JP2740775B2 - 新規シクロスポリン類 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は新規シクロスポリン
類、その医薬品としての用途およびそれらを含む医薬組
成物、およびその製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】シクロスポリン類(Ｃyclosporins)は、
構造上特徴ある、環状のポリ−Ｎ−メチル化されたウン
デカペプチド系の、一般に薬学的、特に免疫抑制、抗炎
症および／または駆虫活性を持つ一群の化合物を含む。
最初に単離されたシクロスポリンは天然に生ずる真菌の
代謝物、「シクロスポリン」(Ｃiclosporin)または「シク
ロスポリン」(Ｃyclosporin)であって、(本明細書では、
これらを「シクロスポリン」で表わす)シクロスポリンＡ
(cyclosporinＡ)としても知られ、サンディミュン(商
標、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮ)またはサンジミューン(商標、
ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ)の登録商標名のもとに商業的に
入手し得る。「シクロスポリン」は下式(Ａ)

【化５】 [式中、ＭｅＢｍｔはＮ−メチル−(４Ｒ)−４−ブタ−
２Ｅ−エン−１−イル−４−メチル−(Ｌ)スレオニル残
基(下式Ｂ)

【化６】 (式中、−ｘ−ｙは−ＣＨ＝ＣＨ−(トランス)である)を
表わす]で示されるシクロスポリンである。

【０００３】「シクロスポリン」の最初の発見以来、多数
の天然に存在するシクロスポリン類が単離され、同定さ
れ、またさらに全合成または半合成手段、もしくは修飾
培養技術の適用によって多数の非天然シクロスポリン類
が製造された。したがって今日シクロスポリン系統群に
含まれるものは多数存在し、例えば天然に存在するシク
ロスポリンＡからＺまで[トレーバーら、１、ヘルベチ
カ・キミカ・アクタ(Ｈelv.Ｃhim.Ａcta)、６０巻、１
２４７〜１２５５頁(１９７７)；トレーバーら、２、ヘ
ルベチカ・キミカ・アクタ、６５巻、１６５５〜ｌ６６
７頁(１９８２年)、コベルら、ヨーロピアン・ジャーナ
ル・オブ・アプライド・マイクロバイオロジー(Ｅurop.
Ｊ.Ａpplied Ｍicrobiology and Ｂiotechnology)、
１４巻、２７３〜２４０頁(１９８２年)およびフォン・
ワートバーグら、プログレス・イン・アラージー(Ｐrog
ress in Ａllergy)、３８巻、２８〜４５頁(１９８６
年)参照]、およびさまざまな非天然シクロスポリン誘導
体および人工または合成シクロスポリン類、例えばジヒ
ドロシクロスポリン類[ＭｅＢｍｔ残基(前記式Ｂ)の−
ｘ−ｙ−部分を飽和して−ｘ−ｙ−＝−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
とする]、誘導体化したシクロスポリン類[例えばＭｅＢ
ｍｔ残基の３'−０−原子をアシル化し、あるいは３−
位のサルコシル残基のα炭素原子にさらに置換基を導入
する]、ＭｅＢｍｔ残基が異性体形態で存在するシクロ
スポリン類[例えばＭｅＢｍｔ残基の６'および７'位と
の立体配置がトランスではなくシスである]、および例
えばＲ.ウエグナ−によって開発されたシクロスポリン
製造のための全合成方法を用いることによってペプチド
配列内の特定位置に変異アミノ酸を挿入したシクロスポ
リン類[例えばトレーバーら、１、トレーバーら、２お
よびコベルら(前掲)、米国特許第４１０８９８５号、同
第４２２０６４１号、同第４２８８４３１号、４５５４
３５１号、同第４３９６５４２号、同第４７９８８２３
号、ヨーロッパ特許公開第３４５６７Ａ号、同第５６７
８２Ａ号、同第３００７８４Ａ号、同第３００７８５Ａ
号、同第４１４６３２Ａ号、国際特許公開Ｗ０８６／０
２０８０号、英国特許公開第２２０６１１９号および第
２２０７６７８号、ウエグナー、１、トランスプランテ
ーション・プロシーディングズ(Ｔranspl.Ｐroc.)、１
５巻、増刊１号、２２３０頁(１９８３年)、ウエグナ
ー、２、アンゲバンテ・ヒェミー・インターナショナル
・エディション(Ａngew.Ｃhem.Ｉnt.Ｅd.)、２４巻、７
７頁(１９８５年)およびウエグナー、３、プログレス・
イン・ザ・ケミストリー・オブ・オーガニック・ナチュ
ラル・プロダクツ(Ｐrogress in the Ｃhemistry
Ｏrganic Ｎatural Ｐroducts)、５０巻、１２３頁
(１９８６年)]等が挙げられる。

【０００４】このように今日シクロスポリン類に含まれ
る系統群は事実極めて多数に及び、例えば[Ｔｈｒ]²−
[Ｖａｌ]²−[Ｎｖａ]²−および[Ｎｖａ]²−[Ｎｖａ]⁵−
「シクロスポリン」(それぞれシクロスポリンＣ,Ｄ,Ｇお
よびＭとして知られている)、[３−Ｏ−アセチル−Ｍｅ
Ｂｍｔ]¹−「シクロスポリン」(シクロスポリンＡアセテ
ートとして知られている)、[ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]¹−
[Ｖａｌ]²−「シクロスポリン」(ジヒドロシクロスポリン
Ｄとして知られている)、[(Ｄ)Ｓｅｒ]⁸−「シクロスポ
リン」、[ＭｅＩｌｅ]¹¹−「シクロスポリン」、[(Ｄ)Ｍｅ
Ｖａｌ]¹¹−「シクロスポリン」(シクロスポリンＨとして
知られている)、[ＭｅＡｌａ]⁶−「シクロスポリン」およ
び[(Ｄ)Ｐｒｏ]³−シクロスポリン等が挙げられる。

【０００５】シクロスポリンのための通常の命名法によ
って、これらは本明細書および請求範囲において「シク
ロスポリン」(即ちシクロスポリンＡ)の構造を引用して
示す。この場合、まず「シクロスポリン」(Ｃiclosporin)
に存在する残基と異なった分子内の残基を示し、ついで
「シクロスポリン(Ｃiclosporin)」の語を適用して「シ
クロスポリン」に存在する残基と同一の残りの残基を表
わす。同時に、接頭語「ジヒドロ」はＭｅＢｍｔ残基が
水素化されている、即ち式Ｂで−ｘ−ｙ−が−ＣＨ₂−
ＣＨ₂−である(ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ)シクロスポリン
類を示すのに使用する。したがって[Ｔｈｒ]²−「シクロ
スポリン」とは、式Ａで示される配列を有しているが２
位のαＡｂｕがＴｈｒで置き代えられているシクロスポ
リンであり、[ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]¹−[Ｖａｌ]²−
「シクロスポリン」とは、式Ａで示される配列を有してい
るが１位のＭｅＢｍｔ残基が水素化されており、２位の
αＡｂｕがＶａｌで置き代えられているシクロスポリン
である。

【０００６】また例えばＡｌａ、ＭｅＶａｌ、αＡｂｕ
等の略号で示されるアミノ酸残基は、通常行なわれてい
るように、例えば「(Ｄ)Ａｌａ」の場合のように特に示
さない限り(Ｌ)−配置を有するものと理解すべきであ
る。「ＭｅＬｅｕ」の場合のように、前に「Ｍｅ」を付
けた残基の略号はα−Ｎ−メチル化した残基を表わす。
シクロスポリン分子の個々の残基は、１位のＭｅＢｍｔ
またはジヒドロＭｅＢｍｔまたはジヒドロＭｅＢｍｔ残
基から出発して時計回りの方向に数える。本明細書およ
び請求範囲ではすべて同一の配列番号を使用する。

