JP2026501211A

JP2026501211A - Ｂ型肝炎組成物

Info

Publication number: JP2026501211A
Application number: JP2025536017A
Authority: JP
Inventors: バヤット，ババック; ムーサヴィ，カンビズ; ヴァシレフ，ヴェンツィスラフ
Original assignee: グラクソスミスクラインバイオロジカルズソシエテアノニム
Priority date: 2022-12-19
Filing date: 2023-12-18
Publication date: 2026-01-14
Also published as: CN120456919A; MX2025007159A; EP4637812A1; WO2024133160A1

Abstract

慢性Ｂ型肝炎感染症を治療するための組成物であって、Ｂ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡを含み、該ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）内にカプセル化されている組成物。【選択図】図１Ａ

Description

本発明は、慢性Ｂ型肝炎の治療に使用するための組成物であって、１種以上のＢ型肝炎抗原をコードするｍＲＮＡを含む組成物、及び関連する態様に関する。

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症は、公衆衛生上における大きな問題である。世界全体で、２０１９年に２億９６００万人が慢性Ｂ型肝炎感染症と共に生活しており、毎年１５０万人が新たに感染しているとＷＨＯは推定している（ＷＨＯ，２０２１）。ＨＢＶ感染の臨床経過と転帰は、感染を獲得した年齢と、ウイルスと個人の免疫応答との間の複雑な相互作用によって大きく左右される。したがって、ＨＢＶに暴露されると、急性肝炎を発症して自然に治癒する場合もあれば、不活性型Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）保因者状態、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌（ＨＣＣ）など、さまざまな形態の慢性感染症に進展する場合もある。慢性感染者（血清ＨＢｓＡｇが６ヵ月以上検出された状態と定義される）の１５～４０％が肝臓の後遺症を発症すると考えられており、そのうち肝硬変（ＬＣ）、肝機能低下、肝細胞癌（ＨＣＣ）が主な合併症である。

乳幼児への普遍的なＢ型肝炎予防接種の実施は、多くの流行国においてＢ型肝炎の発生率と有病率を減少させる上で非常に効果的であったが、青少年や成人における慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）の有病率の強力な減少にはまだつながっておらず、導入後数十年でＨＢＶ関連死に影響するとは予想されていない。２０１９年、世界保健機関（ＷＨＯ）は、ＨＢＶ関連の原因による死亡者数は８２万人で、そのほとんどが肝硬変と肝細胞がん（原発性肝がん）であると推定した（ＷＨＯ，２０２１）。

慢性Ｂ型肝炎の臨床管理は、疾患の進行、ひいてはＨＣＣの発症を予防することによって、生存期間と生活の質を改善することを目的としている。現在の治療戦略は、ＨＢＶ誘発性肝疾患の安定化の達成と進行予防のために、主にＨＢＶＤＮＡ複製の長期抑制に基づいている。血清ＨＢＶＤＮＡレベルは、現在の全ての治療モダリティの基本的なエンドポイントである。（検出可能な）Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）の消失を達成することは重要なバイオマーカーであるが、抗ＨＢｓ血清転換の有無にかかわらずＨＢｓＡｇの消失は、ＨＢＶ複製とウイルスタンパク質の発現の意義深い抑制を示すため、一般に「機能的治癒」を表す最適なエンドポイントと考えられている（Ｒｅｖｉｌｌ，２０１９；Ｂｌｏｃｋ，２０１７；Ｃｏｒｎｂｅｒｇ，２０１７）。現在、ＣＨＢ患者に対する主な治療選択肢は、ペグインターフェロンα（ＰｅｇＩＦＮα）による治療、又はヌクレオシド（ヌクレオチド）アナログ（ＮＡ）による治療の２つである（ＥＡＳＬ、２０１７）。ＰｅｇＩＦＮαは、限られた期間の治療で長期的な免疫制御を誘導することを目的とし、持続的な治療外制御を達成し得るが、持続的なウイルス応答とＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）消失は、ごく一部の患者に限られる。さらに、忍容性が低く、長期的な安全性に懸念があるため、この種の治療が不適格な患者も相当数いる。

ＮＡは、ＨＢＶポリメラーゼ逆転写酵素活性の阻害を通じてＤＮＡ複製を抑制することにより作用する。欧州でＨＢＶ治療薬として承認されているＮＡには、エンテカビル（ＥＴＶ）、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド（ＴＡＦ）など、ＨＢＶ耐性に対する障壁が高い薬や、ラミブジン（ＬＡＭ）、アデホビルジピボキシル（ＡＤＶ）、テルビブジン（ＴＢＶ）など、ＨＢＶ耐性に対する障壁が低い薬が挙げられる。耐性に対する障壁の高い強力なＮＡによる治療の主な利点は、その予測可能な高い長期抗ウイルス効果であり、適合患者の大部分においてＨＢＶＤＮＡ抑制につながり、安全性プロフィールも良好であることである。ＮＡ治療の欠点は、長期にわたる治療レジメンであることである。なぜなら、ＮＡでは通常ＨＢＶの根絶が達成されず、ＮＡを中止するとＨＢＶが再発し得るからである。

ＨＢｓＡｇ血清クリアランスの割合が低く、オフＮＡウイルス再発のリスクが高いため、ほとんどの患者は長期あるいは無期限のＮＡ治療下に維持されているが、これは患者の治療コンプライアンスの低下、経済的コストの増加、長期曝露による薬物毒性や薬剤耐性変異のリスク上昇につながる可能性がある。したがって、有限のレジメンで「機能的治癒」を達成するための新しい戦略が必要である。

メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、遺伝子の遺伝配列に対応する一本鎖のＲＮＡ分子で、タンパク質を生成する過程でリボソームによって読み取られる。ｍＲＮＡベースのワクチンは、弱毒化／不活化病原体やサブユニットワクチンを含む従来の戦略に代わるワクチン接種方法を提供する（Ｚｈａｎｇ，２０１９）。ｍＲＮＡワクチンは、非複製型ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ）又は自己複製型ＲＮＡ（自己増幅型ｍＲＮＡ又はＳＡＭとも呼ばれる）を利用し得る。非複製ｍＲＮＡベースのワクチンは通常、目的の抗原をコードし、５’及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）、５’キャップ及びポリ（Ａ）テールを含むが、自己増幅型ＲＮＡは細胞内ＲＮＡ増幅を可能にするウイルス複製機構もコードする（Ｐａｒｄｉ，２０１８）。

本発明は、ウイルス又は臨床的再発なしに患者がＮＡ治療を安全に中止できるようにするために、ＨＢｓＡｇをクリアできるＨＢＶ治療の必要性に対処するのに貢献することを目的とする。

本開示は、少なくともＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物を提供し、ｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中にカプセル化されている。実施形態において、ＨＢｃは、ヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合される。

一態様において、本開示は、少なくとも１種のＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）をコードするｍＲＮＡを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症を治療するための組成物を提供し、前記ｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中にカプセル化されている。実施形態において、ＨＢｓＡｇは、Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）である。実施形態において、ＨＢｓＡｇはヒト不変鎖（ｈＩｉ）と融合している。

さらなる態様において、ｍＲＮＡは非複製性である。他の態様において、ｍＲＮＡは自己複製型ｍＲＮＡ（ＳＡＭ）である。

他の態様において、ｍＲＮＡを含む組成物は、１つ又は複数の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと逐次的又は同時に投与される。一実施形態において、組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）、組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む。さらなる実施形態において、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、アジュバントと共に投与される。アジュバントはＡＳ０１であり得る。

また、本明細書には慢性Ｂ型肝炎感染症の治療方法も記載されている。この方法は、プライムブーストレジメンを含み得る。Ｂ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡをプライミング投与として投与し、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドをブースター投与として投与し得る。一実施形態において、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、ブースター投与としてアジュバントと共に投与され得る。アジュバントはＡＳ０１であり得る。

また、本明細書には、以下のステップ：（ａ）Ｂ型肝炎ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むアデノウイルスベクターをヒトに投与するステップ；（ｂ）Ｂ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡをヒトに投与するステップ；及び（ｃ）少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドをヒトに投与するステップ、を含む、ヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症を治療する方法が記載される。このような方法は、（ａ）アデノウイルスベクターをプライミング投与として投与すること；（ｂ）ｍＲＮＡをブースター投与として投与すること；及び（ｃ）少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドを１回以上のブースト投与として投与することを含む、異種プライム－ブーストレジメンであり得る。一実施形態において、アデノウイルスベクターは、複製能欠損型チンパンジーアデノウイルス（ＣｈＡｄ）ベクターである。

本発明はまた、１種以上のポリペプチドと逐次的又は同時に投与されるｍＲＮＡを含む組成物を提供する。さらなる実施形態において、１種以上のポリペプチドは、アジュバントと共に投与される。アジュバントはＡＳ０１であり得る。

一態様では、少なくとも１種のポリペプチドと組み合わせたｍＲＮＡをヒトに投与することを含む方法がある。構成要素（すなわち、ｍＲＮＡ及びポリペプチド）は、異種プライムブーストレジメンで逐次投与し得る。異種プライムブーストレジメンを用いる場合、ｍＲＮＡはプライミング投与として投与され、少なくとも１種のポリペプチドはブースター投与として投与される。別の態様では、少なくとも１種のポリペプチドをプライミング投与として投与し、ｍＲＮＡをブースター投与として投与する。少なくとも１種のポリペプチドは、アジュバントの有り無し関係なく投与し得る。特定の一実施形態では、ポリペプチドはアジュバントと共に投与される。一実施形態において、ｍＲＮＡは、アジュバント添加ポリペプチドと逐次投与される。別の実施形態において、ｍＲＮＡは、アジュバント添加ポリペプチドと同時に（例えば、異なる場所で同時に）投与される。アジュバントは好ましくはＡＳ０１である。

配列の簡単な説明
配列番号１：ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号２：ＨＢｃ切断型のアミノ酸配列
配列番号３：口蹄疫ウイルスの２Ａ切断領域を組み込むスペーサーのアミノ酸配列
配列番号４：口蹄疫ウイルスの２Ａ切断領域を組み込むスペーサーをコードするヌクレオチド配列
配列番号５：ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号６：ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号７：ｈＩｉのアミノ酸配列
配列番号８：ｈＩｉをコードするヌクレオチド配列
配列番号９：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号１０：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号１１：ＨＢｃのアミノ酸配列
配列番号１２：ｈＩｉ代替バリアントのアミノ酸配列
配列番号１３：ｈＩｉ代替バリアントをコードするヌクレオチド配列
配列番号１４：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓの代替核酸配列
配列番号１５：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓの代替アミノ酸配列
配列番号１６：空ＳＡＭベクターの核酸配列
配列番号１７：ｈＩｉ＿ＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（Ｇｅｎｅｗｉｚ）核酸配列
配列番号１８：ｈＩｉ＿ＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭプラスミド配列
配列番号１９：ＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（Ｇｅｎｅｗｉｚ）核酸配列
配列番号２０：ＳＡＭプラスミド配列中のＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓ
配列番号２１：ｈＩｉ－ＨＢｃのアミノ酸配列
配列番号２２：ｈＩｉ－ＨＢｃをコードするヌクレオチド配列
配列番号２３：ｈＩｉ－ＨＢｃｍＲＮＡプラスミド配列（ＵＴＲ４）
配列番号２４：ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号２５：ＨＢｓｍＲＮＡプラスミド配列（ＵＴＲ４）
配列番号２６：ｈＩｉ－ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号２７：ｈＩｉ－ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号２８：ｈＩｉ－ＨＢｓｍＲＮＡプラスミド配列（ＵＴＲ４）
配列番号２９：ＩＲＥＳヌクレオチド配列
配列番号３０：ｈＩｉ＿ＨＢｃｍＲＮＡ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（ＣｏｄｅＲＮＡ２）核酸配列
配列番号３１：ＨＢｓｍＲＮＡ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（ＣｏｄｅＲＮＡ２）核酸配列
配列番号３２：ｈＩｉ＿ＨＢｓｍＲＮＡ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（ＣｏｄｅＲＮＡ２）核酸配列

ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）でブーストした後の、脾臓におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１２／１３日後（１２／１３ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によりＨＢコア（ＨＢｃ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するため、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、横線は幾何平均（ＧＭ）を表す。ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）でブーストした後の、脾臓におけるＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１２／１３日後（１２／１３ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によりＨＢ表面（ＨＢｓ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するため、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、横線は幾何平均（ＧＭ）を表す。ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）でブーストした後の、脾臓におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１２／１３日後（１２／１３ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によりＨＢコア（ＨＢｃ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価するため、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、横線は幾何平均（ＧＭ）を表す。ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）でブーストした後の脾臓におけるＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１２／１３日後（１２／１３ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によりＨＢ表面（ＨＢｓ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価するため、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、横線は幾何平均（ＧＭ）を表す。ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶによるプライミング及びＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）によるブースト後のＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的抗体応答を示す。２回目の免疫化の１２／１３日後に、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＢｃＩｇＧ抗体力価を評価するため、血清サンプルを採取した。各群について、各点は個々の動物の抗ＨＢｃＩｇＧ抗体力価を表し、カラムは９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均（ＧＭ）を表す。ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶによるプライミング及びＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）によるブースト後のＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的抗体応答を示す。２回目の免疫化の１２／１３日後に、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＢｓＩｇＧ抗体力価を評価するため、血清サンプルを採取した。各群について、各点は個々の動物の抗ＨＢｓＩｇＧ抗体力価を表し、カラムは９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、１４ｄｐＩＩ（すなわち、２回目の投与の１４日後）の脾臓におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１４日後（１４ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によってＨＢコア（ＨＢｃ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価するために、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、２２ｄｐＩＶ（すなわち、４回目の投与の２２日後）の脾臓におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。４回目の免疫化の２２日後（２２ｄｐＩＶ）に、細胞内染色によりＨＢコア（ＨＢｃ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価するために、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、１４ｄｐＩＩ（すなわち、２回目の投与の１４日後）の脾臓におけるＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１４日後（１４ｄｐＩＶ）に、細胞内染色によってＨＢ表面（ＨＢｓ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価するために、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、２２ｄｐＩＶ（すなわち、４回目の投与の２２日後）の脾臓におけるＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。４回目の免疫化の２２日後（２２ｄｐＩＶ）に、細胞内染色によってＨＢ表面（ＨＢｓ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を評価するために、脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、１４ｄｐＩＩ（すなわち、２回目の投与の１４日後）の脾臓におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１４日後（１４ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によってＨＢコア（ＨＢｃ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、２２ｄｐＩＶ（すなわち、４回目の投与の２２日後）の脾臓におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。４回目の免疫化の２２日後（２２ｄｐＩＶ）に、細胞内染色によってＨＢコア（ＨＢｃ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、１４ｄｐＩＩ（すなわち、２回目の投与の１４日後）の脾臓におけるＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。２回目の免疫化の１４日後（１４ｄｐＩＩ）に、細胞内染色によってＨＢ表面（ＨＢｓ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、２２ｄｐＩＶ（すなわち、４回目の投与の２２日後）の脾臓におけるＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。４回目の免疫化の２２日後（２２ｄｐＩＶ）に、細胞内染色によってＨＢ表面（ＨＢｓ）特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を評価するために脾臓を採取した。各点は個々の動物を表し、カラムは幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、１３ｄｐＩＩ／１４ｄｐＩＩ（すなわち、２回目の投与の１３／１４日後）に測定した抗ＨＢｃ結合抗体力価を示す。２回目の免疫化の１３／１４日後に、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＢｃＩｇＧ抗体力価を評価するため、血清サンプルを採取した。各群について、各点は個々の動物の抗ＨＢｃＩｇＧ抗体力価を表し、カラムは９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、２２ｄｐＩＶ（すなわち、４回目の投与の２２日後）に測定した抗ＨＢｃ結合抗体力価を示す。４回目の免疫化の２２日後に、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＢｃＩｇＧ抗体力価を評価するため、血清サンプルを採取した。各群について、各点は個々の動物の抗ＨＢｃＩｇＧ抗体力価を表し、カラムは９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、１３ｄｐＩＩ／１４ｄｐＩＩ（すなわち、２回目の投与の１３／１４日後）に測定した抗ＨＢｓ結合抗体力価を示す。２回目の免疫化の１３／１４日後に、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＢｓＩｇＧ抗体力価を評価するため、血清サンプルを採取した。各群について、各点は個々の動物の抗ＨＢｓＩｇＧ抗体力価を表し、カラムは９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均（ＧＭ）を表す。表２に詳述した全ての群（ここで、Ｃ＝ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｍ＝ＭＶＡ－ＨＢＶ、Ｓ＝ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ、Ｐ＝ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１）について、２２ｄｐＩＶ（すなわち、４回目の投与の２２日後）に測定した抗ＨＢｓ結合抗体力価を示す。４回目の免疫化の２２日後に、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＢｓＩｇＧ抗体力価を評価するため、血清サンプルを採取した。各群について、各点は個々の動物の抗ＨＢｓＩｇＧ抗体力価を表し、カラムは９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均（ＧＭ）を表す。異なる群で検出された循環ＨＢｓ抗原力価の動態を示す。循環ＨＢｓ抗原力価の幾何平均（ＧＭ）は、９５％信頼区間を伴う四角で表されている。異なる群における免疫前力価と比較した、２回目及び４回目の免疫化後の循環ＨＢｓ抗原力価を示す。幾何平均比は、９０％信頼区間を伴う四角で表されている。図１１Ａの続き。異なる群において検出されたＡＳＴ及びＡＬＴ値の動態を示す。免疫前力価と比較した、ＡＳＴ及びＡＬＴ力価の幾何平均比（ＧＭＲ）は、９５％信頼区間を伴う三角形で表されている。ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のサイトカイン共発現プロフィールを示す。少なくとも１つ、２つ又は３つのサイトカイン（ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－α）を発現するＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を、２回目の免疫化の１４日後に細胞内染色によって評価した。群ごとの中央値をプロットした。ＨＢｓ特異的Ｔ細胞のサイトカイン共発現プロフィールを示す。少なくとも１つ、２つ又は３つのサイトカイン（ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－α）を発現するＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を、２回目の免疫化の１４日後に細胞内染色によって評価した。群ごとの中央値をプロットした。実施例で使用したＳＡＭ－ＨＢＶコンストラクトを示す。ＳＡＭコンストラクトは、ＲＮＡ増幅に必要なＶＥＥＶＴＣ－８３の遺伝的要素（非構造タンパク質配列、ｎｓＰ１～４）を含む。構造タンパク質をコードする配列は、サブゲノムプロモーターの制御下にあるＨＢＶポリペプチドをコードする導入遺伝子に置き換えられている。空のＳＡＭプラスミドを配列番号１６に示す。挿入物は配列番号１６のヌクレオチド７５６１の後に始まる。２つの異なるＨＢＶコンストラクトを示す。両方のコンストラクトにおいて、ＨＢｃ及びＨＢｓタンパク質は２Ａ配列によって分離されている。一方のコンストラクトでは、ヒト不変鎖（ｈＩｉ）がＨＢｃに融合している。配列番号１８のＳＡＭプラスミド配列のｈＩｉ＿ＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭプラスミドマップを示す。配列番号２０のＳＡＭプラスミド配列のＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭプラスミドマップを示す。３つの異なるｍＲＮＡの共投与後のＨＢＶ特異的ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。図１７Ａの続き。実施例３で観察されたＨＢｃ特異的及びＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。図１８Ａの続き。（ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ）ｍＲＮＡコンストラクトの組み合わせ対ｈＩｉ－ＨＢｃ及びｈＩｉ－ＨＢｓ単体での、図１８のＣＤ８＋Ｔ細胞応答の幾何平均比（ＧＭＲ）の比較を示す。図１９Ａの続き。実施例３で観察されたＨＢｃ特異的及びＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示す。図２０Ａの続き。実施例３で観察されたＨＢｃ特異的ＩｇＧ応答を示す。

ＨＢＶ抗原
少なくとも１０種のＨＢＶの遺伝子型（ＡからＪまで）が同定されている（Ｌｉｕ，２０２１）。特定のＨＢＶ遺伝子型の中で、複数のサブ遺伝子型も同定されている。例えば、遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｆはさらにサブ遺伝子型に分割されている。開示された組成物及び方法において使用するための抗原は、全てのＨＢＶ遺伝子型にわたって免疫学的カバー範囲を提供するように選択される。ＨＢＶゲノムは、（ｉ）ウイルスポリメラーゼ（Ｐｏｌ）、（ｉｉ）ウイルス表面タンパク質（Ｌ－ＨＢｓ、Ｍ－ＨＢｓ及びＨＢｓ）、（ｉｉｉ）プレコア／コアタンパク質（ＨＢｅ及びＨＢｃ）、及び（ｉｖ）Ｘタンパク質（ＨＢｘ）をコードする４つの重複するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。

Ｂ型肝炎ウイルス表面タンパク質（ＨＢｓＡｇ）は、大（Ｌ）表面タンパク質、中（Ｍ）表面タンパク質、小（Ｓ）表面タンパク質という、関連するが異なる３つのタンパク質からなる。ＨＢＶ表面タンパク質（Ｌ、Ｍ、Ｓ）は同じＯＲＦの代替翻訳に由来する。大表面タンパク質は３つのドメイン：ｐｒｅＳ１（遺伝子型により１０８／１１８／１１９アミノ酸を有する；遺伝子型ＡのｐｒｅＳ１ドメインは１１９アミノ酸）、ｐｒｅＳ２（５５アミノ酸を有する）、小表面タンパク質（ＨＢｓ、２２６アミノ酸を有する）から構成される。中表面タンパク質は、ｐｒｅＳ２と小表面タンパク質（ＨＢｓ）の２つのドメインから構成される。小表面タンパク質（ＨＢｓ）はｐｒｅＳ１やｐｒｅＳ２を含まず、２２６アミノ酸長である。

Ｂ型肝炎コアタンパク質抗原（ＨＢｃ）は、遺伝子型及び遺伝子サブタイプ間で高度に保存されており、Ｂ型肝炎小表面タンパク質抗原（ＨＢｓ）の配列は、広範な中和応答の誘導を可能にする、遺伝子型横断的に保存された重要なＢ細胞エピトープを含むように選択される。好適には、開示された方法及び組成物において使用するためのＨＢｃ及びＨＢｓの配列は、遺伝子型／サブタイプＡ２のものに基づく。

好適には、開示された方法及び組成物において使用するためのＨＢＶ表面タンパク質抗原は、小（Ｓ）表面抗原タンパク質に由来する。特に、本明細書で使用するためのＨＢＶ表面抗原は、ＨＢｓに由来し得る。

特に、好適なＨＢＶ表面タンパク質抗原は、遺伝子型ＡのＨＢＶａｄｗ２株の小（Ｓ）タンパク質（ＨＢｓ）を含む。例えば、好適なＨＢｓ抗原は、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する。好ましい実施形態において、好適なＨＢｓ抗原は、配列番号１のアミノ酸配列の２２６アミノ酸を有する。一態様において、ＨＢｓ抗原はｈＩｉに融合され得る。一実施形態において、ｈＩｉ－ＨＢｓ抗原は、配列番号２６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する。好ましい実施形態において、ｈＩｉ－ＨＢｓは、配列番号２６のアミノ酸配列を有する。

Ｂ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）は、ウイルスゲノムをパッケージングするヌクレオカプシド殻の主成分である。このタンパク質（１８３～１８５アミノ酸長）は、感染細胞の細胞質で発現する。ＨＢｃは、１４９残基のアセンブリドメイン、及びＣ末端に３４～３６残基のＲＮＡ結合ドメインを含む。開示された方法及び組成物に用いられるＨＢｃ抗原は、全長であり得、又はＣ末端が切断されたタンパク質（ＲＮＡ結合Ｃ末端を欠く）を含み得、例えば、野生型Ｂ型肝炎コア抗原タンパク質の１～１４５番目のアミノ酸、例えば１～１４５番目のアミノ酸、１～１４６番目のアミノ酸、１～１４７番目のアミノ酸、１～１４８番目のアミノ酸、又は１～１４９番目のアミノ酸を含む。切断型タンパク質は、ヌクレオカプシド粒子に組み立てられる能力を保持している。開示された方法及び組成物に用いるのに好適なＨＢｃ抗原は、遺伝子型ＡのＨＢＶａｄｗ２株由来のアミノ酸配列を有する。組換えポリペプチドとして使用する場合、組換えＨＢｃタンパク質は、野生型のＣ末端で好適に切断されている。特に、組換えＨＢｃタンパク質は、配列番号２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有する。好ましい実施形態では、組換えＨＢｃタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を有する。ｍＲＮＡ又はウイルスベクターから発現させる場合、ＨＢｃ抗原は、好適には全長ＨＢｃ抗原である。特に、ＨＢｃ抗原は、配列番号１１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有する。一実施形態においては、ＨＢｃ抗原は配列番号１１のアミノ酸配列を有する。一態様では、ＨＢｃ抗原はｈＩｉと融合し得る。一実施形態では、ｈＩｉ－ＨＢｃは、配列番号２１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有する。好ましい実施形態では、ｈＩｉ－ＨＢｃは配列番号２１のアミノ酸配列を有する。

不変鎖
抗原は、体内の免疫応答、特に抗体の産生を誘導する物質である。抗原は外来のもの、すなわち病原性のものと、生物自身に由来する又はそれから生じるものがあり、後者は自己抗原（ｓｅｌｆ－ａｎｔｉｇｅｎ）又は自己抗原（ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ）と呼ばれる。抗原はＭＨＣ分子によって抗原提示細胞表面に提示され得る。ＭＨＣ分子にはＭＨＣクラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）とＭＨＣクラスＩＩ（ＭＨＣ－ＩＩ）の２つのクラスがある。ＭＨＣ－ＩＩ分子は膜結合型レセプターで、小胞体で合成され、ＭＨＣクラスＩＩコンパートメントとして小胞体から出る。内因性ペプチド、すなわち自己抗原がＭＨＣ－ＩＩ分子に結合し、免疫応答を引き起こすために提示されるのを防ぐために、新生ＭＨＣ－ＩＩ分子は別のタンパク質である不変鎖と相互作用し、ＭＨＣ－ＩＩ分子のペプチド結合クレフトをブロックする。

ヒトの不変鎖（ｈＩｉ、細胞膜に発現している場合はＣＤ７４としても知られる）は、進化的に保存されたＩＩ型膜タンパク質であり、細胞内や免疫系全体でいくつかの役割を担っている（Ｂｏｒｇｈｅｓｅ，２０１１）。ＭＨＣクラスＩＩコンパートメントが、貪食され分解された外来タンパク質を含む後期エンドソームに融合すると、不変鎖は切断され、ＭＨＣ－ＩＩ分子に結合したＣＬＩＰ領域だけが残る。第２のステップにおいて、ＣＬＩＰはＨＬＡ－ＤＭ分子によって除去され、ＭＨＣ－ＩＩ分子は自由に外来タンパク質の断片と結合できるようになる。この断片は、ＭＨＣクラスＩＩコンパートメントが細胞膜と融合すると抗原提示細胞表面に提示され、外来抗原を他の細胞、主にＴヘルパー細胞に提示する。

不変鎖と抗原の融合物をコードするアデノウイルス発現系をワクチン接種に使用すると、抗原に対する免疫応答が増大することが知られている（ＷＯ２００７／０６２６５６を参照、これはＵＳ２０１１／０２９３７０４としても公開されており、不変鎖配列を開示する目的で参照により組み込まれる）。すなわち、不変鎖は抗原の免疫原性を増強する。さらに、前記アデノウイルスコンストラクトは、プライムブーストワクチン接種レジメンの文脈における免疫応答のプライミングに有用であることが証明されている（ＵＳ２０１６／００００９０４としても公開されたＷＯ２０１４／１４１１７６；及びＵＳ２０１０／０２７８９０４としても公開されたＷＯ２０１０／０５７５０１を参照、これらは不変鎖配列及び不変鎖配列をコードするアデノウイルスベクターを開示する目的で参照により組み込まれる）。

本発明において、Ｂ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡは、不変鎖（Ｉｉ）、好ましくはヒト不変鎖（ｈＩｉ）をコードするヌクレオチド配列を含む。ｈＩｉの２つのアミノ酸配列は、配列番号７及び配列番号１２に示されている。好ましい実施形態において、不変鎖は配列番号１２を有する。好適には、ｈＩｉをコードするヌクレオチド配列は、ＨＢｃ抗原、及び／又はＨＢｓ抗原をコードするヌクレオチド配列にＮ末端において融合される。

本発明においては、少なくともＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡを含み、ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中にカプセル化されており、ＨＢｃをコードするヌクレオチド配列のＮ末端がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、慢性Ｂ型肝炎感染症を治療するための組成物が提供される。

本発明においてはまた、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードする第１のｍＲＮＡ、及びＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓ）をコードする第２のｍＲＮＡを含み、第１及び第２のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されており、ＨＢｃ及びＨＢｓをコードするヌクレオチド配列のＮ末端がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、慢性Ｂ型肝炎感染症を治療するための組成物が提供される。

一実施形態において、ｍＲＮＡは、配列番号９及び配列番号１５（好ましくは、配列番号１５）のアミノ酸配列をコードする。配列番号１５は、配列番号１２で報告されるｈＩｉ、配列番号１１で報告されるＨＢｃ、配列番号３で報告される２Ａ、及び配列番号１で報告されるＨＢの融合体である。

特定の実施形態において、本明細書に開示される方法及び組成物において使用するためのアデノウイルスベクター（Ａｄ）、例えば、チンパンジーアデノウイルスベクター（ＣｈＡｄ）は、ｈＩｉをコードするヌクレオチド配列を含み得る。開示されたアデノウイルスベクターに含まれるようなｈＩｉの２つのアミノ酸配列は、配列番号７及び配列番号１２に示され、これらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号８及び配列番号１３に示される。好ましい実施形態において、不変鎖は、配列番号１２を有する。好適には、ｈＩｉをコードするヌクレオチド配列は、ＨＢｃ抗原をコードするヌクレオチド配列にＮ末端で融合される。

メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）
非複製ｍＲＮＡ
本開示は、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する組換えメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む組成物を提供する。本明細書で使用される場合、用語「組換えメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）」は、少なくとも１種の目的のポリペプチドをコードし、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ、ｉｎｓｉｔｕ、又はｅｘｖｉｖｏで、コードされた目的のポリペプチドを産生するために翻訳されることが可能な、組換えて産生された任意のポリヌクレオチドを指す。ｍＲＮＡは通常、目的のポリペプチドをコードする部分（すなわち、Ｂ型肝炎ウイルス抗原のような異種ポリペプチドをコードする部分）、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、任意の３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）、３’ポリ（アデノシン１リン酸）（３’ポリ（Ａ））テール、及び５’キャップを含む。５’ＵＴＲは目的のポリペプチドの上流（すなわち５’）にあり、一方３’ＵＴＲは目的のポリペプチドの下流（すなわち３’）にある。５’ＵＴＲは転写開始部位で始まり、目的のポリペプチドのコード領域の翻訳開始配列（すなわち、５’－アデノシン、ウリジン、グアノシン－３’（５’－ＡＵＧ－３’）の配列）の１ヌクレオチド前で終わる。３’ＵＴＲは、目的のポリペプチドのコード領域の翻訳終止コドンに続く。

一実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、構造的に改変又は化学的に改変され得る。本明細書において、「構造的」改変とは、ヌクレオチド自体に有意な化学的改変を加えることなく、ポリヌクレオチドにおいて２つ以上の連結ヌクレオチドが挿入、欠失、複製、反転、又はランダム化される改変を指す。構造的改変を行うためには化学結合が必然的に切断され、再形成されるため、構造的改変は化学的性質を有し、したがって化学的改変である。しかし、構造的改変はヌクレオチド配列の変化をもたらす。例えば、ポリヌクレオチド「ＡＴＣＧ」は「ＡＴ－５ｍｅＣ－Ｇ」に化学的に改変され得る。同じポリヌクレオチドが「ＡＴＣＧ」から「ＡＴＣＣＣＧ」に構造的に改変され得る。この場合、ジヌクレオチド「ＣＣ」が挿入され、ポリヌクレオチドの構造的改変がもたらされる。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、同じヌクレオシドタイプの全て又はいずれかが均一に化学的改変されているか、又は同じヌクレオシドタイプの全て又はいずれかが測定された割合で化学的改変されているが、ランダムに組み込まれている場合（例えば、全てのウリジンがウリジン類似体、例えばシュードウリジンに置換されている場合）がある。別の実施形態では、ｍＲＮＡは、ポリヌクレオシド全体にわたって、同じヌクレオチドタイプの２つ、３つ、又は４つが均一に化学的改変され得る（例えば、全てのウリジン及び全てのシステインなどが同様に改変されている場合）。本開示のｍＲＮＡのポリヌクレオチドが化学的又は構造的に改変されている場合、当該ポリヌクレオチドは「改変ポリヌクレオチド」と呼ばれることがある。

一実施形態では、ｍＲＮＡは、５’キャップ／５’ＵＴＲ／ｈＩｉ／ＨＢｃ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。

一実施形態では、ｍＲＮＡは５’キャップ／５’ＵＴＲ／ＨＢｃ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。

一実施形態では、ｍＲＮＡは５’キャップ／５’ＵＴＲ／ｈＩｉ／ＨＢｓ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。

一実施形態では、ｍＲＮＡは５’キャップ／５’ＵＴＲ／ＨＢｓ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。

一部の実施形態において、ｍＲＮＡは５’キャップを含む。一部の実施形態において、ｍＲＮＡは、７－メチルグアノシン、５’の第１リボヌクレオシド、任意で５’の第２リボヌクレオシド、及び任意で３リン酸架橋をさらに含む。一部の実施形態において、７－メチルグアノシンは、５’の第１リボヌクレオシドに直接的又は間接的に５’－ｔｏ－５’で連結される。一部の実施形態において、７－メチルグアノシンは、三リン酸架橋によって５’の第１リボヌクレオシドに５’－ｔｏ－５’で連結される。一部の実施形態において、５’第１のリボヌクレオシドは、２’－メチル化リボース（２’－Ｏ－Ｍｅ）（すなわち、キャップ－１又はキャップ－２）を含む。一部の実施形態において、５’の第２リボヌクレオシドは、５’の第１リボヌクレオシドの３’末端に結合している。一部の実施形態において、５’の第２リボヌクレオシドは、２’－メチル化リボース（２’－Ｏ－Ｍｅ）（すなわち、キャップ－２）を含む。一部の実施形態において、５’の第１リボヌクレオシドは、２’－メチル化リボース（２’－Ｏ－Ｍｅ）を含み、５’の第２リボヌクレオシドは、２’－メチル化リボース（２’－Ｏ－Ｍｅ）（すなわち、キャップ－２）を含む。５’キャップは、ｍＲＮＡグアニリルトランスフェラーゼによって５’から５’への三リン酸連結を介してＲＮＡに連結されたグアノシンを含み、前記グアノシンのグアニンがその７位でメチル化されている。この文脈及び一部の実施形態において、５’から５’への三リン酸連結は、前記グアノシンのリボースの５’末端が、ｍＲＮＡのリボースの５’末端に、ｍＲＮＡグアニリルトランスフェラーゼによって三リン酸基を介して連結される場合に生じる。一部の実施形態において、その後、前記グアノシンのグアニンは、（グアニン－Ｎ７－）メチルトランスフェラーゼによって７位においてメチル化される。一部の実施形態において、７－メチルグアノシン５’－ｔｏ－５’の５’の第１リボヌクレオシドへの付加は、７－グアノシンの付加及び７－メチルグアノシン（すなわち、ＣＬＥＡＮＣＡＰ（登録商標））を得るためのさらなるメチル化なしに、一度に起こる。一部の実施形態において、５’の第１リボヌクレオシドへの７－メチルグアノシン５’－ｔｏ－５’の付加と、２’－メチル化リボースを含む５’の第１リボヌクレオシド又は２’－メチル化リボースを含む５’の第２リボヌクレオシドの付加が一度に起こる（すなわち、ＣＬＥＡＮＣＡＰ（登録商標））。一部の実施形態において、キャップ構造は予め形成され（すなわち、キャップ－１、キャップ－２、又はキャップ－０として、５’グアノシン／７－メチルグアノシン上の７－メチル基の付加の有無にかかわらず）、組換えＲＮＡ分子に付加される（すなわち、ライゲーションによる）。一部の実施形態において、予め形成されたキャップ構造は、参照により組み込まれるＣＬＥＡＮＣＡＰ（登録商標）ＡＧ製品インサート（Ｔｒｉｌｉｎｋカタログ番号Ｎ－７１１３）に記載されているように、５’－ＡＧ－３’開始配列と共に付加される。

さらにメチル化することなく、５’の第１リボヌクレオシドに５’－ｔｏ－５’結合した７－メチルグアノシンはキャップ－０として知られ、５’（ｍ７Ｇｐ）（ｐｐＮ）［ｐＮ］_Ｎとして表され、「Ｎ」は、ｍＲＮＡの最初の（５’）核酸塩基を示し、「ｐＮ」は、ＲＮＡ中のさらなるヌクレオチドを示し、「［ｐＮ］_Ｎ」中の「［．．．］_Ｎ」の付加は、ＲＮＡの繰り返し重合構造を示し、それによりＲＮＡ中の順次隣接する各ヌクレオチドをまとめて示す。

前記７－メチルグアノシンにすぐ隣接するｍＲＮＡのヌクレオシドのリボースの２’炭素への２’－Ｏ－メチルトランスフェラーゼによる付加的な酸素結合メチル化（すなわち５’の第１リボヌクレオシド）は５’（ｍ７Ｇｐ）（ｐｐｍ２Ｎ）［ｐＮ］_Ｎとして表されるｃａｐ－１構造を生じ、ここで、「ｍ２」の付加は、前記７－メチルグアノシンに（三リン酸結合を介して）隣接するヌクレオシドのリボースの２’炭素の酸素結合メチル化を示す。そしてさらに、５’第２のリボヌクレオシド（すなわち、ｃａｐ－１においてメチル化された５’第１のヌクレオシドのすぐ隣の次の（３’）ヌクレオシド）への付加的なメチル化は、５’（ｍ７Ｇｐ）（ｐｐｍ２Ｎ）（ｍ２ｐＮ）［ｐＮ］ｎとして表されるｃａｐ－２構造を生じ、ここで、後者の「ｍ２」の付加は、ｃａｐ－１においてメチル化されたヌクレオチドのすぐ隣のヌクレオチドのメチル化を示す。このキャップ－２のメチル化はまた、そのすぐ隣のヌクレオチドのリボースの２’炭素に対するものである（すなわち、２’－Ｏ－Ｍｅ）。一部の実施形態において、５’キャップは、キャップ－０、キャップ－１、又はキャップ－２である。一部の実施形態において、５’キャップはキャップ－０である。一部の実施形態において、５’キャップはキャップ－１である。一部の実施形態において、５’キャップはキャップ－２である。

一部の実施形態において、５’の第１リボヌクレオシド又は５’の第２リボヌクレオシドは、ｍＲＮＡに外因的に添加される。一部の実施形態において、５’第１のリボヌクレオシド又は５’第２のリボヌクレオシドは、ｍＲＮＡに内在的である（すなわち天然の配列が５’－ＵＵＡＡＴ－３’である場合、ｍ７Ｇｐの付加は、三リン酸ブライドが存在する場合、５’－ｍ７Ｇｐ（ｐｐＵＵＡＡＴ－３’をもたらす；天然の配列が同じである場合、キャップ－１構造は、５－’（ｍ７Ｇｐ）（ｐｐｍ２Ｕ）ＵＡＡＴ－３’をもたらし、キャップ－２構造は、５－’（ｍ７Ｇｐ）（ｐｐｍ２Ｕ）（ｍ２Ｕ）ＡＡＴ－３’をもたらす）。

ｃａｐ－１であれｃａｐ－２であれ、５’キャップのための全ての材料を提供するキット、及びｃａｐ－０キットにｃａｐ－１及びｃａｐ－２の容量を追加する補助的なキットを使用し得る。５’キャッピングの方法は、製造者の説明書に従って実施し得る。

一部の実施形態において、ｍＲＮＡは、３’ポリ（アデノシン一リン酸）（ポリ（Ａ））テールを含む。一部の実施形態において、３’ポリ（Ａ）テールは、３’ＵＴＲから３’である。一部の実施形態において、３’ポリ（Ａ）テールはｍＲＮＡの３’末端にある。

本明細書で開示するｍＲＮＡは改変され得る。本明細書で使用される「改変ｍＲＮＡ」又は「ＲＮＡ改変」という用語は、糖改変又は塩基改変と同様に、骨格改変を含む化学的改変を指し得る。この文脈において、本明細書で定義される改変ＲＮＡ分子は、ヌクレオチド類似体／改変、例えば骨格改変、糖改変又は塩基改変を含み得る。本発明に関連する骨格改変は、本明細書で定義されるＲＮＡ分子に含まれるヌクレオチドの骨格のリン酸塩が化学的に改変されるような改変である。本発明に関連する糖改変は、本明細書で定義されるＲＮＡ分子のヌクレオチドの糖の化学的改変である。さらに、本発明に関連する塩基改変は、ＲＮＡ分子のヌクレオチドの塩基部分の化学的改変である。この文脈において、ヌクレオチド類似体又は改変は、好ましくは、転写及び／又は翻訳に適用可能なヌクレオチド類似体から選択される。

一態様において、本明細書に記載の改変ＲＮＡ分子に組み込まれ得る改変ヌクレオシド及びヌクレオチドは、糖部分で改変され得る。例えば、２’ヒドロキシル基（ＯＨ）は、多数の異なる「オキシ」又は「デオキシ」置換基で改変又は置換され得る。「オキシ」－２’ヒドロキシル基の改変の例としては、限定されるものではないが、アルコキシ又はアリールオキシ（－ＯＲ、例えば、Ｒ＝Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール又は糖）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲ；２’ヒドロキシルが、例えば、メチレン架橋によって、同じリボース糖の４’炭素に連結されている「ロックド」核酸（ＬＮＡ）；及びアミノ基（－Ｏ－アミノ、ここで、前記アミノ基、例えば、ＮＲＲは、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、又はジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）又はアミノアルコキシであり得る。「デオキシ」改変としては、水素、アミノ（例えば、ＮＨ_２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、又はアミノ酸）が挙げられ；又はアミノ基は、リンカーを介して糖に結合し得、前記リンカーは、原子Ｃ、Ｎ、及びＯのうちの１つ又は複数を含む。糖基はまた、リボースの対応する炭素の立体化学的配置とは反対の立体化学的配置を有する１つ以上の炭素を含み得る。したがって、改変ＲＮＡ分子は、例えばアラビノースを糖として含むヌクレオチドを含み得る。

別の態様において、リン酸骨格は、改変ヌクレオシド及びヌクレオチドにおいてさらに改変され得、これらは本明細書に記載されるように改変ＲＮＡ分子に組み込まれ得る。骨格のリン酸基は、１つ以上の酸素原子を異なる置換基で置換することによって改変され得る。さらに、改変ヌクレオシド及びヌクレオチドは、非改変リン酸部分を本明細書に記載の改変リン酸で完全に置換することを含み得る。改変リン酸基の非限定的な例としては、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、水素ホスホネート、ホスホロアミデート、アルキル又はアリールホスホネート及びホスホトリエステルが挙げられるが、これらに限定されない。ホスホロジチオエートは、非連結酸素が両方とも硫黄で置換されている。リン酸リンカーはまた、連結酸素を窒素（架橋ホスホロアミデート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、炭素（架橋メチレンホスホネート）で置換することによって改変され得る。

本発明で使用され得る改変ヌクレオシド及びヌクレオチドは、さらに核酸塩基部分を改変され得る。ＲＮＡ中に見出される核酸塩基の例としては、アデニン、グアニン、シトシン及びウラシルが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、本明細書に記載のヌクレオシド及びヌクレオチドは、主溝面で化学的改変され得る。一部の実施形態において、主溝化学的改変は、アミノ基、チオール基、アルキル基、又はハロ基を含み得る。

改変ｍＲＮＡは、１種以上の改変ヌクレオシド及びヌクレオチドを含み得る。ヌクレオシド及びヌクレオチド、ならびに改変ヌクレオチド及びヌクレオシドの調製は当技術分野で周知であり、以下の文献を参照されたい：米国特許第４３７３０７１号、第４４５８０６６号、第４５００７０７号、第４６６８７７７号、第４９７３６７９号、第５０４７５２４号、第５１３２４１８号、第５１５３３１９号、第５２６２５３０号、第５７００６４２号。多くの改変ヌクレオシド及び改変ヌクレオチドが市販されている。

改変ヌクレオシド及びヌクレオチドに組み込まれ、ｍＲＮＡ分子内に存在する可能性のある改変核酸塩基には、シュードウリジン、Ｎ１－メチルシュードウリジン、Ｎ１－エチルシュードウリジン、２－メチルチオ－Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－メチルアデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン、１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン、１－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）、２－メチルアデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６イソペンテニルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；２’－Ｏ－メチルアデノシン；２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）；イソペンテニルアデノシン；Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン；Ｎ６－アセチルアデノシン；Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン；２－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデノシン；７－デアザ－アデノシン；Ｎ１－メチル－アデノシン；Ｎ６，Ｎ６（ジメチル）アデニン；Ｎ６－シス－ヒドロキシ－イソペンテニル－アデノシン；α－チオ－アデノシン；２－（アミノ）アデニン；２－（アミノプロピル）アデニン；２－（メチルチオ）Ｎ６（イソペンテニル）アデニン；２－（アルキル）アデニン；２－（アミノアルキル）アデニン；２－（アミノプロピル）アデニン；２－（ハロ）アデニン；２－（ハロ）アデニン；２－（プロピル）アデニン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＡＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＡＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドアデノシンＴＰ；６－（アルキル）アデニン；６－（メチル）アデニン；６－（アルキル）アデニン；６－（メチル）アデニン；７－（デアザ）アデニン；８－（アルケニル）アデニン；８－（アルキニル）アデニン；８－（アミノ）アデニン；８－（チオアルキル）アデニン；８－（アルケニル）アデニン；８－（アルキル）アデニン；８－（アルキニル）アデニン；８－（アミノ）アデニン；８－（ハロ）アデニン；８－（ヒドロキシル）アデニン；８－（チオアルキル）アデニン；８－（チオール）アデニン；８－アジド－アデノシン；アザアデニン；デアザアデニン；Ｎ６－（メチル）アデニン；Ｎ６－（イソペンチル）アデニン；７－デアザ－８－アザ－アデノシン；７－メチルアデニン；１－デアザアデノシンＴＰ；２’－フルオロ－Ｎ６－Ｂｚ－デオキシアデノシンＴＰ；２’－ＯＭｅ－２－アミノ－ＡＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ６－Ｂｚ－デオキシアデノシンＴＰ；２’－ａ－エチニルアデノシンＴＰ；２－アミノアデニン；２－アミノアデノシンＴＰ；２－アミノ－ＡＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；２－アジドアデノシンＴＰ；２’－ｂ－エチニルアデノシンＴＰ；２－ブロモアデノシンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；２－クロロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシアデノシンＴＰ；２－フルオロアデノシンＴＰ；２－ヨードアデノシンＴＰ；２－メルカプトアデノシンＴＰ；２－メトキシアデニン；２－メチルチオアデニン；２－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－ブロモアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－クロロアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－フルオロアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－ヨードアデノシンＴＰ；３－デアザアデノシンＴＰ；４’－アジドアデノシンＴＰ；４’－炭素環アデノシンＴＰ；４’－エチニルアデノシンＴＰ；５’－ホモアデノシンＴＰ；８－アザＡＴＰ；８－ブロモアデノシンＴＰ；８－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；９－デアザアデノシンＴＰ；２－アミノプリン；７－デアザ－２，６－ジアミノプリン；７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン；７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン；２，６－ジアミノプリン；７－デアザ－８－アザアデニン、７－デアザ－２－アミノプリン；２－チオシチジン；３－メチルシチジン；５－ホルミルシチジン；５－ヒドロキシメチルシチジン；５－メチルシチジン；Ｎ４－アセチルシチジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；５，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５－ホルミル－２’－Ｏ－メチルシチジン；リシジン；Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチルシチジン；Ｎ４－メチルシチジン；Ｎ４，Ｎ４－ジメチル－２’－ＯＭｅ－シチジンＴＰ；４－メチルシチジン；５－アザシチジン；シュードイソシチジン；ピロロシチジン；α－チオシチジン；２－（チオ）シトシン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＣＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＣＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドシチジンＴＰ；３（デアザ）５（アザ）シトシン；３（メチル）シトシン；３－（アルキル）シトシン；３－（デアザ）５（アザ）シトシン；３－（メチル）シチジン；４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５（ハロ）シトシン；５（メチル）シトシン；５（プロピニル）シトシン；５（トリフルオロメチル）シトシン；５－（アルキル）シトシン；５－（アルキニル）シトシン；５－（ハロ）シトシン；５－（プロピニル）シトシン；５－（トリフルオロメチル）シトシン；５－ブロモシチジン；５－ヨードシチジン；５－プロピニルシトシン；６－（アゾ）シトシン；６－アザシチジン；アザシトシン；デアザシトシン；Ｎ４（アセチル）シトシン；１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン；１－メチル－シュードイソシチジン；２－メトキシ－５－メチルシチジン；２－メトキシ－シチジン；２－チオ－５－メチルシチジン；４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン；４－メトキシ－シュードイソシチジン；４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン；４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン；４－チオ－シュードイソシチジン；５－アザ－ゼブラリン；５－メチル－ゼブラリン；ピロロ－シュードイソシチジン；ゼブラリン；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）シチジンＴＰ；２，２’－無水－シチジンＴＰ塩酸塩；２’－フルオロ－Ｎ４－Ｂｚ－シチジンＴＰ；２’－フルオロ－Ｎ４－アセチル－シチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ４－アセチル－シチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ４－Ｂｚ－シチジンＴＰ；２’－ａ－エチニルシチジンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；２’－ｂ－エチニルシチジンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシシチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－５－（１－プロピニル）シチジンＴＰ；３’－エチニルシチジンＴＰ；４’－アジドシチジンＴＰ；４’－炭素環式シチジンＴＰ；４’－エチニルシチジンＴＰ；５－（１－プロピニル）アラシチジンＴＰ；５－（２－クロロフェニル）－２－チオシチジンＴＰ；５－（４－アミノフェニル）－２－チオシチジンＴＰ；５－アミノアリル－ＣＴＰ；５－シアノシチジンＴＰ；５－エチニルアラシチジンＴＰ；５－エチニルシチジンＴＰ；５’－ホモシチジンＴＰ；５－メトキシシチジンＴＰ；５－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；Ｎ４－アミノシチジンＴＰ；Ｎ４－ベンゾイルシチジンＴＰ；シュードイソシチジン；７－メチルグアノシン；Ｎ２，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；Ｎ２－メチルグアノシン；ワイオシン；１，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；１－メチルグアノシン；２’－Ｏ－メチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）；２’－Ｏ－メチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）；７－アミノメチル－７－デアザグアノシン；７－シアノ－７－デアザグアノシン；アーキオシン；メチルワイオシン（ｗｙｏｓｉｎｅ）；Ｎ２，７－ジメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン；Ｎ２，７，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；６－チオグアノシン；７－デアザグアノシン；８－オキソグアノシン；Ｎ１－メチルグアノシン；α－チオグアノシン；２－（プロピル）グアニン；２－（アルキル）グアニン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＧＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＧＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドグアノシンＴＰ；６－（メチル）グアニン；６－（アルキル）グアニン；６－（メチル）グアニン；６－メチルグアノシン；７（アルキル）グアニン；７（デアザ）グアニン；７（メチル）グアニン；７－（アルキル）グアニン；７－（デアザ）グアニン；７－（メチル）グアニン；８（アルキル）グアニン；８（アルキニル）グアニン；８（ハロ）グアニン；８（チオアルキル）グアニン；８－（アルケニル）グアニン；８－（アルキル）グアニン；８－（アルキニル）グアニン；８－（アミノ）グアニン；８－（ハロ）グアニン；８－（ヒドロキシル）グアニン；８－（チオアルキル）グアニン；８－（チオール）グアニン；アザグアニン；デアザグアニン；Ｎ（メチル）グアニン；Ｎ－（メチル）グアニン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、６－メトキシ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン；Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン；１－Ｍｅ－ＧＴＰ；２’－フルオロ－Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；２’－ａ－エチニルグアノシンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルグアノシンＴＰ；２’－ｂ－エチニルグアノシンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシグアノシンＴＰ；
４’－アジドグアノシンＴＰ；４’－炭素環式グアノシンＴＰ；４’－エチニルグアノシンＴＰ；５’－ホモグアノシンＴＰ；８－ブロモグアノシンＴＰ；９－デアザグアノシンＴＰ；Ｎ２－イソブチルグアノシンＴＰ；１－メチルイノシン；イノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；７－メチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；エポキシキューオシン；ガラクトシルキューオシン；マンノシルキューオシン；キューオシン；アリルアミノチミジン；アザチミジン；デアザチミジン；デオキシチミジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオウリジン；３－メチルウリジン；５－カルボキシメチルウリジン；５－ヒドロキシウリジン；５－メチルウリジン；５－タウリノメチル－２－チオウリジン；５－タウリノメチルウリジン；ジヒドロウリジン；（３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）シュードウリジン；１－メチルシュードウリジン；１－メチルシュードウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２’－Ｏ－メチルシュードウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；３－メチルシュード－ウリジンＴＰ；４－チオウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル、５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；５，６－ジヒドロ－ウリジン；５－アミノメチル－２－チオウリジン；５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－カルバモイルメチルウリジン；５－カルボキシヒドロキシメチルウリジン；５－カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル；５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルバモイルメチルウリジンＴＰ；５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン；５－メトキシカルボニルメチルウリジン；５－メトキシウリジン；５－メチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン；５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチルウリジン；５－メチルジヒドロウリジン；５－オキシ酢酸－ウリジンＴＰ；５－オキシ酢酸－メチルエステル－ウリジンＴＰ；Ｎ１－メチル－シュードウリジン；Ｎ１－エチル－シュードウリジン；ウリジン５－オキシ酢酸；ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）－ウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）－２－チオウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）ウリジンＴＰ；５－プロピニルウラシル；α－チオウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２（チオ）－シュードウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２，４－（ジチオ）シュードウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－４（チオ）シュードウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－２（チオ）－シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－２，４－（ジチオ）シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－４（チオ）シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレン）－シュードウリジン；１置換２（チオ）－シュードウリジン；１置換２，４－（ジチオ）シュードウリジン；１置換４（チオ）－シュードウリジン；１置換シュードウリジン；１－（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２－（チオ）－シュードウリジン；１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードＵＴＰ；１－メチル－シュードＵＴＰ；２（チオ）－シュードウリジン；２’デオキシウリジン；２’フルオロウリジン；２－（チオ）ウラシル；２，４－（ジチオ）シュードウラシル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオログアノシン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－アジドデオキシウリジンＴＰ；２’－Ｏ－メチルシュードウリジン；２’デオキシウリジン；２’フルオロウリジン；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドウリジンＴＰ；２－メチルシュードウリジン；３（３アミノ－３カルボキシプロピル）ウラシル；４（チオ）シュードウリジン；４－（チオ）シュードウリジン；４－（チオ）ウラシル；４－チオウラシル；５（１，３－ジアゾール－１－アルキル）ウラシル；５（２－アミノプロピル）ウラシル；５（アミノアルキル）ウラシル；５（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５（メトキシカルボニルメチル）－２－（チオ）ウラシル；５（メトキシカルボニルメチル）ウラシル；５（メチル）２（チオ）ウラシル；５（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチル）４（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－２（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－４（チオ）ウラシル；５（プロピニル）ウラシル；５（トリフルオロメチル）ウラシル；５－（２－アミノプロピル）ウラシル；５－（アルキル）－２－（チオ）シュードウリジン；５－（アルキル）－２，４（ジチオ）シュードウリジン；５－（アルキル）－４（チオ）シュードウリジン；５－（アルキル）シュードウリジン；５－（アルキル）ウラシル；５－（アルキニル）ウラシル；５－（アリルアミノ）ウラシル；５－（シアノアルキル）ウラシル；５－（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル；５－（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５－（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５－（ハロ）ウラシル；５－（１，３－ジアゾール－１－アルキル）ウラシル；５－（メトキシ）ウラシル；５－（メトキシカルボニルメチル）－２－（チオ）ウラシル；５－（メトキシカルボニルメチル）ウラシル；５－（メチル）２（チオ）ウラシル；５－（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５－（メチル）－４－（チオ）ウラシル；５－（メチル）－２－（チオ）シュードウリジン；５－（メチル）－２，４－ジチオシュードウリジン；５－（メチル）－４－（チオ）シュードウリジン；５－（メチル）シュードウリジン；５－（メチルアミノメチル）－２－（チオ）ウラシル；５－（メチルアミノメチル）－２，４－（ジチオ）ウラシル；５－（メチルアミノメチル）－４－（チオ）ウラシル；５－（プロピニル）ウラシル；５－（トリフルオロメチル）ウラシル；５－アミノアリルウリジン；５－ブロモウリジン；５－ヨードウリジン；５－ウラシル；６－（アゾ）ウラシル；６－（アゾ）ウラシル；６－アザウリジン；アリルアミノウラシル；アザウラシル；デアザウラシル；Ｎ３（メチル）ウラシル；シュードＵＴＰ－１－２－エタン酸；シュードウリジン；４－チオシュードＵＴＰ；１－カルボキシメチルシュードウリジン；１－メチル－１－デアザシュードウリジン；１－プロピニルウリジン；１－タウリノメチル－１－メチルウリジン；１－タウリノメチル－４－チオウリジン；１－タウリノメチルシュードウリジン；２－メトキシ－４－チオシュードウリジン；２－チオ－１－メチル－１－デアザシュードウリジン；２－チオ－１－メチルシュードウリジン；２－チオ－５－アザウリジン；２－チオ－ジヒドロシュードウリジン；２－チオ－ジヒドロウリジン；２－チオシュードウリジン；４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン；４－メトキシ－シュードウリジン；４－チオ－１－メチル－シュードウリジン；４－チオ－シュードウリジン；５－アザ－ウリジン；ジヒドロシュードウリジン；（．±．）１－（２－ヒドロキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；（２Ｒ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；（２Ｓ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）アラ－ウリジンＴＰ；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）ウリジンＴＰ；（Ｚ）－５－（２－ブロモ－ビニル）アラ－ウリジンＴＰ；（Ｚ）－５－（２－ブロモ－ビニル）ウリジンＴＰ；１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－シュードＵＴＰ；１－（２，２，３，３，３－ペンタフルオロプロピル）シュードウリジンＴＰ；１－（２，２－ジエトキシエチル）シュードウリジンＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルベンジル）シュードＵＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルフェニル）シュードＵＴＰ；１－（２－アミノ－２－カルボキシエチル）シュードＵＴＰ；１－（２－アミノエチル）シュードＵＴＰ；１－（２－ヒドロキシエチル）シュードウリジンＴＰ；１－（２－メトキシエチル）シュードウリジンＴＰ；１－（３，４－ビストリフルオロメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（３，４－ジメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュード－ＵＴＰ；１－（３－アミノプロピル）シュード－ＵＴＰ；１－（３－シクロプロピル－プロプ－２－イニル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－アミノ－４－カルボキシブチル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アミノベンジル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アミノブチル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アミノフェニル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アジドベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－ブロモベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－クロロベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－フルオロベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－ヨードベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メタンスルホニルベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）シュードＵＴＰ；１－（４－メトキシフェニル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メチルベンジル）シュードＵＴＰ；１－（４－ニトロベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－ニトロベンジル）シュードＵＴＰ；１－（４－ニトロフェニル）シュードＵＴＰ；１－（４－チオメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－トリフルオロメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－トリフルオロメチルベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（５－アミノペンチル）シュードＵＴＰ；１－（６－アミノヘキシル）シュードＵＴＰ；１，６－ジメチルシュードＵＴＰ；１－［３－（２－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－エトキシ｝－エトキシ）－プロピオニル］シュードウリジンＴＰ；１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－プロピオニル｝シュードウリジンＴＰ；１－アセチルシュードウリジンＴＰ；１－アルキル－６－（１－プロピニル）－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－（２－プロピニル）－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－アリル－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－エチニル－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－ホモアリル－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－ビニル－シュード－ＵＴＰ；１－アリルシュードウリジンＴＰ；１－アミノメチル－シュード－ＵＴＰ；１－ベンゾイルシュードウリジンＴＰ；１－ベンジルオキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－ベンジル－シュード－ＵＴＰ；１－ビオチニル－ＰＥＧ２－シュードウリジンＴＰ；１－ビオチニルシュードウリジンＴＰ；１－ブチル－シュード－ＵＴＰ；１－シアノメチルシュードウリジンＴＰ；１－シクロブチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロブチル－シュード－ＵＴＰ；
１－シクロヘプチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロヘプチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロヘキシルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロヘキシル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロオクチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロオクチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロペンチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロペンチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロプロピルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロプロピル－シュード－ＵＴＰ；１－エチル－シュード－ＵＴＰ；１－ヘキシル－シュードＵＴＰ；１－ホモアリル－シュードウリジンＴＰ；１－ヒドロキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－イソ－プロピル－シュードＵＴＰ；１－Ｍｅ－２－チオ－シュードＵＴＰ；１－Ｍｅ－４－チオ－シュードＵＴＰ；１－Ｍｅ－α－チオ－シュードＵＴＰ；１－メタンスルホニルメチルシュードウリジンＴＰ；１－メトキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－メチル－６－（２，２，２－トリフルオロエチル）－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－（４－モルホリノ）－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－（４－チオモルホリノ）－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－（置換フェニル）－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－アミノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－アジド－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ブロモ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ブチル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－クロロ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－シアノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ジメチルアミノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－エトキシ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－エチルカルボキシレート－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－エチル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－フルオロ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ホルミル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヒドロキシアミノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヒドロキシ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヨード－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－イソプロピル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－メトキシ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－メチルアミノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－フェニル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－プロピル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ｔｅｒｔ－ブチル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－トリフルオロメトキシ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－トリフルオロメチル－シュード－ＵＴＰ；１－モルホリノメチルシュードウリジンＴＰ；１－ペンチル－シュード－ＵＴＰ；１－フェニル－シュード－ＵＴＰ；１－ピバロイルシュードウリジンＴＰ；１－プロパルギルシュードウリジンＴＰ；１－プロピル－シュード－ＵＴＰ；１－プロピニル－シュードウリジン；１－ｐ－トリル－シュード－ＵＴＰ；１－ｔｅｒｔ－ブチル－シュード－ＵＴＰ；１－チオメトキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－チオモルホリノメチルシュードウリジンＴＰ；１－トリフルオロアセチルシュードウリジンＴＰ；１－トリフルオロメチル－シュード－ＵＴＰ；１－ビニルシュードウリジンＴＰ；２，２’－無水－ウリジンＴＰ；２’－ブロモ－デオキシウリジンＴＰ；２’－Ｆ－５－メチル－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－ＯＭｅ－５－Ｍｅ－ＵＴＰ；２’－ＯＭｅ－シュード－ＵＴＰ；２’－ａ－エチニルウリジンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；２’－ｂ－エチニルウリジンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシウリジンＴＰ；２－メトキシ－４－チオウリジン；２－メトキシウリジン；２’－Ｏ－メチル－５－（１－プロピニル）ウリジンＴＰ；３－アルキル－シュードＵＴＰ；４’－アジドウリジンＴＰ；４’－炭素環式ウリジンＴＰ；４’－エチニルウリジンＴＰ；５－（１－プロピニル）アラウリジンＴＰ；５－（２－フラニル）ウリジンＴＰ；５－シアノウリジンＴＰ；５－ジメチルアミノウリジンＴＰ；５’－ホモウリジンＴＰ；５－ヨード－２’－フルオロデオキシウリジンＴＰ；５－フェニルエチニルウリジンＴＰ；５－トリデューテロメチル－６－デューテロウリジンＴＰ；５－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；５－ビニルアラウリジンＴＰ；６－（２，２，２－トリフルオロエチル）－シュードＵＴＰ；６－（４－モルホリノ）－シュードＵＴＰ；６－（４－チオモルホリノ）－シュードＵＴＰ；６－（置換フェニル）－シュードＵＴＰ；６－アミノ－シュードＵＴＰ；６－アジド－シュードＵＴＰ；６－ブロモ－シュードＵＴＰ；６－ブチル－シュードＵＴＰ；６－クロロ－シュードＵＴＰ；６－シアノ－シュードＵＴＰ；６－ジメチルアミノ－シュードＵＴＰ；６－エトキシ－シュードＵＴＰ；６－エチルカルボキシレート－シュードＵＴＰ；６－エチル－シュードＵＴＰ；６－フルオロ－シュードＵＴＰ；６－ホルミル－シュードＵＴＰ；６－ヒドロキシアミノ－シュードＵＴＰ；６－ヒドロキシ－シュードＵＴＰ；６－ヨード－シュードＵＴＰ；６－イソ－プロピル－シュード－ＵＴＰ；６－メトキシ－シュード－ＵＴＰ；６－メチルアミノ－シュード－ＵＴＰ；６－メチル－シュード－ＵＴＰ；６－フェニル－シュード－ＵＴＰ；６－フェニル－シュード－ＵＴＰ；６－プロピル－シュード－ＵＴＰ；６－ｔｅｒｔ－ブチル－シュード－ＵＴＰ；６－トリフルオロメトキシ－シュード－ＵＴＰ；６－トリフルオロメチル－シュード－ＵＴＰ；アルファ－チオ－シュード－ＵＴＰ；シュードウリジン１－（４－メチルベンゼンスルホン酸）ＴＰ；シュードウリジン１－（４－メチル安息香酸）ＴＰ；シュードウリジンＴＰ１－［３－（２－エトキシ）］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－（２－エトキシ）－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ）－エトキシ｝－エトキシ］－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－メチルホスホン酸；シュードウリジンＴＰ１－メチルホスホン酸ジエチルエステル；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－３－プロピオン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－４－ブタン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－５－ペンタン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－６－ヘキサン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－７－ヘプタン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－メチル－ｐ－安息香酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－ｐ－安息香酸；ワイブトシン；ヒドロキシワイブトシン；イソワイオシン；ペルオキシワイブトシン；不十分な改変の（under modified）ヒドロキシワイブトシン；４－デメチルワイオシン；２，６－（ジアミノ）プリン；１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル：１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；１，３，５－（トリアザ）－２，６－（ジオキサ）－ナフタレン；２（アミノ）プリン；２，４，５－（トリメチル）フェニル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロ－シチジン；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロ－アデニン；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロウリジン；２’－アミノ－２’－デオキシリボース；２－アミノ－６－クロロプリン；２－アザ－イノシニル；２’－アジド－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ改変塩基；２’－Ｏ－メチルリボース；２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；２－オキソ－ピリドピリミジン－３－イル；２－ピリジノン；３－ニトロピロール；３－（メチル）－７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；３－（メチル）イソカルボスチリリル；４－（フルオロ）－６－（メチル）ベンゾイミダゾール；４－（メチル）ベンゾイミダゾール４－（メチル）インドリル；４，６－（ジメチル）インドリル；５－ニトロインドール；５－置換ピリミジン；５－（メチル）イソカルボスチリリル；５－ニトロインドール；６－（アザ）ピリミジン；６－（アゾ）チミン；６－（メチル）－７－（アザ）インドリル；６－クロロ－プリン；６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アザ）インドリル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル－７－（アザ）インドリル；７－デアザイノシニル；７－置換１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－置換１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；９－（メチル）－イミジゾピリジニル；アミノインドリル；アントラセニル；ビス－オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニルピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ビス－オルト置換－６－フェニルピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ジフルオロトリル；ヒポキサンチン；イミジゾピリジニル；イノシニル；イソカルボスチリリル；イソグアニシン；Ｎ２－置換プリン；Ｎ６－メチル－２－アミノプリン；Ｎ６－置換プリン；Ｎ－アルキル化誘導体；ナフタレニル；ニトロベンズイミダゾリル；ニトロイミダゾリル；ニトロインダゾリル；ニトロピラゾリル；ヌブラリン；Ｏ６－置換プリン；Ｏ－アルキル化誘導体；オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニルピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オルト置換－６－フェニルピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オキソホルマイシンＴＰ；パラ－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニルピロロピリミジン－２－オン－３－イル；パラ置換－６－フェニルピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ペンタセニル；フェナントラセニル；フェニル；プロピニル－７－（アザ）インドリル；ピレニル；ピリドピリミジン－３－イル；ピリドピリミジン－３－イル、２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ピロロピリミジニル；ピロロピリジニル；スチルベンジル；置換１，２，４－トリアゾール；テトラセニル；ツベルシジン；キ
サンチン；
キサントシン－５’－ＴＰ；２－チオ－ゼブラリン；５－アザ－２－チオ－ゼブラリン；７－デアザ－２－アミノ－プリン；ピリジン－４－オンリボヌクレオシド；２－アミノ－リボシド－ＴＰ；フォルマイシンＡＴＰ；フォルマイシンＢＴＰ；ピロロシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－アデノシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－シチジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－ウリジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－グアノシンＴＰ；５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジンＴＰ；又はＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）アデノシンＴＰを含む。

