JP3056502B2 - ヒトパピローマウイルス１６型のｅ７タンパク質上の免疫原性領域 - Google Patents
ヒトパピローマウイルス１６型のｅ７タンパク質上の免疫原性領域Info
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Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、一つの免疫反応性領域はHPV16ゲノムのヌ
クレオチド位置595の３′に位置しており、他の一つはH
PV16ゲノムのヌクレオチド位置667の３′に位置してい
る、ヒトパピローマウイルス16型（HPV16）E7タンパク
質上の二つの免疫原性領域に関する。
クレオチド位置595の３′に位置しており、他の一つはH
PV16ゲノムのヌクレオチド位置667の３′に位置してい
る、ヒトパピローマウイルス16型（HPV16）E7タンパク
質上の二つの免疫原性領域に関する。
従来技術 パピローマウイルスは、培養中では増殖することがで
きない。したがって、HPV DNAの診断補助物としての使
用、発現産物の獲得、その抗原としての使用、抗体の単
離、および対応する診断補助物の調製のためには、遺伝
子工学的方法が前提条件となる。
きない。したがって、HPV DNAの診断補助物としての使
用、発現産物の獲得、その抗原としての使用、抗体の単
離、および対応する診断補助物の調製のためには、遺伝
子工学的方法が前提条件となる。
Duerstら（Proc.Natl.Acad.Sci.USA80、3813-3815、1
983）は、新しい型のヒトパピローマウイルス（HPV）を
記述しており、彼らはこれをHPV16と称している。この
ウイルスのDNA配列およびゲノム構成は、Seedorfら（Vi
rology145、181-185、1985）によって再生産されてい
る。
983）は、新しい型のヒトパピローマウイルス（HPV）を
記述しており、彼らはこれをHPV16と称している。この
ウイルスのDNA配列およびゲノム構成は、Seedorfら（Vi
rology145、181-185、1985）によって再生産されてい
る。
SmotkinおよびWettstein（Proc.Natl.Acad.Sci.USA8
3、4680-4684、1986）は、E7転写物を、CaSki細胞系お
よび主にプラスミドとしてHPV16DNAを含む他の頸部悪性
腫瘍中で最も頻繁に得られるHPV転写物として同定し
た。Seedorfら（ENBO J.6、139-144、1987）は、次い
で、E7タンパク質は、組み入れられたかたちまたはプラ
スミドとしてHPV16を含むこれら細胞系における最も頻
繁に得られるウイルス性HPV16タンパク質であることを
示した。
3、4680-4684、1986）は、E7転写物を、CaSki細胞系お
よび主にプラスミドとしてHPV16DNAを含む他の頸部悪性
腫瘍中で最も頻繁に得られるHPV転写物として同定し
た。Seedorfら（ENBO J.6、139-144、1987）は、次い
で、E7タンパク質は、組み入れられたかたちまたはプラ
スミドとしてHPV16を含むこれら細胞系における最も頻
繁に得られるウイルス性HPV16タンパク質であることを
示した。
発明の具体的説明 E7タンパク質は、加えて、形質転換された表現型（ph
enotype）の維持に関与するようにみえる。さらに、E7
タンパク質に対する抗体は、頸部悪性腫瘍を有する患者
に共通している。HPV16E7タンパク質またはこれに対す
る抗体の検出は、したがって、診断において興味深い。
enotype）の維持に関与するようにみえる。さらに、E7
タンパク質に対する抗体は、頸部悪性腫瘍を有する患者
に共通している。HPV16E7タンパク質またはこれに対す
る抗体の検出は、したがって、診断において興味深い。
ウサギのHPV16E7に対するポリクローナル抗血清を用
いる、クローニングされたHPV16DNAのショットガン発現
バンクの分析において、二つの免疫反応性領域がE7タン
パク質中に見出された。最初の領域はE7のＮ−末端部分
にあって、異なる大ききの四つのファージクローンによ
って表される。
いる、クローニングされたHPV16DNAのショットガン発現
バンクの分析において、二つの免疫反応性領域がE7タン
パク質中に見出された。最初の領域はE7のＮ−末端部分
にあって、異なる大ききの四つのファージクローンによ
って表される。
これらの中で、クローンの５′末端は、HPV16ゲノム
上のヌクレオチド位置595に対応する。
上のヌクレオチド位置595に対応する。
相応じて、四つのクラスのアミノ酸配列は以下の通り
である。
である。
HPV16E7の第二の免疫反応性領域は、HPV16ゲノム上の
ヌクレオチド位置667に位置していた。
ヌクレオチド位置667に位置していた。
これは以下の17個のアミノ酸を含む。
したがって、本発明は、上記の二つの免疫反応性領
域、および診断、治療のためのおよび医薬物またはワク
チンとしてのこれらの使用、に関する。
域、および診断、治療のためのおよび医薬物またはワク
チンとしてのこれらの使用、に関する。
本発明は、次の諸例および特許請求の範囲にさらに記
載される通りである。
載される通りである。
例： 1. HPV16ゲノムのショットガン発現バンクの調製 細菌性プラスミドベクターsp65中でクローニングされ
たHPV16DNAを、超音波せん断およびそれに続くDNaseI処
理によって平均断片サイズが約100塩基対（bp）になる
ように変換させた。
たHPV16DNAを、超音波せん断およびそれに続くDNaseI処
理によって平均断片サイズが約100塩基対（bp）になる
ように変換させた。