【０００７】現在、「シクロスポリン」がＩＬ−２の転写
開始を遮断することによりＴ細胞の活性化過程を妨害す
ることによって作用するということは確立されている
が、明確なメカニズムはまだ解明されていない。「シク
ロスポリン」は、多くの細胞型中に存在する１７ｋＤ細
胞質ゾルの蛋白質(シクロフィリン)との複合体を形成す
ることが明かにされており、蛋白質折り畳み中に含まれ
る酵素である、ペプチジル−プロピル シス−トランス
異性化酵素と等しいことも明らかにされている。しかし
ながら、これまでのところ、シクロフィリンとの結合が
シクロスポリン類の免疫抑制活性と直接関連しているか
どうか、または実際にシクロフィリン結合がそれ自体免
疫抑制活性に対する十分な判定規準であるかどうかは明
かでない。

【０００８】シクロフィリンと強力に結合するが全く免
疫抑制的ではないシクロスポリン類があることが判明し
た。したがって、シクロフィリンとの結合は、免疫活性
にとって必要ではあるが、十分ではない判定規準であ
る。

【０００９】この発明はＨＩＶ−１複製に対して活性で
あるシクロスポリン類を提供する。

【００１０】ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ)はＴ−ヘル
パー(Ｔ４)リンパ球に好んで感染するが、多様な他の細
胞型、特に単球リネージにおいても複製する。それは、
エイズ(ＡＩＤＳ)と名付けられる、漸次のＴ４−細胞破
壊を特徴とする免疫機構の緩慢に進行する、エイズ(Ａ
ＩＤＳ)と名付けられる疾患の原因となる。ＡＩＤＳの
他の免疫学的異常は細胞毒性／抑制(Ｔ８)リンパ球の増
加、抗原の提示／認識過程およびＢ−細胞のポリクロー
ナル活性における欠陥である。Ｔ４−細胞破壊のメカニ
ズムはまだ明かでない。比較的少数のＴ４−細胞だけが
感染しているようなので、ウイルスによって生じる直接
の細胞変性効果はＴ４−細胞消耗の唯一の原因では有り
得ない。Ｔ４−細胞破壊は、ＨＩＶ−生成またはＨＩＶ
−蛋白−被覆Ｔ４−細胞によって引き起こされる自己免
疫過程によって増幅されるという仮設が立てられてき
た。この持続的な抗原刺激は、Ｔ４細胞の永続的な活性
化状態をもたらすが、これはＴ４細胞中のＨＩＶ複製を
増大させ、Ｔ細胞毒性クローンを拡大させることにな
る。感染していないＴ４細胞は外因性ウイルスｇｐ１２
０をそれらのＣＤ４分子を結合させることによって抗原
にされ、したがってＴ細胞毒性応答の標的になる。

【００１１】米国特許第４８１４３２３号は、「シクロ
スポリン」がＡＩＤＳに対して活性をもち、一般に“免
疫抑制剤として知られるシクロスポリン類”がこの指示
に有用で有り得ることを開示している。非免疫抑制シク
ロスポリン類がこの属性をもつことが期待されるという
ことは示唆されていない。

【００１２】

【発明の構成】驚くべきことに、シクロフィリンに結合
し、免疫抑制的ではないシクロスポリン類が、ＨＩＶ−
１複製に抑制効果を示すということが見いだされた。

【００１３】シクロスポリンは、ケスノー(Ｑuesniaux)
によりヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジ−
(Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.)１９８７年、１７巻、１３５９−
１３６５頁に記載されている競合的ＥＬＩＳＡテストに
おける「シクロスポリン」のようにヒト組み替えシクロフ
ィリンと最低５分の１結合するとシクロフィリンと結合
すると考えられてよい。この試験では、試験されるシク
ロスポリンをシクロフィリンと被覆されたＢＳＡ「シク
ロスポリン」のインキュベーション中に加え、競合物な
しの対照反応を５０％阻止するのに必要な濃度を計算す
る(ＩＣ₅₀)。結果は結合率(ＢＲ)として表わし、それは
この試験化合物および「シクロスポリン」それ自体の同時
試験でのＩＣ₅₀の比率の底１０に対する対数である。し
たがって、ＢＲ１.０は、試験化合物がシクロフィリン
と「シクロスポリン」の結合の１０分の１ファクタ−以下
で結合していることを示し、負の値は結合が「シクロス
ポリン」のものより強いことを示している。

【００１４】ＨＩＶに対して活性なシクロスポリンは、
０.７以下のＢＲをもち(log₁₀５＝約０.７であるか
ら)、好ましくはゼロと等しいかまたはゼロより低い。

【００１５】シクロスポリンは、「シクロスポリン」の５
％以下、好ましくは２％以下の混合リンパ球反応(ＭＩ
Ｒ)における活性をもつときに非免疫抑制的であるとみ
なされる。混合リンパ球反応はＴ.メオの“イムノロジ
カル・メソズ(ＩmmunologicalＭethod)”、Ｌ.レフコヴ
ィツおよびＢ.ペリス編、アカデミック・プレス・ニュ
ーヨーク(Ａcademic Ｐress,Ｎ.Ｙ.)２２７−２３９頁
(１９７９年)に記載されている。近交系マウス(メス、
８−１０週)の脾臓細胞(０.５ｘ１０⁶)を、ＣＢＡマウ
ス(メス、８−１０週)の０.５ｘ１０⁶の照射(２０００
ラッド)またはマイトマイシンＣ処置された脾臓細胞と
ともに５日間インキュベートする。照射された同種の
(異系の)細胞は近交系マウスの脾臓細胞内の増殖反応を
誘導するが、それはＤＮＡ内への標識化前駆体組み込み
によって測定し得る。刺激細胞は照射(またはマイトマ
イシンＣ処置)されるので、近交系マウスの細胞に増殖
応答せず、それらの抗原性を保つ。ＭＬＲにおける試験
化合物でみられるＩＣ₅₀を、平行実験でのシクロスポリ
ン(Ｃiclosporin)でみられるものと比較する。