一部の実施形態において、アデノシン置換可能な改変ヌクレオチドは、２－メチルチオ－Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－イソペンテニルアデノシン；Ｎ６－メチルアデノシン；Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；１－メチルアデノシン；２’－Ｏ－メチルアデノシン；２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）；２－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；２’－Ｏ－メチルアデノシン；２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）；イソペンテニルアデノシン；Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン；Ｎ６－アセチルアデノシン；Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン；２－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデノシン；７－デアザ－アデノシン；Ｎ１－メチル－アデノシン；Ｎ６，Ｎ６（ジメチル）アデニン；Ｎ６－シス－ヒドロキシ－イソペンテニル－アデノシン；α－チオ－アデノシン；２－（アミノ）アデニン；２（アミノプロピル）アデニン；２（メチルチオ）Ｎ６（イソペンテニル）アデニン；２－（アルキル）アデニン；２－（アミノアルキル）アデニン；２－（アミノプロピル）アデニン；２－（ハロ）アデニン；２－（ハロ）アデニン；２－（プロピル）アデニン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＡＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＡＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドアデノシンＴＰ；６（アルキル）アデニン；６（メチル）アデニン；６－（アルキル）アデニン；６－（メチル）アデニン；７（デアザ）アデニン；８（アルケニル）アデニン；８（アルキニル）アデニン；８（アミノ）アデニン；８（チオアルキル）アデニン；８－（アルケニル）アデニン；８－（アルキル）アデニン；８－（アルキニル）アデニン；８－（アミノ）アデニン；８－（ハロ）アデニン；８－（ヒドロキシル）アデニン；８－（チオアルキル）アデニン；８－（チオール）アデニン；８－アジド－アデノシン；アザアデニン；デアザアデニン；Ｎ６（メチル）アデニン；Ｎ６－（イソペンチル）アデニン；７－デアザ－８－アザ－アデノシン；７－メチルアデニン；１－デアザアデノシンＴＰ；２’－フルオロ－Ｎ６－Ｂｚ－デオキシアデノシンＴＰ；２’－ＯＭｅ－２－アミノ－ＡＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ６－Ｂｚ－デオキシアデノシンＴＰ；２’－ａ－エチニルアデノシンＴＰ；２－アミノアデニン；２－アミノアデノシンＴＰ；２－アミノ－ＡＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；２－アジドアデノシンＴＰ；２’－ｂ－エチニルアデノシンＴＰ；２－ブロモアデノシンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；２－クロロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシアデノシンＴＰ；２－フルオロアデノシンＴＰ；２－ヨードアデノシンＴＰ；２－メルカプトアデノシンＴＰ；２－メトキシアデニン；２－メチルチオアデニン；２－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－ブロモアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－クロロアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－フルオロアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－ヨードアデノシンＴＰ；３－デアザアデノシンＴＰ；４’－アジドアデノシンＴＰ；４’－炭素環アデノシンＴＰ；４’－エチニルアデノシンＴＰ；５’－ホモアデノシンＴＰ；８－アザ－ＡＴＰ；８－ブロモアデノシンＴＰ；８－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；９－デアザアデノシンＴＰ；ワイブトシン；ヒドロキシワイブトシン；イソワイブトシン；ペルオキシワイブトシン；改変が不十分なヒドロキシワイブトシン；４－デメチルワイオシン；２，６－（ジアミノ）プリン；１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル：１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；１，３，５－（トリアザ）－２，６－（ジオキサ）－ナフタレン；２－（アミノ）プリン；２，４，５－（トリメチル）フェニル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロシチジン；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロアデニン；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロウリジン；２’－アミノ－２’－デオキシリボース；２－アミノ－６－クロロプリン；２－アザ－イノシニル；２’－アジド－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ改変塩基；２’－Ｏ－メチル－リボース；２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；２－オキソ－ピリドピリミジン－３－イル；２－ピリジノン；３－ニトロピロール；３－（メチル）－７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；３－（メチル）イソカルボスチリリル；４－（フルオロ）－６－（メチル）ベンゾイミダゾール；４－（メチル）ベンゾイミダゾール；４－（メチル）インドリル；４，６－（ジメチル）インドリル；５－ニトロインドール；５－置換ピリミジン；５－（メチル）イソカルボスチリリル；５－ニトロインドール；６－（アザ）ピリミジン；６－（アゾ）チミン；６－（メチル）－７－（アザ）インドリル；６－クロロ－プリン；６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アザ）インドリル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル－７－（アザ）インドリル；７－デアザ－イノシニル；７－置換１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－置換１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；９－（メチル）－イミジゾピリジニル；アミノインドリル；アントラセニル；ビス－オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ビス－オルト－置換－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ジフルオロトリル；ヒポキサンチン；イミジゾピリジニル；イノシニル；イソカルボスチリリル；イソグアニシン；Ｎ２－置換プリン；Ｎ６－メチル－２－アミノプリン；Ｎ６－置換プリン；Ｎ－アルキル化誘導体；ナフタレニル；ニトロベンズイミダゾリル；ニトロイミダゾリル；ニトロインダゾリル；ニトロピラゾリル；ヌブラリン；Ｏ６－置換プリン；Ｏ－アルキル化誘導体；オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オルト置換－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オキソホルマイシンＴＰ；パラ－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；パラ置換－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ペンタセニル；フェナントラセニル；フェニル；プロピニル－７－（アザ）インドリル；ピレニル；ピリドピリミジン－３－イル；ピリドピリミジン－３－イル、２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ピロロピリミジニル；ピロロピリジニル；スチルベンジル；置換１，２，４－トリアゾール；テトラセニル；ツベルシジン；キサンチン；キサントシン－５’－ＴＰ；２－チオ－ゼブラリン；５－アザ－２－チオ－ゼブラリン；７－デアザ－２－アミノ－プリン；ピリジン－４－オンリボヌクレオシド；２－アミノ－リボシド－ＴＰ；フォルマイシンＡＴＰ；フォルマイシンＢＴＰ；ピロロシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－アデノシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－シチジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－ウリジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－グアノシンＴＰ；５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジンＴＰ；又はＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）アデノシンＴＰを含む。

一部の実施形態において、ウリジン置換可能な改変ヌクレオチド又はチミジン置換可能な改変ヌクレオチドは、シュードウリジン；Ｎ１－メチルシュードウリジン；Ｎ１－エチルシュードウリジン；イノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；７－メチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；エポキシキューオシン；ガラクトシルキューオシン；マンノシルキューオシン；キューオシン；アリルアミノチミジン；アザチミジン；デアザチミジン；デオキシチミジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオウリジン；３－メチルウリジン；５－カルボキシメチルウリジン；５－ヒドロキシウリジン；５－メチルウリジン；５－タウリノメチル－２－チオウリジン；５－タウリノメチルウリジン；ジヒドロウリジン；（３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）シュードウリジン；１－メチルシュードウリジン；１－メチルシュードウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２’－Ｏ－メチルシュードウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；３－メチルシュード－ウリジンＴＰ；４－チオウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル、５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；５，６－ジヒドロ－ウリジン；５－アミノメチル－２－チオウリジン；５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－カルバモイルメチルウリジン；５－カルボキシヒドロキシメチルウリジン；５－カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルバモイルメチルウリジンＴＰ；５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン；５－メトキシカルボニルメチルウリジン；５－メトキシウリジン；５－メチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン；５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチルウリジン；５－メチルジヒドロウリジン；５－オキシ酢酸－ウリジンＴＰ；５－オキシ酢酸－メチルエステル－ウリジンＴＰ；Ｎ１－メチル－シュードウリジン；Ｎ１－エチル－シュードウリジン；ウリジン５－オキシ酢酸；ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）－ウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）－２－チオウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）ウリジンＴＰ；５－プロピニルウラシル；α－チオウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２（チオ）－シュードウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２，４－（ジチオ）シュードウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－４（チオ）シュードウリジン；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－２（チオ）－シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－２，４－（ジチオ）シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－４（チオ）シュードウリジン；１（アミノカルボニルエチレニル）－シュードウリジン；１置換２（チオ）－シュードウリジン；１置換２，４－（ジチオ）－シュードウリジン；１置換４（チオ）シュードウリジン；１置換シュードウリジン；１－（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２－（チオ）－シュードウリジン；１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュード－ＵＴＰ；１－メチル－シュード－ＵＴＰ；２（チオ）シュードウリジン；２’デオキシウリジン；２’フルオロウリジン；２－（チオ）ウラシル；２，４－（ジチオ）シュードウラシル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオログアノシン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－アジド－デオキシウリジンＴＰ；２’－Ｏ－メチルシュードウリジン；２’デオキシウリジン；２’フルオロウリジン；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドウリジンＴＰ；２－メチルシュードウリジン；３（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウラシル；４（チオ）シュードウリジン；４－（チオ）シュードウリジン；４－（チオ）ウラシル；４－チオウラシル；５（１，３－ジアゾール－１－アルキル）ウラシル；５（２－アミノプロピル）ウラシル；５（アミノアルキル）ウラシル；５（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５（メトキシカルボニルメチル）－２－（チオ）ウラシル；５（メトキシカルボニルメチル）ウラシル；５（メチル）２（チオ）ウラシル；５（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチル）４（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－２（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－４（チオ）ウラシル；５（プロピニル）ウラシル；５（トリフルオロメチル）ウラシル；５－（２－アミノプロピル）ウラシル；５－（アルキル）－２－（チオ）シュードウリジン；５－（アルキル）－２，４（ジチオ）シュードウリジン；５－（アルキル）－４（チオ）シュードウリジン；５－（アルキル）シュードウリジン；５－（アルキル）ウラシル；５－（アルキニル）ウラシル；５－（アリルアミノ）ウラシル；５－（シアノアルキル）ウラシル；５－（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル；５－（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５－（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５－（ハロ）ウラシル；５－（１，３－ジアゾール－１－アルキル）ウラシル；５－（メトキシ）ウラシル；５－（メトキシカルボニルメチル）－２－（チオ）ウラシル；５－（メトキシカルボニルメチル）ウラシル；５－（メチル）２（チオ）ウラシル；５－（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５－（メチル）４（チオ）ウラシル；５－（メチル）－２－（チオ）シュードウリジン；５－（メチル）－２，４（ジチオ）シュードウリジン；５－（メチル）－４（チオ）シュードウリジン；５－（メチル）シュードウリジン；５－（メチルアミノメチル）－２（チオ）ウラシル；５－（メチルアミノメチル）－２，４（ジチオ）ウラシル；５－（メチルアミノメチル）－４－（チオ）ウラシル；５－（プロピニル）ウラシル；５－（トリフルオロメチル）ウラシル；５－アミノアリルウリジン；５－ブロモウリジン；５－ヨードウリジン；５－ウラシル；６－（アゾ）ウラシル；６－（アゾ）ウラシル；６－アザウリジン；アリルアミノウラシル；アザウラシル；デアザウラシル；Ｎ３（メチル）ウラシル；シュードＵＴＰ－１－２－エタン酸；シュードウリジン；４－チオ－シュードＵＴＰ；１－カルボキシメチル－シュードウリジン；１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン；１－プロピニル－ウリジン；１－タウリノメチル－１－メチル－ウリジン；１－タウリノメチル－４－チオ－ウリジン；１－タウリノメチル－シュードウリジン；２－メトキシ－４－チオ－シュードウリジン；２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン；２－チオ－１－メチル－シュードウリジン；２－チオ－５－アザ－ウリジン；２－チオ－ジヒドロシュードウリジン；２－チオ－ジヒドロウリジン；２－チオ－シュードウリジン；４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン；４－メトキシ－シュードウリジン；４－チオ－１－メチル－シュードウリジン；４－チオ－シュードウリジン；５－アザ－ウリジン；ジヒドロシュードウリジン；（．±．）１－（２－ヒドロキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；（２Ｒ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；（２Ｓ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）シュードウリジンＴＰ；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）アラ－ウリジンＴＰ；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）ウリジンＴＰ；（Ｚ）－５－（２－ブロモ－ビニル）アラ－ウリジンＴＰ；（Ｚ）－５－（２－ブロモ－ビニル）ウリジンＴＰ；１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－シュード－ＵＴＰ；１－（２，２，３，３，３－ペンタフルオロプロピル）シュードウリジンＴＰ；１－（２，２－ジエトキシエチル）シュードウリジンＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルベンジル）シュード－ＵＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルフェニル）シュード－ＵＴＰ；１－（２－アミノ－２－カルボキシエチル）シュード－ＵＴＰ；１－（２－アミノエチル）シュード－ＵＴＰ；１－（２－ヒドロキシエチル）シュードウリジンＴＰ；１－（２－メトキシエチル）シュードウリジンＴＰ；１－（３，４－ビストリフルオロメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（３，４－ジメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュード－ＵＴＰ；１－（３－アミノプロピル）シュード－ＵＴＰ；１－（３－シクロプロピル－プロプ－２－イニル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－アミノ－４－カルボキシブチル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アミノベンジル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アミノブチル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アミノフェニル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－アジドベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－ブロモベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－クロロベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－フルオロベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－ヨードベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メタンスルホニルベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）シュードＵＴＰ；１－（４－メトキシフェニル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－メチルベンジル）シュードＵＴＰ；１－（４－ニトロベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－ニトロベンジル）シュードＵＴＰ；１－（４－ニトロフェニル）シュード－ＵＴＰ；１－（４－チオメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－トリフルオロメトキシベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（４－トリフルオロメチルベンジル）シュードウリジンＴＰ；１－（５－アミノペンチル）シュード－ＵＴＰ；１－（６－アミノヘキシル）シュード－ＵＴＰ；１，６－ジメチル－シュード－ＵＴＰ；１－［３－（２－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－エトキシ｝－エトキシ）－プロピオニル］シュードウリジンＴＰ；１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－プロピオニル｝シュードウリジンＴＰ；１－アセチルシュードウリジンＴＰ；１－アルキル－６－（１－プロピニル）－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－（２－プロピニル）－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－アリル－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－エチニル－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－ホモアリル－シュード－ＵＴＰ；１－アルキル－６－ビニル－シュード－ＵＴＰ；１－アリルシュードウリジンＴＰ；１－アミノメチル－シュード－ＵＴＰ；１－ベンゾイルシュードウリジンＴＰ；１－ベンジルオキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－ベンジル－シュード－ＵＴＰ；１－ビオチニル－ＰＥＧ２－シュードウリジンＴＰ；１－ビオチニルシュードウリジンＴＰ；１－ブチル－シュード－ＵＴＰ；１－シアノメチルシュードウリジンＴＰ；１－シクロブチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロブチル－シュード－ＵＴＰ；
１－シクロヘプチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロヘプチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロヘキシルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロヘキシル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロオクチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロオクチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロペンチルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロペンチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロプロピルメチル－シュード－ＵＴＰ；１－シクロプロピル－シュード－ＵＴＰ；１－エチル－シュード－ＵＴＰ；１－ヘキシル－シュードＵＴＰ；１－ホモアリル－シュードウリジンＴＰ；１－ヒドロキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－イソプロピル－シュードＵＴＰ；１－Ｍｅ－２－チオ－シュードＵＴＰ；１－Ｍｅ－４－チオ－シュードＵＴＰ；１－Ｍｅ－α－チオ－シュードＵＴＰ；１－メタンスルホニルメチルシュードウリジンＴＰ；１－メトキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－メチル－６－（２，２，２－トリフルオロエチル）シュードＵＴＰ；１－メチル－６－（４－モルホリノ）－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－（４－チオモルホリノ）－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－（置換フェニル）シュードＵＴＰ；１－メチル－６－アミノ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－アジド－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－ブロモ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－ブチル－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－クロロ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－シアノ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－ジメチルアミノ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－エトキシ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－エチルカルボキシレート－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－エチル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－フルオロ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ホルミル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヒドロキシアミノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヒドロキシ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヨード－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－イソ－プロピル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－メトキシ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－メチルアミノ－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－フェニル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－プロピル－シュード－ＵＴＰ；１－メチル－６－ｔｅｒｔ－ブチル－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－トリフルオロメトキシ－シュードＵＴＰ；１－メチル－６－トリフルオロメチル－シュードＵＴＰ；１－モルホリノメチルシュードウリジンＴＰ；１－ペンチル－シュードＵＴＰ；１－フェニル－シュードＵＴＰ；１－ピバロイルシュードウリジンＴＰ；１－プロパルギルシュードウリジンＴＰ；１－プロピル－シュードＵＴＰ；１－プロピニル－シュードウリジン；１－ｐ－トリル－シュードＵＴＰ；１－ｔｅｒｔ－ブチル－シュードＵＴＰ；１－チオメトキシメチルシュードウリジンＴＰ；１－チオモルホリノメチルシュードウリジンＴＰ；１－トリフルオロアセチルシュードウリジンＴＰ；１－トリフルオロメチル－シュードＵＴＰ；１－ビニルシュードウリジンＴＰ；２，２’－無水ウリジンＴＰ；２’－ブロモデオキシウリジンＴＰ；２’－Ｆ－５－メチル－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－ＯＭｅ－５－Ｍｅ－ＵＴＰ；２’－ＯＭｅ－シュード－ＵＴＰ；２’－ａ－エチニルウリジンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；２’－ｂ－エチニルウリジンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシウリジンＴＰ；２－メトキシ－４－チオウリジン；２－メトキシウリジン；２’－Ｏ－メチル－５－（１－プロピニル）ウリジンＴＰ；３－アルキル－シュードＵＴＰ；４’－アジドウリジンＴＰ；４’－炭素環式ウリジンＴＰ；４’－エチニルウリジンＴＰ；５－（１－プロピニル）アラ－ウリジンＴＰ；５－（２－フラニル）ウリジンＴＰ；５－シアノウリジンＴＰ；５－ジメチルアミノウリジンＴＰ；５’－ホモ－ウリジンＴＰ；５－ヨード－２’－フルオロ－デオキシウリジンＴＰ；５－フェニルエチニルウリジンＴＰ；５－トリデューテロメチル－６－デューテロウリジンＴＰ；５－トリフルオロメチル－ウリジンＴＰ；５－ビニルアラウリジンＴＰ；６－（２，２，２－トリフルオロエチル）－シュードＵＴＰ；６－（４－モルホリノ）－シュードＵＴＰ；６－（４－チオモルホリノ）－シュードＵＴＰ；６－（置換フェニル）－シュードＵＴＰ；６－アミノ－シュードＵＴＰ；６－アジド－シュード－ＵＴＰ；６－ブロモ－シュード－ＵＴＰ；６－ブチル－シュード－ＵＴＰ；６－クロロ－シュード－ＵＴＰ；６－シアノ－シュード－ＵＴＰ；６－ジメチルアミノ－シュード－ＵＴＰ；６－エトキシ－シュード－ＵＴＰ；６－エチルカルボキシレート－シュード－ＵＴＰ；６－エチル－シュード－ＵＴＰ；６－フルオロ－シュード－ＵＴＰ；６－ホルミル－シュード－ＵＴＰ；６－ヒドロキシアミノ－シュード－ＵＴＰ；６－ヒドロキシ－シュード－ＵＴＰ；６－ヨード－シュード－ＵＴＰ；６－イソ－プロピル－シュード－ＵＴＰ；６－メトキシ－シュード－ＵＴＰ；６－メチルアミノ－シュード－ＵＴＰ；６－メチル－シュード－ＵＴＰ；６－フェニル－シュード－ＵＴＰ；６－フェニル－シュード－ＵＴＰ；６－プロピル－シュード－ＵＴＰ；６－ｔｅｒｔ－ブチル－シュード－ＵＴＰ；６－トリフルオロメトキシ－シュード－ＵＴＰ；６－トリフルオロメチル－シュード－ＵＴＰ；α－チオ－シュード－ＵＴＰ；シュードウリジン１－（４－メチルベンゼンスルホン酸）ＴＰ；シュードウリジン１－（４－メチル安息香酸）ＴＰ；シュードウリジンＴＰ１－［３－（２－エトキシ）］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－（２－エトキシ）－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ）］－エトキシ｝－エトキシ］－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－（２－エトキシ）－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ）－エトキシ｝－エトキシ］－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジンＴＰ１－メチルホスホン酸；シュードウリジンＴＰ１－メチルホスホン酸ジエチルエステル；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－３－プロピオン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－４－ブタン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－５－ペンタン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－６－ヘキサン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－７－ヘプタン酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－メチル－ｐ－安息香酸；シュード－ＵＴＰ－Ｎ１－ｐ－安息香酸；ワイブトシン；ヒドロキシワイブトシン；イソワイオシン；ペルオキシワイブトシン；改変が不十分なヒドロキシワイブトシン；４－デメチルワイオシン；２，６－（ジアミノ）プリン；１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル：１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；１，３，５－（トリアザ）－２，６－（ジオキサ）－ナフタレン；２（アミノ）プリン；２，４，５－（トリメチル）フェニル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロ－シチジン；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロ－アデニン；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルオロ－ウリジン；２’－アミノ－２’－デオキシリボース；２－アミノ－６－クロロプリン；２－アザ－イノシニル；２’－アジド－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ改変塩基；２’－Ｏ－メチル－リボース；２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；２－オキソ－ピリドピリミジン－３－イル；２－ピリジノン；３ニトロピロール；３－（メチル）－７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；３－（メチル）イソカルボスチリリル；４－（フルオロ）－６－（メチル）ベンゾイミダゾール；４－（メチル）ベンゾイミダゾール；４－（メチル）インドリル；４，６－（ジメチル）インドリル；５ニトロインドール；５置換ピリミジン；５－（メチル）イソカルボスチリリル；５－ニトロインドール；６－（アザ）ピリミジン；６－（アゾ）チミン；６－（メチル）－７－（アザ）インドリル；６－クロロ－プリン；６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アザ）インドリル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル－７－（アザ）インドリル；７－デアザ－イノシニル；７－置換１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－置換１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；９－（メチル）－イミジゾピリジニル；アミノインドリル；アントラセニル；ビス－オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ビス－オルト置換－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ジフルオロトリル；ヒポキサンチン；イミジゾピリジニル；イノシニル；イソカルボスチリリル；Ｎ２－置換プリン；Ｎ６－メチル－２－アミノプリン；Ｎ６－置換プリン；Ｎ－アルキル化誘導体；ナフタレニル；ニトロベンズイミダゾリル；ニトロイミダゾリル；ニトロインダゾリル；ニトロピラゾリル；ヌブラリン；Ｏ６－置換プリン；Ｏ－アルキル化誘導体；オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オルト置換－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オキソホルマイシンＴＰ；パラ－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；パラ置換－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ペンタセニル；フェナントラセニル；フェニル；プロピニル－７－（アザ）インドリル；ピレニル；ピリドピリミジン－３－イル；
ピリドピリミジン－３－イル、２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ピロロピリミジニル；ピロロピレジニル；スチルベンジル；置換１，２，４－トリアゾール；テトラセニル；ツベルシジン；キサンチン；キサントシン－５’－ＴＰ；２－チオ－ゼブラリン；５－アザ－２－チオ－ゼブラリン；７－デアザ－２－アミノ－プリン；ピリジン－４－オンリボヌクレオシド；２－アミノ－リボシド－ＴＰ；フォルマイシンＡＴＰ；フォルマイシンＢＴＰ；ピロロシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－シチジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－ウリジンＴＰＴＰ；又は５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジンＴＰを含む。

