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JP2963540B2 - 薬剤移送用ポリマーミクロ粒子 - Google Patents

薬剤移送用ポリマーミクロ粒子

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JP2963540B2
JP2963540B2 JP8501825A JP50182595A JP2963540B2 JP 2963540 B2 JP2963540 B2 JP 2963540B2 JP 8501825 A JP8501825 A JP 8501825A JP 50182595 A JP50182595 A JP 50182595A JP 2963540 B2 JP2963540 B2 JP 2963540B2
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microparticles
polymer
water
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microparticle
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JP8501825A
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ミン−クン イエ，
アラン ジェラルド オーサー クームベス，
ポール ジョージ ジェンキンス，
スンタリー スチュアート デイビス，
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DANBAIOSHISUTO YUU KEE Ltd
Original Assignee
DANBAIOSHISUTO YUU KEE Ltd
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、活性剤を投与するためのポリマーミクロ粒
子（polymer microparticles）およびこのような粒子の
製造方法に関する。
背景 非経口的および経口的アクセスを含む種々の経路によ
って、薬剤およびワクチンの形態の治療剤を体に移送す
ることが可能である。バイオテクノロジーによる生成物
は特殊な部類の物質である。今日、製薬学者は、ペプチ
ドおよびタンパク質、炭水化物、オリゴヌクレオチドお
よびDNAの形態の治療活性物質を移送するという問題に
直面している。
ワクチン製剤、およびペプチドおよびタンパク質の形
態で、治療活性物質を移送するためにコロイド粒子を使
用することには、かなりの関心が寄せられている。血清
アルブミンビーズ、ポリアクリルデンプンのミクロ粒
子、ポリアクリルアミドのミクロ粒子、ポリ（ブチル−
２−シアノクリラート）のナノ粒子（nanoparticle
s）、およびポリラクチド−コ−グリコリド（polylacti
de co−glycolide）のミクロ粒子［フローレンス（Flor
ence）ら］を含む種々の生物分解性ポリマーが治療用キ
ャリアとして研究されている。アルブミンとポリアクリ
ルデンプンの場合、キャリア並びにそこに捕捉される特
定の抗原に抗体反応が誘発されていた。また、ポリアク
リルアミドおよびポリ（ブチル−２−シアノクリラー
ト）は、毒性の問題から、抗原移送システムとしてこれ
らのポリマーを使用することは制限されている。
再吸収可能なポリラクチドとポリグリコリドのコポリ
マーをベースとしたミクロ粒子は、薬剤移送用に広く研
究されており［ワッツ（Watts）ら］、バイオテクノロ
ジーによる生成物（特に、ペプチド類およびタンパク質
類）の移送用としての利用が増加しつつある［クオン
（Kwong）ら、およびワン（Wang）ら］。これらの合成
ポリエステル類は、ヒトへの使用が認可されており、25
年間安全であったという歴史を有する。注入されたポリ
（DL−ラクチド−コ−グリコリド）（PLG）のミクロ粒
子類は、良好な生物学的適合性を示し、最小の炎症反応
しか誘発しない。ラクチドのコポリマー類、例えばPLG
は、放徐（controlled release）薬剤システムおよびワ
クチンの開発のための有用な候補である。それらは、エ
ステル結合の加水分解により生物分解され、正常体の構
成要素に乳酸とグリコール酸をもたらす。ラクチドコポ
リマーの分解速度は、分子量、ラクチド：グリコリドの
比、およびポリマーの結晶度を含む種々の要因により調
節され、数週間から１年を越えて変化させることが可能
であり、よって、ワクチンの放出速度および時間を調節
することは可能である。よって、ブースター投与量を正
常に投与した場合、キャリアは、免疫処置後に、ある間
隔で捕捉抗原を放出するようにすることができる。
PLGを使用する非常に多くのマイクロカプセル化技
術、例えば、被膜鋳造（film casting）、成形、スプレ
ー乾燥、および押し出し成形が開発されているが、最も
良く知られているものは、溶媒蒸発法［フォング（Fon
g）ら、およびボドマイアー（Bodmeier）ら］である。
水中油型（O/W）型エマルション／溶媒蒸発法は、プロ
ゲステロンのような疎水性物質を捕捉するために、いく
つかのグループによって用いられて成功しているが、水
性連続相内への混入（partition）のため、ゆっくりと
水に溶解する薬剤および水に溶解する薬剤に対しては、
カプセル化効率が劣る。これが、薬剤およびワクチン投
与の主たる問題である。
PLGミクロ粒子へのタンパク質のカプセル化は、乾燥
タンパク質を先ずPLG溶液に分散させる油中油型（O/O）
およびO/W型法を用いて過去に試みがなされている［ア
ロンソ（Alonso）ら］。O/O法では、分散液は、安定化
剤としてスパン（Span）85を含有するシリコーン油にお
いて乳化される。続いて、石油エーテルを添加して溶媒
を抽出し、ミクロ粒子を沈殿させる。タンパク質の充填
は理論上の最大値に近いが、粒子径は大きくなる（約50
0μｍ）傾向にあり、粒子の形状はふぞろいになる。リ
ーララサミー（Leelarasamee）らは、PLA溶液にヒドロ
コルチゾンが懸濁した液を鉱物性油流中にゆっくりと注
入する溶媒分離法を開示している。関連した方法とし
て、ワダらは、アセトニトリル／水の混合物を使用し
て、乳酸オリゴマーのミクロ粒子に親水性の薬剤をカプ
セル化し、第１のエマルションを形成した。続いて、こ
れを綿実油中で乳化し、加熱により溶媒を除去した。
O/W法では、ポリマー溶液中にタンパク質が懸濁した
懸濁液を、非混和性の界面活性剤水溶液で乳化させ、ポ
リマーを沈殿させ、ミクロ粒子を硬化させる。溶媒は蒸
発により除去される。10μｍより小さいミクロ粒子が製
造され得るが、水性連続相に分かれるため、タンパク質
が、水の存在下で調製されたミクロ粒子に非効率的にカ
