JP6266857B2 - 化粧料 - Google Patents
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Description
しかし、ボタン科ボタン属に属する植物の花部の抽出物がすぐれた美白作用及び抗老化作用の両作用を併せ持つことについては何ら報告されていなかった。
以上のことに鑑みて、本発明者が鋭意研究を行った結果、ボタン科ボタン属の植物の花部(花弁、萼等を含む)の抽出物が、すぐれたチロシナーゼ活性抑制作用、並びに抗酸化作用、及びMMP(エラスターゼ、コラゲナーゼ、及びゼラチナーゼ)活性阻害作用等の抗老化作用を併せ持つことを新たに見出し、本発明を完成するに至った。
また、上記ボタン科ボタン属に属する植物としては、シャクヤク(Paeonia lactiflora)が好ましい。
また、上記ボタン科ボタン属に属する植物としては、ボタン(Paeonia suffruticosa)が好ましい。
なお、ここで、化粧料なる文言は、所謂化粧料のほかに医薬部外品をも含む広義で用いる。
本発明で用いるボタン科(Paeoniaceae)ボタン属(Paeonia)の植物の種は、特に限定されるものではなく、例えば、シャクヤク(Paeonia lactiflora)、ヤマシャクヤク(Paeonia japonica)、ベニバナヤマシャクヤク(Paeonia obovata)、ボタン(Paeonia suffruticosa)等が挙げられる。
また、乳化剤乃至乳化助剤として、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類(麦類、豆類、雑穀など)、ジュアゼイロ(Rhamnaceae zizyphus joazeiro)抽出物等を配合することもできる。
ボタン科ボタン属に属する植物のシャクヤク(Paeonia lactiflora)の花を乾燥、粉砕して得られる粉砕物30gを、30%1,3−ブチレングリコール溶液(精製水/1,3ブチレングリコール=70/30)300gに接触させ、80℃で2時間抽出を行った。次に、得られた抽出液を濾過して淡黄色〜褐色透明の花部の抽出液260gを得た(固形分濃度2.59%)。
抽出溶媒として、30%1,3−ブチレングリコール溶液に代えて、1,3−ブチレングリコールを使用すること以外は製造例1と同様の方法により、淡黄色〜褐色透明の花部の抽出液280gを得た(固形分濃度0.9%)。
抽出溶媒として、30%1,3−ブチレングリコールに代えて、精製水を使用すること以外は製造例1と同様の方法により、褐色透明の花部の抽出液260gを得た(固形分濃度1.37%)。
ボタン科ボタン属に属する植物として、シャクヤクに代えて、ヤマシャクヤク(Paeonia japonica)を使用すること以外は製造例1と同様の方法により、淡黄色〜褐色透明の花部の抽出液275gを得た(固形分濃度2.56%)。
ボタン科ボタン属に属する植物として、シャクヤクに代えて、ベニバナヤマシャクヤク(Paeonia obovata)を使用すること以外は製造例1と同様の方法により、淡黄色〜褐色透明の花部の抽出液278gを得た(固形分濃度2.51%)。
ボタン科ボタン属に属する植物として、シャクヤクに代えて、ボタン(Paeonia suffruticosa)の花部を使用すること以外は製造例1と同様の方法により、淡黄色〜褐色透明の花部の抽出液278gを得た(固形分濃度1.2%)。
ボタン科ボタン属に属する植物のシャクヤク(Paeonia lactiflora)の花部を乾燥、粉砕して得られる粉砕物30gを、精製水300gに接触させ、かつ、この溶液に0.3gのペクチナーゼを添加し、40℃で1時間、酵素分解処理を行った後、80℃で1時間抽出を行った。得られた抽出液を濾過して淡黄色〜褐色透明の花部の抽出液260gを得た(固形分濃度1.8%)。
[A成分] 部
流動パラフィン 5.0
ヘキサラン (注1) 4.0
パラフィン 5.0
グリセリルモノステアレート 2.0
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート 6.0
ブチルパラベン 0.1
(注1)株式会社テクノーブル製 トリオクタン酸グリセリル
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
グリセリン 5.0
カルボキシメチルモノステアレート 0.1
モイストン・C (注2) 1.0
精製水 全量が100部となる量
(注2)株式会社テクノーブル製 NMF成分
[C成分]
香料 適量
上記のA成分とB成分をそれぞれ80℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを50℃まで冷却した後、C成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
[A成分] 部
流動パラフィン 6.0
ヘキサラン 4.0
ホホバ油 1.0
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート 2.0