【００１６】ＨＩＶ−１複製の抑制剤としてのシクロス
ポリン類の活性を下記の試験方法で示す。 １．ＭＴ４−細胞におけるＨＩＶ−１−誘導細胞変性効
果の抑制 パウエルら、ジャ−ナル・オブ・バイロロジカル・メソ
ズ(Ｊ.Ｖirol.Ｍeth.)２０／３０９(１９８８年)に記載
されているアッセイ方法を最小限に修正して用いる。前
もってＨＩＶ感染に対して高い許容性を示したＨＴＬＶ
−Ｉ−形質転換Ｔ４細胞、ＭＴ４を標的細胞として用い
る。ＨＩＶ−１の抑制、株ＨＩＶ−IIIＢ−誘導細胞変
性効果を、ＨＩＶ感染および模擬(mock)感染の両細胞の
生存率を測定することによって測定する。生存率を３−
(４,５−ジメチルチアゾール−２−イル)−２,５−ジフ
ェニルテトラゾリウムブロミド(ＭＴＴ)のその場所での
還元によって分光光度計により評価する。化合物で処置
された非感染の細胞と、化合物で処置されていないウイ
ルス感染および非感染培養を対照として入れる。１mlあ
たりの細胞数が模擬感染培養における４日間のインキュ
ベーション中に１０倍に増加するように細胞濃度を選択
する。４日間のインキュベーションの後、標的細胞の９
０％で細胞死を生じるようにウイルスの接種を調整す
る。ウイルスを、１０倍に濃縮した細胞懸濁液に３７℃
で１時間吸着させる。次に、感染した細胞を１：１０に
希釈し、試験化合物を入れた微量滴定皿に加える。 ２．細胞毒性 別の細胞、具体的には系単球細胞系(Ｕ９３７)における
抗ＨＩＶ能力を評価するために、これらの細胞系に対す
る試験化合物の細胞毒性を最初に評価する。Ｊurkatお
よびＵ９３７細胞懸濁液を１ｘ１０⁵に調整し、様々な
濃度の試験化合物の存在下でインキュベートする。４８
時間後、１mlあたりの細胞量をＭＴＴで染色して比較す
る。ＭＴ４細胞での細胞毒性を同様にして測定する。 ３．ユルカット(Ｊurkat)およびＵ９３７細胞における
ＨＩＶ−１複製の抑制 Ｔ４細胞系Ｊurkatおよび単球細胞系Ｕ９３７を、ウイ
ルス溶液中で１０倍に濃縮された細胞を懸濁することに
よって感染させる。吸着を３７℃で２時間させる。次に
細胞を遠心分離し、接種材料を除去し、試験化合物を含
む新鮮培地でのもとの濃度で再懸濁する。こうして、そ
の物質を吸着後加える。感染後２、５、８、１２、１５
および１９日で、感染培養物の一部を除去する。細胞を
遠心分離し、上澄みを収集する。ウイルスｐ２４抗原の
濃度を、市販のＥＬＩＳＡ用具を使って、上澄み中で測
定し、ウイルス製造のパラメーターとする。各部分の除
去の後、細胞数を数え、特定の濃度の試験化合物を含む
新鮮媒体を加えることによって２ｘ１０⁵細胞／mlに調
整する。

【００１７】この発明の化合物、すなわち非免疫抑制、
シクロフィリン結合性、抗ＨＩＶ−１活性(活性化合物)
シクロスポリン類のうち、いくつかは新規であるが、他
は既知である。しかしながら、既知の活性化合物の抗Ｈ
ＩＶ活性は、これまでに公開されていないし、多くの場
合、既知の活性化合物はなんであれ医薬活性をもってい
ることが公開されたことはなかった。

【００１８】多くの活性化合物が「シクロスポリン」と４
および／または５位において特異的に異なる構造をもつ
ことがわかっている。

【００１９】活性化合物の１群は、例えばγ−ヒドロキ
シ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈ
ｒ、またはＭｅＡｌａなどの、４位でＭｅＬｅｕ基が異
なるＮ−メチル化アミノ酸によって置換されているシク
ロスポリン類である。ＭｅＩｌｅおよびＭｅＴｈｒの他
に異型(allo)のＭｅａＩｌｅおよびＭｅａＴｈｒも使用
され得る。異型においては、正常の型と異型がジアステ
レオ異性体の一対を成すように、β−位での立体化学は
天然アミノ酸の配置と反対の配置をもつ。

【００２０】活性化合物のもう１つの群は、５位でのＶ
ａｌがＮ−アルキル−、好ましくはＮ−メチルアミノ酸
で置換されたものである。好ましくはＮ−アルキル化さ
れたアミノ酸はＶａｌまたはＬｅｕである。好ましくは
[Ｖａｌ]⁵のイミノ基の水素は、非分枝Ｃ_1-6アルキル
基、好ましくはメチル、エチルまたはｎ−プロピル、特
にメチルで置換されている。活性化合物の後者の好まし
い群は全て新規である。

【００２１】追加または選択的に、ある種の活性化合物
は「シクロスポリン」と１、２、３および／または６位で
異なり得る。活性化合物の好ましい群は、式Ｉ

【化７】 [式中、ＷはＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−Ｍｅｂｍｔまたは
８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔである。ＸはαＡｂｕ、
Ｖａｌ、Ｔｈｒ,ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(Ｍ
ｅＯＴｈｒ)である。ＲはＳａｒまたは(Ｄ)−ＭｅＡｌ
ａである。ＹはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅ
ｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌ
ａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒである。ＺはＶａ
ｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌ、またはＭｅＬｅｕである。ま
たＱはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕまたは
ＭｅＡｌａである。但しＹがＭｅＬｅｕであるときＺは
ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであるかまたはＷが８'−
ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔである。]で示される化合物か
ら成る。

【００２２】Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＱおよびＲの基は、個別
に、下記の好ましい意味をもつ。Ｗは、Ｗ'がＭｅＢｍ
ｔまたはジヒドロＭｅＢｍｔであるとき、好ましくは
Ｗ'である。Ｘは、好ましくはＸ'がαＡｂｕまたはＮｖ
ａであるときＸ'であり、より好ましくはＸ”がαＡｂ
ｕであるときＸ”である。Ｒは好ましくは、Ｒ'がＳａ
ｒであるときＲ'である。Ｙは好ましくは、Ｙ'がγ−ヒ
ドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒまたは
ＭｅＩｌｅであるときＹ'である。Ｚは、好ましくは、
Ｚ'がＶａｌまたはＭｅＶａｌであるときＺ'である。Ｑ
は、好ましくは、Ｑ'がＭｅＬｅｕであるときＱ'であ
る。

【００２３】１つの特に好ましい活性物質の群は、Ｗが
Ｗ'、ＸがＸ'、ＹがＹ'、ＺがＺ'、ＱがＱ'およびＲが
Ｒ'であるときの式Ｉの化合物である。特に好ましい式
Ｉの化合物は、 ａ)[ジヒドロ−Ｍｅｂｍｔ]¹−[γ−ヒドロキシ−Ｍｅ
Ｌｅｕ]⁴−「シクロスポリン」 ｂ)[ＭｅＶａｌ]⁴−「シクロスポリン」 ｃ)[ＭｅＩｌｅ]⁴−「シクロスポリン」 ｄ)[ＭｅＴｈｒ]⁴−「シクロスポリン」 ｅ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロスポリン」 ｆ)[Ｎｖａ]²−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−「シク
ロスポリン」 ｇ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−[γ−ヒドロキシ
−ＭｅＬｅｕ]⁶−「シクロスポリン」 ｈ)[ＭｅＶａｌ]⁵−「シクロスポリン」 ｉ)[ＭｅＯＴｈｒ]²−[(Ｄ)ＭｅＡｌａ]³−[ＭｅＶａ
ｌ]⁵−「シクロスポリン」 ｊ)[８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ]¹ −「シクロスポリ
ン」

【００２４】加えて、式Ｉの範囲内にないある種の化合
物、例えばｋ)[ＭｅＡｌａ]⁶−「シクロスポリン」および
ｌ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁹ −「シクロスポリ
ン」も活性化合物である。

【００２５】この発明はまた、式II、

【化８】 [式中、Ｗ'、Ｘ、Ｒ、Ｙ、およびＺは上記で定義された
とおりである。但し１)ＹがＹがＭｅＬｅｕまたはＭｅ
Ａｌａであるとき、ＺはＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕで
あり、２)Ｗ'がＭｅＢｍｔであるとき、ＲがＳａｒで、
Ｙがγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕであるとき、ＺはＶａ
ｌ以外である]で示される化合物である、新規活性化合
物を提供する。