これら断片の末端を、T4DNAポリメラーゼおよび大腸
菌DNAリガーゼを用いて埋填した。ファージ発現ベクタ
ーfd-tet-J6をPvuIIで切断して、断片の平滑連結（blun
t ligationing）を行った。fd-tet-J6は、バクテリオフ
ァージfdに由来しており、G.P.Smith（Science228、131
5-1317、1985）によって記述された。
菌DNAリガーゼを用いて埋填した。ファージ発現ベクタ
ーfd-tet-J6をPvuIIで切断して、断片の平滑連結（blun
t ligationing）を行った。fd-tet-J6は、バクテリオフ
ァージfdに由来しており、G.P.Smith（Science228、131
5-1317、1985）によって記述された。
2. 免疫原性反応の検出 組換えファージを大腸菌K91上にプレートした後に、
ニトロセルロースフィルター上のレプリカについて免疫
反応性ファージを特異血清を用いて調べた。200個の組
換え体が抗血清と反応した。そのうち、30個をDNA配列
分析によってさらに調べた。
ニトロセルロースフィルター上のレプリカについて免疫
反応性ファージを特異血清を用いて調べた。200個の組
換え体が抗血清と反応した。そのうち、30個をDNA配列
分析によってさらに調べた。
次の結果が得られた。
1.全ての組換え体は、E7−特異性配列を含む。
2.二つの免疫原性領域がE7タンパク質中に見出された。
最初の領域は、25個の重複クローン（overlapping clon
es）によって同定された。
最初の領域は、25個の重複クローン（overlapping clon
es）によって同定された。
これらの25個のクローンは四つのクラスに分けること
ができた。
ができた。
これらの中で、クローンの５′末端は、HPV16ゲノム
上のヌクレオチド位置595に対応する。
上のヌクレオチド位置595に対応する。
相応じて、四つのクラスのアミノ酸配列は以下の通り
である。
である。
この領域の最少の大ききは、したがって、８個のアミ
ノ酸である。モノクローナル抗体はクラスＩおよびIIと
しか反応しなかったが、ポリクローナル抗血清は四つの
クラス全てと反応したことから、クラスＩまたはIIの抗
原上に位置する少なくとも二つの異なるエピトープがあ
る。
ノ酸である。モノクローナル抗体はクラスＩおよびIIと
しか反応しなかったが、ポリクローナル抗血清は四つの
クラス全てと反応したことから、クラスＩまたはIIの抗
原上に位置する少なくとも二つの異なるエピトープがあ
る。
クラスIIのアミノ酸配列に対応する合成オリゴペプチ
ド（met-leu-asp-leu-gln-pro-glu-thr-thr-asp-leu-ty
r）を、ELISAに用いて、HPV16E7に対する上記のポリク
ローナルウサギ血清との明瞭な反応を示した。
ド（met-leu-asp-leu-gln-pro-glu-thr-thr-asp-leu-ty
r）を、ELISAに用いて、HPV16E7に対する上記のポリク
ローナルウサギ血清との明瞭な反応を示した。
17個のアミノ酸の第二の免疫反応性領域が５個のクロ
ーン中に見出され、これはHPV16ゲノム上のヌクレオチ
ド位置667に位置していた。
ーン中に見出され、これはHPV16ゲノム上のヌクレオチ
ド位置667に位置していた。
これは以下の17個のアミノ酸に対応する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ // Ａ６１Ｋ 39/42 Ａ６１Ｋ 39/42 Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 マルティン、ミュラー ドイツ連邦共和国ハイデンベルク、フザ レンシュトラーセ、14 (56)参考文献 特開 昭63−183600（ＪＰ，Ａ) Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，1985，Ｖｏｌ. 145，Ｎｏ．１，ｐ．181−185 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 C07K 7/06 C07K 7/08 A61K 39/395 ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (4)
- 【請求項１】下記のアミノ酸配列の一つを有してなる、
ヒトパピローマウイルス16型E7タンパク質の免疫原性領
域。 - 【請求項２】請求項１に記載のアミノ酸配列の少なくと
も一つを含んでなる、ヒトパピローマウイルス16型E7タ
ンパク質に対する特異的抗体を検出するための診断補助
物。 - 【請求項３】請求項１に記載の免疫原性領域の少なくと
も一つに対する、ポリクローナルまたはモノクローナル
抗体。 - 【請求項４】請求項３に記載のポリクローナルまたはモ
ノクローナル抗体を含んでなる、診断補助物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3907721.7 | 1989-03-10 | ||
| DE3907721A DE3907721A1 (de) | 1989-03-10 | 1989-03-10 | Immunogene regionen auf dem e7-protein des humanen papillomvierus typ 16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02289600A JPH02289600A (ja) | 1990-11-29 |
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|---|---|---|---|