大豆レシチン 1.5
メチルパラベン 0.15
エチルパラベン 0.03
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
グリセリン 3.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
カルボキシメチルセルロース 0.3
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
香料 適量
上記のA成分とB成分をそれぞれ80℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを50℃まで冷却した後、C成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
実施例2のB成分中、製造例1の抽出液に代えて製造例6の抽出液5.0部を用いるほかは実施例2と同様にして乳液を得た。
[A成分] 部
製造例1の抽出液 5.0
エタノール 10.0
グリセリン 3.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
メチルパラベン 0.2
クエン酸 0.1
クエン酸ナトリウム 0.3
カルボキシビニルポリマー 0.1
香料 適量
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が100部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
[A成分] 部
オリーブ油 1.0
ポリオキシエチレン(5.5)セチルアルコール 5.0
ブチルパラベン 0.1
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
エタノール 5.0
グリセリン 5.0
1,3−ブチレングリコール 5.0
メチルパラベン 0.1
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
香料 適量
A成分及びB成分をそれぞれ80℃以上に加温後、A成分にB成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン(5000rpm)で2分間ホモジナイズを行った。これを50℃まで冷却した後、C成分を加えて攪拌混合し、さらに30℃以下まで冷却して化粧水を得た。
実施例5のB成分中、製造例1の抽出液に代えて製造例6の抽出液5.0部を用いるほかは実施例5と同様にして乳液を得た。
[A成分] 部
流動パラフィン 6.0
ヘキサラン 4.0
ホホバ油 1.0
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート 2.0
大豆レシチン 1.5
メチルパラベン 0.15
エチルパラベン 0.03
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
L−アスコルビン酸−2−グルコシド 2.0
水酸化カリウム 0.5
グリセリン 3.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
カルボキシメチルセルロース 0.3
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
香料
適量
上記のA成分とB成分をそれぞれ80℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを50℃まで冷却した後、C成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
実施例5のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えてL−アスコルビン酸−2−リン酸エステルマグネシウム2.0部を用いるほかは実施例と同様にして乳液を得た。
実施例5のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えてL−アスコルビン酸−2−リン酸エステルナトリウム2.0部を用いるほかは実施例5と同様にして乳液を得た。
実施例5のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えてアルブチン2.0部を用いるほかは実施例5と同様にして乳液を得た。
実施例5のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えて米糠抽出物加水分解物(株式会社テクノーブル製、商品名「グレイスノウ*雪*HP」、固形分濃度3.5%)5.0部を用いるほかは実施例5と同様にして乳液を得た。
実施例5のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えて白芥子抽出物(株式会社テクノーブル製、商品名「シナブランカ−WH」、固形分濃度1.0%)5.0部を用いるほかは実施例5と同様にして乳液を得た。