一部の実施形態において、シトシン置換可能な改変ヌクレオチドは、２－チオシチジン；３－メチルシチジン；５－ホルミルシチジン；５－ヒドロキシメチルシチジン；５－メチルシチジン；Ｎ４－アセチルシチジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；５，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５－ホルミル－２’－Ｏ－メチルシチジン；リシジン；Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチルシチジン；Ｎ４－メチルシチジン；Ｎ４，Ｎ４－ジメチル－２’－ＯＭｅ－シチジンＴＰ；４－メチルシチジン；５－アザ－シチジン；シュードイソシチジン；ピロロ－シチジン；α－チオ－シチジン；２－（チオ）シトシン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＣＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＣＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドシチジンＴＰ；３（デアザ）５（アザ）シトシン；３（メチル）シトシン；３－（アルキル）シトシン；３－（デアザ）５（アザ）シトシン；３－（メチル）シチジン；４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５（ハロ）シトシン；５（メチル）シトシン；５（プロピニル）シトシン；５（トリフルオロメチル）シトシン；５－（アルキル）シトシン；５－（アルキニル）シトシン；５－（ハロ）シトシン；５－（プロピニル）シトシン；５－（トリフルオロメチル）シトシン；５－ブロモシチジン；５－ヨードシチジン；５－プロピニルシトシン；６－（アゾ）シトシン；６－アザシチジン；アザシトシン；デアザシトシン；Ｎ４（アセチル）シトシン；１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン；１－メチル－シュードイソシチジン；２－メトキシ－５－メチルシチジン：２－メトキシ－シチジン；２－チオ－５－メチルシチジン；４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン；４－メトキシ－シュードイソシチジン；４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン；４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン；４－チオ－シュードイソシチジン；５－アザ－ゼブラリン；５－メチル－ゼブラリン；ピロロ－シュードイソシチジン；ゼブラリン；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）シチジンＴＰ；２，２’－無水－シチジンＴＰ塩酸塩；２’－フルオロ－Ｎ４－Ｂｚ－シチジンＴＰ；２’－フルオロ－Ｎ４－アセチル－シチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ４－アセチル－シチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ４－Ｂｚ－シチジンＴＰ；２’－ａ－エチニルシチジンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；２’－ｂ－エチニルシチジンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシシチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－５－（１－プロピニル）シチジンＴＰ；３’－エチニルシチジンＴＰ；４’－アジドシチジンＴＰ；４’－炭素環式シチジンＴＰ；４’－エチニルシチジンＴＰ；５－（１－プロピニル）アラシチジンＴＰ；５－（２－クロロフェニル）－２－チオシチジンＴＰ；５－（４－アミノフェニル）－２－チオシチジンＴＰ；５－アミノアリル－ＣＴＰ；５－シアノシチジンＴＰ；５－エチニルアラシチジンＴＰ；５－エチニルシチジンＴＰ；５’－ホモシチジンＴＰ；５－メトキシシチジンＴＰ；５－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；Ｎ４－アミノシチジンＴＰ；Ｎ４－ベンゾイルシチジンＴＰ；シュードイソシチジン；２’－フルオロシチジン；又は２’－ＯＨ－アラシチジンＴＰを含む。

一部の実施形態において、改変ヌクレオチドは、７－メチルグアノシン；Ｎ２，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；Ｎ２－メチルグアノシン；ワイオシン；１，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；１－メチルグアノシン；２’－Ｏ－メチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）；２’－Ｏ－メチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）；７－アミノメチル－７－デアザグアノシン；７－シアノ－７－デアザグアノシン；アーケオシン；メチルワイオシン；Ｎ２，７－ジメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン；Ｎ２，７，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；６－チオグアノシン；７－デアザグアノシン；８－オキソグアノシン；Ｎ１－メチルグアノシン；α－チオグアノシン；２－（プロピル）グアニン；２－（アルキル）グアニン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＧＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＧＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドグアノシンＴＰ；６－（メチル）グアニン；６－（アルキル）グアニン；６－（メチル）グアニン；６－メチルグアノシン；７－（アルキル）グアニン；７－（デアザ）グアニン；７－（メチル）グアニン；７－（アルキル）グアニン；７－（デアザ）グアニン；７－（メチル）グアニン；８－（アルキル）グアニン；８－（アルキニル）グアニン；８－（ハロ）グアニン；８－（チオアルキル）グアニン；８－（アルケニル）グアニン；８－（アルキル）グアニン；８－（アルキニル）グアニン；８－（アミノ）グアニン；８－（ハロ）グアニン；８－（ヒドロキシル）グアニン；８－（チオアルキル）グアニン；８－（チオール）グアニン；アザグアニン；デアザグアニン；Ｎ－（メチル）グアニン；Ｎ－（メチル）グアニン；１－メチル－６－チオ－グアノシン；６－メトキシ－グアノシン；６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン；６－チオ－７－デアザ－グアノシン；６－チオ－７－メチル－グアノシン；７－デアザ－８－アザ－グアノシン；７－メチル－８－オキソ－グアノシン；Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン；Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン；１－Ｍｅ－ＧＴＰ；２’－フルオロ－Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；２’－ａ－エチニルグアノシンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルグアノシンＴＰ；２’－ｂ－エチニルグアノシンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシグアノシンＴＰ；４’－アジドグアノシンＴＰ；４’－炭素環式グアノシンＴＰ；４’－エチニルグアノシンＴＰ；５’－ホモグアノシンＴＰ；８－ブロモグアノシンＴＰ；９－デアザグアノシンＴＰ；Ｎ２－イソブチルグアノシンＴＰ；１－メチルイノシン；イノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；７－メチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；エポキシキューオシン；ガラクトシルキューオシン；マンノシルキューオシン；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル－７－（アザ）インドリル；７－デアザイノシニル；７－置換１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－置換１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；９－（メチル）－イミジゾピリジニル；アミノインドリル；アントラセニル；ビス－オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ビス－オルト置換－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ジフルオロトリル；ヒポキサンチン；イミジゾピリジニル；イノシニル；イソカルボスチリリル；イソグアニシン；Ｎ２－置換プリン；Ｎ６－メチル－２－アミノプリン；Ｎ６－置換プリン；Ｎ－アルキル化誘導体；ナフタレニル；ニトロベンズイミダゾリル；ニトロイミダゾリル；ニトロインダゾリル；ニトロピラゾリル；ヌブラリン；Ｏ６－置換プリン；Ｏ－アルキル化誘導体；オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オルト置換－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；オキソホルマイシンＴＰ；パラ－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；パラ置換－６－フェニル－ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ペンタセニル；フェナントラセニル；フェニル；プロピニル－７－（アザ）インドリル；ピレニル；ピリドピリミジン－３－イル；ピリドピリミジン－３－イル、２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；ピロロピリミジン－２－オン－３－イル；ピロロピリミジニル；ピロロピリジニル；スチルベンジル；置換１，２，４－トリアゾール；テトラセニル；ツベルシジン；キサンチン；キサントシン－５’－ＴＰ；２－チオ－ゼブラリン；５－アザ－２－チオ－ゼブラリン；７－デアザ－２－アミノ－プリン；ピリジン－４－オンリボヌクレオシド；２－アミノ－リボシド－ＴＰ；フォルマイシンＡＴＰ；フォルマイシンＢＴＰ；ピロロシンＴＰ；又は２’－ＯＨ－アラグアノシンＴＰを含む。
これらの改変核酸塩基及び対応するリボヌクレオシドの多くは、市販されている。

自己増幅型ｍＲＮＡ（ＳＡＭ）
本明細書に開示されるｍＲＮＡは、複製型、すなわち自己増幅型であり得る。自己増幅型ｍＲＮＡ分子は、アルファウイルス由来のｍＲＮＡレプリコンであり得る。ｍＲＮＡ増幅は、抗原をコードする非複製型ｍＲＮＡと、複製機構をコードする別のｍＲＮＡと組み合わせて提供することによっても達成し得る。

自己複製型ＲＮＡ分子は当技術分野において周知であり、例えばアルファウイルス由来の複製エレメントを用い、ウイルスの構造タンパク質を目的のタンパク質をコードするヌクレオチド配列に置換することによって製造され得る。自己複製型ＲＮＡ分子は典型的には＋鎖分子であり、細胞に送達された後に直接翻訳され得、この翻訳によってＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼが提供され、送達されたＲＮＡからアンチセンス転写産物とセンス転写産物の両方が産生される。このように、送達されたＲＮＡは複数の娘ＲＮＡの産生をもたらす。これらの娘ＲＮＡは、共線的なサブゲノム転写産物と同様に、それ自体が翻訳されてコードされた抗原のｉｎｓｉｔｕ発現をもたらすか、又は送達されたＲＮＡと同じセンスを有するさらなる転写産物へと転写されて、それが翻訳されて抗原のｉｎｓｉｔｕ発現をもたらし得る。この一連の転写の結果として、導入されたレプリコンＲＮＡの数が大幅に増加し、コードされた抗原が細胞の主要なポリペプチド産物となる。

好適なアルファウイルスレプリコンは、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルスなどのレプリカーゼを使用し得る。変異型又は野生型のウイルス配列が使用され得、例えば、ＶＥＥＶの弱毒化ＴＣ８３変異体がレプリコンに使用されている。ＷＯ２００５／１１３７８２を参照されたい。

特定の実施形態では、本明細書に記載の自己複製型ＲＮＡ分子は、（ｉ）自己複製型ＲＮＡ分子からＲＮＡを転写し得るＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、及び（ｉｉ）抗原、をコードする。ポリメラーゼは、例えば、アルファウイルスタンパク質ｎｓＰ１、ｎｓＰ２、ｎｓＰ３、及びｎｓＰ４（前記ｎｓＰは非構造タンパク質を表す）の１種以上を含むアルファウイルスレプリカーゼであり得る。

天然アルファウイルスゲノムは、非構造レプリカーゼポリタンパク質に加えて構造ビリオンタンパク質もコードしているが、自己複製型ＲＮＡ分子はアルファウイルス構造タンパク質をコードしていない。したがって、自己複製型ＲＮＡは細胞内で自身のゲノムＲＮＡコピーを産生することはできるが、ＲＮＡ含有ビリオンを産生することはできない。これらのビリオンを産生できないということは、野生型アルファウイルスとは異なり、自己複製型ＲＮＡ分子は感染性形態で永続化できないことを意味する。野生型ウイルスにおける永続化に必要なアルファウイルス構造タンパク質は、本開示の自己複製型ＲＮＡには存在せず、その代わりに目的の免疫原をコードする遺伝子があるため、サブゲノム転写産物はアルファウイルスビリオン構造タンパク質ではなく免疫原をコードする。

本発明に有用な自己複製型ＲＮＡ分子は、２つのオープンリーディングフレームを有し得る。第１の（５’）オープンリーディングフレームはレプリカーゼを、第２の（３’）オープンリーディングフレームは１種以上のＨＢＶ抗原をコードする。

特定の実施形態では、本明細書に開示される自己複製型ＲＮＡ分子は５’キャップ（例えば、７－メチルグアノシン）を有する。このキャップは、ＲＮＡのｉｎｖｉｖｏ翻訳を促進し得る。一部の実施形態において、自己複製型ＲＮＡ分子の５’配列は、コードされるレプリカーゼとの適合性を確保するように選択されなければならない。

自己複製型ＲＮＡ分子は３’ポリＡテールを有し得る。また、３’末端付近にポリＡポリメラーゼ認識配列（例えば、ＡＡＵＡＡＡ）を含み得る。

自己複製型ＲＮＡ分子は様々な長さを持ち得るが、典型的には５０００～２５０００ヌクレオチド長である。自己複製型ＲＮＡ分子は典型的には一本鎖である。一本鎖ＲＮＡは一般に、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＲＮＡヘリカーゼ、及び／又はＰＫＲに結合してアジュバント効果を発現し得る。二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）として送達されたＲＮＡはＴＬＲ３に結合し得、この受容体は一本鎖ＲＮＡの複製中又は一本鎖ＲＮＡの二次構造内で形成されるｄｓＲＮＡによっても活性化され得る。

別の実施形態では、自己複製型ＲＮＡは、それぞれがアルファウイルス由来のヌクレオチド配列を含む２つの別個のＲＮＡ分子を含むことができる。一方のＲＮＡ分子はアルファウイルスレプリカーゼを発現するためのＲＮＡコンストラクトを含み、もう一方のＲＮＡ分子はレプリカーゼによってトランスで複製され得るＲＮＡレプリコンを含む。アルファウイルスレプリカーゼを発現するためのＲＮＡコンストラクトは、５’キャップを含む。ＷＯ２０１７／１６２２６５を参照のこと。

自己複製型ＲＮＡは、ｉｎｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）によって簡便に調製され得る。ＩＶＴでは、細菌内でプラスミドとして製造・増殖させた（ｃＤＮＡ）テンプレート、又は合成的に（例えば、遺伝子合成及び／又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）工学的方法によって）製造したテンプレートを使用し得る。例えば、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（バクテリオファージＴ７、Ｔ３、又はＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼなど）を用いて、ＤＮＡテンプレートから自己複製型ＲＮＡを転写し得る。必要に応じた好適なキャッピング反応及びポリＡ付加反応を使用し得る。（しかしながら、レプリコンのポリＡは通常、ＤＮＡテンプレート内にコードされている）。これらのＲＮＡポリメラーゼは、転写される５’ヌクレオチドに対して厳格な要件を有する場合があり、一部の実施形態において、これらの要件は、コードされているレプリカーゼの要件と一致している必要がある。これは、ＩＶＴ転写されたＲＮＡが、自己コードされたレプリカーゼの基質として効率的に機能することを保証するためである。

自己複製型ＲＮＡは、（任意の５’キャップ構造に加えて）改変された核酸塩基を有する１種以上のヌクレオチドを含み得る。本発明で使用されるＲＮＡは、理想的にはヌクレオシド間にホスホジエステル結合のみを含むが、一部の実施形態において、ホスホロアミデート結合及び／又はメチルホスホネート結合を含み得る。

自己複製型ＲＮＡ分子は、単一の異種ポリペプチド抗原（すなわち抗原）、又はアミノ酸配列として発現させた際に各配列が同一性を保持するように（例えば、直列に）連結された２つ以上の異種ポリペプチド抗原をコードし得る。自己複製型ＲＮＡから生成された異種ポリペプチドは、融合ポリペプチドとして産生されるか、又は、別個のポリペプチド配列又はペプチド配列が得られるように操作され得る。

本明細書に記載の自己複製型ＲＮＡ分子は、複数のヌクレオチド配列を発現するように操作することができ、それによって、１つ、２つ、又はそれ以上のＨＢＶ抗原（例えば、表面抗原及びコア抗原）などのタンパク質の共発現を可能にする。ＲＮＡ分子は、これらのタンパク質をサイトカイン又は他の免疫調節因子と共に発現し得て、免疫応答の生成を増強することができる。

必要に応じて、自己複製型ＲＮＡ分子は、当業者に知られている様々なｉｎｖｉｔｒｏ又はｉｎｖｉｖｏ試験方法を用いて、治療特性及び予防特性を確認するためにスクリーニング又は分析され得る。例えば、自己複製型ＲＮＡ分子を含むワクチンは、対象となる特定のリンパ球型、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、Ｔ細胞株、及びＴ細胞クローン、の増殖誘導又はエフェクター機能に対する効果について試験され得る。例えば、免疫化マウスの脾臓細胞を単離し、抗原をコードする自己複製型ＲＮＡ分子を含む自己標的細胞を溶解する細胞傷害性Ｔリンパ球の能力を試験し得る。さらに、Ｔヘルパー細胞の分化は、ＥＬＩＳＡ法を用いてＴＨ１（ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ）及び／又はＴＨ２（ＩＬ－４及びＩＬ－５）サイトカインの増殖又は産生を測定することにより、あるいはＣＤ４＋Ｔ細胞において細胞質サイトカイン染色及びフローサイトメトリーにより直接測定することにより分析できる。

抗原をコードする自己複製型ＲＮＡ分子は、例えば、目的の抗原に特異的な抗体のＢ細胞産生誘導によって証明されるように、体液性免疫応答を誘導する能力についても試験され得る。これらのアッセイは、例えば、免疫化された個体の末梢Ｂリンパ球を用いて行われ得る。このようなアッセイ方法は当業者に公知である。自己複製型ＲＮＡ分子の特性評価に使用できる他のアッセイでは、標的細胞によるコードされた抗原の発現を検出することが含まれる。例えば、ＦＡＣＳ法を用いて細胞表面又は細胞内での抗原発現を検出し得る。ＦＡＣＳによる選定のもう１つの利点は、異なる発現レベルに基づいて選別できることである。場合によっては、より低い発現が望ましいことがあり得る。特定の抗原を発現する細胞を同定するための他の好適な方法としては、プレート上でのモノクローナル抗体を用いたパンニングや、モノクローナル抗体をコーティングした磁気ビーズを用いた捕捉法などがある。

一実施形態では、本開示の自己複製型ＲＮＡは、自己切断ペプチドをコードする配列を含み得る。自己切断ペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）の２Ａ切断領域（本明細書では「２Ａ」と称する）であり得るが、これに限定されない。２Ａペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。一態様においては、２Ａペプチドは最後のグリシンと最後のプロリンの間を切断する。２Ａペプチドは、リボソームに２ＡペプチドのＣ末端におけるペプチド結合の合成をスキップさせ、２Ａ配列の末端と下流の次のペプチドとの間の分離（「切断」）をもたらす。一実施形態では、２Ａペプチドは、２つ以上の目的のポリペプチドのコード領域を分離するために使用され得る。非限定的な例として、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のコード領域Ａ（例えば、ｈＩｉ－ＨＢｃをコードする）と第２のコード領域Ｂ（例えば、ＨＢｓをコードする）との間にあり得る。

別の実施形態では、本開示の自己複製型ＲＮＡは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードする配列を含み得る。ＩＲＥＳエレメントは、追加のリボソーム動員部位のように機能し、ｍＲＮＡの内部領域での翻訳を可能にし、その結果、下流ＯＲＦは上流ＯＲＦとは別に翻訳される。一実施形態では、ＩＲＥＳは、２つ以上の目的のポリペプチドのコード領域を分離するために使用され得る。非限定的な例として、ＩＲＥＳをコードするヌクレオチド配列は、第１のコード領域Ａ（例えば、ｈＩｉ－ＨＢｃをコードする）と第２のコード領域Ｂ（例えば、ＨＢｓをコードする）との間にあり得る。

一実施形態では、自己複製型ＲＮＡは、５’キャップ／５’ＵＴＲ－非構造タンパク質（ＮＳＰ）１－４／サブゲノムプロモーター／ｈＩｉ／ＨＢｃ／２Ａ／ＨＢｓ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。
一実施形態では、自己複製型ＲＮＡは、５’キャップ／５’ＵＴＲ－非構造タンパク質（ＮＳＰ）１－４／サブゲノムプロモーター／ｈＩｉ／ＨＢｃ／ＩＲＥＳ／ＨＢｓ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。

一実施形態では、自己複製型ＲＮＡは、５’キャップ／５’ＵＴＲ－非構造タンパク質（ＮＳＰ）１－４／サブゲノムプロモーター／ｈＩｉ／ＨＢｃ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。
一実施形態では、自己複製型ＲＮＡは、５’キャップ／５’ＵＴＲ－非構造タンパク質（ＮＳＰ）１－４／サブゲノムプロモーター／ＨＢｓ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。

一実施形態では、自己複製型ＲＮＡは、５’キャップ／５’ＵＴＲ－非構造タンパク質（ＮＳＰ）１－４／サブゲノムプロモーター／ｈＩｉ／ＨＢｓ／３’ＵＴＲ／ポリＡの構成を有する。
一実施形態では、ｍＲＮＡは非複製型ｍＲＮＡである。第２の実施形態では、ｍＲＮＡは複製型ｍＲＮＡである。

脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、ｍＲＮＡをカプセル化し得る非ビリオンリポソーム粒子である。単独で、及び保護されていない状態のＲＮＡは、対象者のＲＮＡ分解酵素によって分解され得る。ＬＮＰは、全体組成物中の一定量のｍＲＮＡをＬＮＰ内にカプセル化することにより、ｍＲＮＡを保護する手段を提供する。ＬＮＰ送達システム及びその調製方法は、当技術分野において既知である。ＬＮＰは、（例えば、ＬＮＰの表面上に）外部ｍＲＮＡを含むことができるが、ｍＲＮＡの少なくとも半分（好適には少なくとも８５％、特に少なくとも９５％、例えば全て）がカプセル化されていることが望ましい。

第１の脂質
一部の実施形態において、ＬＮＰは、第１の脂質（すなわち、カチオン化可能な（ｃａｔｉｏｎ－ｉｏｎｉｚａｂｌｅ）脂質）、任意のステロール（例えば、コレステロール）、任意のポリマーコンジュゲート脂質、及び任意の第２脂質（すなわち、任意のアニオン性脂質又は双性イオン性脂質を含む任意の中性脂質）を含む脂質を含む。一部の実施形態において、任意の中性脂質は、中性脂質／両性イオン性脂質を含む。一部の実施形態において、ポリマーコンジュゲート脂質は、ポリエチレングリコールコンジュゲート脂質を含む。一部の実施形態において、ＬＮＰは、ＷＯ２０１２／００６３７６、ＷＯ２０１２／０３０９０１、ＷＯ２０１２／０３１０４６、ＷＯ２０１２／０３１０４３、ＷＯ２０１２／００６３７８、ＷＯ２０１１／０７６８０７、ＷＯ２０１３／０３３５６３、ＷＯ２０１３／００６８２５、ＷＯ２０１４／１３６０８６、ＷＯ２０１５／０９５３４０、ＷＯ２０１５／０９５３４６、ＷＯ２０１６／０３７０５３、ＷＯ２０１７／０７５５３１、ＷＯ２０１８／０８１４８０、ＷＯ２０１５／０７４０８５、ＷＯ２０１８／１７０３３２２、米国特許出願公開番号：２０２２００８１３９２、２０２２００７２１５５、２０２２００４０２８５、２０２１０３９５１８８、２０２１０２５１８９８、２０２１０１２８４８８、２０２１０１２２７０３、２０２１０１２２７０２、２０２１０１０７８６１、２０２００２８３３７２、２０２００１７２４７２、２０２００１６３８７８、２０２００１２１８０９、２０２０００４６８３８、２０１９０３５９５５６、２０１９０３１４５２４、２０１９０２７４９６８、２０１９０２７０６９７、２０１９００２２２４７、２０１８０１８５５１６、２０１７０２８３３６７、２０１７０１５７２６８、２０１７０１１９９０４、２０１６０３７６２２４、２０１６０３１７６７６、又は２０１５０３７６１１５、米国出願番号６１／９０５，７２４又は１５／６１４，４９９、又は米国特許第８，８０２，８６３、９，４５８，０９０、９，５９３，０７７、９，５６７，２９６、９，６０４，９０８、９，６４３，９１６、９，６６９，０９７、９，６７０，４８７、９，７３７，６１９、９，７３８，５９３、９，７２５，７２０、９，７９６，９７７、１０，１０６，４９０、１０，１６６，２９８、１０，２２１，１２７、１０，７２３，６９２、１１，０４０，１１２、１１，１６８，０５１、又は１１，２８５，２２２～の脂質（本明細書中で言及されているイオン化可能な脂質及びＰＥＧ脂質を含む）を含む。

一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質は、カチオン化可能な脂質のｐＫａと比較した場合、カチオン化可能な脂質が存在する溶液のｐＨに依存して荷電され得る、第三級アミンであり得るアミンを含む。一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質を含む溶媒のｐＨがｐＫａを超える場合、カチオン化可能な脂質の少なくとも半分は中性に帯電し、アミンは第三級アミンである。また、カチオン化可能な脂質を含む溶媒のｐＨがｐＫａを下回る場合、カチオン化可能な脂質の少なくとも半分は正に帯電する。この点に関して、一部の実施形態において、特定の理論に限定されるわけではないが、イオン化脂質の正電荷がアミン上に分布し、その結果、カチオン化可能な脂質を含む溶媒のｐＨがｐＫａを下回る場合、アミンは正に帯電すると考えられる。アミンは、カチオン化可能な脂質のｐＫａに対する溶液のｐＨに応じて中性と正電荷の間で変動し得るため、特定の理論に縛られることなく、アミンはイオン化可能なアミンである。

アミンが第三級アミンである場合、及びカチオン化可能な脂質が中性に帯電している場合について、カチオン化可能な脂質についてさらに記載するが、その記載は、カチオン化可能な脂質が正に帯電する能力を欠くことに限定するものではない。すなわち、第三級アミンが帯電した場合のカチオン化可能な脂質について説明する必要なしに第三級アミン状態にあり、中性に帯電している脂質について本明細書で説明する。一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質は、上記のイオン化可能なアミンに加えて、ヘッドグループ（Ｒ^Ｈ）及び脂肪酸テール（Ｒ^ＦＡ１又はＲ^ＦＡ２）をさらに含む。一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質は、例えば式Ｉに示すように、（上記のイオン化アミンに加えて）ヘッドグループ及び少なくとも２つの脂肪酸テール（Ｒ^ＦＡ１及びＲ^ＦＡ２）をさらに含む。

一部の実施形態において、アミンはヘッドグループと脂肪酸テールの間に分岐点を提供する。一部の実施形態において、脂肪酸テール（Ｒ^ＦＡ）又は少なくとも２つの脂肪酸テール（すなわち、Ｒ^ＦＡ１、Ｒ^ＦＡ２…）は、イオン化可能なアミンからすぐ離れている。一部の実施形態において、脂肪酸テールは、又は少なくとも２つの脂肪酸テールは、生分解性基（すなわち、Ｒ^ＢＤ１又はＲ^ＢＤ２）を含み、少なくとも２つの脂肪酸テールは、同じであるか、互いに独立している。一部の実施形態において、少なくとも２つの脂肪酸テールはそれぞれ、式ＩＩに示されるような生分解性基を含み、生分解性基は、同じであるか、互いに独立している。一部の実施形態において、生分解性基は、イオン化可能なアミンから順に、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、又は－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）Ｏ－を含み、前記Ｘは０、１、又は２であり、Ｒ^ａは水素又はＣ_１－Ｃ_１２アルキルである。一部の実施形態において、脂肪酸、又は少なくとも２つの脂肪酸は、式ＩＩに示すように、アミン分岐点と生分解性基との間に、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、又はＣ_１－Ｃ_１２アルケニレン（すなわち、Ｒ^ＦＣ１及びＲ^ＦＣ２）を含む。一部の実施形態において、脂肪酸、又は２つ以上の脂肪酸は、イオン化可能なアミン及び生分解性基から遠い位置に、例えば式ＩＩに示される、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_７－Ｃ_２３アルキル、Ｃ_７－Ｃ_２３アルキレン、Ｃ_８－Ｃ_２２アルキル、Ｃ_８－Ｃ_２２アルキレン、Ｃ_９－Ｃ_２１アルキル、Ｃ_９－Ｃ_２１アルキレン、Ｃ_１０－Ｃ_２０アルキル、Ｃ_１０－Ｃ_２０アルキレン、Ｃ_１１－Ｃ_１９アルキル、Ｃ_１１－Ｃ_１９アルキレン、Ｃ_１２－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１２－Ｃ_１８アルキレン、Ｃ_１３－Ｃ_１７アルキル、又はＣ_１３－Ｃ_１７アルキレン（すなわち、Ｒ^ＦＣ３及びＲ^ＦＣ４）を含む。
［式中、Ｒ^ＦＣ１及びＲ^ＦＣ２はそれぞれ独立して、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、又はＣ_１－Ｃ_１２アルケニレンであり、
Ｒ^ＦＣ３及びＲ^ＦＣ４はそれぞれ独立して、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_７－Ｃ_２３アルキル、Ｃ_７－Ｃ_２３アルキレン、Ｃ_８－Ｃ_２２アルキル、Ｃ_８－Ｃ_２２アルキレン、Ｃ_９－Ｃ_２１アルキル、Ｃ_９－Ｃ_２１アルキレン、Ｃ_１０－Ｃ_２０アルキル、Ｃ_１０－Ｃ_２０アルキレン、Ｃ_１１－Ｃ_１９アルキル、Ｃ_１１－Ｃ_１９アルキレン、Ｃ_１２－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１２－Ｃ_１８アルキレン、Ｃ_１３－Ｃ_１７アルキル、Ｃ_１３－Ｃ_１７アルキレンであり、
Ｒ^ＢＤ１及びＲ^ＢＤ２はそれぞれ独立して、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、又は－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｘは０、１、又は２であり、Ｒ^ａは水素又はＣ_１－Ｃ_１２アルキルである。］

