JPH01199589A - 発酵法によるｌ−リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−リジンの製造法Info
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- JPH01199589A JPH01199589A JP63023542A JP2354288A JPH01199589A JP H01199589 A JPH01199589 A JP H01199589A JP 63023542 A JP63023542 A JP 63023542A JP 2354288 A JP2354288 A JP 2354288A JP H01199589 A JPH01199589 A JP H01199589A
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- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は発酵法によるＬ −リジンの製造法に関する。
Ｌ −リジンを飼料、医薬品７食品など広い分野で種々
の用途を有する。
の用途を有する。
従来の技術
従来、コリネ型グルタミン酸生産菌の各種栄養要求性株
や、各種薬剤耐性株、各種薬剤感受性株などによるＬ−
’Ｊリジン製造法が知られている。
や、各種薬剤耐性株、各種薬剤感受性株などによるＬ−
’Ｊリジン製造法が知られている。
また抗生物質耐性株を用いる方法（Ｉｌ、 Ｓ、 Ｐ
３ｆｉ８７８１ｆｌ）や、バチルス属細菌の生産ずろ抗
菌性物質に耐性を有する菌株を用いる方法（特開昭５９
−１ｆｉ９４９７＞も知られている。
３ｆｉ８７８１ｆｌ）や、バチルス属細菌の生産ずろ抗
菌性物質に耐性を有する菌株を用いる方法（特開昭５９
−１ｆｉ９４９７＞も知られている。
しかしながら、イツリン類縁物質に対して耐性を有する
菌株についての報告はない１．また、特開昭５９−１６
９４！１７に記載されたバチルス属細菌の生産する抗菌
性物質に耐性を有する菌株を用いる方法において、その
目的とするところはバチルス属細菌の混入によるリジン
生産菌の生育阻害の防止であり、リジン生産菌のリジン
生産能向上を目的とするものではない。
菌株についての報告はない１．また、特開昭５９−１６
９４！１７に記載されたバチルス属細菌の生産する抗菌
性物質に耐性を有する菌株を用いる方法において、その
目的とするところはバチルス属細菌の混入によるリジン
生産菌の生育阻害の防止であり、リジン生産菌のリジン
生産能向上を目的とするものではない。
発明が解決しようとする課題
飼料、医薬品１食品またはその原料など広い分野で種々
の用途を有するＬ −リジンを工業的に安価に製造する
方法の開発が望まれている。
の用途を有するＬ −リジンを工業的に安価に製造する
方法の開発が望まれている。
課題を解決するだめの手段
本発明者は、Ｌ−リジンを工業的に安価に製造するため
に、発酵法によるＬ−リジンを製造法について鋭意検ｉ
＝１を行った。その結果、ｌ−−ＩＪリジ生産閑の生産
能が、イツリン類縁物質に対する耐性を付与することに
より向上することを見出し本発明を完成した。
に、発酵法によるＬ−リジンを製造法について鋭意検ｉ
＝１を行った。その結果、ｌ−−ＩＪリジ生産閑の生産
能が、イツリン類縁物質に対する耐性を付与することに
より向上することを見出し本発明を完成した。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明は、コリネ型りルタミン酸生産閑に属し、イツリ
ン類縁物質に耐性を有し、かつＬ −リジンを生産能有
する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ −リジンを
生成蓄積させ、該培養物よりＩ−−−リジンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−リジンを製造法を促
供する。
ン類縁物質に耐性を有し、かつＬ −リジンを生産能有
する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ −リジンを
生成蓄積させ、該培養物よりＩ−−−リジンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−リジンを製造法を促
供する。
本発明でいうイツリン類縁物質とは、バチルス属細ｆＭ
ｉの生産する抗生物質であり、イツリン−Δ。
ｉの生産する抗生物質であり、イツリン−Δ。
イツリン−Ｃ，マイコスチリン、ハンロマイシン−Ｌな
とがイ列示される〔ハイオニ１−ミカ・工・ハイオフイ
シ力・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、 ｌ］１ｏｐｈｙＳ