【００２６】新規活性化合物の好ましい群は式II、[式
中、ＸはＸ”、ＹはＹ'、ＺはＺ'である。但しＷ'がＭ
ｅＢｍｔ、Ｙ'がγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ以外であ
る]で示される化合物から成る。特に好ましい新規活性
化合物は、上記の化合物ａ)、ｂ)、ｃ)、ｄ)、ｆ)、お
よびｈ)である。これらの化合物のある物、例えば化合
物ｂ)およびｃ)は、シクロフィリンとの結合を遮断する
ことによって「シクロスポリン」の免疫抑制作用を遮断
し、「シクロスポリン」きっ抗剤として作用することがわ
かっている。

【００２７】活性化合物は、下記のように分類される様
々な方法で得ることができる。 １)発酵 ２)生体内変換 ３)誘導化 ４)部分的合成 ５)全合成

【００２８】１)活性化合物のあるものは、下記の実施
例１に記載されている化合物ｃ)の生成に例示されるよ
うに、トリポクロジウム・インフラツム・ガムズ(Ｔoly
pocladium inflatum Ｇams)などの「シクロスポリン」
産成生物のもとのまたは修飾菌株の発酵の副産物として
生成される。

【００２９】２)既知の化合物ｊ)およびｌ)を含む他の
活性化合物は、「シクロスポリン」の代謝物であり、クロ
マトグラフィーの方法で「シクロスポリン」を投与された
ヒトまたは動物の尿から単離し得る。さらに、例えば実
施例２に記載されているシクロスポリンＡの生体内変換
による化合物ｅ)およびｇ)の生成、シクロスポリンＧの
生体内変換による化合物ｆ)の生成(実施例４)のよう
に、これらおよび他の代謝的変換は微生物を使うことが
可能である。これらの実施例は、１種またはそれ以上の
ＭｅＬｅｕ残基をもつシクロスポリンを加えて、セベキ
ア・ベニハナ(Ｓebekia benihana)の新規修飾菌株を培
養し、生成物を発酵ブロスから単離する方法を含む、１
種またはそれ以上のγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ残基を
もつシクロスポリン類の新規製造方法を提示する。

【００３０】誘導化という語は、天然または合成シクロ
スポリン類を、ペプチド結合を開裂したり再生したりす
る事なく１種またはそれ以上のアミノ酸を修飾する、１
種またはそれ以上の化学反応によって、活性化合物に変
換することを意味している。例えば、実施例５中の化合
物ｈ)および実施例６中の化合物ｉ)に例示されているよ
うに、５位のＶａｌがＮ−アルキル化されている活性化
合物群を、５位のＶａｌを持つ対応するシクロスポリン
をブチルリチウムと反応させ、その後アルキル化剤と反
応させることによって得ることができる。

【００３１】他の例では、化合物ａ)を化合物ｅ)(実施
例７)の水素化によって製造することができ、「シクロス
ポリン」の主な代謝物である化合物ｊ)を実施例８で記載
されているような既知の化合物、酢酸シクロスポリンか
ら製造することができる。

【００３２】４)半合成という用語は、天然シクロスポ
リンの環を開き、１種またはそれ以上のアミノ酸を除去
し、異なるアミノ酸を加え、環を再び閉じる一連の化学
反応を意味するのに使用される。

【００３３】５)シクロスポリンの全合成を、ウエグナ
ー(引用文中)による記載、米国特許第４３９６５４２お
よび第４７９８８２３にみられるように、線状ウンデカ
ペプチドを作り、環化することによって実施することが
出来る。原則として、どのシクロスポリンも、全合成の
手段で製造されるが、他の方法の１つが可能であればそ
れは全合成より便宜的である。全合成は化合物ｄ)(実施
例９)および既知の代謝化合物ｌ)の製造に使用され得
る。

【００３４】化合物ｋ)はケスノーら(モルキュラー・イ
ムノロジー(Ｍol.Ｉmmuunol.)、２４巻、１１５９、１
９８７年)によってその属性が記載されている既知の物
質であるが、これも全合成により製造され得る。例え
ば、この化合物の全合成は米国特許第４９１４１８８号
に記載されている。

【００３５】実施例ｌ[ＭｅＩｌｅ]⁴−「シクロスポリ
ン」 (化合物ｃ) 菌株生成 化合物ｃ)を、ブダペスト条約の規定の下に、受託番号
ＤＳＭ６６２７で、ドイチェ・ザムルンク・フュル・ミ
クロオルガニスメン(Ｄeutsche Ｓammlung fur Ｍik
roorganismen)に寄託されている、真菌の菌株トリポク
ラジウム・インフラツム(Ｔolypocladium inflatum)Ｃ
ｙ Ｅ ４５５６の発酵によって得る。この菌株はトリ
ポクラジウム・インフラツム(Ｔolypocladium inflatu
m Ｇams)種の菌株ＮＲＲＬ８０４４の突然変異体であ
り、親菌株と系統的に同一であるが、これについては英
国特許第１４９１５０９号などに、全て記載されてい
る。

【００３６】培養 １．寒天出発培養：菌株ＤＳＭ６６
２７の寒天斜面培養を、下記の寒天培地で２７℃で１４
日間成長させる。 イースト抽出物(ジステックス) ４ｇ モルト抽出物(ワンダー) ２０ｇ 寒天 ２０ｇ 脱塩水を加えて１０００mlにする。 培地はｐＨ５.４−５.６であり、１２０℃で２０分滅菌
する。

【００３７】２．前培養：４つの出発培養の菌糸からの
胞子を０.９％の塩水４０ml中に懸濁する。各々が１０
０mlの前培養培地を含むエルレンマイヤーフラスコの各
々にこの懸濁液を２０ml接種する。前培地の組成は下記
の通りである。 カゼイン(アンバーＥＨＣ) ２５ｇ マルトース ７５ｇ ＫＨ₂ＰＯ₄ １ｇ ＫＣｌ ２.５ｇ 脱塩水を加えて１０００mlにする。 培地をＨＣｌでｐＨ５.２−５.５に調整し、１２０℃で
２０分間滅菌する。前培養菌を、５０mmの離心率、２０
０rpmの回転振とう器中、２７℃で２４時間発酵させ
る。

【００３８】中間培養：２０リットルの前培養培地を入
れた２５リットルのスチール発酵器に２００mlの前培養
菌を接種する。中間培養菌を、攪拌率１５０rpm、１リ
ットルの培地あたり０.５バールの圧力で０.５リットル
／分の気流中、２７℃で５日間発酵させる。

【００３９】３．主培養：１００リットルの前培地に、
１０リットルの中間培養菌を接種し、１２０リットルの
スチール発酵器で発酵させる。この培地に４ｇのＤ−ス
レオニンを加え、濾過により滅菌する。発酵を、最初の
５日間は攪拌率７０rpm、１リットルの培地あたり０.５
バールの圧力で０.４リットル／分の気流で、残りの発
酵期間は攪拌率１００rpm、気流０.５ｌ／分に増やして
１４日間実施する。

【００４０】単離：菌糸体を培地から分離し、ターラッ
クス器中で、１０リットルのメタノール／水(９：１の
体積で)で３回破砕、攪拌することによって抽出する。
破砕された菌糸体を吸引濾過によって溶媒から分離し、
濾過物を合わせて４０℃の真空中で蒸気がおもに水だけ
から成るまで蒸発させることによって濃縮する。得られ
た混合物を、各抽出で２リットルの１,２−ジクロロエ
タンを使って４回抽出し、１,２−ジクロロエタン溶液
を合わせて４０℃の真空下で蒸発によって濃縮する。