プセル化される。また、タンパク質がポリマー溶液に親
液性化された粉末として分散している場合、タンパク質
の放出は、より早く、再現性に劣ることが知見されてい
る（アロンソら）。
PLGミクロ粒子中への水溶性化合物の充填性を改良す
るために、オガワらは、水中油中水型（W/O/W）溶媒蒸
発法を使用して、PLGミクロ粒子に水溶性ペプチドを捕
捉させた。以来、W/O/W型法が、タンパク質およびペプ
チドをカプセル化するための主要方法の一つとなってい
る［ジェフェリー（Jeffery）ら］。この二重エマルシ
ョン−溶媒蒸発法では、タンパク質の水溶液をポリマー
溶液と乳化させ、第１の油中水型のエマルション（W/
O）を形成する。続いて、これを、界面活性剤水溶液で
乳化し（W/O/W）、ポリマーを沈殿させ、ミクロ粒子を
硬化させて、蒸発により溶媒を除去する。W/O/W法は、
単一投与ワクチンをつくって、患者の不従順、ワクチン
投与および保管の問題を潜在的に克服することを目的と
して、DL.PLA放徐ミクロ粒子にジフテリアトキソイドを
［シング（Singh）ら］、PLAおよびDL.PLAに破傷風トキ
ソイドを［ラグバンシ（Raghubanshi）ら］、カプセル
化するために使用された。
最近の出版物に、W/O/W法を使用してPLG粒子にオボア
ルブミンを導入することが記載されている［ウチダおよ
びゴトー,Biol.Pharm.Bull.17（1994）1272−1276］。
粒子は、１〜14μｍの範囲内の大きさである。著者は、
充填効率が低い（８−20％）と報告している。ミクロ粒
子中のオボアルブミンの含有量は、0.08〜20％であると
予想された。
皮下に投入されるミクロ粒子は、それらの大きさによ
り、食菌されるか、または皮下組織に残存している［ビ
ッシャー（Visscher）ら］。10μｍ未満のミクロ粒子に
抗原を包含させることは、大食細胞を目標とする場合に
は、興味があるものである［エルドリッジ（Eldridge）
ら］。いくつかの研究［エルドリッチら、ジェンキンス
（Jenkins）ら、およびジャニ（Jani）ら］には、経口
投与後、胃腸管でのミクロ粒子の吸収は、その大きさに
かなり依存し、0.5〜1.0μｍのミクロ粒子が、もっとも
よく吸収されることが示されている。よって、粒子径を
容易に調節する能力が所望されている。
驚くべきことに、生物分解性ポリマーと水溶性ポリマ
ーとの混合物を含有するミクロ粒子により、活性剤の充
填が大幅に改善され、活性剤に対する放出時間プロフィ
ールを直線的なものとすることができることを見いだし
た。さらに、混和性のある有機溶媒が使用される乳化／
溶媒抽出法を用いてポリマーミクロ粒子を調製すると、
特に活性剤が水溶性の場合、活性剤が第２のエマルショ
ンの連続相内に混入することを著しく低減することが見
いだされた。
よって、本発明は、生物分解性ポリマーと水溶性ポリ
マーとの混合物、および活性剤を含有するミクロ粒子を
提供するものである。ミクロ粒子という用語は、ここで
はナノ粒子（nanoparticles）を含むものとして用い
る。ミクロ粒子は、好ましくは、10nm〜200μｍの範囲
の大きさを有する。
水溶性ポリマーは、好ましくは、水とジクロロメタン
（DCM）の両方に溶解するものである。
我々は、「生物分解性ポリマー」という用語を、正常
に代謝経路に含まれることが知られている低分子量の化
合物に分解可能な重合系を含むものとして使用する。我
々はまた、その用語が、系の全体（integrity）および
マクロ分子の場合はそれ自体が、影響され（affecte
d）、作用場所から移動するが体からは必ずしも排除さ
れない断片（fragments）もしくは他の分解副産物を生
じるように生物学的環境（ミリュー）に存在する（atta
ched）重合系を含むものとして使用する。
生物分解性ポリマーの水溶性ポリマーに対する比は、
99.9:1.0〜10:90で、より好ましくは90:10〜10:90の範
囲内である。
ミクロ粒子を製造するのに適切な生物分解性ポリマー
類は、ポリエステル類、例えば、ポリラクチド、ポリグ
リコリド、ラクチドとグリコリドのコポリマー、ポリヒ
ドロキシブチラート、ポリカプロラクトン、乳酸とラク
トンのコポリマー、乳酸とPEGのコポリマー、α−ヒド
ロキシ酸とα−アミノ酸のコポリマー（ポリデプシペプ
チド）、ポリ無水物類（polyanhydrides）、ポリオルト
エステル類、ポリホスファゼン類、ヒドロキシブチラー
トおよびヒドロキシバレアートのコポリマー、ポリ（エ
チレンカルボナート）、コポリ（エチレンカルボナー
ト）、ポリエチレンテレフタラート、またはこれらのポ
リマーの混合物である。
好ましい再吸収可能／生物分解性ポリマーは、ラクチ
ドのホモポリマー類、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（D,
L−ラクチド）、およびラクチドとグリコリドのコポリ
マー、例えば50:50のポリ（DL−ラクチド−コ−グリコ
リド）（PLG）である。PLGは、好ましくは、５−100kD
の範囲内の分子量を有する。
ポリ（エチレングリコール）（PEG）は、生物分解性
ポリマーと混合するための好ましい水溶性ポリマーであ
るが、他の適切な水溶性ポリマーとしては、ポリ（オキ
シエチレンオキシド）（PEO）、ポリ（オキシエチレ
ン）−ポリ（オキシプロピレン）［PEO−PPO］のブロッ
クコポリマー、例えば、トリ−ブロックPEO−PPO−PEO
コポリマー［ポロキサマー類（Poloxamers）、プルロニ
クス類（Pluronics）］、およびエチレンジアミンにプ
ロピレンオキシドおよびエチレンオキシドを連続して付
加して誘導されるテトラ−官能性ブロックコポリマー
［ポロキサミン類（Poloxamines）、テトロニクス類（T
etronics）］、ポリ（乳酸）とのPEGのコポリマー、ポ
リ（乳酸）のオリゴマー類、ラクチド類、PEGとアミノ
酸のコポリマー、PEGの多糖類との共役体類（conjugate
s）、例えば40000MWのデキストランとポリオキシエチレ
ン−グリコール−モノメチル−エーテル等から生成さ
れ、デュバル（Duval）らによって、炭水化物のポリマ
ー（Carbohydrate Polymers）、15、（1991）、233−24
2に記載されている共役体、ヌーシ（Nucci）らによって
薬剤移送レビューの進歩（Advances in Drug Delivery
Review）、６、（1981）、113−151に記載されているよ
うな、タンパク質とのPEGの共役体、またはリー（Rhe
e）らによって、ポリ（エチンレングリコール）の化学
［Poly（ethylene glycol）chemistry］、生物工学およ
び生物医学的適用（Biotechnical and Biomedical Appl
ication）、エド．ジェイ．ミルトン．ハリス．（Ed.J.