実施例5のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えてγ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸1.0部を用いるほかは実施例5と同様にして乳液を得た。
[A成分] 部
ステアリン酸 2.4
モノステアリン酸プロピレングリコール 2.0
セトステアリルアルコール 0.2
液状ラノリン 2.0
流動パラフィン 3.0
ミリスチン酸イソプロピル 8.5
プロピルパラベン 0.05
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.2
ベントナイト 0.5
プロピレングリコール 4.0
トリエタノールアミン 1.1
メチルパラベン 0.1
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
酸化チタン 8.0
タルク 4.0
着色顔料 適量
上記のA成分とB成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のC成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリクイドファンデーションを得た。
[A成分] 部
ステアリン酸 5.0
セタノール 2.0
モノステアリン酸グリセリル 3.0
流動パラフィン 5.0
スクワラン 3.0
ミリスチン酸イソプロピル 8.0
ポリオキシエチレン(20)モノステアリン酸グリセリル 2.0
プロピルパラベン 0.1
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
ソルビトール 3.0
1,3−ブチレングリコール 5.0
トリエタノールアミン 1.5
メチルパラベン 0.1
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
酸化チタン 8.0
タルク 2.0
カオリン 5.0
ベントナイト 1.0
着色顔料 適 量
[D成分]
香料 0.3
C成分を混合し、粉砕機で粉砕した。B成分を混合し、これに粉砕したC成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。A成分及び均一分散させたB、C成分をそれぞれ80℃に加温後、B、C成分にA成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン(5000rpm)で2分間ホモジナイズを行った。これを50℃まで冷却した後、D成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら30℃以下まで冷却してクリームファンデーションを得た。
[A成分] 部
N−ラウロイルメチルアラニンナトリウム 25.0
ヤシ油脂肪酸カリウム液(40%) 26.0
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド 3.0
メチルパラベン 0.1
[B成分]
製造例1の抽出液 5.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
精製水 全量が100部となる量
A成分及びB成分をそれぞれ80℃に加温して均一に溶解した後、A成分にB成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
まず、マックイルベイン緩衝液(pH6.8)を用いて125U/mLのチロシナーゼ酵素液を調製した。次に、精製水を用いて製造例1のシャクヤクの花部の抽出液をその終濃度が0.5%及び1.0%になるように調製した後、当該液を96ウェルマイクロプレートに100μL/ウェルずつ添加した。これに、0.03%L−チロシン溶液を同じく100μL/ウェルずつ添加し、十分に混合した。これに前記チロシナーゼ酵素液を100μL/ウェルずつ添加して十分に混合し、この溶液の波長490nmにおける吸光度を直ちに測定した後に、室温で反応させ、10分経過後、再び波長490nmにおける吸光度を測定し、下式からチロシナーゼ活性指数を求めた。また、処理物の代わりに30%1,3−ブチレングリコール溶液(精製水/1,3−ブチレングリコール=70/30)を用いて同様に操作したものをブランクとした。
チロシナーゼ活性指数=[(T10−T0)/(B10−B0)]×100(%)
(式中、T10は試験開始から10分間経過後の試料が添加された溶液の吸光度、B10は試験開始から10分間経過後の試料の代わりに30%1,3−ブチレングルコール溶液が添加された溶液の吸光度、T0は試験開始直後の試料が添加された溶液の吸光度、B0は試験開始直後の試料のかわりに30%1,3−ブチレングルコール溶液が添加された溶液の吸光度を示す)。
[表1]
[試験方法]