【００４１】残留物を、酢酸エチル／水を溶離剤(２.５
リットルの留分)として使って、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーに付す。(１０kgのシリカゲル、粒状化
サイズ０.０２−０.０４５mm、“グレース(Ｇrace)”)
[ＭｅＩｌｅ]⁴−シクロスポリンを含む留分２０−２３
をプールし、さらに、クロロホルム／メタノール(９
８：２の体積で)を溶離剤として(留分サイズ３００ml)
使ってシリカゲルカラムクロマトグラフィー(６００ｇ
のシリカゲル、粒状化サイズ０.０４−０.０６３mm,
“メルク(Ｍerck)”)によって分離する。塩化メチレン
／メタノール(９８：２の体積で)を溶離剤として使って
(留分サイズ２００ml)シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー(４００ｇのシリカゲル、粒子サイズ０.０４−０.
０６３mm,“メルク”)によりさらに精製し、純粋な[Ｍ
ｅＩｌｅ]⁴−シクロスポリンを無定型の白色粉として得
る。融点 １５５−１５８℃；[α]２０／Ｄ＝−２３５
(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝０.６８)および−１９３(ＣＨ₃ＯＨ
中、ｃ＝０.７４)

【００４２】ＣＨ₂Ｃｌ₂におけるＩＲスペクトルは、図
ｌに見られる通りであり、ＣＤＣｌ₃におけるプロトン
ＮＭＲスペクトルは図２の通りである。

【００４３】実施例２ [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]
⁴−「シクロスポリン」(化合物ｅ) 化合物ｅ)を、微生物セベキア・ベニハナ(Ｓebekia be
nihana)による「シクロスポリン」の生体内変換によって
得る。使用される元の菌株はＮＲＬＬ１１１１１と名付
けられ、セベキア・ベニハナ(Ｓebekia benihana)種に
属する。(ジエツとリ：セベキア(Ｓebekia)、アクチノ
プラナシア科の新属。第８２回アニュアル・ミーティン
グ・オブ・アメリカン・ソサエティ・オブ・マイクロバ
イオロジー(Ａnn.Ｍeet.Ａmer.Ｓoc.Ｍicrobiol.)アト
ランタ、１９８２年、要旨、１６３頁)この菌株はノボ
ビオシンを水酸化することができる。化合物ｅおよびそ
の関連の化合物の製造のために副次培養された菌株は、
ブタペスト条約の規定に従って、ジャーマン・コレクシ
ョン・オブ・マイクロオーガニズムズ(Ｇerman Ｃolle
ction of Ｍicrorganisms)(Ｄ−３３００ ブラウン
シュヴァイク)にＤＳＭ６１８２の番号で寄託されてい
る。

【００４４】１．寒天出発培養：菌株ＤＳＭ６１８２の
寒天斜面培養を２７℃で１０日間下記の寒天培地で行な
う。 グルコース １０ｇ デンプン(可溶性) ２０ｇ イースト抽出物(ギステックス) ５ｇ ペプトン(Ｎ−Ｚ−アミンＡ型、シェフィールド) ５ｇ ＣａＣＯ₃ １ｇ 寒天(バクト) １８ｇ 脱塩水を加えて１リットル ｐＨ：ＮａＯＨ／Ｈ₂ＳＯ₄で７に中和される。 滅菌：１２０℃／２０分 ２．前培養：１つの出発培養物の胞子および菌糸体を１
０mlの０.９％塩水で懸濁する。各々５０mlの前培地を
含む一連のエルレンマイヤーフラスコの各々にこの懸濁
液を５mlづつ接種する。前培養培地の組成は下記の通り
である。 グルコース ７ｇ デンプン(可溶性) １０ｇ イースト抽出物(ギステックス) ４.５ｇ 麦芽抽出物(液、ワンダー) １０ｇ ペプトン(Ｎ−ＺアミンＡ型、シェフィールド) ２.５ｇ ＣａＣＯ₃ １ｇ 微量成分溶液２３５番 ｌml 脱塩水加えて１リットル ｐＨをＮａＯＨ／Ｈ₂ＳＯ₄で７に中和する。 滅菌：１２０℃／２０分 微量成分溶液２３５番 Ｈ₃ＢＯ₃ ０.１ｇ ＦｅＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ ５ｇ ＫＩ ０.０５ｇ ＣｏＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ ２ｇ ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ ０.２ｇ ＭｎＣｌ₂・４Ｈ₂Ｏ ２ｇ ＺｎＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ４ｇ 脱塩水を加えて９９９mlにする。 Ｈ₂ＳＯ₄(９７％) ｌml 前培養物を２７℃で４日間、２００rpm、５０mmの離心
率の回転振とう器で発酵させる。

【００４５】３．中間培養：各々５０mlの前培養培地を
含む、直列の２００mlのエルレンマイヤーフラスコの各
々に５mlの前培養物を接種する。中間培養物を３日間２
７℃で２００rpmで離心率５０mmの回転振とう器で発酵
する。

【００４６】４．主培養：各々が５０mlの主培養培地を
含む直列の５００mlエルレンマイヤーフラスコの各々に
５mlの中間培養物を接種する。これらの培養物を３日
間、２７℃で２００rpm、離心率５０mmの回転振とう器
で発酵させる。２４時間後、メタノールに溶けたシクロ
スポリンＡ(７.５mg)を各主培養物(＝１５０mg／Ｌ)に
加える。主培養培地の組成は下記の通りである。 セルロース １０ｇ デキストリン １０ｇ デンプン(可溶性) １０ｇ イースト抽出物(ギステックス) ２.５ｇ 大豆粉(ヌルパン、エーデルソヤ) １２.５ｇ Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０.２５ｇ ＫＨ₂ＰＯ₄ ０.１２ｇ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.１０ｇ ＣａＣｌ₂・６Ｈ₂０ ０.０５ｇ 微量元素ＡＣ−１ １ml 脱塩水を加えて１リットルにする。 ｐＨ：７.２−７.５に調整する。(ＫＯＨ／Ｈ₂ＳＯ₄) 滅菌：１２０℃／２０分 微量元素溶液ＡＣ−１：この溶液は、(ＮＨ₄)₆Ｍｏ₇Ｏ
₂₄ ０.２ｇを加えた２３５番溶液と同じ組成をもつ。

【００４７】５．単離：菌糸体を培地から分離し、生成
した培養濾過物(１３Ｌ)を１,２−ジクロロエタンを各
抽出に１.５Ｌ使用して３回抽出する。１,２−ジクロロ
エタン溶液を合わせて４０℃の真空下で蒸発させる。粗
残留物を、メタノールを溶離剤として使用してセファデ
ックス(Ｓephadex)ＬＨ−２０ゲル濾過に処す。シクロ
スポリン化合物(５２５mg)を含むそれらの留分をプール
し、クロロホルム／メタノールを溶離剤として使用して
シリカゲル(５０ｇ、粒状化サイズ０.０４−０.０６３m
m、‘メルク')上でクロマトグラフィーに付す。同じ方
法を使ってクロマトグラフィーを繰り返して、無定形の
白色粉として純粋な[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−
「シクロスポリン」を得る。融点、１５０−１５３℃、
[α]_D ²⁰−２２５(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝０.５３)、−１７
１(ＣＨ₃ＯＨ中、ｃ＝０.４４)