Milton Harris,）プレナム（Plenum）出版（1992）に記
載されているコラーゲンとのPEGの共役体、もしくは、
カトレ エヌ．ブイ．（Katre N.V）によって、ポリエ
チレングリコールおよび他のポリマーとタンパク質との
共役．薬剤投与の進歩、10、91−114（1993）に記載さ
れているコロニー性の刺激因子（CSF−１）とのPEGの共
役体類、生物活性剤類、例えば酵素、ビタミン類、ステ
ロイド類、および薬剤類、例えば５−フルオロ−ウラシ
ルとPEGの共役体類が含まれる。
PEGの分子量は、100−100,000の範囲内である。PEOの
分子量は、有益には、100,000−500,000の範囲内であ
る。
さらに、発明は、 a. 第１の有機溶媒には、活性剤の懸濁液（suspensio
n）、油中水型（W/O）エマルション、または水溶液を作
製し； b. 第２の有機溶媒に形成されたポリマー溶液と、活性
剤の懸濁液、W/O）エマルション、または水溶液を混合
し； c. 第１および第２の有機溶媒と混和性があり、ポリマ
ー用の溶媒ではない第３の有機溶媒を含有する連続相
と、工程ｂで作製されたエマルションを混合する； 工程を具備する活性剤含有ポリマーミクロ粒子を形成す
る方法を提供するものである。
連続相により、ポリマーは沈殿し、第１および第２の
溶媒が抽出され、ミクロスフェアが硬化する。
ついで、通常の方法により、ミクロ粒子を収集、洗
浄、および貯蔵する。
第１および第２の有機溶媒は、同一でも異なっていて
もよく、好ましくは、ジクロロメタン（DCM）、クロロ
ホルム、アセトン、酢酸エチル、ギ酸エチル、またはそ
れらの混合物から選択される。
乾燥した活性剤は、第２の有機溶媒中のポリマー溶液
に直接添加することができる。よって、活性剤の懸濁液
または油中水型のエマルションを調製するために使用さ
れる溶媒は、既に、溶解したポリマーを含有している。
第３の有機溶媒は、好ましくは、１〜６の炭素原子を
有する低級アルコールであり、より好ましくは、メタノ
ールまたはエタノールである。
第１の有機溶媒は、好ましくは、安定化剤を含有す
る。適切な安定化剤は、ソルビタンエステル類、スパン
60（モノステアリン酸ソルビタン）、グルセリル−モノ
エステル類、例えば、モノステアリン酸グリセリル、お
よびノニル−フェノール−エトキシラート類、または第
１の有機溶媒に溶解する任意の他の安定化剤を含むもの
である。連続相は、好ましくは、界面活性剤、例えば、
ポリビニル−ピロリドン（PVP）、または第３の有機溶
媒に溶解する任意の他の界面活性剤を含むものである。
PLGミクロ粒子の調製における乳化／溶媒蒸発法は、
一般的に、非混和性の液体を用いて、続いて硬化して、
ポリマーの沈殿と溶媒の除去によってミクロ粒子を形成
する連続相中に、ポリマー溶液の液滴を形成することに
基づく。例外は、フェシー（Fessi）らのナノ沈殿（nan
oprecipitation）法であり、その方法では、PLGのアセ
トン溶液を水に添加することにより球形粒子を製造す
る。
しかしながら、これに対して本発明の方法は、混和性
のある有機相、例えばDCMおよびメタノールを使用し
て、ミクロ粒子を作製する。この方法により、活性剤の
捕捉度合いが著しく向上し、連続相への活性剤の分配を
大きく低減させることが見いだされている。
ここでは、「活性剤」なる用語は、治療、製薬、薬
理、診断、化粧品、および予防用の薬剤を含み、任意の
目的で、ヒトまたは動物の体に投与されうる任意の薬剤
を含むものとして用いる。また、この用語は、放出を調
整して、植物に投与されうる任意の薬剤、例えば、除草
剤、殺虫殺そ剤および肥料を含む農薬などを含むものと
しても使用される。
活性剤は、好ましくは水溶性であり、ここでは、水溶
性を、水に可溶で、少なくとも1mg/mlの溶液となる物質
を指すものと定義する。
活性剤は、好ましくは、ポリペプチド、ペプチドまた
はタンパク質、炭水化物、またはオリゴヌクレオチド、
例えばDNAである。
適切な活性剤としては、成長ホルモン、インシュリ
ン、インターフェロン類（アルファ、ベータ、ガン
マ）、エリトロポエチン、コロニー性の刺激因子、副甲
状腺ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、カルシ
トニン、ヘパリン、ソマトスタチン、および種々のそれ
らの類似体（analogues）を含むものである。
また、活性剤は、ワクチンに使用される抗原であって
もよく、該ワクチンは、細菌、ウィルス、および寄生虫
を源して得られた、または合成方法により製造された、
糖タンパク質、タンパク質、ポリペプチドを含む。我々
は、抗原という用語を、投与すると、あらゆる種類の抗
体反応を引き起こすあらゆる物質を含むものとして使用
する。このような抗原は、注射により、または種々の粘
膜部位（鼻、口、膣、直腸、結腸）に投与することがで
きる。
アレルゲンおよび自己免疫疾患の治療用のワクチン
は、従来よりよく開示されている。例えば、自己免疫疾
患においては、必須因子を徐々に投与することが有益で
あると提案されている。このような因子には、糖尿病の
治療用のインシュリン、および慢性関節リウマチの治療
用のコラーゲンが含まれる。
ミクロ粒子は、幅広い活性剤を投与するのに有用であ
り、投与される薬剤に応じて、様々な経路で投与するこ
とができる。ミクロ粒子は、筋肉であれ、静脈であれ、
皮下であれ、関節であれ、または腹膜内であれ、注射に
適切である。また、ミクロ粒子は、注射、または針を使
用しない注入システムにより、皮膚の真皮層または表皮
層に投与するのにも適切である。さらに、ミクロ粒子
は、粘膜、例えば、鼻、胃腸管、結腸、膣、または直腸
への投与にも適しており、あるいは眼にも投与できる。
ミクロ粒子は、好ましくは、10nm〜200μｍの範囲内
の大きさを有する特定のミクロ粒子に対して選ばれる大
きさは、投与される活性剤、および意図される投与経路
に依存する。
経口投与用の粒子は、0.5〜5.0μｍの範囲内の大きさ
が好都合である。皮下投与用の粒子は、100μｍ未満が
適切な大きさである。脾臓、肝臓、および骨髄への管外
投与用のミクロ粒子は、好ましくは、100nm未満の大き
さである。
非経口投与用のミクロ粒子は、200μｍ未満、好まし
くは150μｍ未満の大きさが好都合である。動脈内の化
学的塞栓治療に適切なミクロ粒子は、好ましくは100μ
ｍまでの大きさであり、肺毛管を目標とする薬剤用のミ
クロ粒子は、７μｍの範囲の大きさを有するのが好都合
である。
当業者によく知られている方法でプロセスパラメータ
ーを変えることにより、所望の大きさの粒子を得ること
ができる。例えば、使用する特定のポリマーの種類とそ
の分子量を変えると、ポリマーの大きさが変わり、ポリ
マーの分子量を増加させれば、一般的に、粒子径も大き
くなる。また、ポリマー濃度を増加させれば、粒子径も
大きくなる。
本発明のミクロ粒子は、幅広い活性剤を移送するのに
有用な放徐システムを提供する。特に顕著な利点とし