一部の実施形態において、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキル又はＣ_６－Ｃ_２４アルキレンは、そのＣ_６－Ｃ_１２、Ｃ_７－Ｃ_１１、Ｃ_８－Ｃ_１０、又はＣ_９において生分解性基に結合している。一部の実施形態において、少なくとも２つの脂肪酸末端のそれぞれのＣ_６－Ｃ_２４アルキル又はＣ_６－Ｃ_２４アルキレンは独立して以下を含む：

一部の実施形態において、ヘッドグループは、第１の基（すなわちＲ^Ｈ１）及び第２の基（すなわちＲ^Ｈ２）を含む、それらからなる、又はそれらである、又はそれらを有する。前記の第１の基は、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_２４アルケニレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、又はＣ_３－Ｃ_８シクロアルケニレンであり、第２の基は、Ｈ、－ＯＨ、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ^４、－ＮＲ^５Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^４、又はＯＲ^５であり、前記のＲ^４はＣ_１－Ｃ_１２アルキルであり、Ｒ^５はＨ又はＣ_１－Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、ヘッドグループは、－（ＣＨ_２）_６ＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＯＨ、又は－ＣＨ_２ＯＨの直鎖又は分岐鎖形態を含む。一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質は、［（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル］ジ（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）、又は９－ヘプタデカニル８－｛（２－ヒドロキシエチル）［６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル］アミノ｝オクタノエートを含むか、それらからなるか、又はそれらである。

一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質は以下のものである：

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ２８を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ３１を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ３３を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ３７を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、ＲＶ３９、すなわち、２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ベンジル４－（ジメチルアミノ）ブタノエートを含むか、それからなるか、本質的にそれからなるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ４２を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ４４を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ７３を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ７５を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ８１を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ８４を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ８５を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ８６を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ８８を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９１を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９２を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９３を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有する２－（５－（（４－（（１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート（ＲＶ９４）を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９５を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９６を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９７を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ９９を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一実施形態では、カチオン化可能な脂質は、以下の構造を有するＲＶ１０１を含むか、それからなるか、それから本質的になるか、又はそれである。

一部の実施形態において、カチオン化可能な脂質は、式ＩＩＩの構造を有する脂質を含むか、それからなるか、本質的にそれからなるか、又はそれである。
［式中、ｎは１から３までの整数であり、
（ｉ）Ｒ_１はＣＨ_３であり、Ｒ_２及びＲ_３は双方Ｈであり、ＹはＣであり、又は
（ｉｉ）Ｒ_１及びＲ_２は、一緒になってＣＨ_２－ＣＨ_２であり、窒素と共に５員、６員、又は７員ヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ_３はＣＨ_３であり、ＹはＣであり、又は
（ｉｉｉ）Ｒ_１はＣＨ_３であり、Ｒ_２及びＲ_３はともに存在せず、ＹはＯであり、
ｏは０又は１であり、
Ｘは、
（ｉ）
であり、式中、Ｒ_４及びＲ_５は、独立して、オメガ６位及びオメガ９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有するＣ_１０－_２０炭化水素鎖であり、又は
（ｉｉ）－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、ここで
（１）Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８又は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり；
（２）Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’又は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり；
（３）ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり；及び
（４）Ｒ_８及びＲ_８’は独立して
（Ａ）オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１個又は２個のシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖；
（Ｂ）－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖；
（Ｃ）－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖；
（Ｄ）－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖；
（Ｅ）－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖；及び
（Ｆ）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖
である。］

一実施形態では、Ｒ_１はＣＨ_３であり、Ｒ_２及びＲ_３はともにＨであり、ＹはＣである。一部の実施形態において、Ｒ_１及びＲ_２は、一緒になってＣＨ_２－ＣＨ_２であり、窒素原子と共に５員、６員、又は７員のヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ_３はＣＨ_３であり、ＹはＣである。一部の実施形態において、Ｒ_１はＣＨ_３であり、Ｒ_２及びＲ_３はともに存在せず、ＹはＯである。

一実施形態では、Ｘは
であり、Ｒ_４及びＲ_５は、独立して、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有するＣ_{１０－２０}炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位の一方又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位の一方又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－（ＣＨ_２）_ｐ’－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり；Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり；Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、オメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４である。Ｒ_８は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は、－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’はオメガ６位及び９位のいずれか又は両方に１つ又は２つのシスアルケン基を有する－Ｃ_８－２０炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_１－３－Ｃ（－Ｏ－Ｃ_６－１２）－Ｏ－Ｃ_６－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ（－Ｃ_６－１６）－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ［－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２］－Ｃ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_４－１２飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一実施形態では、Ｘは－ＣＨ（－Ｒ_６）－Ｒ_７であり、Ｒ_６は－Ｃ_ｐ－Ｒ_８であり、Ｒ_７は－Ｃ_ｐ’－Ｒ_８’であり、ｐ及びｐ’は独立して０、１、２、３又は４であり、Ｒ_８は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖であり、Ｒ_８’は－Ｃ_６－１６飽和又は不飽和炭化水素鎖である。

一部の実施形態では、カチオン化可能な脂質は、ＷＯ２０１２／００６３７６、ＷＯ２０１２／０３０９０１、ＷＯ２０１２／０３１０４６、ＷＯ２０１２／０３１０４３、ＷＯ２０１２／００６３７８、ＷＯ２０１１／０７６８０７、ＷＯ２０１３／０３３５６３、ＷＯ２０１３／００６８２５、ＷＯ２０１４／１３６０８６、ＷＯ２０１５／０９５３４０、ＷＯ２０１５／０９５３４６、ＷＯ２０１６／０３７０５３、ＷＯ２０１７／０７５５３１、ＷＯ２０１８／０８１４８０、ＷＯ２０１５／０７４０８５、ＷＯ２０１８／１７０３３２２、米国特許出願公開番号：２０２２００８１３９２、２０２２００７２１５５、２０２２００４０２８５、２０２１０３９５１８８、２０２１０２５１８９８、２０２１０１２８４８８、２０２１０１２２７０３、２０２１０１２２７０２、２０２１０１０７８６１、２０２００２８３３７２、２０２００１７２４７２、２０２００１６３８７８、２０２００１２１８０９、２０２０００４６８３８、２０１９０３５９５５６、２０１９０３１４５２４、２０１９０２７４９６８、２０１９０２７０６９７、２０１９００２２２４７、２０１８０１８５５１６、２０１７０２８３３６７、２０１７０１５７２６８、２０１７０１１９９０４、２０１６０３７６２２４、２０１６０３１７６７６、又は２０１５０３７６１１５、米国出願番号６１／９０５，７２４又は１５／６１４，４９９、又は米国特許第８，８０２，８６３、９，４５８，０９０、９，５９３，０７７、９，５６７，２９６、９，６０４，９０８、９，６４３，９１６、９，６６９，０９７、９，６７０，４８７、９，７３７，６１９、９，７３８，５９３、９，７２５，７２０、９，７９６，９７７、１０，１０６，４９０、１０，１６６，２９８、１０，２２１，１２７、１０，７２３，６９２、１１，０４０，１１２、１１，１６８，０５１、１１，２４６，９３３、又は１１，２８５，２２２（文献中ではイオン化可能な脂質と称される）が挙げられる。

一部の実施形態では、カチオン化可能な脂質は、第１の基と２つの生分解性疎水性テールとを含む。一部の実施形態では、第１の基は中心部分と頭部基とを含み、第１の基は正に帯電することができる。一部の実施形態では、中心部分は２つの生分解性基のそれぞれに直接結合している。一部の実施形態では、中心部分は頭部基に直接結合している。一部の実施形態では、中心部分は、中心炭素原子、中心窒素原子、中心ヘテロアリール基、及び中心複素環式基から選択される。一部の実施形態では、２つの生分解性疎水性テールの１つ、又は２つの生分解性疎水性テールのそれぞれは、以下の式を有する：－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、又はＣ_１－Ｃ_１２アルケニレン）－（生分解性基）－（Ｃ_６－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_７－Ｃ_２３アルキル、Ｃ_７－Ｃ_２３アルキレン、Ｃ_８－Ｃ_２２アルキル、Ｃ_８－Ｃ_２２アルキレン、Ｃ_９－Ｃ_２１アルキル、Ｃ_９－Ｃ_２１アルキレン、Ｃ_１０－Ｃ_２０アルキル、Ｃ_１０－Ｃ_２０アルキレン、Ｃ_１１－Ｃ_１９アルキル、Ｃ_１１－Ｃ_１９アルキレン、Ｃ_１２－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１２－Ｃ_１８アルキレン、Ｃ_１３－Ｃ_１７アルキル、Ｃ_１３－Ｃ_１７アルキレン）。一部の実施形態では、２つの生分解性疎水性テールにおける各生分解性基は、独立して、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、又は－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）Ｏ－から選択され；ここで、Ｘは０、１、又は２であり、Ｒ^ａは水素又はＣ_１－Ｃ_１２アルキルである。一部の実施形態では、２つの生分解性テールの１つ、又は２つの生分解性テールのそれぞれは、１）分岐アルキル基である末端疎水性鎖及び末端を有し、２）分岐アルキル基の分岐は生分解性基に対してアルファ位を有し、３）生分解性疎水性テールの６～１２個の炭素原子が末端を生分解性基から隔てている。

一部の実施形態では、カチオン化可能な脂質は、ビス（２－メタクリロイル）オキシエチルジスルフィド（ＤＳＤＭＡ、ＣＡＳ番号３６８３７－９７－５）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリール－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、ｃｋｋ－Ｅ１２、ｃｋｋ、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２－ジ－ｙ－リノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ｙ－ＤＬｅｎＤＭＡ）、９８Ｎ１２－５、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン塩化物（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＭＤＭＡ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｋ－ＸＴＣ２－ＤＭＡ、ＸＴＣ（２，２－ジリノレオイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン）ＨＧＴ４００３、１，２－ジリノレイル－３－トリメチルアミノプロパン塩化物（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、又は３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオ（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）又はそれらの類似体、（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－－３ａＨ－シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－アミン、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル－４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＭＣ３）、ＡＬＮＹ－１００（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－ｏ－３ａＨ－シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－アミン））、１，１’－（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチルアザンジイル）ジドデカン－２－オール（Ｃ１２－２００）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、ＮＣ９８－５（４，７，１３－トリス（３－オキソ－３－（ウンデシルアミノ）プロピル）－Ｎ１，Ｎ１６－ジウンデシル－４，７，１０，１３－テトラアザヘキサデカン－１，１６－ジアミド）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－Ｍ－Ｃ３－ＤＭＡ）、３－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン（ＭＣ３エーテル）、４－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルブタン－１－アミン（ＭＣ４エーテル）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（ニューヨーク州グランドアイランドＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ製のＤＯＴＭＡ及び１，２－ジオレオイル－ｓｎ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む市販の陽イオン性リポソーム）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ製の、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ－（２－（スペルミンカルボキサミド）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムトリフルオロ酢酸（ＤＯＳＰＡ）（ＤＯＰＥ）を含む市販の陽イオン性リポソーム）、又はＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（登録商標）（ウィスコンシン州マディソンＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ．製の、エタノール中のジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）を含む市販の陽イオン性脂質）、又は前記いずれかの組み合わせを含む。さらに好適な陽イオン系化合物としては、国際特許公開ＷＯ２０１０／０５３５７２（特に、段落［００２２５］に記載のＣＩ２－２００）及びＷＯ２０１２／１７０９３０（いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているもの、ＨＧＴ４００３、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴＳ００１、ＨＧＴ５００１、ＨＧＴ５００２（米国特許出願公開第２０１５０１４００７０Ａ１号参照）が挙げられる。

代表的なカチオン化可能な脂質としては、１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン塩化物（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパン塩化物（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、及び２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、ＭＣ３（米国特許公開番号２０１００３２４１２０）などが挙げられるが、これらに限定されない。

様々な両親媒性脂質は、水性環境下で二重膜を形成し、ＲＮＡを含む水性コアをＬＮＰとして包み込み得る。これらの脂質は、陰イオン性、陽イオン性、又は両性イオン性の親水性頭部基を有し得る。リン脂質には陰イオン性のものもあれば、両性イオン性のもの、そして陽イオン性のものもある。好適なリン脂質のクラスには、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、及びホスファチジルグリセロールが含まれるが、これらに限定されない。一部の有用なリン脂質は表１に列挙されている。有用な陽イオン性脂質には、ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、及び１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。両性イオン性脂質には、アシル両性イオン性脂質及びエーテル両性イオン性脂質が含まれるが、これらに限定されない。有用な両性イオン性脂質の例としては、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、及びドデシルホスホコリンが挙げられる。これらの脂質は飽和又は不飽和のいずれでもあり得る。リポソームの調製には、少なくとも１種の不飽和脂質を使用することが好ましい。不飽和脂質が２つのテールを有する場合、両方のテールが不飽和であってもよく、又は１つの飽和テールと１つの不飽和テールを有してもよい。

その他の有用なＬＮＰについては、以下の文献に記載されている：ＷＯ２０１２／００６３７６、ＷＯ２０１２／０３０９０１、ＷＯ２０１２／０３１０４６、ＷＯ２０１２／０３１０４３、ＷＯ２０１２／００６３７８、ＷＯ２０１１／０７６８０７、ＷＯ２０１３／０３３５６３、ＷＯ２０１３／００６８２５、ＷＯ２０１４／１３６０８６、ＷＯ２０１５／０９５３４０、ＷＯ２０１５／０９５３４６、ＷＯ２０１６／０３７０５３。一部の実施形態では、ＬＮＰはＲＶ０１リポソームであり、以下の文献を参照のこと：ＷＯ２０１２／００６３７６及びＧｅａｌｌｅｔａｌ．（２０１２）ＰＮＡＳＵＳＡ．Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ４；１０９（３６）：１４６０４－９。

ポリエチレングリコールコンジュゲート脂質
一部の実施形態では、ＬＮＰはポリエチレングリコールコンジュゲート（ＰＥＧコンジュゲート）脂質を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧコンジュゲート脂質は、様々な長さ及び分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。

一部の実施形態では、ＰＥＧコンジュゲート脂質中のＰＥＧの分子量の中央値は、０．５ｋＤａ、０．６ｋＤａ、０．７ｋＤａ、０．８ｋＤａ、０．９ｋＤａ、１．０ｋＤａ、１．１ｋＤａ、１．２ｋＤａ、１．３ｋＤａ、１．４ｋＤａ、１．５ｋＤａ、１．６ｋＤａ、１．７ｋＤａ、１．８ｋＤａ、１．９ｋＤａ、２．０ｋＤａ、２．１ｋＤａ、２．２ｋＤａ、２．３ｋＤａ、２．４ｋＤａ、２．５ｋＤａ、２．６ｋＤａ、２．７ｋＤａ、２．８ｋＤａ、２．９ｋＤａ、３．０ｋＤａ、３．１ｋＤａ、３．２ｋＤａ、３．３ｋＤａ、３．４ｋＤａ、３．５ｋＤａ、３．６ｋＤａ、３．７ｋＤａ、３．８ｋＤａ、３．９ｋＤａ、４．０ｋＤａ、４．１ｋＤａ、４．２ｋＤａ、４．３ｋＤａ、４．４ｋＤａ、４．５ｋＤａ、４．６ｋＤａ、４．７ｋＤａ、４．８ｋＤａ、４．９ｋＤａ、５．０ｋＤａ、５．１ｋＤａ、５．２ｋＤａ、５．３ｋＤａ、５．４ｋＤａ、５．５ｋＤａ、５．６ｋＤａ、５．７ｋＤａ、５．８ｋＤａ、５．９ｋＤａ、又は６．０ｋＤａである。

一部の実施形態では、ＰＥＧコンジュゲート脂質は、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００を含む。２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００において、「２０００」はＰＥＧの分子量の中央値（ダルトン）を表す。一部の実施形態では、ＰＥＧコンジュゲート脂質は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－２－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧコンジュゲート脂質は、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロール－３－メトキシポリエチレングリコールを含む。

第２の脂質
一部の実施形態では、ＬＮＰはさらに、陰イオン性脂質、中性脂質、又は両性イオン性脂質を含む第２の脂質を含む。一部の実施形態では、中性脂質は中性両性イオン性脂質を含む。一部の実施形態では、陰イオン性脂質、中性脂質、又は両性イオン性脂質は、リン酸基（すなわち、リン脂質）、コリン、又はスフィンゴ脂質を含む。

一部の実施形態では、第２の脂質は、１，２－ジヘプタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１７：０ＰＥ）、１，２－ジヘキサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（０６：０ＰＥ）、１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（０８：０ＰＥ）、１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１０：０ＰＥ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１２：０ＰＥ）、１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１５：０ＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０ＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１４：０ＰＥ）、１，２－ジパルミトレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：１ＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－トランス）ＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：２ＰＥ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：３ＰＥ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２２：６ＰＥ）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２０：４ＰＥ）、１－ペンタデカノイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１５：０－１８：１ＰＥ）、１－パルミトイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：２ＰＥ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：１ＰＥ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：１ＰＥ）、１－パルミトイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－２０：４ＰＥ）、１－パルミトイル－２－ドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－２２：６ＰＥ）１－ステアロイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：２ＰＥ）、１－ステアロイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－２０：４ＰＥ）、１－ステアロイル－２－ドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－２２：６ＰＥ）、１－オレオイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：１リゾＰＥ）、１－ヒドロキシ－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２－１８：１リゾＰＥ）、１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０リゾＰＥ）、１－トリデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１３：０リゾＰＥ）、１－（１０Ｚ－ヘプタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１７：１リゾＰＥ）、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０リゾＰＥ）、１－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１４：０リゾＰＥ）、Ｌ－α－ホスファチジルエタノールアミン、１，２－ジブチリル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０４：０ＰＣ）、１，２－ジヘキサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＨＰＣ）、１，２－ジヘプタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（７：０ＰＣ）、１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（８：０ＰＣ）、１，２－ジノナノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（９：０ＰＣ）、１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１０：０ＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１１：０ＰＣ）、１，３－ジパルミトイル－ｒａｃ－グリセロ－２－ホスホコリン（１６：０２－ＰＣ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジトリデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１３：０ＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１５：０ＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジヘプタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１７：０ＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１９：０ＰＣ）、１，２－ジアラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：０ＰＣ）、１，２－ジヘネイコサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２１：０ＰＣ）、１，２－ジベヘノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：０ＰＣ）、１，２－ジトリコサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２３：０ＰＣ）、１，２－ジリグノセロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２４：０ＰＣ）、１，２－ジバセノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１（１１－シス）ＰＣ）、１，２－ジ［（８Ｚ）オクタデセノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１（８－シス）ＰＣ）、１，２－ジミリストレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：１（Δ９－シス）ＰＣ）、１，２－ジペトロセレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１（Δ６－シス）ＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１（Δ９－トランス）ＰＣ）、１，２－ジヘプタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジヘキサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：３（シス）ＰＣ）、１，２－ジエイコセノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：１（シス）ＰＣ）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：４（シス）ＰＣ）、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：１（シス）ＰＣ）、１，２－ジネルボノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２４：１（シス）ＰＣ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：６（シス）ＰＣ）、１－ペンタデカノイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１５：０－１８：１ＰＣ）、１－ミリストイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０－１６：０ＰＣ）、１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０－１８：０ＰＣ）、１－パルミトイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１４：０ＰＣ）、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１８：０ＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１－パルミトイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１８：２ＰＣ）１－パルミトイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－２０：４ＰＣ）、１－パルミトイル－２－ドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－２２：６ＰＣ）、１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１４：０ＰＣ）、１－ステアロイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１６：０ＰＣ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１８：１ＰＣ）、１－ステアロイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１８：２ＰＣ）、１－ステアロイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－２０：４ＰＣ）、１－ステアロイル－２－ドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－２２：６ＰＣ）、１－オレオイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１－１４：０ＰＣ）、１－オレオイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１－１６：０ＰＣ）、１－オレオイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１－１８：０ＰＣ）、１－（８Ｚ－オクタデセノイル）－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１（ｎ１０）－１６：０ＰＣ）、１－パルミトイル－２－アセチル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－０２：０ＰＣ）、１－パルミトイル－２－［１２’－（パルミトイルオキシ）オクタデカノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－（１２－ＰＡＨＳＡ）ＰＣ）、１－オレオイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ヘキサノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ヘプタノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－オクタノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ノナノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－デカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ウンデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ラウロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－トリデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ペンタデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ヒドロキシ－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ヘプタデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、
１－（１０Ｚ－ヘプタデセノイル）－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ヒドロキシ－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ノナデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－アラキドイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ベヘノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－リグノセロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１－ヘキサコサノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６リゾＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、Ｎ－リグノセロイル－Ｄ－エリトロ－スフィンゴシルホスホエタノールアミン、又はスフィンゴミエリンを含む。

ステロール
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子はさらにステロールを含む。一部の実施形態では、ステロールは、コレステロール、コレステロール硫酸塩、デスモステロール、スティグマステロール、ラノステロール、７－デヒドロコレステロール、ジヒドロラノステロール、シモステロール、ラトステリオール、１４－デメチル－ラノステロール、８（９）－デヒドロコレステロール、８（１４）－デヒドロコレステロール、１４－デメチル－１４－デヒドロラノステロール（ＦＦ－ＭＡＳ）、ジオスゲニン、デヒドロエピアンドロステロン硫酸塩（ＤＨＥＡ硫酸塩）、デヒドロエピアンドロステロン、シトステロール、ラノステロール－９５、４，４－ジメチル（ｄ６）－コレスト－８（９）、１４－ジエン－３β－オール（ジヒドロ－ＦＦ－ＭＡＳ－ｄ６）、４，４－ジメチル（ｄ６）－コレスト－８（９）－エン－３β－オール（ジヒドロＴ－ＭＡＳ－ｄ６）、ザイモステノール、シトスタノール、カンペスタノール、カンペルスタノール、７－デヒドロデスモステロール、プレグネノロン、４，４－ジメチル－コレスタ－８（９）－エン－３β－オール（ジヒドロＴ－ＭＡＳ）、Δ５－アベンステロール、ブラシカステロール、ジヒドロＦＦ－ＭＡＳ、２４－メチレンコレステロール、オキシステロール、重水素化ステロール、フッ素化ステロール、スルホン化ステロール、リン酸化ステロール、Ａ環置換ステロール、コレスタ－５－エン－３β，４β－ジオール、５α－コレスタン－３β－オール、４－コレステン－３－オン、コレスタ－８（９），２４－ジエン－３－オン、コレスタ－８（９），２４－ジエン－３－オン、２，２，３，４，４－ペンタデューテリオ－５ａ－コレスタン－３β－オール、コレステリルホスホコリン、コレステリル－ｄ７ペンタデカン酸塩、コレステリル－ｄ７パルミトイル酸塩、Ｂ環置換ステロール、コレスタノール、５β，６β－エポキシ－ｄ７、３β－ヒドロキシ－５－コレステン－７－オン、６α－ヒドロキシ－５α－コレスタン、コレスタノール、５α，６α－エポキシコレスタ－５－エン－３β，７α－ジオール、コレスタ－５－エン－３β，７β－ジオール、コレスタノール、５α，６α－エポキシ－ｄ７Δ５，７－コレステロール、コレスタ－５，８（９）－ジエン－３β－オール、コレスタ－５，８（１４）－ジエン－３β－オール、７α－ヒドロキシ－４－コレステン－３－オン、ザイモステノール－ｄ７、ザイモステノール、７－デヒドロデスモステロール、３ｂ，５ａ－ジヒドロキシ－コレスタン－６－オン、Ｄ環置換ステロール、３β－ヒドロキシ－５α－コレスタ－８（１４）－エン－１５－オン、３β－ヒドロキシ－５α－コレスタン－１５－オン、５α－コレスタ－８（１４）－エン－３β，１５α－ジオール、５α－コレスタ－８（１４）－エン－３β，１５β－ジオール、ラノステロール－９５、５α－７，２４－コレスタジエン、１４－デヒドロザイモステノール、エルゴスタ－５，７，９（１１），２２－テトラエン－３β－オール、コレスタ－５－エン－３β，２５－ジオール、コレスト－（２５Ｒ）－５－エン－３β，２７－ジオール、２４（Ｒ／Ｓ）－２５－エポキシコレステロール、２４（Ｓ）－２５－エポキシコレステロール、２４（Ｒ／Ｓ），２５－エポキシコレステロール－ｄ６、コレスタ－５－エン－３β，２２（Ｓ）－ジオール、コレスタ－５－エン－３β，２２（Ｒ）－ジオール、コレスタ－５－エン－３β，２４（Ｓ）－ジオール、コレスタ－５－エン－３β，２４（Ｒ）－ジオール、２７－ヒドロキシ－４－コレステン－３－オン、カンペスタノール、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３β－ヒドロキシコレナミド、２５，２７－ジヒドロキシコレステロール、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３β－ヒドロキシコレナミド、２５，２７－ジヒドロキシコレステロール、５－コレステン－３β，２０α－ジオール、２４Ｓ，２５－エポキシ－５α－コレスタ－８（９）－エン－３β－オール、２４（Ｓ／Ｒ），２５－エポキシラノスタ－８（９）－エン－３β－オール、７－ケト－２７－ヒドロキシコレステロール、７α，２７－ジヒドロキシ－４－コレステン－３－オン、７α，２７－ジヒドロキシコレステロール、７β，２７－ジヒドロキシコレステロール、５α，６β－ジヒドロキシコレスタノール、７α，２５－ジヒドロキシコレステロール、７β，２５－ジヒドロキシコレステロール、７α，２４（Ｓ）－ジヒドロキシコレステロール、７α，２４（Ｓ）－ジヒドロキシ－４－コレステン－３－オン、７－ケト－２５－ヒドロキシコレステロール、７α，２４Ｓ，２７－トリヒドロキシコレステロール、ジヒドロテストステロン、テストステロン、エストロン、エストロゲン、エストラジオール、コルチコステロン、コルチゾール、又は２４Ｓ，２７－ジヒドロキシコレステロールを含む。

ｍＲＮＡをカプセル化するＬＮＰの製造
上述のように、一部の実施形態では、ｍＲＮＡ分子はＬＮＰ内にカプセル化される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡとＬＮＰの脂質を混合及び／又は精製することにより、ＬＮＰ内に含まれる又はカプセル化されたｍＲＮＡを得ることができる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡとＬＮＰの脂質を混合及び／又は精製することにより、ＬＮＰ内にカプセル化された上記の割合のｍＲＮＡを得ることができる。

一部の態様では、ｍＲＮＡとＬＮＰを含み、ｍＲＮＡが上記の割合でＬＮＰ内にカプセル化され、ＬＮＰが上記脂質を含む組成物を得る方法が提供され、この方法は、前記組換えＲＮＡ分子を含む第１の溶液と、上記脂質を含む第２の溶液を混合することを含む。一部の実施形態では、混合は、少なくともＴ型ミキサー、マイクロフルイディクス、又は衝突ジェットミキサーによって行われる。一部の実施形態では、第１の溶液は、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸ナトリウム）又は酢酸緩衝液（例えば、酢酸ナトリウム）をさらに含む。

一部の実施形態では、第２の溶液は、有機溶媒をさらに含む。一部の実施形態では、有機溶媒は、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、シクロペンタン、ベンゼン、トルエン、メタノール、ベンジルアルコール、及び脂肪族アルコール（例えば、Ｃ_１～Ｃ_８アルコール）を含む。一部の実施形態では、脂肪族アルコールは、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、イソブタノール、ペンタノール、ベンジルアルコール、及びヘキサノールを含む。一部の実施形態では、有機溶媒はアルコール溶液を含む。一部の実施形態では、有機アルコール溶液は、７０体積％～１００体積％のエタノールを含む。

一部の実施形態では、本方法は、組換えＲＮＡ分子及び上記のＬＮＰの脂質を含む第１の溶液と、水溶液である第２の溶液を混合することを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ及びＬＮＰの脂質は有機溶媒中で混合される。一部の実施形態では、有機溶媒は、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、シクロペンタン、ベンゼン、トルエン、メタノール、ベンジルアルコール、及び脂肪族アルコール（例えば、Ｃ_１～Ｃ_８アルコール）を含む。一部の実施形態では、脂肪族アルコールは、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、イソブタノール、ペンタノール、ベンジルアルコール、及びヘキサノールを含む。一部の実施形態では、有機溶媒はアルコール溶液を含む。一部の実施形態では、有機アルコール溶液は、７０体積％～１００体積％のエタノールを含む。一部の実施形態では、有機アルコール溶液は、エタノール７０体積％～１００体積％及びベンジルアルコール３０体積％～０体積％を含む。一部の実施形態では、水溶液はクエン酸緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）又は酢酸緩衝液（例えば酢酸ナトリウム）を含む。一部の実施形態では、第１の溶液と第２の溶液は、１：１～５：１、２：１～４：１、２．５：１～３．５：１、又は３：１の比率で混合される。

一部の実施形態では、第１の溶液と第２の溶液の混合（すなわち、上記２つの方法のいずれか）は、ｐＨ４．５から第１の脂質（例えば、カチオン化可能な脂質）のｐＫａまでの範囲で行われ、それによって第１の混合物が得られる。一部の実施形態では、第１の溶液と第２の溶液の混合は、ｐＨ４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、又は６．０から第１の脂質（例えば、カチオン化可能な脂質）のｐＫａまでの範囲で行われ、それによって第１の混合物が得られる。一部の実施形態では、本方法は、さらに、第１の混合物のｐＨを第１の脂質のｐＫａ以上に増加させることにより、ｐＨ調整された第１の混合物を得る第１の増加工程を含む。一部の実施形態では、第１の増加工程により、第１の脂質（例えば、カチオン化可能な脂質）のｐＫａから、９．０、８．９、８．８、８．７、８．６、８．５、８．４、８．３、８．２、８．１、８．０、７．９、７．８、７．７、７．６、７．５、７．４、７．３、７．２、７．１、又は７．０までのｐＨを有するｐＨ調整された第１の混合物が得られる。