、八ｃｔａ）６８４ 、 ２０７〜２１１（１９８２）
ｌ］。
とがイ列示される〔ハイオニ１−ミカ・工・ハイオフイ
シ力・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、 ｌ］１ｏｐｈｙＳ
、八ｃｔａ）６８４ 、 ２０７〜２１１（１９８２）
ｌ］。
本発明の変異株の親株としては、コリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属などのコリネ型りルタミン
酸生産菌に属し、リジン生産能を有する菌株ならいずれ
でもよい。具体的にはコリネバクテリウム・グルタミク
ムＨ−３１４９（微工研条寄第１５８号）およびコリネ
バクテリウム・グルタミクム＋１−４４１２ （微工研
条寄第１０６９号）などが挙げられる。
またはブレビバクテリウム属などのコリネ型りルタミン
酸生産菌に属し、リジン生産能を有する菌株ならいずれ
でもよい。具体的にはコリネバクテリウム・グルタミク
ムＨ−３１４９（微工研条寄第１５８号）およびコリネ
バクテリウム・グルタミクム＋１−４４１２ （微工研
条寄第１０６９号）などが挙げられる。
本発明における変異株の誘導は、例えば」１記親株をＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソクアニンン２５
０Ｊ１ｇ／ｍｌで３０℃、３０分処理し、親株が生育阻
害を示す濃度のイツリン類縁物質を含む最少培地寒天平
板」二に生育する変異株を取得することにより行うこと
ができる。このようにして取得したイツリン類縁物質に
対する耐性変異株を培養し、Ｌ −リジンを生産能調べ
ることによりＬ−リジンを産能が向」ニした変異株を分
離することができる。
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソクアニンン２５
０Ｊ１ｇ／ｍｌで３０℃、３０分処理し、親株が生育阻
害を示す濃度のイツリン類縁物質を含む最少培地寒天平
板」二に生育する変異株を取得することにより行うこと
ができる。このようにして取得したイツリン類縁物質に
対する耐性変異株を培養し、Ｌ −リジンを生産能調べ
ることによりＬ−リジンを産能が向」ニした変異株を分
離することができる。
以下に親株および親株より誘導したイツリン類縁物質（
イツリンＡおよびイツリンＣの１＝１混合物）耐性変異
株の例を示す。
イツリンＡおよびイツリンＣの１＝１混合物）耐性変異
株の例を示す。
チアリジン耐性、リファンピシン耐性。
ストレプトマイノン耐性、６−アザウランル耐性
耐性株 コリネバクテリウム・クルタミクムＩド４９３
３チアリンン耐性、リファンピシン耐性。
３チアリンン耐性、リファンピシン耐性。
ストレプトマインン耐性、６−アザウラシル耐性、イツ
リン類縁物質耐性 チアリジン耐性１ リファンピシン耐性。
リン類縁物質耐性 チアリジン耐性１ リファンピシン耐性。
ストレプトマイノン耐性、６−了ザウランル耐性、β−
ナフトキノリン耐性 耐性株 コリネバクゾリウム・グルタミクムｌｌ−４９
３４チアリジン耐性、リファンピシン耐性７ストレブト
マイノン耐性、６−アザウランル耐性、β−ナフトキノ
リン耐性。
ナフトキノリン耐性 耐性株 コリネバクゾリウム・グルタミクムｌｌ−４９
３４チアリジン耐性、リファンピシン耐性７ストレブト
マイノン耐性、６−アザウランル耐性、β−ナフトキノ
リン耐性。
イツリン類縁物質耐性
得られたイツリン類縁物質耐性変異株であるコリネバク
テリウム・グルタミクムｌ−４９３４株は、昭和６３年
１月１４日伺で］１業技術院微生物工業技術研究所く微
工研）にｌ’ｔＥＲＭ ＩＭＰ−１６５５として寄託さ
れている。
テリウム・グルタミクムｌ−４９３４株は、昭和６３年
１月１４日伺で］１業技術院微生物工業技術研究所く微
工研）にｌ’ｔＥＲＭ ＩＭＰ−１６５５として寄託さ
れている。
一ト記各菌株をイツリン（イツリンΔおよびイツリンＣ
の１１混合物）２００μｇ ／ ｍ ｌを含む最少寒天
平板〔グルコース］Ｏｇ／Ｃ塩化アンモニウムＩｇ／、
１２．尿素２ｇ／、ｉ！、ＫＨ２ＰＯ，Ｉｇ／ＣＫ
２ＨＰ Ｏｔ ３ ｇ／ 、ｉ！、 Ｍ
ｇＣβ ２ ・ ２Ｔ−１２００，４ｇ／ＣＦ ｅ
５０．−７８２０ １０ｍｇ／ＣＭｎ ＳＯ，・ ４
Ｉ−Ｉ ２０ １ ０ｍｇ／ ＣＺｎ ＳＯ４
・７１（ｚｏ １ｍｇ／、＆、 Ｃｕ５Ｏ＋・５Ｉ−
Ｔ２Ｏ１ｍｇ／、ｉ！、 （ＮＩ−Ｉ＋ＬｔＭｏ
７０ □＋ ・ ４）ｆ ２０ Ｉｍｇ／Ｉ
Ｉ！。
の１１混合物）２００μｇ ／ ｍ ｌを含む最少寒天
平板〔グルコース］Ｏｇ／Ｃ塩化アンモニウムＩｇ／、
１２．尿素２ｇ／、ｉ！、ＫＨ２ＰＯ，Ｉｇ／ＣＫ
２ＨＰ Ｏｔ ３ ｇ／ 、ｉ！、 Ｍ
ｇＣβ ２ ・ ２Ｔ−１２００，４ｇ／ＣＦ ｅ
５０．−７８２０ １０ｍｇ／ＣＭｎ ＳＯ，・ ４