【００４８】実施例３[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴
−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁶−「シクロスポリン」
(化合物ｇ) [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロスポリン」の
精製で生じる極性が強い副留分を、２：１のアセトン／
ヘキサンを溶離剤として使用してシリカゲルカラムクロ
マトグラフィ−(粒状化サイズ０.０４−０.０６３mm)を
繰り返し９０：９：１のメチルｔ−ブチルエーテル／メ
タノール／水を溶離剤として使用するシリカゲル上のク
ロマトグラフィーによってその後分離する。最初の留分
は[γ−ヒドロキシ−Ｌｅｕ]⁴−「シクロスポリン」を含
むが、それを炭で脱色させてさらに精製し、無定形の白
色粉として純粋な化合物を得る。融点１６２−１６４
℃、[α]_D ²⁰−２１１(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝０.５０)、−
１５７(ＣＨ₃ＯＨ中、ｃ＝０.５２)

【００４９】上記のシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーからの後期の留分は、[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]
⁴−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁶−「シクロスポリン」
を含み、炭で脱色してさらに精製し、純粋な標題の化合
物を無定形の白色粉として得る。融点１５７−１６０
℃、[α]_D ²⁰−２１７(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝０.５４)、−
１７６(ＣＨ₃ＯＨ中、ｃ＝０.４２)

【００５０】実施例４ [Ｎｖａ]²−[γ−ヒドロキシ−
ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロスポリン」(化合物ｆ) この化合物は化合物ｅ([γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴
−「シクロスポリン」)の製造と同様の方法で製造される
が、出発物質としてシクロスポリンＧ([Ｎｖａ]²−「シ
クロスポリン」)を使用する。溶離剤として水飽和酢酸エ
チルおよび２：１のアセトン／ヘキサンを使用してシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返して精製した
後、標題の化合物を無定形の白色粉として得る。融点１
３８−１４１℃、[α]_D ²⁰−２１３(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝
０.６９)、−１６８(ＣＨ₃ＯＨ中、ｃ＝０.７０)

【００５１】実施例５[ＭｅＶａｌ]₅−「シクロスポリ
ン」(化合物ｈ) テトラヒドロフラン中に溶解したシクロスポリンＡ(０.
６０ｇ＝０.５mmol)を、ヘキサン中の１.６Ｍブチルリ
チウム溶液(１.０mmol)０.６３mlとインキュベートす
る。生成溶液を−７８℃でジメチル硫酸エステル(０.１
ml；１.５mmol)と反応させる。反応混合物をゆっくりと
室温にまで温め、１晩攪拌する。

【００５２】フラッシュクロマトグラフィー(ＳｉＯ²、
５％メタノール／エタノール)による単離の後、ＨＰＬ
Ｃ(逆相)によって標題の生成物を得る。化合物を、図３
に示されているＣＤＣｌ₃中の３００ＭＨｚの¹ＨＮＭＲ
スペクトルで確認する。

【００５３】実施例６[ＭｅＯＴｈｒ]²−[(Ｄ)ＭｅＡｌ
ａ]³−[ＭｅＶａｌ]⁵−「シクロスポリン」(化合物ｉ) ４８０mlのＴＨＦ(無水)および６.９６ｇ(４９.２mMol)
のジイソプロピルアミンの混合物を−８０℃まで冷却
し、ヘキサン中の１.３３Ｍのブチルリチウム溶液３３.
５mlをゆっくりとシリンジを通して加える。混合物を−
８０℃で３０分間攪拌し、１２０mlの無水ＴＨＦ中の８
ｇのシクロスポリンＣ([Ｔｈｒ]²−「シクロスポリン」)
溶液をシリンジを通して２−３分間に加える。透明な溶
液を−８０℃でさらに１時間攪拌し、２.０６mlのヨー
ドメチルをゆっくりと加える。

【００５４】混合物を２時間以上室温にまで温めてお
き、４０mlの水を加え、溶媒を回転蒸発器で３０℃／１
５mmＨｇで蒸発させる。残基を水とエーテルに分割し、
エーテル層を半飽和食塩で４回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾
燥し、蒸発させ、８.１ｇの残留物を得る。

【００５５】残留物を水飽和酢酸エチルを含む１２００
ｇのけいそう土上でクロマトグラフィーに付して粗生成
物を得、さらにそれを５％のＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂を含
む２００ｇのけいそう土上でクロマトグラフィーに付し
て純粋な標題の生成物、[α]_D ²⁰＝−１９５(ＣＨＣＩ₃
中、ｃ＝１.０)を得る。

【００５６】実施例７ [ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]¹−[γ
−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロスポリン」(化合
物ａ) ４mlのエタノール中の２００mgの前水素化された１０％
のパラジウム／炭素の懸濁液に、１０mlのエタノール中
の１.２ｇの[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロ
スポリン」(化合物ｅ)を加え、室温で、水素が取り込ま
れなくなるまで水素化を実施する。濾過による触媒の除
去の後、溶液を蒸発させ、標題の化合物を白色粉として
得る。融点、１５４−１５６℃、[α]_D ²⁰−２２５(ＣＨ
Ｃｌ₃中、ｃ＝０.８７)、−１６９(ＣＨ₃ＯＨ中、ｃ＝
０.７０)

【００５７】実施例８ [８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍ
ｔ]¹−「シクロスポリン」(化合物ｊ) １．[０−アセチル−ω−ブロモ−ＭｅＢｍｔ]¹−「シク
ロスポリン」：２５.０ｇ(２０mmol)の[０−アセチル−
ＭｅＢｍｔ]¹−「シクロスポリン」(トレーバーら、ヘル
ベチカ・キミカ・アクタ、６５巻、１９８２年、１６５
３頁)、４.４ｇ(２５mmol)のＮ−ブロモスクシンイミド
および２５０mlの四塩化炭素中の４００mgのアゾビスイ
ソブチロニトリルの混合物を還流温度で２.５時間加熱
する。溶媒を蒸発し、エーテルで置換し、固体を濾去
し、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、乾固する
まで蒸発する。残留物をエチルエーテル／酢酸エーテル
(４：１)でシリカゲルクロマトグラフィーに付して、１
０.７ｇ(４０％)の無定形の生成物を得、それをエーテ
ル／ヘキサンから結晶化して８.４ｇの純粋な物質を得
る。融点、２０７−２０９℃。クロマトグラフィーの後
期の留分はわずかに質の劣った１１.２ｇの生成物を含
む。

【００５８】２．[０−アセチル−ω−アセトキシ−Ｍ
ｅＢｍｔ]¹−「シクロスポリン」：ヨウ化ナトリウムの触
媒量を含む、方法１の生成物(概算１５−２０％の開始
物質を混入した)４.３１ｇ(３.３１mmol)およびメチル
エチルケトン３０ml中の酢酸テトラエチルアンモニウム
２.１ｇ(８mmol)の混合物を油浴で１０５℃で３時間加
熱する。溶媒をｔ−ブチルメチルエーテルで希釈し、水
および食塩水で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥
し、蒸発して４.０ｇの粗生成物を残し、それをＲＰ−
１８の逆相カラム(２４０ｇ)で精製して３.０７ｇの標
題の生成物を得る。融点１９１−１９２℃

【００５９】３．[ω−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ]¹−「シ
クロスポリン」：７５mlのメタノール中の方法２の生成
物１.７２ｇ(１.３mmol)溶液および５０mlのメタノール
中の１.２ｇのナトリウム溶液を混合し、室温に２.５時
間おく。次に溶液を酢酸で酸性化する。溶媒を減圧下で
蒸発し残留物をｔ−ブチルメチルエーテル中に溶解し、
連続して水、食塩水、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、
ＭｇＳＯ₄で乾燥し、蒸発する。粗生成物(１.６ｇ)をＲ
Ｐ−１８カラム(２４０ｇ)から７５：１５のメタノール
／水で溶離し、１.５ｇの純粋な生成物を得る。サンプ
ルをエーテル／ヘキサンから結晶化して融点１８１−１
８３℃の結晶生成物を得る。