一部の実施形態では、第１の増加工程又は精製工程は、クロスフロー濾過又はタンジェンシャルフロー濾過を含む。一部の実施形態では、第１の増加又は精製は、ＬＮＰ及び組換えＲＮＡ分子を含む組成物を、第１の溶液とは異なる第３の溶液に移行することをさらに含む。一部の実施形態では、第３の溶液はリン酸緩衝生理食塩水を含む。一部の実施形態では、移行は透析を含む。一部の実施形態では、タンジェンシャルフロー濾過は、中空糸（hollow fiber）フィルターの使用を含む。一部の実施形態では、中空糸は、ポリエーテルスルホン中空糸フィルター又はポリスルホン中空糸フィルターを含む。

一部の実施形態では、第１の増加又は精製は、上記の濾過の前に、ＬＮＰ／ＲＮＡ混合物をイオン交換固体支持体に通すことを含む。一部の実施形態では、イオン交換固体支持体は、陰イオン交換カラム又は陽イオン交換カラムを含む。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡとＬＮＰの脂質を混合する前に、ＬＮＰの脂質を有機溶媒と混合して濃縮されたストック（例えば、ストック脂質／有機溶媒混合物）を得る。一部の実施形態では、混合は、少なくとも５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２５分、３０分、３５分、又は４０分間行われ（例えば、ストック脂質／有機溶媒混合物を２５℃～３７℃で撹拌、揺すり、ボルテックス、超音波処理、又はかき混ぜる）、均質なストック脂質／有機溶媒混合物を形成する。一部の実施形態では、混合は、１０分以内、１１分以内、１２分以内、１３分以内、１４分以内、１５分以内、１６分以内、１７分以内、１８分以内、１９分以内、２０分以内、２５分以内、３０分以内、３５分以内、４０分以内、５０分以内、１時間以内、１．１時間以内、１．２時間以内、１．３時間以内、１．４時間以内、又は１．５時間以内行われ（例えば、ストック脂質／有機溶媒混合物を２５℃～３７℃で撹拌、揺すり、ボルテックス、超音波処理、又はかき混ぜる）、均質なストック脂質／有機溶媒混合物を形成する。上述の実施形態を考慮すると、上述の「少なくとも」の時間及び「以内」の時間のいずれかを組み合わせて、閉じた範囲（すなわち、ストック脂質／有機溶媒混合物を、２５°Ｃ～３７°Ｃで５分～１９分間、撹拌、揺動、ボルテックス、超音波処理、又はかき混ぜる）を提供できることが考えられ、サポートされる。

レジメン
本発明には、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第１のｍＲＮＡを、第２のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第２のｍＲＮＡと組み合わせてヒトに投与することにより、慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）を治療する方法を包含する。一実施例では、第１と第２のｍＲＮＡを同時投与する。第１の実施例における同時投与では、第１及び第２のｍＲＮＡは、投与前に単一の組成物に混合される別個のＬＮＰ製剤である。これは、投与の直前にベッドサイドで行われ得る。第２の実施例における同時投与では、第１と第２のｍＲＮＡが単一のＬＮＰに共に製剤化され得る。第３の実施例における同時投与では、第１と第２のｍＲＮＡが単一のバイアル中に充填される。

したがって、本発明には、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第１のｍＲＮＡ、及び第２のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第２のｍＲＮＡを含む免疫原性の組み合わせであって、第１及び第２のｍＲＮＡが別個のＬＮＰ製剤中にあるものが包含される。本発明には、別個のＬＮＰ製剤を混合することにより形成される結果生じる組成物も含まれる。

本発明はさらに、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第１のｍＲＮＡ、及び第２のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第２のｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を包含する。このような組成物では、第１と第２のｍＲＮＡを別個のＬＮＰによってカプセル化するか、又は第１と第２のｍＲＮＡを同じＬＮＰ中に製剤化し得る。

本発明は、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと組み合わせて、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡをヒトに投与することにより、慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）を治療する方法を包含する。成分（例えば、ｍＲＮＡ及び組換えＢ型肝炎ポリペプチド）は、異種プライムブーストレジメンで連続的に投与され得る。異種プライムブーストレジメンを使用する場合、好ましくはｍＲＮＡはプライミング投与として投与され、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがブースター投与として投与される。このレジメンでは、方法は最初にｍＲＮＡを投与し、次に組換えＢ型肝炎ポリペプチドを投与することを含む。別の態様では、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがプライミング投与として投与され、ｍＲＮＡがブースター投与として投与される。このレジメンでは、方法は、組換えＢ型肝炎ポリペプチドを投与し、次にｍＲＮＡを投与することを含む。さらなる態様において、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドはプライミング投与として投与され、ｍＲＮＡがアジュバント添加された組換えタンパク質と共にブースター投与として投与される。このレジメンでは、方法は組換えＢ型肝炎ポリペプチドを投与し、次に組換えタンパク質と共にｍＲＮＡを投与することを含む。

一部の実施形態では、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルスポリペプチドは、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）、組換えＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）、又はその組み合わせである。少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、アジュバントと共に、又はアジュバントなしで投与され得る。好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、組換えＢ型肝炎ポリペプチドがＢ型肝炎小表面抗原（ＨＢｓ）とＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）の両方を含む、アジュバント添加された組換えＢ型肝炎ポリペプチドと連続して投与される。この実施形態では、アジュバントはＡＳ０１であることが好ましい。

上記のレジメンでは、複数のプライミング及び／又はブースター投与があり得る。一実施形態においては、単一のｍＲＮＡプライミングがあり、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドの複数の後続の投与がある。例えば、組換えＢ型肝炎ポリペプチドの２回の投与があり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡの複数のプライミング投与があり、それに続く組換えＢ型肝炎ポリペプチドの複数の投与がある。例えば、２回のｍＲＮＡの投与、続いて２回の組換えＢ型肝炎ポリペプチドの投与である。さらなる実施形態においては、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドによる単一のプライミング、及びそれに続く複数のｍＲＮＡ投与がある。また更なる実施形態においては、組換えＢ型肝炎ポリペプチドの複数のプライミング投与とｍＲＮＡの複数の後続の投与がある。

他の実施形態では、ｍＲＮＡは、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと同時に投与される。これらの成分のさらなる投与は、その後の時間に投与され得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと同時に投与される。少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）、組換えＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）、又はその組み合わせである。組換えＨＢｃは、全長型又は切断型で、好ましくは切断型である。少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、アジュバントあり又はなしで投与され得る。一実施形態では、ｍＲＮＡは、組換えＢ型肝炎ポリペプチドがＢ型肝炎小表面（ＨＢＳ）とＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原の両方を含む、アジュバント添加組換えＢ型肝炎ポリペプチドと同時に投与される。この場合、アジュバントは好ましくはＡＳ０１である。

これらの上記実施形態では、組換えＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）は、配列番号１のアミノ酸配列を有し得る。このような上記実施形態では、組換えＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）は、配列番号２又は１１のアミノ酸配列を有し得る。好ましくは、ＨＢｃは、配列番号２のアミノ酸配列を有する。

これらのレジメン全てにおいて、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドは、好適なアジュバントと共に投与され得る。好適なアジュバントとは、慢性疾患及び免疫能の低下した対象の免疫応答を増強し得るものである。ＣＨＢ患者は、ウイルスに対する効率的な自然免疫及び獲得免疫応答を誘導できないという特徴があり、効率的なワクチン開発は困難である。これらの患者において、アジュバント添加ワクチン製剤の重要な機能の一つは、細胞内病原体の除去に不可欠であると認識されているＴヘルパー１（Ｔｈ１）プロフィールに向けて細胞性免疫応答を誘導することを目指すことである。

好適なアジュバントの例としては、無機アジュバント（例えば、リン酸アルミニウムや水酸化アルミニウムなどの無機金属塩）、有機非ペプチドアジュバント（例えば、ＱＳ２１などのサポニン、又はスクアレン）、油性アジュバント（例えば、完全フロイントアジュバント及び不完全フロイントアジュバント）、サイトカイン（例えば、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＧＭ－ＣＦＳ、及びＩＮＦ－γ）、粒子状アジュバント（例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、リポソーム、又は生分解性マイクロスフェア）、ビロソーム、細菌性アジュバント（例えば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、例えば３－脱Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ－ＭＰＬ）、又は、ムラミルペプチド）、合成アジュバント（非イオン性ブロックコポリマー、ムラミルペプチド類似体、合成脂質Ａなど）、合成ポリヌクレオチドアジュバント（ポリアルギニン、ポリリジンなど）、及び非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含む免疫賦活オリゴヌクレオチドが挙げられるが、これに限定されない。特に、アジュバントは、有機非ペプチドアジュバント（例えばＱＳ２１などのサポニン、スクアレンなど）及び／又は細菌由来アジュバント（例えば、３－脱Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ－ＭＰＬ）などのモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ））であり得る。

好適なアジュバントの１つは、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、特に３－脱－Ｏ－アシル化モノホスリル脂質Ａ（３Ｄ－ＭＰＬ）である。化学的には、これは多くの場合、４、５、又は６つのアシル化された鎖を有する３－脱－Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物として供給される。ＧＢ２１２２２０４Ｂで開示された方法によって精製及び調製され得、この文献はジホスホリル脂質Ａとその３－Ｏデアシル化バリアントの調製も開示する。その他の精製及び合成リポ多糖類も記載されている［米国特許第６，００５，０９９号及びＥＰ０７２９４７３Ｂ１；Ｈｉｌｇｅｒｓ，１９８６；Ｈｉｌｇｅｒｓ，１９８７；及びＥＰ０５４９０７４Ｂ１］。

サポニンもまた好適なアジュバントである［Ｌａｃａｉｌｌｅ－Ｄｕｂｏｉｓ，１９９６］。例えば、サポニンＱｕｉｌＡ（南米の樹木キラヤ・サポナリア・モリナの樹皮由来）及びその画分は、米国特許第５，０５７，５４０号及びＫｅｎｓｉｌ，１９９６、ならびにＥＰ０３６２２７９Ｂ１に記載されている。ＱｕｉｌＡの精製画分は、ＱＳ２１やＱＳ１７などの免疫増強剤としても知られており、その製造方法は米国特許第５，０５７，５４０号及びＥＰ０３６２２７９Ｂ１に開示されている。ＱＳ２１の使用については、Ｋｅｎｓｉｌ，１９９１年にさらに記載されている。ＱＳ２１とポリソルベート又はシクロデキストリンとの組み合わせも知られている（ＷＯ９９／１０００８）。ＱＳ２１やＱＳ７などのＱｕｉｌＡの画分を含む粒子状アジュバント系は、ＷＯ９６／３３７３９及びＷＯ９６／１１７１１に記載されている。

上記のようなアジュバントは、リポソーム、水中油型エマルジョン、及び／又は金属塩（水酸化アルミニウムなどのアルミニウム塩を含む）などの担体と共に製剤化され得る。例えば、３Ｄ－ＭＰＬは水酸化アルミニウム（ＥＰ０６８９４５４）又は水中油型エマルジョン（ＷＯ９５／１７２１０）と共に製剤化され得る。ＱＳ２１は、コレステロール含有リポソーム（ＷＯ９６／３３７３９）、水中油型エマルジョン（ＷＯ９５／１７２１０）、又はミョウバン（ＷＯ９８／１５２８７）と共に製剤化され得る。

開示された組成物には、アジュバントの組み合わせ、特にモノホスホリル脂質Ａとサポニン誘導体の組み合わせ（例えば、ＷＯ９４／００１５３、ＷＯ９５／１７２１０、ＷＯ９６／３３７３９、ＷＯ９８／５６４１４、ＷＯ９９／１２５６５、ＷＯ９９／１１２４１参照）、より具体的にはＷＯ９４／００１５３に開示されているＱＳ２１と３Ｄ－ＭＰＬの組み合わせ、又はＷＯ９６／３３７３９に開示されているコレステロール含有リポソーム（ＤＱ）中でＱＳ２１がクエンチされた組成物などが利用され得る。水中油型エマルジョン中にＱＳ２１、３Ｄ－ＭＰＬ、及びトコフェロールを含む強力なアジュバント製剤がＷＯ９５／１７２１０に記載されており、これも開示された組成物に使用され得る他の製剤である。したがって、好適なアジュバント系としては、例えば、モノホスホリル脂質Ａ、好ましくは３Ｄ－ＭＰＬとアルミニウム塩（例えば、ＷＯ００／２３１０５に記載されているもの）の組み合わせが挙げられる。さらなる例示的なアジュバントとしては、ＱＳ２１及び／又はＭＰＬ及び／又はＣｐＧが含まれる。ＱＳ２１は、ＷＯ９６／３３７３９に開示されているように、コレステロール含有リポソーム中でクエンチされ得る。

したがって、少なくとも１種の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと共に用いるのに適したアジュバントは、ＭＰＬ及びＱＳ－２１を含むリポソームベースのアジュバントであるＡＳ０１（「ＡＳ－０１」と呼ばれることもある）である。ＭＰＬ及びＱＳ－２１免疫増強剤の媒体であるリポソームは、リン酸緩衝生理食塩水中のジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）及びコレステロールから構成される。ＡＳ０１_Ｂ－４は、ＡＳ０１アジュバントの特に好ましいバリアントであり、免疫増強剤ＱＳ－２１（キラヤ・サポナリアの樹皮から精製されたトリテルペン配糖体）及びＭＰＬ（３－Ｄモノホスホリル脂質Ａ）と、これらの免疫増強剤の媒体であるＤＯＰＣ／コレステロールリポソーム、及びＰＢＳ溶液中のソルビトールから構成される。特に、ＡＳ０１_Ｂ－４のヒトへの単回用量（０．５ｍＬ）には、５０μｇのＱＳ－２１と５０μｇのＭＰＬが含まれている。ＡＳ０１_Ｅ－４はＡＳ０１_Ｂ－４の２倍希釈に相当し、すなわち、ヒト用量あたり２５μｇのＱＳ－２１と２５μｇのＭＰＬが含まれている。

これらのレジメン全てにおいて、好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ｈＩｉ融合の有無にかかわらず、Ｂ型肝炎コア（ＨＢｃ）ポリペプチドをコードする。ｍＲＮＡによってコードされるＨＢｃは、全長又は切断型であり得、好ましくは全長である。好ましい実施形態では、ｍＲＮＡによってコードされるＨＢｃは全長であり、ｈＩｉと融合している。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ｈＩｉ融合の有無にかかわらず、Ｂ型肝炎コア（ＨＢｃ）抗原の全長、及びｈＩｉ融合の有無にかかわらず、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨＢｓＡｇ）をコードする。好ましくは、ＨＢｓＡｇは、ｈＩｉとの融合の有無にかかわらず、Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）である。別の好ましい実施形態では、Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）はｈＩｉと融合している。
ｍＲＮＡによってコードされるＨＢｃ、及び／又はｍＲＮＡによってコードされるＨＢｓは、好ましくはｈＩｉと融合している。

本発明はまた、Ｂ型肝炎ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡと組み合わせて含むアデノウイルスベクターをヒトに投与することにより、慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）を治療することを包含する。これらの成分は、異種プライムブーストレジメンで投与され得る。プライムブーストレジメンを用いる場合、アデノウイルスベクターはプライミング投与として投与され、ｍＲＮＡは第１ブースター投与として投与されることが好ましい。このようなレジメンにおいて、プライミング投与及び／又はブースター投与は複数回行われ得る。一実施形態では、アデノウイルスベクター（例えば、複製能欠損型チンパンジーアデノウイルス（ＣｈＡｄ）ベクター）のプライミング投与を１回行い、その後、ｍＲＮＡ及び／又は組換えＨＢＶポリペプチドを含むブースター投与を複数回行う。

異種プライムブーストレジメンの代替実施形態では、ｍＲＮＡを第１プライミング投与として用い、アデノウイルスベクター（例えば、複製能欠損型チンパンジーアデノウイルス（ＣｈＡｄ）ベクター）を第１ブースト投与として用いる。

本発明はまた、ヒトに（ｉ）Ｂ型肝炎ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むアデノウイルスベクター、及び（ｉｉ）組換えＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）、組換えＢ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）及びアジュバントを含む組成物を、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡと組み合わせて投与することにより、慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）を治療することを包含する。
本発明はまた、ｍＲＮＡを複数回連続して投与することを含み得る。このような実施形態では、プライミング投与及びブースター投与で使用されるｍＲＮＡは、好ましくは同一である。

対象
本発明はヒト対象を意図する。本発明の方法を用いて治療される対象は、あらゆる年齢層であり得る。

本発明の方法は、ＨＢＶの治療、すなわちＢ型肝炎ウイルスに感染した対象への投与に好適に用いられる。対象は、Ｂ型肝炎ウイルスのみに感染している、又はＢ型肝炎ウイルスとＤ型肝炎ウイルスの両方に感染している者であり得る。

製剤及び投与
ｍＲＮＡは、筋肉内又は皮下投与などの非経口投与を含む、様々な好適な投与経路で投与され得る。好適には、ｍＲＮＡは、筋肉内投与される。

ｍＲＮＡは、液状又は乾燥（例えば凍結乾燥）の形態で提供され得る。好ましい形態は、ｍＲＮＡの正確な性質（例えば、ｍＲＮＡが乾燥しやすいかどうか）や、存在し得る他の成分などの要因に依存する。
好ましくは、ｍＲＮＡは液状で提供される。

他の組成物と組み合わせることが意図されるｍＲＮＡを含む組成物は、投与前にそれ自体が生理学的に許容されるｐＨ又は生理学的に許容される張性を有する必要はない。投与を意図する製剤は、生理学的に許容されるｐＨ及び生理学的に許容される浸透圧を有するべきである。

液状製剤のｐＨは、組成物の成分及びヒト対象への投与に必要な適合性を考慮して調整される。

非経口投与の場合、溶液は過度の細胞変形又は溶解を避けるため、生理学的に許容される浸透圧を有するべきである。生理学的に許容される浸透圧とは、一般的に、溶液の浸透圧がほぼ等張又は軽度に高張であることを意味する。浸透圧は、市販の浸透圧計（例えば、ＡｄｖａｎｃｅｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＩｎｃ．（米国）製のＡｄｖａｎｃｅｄ（登録商標）Ｍｏｄｅｌ２０２０）を用いるなど、当該技術分野において既知の技術に従って測定され得る。

再構成に使用する液体は、注射用水、リン酸緩衝生理食塩水など、実質的に水性である。前記のように、緩衝液及び／又は張性調整剤の必要性は、再構成する容器の内容物と、再構成後の内容物のその後の使用の両方に依存する。緩衝剤は、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、及びＴＲＩＳから選択され得る。緩衝液は、Ｎａ／Ｎａ_２ＰＯ_４、Ｎａ／Ｋ_２ＰＯ_４、Ｋ／Ｋ_２ＰＯ_４などのリン酸緩衝液であり得る。
ｍＲＮＡは、バイアルやプレフィルドシリンジなどの様々な容器で提供され得る。。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは単回投与の形態で提供される。他の実施形態では、ｍＲＮＡは２回分、５回分、又は１０回分を含む複数回投与の形態で提供される。

バイアルからシリンジへなど、容器間で液体を移送する場合、必要な全量を簡便に移送できるように「余剰分」を用意することが一般的である。必要な余剰分のレベルは状況によって異なるが、無駄を減らすために過剰な余剰分は避けるべきであり、不十分な余剰分は実用上の問題を引き起こし得る。余剰分は、１回投与あたり２０～１００μＬ程度、例えば３０μＬ又は５０μＬとし得る。

安定剤が添加され得る。安定剤は、最終製剤の用量を一定期間にわたって対象に投与する可能性があるため、複数回投与容器が提供される場合に特に重要となり得る。
製剤は好ましくは無菌である。

強力かつ持続的な免疫を確立するためのアプローチには、反復免疫、すなわち１回以上の追加投与による免疫応答のブーストが含まれることが多い。このような追加投与は、同一の免疫原性組成物（同種ブースト）を用いて、又は異なる免疫原性組成物（異種ブースト）を用いて行われ得る。本発明は、同種又は異種のプライム／ブーストレジメンの一部として、プライミング免疫化又はブースター免疫化のいずれかとして適用され得る。

したがって、ｍＲＮＡの投与は、複数回投与レジメンの一部となり得る。例えば、ｍＲＮＡは、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、又はそれ以上の投与量、特に６ヶ月間にわたる６回投与などの複数回投与レジメンにおけるプライミング投与として投与され得る。ｍＲＮＡは、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、又はそれ以上の投与、例えば６ヶ月間にわたる６回投与などの複数回投与レジメンにおけるブースター投与として投与され得る。特定の一例では、ｍＲＮＡは４回投与レジメンとして投与される。

プライミング投与及びブースター投与は、同種又は異種であり得る。したがって、ｍＲＮＡは、同種複数回投与レジメン、具体的に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、又はそれ以上の投与、特に６ヶ月間にわたる６回投与レジメンにおいて、プライミング投与及びブースト投与として投与され得る。一実施例では、ｍＲＮＡは４回投与レジメンとして投与される。あるいは、ｍＲＮＡは、異種複数回投与レジメン、具体的には２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、又はそれ以上の投与レジメン、特に６ヶ月間にわたる６回投与レジメンにおいて、プライミング投与又はブースター投与として投与され得る。ブースター投与は異なり得る（例えば、ＡＳ０１又はスクアレンエマルジョンアジュバントなどのアジュバントの有無は問わない、ｍＲＮＡ、又はタンパク質もしくはウイルスベクター抗原などの代替抗原提示）。一実施例では、ｍＲＮＡは４回投与レジメンとして投与される。

投与間隔は２週間から６ヶ月、例えば３週間から３ヶ月であり得る。好ましくは、プライミング投与１回とブースト投与１回の２回の投与を、６ヶ月間毎月同時に投与する。２年ごとから１０年ごとなど、定期的なより長期間のブースター投与も行われ得る。

本発明は、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第１のｍＲＮＡと、第２のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第２のｍＲＮＡとを含む免疫原性組み合わせ又は組成物を包含する。一実施例では、免疫原性組み合わせは、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第１のｍＲＮＡと、第２のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第２のｍＲＮＡとを含み、第１及び第２のｍＲＮＡは別個のＬＮＰ製剤中に存在する。

別の実施例では、免疫原性組成物は、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第１のｍＲＮＡと、第２のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする第２のｍＲＮＡとを含む。第１及び第２のｍＲＮＡは別個のＬＮＰにカプセル化され得、又は第１及び第２のｍＲＮＡは同一のＬＮＰ中に共製剤化され得る。

一部の実施例では、組み合わせ又は組成物は、第１及び第２のｍＲＮＡを等重量で含む。しかしながら、他の実施例では、組み合わせ又は組成物は、第１及び第２のｍＲＮＡを等しくない重量で含み得る。一部の実施形態では、第１のＢ型肝炎ウイルス抗原はＨＢｃであり、第２のＢ型肝炎ウイルス抗原はＨＢｓである。このような実施形態では、組み合わせ又は組成物は、重量比で第１のｍＲＮＡが第２のｍＲＮＡよりも多く含まれる。

ＨＢｃｍＲＮＡとＨＢｓｍＲＮＡの両方を含む製剤の例では、組成物はＨＢｃｍＲＮＡとＨＢｓｍＲＮＡを等量（重量比）で含む。しかしながら、一実施例では、組成物は、ＨＢｃをコードするｍＲＮＡ（「ＨＢｃ－ｍＲＮＡ」）を、ＨＢｓをコードするｍＲＮＡ（「ＨＢｓ－ｍＲＮＡ」）よりも重量比で多く含む。一実施例では、組成物は、ＨＢｓ－ｍＲＮＡと比較して、ＨＢｃ－ｍＲＮＡの量を１．２５～２倍、例えば１．５～２倍含む。ある特定の実施例では、組成物は、重量比でＨＢｓ－ｍＲＮＡの１．５倍のＨＢｃ－ｍＲＮＡを含む。

別の実施例では、以下：
‐ 脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されたＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡ、及び脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されたＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードするｍＲＮＡを含む第１の組成物；及び
‐ 組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）、組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）及びＡＳ０１を含む第２の組成物
を含む免疫原性組み合わせがある。

この組み合わせは、第１及び第２の組成物を逐次的又は同時投与することにより、慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）を治療する方法に使用され得る。第１の組成物は、ＨＢｃ及びＨＢｓをコードするｍＲＮＡを単一のＬＮＰに共製剤化したものを含み得る。あるいは、ＨＢｃ及びＨＢｓをコードするｍＲＮＡを別個のＬＮＰ中に製剤化し、これらのＬＮＰを単一のバイアルに共充填し得る。

定義
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者が一般的に理解する意味と同一の意味を有する。

特許請求の範囲を含む本明細書全体を通して、文脈上許容される限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などその変形は、必ずしも他の要素（例えば、整数）を排除することなく、記載された要素（例えば、整数）又は複数の要素（例えば、複数の整数）を含むものと解釈されるべきである。したがって、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなる場合もあれば、Ｘ＋Ｙのように追加の要素を含む場合もある。

「実質的に」という語は「完全に」を排除するものではなく、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないことがあり得る。必要に応じて、本発明の定義から「実質的に」という語を省略し得る。

数値ｘに関して「約」又は「およそ」という用語は任意であり、例えば、与えられた数値のｘ±１０％、例えば与えられた数値のｘ±５％などを意味する。

本明細書において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、内容が明確に別段の規定をしない限り、複数形も含む。

特に明記しない限り、２つ以上の成分を混合する工程を含むプロセスは、特定の混合順序を必要としない。したがって、成分は任意の順序で混合し得る。３つの成分がある場合、２つの成分を互いに混合し、その後、その組み合わせを３番目の成分と混合することなどがあり得る。

「タンパク質」、「ポリペプチド」、「抗原」及び「ペプチド」という用語は、本明細書において互換的に使用され、長さ、翻訳時又は翻訳後の改変の有無にかかわらず、ペプチド結合したアミノ酸鎖を指す。融合タンパク質（又は「キメラタンパク質」）は、２つ以上のペプチド結合したタンパク質を含む組換えタンパク質である。融合タンパク質は、元々別個のタンパク質をコードしていた２つ以上の遺伝子を結合させることで製造される。この融合遺伝子を翻訳することで、単一の融合タンパク質が生成される。

「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヌクレオチドモノマーから構成される高分子を指する。好適には、本発明のポリヌクレオチドは、組換え体である。組換え体とは、ポリヌクレオチドが、クローニング、制限酵素処理、ライゲーション、又は天然に存在するポリヌクレオチドとは異なるポリヌクレオチドをもたらすその他の方法のうち少なくとも１つによって生成されたものであることを意味する。

異種核酸配列とは、宿主生物に見出される天然に存在する核酸配列から単離、誘導、又は基づいていない核酸配列を指する。「天然に存在する」とは、天然に存在し、合成又は改変されていない配列を意味する。配列が元の配列から「誘導」されるとは、元の配列から分離されているが、元の遺伝子の正常な機能を妨げないように好適に改変（たとえば、欠失、置換（突然変異）、挿入、又はその他の改変）されている場合を指す。

好適には、本発明で使用されるポリヌクレオチドは単離されている。「単離された」ポリヌクレオチドとは、本来の環境から分離されたものである。例えば、天然に存在するポリヌクレオチドは、自然界で共存する物質の一部又は全部から分離されている場合、単離されている。ポリヌクレオチドは、例えば、その自然環境の一部ではないベクターにクローニングされている場合、又はｃＤＮＡ内に含まれている場合、単離されているとみなされる。

本明細書で使用される「同時」投与とは、同一の免疫応答が進行している間の投与を指す。好ましくは、両成分を同時に投与する（例えば、ベクターを含む組成物とタンパク質を含む組成物の同時投与）が、一方の成分を数分以内（例えば、同じ診察時又は医師の往診時）、又は数時間以内に投与し得る。このような投与は、同時投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）とも呼ばれる。一部の実施形態では、同時投与は、アデノウイルスベクターとタンパク質成分の投与を指し得る。他の実施形態では、同時投与は、アデノウイルスベクターと、例えばＭＶＡなどのポックスウイルスなどの別のウイルスベクターとの投与を指す。他の実施形態では、同時投与とは、アデノウイルスベクターと、アジュバント添加されているタンパク質成分との投与を指す。

「逐次」投与とは、第１の組成物の投与に続いて、相当な時間をおいて、例えば第１の投与によって誘発された免疫応答の継続中ではないとき、第２の組成物を投与することを指す。したがって、逐次投与には、プライムブーストの場合における第１の投与とそれに続く投与が含まれる。２回の逐次投与間の期間は、例えば１週間、２週間、４週間、６週間、８週間、又は１２週間である。より具体的には、４週間又は８週間である。

「アジュバント」という用語は、組成物の抗原に対する免疫応答を細胞レベル又は体液レベルのいずれかで増強（ａｕｇｕｍｅｎｔｓ）、刺激、活性化、増強（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ）、又は調節する薬剤を指す。例えば、免疫原性アジュバントは抗原に対する免疫系の応答を刺激するが、それ自体では免疫学的効果はない。本明細書に開示される免疫原性組成物は、組成物に含まれるベクター（又は組成物の別の成分）がｈＩｉなどの「遺伝的アジュバント」をコードするかどうかに関わらず、製剤中にアジュバントを別個の成分として含み得る。

ヒト不変鎖のある場合とない場合でＳＡＭ－ＨＢＶの免疫原性をマウスで比較した前臨床データを得た（下記実施例１）。さらに、ＭＶＡ－ＨＢＶ及びＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶの１種以上を用いたワクチン接種レジメンと、少なくとも１つのＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶコンストラクトを用いたワクチン接種レジメンの免疫原性を比較した前臨床データも得た（下記実施例２）。ＨＬＡ－Ａ２／ＤＲＢ１ナイーブマウスにおいて、同時投与されたＬＮＰ－ｍＲＮＡの免疫原性を検討した前臨床データも得た（下記実施例３）。