| JP2059801A Expired - Fee Related JP3056502B2 (ja) | 1989-03-10 | 1990-03-09 | ヒトパピローマウイルス１６型のｅ７タンパク質上の免疫原性領域 |
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| Country | Link |
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| EP (1) | EP0386734B1 (ja) |
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| KR (1) | KR0164215B1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US5932412A (en) * | 1990-05-11 | 1999-08-03 | Euro-Diagnostica Ab | Synthetic peptides in human papillomaviruses 1, 5, 6, 8, 11, 16, 18, 31, 33 and 56, useful in immunoassay for diagnostic purposes |
| SE9001705D0 (sv) * | 1990-05-11 | 1990-05-11 | Medscand Ab | Saett foer diagnostik av virusbaerande tumoerer genom immunoassay |
| US6183745B1 (en) | 1990-12-12 | 2001-02-06 | The University Of Queensland | Subunit papilloma virus vaccine and peptides for use therein |
| DE69232963T2 (de) * | 1991-07-13 | 2004-03-04 | Dade Behring Marburg Gmbh | Verwendung von HPV-16 E6 und E7-Gen gewonnen Peptiden für den diagnostischen Zweck |
| IL105554A (en) * | 1992-05-05 | 1999-08-17 | Univ Leiden | Peptides of human papillomavirus for use in preparations elicit a human T cell response |
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| DE19819476C1 (de) * | 1998-04-30 | 2000-01-05 | Deutsches Krebsforsch | Polypeptid mit immunogenen Eigenschaften und veränderten biologischen Funktionen eines Proteins |
| FR2781158B1 (fr) * | 1998-07-15 | 2002-12-13 | Vacs Internat | Nouvelles proteines modifiees immunogenes non immunosuppressives, leur procede de preparation et leurs applications |
| DE19925235A1 (de) | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Medigene Ag | Zytotoxische T-Zellepitope des Papillomavirus L1-Proteins und ihre Verwendung in Diagnostik und Therapie |
| DE19925199A1 (de) * | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Medigene Ag | Zytotoxische T-Zellepitope des Papillomavirus L1-Proteins und ihre Verwendung in Diagnostik und Therapie |
| US6641994B2 (en) | 1999-08-25 | 2003-11-04 | Pharmacia & Upjohn Company | Methods of identifying anti-viral agents |
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| US20050100928A1 (en) * | 1999-09-16 | 2005-05-12 | Zycos Inc., A Delaware Corporation | Nucleic acids encoding polyepitope polypeptides |
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| GB0018050D0 (en) * | 2000-07-21 | 2000-09-13 | Norchip As | Detection of human papillomavirus mRNA |
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