Ｉ−Ｉ ２０ １ ０ｍｇ／ ＣＺｎ ＳＯ４
・７１（ｚｏ １ｍｇ／、＆、 Ｃｕ５Ｏ＋・５Ｉ−
Ｔ２Ｏ１ｍｇ／、ｉ！、 （ＮＩ−Ｉ＋ＬｔＭｏ
７０ □＋ ・ ４）ｆ ２０ Ｉｍｇ／Ｉ
Ｉ！。
ビ」チン５０μｇ／ｎ、寒天２０ｇ／β、ｐｉ４７．２
〕上で２４時間培養したときの生育度を第１表に示す。
〕上で２４時間培養したときの生育度を第１表に示す。
第 １ 表
（μｇ／ｍ１）
０ ＋＋ １４
＋→ ＋（２００−−＋＋ ＋＋ ＋＋′十分な生育 −３非生育 本発明の方法において用いられる菌の培養に際しては、
一般にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が使用され
る。すなわち閑が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類
、成育因子などを含有する合成培地または天然培地が適
宜用いられる。
＋→ ＋（２００−−＋＋ ＋＋ ＋＋′十分な生育 −３非生育 本発明の方法において用いられる菌の培養に際しては、
一般にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が使用され
る。すなわち閑が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類
、成育因子などを含有する合成培地または天然培地が適
宜用いられる。
炭素源としては、クルコース、フラクトース。
ンユクロース、糖蜜、澱粉加水分解物などの糖類の他、
ｌｖｌ酸、フマール酸、クエン酸なとの各種有機酸、
エタノール、クリセロール、マンノースなどのアルコー
ル類なとが使用できる。
ｌｖｌ酸、フマール酸、クエン酸なとの各種有機酸、
エタノール、クリセロール、マンノースなどのアルコー
ル類なとが使用できる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウムな
どの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム塩、アミン類
、その地合窒素化合物ならヒニペプトン、肉エキス、コ
ーン・ステイープ・リカー、カセイン加水分解物、大豆
粕加水分解物。
アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウムな
どの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム塩、アミン類
、その地合窒素化合物ならヒニペプトン、肉エキス、コ
ーン・ステイープ・リカー、カセイン加水分解物、大豆
粕加水分解物。
各種発酵菌体およびその消化物などが用いられる。
無機物としては、隣酸第−カリウム、燐酸第二カリウム
、燐酸マク不シウム、硫酸マク不シウム。
、燐酸マク不シウム、硫酸マク不シウム。
塩化すトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、
炭酸カルシウムなどが用いられる。
炭酸カルシウムなどが用いられる。
その他、ビオチン、チアミン、ニコチン酸、β−アラニ
ン、パントテン酸などのビタミン類や、ロインン、バリ
ン、アスパラギンＷ）１． クルタミン酸などのアミ
ノ酸類、ストレプトマイシンなどの各種抗生物質を添加
する場合がある。
ン、パントテン酸などのビタミン類や、ロインン、バリ
ン、アスパラギンＷ）１． クルタミン酸などのアミ
ノ酸類、ストレプトマイシンなどの各種抗生物質を添加
する場合がある。
培養は振盪培養または深部通気攪拌培養なとの好気的条
件下で行う。培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５
〜３８℃の範囲である。培地のρ１は５〜９の範囲で、
好ましくは中性側近に保持する。培地のｐＩ−■、、Ｉ
ｌ！Ｉ整は炭酸力ルンウム （ｌｉｊ機または有機の酸
、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液などによって
行う。
件下で行う。培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５
〜３８℃の範囲である。培地のρ１は５〜９の範囲で、
好ましくは中性側近に保持する。培地のｐＩ−■、、Ｉ
ｌ！Ｉ整は炭酸力ルンウム （ｌｉｊ機または有機の酸
、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液などによって
行う。
培養期間は通常１〜７０間で、培養液中にＬ−リシンが
生成蓄積する。
生成蓄積する。
培養終了後、培養液から菌体などの沈澱物を除去し、イ
オン交換処理法、濃縮法、塩析法１等重点沈澱法などを
併用することにより、培養液からＬ−リシンを回収する
ことができる。