これらの実験は、Ｂ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）に融合したヒト不変鎖（ｈＩｉ）を含むＬＮＰ配合ＳＡＭ－ＨＢＶが、ヒト不変鎖を含まないコンストラクトと比較して、ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の頻度がより高い（すなわち、より高いパーセンテージのＨＢｃ特異的ＣＤ８＋細胞が応答することが見出された）ことを示している（下記実施例１）。さらに、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶの使用は、ＨＢＶ慢性感染マウスモデルにおけるＨＢｃ及びＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の頻度を高め得ることを実証した（下記実施例２）。さらに、これらの実験は、ＬＮＰ配合ｈＩｉ－ＨＢｃ及びｈＩｉ－ＨＢｓｍＲＮＡの同時投与の好ましい比率を示している（下記実施例３）。

これらのすべての実験では、ＨＢＶｍＲＮＡワクチンのＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導する能力を評価するために、ＨＬＡ．Ａ２／ＤＲＢ１マウス（ヒトＨＬＡ－Ａ２及びＨＬＡ－ＤＲＢ１分子のトランスジェニックマウス）を用いた。ＨＢＶ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞及び抗体は、同じＨＬＡ．Ａ２／ＤＲＢ１マウスで評価した。

ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ原薬の製造：
ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ原薬の製造では、Ｐｒｏｃｅｌｌ－９２．Ｓ細胞を規定の細胞密度まで培養する。次に、細胞にＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶマスターウイルスシード（ＭＶＳ）を規定の感染多重度で感染させる。得られたＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶウイルスは、陰イオン交換クロマトグラフィーに基づく多段階プロセスによって精製される。

ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶワクチンの製剤化と充填：
精製されたＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ原薬は、以下のステップで処理される。
－精製されたＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ原薬の製剤緩衝液での希釈。
－滅菌ろ過。
－最終容器への充填。
ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶワクチンは、バイアルに充填された液状製剤である。

ＭＶＡ－ＨＢＶ原薬の製造：
ＭＶＡ－ＨＢＶ原薬は、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）を規定の細胞密度まで初代培養し、その後、規定の感染多重度でＭＶＡ－ＨＢＶマスターウイルスシード（ＭＶＳ）を感染させることで製造される。得られたＭＶＡ－ＨＢＶウイルスは、分画勾配遠心分離法に基づく多段階プロセスによって精製される。

ＭＶＡ－ＨＢＶワクチンの調製及び充填：
精製されたＭＶＡ－ＨＢＶ原薬は、以下のステップで処理される。
－精製されたＭＶＡ－ＨＢＶＤＳの調製緩衝液での希釈。
－最終容器への充填。
ＭＶＡ－ＨＢＶワクチンは、０．５ｍＬの抽出容量を有するバイアルに充填された液状製剤である。

ＨＢｃ原薬の製造：
ＨＢｃＤＳの製造プロセスは、組換え大腸菌ワーキングシードを前培養フラスコに接種し、次いで発酵プロセス、及び収穫、抽出、清澄化、及び複数のクロマトグラフィーとろ過を含む多段階の精製プロセスを実施することからなる。

ＨＢｓ原薬の製造：
ＨＢｓＤＳの製造プロセスは、組換えＳ．セレビシエワーキングシードを前培養フラスコに接種し、次いで発酵プロセス、及び収穫、抽出、清澄化、及び複数のクロマトグラフィーとろ過を含む多段階の精製プロセスを実施することからなる。

ＨＢｃ及びＨＢｓワクチンの製剤化及び充填：
精製されたＨＢｓ及びＨＢｃＤＳは、凍結保護剤としてスクロース、界面活性剤としてポロキサマーを含む製剤緩衝液で希釈され、４ｍＬ透明ガラスバイアルに充填され、凍結乾燥される。

ＡＳ０１アジュバント系の投与量：
ＡＳ０１Ｂ－４アジュバント系は、免疫増強剤であるＱＳ－２１（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹皮から精製されたトリテルペン配糖体）とＭＰＬ（３－Ｄモノホスホリル脂質Ａ）から構成され、これらの免疫増強剤の媒体としてリポソーム、及びソルビトールも共に含む。特に、ＡＳ０１Ｂ－４の臨床投与容器１個（０．５ｍＬ）には、５０μｇのＱＳ－２１と５０μｇのＭＰＬが含まれている。ヒト投与量の１／１０、すなわち５０μｌは、マウスに注入される量である（ＱＳ－２１及びＭＰＬ５μｇに相当）。

ｍＲＮＡコンストラクトの製造：
プラスミドをＢｓｐＱＩ制限酵素で直鎖化し、ｉｎｖｉｔｒｏ転写用のＤＮＡテンプレートを製造した。ｍＲＮＡは、キャッピングアナログ、ＴＲＩＬＩＮＫＣＬＥＡＮＣＡＰＡ／Ｇ及び１００％Ｎ１－メチルシュードウリジンを用いたｉｎｖｉｔｒｏ転写、それに続くＤＮａｓｅＩ、ホスファターゼ処理、シリカカラム精製によって製造された。新たに合成されたｍＲＮＡは、キャピラリーゲル電気泳動及び変性アガロースゲルによって検証した。

ＳＡＭ－ＨＢＶ及びＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶコンストラクトの製造：
ＨＢＶ及びｈＩｉ－ＨＢＶ配列は、ヒトタンパク質発現用にコドン最適化され、ＧＥＮＥＷＩＺによって合成及びＳＡＭプラスミドにクローニングされた。ＲＮＡはｉｎｖｉｔｒｏ転写によって合成した。簡潔には、ＳＡＭレプリコンをコードするＤＮＡプラスミドを、ポリＡテールの３’末端をＢｓｐＱＩで制限酵素処理して直鎖化し、フェノール－クロロホルム抽出によって精製した。直鎖状ＤＮＡを鋳型として、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを用いたｉｎｖｉｔｒｏ転写反応を行った。ｉｎｖｉｔｒｏ転写後、ワクシニアキャッピングキットを用いてＲＮＡのキャッピングを行い、ＬｉＣｌ沈殿法でＲＮＡを精製した後、ヌクレアーゼフリー水に再懸濁した。

ＳＡＭを含むＬＮＰの調製は、マイクロ流体混合法を用いたＬＮＰ調製の確立された方法に従った。脂質（カチオン性脂質、双性イオン性脂質、コレステロール、ＰＥＧ－脂質複合体）をエタノール溶液に溶解し、ＳＡＭを水性緩衝液に溶解した。エタノール溶液と水溶液は、マイクロ流体混合チャンバーを用いて急速に混合した。ＳＡＭを捕捉した脂質ナノ粒子は、混合物中の過飽和脂質の核形成によって自然に形成される。脂質の凝縮と沈殿によりＳＡＭが捕捉され、脂質ナノ粒子が形成された。ＬＮＰを短時間成熟させた後、ＳＡＭ－ＬＮＰの緩衝液を保存緩衝液に交換した。ＳＡＭ－ＬＮＰ溶液について、サイズ、脂質含量、ＲＮＡの捕捉、及びｉｎｖｉｔｒｏでの効力に関しての特性評価を行った。

ＳＡＭベクターＶＥＥＴＣ－８３は、実施例におけるクローニングのためのバックグラウンドコンストラクトとして使用した。バックグラウンドの空コンストラクトは、配列番号１６の核酸配列を有する。

図１４のＨＢＶ－ＳＡＭコンストラクトの設計は、ＳＡＭベクターのサブゲノムプロモーター下にＨＢＶ抗原をコードする配列をクローニングすることを含む。ＳＡＭＨＢＶコンストラクトには、抗原コード配列のコドン最適化を含む改変が行われた。

ＳＡＭコンストラクトは、抗原産生能及び抗原性について評価し、さらにｉｎｖｉｖｏモデルを用いて免疫原性及び有効性について試験した。

配列番号１７及び１９の配列を有するＳＡＭコンストラクトを、以下の実施例におけるさらなる特性評価及び試験のために設計、及び取得した。

ＳＡＭ－ＨＢＶ及びＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶコンストラクトの特性評価：
ＲＮＡパターンの均一性評価
ＲＮＡパターンの均一性を調べるために、ＲＮＡサンプルを１％アガロースゲル中で分析した。ＲＮＡサンプルは以下のように調製した：１００～２５０ｎｇのＲＮＡを、３μＬのローディングバッファー（５０ｍＭＥＤＴＡｐＨ８、３０％ｗ／ｖスクロース、０．０５％ブロモフェノールブルー）及び水と混合し、最終体積を１０μＬとした。サンプルは５０℃で２０分間変性させた。アガロースゲルは、ＮｏｒｔｈｅｒｎＭａｘ－ＧｌｙＧｅｌＲｕｎｎｉｎｇＢｕｆｆｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））を用いて、１３０Ｖで４５分間泳動した。ＲＮＡの大きな分解は認められず、両コンストラクト間で同様のパターンが得られた。

ウェスタンブロットによるタンパク質発現評価
様々なＨＢＶＳＡＭコンストラクトから得られた抗原を細胞が発現する能力を、以下の方法に従って評価した。

０日目に、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）をＴ２２５フラスコに１×１０^７個ずつ、増殖培地（ＤＭＥＭｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅ（Ｇｉｂｃｏ（商標））、１％Ｌ－グルタミン、１％Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））、５％ＦＢＳ（ＧｉｂｃｏＴＭ）を含む）で播種した。トリプシン処理では、培地を除去し、細胞を５ｍＬのＰＢＳで洗浄した。ＰＢＳ洗浄液を除去し、予め温めておいた５ｍＬのトリプシンを加え、プレート全体によく塗布した。トリプシンを除去し、プレートを３７℃で１～２分間保温した。その後、細胞を１０ｍＬの増殖培地に再懸濁した。細胞数を計数し、必要な濃度で新しいフラスコに播種した。細胞は３７℃、５％ＣＯ_２で約２０時間インキュベートした。

１日目に、６ウェルプレートの各ウェルに２ｍＬの増殖培地（ＤＭＥＭｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅ、１％Ｌ－グルタミン、１％Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ、１％ＦＢＳ）を添加し、プレートを調製した（エレクトロポレーション１回につき１ウェル）。プレートは３７℃のインキュベーターで保温した。エレクトロポレーターは、２ｍｍキュベットに対し、１２０Ｖ、２５ｍｓパルス、パルス間隔０．０、１パルスの出力となるように準備した。キュベットはラベルし、氷上に保管した。増殖期の細胞はＢＨＫ増殖培地に採取し、細胞カウンターを用いて計数した。細胞は上記と同じトリプシン処理プロトコルに従ってトリプシン処理した。その後、細胞を４６２ｘｇで３分間遠心分離した。培地を吸引し、細胞を２０ｍＬの冷Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ（商標））で１回洗浄した。細胞を再度４６２ｘｇで５分間遠心分離した。培地を吸引し、細胞をＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地に再懸濁し、１回のエレクトロポレーションあたり１ｘ１０^６細胞あたり０．２５ｍＬとした。標準液及びネガティブコントロールも調製した。

各サンプルについて、ＲＮＡ２μｇを２５０μＬの細胞と混合し、混合物を４～５回穏やかにピペッティングした。細胞とＲＮＡの混合物を２ｍｍキュベットに移し、上記のパラメータを用いて１回のエレクトロポレーションを行った。細胞は室温で１０分間静置した。１つのキュベットから細胞を取り出し、予め温めておいた６ウェルプレートの１つのウェルに加え、プレートを前後に傾け、さらに４５°の角度で左右に傾けて細胞を均一に分散させた。２日目（エレクトロポレーションから１７時間後）に細胞培養上清を採取し、異なる濃度でウェスタンブロット法により分析した。細胞単層を剥離し、ｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｒｏｃｈｅ社、カタログ番号１１６９７４９８００１）を添加した２０ｍＭＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭＮａＣｌ、５％グリセロール（ｐＨ７．６）緩衝液１ｍＬに再懸濁した後、超音波処理により細胞を溶解した。細胞溶解後、細胞内画分をウェスタンブロット法により分析した。一次抗体として、マウス抗ＨＢｃモノクローナル抗体及びウサギ抗ＨＢｓポリクローナル血清（自家製造）を使用した。

ＬＮＰ調製後のＳＡＭのｉｎｖｉｔｒｏ効力
ＬＮＰ調製後、ｉｎｖｉｔｒｏ効力試験も実施した。

細胞性免疫応答－細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）：
異なる時点で採取した末梢血白血球（ＰＢＬ）、脾臓細胞、又は肝浸潤リンパ球の新鮮プールを、ＨＢｃ又はＨＢｓ配列をカバーする１１アミノ酸の重複を含む１５塩基のプールで、ｅｘｖｉｖｏで６時間刺激した。ＨＢｃ及びＨＢｓ特異的細胞応答は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及び／又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－αを発現するＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞量を測定するＩＣＳによって評価した。ＩＣＳの結果を考慮するための技術的許容基準は、獲得ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞の最小数が３０００イベントを超えることを含む。

体液性免疫応答－酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）：
異なる時点で免疫化したマウスから採取した血清を用いて、ＨＢｃ及びＨＢｓ特異的抗体応答をＥＬＩＳＡにより測定した。簡潔には、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに精製Ｂ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）又は精製Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）をコーティングした。ワクチン接種したマウスの血清を段階希釈し、インキュベートした。標準物質及び対照物質の段階希釈液を用いて、検査対象血清中の抗ＨＢｃ又は抗ＨＢｓ抗体標準力価を算出し、検査の妥当性を確認した。各インキュベーションステップ後、プレートをＰＢＳ０．１％、Ｔｗｅｅｎ２０緩衝液で洗浄した。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体を添加し、テトラメチルベンジジン液体基質（ＴＭＢ）とのインキュベーションにより抗体複合体を検出した。光学密度（ＯＤ）は４５０～６２０ｎｍで記録された。各マウス血清中における抗ＨＢｃ抗体又はＨＢｓ抗体力価は、ＥＬＩＳＡの標準曲線を用いて回帰モデルによって決定された。その後、マウス群ごとに幾何平均力価（ＧＭＴ）が算出された。各時点及び各抗原（ＨＢｃ、ＨＢｓ）について、群、試験、及び交互作用を固定効果として、異質分散モデル（群間で同一分散は仮定されない）を用いて、ｌｏｇ１０力価に分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを適用した。このモデルを用いて、幾何平均（及びその９５％信頼区間）と幾何平均比及びその９５％信頼区間を推定した。事前に定義された基準は設定されていないため、この分析は記述的であり、群間の比の９５％信頼区間は多重性を調整せずに算出された。

ＡＬＴ／ＡＳＴ測定：
マウス血清中のＡＬＴ及びＡＳＴ値は、以下の市販キットを用いて定量した。
・アラニンアミノトランスフェラーゼ活性アッセイキット（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ社製、カタログ番号：ＭＡＫ０５２）
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性アッセイキット（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ社製、カタログ番号：ＭＡＫ０５５）

血清中ＨＢｓ抗原定量
マウス血清中の循環ＨＢｓ抗原は、ＢＩＯ－ＲＡＤ社製ＭｏｎｏｌｉｓａＡｎｔｉ－ＨＢｓＰＬＵＳキット（カタログ番号：７２５６６）及び国際標準物質（ＡｂｂｏｔｔＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製）を用いて定量した。

［実施例１：ヒト不変鎖の有無でのＳＡＭ－ＨＢＶ］
この実験では、オスとメスのＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１ナイーブマウスに０日目と２８日目に筋肉内注射を行なった。０日目と２８日目に各群に投与された組成物の詳細は、以下の表１に記載されている。

対照群７を除き、全群で１４匹のマウス（Ｎ＝１４）を使用した。初回接種の１４日後（１４ｄｐＩ）、各群から２匹のマウスを犠牲にし、脾臓サンプルと血清サンプルを採取して、この時点のＴ細胞応答を測定した。また、全てのマウスから血清サンプルを採取した。２回目の接種から１２日後及び１３日後（１２／１３ｄｐＩＩ）、残りのマウス全てを犠牲にし、脾臓、肝臓、血清サンプルを採取した。

群１～６では、全てのマウスをＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）でブーストした。ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶは１匹当たり１０^８ｖｐの同じ投与量で投与した。ただし、ＳＡＭ－ＨＢＶ（±ｈＩｉ）については、２．５μｇ、１μｇ、０．１μｇの３種類の投与量を使用した。各群で使用した具体的な投与量は、上記の表１に記載されている。

実施例１で得られたＨＢｃ及びＨＢｓ特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答、ならびにＨＢｃ及びＨＢｓ特異的抗体応答を図１、２、及び３に示す。図１はＣＤ４＋応答、図２はＣＤ８＋応答、図３は抗体応答を示している。これらの図の全てにおいて、「Ａ」図はＢ型肝炎コア抗原応答、「Ｂ」図はＢ型肝炎表面抗原応答を示している。

図２Ａ及び２Ｂに示すように、不変鎖を含むＳＡＭコンストラクト（ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ）は、不変鎖を含まないコンストラクト（ＳＡＭ－ＨＢＶ）と比較して、ＨＢｃに対するＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の頻度が有意に高かった（幾何平均比、ＧＭＲ＝４．１、９５％ＣＩ［１．９６－８．４０］）。まず、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶで免疫化されたマウス群とＳＡＭ－ＨＢＶで免疫化されたマウス群のＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の幾何平均を計算した。次に、これら２つの幾何平均の比を計算した。このケースでは、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶが４倍高いＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導することが観察された。

ＨＢＶ感染の効率的な制御は、ＨＢＶ感染の制御と治癒に重要な役割を果たすＨＢＶコア抗原及び表面抗原を特異的に標的とするＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導と持続に関連する。

様々な区分（急性感染後、慢性感染からの回復期、活動性慢性感染、非活動性キャリア）のＨＢＶ感染患者におけるＨＢＶ抗原特異的Ｔ細胞を比較した複数の研究は、ＨＢＶ感染の排除を促進するためには、ＨＢＶ抗原、特にＨＢｃ抗原に対する強力な多重特異的Ｔ細胞応答を誘導する必要性を強調している。これに沿って、慢性ＨＢＶ感染が治癒に向かう患者と治癒しない慢性ＨＢＶ感染の患者のＴ細胞を比較したところ、治癒に向かう患者ではＨＢｃ抗原特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞がより多く存在することが明らかになっている［Ｂｏｎｉ，２０１２；Ｌｉ，２０１１；Ｌｉａｎｇ，２０１１］。

さらに、機能的なＣＤ８＋Ｔ細胞の役割は極めて重要であると考えられる。チンパンジーでは、急性ＨＢＶ感染時にＣＤ８＋Ｔ細胞が枯渇すると、ウイルス血症が持続する［Ｔｈｉｍｍｅ，２００３］。ヒトでは、急性Ｂ型肝炎におけるＨＢＶの排除は、ウイルスのヌクレオカプシド、エンベロープ、及びポリメラーゼタンパク質に対する強力でポリクロ―ナルかつ多重特異性のＣＤ８＋Ｔ細胞応答と関連しており、この応答は臨床回復後も数十年にわたって持続する。対照的に、ＣＨＢ患者は通常、ウイルスに対する強力なＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示さない。自然又はインターフェロン誘導性寛解を経験したＣＨＢ患者は、急性肝炎から回復した患者の応答と比較して、強度及び特異性において同等のＨＢＶに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す［Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ，１９９６］。

不変鎖を含むＳＡＭコンストラクト（ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶ）は、ＨＢｃ抗原及びＨＢｓ抗原に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答をより強く誘導することが示されたため、これらのコンストラクトを実施例２で使用するために選択した。

［実施例２：ＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１遺伝子導入マウスにおけるＭＶＡ－ＨＢＶ又はＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶとＭＶＡ－ＨＢＶの両方をＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶに置換した場合の評価］
実験あたりの動物数制限のため、独立した２つの実験を計画した。両実験とも、表２に示す全ての群の動物を用いた。

本実験では、オスとメスのＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１遺伝子導入マウスを使用した。ＡＡＶ２／８－ＨＢＶを導入したＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１マウスモデルは、慢性ＨＢＶ感染のウイルス学的及び免疫学的特徴を再現する。異なるワクチンレジメンの免疫原性、肝浸潤ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の影響、ＨＢｃＡｇを発現する肝細胞への標的化の可能性、そして血清中のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）活性の測定によるワクチン関連肝炎症の可能性を評価するためにこれが選択された。

したがって、これらの実験では、０日目にオス及びメスのＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１マウス（群１～６及び群８）に、複製能のあるＨＢＶＤＮＡゲノムを含むアデノ随伴ウイルス血清型２／８（ＡＡＶ２／８ＨＢＶ）ベクターの１０^１０ウイルスゲノム（ｖｇ）を静脈内接種した。

ＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１マウスは、免疫化前に、２１日目及び２２日目の血清中に検出されたＨＢｓ循環抗原レベル、年齢、及び性別の割合に基づき、７つの異なる群（群１～６及び群８）に無作為に割り付けられた。

群７のマウスには、ＡＡＶ２／８－ＨＢＶウイルスベクターを導入せず、同時投与ワクチンレジメンを用いて筋肉内（ＩＭ）免疫した。この群は免疫学的検査の陽性対照として使用した。

ＨＬＡ．Ａ２／ＤＲ１を導入したマウスには、３１日目又は３３日目（初回免疫化）、５９日目又は６１日目（２回目免疫化）、７３日目又は７５日目（３回目免疫化）、及び８６日目又は８８日目（４回目免疫化）に、ＨＢｃ抗原及びＨＢｓ抗原を含む様々な製剤（表２に記載）を筋肉内（腓腹筋）注射した。２つの別個の実験の結果は、図表の表示と結果の統計解析のために統合された。

全てのケースにおいて、各組成物は同じ用量で使用された。
－ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶは、マウス１匹あたり１０^８ｖｐの用量で投与された。
－ＭＶＡ－ＨＢＶを接種したマウスには、マウス１匹あたり１０^７ｐｆｕの用量で投与された。
－ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶは、マウス１匹あたり１μｇの用量で投与された、及び
－アジュバント添加タンパク質を投与した群には、マウス１匹あたりＨＢｃ４μｇ、ＨＢｓ１μｇ、及びＭＰＬ５μｇとＱＳ２１５μｇを含むＡＳ０１が投与された。

この実験の目的は、ＭＶＡ－ＨＢＶを使用したワクチンレジメンと比較して、少なくとも同レベルのＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導することにより、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶがＭＶＡ－ＨＢＶ又はＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶとＭＶＡ－ＨＢＶの両方を逐次又は同時投与ワクチンレジメンで置き換えることができるかどうかを評価することである。

初回注射の３１日前又は３３日前に、群１～６及び８のマウスにＡＡＶ２／８－ＨＢＶを導入した。前記の通り、実験実施上の実用上の理由から、各群を２つに分け、２つの別個の実験を実施した。示されている全ての結果は、両方の実験から得られた結果を合わせたものである。

２回目の注射の１３日後及び１４日後（１３／１４ｄｐＩＩ）に、脾臓サンプル及び全てのマウスの血清サンプルを採取するために、群１～６（各実験から）からそれぞれ１５匹のマウス、実験番号２０２００７１９の群７及び８から６匹及び４匹のマウス、実験番号２０２００７２０の群７及び８から４匹及び５匹のマウスを犠牲にした。４回目の注射の２２日後（２２ｄＰＩＶ）に、残りの動物を全て犠牲にし、脾臓、肝臓、及び血清サンプルを採取した。

実施例２の種々のグループで生成されたＣＤ８＋Ｔ細胞及び抗体応答を図４Ａ及び４Ｂに示す。図４の結果は、２回目の免疫化の１４日後、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶでブーストした場合、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＭＶＡ－ＨＢＶでブーストした場合と比較して、ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が７．３６倍（ＧＭＲ＝７．３６、９０％ＣＩ［３．９６～１３．７０］）高いことを示す。同様に、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶによるプライミングとＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶによるブーストは、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶによるプライミングとＭＶＡ－ＨＢＶによるブーストと比較して、９倍高いＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答（ＧＭＲ＝９．０７、９０％ＣＩ［４．８７～１６．８７］）を誘導したことも示している。

同様のＣＤ８＋Ｔ細胞応答の結果を、図５Ａと５Ｂに示す。この実験において、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶによるプライミングとＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶによるブーストは、２回目の免疫の１４日後に、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＭＶＡ－ＨＢＶでブーストした場合と比較して、３．６倍高いＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答（ＧＭＲ＝３．６４、９０％ＣＩ［２．３４－５．６７］）を誘導した。また、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶによるプライミングとＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶによるブーストは、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＭＶＡ－ＨＢＶでブーストした場合と比較して、７．７８倍高いＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答（ＧＭＲ＝７．７８、９０％ＣＩ［５－１２．１２］）を誘導したことも示された。

興味深いことに、ＭＶＡ－ＨＢＶ、又はＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶとＭＶＡ－ＨＢＶの両方をＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶワクチンに置き換えると、サイトカイン共発現プロフィール（図１３Ａ、１３Ｂ）で示されるように、多機能性ＨＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞がより多く誘導された。ＨＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の大部分は、主にＩＦＮ－ｇとＴＮＦαを発現しており、この集団はＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶを用いた同種プライムブーストによってさらに増加した。

図６及び図７は、脾臓で測定されたＣＤ４＋応答を示している。２回目の免疫接種から１４日後、ＡＡＶ２／８－ＨＢＶを導入したＨＬＡ－Ａ２／ＤＲ１マウスにおいて、全てのワクチンレジメンが、非常に低いか、検出限界以下のＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞（０．１％以下）を誘導した。ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１単独又は両ベクターと組み合わせて投与した場合にのみ、わずかに高いＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞が誘導された。

２回目の免疫化の１４日後の抗ＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答に関しては、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングしＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶでブーストした場合、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＭＶＡ－ＨＢＶでブーストした場合よりも７．１２倍高いＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答（幾何平均比（ＧＭＲ）＝７．１２、９０％ＣＩ［４．６１～１１］）が誘導された。ＣｈＡｄとＭＶＡの両方をＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶに置き換えても、より高い応答は誘導されなかったものの、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶでブーストした場合、ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶでプライミングし、ＭＶＡ－ＨＢＶでブーストした場合と比較して、２．５６倍高いＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答（ＧＭＲ＝２．５６、９０％ＣＩ［１．６６～３．９５］）が誘導されたことが示されている。ＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答に関して既に観察されているように、強力なＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１を単独又は両ベクターと組み合わせて投与した場合にのみ誘導された。

体液性免疫応答に関しては、ＭＶＡ－ＨＢＶ、又はＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶとＭＶＡ－ＨＢＶの両方をＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶに置き換えても、抗ＨＢｃ抗体及び抗ＨＢｓ抗体応答のレベルには影響がなかった。

興味深いことに、ＨＢＶワクチンによる免疫接種では、使用したレジメン（逐次投与又は同時投与）に関わらず、全群で血清ＨＢｓ抗原が±１．５倍減少し、群間差は認められなかった（図１０及び１１）。最後に、肝臓関連の炎症パラメータとして、２回目及び４回目の免疫接種後のマウス血清中のＡＳＴ及びＡＬＴ活性を測定した。各群において、ＡＬＴレベルは試験期間全体を通して安定しており、ＭＶＡ－ＨＢＶ、又はＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶとＭＶＡ－ＨＢＶの両方をＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶに置き換えても有意な影響は認められなかった。全てのグループでわずかに高いＡＳＴレベルが測定されたが、群間差はみられなかった（図１２）。

総括：
ＭＶＡ－ＨＢＶ、又はＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶとＭＶＡ－ＨＢＶの両方をＳＡＭ－ｈＩｉ－ＨＢＶに置き換えた場合、ＨＢｃ及びＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が有意に増加し（ＳＡＭ／ＳＡＭ＞ＣｈＡｄ／ＳＡＭ＞ＣｈＡｄ／ＭＶＡ）、ＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答にはわずかなプラスの影響があった。抗ＨＢｃ及び抗ＨＢｓＩｇＧ抗体応答のレベルには有意な影響は認められなかった。

循環ＨＢｓ抗原に関しては、全群で循環ＨＢｓ抗原が±１．５倍減少する傾向が見られ、群間差はみられなかった。
さらに、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清活性を測定することで、ワクチン関連肝炎症の可能性を評価したが、非接種群と比較してワクチン接種群で肝酵素の上昇は検出されなかった。

［実施例３：ＨＬＡ－Ａ２／ＤＲＢ１ナイーブマウスにおけるＬＮＰ－ｍＲＮＡ同時投与の免疫原性評価］
本実験の詳細を表３に示す。ＬＮＰ－ｍＲＮＡコンストラクトは、ＵＴＲ４骨格とＲＶ３９ＬＮＰを含む。本製剤はさらに、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ポリエチレングリコールコンジュゲート（ＰＥＧコンジュゲート）脂質、及びコレステロールを含む。

本実験では、８～１２週齢のＨＬＡ－Ａ２／ＤＲＢ１ナイーブマウス（オス５４匹、メス４７匹）を用いた。投与スケジュールは、０日目、２１日目、４２日目、及び６３日目に筋肉内投与による免疫付与とした。使用した投与量は以下のとおりである。
‐ ｍＲＮＡ：表に記載の通り
‐ ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶ：マウス１匹当たり１０^８ｖｐ
‐ ＭＶＡ－ＨＢＶ：マウス１匹当たり１０^７ｐｆｕ
‐ ＨＢｃ－ＨＢｓ：４～１μｇ／ＡＳ０１、すなわち４μｇのＨＢｃ及び１μｇのＨＢｓ（表３の群７において、ｍＲＮＡと同時に投与されたアジュバント添加タンパク質の場合）。

ＣｈＡｄ１５５－ｈＩｉ－ＨＢＶベクターは、配列番号１５のｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓアミノ酸配列をコードし、ＭＶＡ－ＨＢＶベクターは、配列番号５のＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓアミノ酸配列をコードする。

この実験の主な目的は、ｈＩｉ－ＨＢｃｍＲＮＡとｈＩｉ－ＨＢｓｍＲＮＡ（すなわち「ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ」）の同時投与による免疫干渉を調査することである。３種のｍＲＮＡ（ｈＩｉ－ＨＢｃ及びｈＩｉ－ＨＢｓを含む）を同時投与した実験を、単一のｍＲＮＡタイプのみを含む製剤と比較した。この以前の実験では、同時投与がＨＢｃ及びＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答に悪影響を及ぼすことが観察された（図１７参照）。特に、これらのｍＲＮＡを同時投与した場合、ＨＢｃ特異的応答は６．７倍低下し、ＨＢｓ特異的応答は２倍低下した。