【００６０】実施例９ [ＭｅＴｈｒ]⁴−「シクロスポリ
ン」(化合物ｄ) 米国特許第４３９６５４２および４７９８８２３に記載
されているシクロスポリンの全合成を４位のＭｅＬｅｕ
の代わりにＭｅＴｈｒを使って実施する。生成物は[α]
_D ²⁰＝−２４９.６(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝１.０)をもつ。

【００６１】実施例１０ [ＭｅＶａｌ]⁴−「シクロスポ
リン」(化合物ｂ) 米国特許第４３９６５４２および４７９８８２３に記載
されているシクロスポリンの全合成を４位のＭｅＬｅｕ
の代わりにＭｅＶａｌを使って実施する。生成物は[α]
_D ²⁰＝−２２６(ＣＨＣｌ₃中、ｃ＝０.３５８)を持つ。

【００６２】実施例１１ 「シクロスポリン」に関連する
活性物質の免疫抑制およびシクロフィリン結合性 表Ｉは(１)ＥＬＩＳＡアッセイで測定された活性物質の
シクロフィリン結合率(ＢＲ)および(２)ＭＬＲアッセイ
で測定され、「シクロスポリン」関連活性のパーセンテー
ジ(免疫抑制率、ＩＲ)で表わされた「シクロスポリン」関
連活性化合物の免疫抑制活性の実施例を示している。こ
れらの価の意味およびこれらの試験の実施方法の詳しい
説明は上記に示されている。 表Ｉ 化合物 ＢＲ(log₁₀) ＩＲ(％) ａ)[ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]¹−[γ−ヒドロキシ −ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロスポリン」 ０.１ ＜１ ｂ)[ＭｅＶａｌ]⁴−「シクロスポリン」 ０.１ ＜１ ｃ)[ＭｅＩｌｅ]₄−「シクロスポリン」 −０.２ ＜１ ｅ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴− 「シクロスポリン」 −０.３ ＜１ ｆ)[Ｎｖａ]²−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴ −「シクロスポリン」 ０.４ ＜１ ｈ)[ＭｅＶａｌ]⁵−「シクロスポリン」 ０.４ ５.３ ｊ)[８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ]¹− 「シクロスポリン」 ０.３５ １.８ ｋ)[ＭｅＡｌａ]⁶−「シクロスポリン」 −０.４ ３.２ ｌ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁹− 「シクロスポリン」 ０.１５ ２.９

【００６３】実施例１２ 活性化合物の抗−ＨＩＶ活性
および細胞毒性 ＭＴ４−細胞中のＨＩＶ複製の抑制剤としての活性化合
物および「シクロスポリン」の活性およびＭＴ４−細胞中
の活性化合物および「シクロスポリン」の細胞毒性の実施
例を表IIに示す。これらの数字の意味および適当な方法
は上記で論じている。

【００６４】 表II 化合物 細胞毒性 抗ＨＩＶ (μg／ml) (ＩＣ₅₀) ａ)[ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]¹−[γ−ヒドロキシ −ＭｅＬｅｕ]⁴−「シクロスポリン」 １６.３ ０.１２ ｂ)[ＭｅＶａｌ]⁴−「シクロスポリン」 ５.４ ０.０６４ ｃ)[ＭｅＩｌｅ]⁴−「シクロスポリン」 ４.５ ０.０５６ ｅ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁴− 「シクロスポリン」 １５.５ ０.３４ ｆ)[Ｎｖａ]²−[γ−ヒドロキシ−Ｍｅｌｅｕ]⁴ −「シクロスポリン」 １４.０ ０.８５ ｈ)[ＭｅＶａｌ]⁵−「シクロスポリン」 ４.４ ０.４５ ｉ)[ＭｅＯＴｈｒ]²−[(Ｄ)ＭｅＡｌａ]³ −[ＭｅＶａｌ]⁵−「シクロスポリン」 ＞１０ ０.４５ ｊ)[８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ]¹− 「シクロスポリン」 １０.６ ０.５６ ｋ)[ＭｅＡｌａ]⁶−「シクロスポリン」 ５.２ １.３４ ｌ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]⁹− 「シクロスポリン」 ＞１０ ０.３１「 シクロスポリン」 ８.４５ ０.５３

【００６５】活性化合物は症候のないＨＩＶ−陽性患者
におけるＡＩＤＳの予防およびＡＩＤＳに罹患している
患者の処置の両方に指示されている。ＡＩＤＳが発症し
ている患者において、活性化合物の投与はＡＩＤＳに関
連するＴ４−細胞消耗を復元し、カポジ肉腫のようなＡ
ＩＤＳ関連障害の退行を誘導し、新しい日和見感染の可
能性を減らすはずである。

【００６６】従って、この発明は、処置を必要とする対
象または患者に活性化合物の有効な量を投与することを
ふくむ、後天性免疫不全症候群およびこのウイルスに感
染した患者でのＨＩＶ−１ウイルスによって誘導される
他の病気の処置および予防の方法およびそのための予防
治療剤(処置剤)または組成物を提供する。

【００６７】活性化合物は通常の経路、特に経口などの
腸経由、飲むための溶液、錠剤、カプセルの形で、また
は例えば注射液またはけんだく化剤などの形などでの非
経口で投与することが出来る。静脈経由での指示される
１日の用量は１から２０mg／kg、好ましくは３から１０
mg／kgであり得、経口で１から５０mg／kg、好ましくは
７から２０mg／kgであり得る。

【００６８】活性化合物の毒性は「シクロスポリン」のそ
れと同様であると思われる。活性化合物が免疫抑制的で
ないので、免疫抑制に関連する「シクロスポリン」のある
種の副作用は避けられる。しかしながら、「シクロスポ
リン」に関連する他の副作用は、特に長期の使用におけ
る腎毒性はまた、活性化合物と関連し得る。

【００６９】活性化合物の好ましい製剤は、英国特許出
願２２２２７７０Ａに記載されているようなミクロエマ
ルションに基づくものを含み、局所および経口型、英国
特許出願２２０９６７１Ａに記載されているモノラウリ
ン酸サッカロースなどのサッカリド脂肪酸モノエステル
を含む固溶体から得られた経口および注射型を含む。経
口投与のための好ましい単位用量形態は、例えば一回量
あたり２５から２００mgの活性化合物を含む。 製剤例Ａ 実施例１の生成物 ５０.０mg グリコフロール７５ １８０.０mg ミグリオール８１２ ９０.０mg クレモホール ＲＨ４０ １８０.０mg アルファトコフェロール ０.５mg 製剤例Ｂ 実施例１の生成物 １００.０mg テトラグリコール ２０.０mg キャプテックス８００ ２０.０mg ニッコールＨＣＯ−４０ ８６０.０mg ブチルヒドロキシトルエン １.０mg (ＢＨＴ) 製剤例Ｃ 実施例１の生成物 ２５.０mg グリコフロール １００.０mg ミグリオール ８１２ ３５.０mg クレモホールＲＨ４０ ９０.０mg ブチルヒドロキシアニゾール ０.２mg (ＢＨＡ) 製剤例Ｄ： 実施例１の生成物 １０.０mg テトラグリコール １０.０mg ミリトール ５.０mg クレモホール ＲＨ４０ ７５.０mg アルファートコフェロール ０.１mg これらの製剤の各々の化合物、およびそれらの製造方法
は、英国特許出願２２２２７７０に全て記載されてお
り、ここに引用してその内容をこの明細書に包含させ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例１で得られる化合物のＩＲスペクトル
である。