培養B16−F10マウスメラノーマ細胞を、96穴マイクロプレートに8×103個/穴播種し、10%仔牛血清(FBS)含有RPMI培地中、37℃、5%CO2の条件下に1日間プレ培養した後、10%FBS含有RPMI培地で製造例1のシャクヤクの花部の抽出液をその終濃度が0.1%及び0.5%となるように希釈した液に置換し、同条件で2日間培養した。次に培養液を除去し、0.3mg/mLのMTT溶液を添加するか、又は、界面活性剤(Triton X-100)と5mMのLドーパ溶液を添加して37℃で反応を行った後、マイクロプレートリーダー(Model 450、バイオラッド社製)を用い、波長570−630nmでMTT値を、波長490nmでドーパ値をそれぞれ測定した。
なお、比較のため、PBS(−)の添加の場合及びコウジ酸の添加の場合(陽性対照)についても同様の試験を行った。
[表2]
まず、DPPH 2.4部をエタノール20部に溶解後、精製水20部を加えてDPPH溶液を調製した。このDPPH溶液24部に対して、18v/v%エタノール溶液を19.2部、2M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)を4.8部加えて、DPPH添加溶液として調製した。また、抽出液そのものの色調が試験に及ぼす影響を差し引くため、DPPH溶液の代わりに50v/v%エタノール溶液を用いて、18v/v%エタノール溶液と2M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液を混合した液を対照液とした。
製造例1のシャクヤクの花部の抽出液を精製水で希釈してその終濃度が0.1%、1.0%及び10.0%になるように調製した液を試験溶液とし、この試験溶液とDPPH添加溶液又は対照液とを1:3の割合で混合し、室温で10分静置後、各試験溶液をDPPH添加溶液と混合した場合の550nmにおける吸光度と、同じく各試験溶液を対照液と混合した場合の550nmにおける吸光度との差を測定し、DPPHラジカルの残存量を確認した。
また、同時にコントロールとして製造例1のシャクヤクの花部の抽出液の代わりに、30%1,3−ブチレングリコール溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られるDPPHラジカル残存率に対する各試料添加時のDPPHラジカル残存率の相対値を求め、DPPHラジカル残存率とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照としてビタミンE(終濃度5μM)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
[表3]
[試験方法]
0.2Mトリス塩酸緩衝液50μL、1mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)二ナトリウム溶液20μL、0.75mMニトロブルーテトラゾリウムクロリド(NBT)溶液10μL、1mMキサンチン溶液20μL、0.06U/mLキサンチンオキシターゼ溶液50μL、製造例1のシャクヤクの花部の抽出液50μL(その終濃度が1.0%及び2.0%になるように調製した抽出液)を混合して試料溶液を調製した。この試料溶液を37℃、5分間インキュベートし、スーパーオキシドを発生させた。そして、NBTがスーパーオキシドによって還元されて生成するホルマザン量を560nmにおける吸光度を測定した。
また、コントロールとして製造例1のシャクヤクの花部の抽出液の代わりに、30%1,3−ブチレングリコール溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られる吸光度に対する各試料添加時の吸光度の相対値を求め、スーパーオキシド残存率(%)とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として、スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)8.75units/mLを添加した場合についても、同様の試験を行った。
[試験方法]
<調製溶液>
(1)10容量%NCS含有イーグルMEM
(2)細胞溶解液
(3)基質溶液
<調製方法>
(1)イーグルMEM培地(日水製薬(株)製)9.4gに蒸留水1Lを加え、それぞれ終濃度10容量%NCS(仔牛血清)、1.4重量%炭酸水素ナトリウム、0.03重量%グルタミン酸を添加して調製する。
(2)1mM PMSF、1% TritonX−100を100mM
Tris−HCl(pH 8.0)に溶解した。
(3)スクシニル-L-アラニル-L-アラニル-L-アラニン-p-ニトロアニリド(Suc-Ala-Ala-Ala-pNA)を100mM
Tris−HCl(pH 8.0)に溶解した。
<測定方法>
製造例1のシャクヤクの花部の抽出液を5.0%の濃度(溶液として)となるよう希釈して試料溶液に調製した。なお、試料無添加(コントロール)として、5%PBS(−)溶液を使用した。