て、本発明の粒子は、活性剤の放出プロフィールが、線
形またはゼロオーダーであることが見いだされている。
このような放出プロフィールは、特に、ある生物活性
剤、例えばタンパク質の放出をコントロールするのに有
利である。
さらに、本発明のミクロ粒子において、生物分解性お
よび水溶性ポリマーの混合物を使用することにより、線
形放出プロフィールを得ながら、粒子に導入される活性
剤の量を著しく増加させることができることが見いださ
れた。この特性の組み合わせは、生物分解性ポリマーの
みを含有する従来の粒子では達成できなかった。
従来の乳化／溶媒蒸発（W/O/W）法により製造され
た、従来の再吸収可能なPLG粒子のタンパク質含有量
は、第１のエマルション中のタンパク質の量を増加させ
ることにより増加させることができる。しかしながら、
タンパク質が表面に位置しているため、放出テストの最
初の24時間でタンパク質の著しい「バースト（burs
t）」放出が生じる。さらに、放出パターンは、しばし
ば非線形であり、迅速に放出される相（「バースト効
果」）と、それに続くほとんどまたは全くタンパク質が
放出されない遅延相によって特徴づけられる［コーヘン
（Cohen）らの製薬的研究（Pharmaceutical Researc
h）、８、1991、713−720（1991）］。他の例として、
再吸収可能なミクロ粒子から放出されるタンパク質の累
積量は、時間の平方根に対して線形関係を示し、水分で
満たされたチャンネル網状構造を通過するタンパク質の
拡散放出によってコントロールされるピプロセスを示し
ている［ホラ（Hora）らの製薬的研究、７、1190−1194
（1990）］。
本発明のミクロ粒子には、活性剤の放出による著しい
バースト放出とこれに続く、放出がほとんどまたは全く
見られない遅延期間がない。逆に、本発明のミクロ粒子
は、この問題を低減したばかりか、活性剤の線形的に放
出することが見いだされている。
好ましい実施態様において、PEGは水に即座に溶解す
るので、PLG:PEGを混合したミクロ粒子の再吸収速度
は、PEGがミクロ粒子から浸出して、非常に多孔性のマ
トリックスを残すため、混合されていないPLG系と比べ
て、大幅に変化することが期待される。タンパク質の放
出速度の微調節は、PEG特性と含有量を適切に変えるこ
とにより可能である。
また、本発明の方法において、連続相に使用される第
３の有機溶媒が、粒子内の活性剤の充填の増加を助長し
ていることが見いだされている。加えて、第１の有機溶
媒に、安定化剤、例えば、スパン60を含有せしめると
が、本発明のミクロ粒子での“バースト”効果を減少さ
せる一因となっていることが見いだされている。
好ましい実施態様において、第３の有機溶媒としてメ
タノールを使用する方法により作製された、PEGとPLGの
混合物を含有するミクロ粒子においては、活性タンパク
質剤の充填が著しく増加すること、in vitroで、37℃
で、30日以上インキュベータしても、タンパク質の放出
パターンがゼロオーダーであることが見いだされてい
る。
本発明の好ましい実施態様を、以下の実施例におい
て、添付図を参照しながら例証する。
図1,PLG:PEG溶液を使用して調製したPLGミクロ粒子か
らのOVAの累積放出プロフィールを示す； 図2,PLG:プルロニック溶液を使用して調製したPLGミ
クロ粒子からのOVAの累積放出プロフィールを示す； 図3,PLG:PEG溶液を使用して調製したPLGミクロ粒子か
らのインシュリンの累積放出プロフィールを示す。
材料： 50:50のポリ（DL−ラクチド−コ−グリコリド）、
（分子量9000,RG503）、75:25のポリ（DL−ラクチド−
コ−グリコリド）、（分子量17000,RG755）、85:15のポ
リ（DL−ラクチド−コ−グリコリド）、（分子量54000,
RG858）、ポリ（D,L−ラクチド）：（PLC、分子量33200
0,R208）は独国、インゲルハイム（Ingelheim）のボー
エリンガー（Boehringer）インゲルハイム社から供給さ
れた。ポリビニルアルコール（PVA）（13−23000,87−8
9％が加水分解）、およびポリ（ビニルピロリドン）（P
VP）（分子量40000）は、英国、ドーセットのアルドリ
ッチ ケミカル（Aldrich Chemical）社から得た。ジク
ロロメタン（DCM）、およびメタノール（HPLCグレー
ド）は、英国、ラフバロウのフィソンズ（Fisons）社か
ら供給された。オボアルブミン（OVA）（グレード
Ｖ）、インシュリン、黄体形成ホルモン放出ホルモン
（LHRH）、ポリエチレングリコール（分子量8000）、お
よびスパン60は、英国、ドーセットのシグマ ケミカル
（Sigma Chemical）社から得た。プルロニック−ポリエ
チレンオキシド−ポリプロピレンオキシドのブロックコ
ポリマーのL44、L121、L122、L123およびF127は、英
国、N.J.のパールシッパニー（Parsippany）のBASF社か
ら得た。全の材料は供給状態で使用した。
以下の実施例に記載されている調製物は、特に規定し
ている場合を除いて、全て50:50のPLGコポリマー（RG50
3）を使用して調製した。
実施例1.ミクロ粒子の基本調製物 シルバーサン（Silverson）ホモジナイザー［英国の
チェスハン バックス（Chesham Bucks）のシルバーサ
ン機］を使用して、スパン60のDCM溶液（2ml、0.5％w/
v）を、オボアルブミン（OVA）水溶液（1ml、30mg/ml）
と乳化し、第１のエマルションを得た。ついで、このエ
マルションと、5mlのポリマー溶液（PLGのジクロロメタ
ン溶液 ６％6w/v）とを、高速で２分間混合し、エマル
ション安定化剤として10％w/vのPVPを含有するメタノー
ル（20ml）、連続相溶液と４分間乳化させた。得られた
W/O/O型のエマルションを周囲条件下で３−４時間撹拌
し、DCMを抽出した。ミクロ粒子を、遠心分離および蒸
留水への再懸濁を合計で３回行うことによって洗浄し、
ついで、凍結乾燥した。最終生成物を４℃より低い温度
でデシケーターにて保存した。
実施例2.第１のエマルション中のスパンの濃度の効果 シルバーサンホモジナイザーを使用して、スパン60の
DCM溶液（2ml）（0.1〜20.0％w/v）と、OVA水溶液（1m
l、30mg/ml）とを乳化し、第１のエマルションを得た。
ついで、このエマルションと、ポリマー溶液（PLGのジ
クロロメタン溶液 ６％w/v）とを、高速で乳化し、エ
マルション安定化剤として10％w/vのPVPを含有するメタ
ノール、連続相溶液と乳化させた。得られたW/O/O型の
エマルションを周囲条件下で３−４時間撹拌し、DCMを
抽出した。ミクロ粒子を、上述したように、洗浄、凍結
および貯蔵した。
ミクロ粒子のOVA充填の定量：正確に重量測定した、３
−5mgの凍結乾燥したミクロ粒子を、イカ ヴィブラッ
クス（Ika Vibrax）−VXRシェーカーで、一晩中振とう