【図２】 実施例１で得られる化合物のＮＭＲスペクト
ルである。

【図３】 実施例５で得られる化合物のＮＭＲスペクト
ルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:645） (31)優先権主張番号 ９０２３９７１．６ (32)優先日 1990年11月５日 (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号 ９１１６８３６．９ (32)優先日 1991年８月５日 (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） 微生物の受託番号 ＤＳＭ ６６２７ 微生物の受託番号 ＤＳＭ ６１８２ (72)発明者 ブリギッテ・ローゼンヴィルス オーストリア2340メドリンク、ツェー・ ツヴィリングガッセ17番 (72)発明者 ディーター・ゼーバッハ スイス8044チューリヒ、オレリシュトラ ーセ３番 (72)発明者 ルネ・ペー・トラベール スイス4052バーゼル、ヒルツボデンパル ク20番 (72)発明者 ローラン・ヴェンガー スイス4125リーヘン、グレンツァヒェル ヴェーク45番 (72)発明者 ピエトロ・ボーリンガー スイス4103ボットミンゲン、グスタッケ ルシュトラーセ56番

Claims (13)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 非免疫抑制、シクロフィリン結合シクロ
   スポリンを含む、エイズまたはエイズ関連障害を処置す
   るかまたは予防するための剤。
2. 【請求項２】 非免疫抑制、シクロフィリン結合シクロ
   スポリンが、式Ｉ、 【化１】 [式中、ＷはＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔまたは
   ８'−ヒドロキシ−ＭｅｍＢｍｔ； ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ、またはＭｅＯ
   Ｔｈｒ； ＲはＳａｒまたは(Ｄ)−ＭｅＡｌａ； ＹはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩ
   ｌｅ、 ＭｅＶａｌ、 ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅ、またはＭｅａ
   Ｔｈｒ； ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌ、またはＭｅＬｅｕ；
   および ＱはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ−または
   ＭｅＡｌａ；但しＹがＭｅＬｅｕであるとき、ＺはＭｅ
   ＶａｌまたはＭｅＬｅｕであるかまたはＷが８'−ヒド
   ロキシ−ＭｅＢｍｔである］で示される化合物である、
   請求項１記載の剤。
3. 【請求項３】 非免疫抑制、シクロフィリン結合シクロ
   スポリンが式Ｉ' 【化２】 [式中、Ｗ'はＭｅＢｍｔまたはジヒドロ−ＭｅＢｍｔ； Ｘ'はαＡｂｕまたはＮｖａ； Ｙ'はγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＶａｌ、Ｍｅ
   ＴｈｒまたはＭｅＩｌｅ； および Ｚ'はＶａｌまたはＭｅＶａｌである。］で示される化
   合物である、請求項２記載の剤。
4. 【請求項４】 非免疫抑制、シクロフィリン結合シクロ
   スポリンが、 [ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ］¹−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬ
   ｅｕ］⁴−「シクロスポリン」、 [ＭｅＶａｌ］⁴−「シクロスポリン」、 [ＭｅＩｌｅ］⁴−「シクロスポリン」、 [ＭｅＴｈｒ］⁴−「シクロスポリン」、 [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ］⁴−「シクロスポリ
   ン」、 [Ｎｖａ］²−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ］⁴−「シク
   ロスポリン」、 [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ］⁴−[γ−ヒドロキシ−
   ＭｅＬｅｕ］⁶−「シクロスポリン」、 [ＭｅＶａｌ］⁵−「シクロスポリン」、 [ＭｅＯＴｈｒ］²−[(Ｄ)ＭｅＡｌａ］³−[ＭｅＶａ
   ｌ］⁵−「シクロスポリン」、 [８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ］¹−「シクロスポリ
   ン」、 [ＭｅＡｌａ］⁶−「シクロスポリン」、および [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ］⁹−「シクロスポリン」
   を含むグループから選択された化合物である、請求項１
   記載の剤。
5. 【請求項５】 製薬上許容し得る担体または希釈剤を含
   む、請求項１〜４のいずれかに記載の剤。
6. 【請求項６】 １)式II、 【化３】 [式中、Ｗ'はＭｅＢｍｔまたはジヒドロ−ＭｅＢｍｔ； ＸはαＡｂｕ,Ｖａｌ,Ｔｈｒ,ＮｖａまたはＭｅＯＴｈ
   ｒ； ＲはＳａｒまたは(Ｄ)−ＭｅＡｌａ； ＹはＭｅＬｅｕ,γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ,ＭｅＩｌ
   ｅ,ＭｅＶａｌ,ＭｅＴｈｒ,ＭｅＡｌａ,ＭｅａＩｌｅま
   たはＭｅａＴｈｒ； および ＺはＶａｌ,Ｌｅｕ,ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕ；但し
   ＹがＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａであるとき、ＺがＭｅ
   ＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり、２)Ｗ'がＭｅＢｍｔ、
   ＲがＳａｒ、およびＹがγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕで
   あるとき、ＺはＶａｌ以外のものである］で示される化
   合物。
7. 【請求項７】 式II' 【化４】 [式中、Ｗ'はＭｅＢｍｔまたはジヒドロ−Ｍｅｂｍｔ； Ｙ'はγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ,ＭｅＶａｌ,ＭｅＴ
   ｈｒまたはＭｅＩｌｅ； およびＺ'はＶａｌまたはＭｅＶａｌである。但しＷ'が
   ＭｅＢｍｔであるとき、Ｙ'はγ−ヒドロキシ−ＭｅＬ
   ｅｕ以外のものである］で示される請求項６記載の化合
   物。
8. 【請求項８】[ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ］¹−[γ−ヒドロ
   キシ−ＭｅＬｅｕ］⁴−「シクロスポリン」、 [ＭｅＶａｌ］⁴−「シクロスポリン」、 [ＭｅＩｌｅ］⁴−「シクロスポリン」、 [ＭｅＴｈｒ］⁴−「シクロスポリン」、 [Ｎｖａ］²−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ］⁴−「シク
   ロスポリン」、 [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ］⁴−[γ−ヒドロキシ−
   ＭｅＬｅｕ］⁶−「シクロスポリン」、 [ＭｅＶａｌ］⁵−「シクロスポリン」、および [ＭｅＯＴｈｒ］²−[(Ｄ)ＭｅＡｌａ］³−[ＭｅＶａ
   ｌ］⁵−「シクロスポリン」を含むグループから選択さ
   れた化合物。
9. 【請求項９】 ［ＭｅＩｌｅ］⁴−「シクロスポリン」
   である、請求項８記載の化合物。
10. 【請求項１０】 栄養培地中に真菌株ＤＳＭ６６２７を
    培養し、発酵ブロスから生成物を単離することを含む
    ［ＭｅＩｌｅ］⁴−「シクロスポリン」の製造方法。
11. 【請求項１１】 ［ＭｅＩｌｅ］⁴−「シクロスポリ
    ン」産生能を有するトリポクラジウム・インフラツムＤ
    ＳＭ６６２７。
12. 【請求項１２】 栄養培地中に真菌株ＤＳＭ６１８２を
    培養し、１個またはそれ以上のＭｅＬｅｕ残基をもつシ
    クロスポリンを加え、発酵ブロスから生成物を単離する
    ことを含む、１個またはそれ以上のγ−ヒドロキシ−Ｍ
    ｅＬｅｕ残基を持つシクロスポリンの製造方法。
13. 【請求項１３】 γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ残基を持
    つシクロスポリン産生能を有するトリポクラジウム・イ
    ンフラツムＤＳＭ６１８２。