オン交換処理法、濃縮法、塩析法１等重点沈澱法などを
併用することにより、培養液からＬ−リシンを回収する
ことができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１
コリネバクテリウム・クルタミクムｌｌ−３１，４９，
Ｈ−４４＋２． ｌｌ−４９３３，１１−１１９３４を
下記の種培地２０ｍ１ （３００ｍｌ容三角フラスコ）
に植菌し、３０℃にて２４時間振盪培養（２２Ｏｒρｍ
）した。この種培養液２ｍｌを下記の生産培地２０ｍｌ
（３００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃にて
７２時間振盪培養（２２０ｒｐｍ） した。培養終了後
、Ｌ −ＩＪレシン生成量を酸性鋼ニンヒドリンを用い
る比色法によって測定した。１その結果、培養液中のＬ
−ＩＪレジン成量は塩酸塩として、各々４４ｍｇ／ｍｌ
、 ５２ｍｇ／ｍｌ、 ５３ｍｇ／ｍｌ、 ５４
ｍｇ／ｍｌであった。）Ｉ−４９３３株を用いて得た培
養液１０１００Ｏを遠心分離し、得られた上清液を硫酸
でｐ Ｈ１，５に調整した後、強酸性イオン交換樹脂ダ
イヤイオン５Ｋ−ＩＢ（Ｈ＋型、三菱化成工業社製）の
カラムに通し、Ｌ −ＩＪリシン吸着させ、カラムを水
洗後、２規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ −ＩＪリ
シン分を集約だ。集めた両分を濃縮し、濃縮液を塩酸で
ｐ Ｉ−１２，０に調整した後、エタノールを添加しな
がら冷却することにより、Ｌ−Ｕジン塩酸塩を晶出させ
、結晶４２ｇを得た。
Ｈ−４４＋２． ｌｌ−４９３３，１１−１１９３４を
下記の種培地２０ｍ１ （３００ｍｌ容三角フラスコ）
に植菌し、３０℃にて２４時間振盪培養（２２Ｏｒρｍ
）した。この種培養液２ｍｌを下記の生産培地２０ｍｌ
（３００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃にて
７２時間振盪培養（２２０ｒｐｍ） した。培養終了後
、Ｌ −ＩＪレシン生成量を酸性鋼ニンヒドリンを用い
る比色法によって測定した。１その結果、培養液中のＬ
−ＩＪレジン成量は塩酸塩として、各々４４ｍｇ／ｍｌ
、 ５２ｍｇ／ｍｌ、 ５３ｍｇ／ｍｌ、 ５４
ｍｇ／ｍｌであった。）Ｉ−４９３３株を用いて得た培
養液１０１００Ｏを遠心分離し、得られた上清液を硫酸
でｐ Ｈ１，５に調整した後、強酸性イオン交換樹脂ダ
イヤイオン５Ｋ−ＩＢ（Ｈ＋型、三菱化成工業社製）の
カラムに通し、Ｌ −ＩＪリシン吸着させ、カラムを水
洗後、２規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ −ＩＪリ
シン分を集約だ。集めた両分を濃縮し、濃縮液を塩酸で
ｐ Ｉ−１２，０に調整した後、エタノールを添加しな
がら冷却することにより、Ｌ−Ｕジン塩酸塩を晶出させ
、結晶４２ｇを得た。
種 培 地 生産培地
酵母エキス ５ｇ／、１２ 硫酸アン（ニウム
４０ｇ／β尿 素 ３ｇ／ｐ Ｍｇ５Ｏ，
・２１１□ＯＯ，５ｇ／、ｆ２ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ
／ Ｒ尿素 ３ｇ／ｆ！。
４０ｇ／β尿 素 ３ｇ／ｐ Ｍｇ５Ｏ，
・２１１□ＯＯ，５ｇ／、ｆ２ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ
／ Ｒ尿素 ３ｇ／ｆ！。
Ｋ２ＨＰＯ，０，５ｇ／ｊ２ 炭酸カルシウム
３０ｇ／ＡＭｇＳＯ＋・２１１２００．５ｇ
／ Ｅ ｐｔｌ ７．２ビオチン ５０μｇ／
Ａ ＰＨ７，２ 発明の効果 本発明によりＬ −ＩＪリシン工業的に安価に供給する
ことができる。
３０ｇ／ＡＭｇＳＯ＋・２１１２００．５ｇ
／ Ｅ ｐｔｌ ７．２ビオチン ５０μｇ／
Ａ ＰＨ７，２ 発明の効果 本発明によりＬ −ＩＪリシン工業的に安価に供給する
ことができる。
Claims (1)
- コリネ型グルタミン酸生産菌に属し、イツリン類縁物質
に耐性を有し、かつＬ−リジン生産能を有する微生物を
培地に培養し、培養物中にＬ−リジンを生成蓄積させ、
該培養物よりＬ−リジンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−リジンの製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63023542A JP2578463B2 (ja) | 1988-02-03 | 1988-02-03 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
| EP89101720A EP0327945A3 (en) | 1988-02-03 | 1989-02-01 | Process for producing l-lysine |
