 の受精が起こる。

その後受精された卵は患者の子宮ムコス（ｍｕｃｏｓｅ）内に位置され、そこで 卵の発達が続く。

ゴナドトロピンおよびｈＧＨでの治療の効果は低ゴナドトロピン性の性機能低下 であり以下の４の例により説明される。

４つの全ての場合において使用された調製物は下記の通りである。： アンプル当り７５１ＵのＦＳＨおよび７５１ＵのＬ　ＨＩｃ対応するメトロビン を含有するヒト閉経のゴナドトロピン（ＨＭ　Ｇ　）。

アンプル当り５０００ＩＵのコリオニック（ｃｈｏｒｌｏｎｉｃ　）（ＨＣＧ） 。

バイアル当り２０ＩＵのｈＧＨを含有する生合成ヒト成長ホルモン（Ｂ−ｈＧＨ ）。

例１ 体内受精 名前：ＪＮ 年齢二３５ 以前の医歴：初経（第１の出血）１５歳。規則的月経周期が２年間、しかし１７ 歳から続発性無月経（月経性出血がない）。クロミツエンに対する応答がないの でＨＭ　ＧおよびＨＣＧ治療を１２周期行ない、その後彼女は妊娠し５年前分娩 した。最近２年間、周期毎８０アンプルまでのＨＭＧでのＨＭＧ治療を受けてお り応答はない（非常に低いエストロゲン水準および卵胞の発達なし）。

第１治療周期：　（Ｂ−ｈＧＨなし） ３５日間の増加する用量のＨＭＧの毎日の注射（全体で６０アンプル）の後１０ ，０ＯＯＩＵのＨＣＧの注射で排卵を誘発。満足できる卵胞発達なし。

第２の治療周期：　（Ｂ−ｈＧＨあり）２１日間の増加する用量のＨＭＧの毎日 の注射（全体で２８アンプル）の後１０，０ＯＯＩＵのＨＣＧの注射。同じ期間 の間、該患者はＢ−ｈＧＨの注射を受け一週間に３回２０１Ｕ与えられた。Ｂ− ｈＧＨの注射を受けた（全部で１８０１ＵのＢ−ｈＧＨ）、８のよく定義された （ｖｅｌｌ−ｄｅｆｉｎｅｄ　）卵胞がなしとげられた。

第３の治療周期（Ｂ−ｈＧＨあり） 上記の治療養生。１８日の間全部で２３アンプルのＨλ、ＩＧの注射の後１０． ０ＯＯＩＵのＨＣＧ、Ｂ−ｈＧＨ：全部で１６０ＩＵ、９のよく定義された卵胞 の形成。

例２ 体内受精 以前の医歴：原発性無月経。クロミツエンに対する応答なし。ＬＨＲＨ（黄体形 成ホルモン放出ホルモン）に対する応答なし。ＨＭＧおよびＨＣＧ治療を約１年 受け、周期毎７〇−７５アンプルのＨＭＧを必要とした。

第１治療周期：　（Ｂ−ｈＧＨなし） ２９日間の全体で７０アンプルのＨＭＧの注射（その後１０．０ＯＯＩＵおよび ＨＣＧ）で排卵の形成をインキュード（１ｎｃｕｄｅ）　した。

第２の治療周期：　（Ｂ−ｈＧＨあり）治療の期間：１９日 ＨＭＧ：３５アンプル ＨＣＧ：　１０．０ＯＯＩＵ Ｂ−ｈＧＨ：　１２０１　Ｕ 結果＝６の卵胞の形成。

第３の治療周期ＣＢ−ｈＧＨあり） 治療の期間：１２日 ＨＭＧ：２９アンプル ＨＣＧ：ＩＱ、ｏｏｏｏＩＵ Ｂ−ｈＧＨ：　１００ＩＵ 結果：８の卵胞の形成。

例３ 体外受精 名前：　ＬＬＣ 年齢：３９ 以前の医歴：初経１１歳。不規則周期。２０年前、自発的妊娠および分娩。最近 数年間彼女はクロミツエン、単独およびＬＨＲＨを伴うゴナドロフィン調製物、 および体外受精の試みをした。この患者から良い卵を得ることは困難でありこの 患者は最高２個の卵を得るために１６０アンプルまでのＨＭＧを必要とした。

１９８７年３月、１１日間３３アンプルのＨＭＧおよび１００１ＵのＢ−ｈＧＨ で治療された。１ｏの卵が形成しそのうち３個が受精された。

例４ 体外受精 名前：ＳＨ 年齢：３８ 以前の医歴：１９８２年、異所性妊娠（子宮以外の場所での胎児の発生）により 右卵管の手術（卵管摘出）。

１９８３年左卵管の手術。２年後　診断二人きい骨盤の粘着（ａｄｈｅｓｉｏｎ ｓ　）。最近２年りロミフェンおよびＨＭＧでの治療および数回の体外受精の試 み。

１９８６年１１月２０アンプルのＨＭＧおよびブセレリン（ｂｕｓｅｒｅｌｌｎ −ゴナトロピン放出ホルモン）およびＢ−ｈＧＨでの治療により、３個の卵が形 成し、そのうち２個が受精した。受精された卵の１個は子宮への着床に成功し患 者は妊娠した。