させて、５％w/vのSDSを含有する1.0ml、0.1MのNaOHで
処理した。サンプルを遠心分離し、BCAタンパク質のミ
クロ検定（microassay）を使用し、５％w/vのSDSを含有
する0.1MのNaOH中で調製した標準OVA系列と対比して、
上澄み中のOVA濃度を定量した。各サンプルは重複して
検定した。
粒子径：粒子径は、マルバーン（Malvern）2600D レー
ザー寸法測定器を使用し、レーザー回析により測定し
た。平均粒子径は容積平均直径（vmd）としてμｍで表
した。
ミクロ粒子調製物中のスパンは、表層タンパク質のバ
ースト効果を低減させるのに効果的であるこどが見いだ
され、粒子径およびタンパク質の充填量に影響を及ぼす
（表１）。第１のエマルションに、安定化剤としてスパ
ン60を使用した場合、捕捉されるタンパク質は、３％の
スパン濃度で、約16％とOVAのピーク値になるまで、界
面活性剤の濃度の増加に伴って増加し、ついで、界面活
性剤濃度が３〜20％と増加するに伴い減少していった。
平均粒子径は、10〜20μｍであり、最も小さな粒子は、
スパン60を含有しない場合に得られた。
実施例3.PLG/PEG8000の溶液比の影響 スパン60のDCM溶液（3.0％、2ml）と、OVA水溶液（1m
l、30mg/ml）とを乳化し、第１のエマルションを得た。
ついで、得られたw/o型エマルションを、PEG8000のDCM
溶液とPLGを異なる比率で混合したものを含有するポリ
マー溶液（６％w/v）と、高速で乳化させた。ついで、
このエマルションを、エマルション安定化剤として10％
w/vのPVPを含有するメタノール、連続相溶液と混合し
た。得られたw/o/o型のエマルションを周囲条件下で３
−４時間撹拌し、DCMを抽出した。ミクロ粒子を、上述
したように、洗浄、凍結および貯蔵した。
第１のエマルションに界面活性剤として３％のスパン
60を有するものは、捕捉されるタンパク質と、PLG/PEG8
000溶液比との間に、明らかな相関関係があることが見
いだされた（表２）。溶液比1:3の場合に、捕捉される
タンパク質が最も多かった（72％）。捕捉されるタンパ
ク質（％w/v）は,0〜1:3においては溶液比の増加に伴い
増加するが、溶液比が1:4〜1:5に増加すると、減少し
た。平均粒子径は７〜18μｍの間で、PLG:PEG溶液比に
より変化し、最も小さい粒子径（6.6μｍ）は、ポリマ
ー溶液比が1:1の場合に得られた。
実施例4.連続相中の安定化剤濃度の影響 スパン60のDCM溶液（0.5％、2ml）を、OVA水溶液（1m
l、30mg/ml）で乳化し、第１のエマルションを得た。つ
いで、得られたエマルションを、ポリマー溶液（６％w/
v 1/5 PLG/PEG8000のDCM溶液）とともに、高速で乳化
し、さらに、エマルション安定化剤として５〜25％w/v
のPVPを含有するメタノール、連続相溶液と乳化した、
得られたw/o/o型のエマルションを周囲条件下で３−４
時間撹拌し、DCMを抽出した。ミクロ粒子を、上述した
ように、洗浄、凍結および貯蔵した。
平均粒子径は10〜20μｍの間で変化した（表３）。タ
ンパク質の充填量は、30〜36％とほぼ一定であった（表
１）。捕捉OVAにおいて、５〜25％のPVP濃度は大きな影
響はないことは明らかである。
実施例5.PLG/PEG溶液を使用して製造されたミクロ粒子
の特性における試薬容量の影響 ポリマー溶液の容量の増加に伴うミクロ粒子の特性に
おける影響。OVA/スパン／ポリマー溶液／連続相の溶液
比（1/2/5/20）を一定に維持した。スパン60のDCM溶液
（0.5％）（２、４および8ml）を、30mg/mlのOVA水溶液
（１、２および4ml）で乳化した。ついで、得られたエ
マルションを、ポリマー溶液（６％w/v PLG/PEG8000:1
/5のDCM溶液（５、10、20ml）とともに、高速で乳化
し、さらに、エマルション安定化剤として15％w/vのPVP
を含有するメタノール、連続相溶液（20、40、80ml）と
乳化した。得られたw/o/o型のエマルションを周囲条件
下で３−４時間撹拌し、DCMを抽出した。ミクロ粒子
を、上述したように、洗浄、凍結および貯蔵した。
ポリマー溶液［OVA/スパン／ポリマー溶液／連続相の
溶液比は一定（1/2/5/20）］の容量の増加に伴うミクロ
粒子の特性における影響を表４に示す。捕捉されるタン
パク質は、容量の増加に伴い、31.6％w/vから47.8％w/v
へと増加するが、平均粒子径は、容量の増加に伴い、1
6.7から2.1μｍへと減少した。
実施例6.タンパク質放出ミクロ粒子 in−vitroにおけるミクロ粒子からのオボアルブミンの
放出：各々2.0mlのPBSに分散され、および20mg（正確に
重量測定）の凍結乾燥されたミクロ粒子を含有する一連
のチューブを、時折振とうしつつ、37℃の水槽に保持し
た。定期的にミクロ粒子のサンプルを遠心分離（3800rp
m、５分間）し、上澄みを除去して、上澄み中のタンパ
ク質含有量を、BCAタンパク質検定を使用して分析し
た。新鮮なPBSをミクロ粒子に添加し、インキュベート
し続けた。放出パターンは、インキュベート時間に対す
る累積放出（％）、およびインキュベート時間に対する
ミクロ粒子のμgOVA/mgの両方について算出した。
本発明の方法で製造されたミクロ粒子からのタンパク
質放出特性を図１に示す。累積放出量（μg/mg）と時間
との関係が示されている。放出パターンが、ゼロオーダ
ーの放出パターンに従っているのがわかる。本発明によ
り調製された混合PLG/PEGミクロ粒子は、従来技術に記
載されている標準的な方法［ワン（Wang）ら］で製造さ
れたPLGミクロ粒子と比較して、タンパク質の放出が、
少なくとも４倍に増加する結果となっている。
実施例7.ラクチドポリマーとPEGの混合溶液から調製さ
れたミクロ粒子 ミクロ粒子特性におけるラクチドポリマーの種類の影響 PEGと混合したラクチド：グリコリド比1:2の異なるポ
リマーを使用した以外は、実施例３に記載されている方
法により、OVA−充填ミクロ粒子を調製した。ミクロ粒
子の特性を表５に示す。タンパク質の充填レベルの最大
値は約40％であり、ポリ（D,L−ラクチド）ポリマーとP
EG8000を使用した場合に達成された。最も小さい粒子径
は、75:25のPLGを使用した場合に得られた。よって、ミ
クロ粒子調製物において、遅延再吸収相として、異なる
生物分解性ポリマーを使用することにより、タンパク質
充填量およびミクロ粒子径を変えることができることが
わかった。
実施例8.ミクロ粒子の特性に対するPLG:プルロニック12
7溶液組成の影響 シルバーサンホモジナイザーを使用して、スパン60の
DCM溶液（2ml、0.5％w/v）と、OVA水溶液（1ml、30mg/m
l）とを乳化し、第１のエマルションを得た。ついで、
得られたエマルションと、PLGとプルロニックF127を種
々の比:3:1、1:1、1:2および1:3でDCMに共溶解（co−di
ssolving）させた得られた、６％（w/v）のポリマー溶