| KR1019890001230A KR920007402B1 (ko) | 1988-02-03 | 1989-02-02 | L-리신의 제조방법 |
| CN89100614A CN1037927A (zh) | 1988-02-03 | 1989-02-02 | 生产l-赖氨酸的方法 |
| HU89525A HU203788B (en) | 1988-02-03 | 1989-02-02 | Process for producing 1-lysine with fermentation |
| MX014772A MX173009B (ja) | 1988-02-03 | 1989-02-03 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63023542A JP2578463B2 (ja) | 1988-02-03 | 1988-02-03 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01199589A true JPH01199589A (ja) | 1989-08-10 |
| JP2578463B2 JP2578463B2 (ja) | 1997-02-05 |
Family
ID=12113357
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63023542A Expired - Lifetime JP2578463B2 (ja) | 1988-02-03 | 1988-02-03 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0327945A3 (ja) |
| JP (1) | JP2578463B2 (ja) |
| KR (1) | KR920007402B1 (ja) |
| CN (1) | CN1037927A (ja) |
| HU (1) | HU203788B (ja) |
| MX (1) | MX173009B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3006939B2 (ja) * | 1991-10-21 | 2000-02-07 | 協和醗酵工業株式会社 | Ｌ−リジンの製造法 |
| EP0780477B1 (en) * | 1994-08-19 | 2003-04-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-lysine and l-glutamic acid by fermentation |
| DE102005056668A1 (de) * | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Ag | Fermentative Herstellung organischer Verbindungen |
| WO2011111073A2 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Anand Bhadalakar | PROCESS FOR BIOGENESIS OF L-LYSINE FROM ε-CAPROLACTAM OR ε-CAPROLACTAM DEGRADATION OR RELATED INTERMEDIATES |
| CN105500551B (zh) * | 2016-01-30 | 2018-11-16 | 蒙城县虹升塑粉有限公司 | 高效制备树脂颗粒的化工设备 |
| CN110092729B (zh) * | 2019-05-31 | 2022-06-28 | 上海泰坦科技股份有限公司 | 一种l-赖氨酸盐酸盐的结晶方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2103617B (en) * | 1981-08-10 | 1986-05-21 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Production of l-lysine by fermentation and new micro-organisms obtained by protoplast fusion |
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1988
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1989
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