正常ヒト皮膚由来線維芽細胞(NB1RGB)を10容量%NCS含有イーグルMEMにて1×105個/mLに調製し、96穴マイクロプレートに100μLずつ播種して、5%炭酸ガス、飽和水蒸気下、37℃で培養した。48時間後、培養液を除去し、PBS(−)で細胞を1回洗浄した後、細胞溶解液を50μL添加し室温で10分間静置することにより細胞を溶解し、これを酵素液として用いた。96穴マイクロプレートに、酵素液50μLに対して製造例1のシャクヤクの花部の抽出液を精製水で希釈してその終濃度が5.0%になるように調製した試料溶液を50μL添加し、さらに、基質溶液を100μLずつ添加後、37℃で、暗所で2時間反応させた。ブランクとしては酵素液の代わりに細胞溶解液を試験に供した。その後、プレートリーダーで、405nmにおける反応後の吸光度を測定した。各吸光度の測定値から以下の式(1)を用いて、エラスターゼ活性率を算出した。なお、陽性対照として、0.037%のEDTAを試料溶液として用いて同様の試験を行った。
式(1):線維芽細胞エラスターゼ活性率(%)= (Es-Esb)/(Ec-Ecb)×100
Ec;コントロール(PBS(-))の試験区の吸光度
Ecb;コントロール(PBS(-))のブランク区の吸光度
Es;試料溶液を添加した試験区の吸光度
Esb;試料溶液を添加したブランク区の吸光度
試験例5の結果を表5に示す。
[表5]
0.25ng/mLのIL−1αを用いて、MMP(マトリックスメタロプロテアーゼ)の合成誘導した線維芽細胞(NB1RGB)の培養上清をコラゲナーゼ酵素液として用いた。コラゲナーゼ酵素液に5μg/mLトリプシンを添加し30分間37℃で反応させ活性化処理を行い、50μg/mLトリプシンインヒビターで反応を停止後の液をコラゲナーゼ活性化酵素液とした。コラゲナーゼ活性の測定は、I型コラゲナーゼアッセイキット(株式会社プライマリーセル製品)を応用して測定を行った。マイクロチューブに上記コラゲナーゼ活性化酵素液を50μL、FITCラベルされたI型コラーゲン基質液50μL、その終濃度が5.0%になるように調製した製造例1のシャクヤクの花部の抽出液50μLを添加した。37℃で30分間反応度、反応停止液300μLを添加し、遠心分離により未反応のコラーゲン基質を沈殿させ、上清の蛍光強度(Ex=485,Em=520)を測定した。
上記シャクヤクの花部の抽出液の代わりに精製水を添加した区(対照)についても同様の操作を行い、この対照に対する蛍光強度の相対値をコラゲナーゼ活性率(%)とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、上記試料溶液の代わりに陽性対照として1mMのEDTAを添加した場合についても、同様の試験を行った。
0.25ng/mLIL−1αを用いて、MMP(マトリックスメタロプロテアーゼ)の合成誘導した線維芽細胞(NB1RGB)の培養上清をゼラチナーゼ酵素液として用いた。ゼラチナーゼ酵素液に5μg/mLトリプシンを添加し30分間37℃で反応させ活性化処理を行い、50μg/mLトリプシンインヒビターで反応を停止後の液をゼラチナーゼ活性化酵素液とした。96ウェルマイクロプレートにゼラチナーゼ活性化酵素液120μL、製造例1のシャクヤクの花部の抽出液をその終濃度が5.0%になるように調製した溶液10μL添加した後、1μg/mL
基質溶液(MOCAc-pro-leu-gly-leu-a2pr(DNP) -ala-arg-NH2,ペプチド研究所)を20μL添加し、初期の蛍光強度 (Ex=355nm、Em=460nm) を測定してから30分間室温で反応させた。30分後の蛍光強度から初期値を引いた増加量を求めた。上記シャクヤクの花部の抽出液の代わりに精製水を添加した区(対照)についても同様の操作を行い、この対照に対する蛍光強度の増加量の相対値をゼラチナーゼ活性率(%)とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として1mMのEDTAを添加した場合についても、同様の試験を行った。
Claims (3)
- ボタン科(Paeoniaceae)ボタン属(Paeonia)に属するシャクヤク又はボタンの花部から水と1,3−ブチレングリコールの混合溶媒により得られ、エラスターゼ活性抑制作用、コラゲナーゼ活性抑制作用及びゼラチナーゼ活性抑制作用を有する抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗老化用化粧料。
- ボタン科(Paeoniaceae)ボタン属(Paeonia)に属するシャクヤク又はボタンの花部から水と1,3−ブチレングリコールの混合溶媒により得られ、チロシナーゼ活性抑制作用を有する抽出物を有効成分とすることを特徴とする美白用化粧料。
- ボタン科(Paeoniaceae)ボタン属(Paeonia)に属するシャクヤク又はボタンの花部から水と1,3−ブチレングリコールの混合溶媒により得られる溶媒により抽出する工程を含む化粧料の製造方法であって、混合溶媒の水と1,3−ブチレングリコールの比が、1:1〜20:1であることを特徴とする化粧料の製造方法。
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