液とを、高速で混合した。さらに、得られたw/o型のエ
マルションを、エマルション安定化剤として15％w/vのP
VPを含有するメタノール、連続相溶液と乳化させ、得ら
れたw/o/o型のエマルションを周囲条件下で３−４時
間、マグネットスターラーを使用して撹拌し、DCMを抽
出した。ミクロ粒子を、実施例１に記載したようにし
て、洗浄、凍結および貯蔵した。
サンプルは、出発ポリマー溶液におけるPLGのプルロ
ニックに対する比によって明細書に示している。
ミクロ粒子の特性に対するPLG:プルロニックF127溶液組
成の影響を表６に示す。PLGにプルロニックF127を混合
した結果、PLGミクロ粒子におけるタンパク質の充填量
が改善される。最大充填レベルは約30％に達し（1:2 P
LG:プルロニックF127）、これは、PLGから得られた、同
様の大きさのミクロ粒子（16％）のほぼ２倍である。捕
捉されるタンパク質とPLG:プルロニックF127比との間に
は、明確な関係がないことは明らかである（表６）。ミ
クロ粒子は出発溶液におけるプルロニックF127の比が増
加するに伴い、17.4μｍ（3:1）から6.4μｍ（1:3）へ
と減少していることがわかる。1:3を越えるPLG:プルロ
ニックF127の比では、ミクロ粒子調製物にならなかっ
た。
実施例9.ミクロ粒子の特性に対する試薬容量の影響 （PLG−プルロニックの混合溶液） OVA/スパン／ポリマー溶液／連続相の溶液の容積比
（1/2/5/20）を一定に維持した。スパン60のDCM溶液
（0.5％（w/v））、（２、４または8ml）と、OVA水溶液
（１、２または4ml）乳化した。ついで、得られたエマ
ルションと、ポリマー溶液（６％w/v,1:1 PLG:プルロ
ニックF127のDCM溶液）（５、10または20ml）とを、高
速で混合し、さらに、エマルション安定化剤として15％
w/vのPVPを含有するメタノール、連続相溶液（20、40ま
たは80ml）と乳化した。得られたw/o/o型のエマルショ
ンを周囲条件下で３−４時間撹拌し、DCMを抽出した。
ミクロ粒子を、実施例１に記載しているよに、洗浄、凍
結および貯蔵した。
捕捉されるタンパク質は、一定の容量比で、試薬の容
量の増加による影響を受けないことがわかった（表
７）。ミクロ粒子径は試薬の容量増加に伴い減少する傾
向にあり、粒子径の分布は改善されている。
試薬の容量を増加させて製造した３−４μｍの小さい
ミクロ粒子は、静脈投与、および経口用ワクチン調製物
に適している。経口用ワクチン調製物の場合、粒子径が
５μｍ未満であるならば、リンパ系組織に連結している
腸管のパイエル板とミクロ粒子との相互作用を高める。
実施例10.ラクチドポリマーとプルロニックの混合溶液
から調製されたミクロ粒子 ミクロ粒子の特性に対するラクチドポリマーの種類の影
響 プルロニックF127とラクチド：グリコリド比1:2で混
合した異なるポリマーを使用した以外は、実施例８に記
載されている方法により、OVA−充填ミクロ粒子を調製
した。
タンパク質の充填レベルの最大値は約40％であり、7
5:25のPLGコポリマーを使用して得られることがわかっ
た（表８）。粒子径は、コポリマーのラクチドが含有量
の増加に伴い増加することがわかった。ポリ（D,L−ラ
クチド）を使用すると、ミクロ粒子が調製されなかっ
た。
実施例11.PLGとプルロニックの混合溶液から調製された
ミクロ粒子 ミクロ粒子の特性に対するプルロニックの種類の影響 プルロニックPEO−PPOコポリマー、例えばプルロニッ
クL121のアジュバント効果が、ある研究者グループ［ハ
ンター（Hunter）ら］により報告されている。また、よ
り短いPPO、またはより長い親水性のPEO鎖を有するPEO
−PPOコポリマーを使用したいくつかの他の調製物がア
ジュバント活性を示した。よって、PLGとプルロニック
の混合物から調製されたミクロ粒子ワクチンにより、ア
ジュバント性（adjuvanticity）が改善されうる。
PLGと、1:2の混合溶液における異なる種類のプルロニ
ックPEO−PPOコポリマーを使用し、ポリマー溶液の濃度
を３％まで減少させた以外は、実施例８に記載されてい
る方法により、OVA−充填ミクロ粒子を調製した。
ミクロ粒子の特性に対するプルロニックの種類の影響
を表９に示す。類似した3.9−6.2μｍの大きさのミクロ
粒子におけるOVAの充填レベルは約40％であり、これは
決まって達成された。ミクロ粒子径とプルロニックの種
類との間には明確な関係がないことが明らかになった
（表９）。OVAの高充填は、より低いポリマー溶液含有
量（すなわち、６％より３％）を使用することで部分的
に得られる。
実施例12.PLG:プルロニックの混合溶液から調製された
ミクロ粒子からのOVAの放出 時間に対する種々のミクロ粒子調製物からのOVAの累
積放出量を図３および図４に表した。キャリアマトリッ
クスの製造のため。PLGとプルロニックF127との混合溶
液により得られた放出量と放出パターンの変化が示され
ている。PLG:プルロニックが1:2および1:3のミクロ粒子
の累積放出量は、37℃で、PBSにおける、インキューベ
ート１ヶ月後、それぞれ、100μgOVA/mgミクロ粒子、お
よび110μgOVA/mgミクロ粒子と、同様の量であった。曲
線整合プログラム（curve fitting programmes）（PCNO
NLIN）の結果、1:2のPLG:プルロニック、および1:3のPL
G:プルロニック系からのタンパク質の放出は、ヒグチの
モデルに一致している（放出量が時間の平方根に依存）
ことが示唆されている。拡散速度定数（Ｄ）は、それぞ
れ19.8および20.4（μg/mg.日0.5）であった。
3:1および1:1のPLG:プルロニックのミクロ粒子の場
合、タンパク質の放出パターンは似ており、それぞれ、
1.3および0.97（μg/mg.日）の放出速度定数（k0）で、
線形のゼロオーダーの放出パターンに従っている。
PLG:プルロニックのミクロ粒子の特徴である迅速およ
び効率的なタンパク質の移送は、タンパク質／ポリマー
の相互作用を変化させるキャリア内部のプルロニックに
より変性した内表面によって容易になることが期待され
る。ミクロ粒子のマトリックスの特性、例えば、多孔性
の成長傾向、および薬剤の放出パターンは、出発溶液に
導入されるプルロニックコポリマーの分子特性および量
を調節することによりコントロール可能であること予想
される。タンパク質の放出速度、および放出した累積量
は、混合物中の親水性のプルロニックコポリマーの量の
増加、およびプルロニックコポリマーの分子量の減少に
伴い、増加すると予想される。
実施例13.インシュリン充填ミクロ粒子 スパン60のDCM溶液（2ml、0.5％w/v）と、インシュリ
ン水溶液（1ml、50mg/ミリ）とを乳化し、第１のエマル
ションを得た。ついで、得られたエマルションを、PLG
とPEG8000を1:2の比でDCMに共溶解させて得られた、5ml