Ｃｒｌ：ＣＤ’　（ＳＤ）ＢＲ株の雌のラット（ＳｐｒａｇｕｅＤａｖｌｃｙ　 ｒａｔｓ　）が１７−１９日１ｒｌＬ３０−３３ｇ　ｂ。

ｗｔ、で購入された（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｌｖｅｒ　Ｖｌｇａ　Ｇ　ｍ　ｂ　Ｈ 。

Ｓａｎｄｈｏｒｃｒｖｅｒｇ　７．　Ｄ−８７４１５ｕｌｚｆｅｌｄ　ｌ、　Ｂ ＲＤより）。

ラットは使用前４日間２２±２℃、５５±１０％相対湿度、ｈの光で順応された 。順応期間の間、ラットはマツ寝わら（ｐｉｎｅ　ｂｅｄｄｉｎｇ）　２７Ｘ３ ５Ｘ１６ｃｍの四角形のオルス（Ｏｒｔｈ）プラスチックケージ（ｌ（ａｌｌｎ 　＆　Ｃｏ、　Ｋｒｏｎｓｂｕｒｇ。

Ｄ−２３７１Ｂｒｅｄｅｎｂｅｋ　ＢＲＤのｌ１ａｈｎｆｌｏｃｋ　Ｈ３／　４ 　）中で彼等の母と住まされた。該動物はアルトロミン試料１３２４　（Ｃｈ　 ｒ、　Ｐｅｔｅｒｓｃｎ　Ａ／Ｓ、　ＤＫ−４１００Ｒ１０ＯＲ１ｎからのＡｌ ｔｒｏｓｌｎ　ｄｌｅｔ　１３２４　）および飲み水に対する自由なアクセスを 有した。

６の同産児メイト（ｓｉｘ　１ｌｕｅｒ　ｍａｔｅｓ）の組（５ｅｔｓ）から、 各組から１の同産児メイトがランダムに６の群（ｇｒｏｕｐｓ）各々に割当てら れ、同産児にしたがいマークされた。８のラットの６の群が実験毎に形成された 。

下垂体切除： 順応の期間の後ラットが２１−２３日齢のとき下垂体切除が行われた。ラットは 腹腔内的に、アミレンハイドレイト（０，９％食塩中１０％）、４−５ｍ１／ｋ ｇ　ｂ８ｗｔ。

加えて４−５　ｍ　ｌ　／　ｋ　ｇのブリータル（Ｂｒｉｅｔａｌ　Ｒ）　（１ ０ｍｇ／ｍ１０．９％食塩水）で麻酔された。下垂体切除のためにＲ，１ｌｌｈ ａｒｄｔ　（５）により記載された特別な装置が使用された。耳の下方部を切断 した後、ラットは耳透過（ｔｒａｎｓａｕｒｌｃｕｌａｒ）下垂体切除のための 装置に固定された。

カニユーレが下垂体性の領域に挿入され、下垂体が２０〇−４００ｍｍＨｇの真 空で吸引された。手術後コツトンウールタンポンが耳中に置かれ、術後ラットは 痛覚脱失のためのテ（２日間）。

ラットは下垂体切除前および１４日後（実験に使用する前）ｆｆｉ量測定され、 １ｉ量増加く１０ｇおよび重量減少＜４ｇおよび健康が良好なラットのみが実験 に使用された。

投与（ｄｏｓｉｎｇ）　： ８の下垂体切除されたラットの群は、ベルゴナール（Ｐｅｒｇｏｎａｌ（（Ｓｅ ｒｏｎｏ　Ｍｅｎｏｔｒｏｐｈｌｎｅ））　０．５　Ｉ　Ｕ％　１．　ＯＩＵ、 および１．５ＩＵ、および生合成ヒト成長ホルモン（ＮｏｒｄＩｔｒｏｐｉｎ’ 　）又は２０ｇのグリシン、２．５ｇの炭酸水素ナトリウム、２．０ｇのマンニ トール、および注射のための１０１００Ｏにするための水を含有するバッファ（ Ｎａｎｏｒａｏｎ＾）が与えられた。このバッファはブラシーボとして使用され た。ベルゴナールの用Ｈ（ｄｏｓｅ）応答曲線の急勾配部分から選ばれたベゴナ ールの３つの用量が、０．５ｍ１体積の１４１Ｕのコリオニックゴナドトロピン （Ｃｈｏｒｉｏｎｌｅ　にｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｉ　（２８Ｉ　Ｕ　／　ｍ　 ｌ　）を含むアルブミン−フォスフエイトバッファｐＨ７，２に溶解された。

１の実験において０．４ｍｇのノルディトロピン（Ｎｏｒｄｌｔｒｏｐｌｎゝ） が３のベルゴナール用量が与えられた３つの群に３日間０．５ｍ１体積で皮下的 に投与され、０．５ｍｌのナノルモン（Ｎａｎｏｒｓｏｎ　’）バッファが同じ ３のベルゴナール用量が注射された３つの群に投与された。第２の実験において 、同じ用量養生が従われ、ただノルディトロピン用量は０．５ｍｌ中０．６ｍｇ であった。