最初の変更は、ＨＢｃｍＲＮＡとＨＢｓｍＲＮＡを単に同時投与すること（つまり、３つ目のｍＲＮＡは使用しない）であった。さらに、ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋応答への影響が最も大きかったため、ＨＢｓｍＲＮＡの量をＨＢｃｍＲＮＡに対して減少させた。これにより、表３の群２～５で観察されるＨＢｃｍＲＮＡとＨＢｓｍＲＮＡの比率が異なった。

‐ 群２のマウスには、７μｇのＨＢｃｍＲＮＡと７μｇのＨＢｓｍＲＮＡを含む組成物を投与した。
‐ 群３には、ＨＢｓｍＲＮＡを１．５倍希釈し、４．６μｇ（小数点第１位まで切り捨て）のＨＢｓｍＲＮＡをマウスに投与した。
・したがって、この組成物で使用されたｍＲＮＡの比率は、１．５ＨＢｃｍＲＮＡ：１ＨＢｓｍＲＮＡであった。
‐ 群４では、４．６μｇのＨＢｓｍＲＮＡ組成物を１．５倍希釈し、３．１μｇ（小数点第１位まで切り捨て）を含む組成物をマウスに投与した。
・したがって、この組成物で使用されたｍＲＮＡの比率は、２．３ＨＢｃｍＲＮＡ：１ＨＢｓｍＲＮＡであった。
‐ 群５では、３．１μｇのＨＢｓｍＲＮＡ組成物をさらに１．５倍希釈し、２．０μｇ（小数点第１位まで切り捨て）を含む組成物をマウスに投与した。
・したがって、この組成物で使用されたｍＲＮＡの比率は、３．５ＨＢｃｍＲＮＡ：１ＨＢｓｍＲＮＡであった。

ＬＮＰ－ｍＲＮＡ単独投与（すなわち、群８、９、１０、１１、１２）と比較して、免疫干渉レベルが最も低いＬＮＰ－ｍＲＮＡ比率を含む同時投与（群２、３、４、５から）を選択すること。そこで、
‐ ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答への潜在的な悪影響を評価した。
‐ ＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答への潜在的な悪影響を評価した。

免疫干渉を評価するため、脾臓におけるＨＢｃ及びＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を７５日目及び７７日目に測定した（図１８、１９、２０参照）。

成功基準は、「単独のＬＮＰ－ｍＲＮＡ製剤に対する異なるＬＮＰ－ｍＲＮＡ比率の同時投与の非劣性を評価する。幾何平均比率の９０％信頼区間の下限が０．３３を超える場合、非劣性が示される。統計的に非劣性が示された場合、生物学的関連性は科学者によって評価される。」と定義された。

マウス８匹のサンプルサイズでＳＤが０．３６未満であれば、レベルαの５％で少なくとも８０％の３倍の非劣性が示される。各群に８匹のマウス、ＮａＣｌ群に５匹のマウスを割り当て、合計１０１匹のマウスを使用する。

結果は、ｈＩｉ－ＨＢｃｍＲＮＡに対するｈＩｉ－ＨＢｓｍＲＮＡの量を減らすことで、対照群（７μｇのｈＩｉ－ＨＢｃｍＲＮＡのみで免疫したマウス）と比較して、ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋応答が改善されることを示した（図１９参照）。最も高いＨＢｃ特異的ＣＤ８＋応答は、４．６μｇのｈＩｉ－ＨＢｓｍＲＮＡを使用した場合に観察された。

興味深いことに、７μｇのｈＩｉ－ＨＢｃと４．６μｇのｈＩｉ－ＨＢｓを含む組成物も、７μｇのｈＩｉ－ＨＢｃと７μｇのｈＩｉ－ＨＢｓを含む組成物と同程度のＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を生じることがわかり、この応答は４．６μｇのＨＢｓｈＩｉ－ＨＢｓｍＲＮＡのみで免疫したマウス群で検出されたものと同様であった。７μｇ‐３．１μｇ及び７μｇ‐２μｇの組成物では、７μｇ‐７μｇの組成物よりもＨＢｃ特異的Ｔ細胞応答が高かったものの、ＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答はこれらの２つの配合で有意に低下した。

したがって、７μｇｈＩｉ－ＨＢｃ－ｍＲＮＡと４．６μｇｈＩｉ－ＨＢｓ－ｍＲＮＡ（すなわち、１．５ｈＩｉ－ＨＢｃ－ｍＲＮＡ：１ｈＩｉ－ＨＢｓ－ｍＲＮＡの比率）を含む同時投与が、同時投与されたｍＲＮＡによって誘導される免疫応答が、それぞれのｍＲＮＡを単独で投与した場合の免疫応答と同様であったことから、好ましい組成物であることがわかった。

この実験の結果は、以下の点も示した：
‐ ＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答に対する同時投与の悪影響は認められないこと、及び
‐ ＨＢｃ特異的ＩｇＧ応答に対する同時投与（ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ）の悪影響は認められないこと。

この実験は、以下の目的でも計画された：
（ｉ）ｍＲＮＡ（ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ）の同時投与によるプライムブースト免疫とＣｈＡｄ／ＭＶＡの同時投与を直接比較すること（表３の群１と２、３、４、５の比較）。
（ｉｉ）ｍＲＮＡ（ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ）の同時投与を４回投与した場合と２回投与した場合の免疫原性を評価すること（表３の群４と６の比較）。
（ｉｉｉ）同時投与したｍＲＮＡ（ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ）とＡＳ０１アジュバント添加タンパク質との間の免疫干渉を調査すること（表３の群６と７の比較）。群７では、「ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ」と「ＨＢｃ－ＨＢｓ／ＡＳ０１」の組成物を同時に投与したが、マウスの異なる肢にそれぞれ異なる注射で投与した。

これらの副次的エンドポイントは、７５日目と７７日目にＩＣＳ法で測定した脾臓中のＨＢｃ及びＨＢｓ特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答、及びＥＬＩＳＡで測定した７５日目と７７日目のＨＢｃ及びＨＢｓ特異的抗体応答であった（図１８、２０、２１参照）。

それぞれの結果は以下のとおりである：
（ｉ）ｍＲＮＡ２回投与とＣｈＡｄ／ＭＶＡプライムブーストの比較：
‐ ｍＲＮＡ２回投与は、ＣｈＡｄ／ＭＶＡプライムブーストよりも高いＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導することが分かった。特に、ＨＢｃに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は３倍、ＨＢｓに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は２倍増加した（図１８参照）。
‐ ｍＲＮＡ２回投与は、ＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答も８倍高く誘導することが分かった。ｍＲＮＡ又はＣｈＡｄ／ＭＶＡのいずれによっても、ＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答は誘導されなかった（図１９参照）。
‐ ｍＲＮＡ２回投与は、ＨＢｃ特異的ＩｇＧ応答も８倍高く誘導することが分かった（図２１参照）。ｍＲＮＡ又はＣｈＡｄ／ＭＶＡのいずれによっても、ＨＢｓ特異的ＩｇＧ応答は誘導されなかった。

（ｉｉ）ｍＲＮＡの４回投与と２回投与の比較：
‐ ｍＲＮＡを同時投与した２回の追加免疫において、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が認められた。特に、ＨＢｃに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は２倍、ＨＢｓに対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は３倍増加した（図１８参照）。
‐ ｍＲＮＡの４回投与では、ＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答も３．５倍高く誘導された。ＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、４回投与後も２回投与後も誘導されなかった（図１９参照）。
‐ ｍＲＮＡの４回投与では、ＨＢｃ特異的ＩｇＧ応答も２倍高く誘導された（図２１参照）。ＨＢｓ特異的ＩｇＧ応答は、４回投与後も２回投与後も誘導されなかった。

（ｉｉｉ）ｍＲＮＡとアジュバント添加タンパク質の同時投与について：
‐ アジュバント添加タンパク質と同時投与したｍＲＮＡ（ｈＩｉ－ＨＢｃ＋ｈＩｉ－ＨＢｓ）の同時投与は、ＨＢｃ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答に悪影響を及ぼすことが確認された。しかし、この同時投与レジメンは、ＨＢｓ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答には悪影響を与えなかった（図１８参照）。
‐ この同時投与レジメンは、ＨＢｃ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答に悪影響を与えることが確認された。しかし、製剤にアジュバント添加タンパク質を添加することで、ＨＢｓ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答も誘導された（図１９参照）。
‐ この同時投与レジメンは、ＨＢｃ特異的ＩｇＧ応答にも好影響を与えることが確認された（図２１参照）。さらに、製剤にアジュバント添加タンパク質を含めると、ＨＢｓ特異的ＩｇＧ応答が誘導された。

本発明の実施形態
本発明の実施形態は、以下の３つのグループの実施形態で記載される。必要に応じて、３つのグループの特徴を組み合わせて個別の実施形態を形成することができる。

実施形態のグループ１は、以下を説明する。
実施形態Ａ．少なくともＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡを含む慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物であって、ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている組成物。

実施形態Ｂ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）が、配列番号１１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ａに記載の組成物。

実施形態Ｃ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態Ｄ．前記組成物がさらにＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードするｍＲＮＡを含む、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態Ｅ．Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）が、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｄに記載の組成物。

実施形態Ｆ．Ｂ型肝炎小表面抗原（ＨＢｓ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、前記実施形態のいずれかに記載に組成物。

実施形態Ｇ．少なくともＢ型肝炎ウイルス表面タンパク質（ＨＢｓＡｇ）をコードするｍＲＮＡを含み、ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物。

実施形態Ｈ．ＨＢｓＡｇがＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）である、実施形態Ｇに記載の組成物。

実施形態Ｉ．ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｈに記載の組成物。

実施形態Ｊ．ＨＢｓＡｇがヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、実施形態Ｇ～Ｉのいずれかに記載の組成物。

実施形態Ｋ．ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号７又は配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態Ｌ．ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｋに記載の組成物。

実施形態Ｍ．１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと逐次的に又は同時に投与される、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態Ｎ．組換えＢ型肝炎ポリペプチドが組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、実施形態Ｍに記載の組成物。

実施形態Ｏ．前記ＨＢｃが、配列番号２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｍ又はＮに記載の組成物。

実施形態Ｐ．前記ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｍ又はＮに記載の組成物。

実施形態Ｑ．組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、実施形態Ｍ～Ｐのいずれかに記載の組成物。

実施形態Ｒ．アジュバントがＡＳ０１である、実施形態Ｑに記載の組成物。

実施形態Ｓ．ヒトにプライムブーストレジメンを施すことを含み、、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡがプライミング投与として投与され、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがブースター投与として投与される、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療方法。

実施形態Ｔ．ｍＲＮＡが、Ｂ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）及びＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）からなる群から選択される少なくとも１つのＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする、実施形態Ｓに記載の方法。

実施形態Ｕ．前記Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）がＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）である、実施形態Ｔに記載の方法。

実施形態Ｖ．Ｂ型肝炎ウイルス抗原がｈＩｉに融合している、実施形態Ｓ～Ｕのいずれかに記載の方法。

実施形態Ｗ．前記組換えＢ型肝炎ポリペプチドが、組換えＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、実施形態Ｓ～Ｕのいずれかに記載の方法。

実施形態Ｘ．組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、実施形態Ｓ～Ｗのいずれかに記載の方法

実施形態Ｙ．アジュバントがＡＳ０１である実施形態Ｘに記載の方法。

実施形態のグループ２は、以下を記載する。
実施形態ｉ．少なくともＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードする第１のｍＲＮＡを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症を治療するための組成物であって、第１のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、組成物。

実施形態ｉｉ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）が、配列番号１１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｉに記載の組成物。

実施形態ｉｉｉ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態ｉｖ．前記組成物がさらにＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードする第２のｍＲＮＡを含む、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態ｖ．ＨＢｃをコードする第１のｍＲＮＡ（「ＨＢｃｍＲＮＡ」）が、ＨＢｓをコードする第２のｍＲＮＡ（「ＨＢｓｍＲＮＡ」）とは異なるＬＮＰにカプセル化されている、実施形態ｉｖに記載の組成物。

実施形態ｖｉ．ＨＢｃをコードする第１のｍＲＮＡ（「ＨＢｃｍＲＮＡ」）が、ＨＢｓをコードする第２のｍＲＮＡ（「ＨＢｓｍＲＮＡ」）と同じＬＮＰにカプセル化されている、実施形態ｉｖに記載の組成物。

実施形態ｖｉｉ．Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）が、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｉｖ～ｖｉのいずれかに記載の組成物。

実施形態ｖｉｉｉ．Ｂ型肝炎小表面抗原（ＨＢｓ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、実施形態ｉｖ～ｖｉｉのいずれかに記載の組成物。

実施形態ｉｘ．第１のｍＲＮＡを、第２のｍＲＮＡより多くの重量で含む、実施形態ｉｖ～ｖｉｉｉのいずれかに記載の組成物。

実施形態ｘ．第１のｍＲＮＡと第２のｍＲＮＡがそれぞれ１．５：１の重量比で存在する、実施形態ｉｖ～ｉｘのいずれかに記載の組成物。

実施形態ｘｉ．少なくともＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードする第１のｍＲＮＡを含む慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物であって、前記第１のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、組成物。

実施形態ｘｉｉ．ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｘｉに記載の組成物。

実施形態ｘｉｉｉ．ＨＢｓがヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、実施形態ｘｉ又はｘｉｉに記載の組成物。

実施形態ｘｉｖ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードする第２のｍＲＮＡをさらに含む、実施形態ｘｉからｘｉｉｉのいずれかに記載の組成物。

実施形態ｘｖ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）が、配列番号１１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｘｉｉに記載の組成物。

実施形態ｘｖｉ．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、実施形態ｘｉｖ又はｘｖに記載の組成物。

実施形態ｘｖｉｉ．ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号７又は配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態ｘｖｉｉｉ．ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｘｖｉｉに記載の組成物。

実施形態ｘｉｘ．１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと逐次的に又は同時に投与される、前記実施形態のいずれかに記載の組成物。

実施形態ｘｘ．組換えＢ型肝炎ポリペプチドが、組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、実施形態ｘｉｘに記載の組成物。

実施形態ｘｘｉ．ＨＢｃが、配列番号２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｘｉｘ又はｘｘに記載の組成物。

実施形態ｘｘｉｉ．ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ｘｉｘ又はｘｘに記載の組成物。

実施形態ｘｘｉｉｉ．組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、実施形態ｘｉｘからｘｘｉｉのいずれかに記載の組成物。

実施形態ｘｘｉｖ．アジュバントがＡＳ０１である、実施形態ｘｘｉｉｉに記載の組成物。

実施形態のグループ３は、以下を記載する。
実施形態１．少なくともＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症を治療するための組成物であって、前記ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、組成物。

実施形態２．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）が、配列番号１１に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３．Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合されている、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４．ｍＲＮＡがさらにＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードする、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態５．Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）が、配列番号１に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態６．ＨＢｓをコードするｍＲＮＡ（ＨＢｓｍＲＮＡ）よりもＨＢｃをコードするｍＲＮＡ（ＨＢｃｍＲＮＡ）をより多くの重量で含む、実施形態４又は５に記載のｍＲＮＡ。

実施形態７．ＨＢｃｍＲＮＡとＨＢｓｍＲＮＡがそれぞれ１．５：１の重量比で存在する、実施形態４～６のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態８．少なくともＢ型肝炎ウイルス表面タンパク質（ＨＢｓＡｇ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物。

実施形態９．ＨＢｓＡｇがＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）である、実施形態８に記載のｍＲＮＡ。

実施形態１０．ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９に記載のｍＲＮＡ。

実施形態１１．ＨＢｓＡｇがヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合されている、実施形態８～１０に記載のｍＲＮＡ。

実施形態１２．ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号７又は配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１３．ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１４．組成物が、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと逐次的に又は同時に投与される、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１５．組換えＢ型肝炎ポリペプチドが、組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１６．ＨＢｃが、配列番号２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１７．ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１８．組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態１９．アジュバントがＡＳ０１である、実施形態１８に記載のｍＲＮＡ。

実施形態２０．少なくとも１つのＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡがプライミング投与として投与され、少なくとも１つのＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡがブースター投与として投与される、ヒトにプライムブーストレジメンを投与することを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療方法。

実施形態２１．ヒトにｍＲＮＡを４回連続投与することを含む、実施形態２０に記載の方法。

実施形態２２．アジュバント添加組換えＢ型肝炎ポリペプチドを含む別の組成物がｍＲＮＡと同時に投与され、組換えＢ型肝炎ポリペプチドが組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、実施形態２０又は２１に記載の方法。

実施形態２３．少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡがプライミング用量として投与され、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがブースター用量として投与される、ヒトにプライムブーストレジメンを施すことを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療方法。

実施形態２４．Ｂ型肝炎ウイルス抗原が、Ｂ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）、又はＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）からなる群から選択される、実施形態２３に記載の方法。

実施形態２５．Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）がＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）である、実施形態２３に記載の方法。

実施形態２６．Ｂ型肝炎ウイルス抗原がｈＩｉに融合されている、実施形態２３～２５に記載の方法。

実施形態２７．組換えＢ型肝炎ポリペプチドが組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、実施形態２３～２６のいずれかに記載の方法。

実施形態２８．組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、実施形態２３～２７のいずれかに記載の方法。

実施形態２９．ＬＮＰがＰＥＧ改変脂質、非カチオン性脂質、ステロール、及び非イオン化可能なカチオン性脂質を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３０．ＬＮＰがＰＥＧ改変脂質、非カチオン性脂質、ステロール、及びイオン化可能なカチオン性脂質を含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３１．非カチオン性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、又はスフィンゴミエリン（ＳＭ）などの中性脂質である、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３２．ステロールがコレステロールである、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３３．ＬＮＰが、ＰＥＧ改変脂質を約０．５～１５モル％、非カチオン性脂質を約５～２５モル％、ステロールを約２５～５５モル％、及びイオン化可能なカチオン性脂質を約２０～６０モル％含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３４．ＬＮＰの直径が５０～２００μｍである、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３５．ＬＮＰの多分散度が０．４以下、例えば０．３以下である、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３６．ヌクレオチド（Ｎ）とリン脂質（Ｐ）の比が、１Ｎ：１Ｐ～２０Ｎ：１Ｐ、１Ｎ：１Ｐ～１０Ｎ：１Ｐ、２Ｎ：１Ｐ～８Ｎ：１Ｐ、２Ｎ：１Ｐ～６Ｎ：１Ｐ、又は３Ｎ：１Ｐ～５Ｎ：１Ｐの範囲である、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３７．ｍＲＮＡの少なくとも半分がＬＮＰにカプセル化されており、好適には少なくとも８５％、特に少なくとも９５％、例えば１００％カプセル化されている、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３８．ｍＲＮＡが非複製型又は自己複製型ｍＲＮＡ（ＳＡＭ）である、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態３９．自己複製型ＲＮＡ分子が、（ｉ）自己複製型ＲＮＡ分子からＲＮＡを転写し得るＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、及び（ｉｉ）Ｂ型肝炎ポリペプチド、をコードする、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４０．５’キャップ－５’ＵＴＲ－非構造タンパク質（ＮＳＰ）１－４－サブゲノムプロモーター－Ｂ型肝炎ポリペプチド－３’ＵＴＲ－ポリＡという構成を有する、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４１．慢性Ｂ型肝炎感染症のヒト被験者に投与するための、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４２．非複製型ｍＲＮＡである、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４３．１つ又は複数の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがＡＳ０１アジュバントと共に投与される、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４４．前記方法が、まず前記ｍＲＮＡを投与し、次いで前記１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドを投与することを含む、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４５．前記方法が、プライムブーストレジメンを含み、前記ｍＲＮＡがプライミング投与として投与され、前記１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがブースター投与として投与される、前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡ。

実施形態４６．前記方法が、前記ｍＲＮＡの１回のプライミング投与と、前記組換えＢ型肝炎ポリペプチドの複数回のその後のブースター投与とを含む、実施形態４５に記載のｍＲＮＡ。

実施形態４７．前記方法が、前記１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドの２回又は３回のその後のブースター投与とを含む、実施形態４６に記載のｍＲＮＡ。

実施形態４８．前記方法が、前記ｍＲＮＡの複数回のプライミング投与と、前記組換えＢ型肝炎ポリペプチドの複数回のその後のブースター投与とを含む、実施形態４５に記載のｍＲＮＡ。

実施形態４９．前記方法が、前記ｍＲＮＡの２回のプライミング投与と、その後の前記組換えＢ型肝炎ポリペプチドの２回のブースター投与とを含む、実施形態４８に記載のｍＲＮＡ。

実施形態５０．前記実施形態のいずれかに記載のｍＲＮＡを含む免疫原性組成物。

実施形態５１．前記１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドをさらに含む、実施形態５０に記載の免疫原性組成物。

実施形態５２．以下：
（ａ）実施形態１～４９のいずれかに記載のｍＲＮＡ；及び
（ｂ）前記ｍＲＮＡと共に投与される１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチド
を含む免疫原性組み合わせ。

実施形態５３．前記１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドが、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）、及びアジュバントを含む、実施形態５２に記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態５４．１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドがＡＳ０１アジュバントと組み合わされている、実施形態５３に記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態５５．さらに、アデノウイルスベクター（Ｂ型肝炎ポリペプチドをコードする複製能欠損型チンパンジーアデノウイルス（ＣｈＡｄ）ベクターであり得る）を含む、実施形態５２～５４のいずれかに記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態５６．アデノウイルスベクターがヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合したＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードする、実施形態５５に記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態５７．アデノウイルスベクターがさらにＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓ）をコードする、実施形態５６に記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態５８．アデノウイルスベクターが、配列番号１５に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、実施形態５５～５７のいずれかに記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態５９．アデノウイルスベクターが、配列番号１５に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする、実施形態５５～５８のいずれかに記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態６０．アデノウイルスベクターが、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、実施形態５５～５９のいずれかに記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態６１．アデノウイルスベクターが、配列番号１５に示すアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする、実施形態５５～６０のいずれかに記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態６２．以下：
・脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されたＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡと、脂質ナノ粒子にカプセル化されたＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードするｍＲＮＡとを含む第１の組成物；及び
・組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）ならびにアジュバントを含む第２の組成物
を含む、免疫原性組み合わせ。

実施形態６３．前記の第２の組成物がＡＳ０１アジュバントを含む、実施形態６２に記載の免疫原性組み合わせ。

実施形態６４．組成物を逐次又は同時投与することにより慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）を治療する方法に使用するための、実施形態６２又は６３に記載の組み合わせ。

実施形態６５．実施形態１から４９のいずれかに記載のｍＲＮＡを、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと逐次的又は同時のいずれかでヒトに投与することを含む、ヒトにおける慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）感染症の治療方法。

実施形態６６．１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドが組換えＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）である、実施形態６２に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態６７．前記組成物が、組換えＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）及びアジュバントをさらに含む、実施形態６３に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態６８．前記組成物が、アジュバントをさらに含む、実施形態６２又は６３に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態６９．前記アジュバントがＭＰＬ及びＱＳ－２１を含む、実施形態６５に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態７０．前記組換えＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）が、Ｃ末端切断型組換えＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）である、実施形態６３に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態７１．Ｂ型肝炎ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むアデノウイルスベクターをヒトに投与することをさらに含む、前記実施形態６２～６７のいずれかに記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）感染症の治療方法。

実施形態７２．アデノウイルスベクターが複製能欠損型チンパンジーアデノウイルス（ＣｈＡｄ）ベクターである、実施形態６８に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態７３．アデノウイルスベクターがヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合したＢ型肝炎ポリペプチドをコードする、実施形態６８又は６９に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態７４．アデノウイルスベクターがＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードする、実施形態６８～７０のいずれかに記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態７５．アデノウイルスベクターがさらにＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓ）をコードする、実施形態７１に記載のヒトにおける慢性Ｂ型肝炎感染症（ＣＨＢ）の治療方法。

実施形態７６．ＨＢＶの治療における、実施形態１～４９のいずれかに記載のｍＲＮＡ、又は実施形態５０～６１のいずれかに記載の免疫原性組み合わせの使用。

実施形態７７．ＨＢＶに感染した患者における循環Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）レベルを低下させるための、実施形態１～４９のいずれかに記載のｍＲＮＡ、又は実施形態５０～６１のいずれかに記載の免疫原性組み合わせの使用。

実施形態７８．医薬の製造における、実施形態１～４９のいずれかに記載のｍＲＮＡ、又は実施形態５０～６１のいずれかに記載の免疫原性組み合わせの使用。

実施形態７９．ＨＢＶの治療用医薬の製造における、実施形態１～４９のいずれかに記載のｍＲＮＡ又は実施形態５０～６１のいずれかに記載の免疫原性組み合わせの使用。

実施形態８０：以下の構成要素：
（ａ）実施形態１～４９のいずれかに記載のｍＲＮＡ；及び
（ｂ）ｍＲＮＡと共に投与される１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチド
を含むキット。

参照文献

配列リスト
配列番号１：ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号２：ＨＢｃ切断型のアミノ酸配列
配列番号３：口蹄疫ウイルスの２Ａ切断領域を組み込むスペーサーのアミノ酸配列
配列番号４：口蹄疫ウイルスの２Ａ切断領域を組み込むスペーサーをコードするヌクレオチド配列
配列番号５：ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号６：ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号７：ｈＩｉのアミノ酸配列
配列番号８：ｈＩｉをコードするヌクレオチド配列
配列番号９：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号１０：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号１１：ＨＢｃのアミノ酸配列
配列番号１２：ｈＩｉ代替バリアントのアミノ酸配列
配列番号１３：ｈＩｉ代替バリアントをコードするヌクレオチド配列
配列番号１４：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓの代替核酸配列
配列番号１５：ｈＩｉ－ＨＢｃ－２Ａ－ＨＢｓの代替アミノ酸配列
配列番号１６：空ＳＡＭベクターの核酸配列
^１挿入はヌクレオチド7561の後のここから開始される
配列番号１７：ｈＩｉ＿ＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（Ｇｅｎｅｗｉｚ）核酸配列
配列番号１８：ＡＡ０９８中のｈＩｉ_ＨＢｃ_２Ａ_ＨＢｓＳＡＭプラスミド配列
配列番号１９：ＨＢｃ＿２Ａ＿ＨＢｓＳＡＭ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（Ｇｅｎｅｗｉｚ）核酸配列
配列番号２０：ＡＡ０９８中のＨＢｃ_２Ａ_ＨＢｓＳＡＭプラスミド配列
配列番号２１：ｈＩｉ－ＨＢｃのアミノ酸配列
配列番号２２：ｈＩｉ－ＨＢｃをコードするヌクレオチド配列
配列番号２３：ｈＩｉ－ＨＢｃプラスミド配列（ＵＴＲ４）
配列番号２４：ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号２５：ＨＢｓプラスミド配列（ＵＴＲ４）
配列番号２６：ｈＩｉ－ＨＢｓのアミノ酸配列
配列番号２７：ｈＩｉ－ＨＢｓをコードするヌクレオチド配列
配列番号２８：ｈＩｉ－ＨＢｓプラスミド配列（ＵＴＲ４）
配列番号２９：ＩＲＥＳヌクレオチド配列
配列番号３０：ｈＩｉ＿ＨＢｃｍＲＮＡ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（ＣｏｄｅＲＮＡ２）核酸配列
配列番号３１：ＨＢｓｍＲＮＡ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（ＣｏｄｅＲＮＡ２）核酸配列
配列番号３２：ｈＩｉ＿ＨＢｓｍＲＮＡ導入遺伝子をコードする、ヒトコドン最適化（ＣｏｄｅＲＮＡ２）核酸配列

Claims

少なくともＢ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）をコードするｍＲＮＡを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物であって、ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、組成物。
Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）が、配列番号１１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原（ＨＢｃ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、請求項１又は２に記載の組成物。
Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ｓｍａｌｌｓｕｒｆａｃｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＢｓ）をコードするｍＲＮＡを更に含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）が、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の組成物。
Ｂ型肝炎小表面抗原（ＨＢｓ）がヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
ＨＢｓをコードするｍＲＮＡ（ＨＢｓ－ｍＲＮＡ）よりもＨＢｃをコードするｍＲＮＡ（ＨＢｃ－ｍＲＮＡ）をより多くの重量で含む、請求項４～６のいずれか１項に記載の組成物。
ＨＢｃをコードするｍＲＮＡ及びＨＢｓをコードするｍＲＮＡがそれぞれ１．５：１の重量比で存在する、請求項４～７のいずれか１項に記載の組成物。
Ｂ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）をコードするｍＲＮＡを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療のための組成物であって、ｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）にカプセル化されている、組成物。
ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の組成物。
ＨＢｓがヒト不変鎖（ｈＩｉ）に融合している、請求項９又は１０に記載の組成物。
ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号７又は配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３、６又は１１に記載の組成物。
ヒト不変鎖（ｈＩｉ）が、配列番号１２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の組成物。
１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドと逐次的又は同時に投与される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。
組換えＢ型肝炎ポリペプチドが、組換えＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、請求項１４に記載の組成物。
ＨＢｃが、配列番号２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の組成物。
ＨＢｓが、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５又は１６に記載の組成物。
組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、請求項１４～１７のいずれか１項に記載の組成物。
アジュバントがＡＳ－０１である、請求項１８に記載の組成物。
プライム－ブーストレジメンをヒトに投与することを含む、慢性Ｂ型肝炎感染症の治療方法であって、少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡをプライミング投与として投与し、１種以上の組換えＢ型肝炎ポリペプチドをブースター投与として投与する、方法。
ｍＲＮＡが、Ｂ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）又はＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む群から選択される少なくとも１種のＢ型肝炎ウイルス抗原をコードする、請求項２０に記載の方法。
Ｂ型肝炎ウイルス抗原がｈＩｉに融合している、請求項２０又は２１に記載の方法。
組換えＢ型肝炎ポリペプチドが、組換えＢ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃ）及び組換えＢ型肝炎小表面タンパク質（ＨＢｓ）を含む、請求項２０～２２のいずれか１項に記載の方法。
組換えＢ型肝炎ポリペプチドがアジュバントと共に投与される、請求項２０～２２のいずれか１項に記載の方法。
アジュバントがＡＳ－０１である、請求項２４に記載の方法。