の６％（w/v）のポリマー溶液とともに、高速で混合し
た。さらに、得られたw/o型のエマルションを、エマル
ション安定化剤として10％w/vのPVPを含有するメタノー
ル、連続相溶液20mlと混合した。得られたw/o/o型のエ
マルションを周囲条件下で３−４時間、マグネットスタ
ーラーを使用して撹拌し、DCMを抽出した。ミクロ粒子
を、遠心分離および蒸留水への再懸濁を全部で３回行う
ことによって洗浄し、ついで、凍結乾燥した。最終生成
物を４℃より低い温度で、デシケーターにて保存した。
HPLCによるミクロ粒子に充填されたインシュリンの定量 定量の手順：リチロスフェア（Lichrospher）100 RP−
18 ５μｍの粒子径［メルク［Merck）］（0.46×15c
m）のカラム、LKB 2150 HPLC 溶媒分配用ポンプ、ギ
ルソン ダィリュター（Gilson dilutor）モデル401サ
ンプルインジェクター、およびLKB 2152 HPLCコント
ローラーからなるクロマトグラフシステムを使用した。
ピークの検出は、LKB2151可変波長検出器を使用し、220
nmでのUVの吸光度によった。定量（ピーク面積）とクロ
マトグラムの記録は、HP 3394A 積分器を使用して行
った。
移動相は、使用前にヘリウムで脱気され、0.06％のTF
Aを有する、32:68のアセトニトリル：水である。2.0ml/
minの流量が室温で用いられ、インシュリンのピーク出
現までの保持時間は６分であった。注入するサンプルの
容量は50μｌに設定し、同じサンプルで３回定量した。
インシュリンの最小検出可能濃度は、１μg/mlであり、
インシュリンのピーク面積と濃度（１〜100μg/mlの
間）の検量線に対する回帰関係は0.997を越えた。
ミクロ粒子からのインシュリンの抽出：インシュリンを
次の方法により、ミクロ粒子から抽出した。10mgのイン
シュリンを充填したミクロ粒子を、1mlのNN−ジメチル
アセトアミド:1,メチル−２−ピロリジノン（比は1:1）
に溶解し、1.0mlのアセトニトリルに添加した、混合物
をシェーカー機を使用し、３分間、機械的に振とうし、
2mlの0.1Nのリン酸塩バッファー（pH7.4）を添加し、チ
ューブの中身を3500rpmで10分間、遠心分離した。上澄
みを、13600rpmで５分間、再度遠心分離し、ついで、こ
の溶液の50μｌをHPLCで分析した。各々の同じサンプル
３回定量し、インシュリン濃度を、検量線と比較するこ
とにより決定した。
ミクロ粒子からのインシュリンのIn−vitroにおける放
出：正確に測定した各々約20mgの凍結乾燥されたミクロ
粒子を含有する一連のチューブを、0.01％のメチルセル
ロースを含有する2.0mlのPBSに分散し、時折振とうしつ
つ、37℃の水槽に保った。定期的にミクロ粒子のサンプ
ルを遠心分離（3600rpm、５分間）し、上澄みを集め
て、13600rpmで５分間、再度遠心分離した。この溶液の
50μｌを、HPLCカラムに注入した。新鮮なPBSをミクロ
粒子に添加し、インキュベートし続けた。放出パターン
は、インキュベート時間に対する累積放出（％w/v）、
およびインキュベート時間に対する累積放出（μｇイン
シュリン/mgミクロ粒子）の両方について算出した。
ミクロ粒子中の初期インシュリン含有量と、表面にあ
るインシュリンを除去するため、４時間室温にて、PBS
溶液中で洗浄した後のミクロ粒子中のインシュリン含有
量を表10に示す。初期のインシュリンの充填レベルは約
17％w/vであるが、洗浄後の充填レベルは約５％に減少
していた。このように、最初からミクロ粒子にある多く
のインシュリンは、表面に位置している。
37℃でPBS中にて１ヶ月間インキュベートした後の、
洗浄されたミクロ粒子から放出されたインシュリンの累
積量は、約30μｇインシュリン/mgミクロ粒子（図３）
であった。表面に位置するインシュリンの著しい「バー
スト効果」は、放出テストの最初の３日間で、洗浄され
たミクロ粒子から生じ、インシュリン含有量の約47％に
達した。３日後、インシュリンの放出は均一になり、そ
の放出速度は、0.6μg/mg/日であった。
従来より、ミクロ粒子中にインシュリンを捕捉する試
みがなされれている。コンらは、ポリ乳酸粒子に、イン
シュリンを充填した調製物を記載しており、このものの
大きさは、100μｍより大きいものであった。バースト
放出効果は、０℃で最初の１時間の間に生じ、インシュ
リン充填の50％より多かった。残っていたインシュリン
の放出は遅くなった。粒子の作用の持続時間は、数時間
から数日と色々であった。従来技術において記載されて
いるこれらの粒子のインシュリンの含有量は、洗浄前
で、５％w/w未満であった。この値は、洗浄後、２％w/w
あるいはそれ以下に落ちた。
実施例14.LHRH−充填ミクロ粒子 調製 スパン60のDCM溶液（2ml、0.5％w/v）と、LHRH水溶液
（1ml、50mg/ml）とを乳化し、第１のエマルションを得
た。ついで、このようにして得られたエマルションを、
PLGとPEG8000を1:2の比でDCMに共溶解させて得られた、
5mlの６％（w/v）のポリマー溶液とともに、高速で混合
した。さらに、得られたw/o型のエマルションを、エマ
ルション安定化剤として10％w/vのPVPを含有するメタノ
ール、連続相溶液20mlと混合した。得られたw/o/o型の
エマルションを周囲条件下で３−４時間、マグネットス
ターラーを使用して撹拌し、DCMを抽出した。ミクロ粒
子を、遠心分離および蒸留水への再懸濁を全部で３回行
うことによって洗浄し、ついで、凍結乾燥した。最終生
成物を４℃より低い温度で、デシケーターにて保存し
た。
実施例13に記載されている定量手順により、ミクロ粒
子に充填されているLHRHを定量した。
ミクロ粒子中のLHRH含有量と対応するミクロ粒子の大
きさを、表11に示す。
実施例15.DNA−充填ミクロ粒子 スパン60のDCM溶液（2ml、0.5％w/v）と、DNA水溶液
（1mgのプラスミド PT 7T3、400μｌの水、200μｌの
エタノール、400μｌのTE（トリス/EDTA）pH8.5）とを
乳化した。このエマルションを、5mlのポリマーDCM溶液
（６％w/v、1:1のPLG:PEG）と混合し、エマルション安
定化剤として10％w/vのPVPを含有するメタノール（20m
l）、連続相溶液（20ml）で、４分間乳化した。得られ
たW/O/O型のエマルションを周囲条件下で３−４時間撹
拌し、DCMを抽出した。ミクロ粒子を、遠心分離および
蒸留水への再懸濁によって洗浄し、ついで、凍結乾燥
し、４℃より低い温度で、デシケーターにて保存した。
走査型電子顕微鏡を使用してミクロ粒子の調査を行っ
たところ、ほぼ球形のミクロ粒子の２つの集団が現れ、
１つは10〜40μｍの範囲内の直径を有するもの、二つ目
は、平均直径が約100μｍのものであった。
ミクロ粒子は、クロロホロム／水で処理し、DNAを抽
出し、DNAを、アガロースゲルを用いた電気泳動により