最後の注射から約２４時間抜ラットは頚脱臼により殺され、卵巣が除去され直ち にｆｆｉ量測定された。両卵巣の組合わせたＩＲｆｊｌが記録され個々のラット の試験結果として使用された。

結果： 得られたデータは第１−２表に示されている。表は、種々の用量の群の卵巣重量 、平均（■ｅａｎｓ　）±Ｓ、Ｅ、Ｍを示す。

ノルディトロピン注射された群の結果はスチニーデンツ　ｔ−テスト（ｓｔｕｄ ｅｎｔ’ｓ　ｔ−ｔｅｓｔ）を用い同様のナノルモン　ノくッファ注射された群 と比較された。

ベルゴナール十ノルディトロピン　注射されたラットは、ベルゴナール＋バッフ ァ注射されたラットよりも顕著に高い卵巣重量を有した。ノルディトロピン　は ベルゴナールの用量応答曲線を左にシフトした。卵巣重量における最大の効果は 、１．０−１．５１Ｕベルゴナ−ル＋０．６ｍｇノルディトロピン　の組合わせ により達成されるようである（￥Ｓ２表）。

！ｓ１表 下垂体切除されたラットからの卵巣の重量”　ｐ　＜０．０５　（ｓｔｕｄｅｎ ｔ’ｓ　ｔ−Ｌｅｓｔ）第２表 参照 １、　Ａｄａｓｈｌ　ｅｔ　ａｌ 粒状細胞成長および機能の卵巣内レギュレータとしてのインシュリン様成長因子 。

Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｒｅｖｌｅｖｓ　６　：　４００−４２０　（１９８５） ２、　Ｙｌｎｇ　ｅｔ　ａｌ インヒビンおよびベータタイプ変Ｂ　（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ）成長因子は 培養されたラットの粒状細胞の卵胞刺激ホルモン誘発されたアロマターゼ活性に 対して反対の効果を有する。

３、Ｂｃｎｊａｍｌｎ　Ｄａｖｏｒｅｎ　ａｎｄ　Ｈｓｕｃｌｔ　Ａ　Ｊ　Ｗ成 長ホルモンは体内で免疫反応ソマトメジン−Ｃ／インシュリン様成長因子の卵巣 水準を増加する。

Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙｌｌ　８　：　８８８−８９０　（１９８６）４、 　ｌ１ｕｌｌ　Ｍ　Ｇ　Ｒｅｔ　ａｌ不妊症の原因、治療および結果の人口（ｐ ｏｐｕｌａｔｌｏｎ）研究。

Ｂｒ１ｔｌｓｈ　ｌｅｄ　Ｊ　２９１　：１６９３−１６９７　（’１９８５） ５、　ｌ１ｌｈａｒｄｔ、　Ｒ，、１９７１（Ｅｒｆａｈｒｕｎｇｅｎ　ｍｌｔ 　ｅｉｎｅｒ　５ｐｅｚｌａｌａｐｐａｒａｔｕｒ　ｚｕｒｔｒａｎｓａｕｒｌ ｋｕＩａｒｅｎ　Ｈｙｐｏｐｈｙｓｅｋｔｏｍｉｅ　ｂｅＩ　Ｒａｔｔｅｎ　ｚ 、　ｗｅｄ。

Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎ、１２　：　３０３−３０６）国際調査報告 ＆、ｗｌＱｗａ１．＋ｍ　ＰＣＴ／ＤＫ８Ｂ１０００１２

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．不妊症個体をゴナドトロピンおよび成長ホルモンの組合わせの注射で治療す ることを特徴とする高等哺乳動物又はヒトの不妊症の治療方法。
2. ２．該成長ホルモンが問題の治療される種に特有であることを特徴とする請求項 １記載の方法。
3. ３．不妊症の飼育動物に該治療を行なうことを特徴とする請求項１又は２記載の 方法。
4. ４．不妊症の女性に該治療を行なうことを特徴とする請求項１又は２記載の方法 。
5. ５．それぞれ適当な時間間隔で分配されたゴナドトロピンおよび成長ホルモンの 分離した注射を行なうことを特徴とする請求項１−４記載の方法。
6. ６．個々に適合された用量でおよび所定の時間計画に従ってゴナドトロピンおよ び成長ホルモンの混合された調製物の注射で治療を行なうことを特徴とする請求 項１−４記載の方法。
7. ７．ゴナドトロピンおよび成長ホルモンの組合わせから構成されることを特徴と する請求項１−６のいずれかに記載の方法において使用するための試薬。
8. ８．生理学上受容される液体キャリや中に個々に適合された量のゴナドトロピン および成長ホルモンを含有することを特徴とする請求項７記載の試薬。
9. ９．単一用量のゴナドトロピンおよびｈＧＨを含有する注射可能な液体からなる ことを特徴とする請求項８記載の試薬。
10. １０．使用されるｈＧＨが生合成ｈＧＨからなることを特徴とする請求項９記載 の試薬。