検出した。UVを透過させてゲル上にバンドを現出させ、
ミクロ粒子サンプルにDNAが存在することを確認した。
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───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 クームベス， アラン ジェラルド オ ーサー イギリス国 ＮＧ２ ７ＦＰ ノッティ ンガム ウエスト ブリッジフォード スタンホーム ドライブ 21 (72)発明者 ジェンキンス， ポール ジョージ イギリス国 ＳＫ10 ２ＵＬ マックレ スフィールド ティザーリントン プラ ウマンズ ウェイ ９ (72)発明者 デイビス， スンタリー スチュアート イギリス国 ＮＧ７ １ＢＡ ノッティ ンガム ザ パーク カヴァンディッシ ュ クレセント ノース 19 (56)参考文献 特開 平４−283510（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 9/16 A61K 47/34 A61K 9/52

Claims (26)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】生物分解性ポリマーと水溶性ポリマーの混
    合物および活性剤を含有するミクロ粒子において、時間
    に対して線形の活性剤放出プロフィールを示すことを特
    徴とするミクロ粒子。
  2. 【請求項２】生物分解性ポリマー、水溶性ポリマーおよ
    び活性剤の混合物を含有するミクロ粒子において、水溶
    性ポリマーが、ブロックの一つとして、PEGを含有する
    ブロックコポリマーであるミクロ粒子。
  3. 【請求項３】水溶性ポリマーが、ブロックの一つとし
    て、PEGを含有するブロックコポリマーである請求項１
    に記載のミクロ粒子。
  4. 【請求項４】ミクロ粒子が10nm〜200μｍの範囲内の粒
    子径を有する請求項１ないし３のいずれか１項に記載の
    ミクロ粒子。
  5. 【請求項５】生物分解性ポリマーが、ラクチドホモポリ
    マー、またはラクチドとグリコリドのコポリマーである
    請求項１ないし４のいずれか１項に記載のミクロ粒子。
  6. 【請求項６】生物分解性ポリマーが、５−100kDの範囲
    内の分子量を有するポリ（ラクチド−コ−グリコリド）
    である請求項５に記載のミクロ粒子。
  7. 【請求項７】活性剤が、ペプチド、ポリペプチド、また
    はタンパク質である請求項１ないし６のいずれか１項に
    記載のミクロ粒子。
  8. 【請求項８】活性剤が、DNA、ワクチン、アレルゲン、
    または抗原である請求項１ないし６のいずれか１項に記
    載のミクロ粒子。
  9. 【請求項９】活性剤が、インシュリン、LHRF、またはそ
    の類似体、成長ホルモン、インターフェロン、コロニー
    性の刺激因子、ソマトスタチン、またはその類似体であ
    る請求項７に記載のミクロ粒子。
  10. 【請求項１０】水溶性ポリマーに対する生物分解性ポリ
    マーの比が、99.9:1.0〜10:90の範囲内にある請求項１
    ないし９のいずれか１項に記載のミクロ粒子。
  11. 【請求項１１】筋内、静脈、皮下、関節、または腹膜内
    注射により投与するのに適した請求項１ないし10のいず
    れか１項に記載のミクロ粒子。
  12. 【請求項１２】注射、または針なし注入システムによ
    り、皮膚の真皮層または表皮層に投与するのに適した請
    求項１ないし10のいずれか１項に記載のミクロ粒子。
  13. 【請求項１３】眼、鼻、口腔、胃腸管、または膣腔に投
    与するのに適した請求項１ないし10のいずれか１項に記
    載のミクロ粒子。
  14. 【請求項１４】植物に投与するのに適した請求項１ない
    し10のいずれか１項に記載のミクロ粒子。
  15. 【請求項１５】a. 第１の有機溶媒に、活性剤の懸濁
    液、油中水型（W/O）エマルション、または水溶液を作
    製し； b. 第２の有機溶媒に形成されたポリマー溶液と、活性
    剤の懸濁液、W/Oエマルション、または水溶液を混合
    し； c. 第１および第２の有機溶媒と混和性があり、ポリマ
    ー用の溶媒ではない第３の有機溶媒を含有する連続相
    と、工程ｂで作製されたエマルションを混合する； 工程を具備する、活性剤を含有するポリマーミクロ粒子
    を形成する方法。
  16. 【請求項１６】活性剤の懸濁液または油中水型エマルシ
    ョンを製造するために使用する溶媒が溶解したポリマー
    を含有し、工程ｂが省略される請求項15に記載の方法。
  17. 【請求項１７】ポリマー溶液が、生物分解性ポリマーと
    水溶性ポリマーの混合物を含有する請求項15または16に
    記載の方法。
  18. 【請求項１８】第３の有機溶媒が、１−６の炭素原子を
    有する低級アルコールである請求項15ないし17のいずれ
    か１項に記載の方法。
  19. 【請求項１９】第３の有機溶媒がメタノールである請求
    項18に記載の方法。
  20. 【請求項２０】第１および第２の有機溶媒が、同一かま
    たは異なっており、ジクロロメタン（DCM）、クロロホ
    ルム、アセトン、酢酸エチル、ギ酸エチル、またはこれ
    らの混和性のある混合物から選択される請求項15ないし
    19のいずれか１項に記載の方法。
  21. 【請求項２１】第１の有機溶媒が安定化剤を含有する請
    求項15ないし20のいずれか１項に記載の方法。
  22. 【請求項２２】連続相が界面活性剤を含有する請求項15
    ないし21のいずれか１項に記載の方法。
  23. 【請求項２３】ヒトまたはその他の動物に非経口的また
    は経口的に活性剤を投与するために使用される、生物分
    解性ポリマーと水溶性ポリマーの混合物、および活性剤
    を含有するミクロ粒子からなる製剤。
  24. 【請求項２４】請求項15ないし22のいずれか１項に記載
    の方法により得られたミクロ粒子。
  25. 【請求項２５】請求項15ないし22のいずれか１項に記載
    の方法により得ることができ、時間に対して線形である
    活性剤放出プロフィールを示す、生物分解性ポリマー、
    水溶性ポリマーおよび活性剤の混合物を含有するミクロ
    粒子。
  26. 【請求項２６】請求項15ないし22のいずれか１項に記載
    の方法により得ることができ、水溶性ポリマーが、ブロ
    ックの一つとして、PEGを含有するブロックコポリマー
    である、生物分解性ポリマー、水溶性ポリマーおよび活
    性剤の混合物を含有するミクロ粒子。
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