JP2019131580A - 慢性疼痛を治療する方法 - Google Patents

Abstract

【課題】慢性疼痛を治療する方法の提供。【解決手段】慢性疼痛を治療する方法。本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の予防および／または治療で使用するための抗ＣＧＲＰ抗体、ならびに抗ＣＧＲＰ抗体を用いて慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防する方法に関する。本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する医薬品を製造するための、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の使用であって、末梢投与するために医薬品を調製する使用を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の予防および／または治療で使用するための抗ＣＧＲＰ抗体、ならびに抗ＣＧＲＰ抗体を用いて慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防する方法に関する。

慢性疼痛とは、根底にある原因の傷害または疾患の自然治癒の時間経過よりも長く持続する、持続性の疼痛である。これは、有益または保護的な機能は果たさず、慢性疼痛状態に起因して英国において推定２７０万人が身体不自由となっている。

癌性疼痛は最も一般的な種類の慢性疼痛であり、腫瘍増殖に起因する侵害受容性の構成要素および腫瘍誘発性神経損傷に起因する神経因性の構成要素を実証する。これには、構造的損傷、神経の絞扼および損傷、正常組織代謝の崩壊をもたらす炎症プロセス、炎症性プロスタグランジンおよびサイトカインの産生、ならびに組織損傷がさらに関与する。

現在までに、慢性疼痛の治療に用いられてきた主な鎮痛剤は、オピエートおよび非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）である。どちらの薬物クラスも重篤な副作用を生じる場合がある。ＮＳＡＩＤＳは胃潰瘍および腎損傷を引き起こす場合があり、オピエートは嘔気、便秘、錯乱および依存性の問題を引き起こす場合がある。オピオイドは、高用量でも慢性疼痛を患っている個体のすべてで鎮痛をもたらすことができず、オピオイドに対する鎮痛耐性の発生により、長期療法におけるその有用性が複雑となる。特に、癌性疼痛治療は容認し難いほど高いレベルのオピエートの使用を必要とし、副作用を伴い、治療した患者の少なくとも２０％は依然として制御不能な疼痛を患う。

したがって、慢性疼痛プロセスの主要なステップを妨げ、特に慢性侵害受容性疼痛および／または慢性侵害受容性疼痛の症状を治療および／または予防するための、新しい薬学的に活性のある化合物を同定することが、非常に医療上必要である。

驚くべきことに、本発明者らは、慢性疼痛、特に癌性疼痛などの慢性侵害受容性疼痛の予防および／または治療において、抗ＣＧＲＰ抗体の投与が末梢作用部位において有効であることを見出した。

ＣＧＲＰ（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）とは、中枢神経系において神経伝達物質として作用する、３７個のアミノ酸の神経ペプチドである。これは、高い親和性でＣＧＲＰの受容体であるカルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）と結合して、アデニル酸シクラーゼおよびプロテインキナーゼＡの産生を活性化する。

中枢侵入性（ｃｅｎｔｒａｌｌｙ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ）の脊髄投与される低分子選択的ＣＧＲＰ拮抗剤は、神経因性および侵害受容性の疼痛状態の治療において有用であることが示されており（Ａｄｗａｎｉｋａｒ他、Ｐａｉｎ、２００７）、これは、脊髄中の内在性ＣＧＲＰを除去することが抗侵害受容性効果を有することを示唆している。さらに、ＣＧＲＰに対する抗血清のくも膜下腔内投与は、関節炎のげっ歯類モデルにおいて侵害受容性挙動を減少させることが示されている（Ｋｕｒａｉｓｈｉ，Ｙ．他、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．ｌｅｔｔ（１９９８）９２、３２５〜３２９）。

驚くべきことに、本発明者らは、抗ＣＧＲＰ抗体の投与が、末梢投与した場合に、慢性疼痛、特に慢性侵害受容性疼痛の予防および／または治療において、末梢作用部位において有効であることを見出した。この末梢投与経路は、より高リスクかつ不便な手順である抗体をくも膜下腔内または脊髄投与する必要性を超える、明白な利点を提供する。

本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する医薬品を製造するための、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の使用であって、末梢投与するために医薬品を調製する使用を提供する。

本発明は、治療有効量の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を個体に末梢投与することを含む、個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する方法をさらに提供する。

一実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、投与後に末梢に作用する。さらに本発明は以下をも提供する。
（１） 慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する医薬品を製造するための、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の使用。
（２） 末梢投与するために医薬品を調製する、項目１に記載の使用。
（３） 医薬品を末梢投与する、項目１に記載の使用。
（４） 経口、舌下、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、関節内、関節周囲、局所および／または筋肉内に投与するために医薬品を調製する、項目１から３のいずれか一項に記載の使用。
（５） 皮下または静脈内に投与するために医薬品を調製する、項目４に記載の使用。
（６） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、投与後に末梢に作用する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（７） 慢性疼痛が、慢性侵害受容性疼痛、慢性神経因性疼痛、慢性炎症性疼痛、線維筋痛症、突出痛および持続性疼痛のうちの１つまたは複数を含む、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（８） 慢性疼痛が、痛覚過敏、アロディニア、中枢感作、末梢感作、脱抑制および促通増大のうちの１つまたは複数をさらに含む、項目７に記載の使用。
（９） 慢性疼痛が癌性疼痛である、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（１０） 癌性疼痛が、以下の状態：腺組織における腺癌、臓器の胚性組織における芽細胞腫、上皮組織における癌腫、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合組織または支持組織における肉腫、副腎癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、神経系腫瘍、口腔
癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、結合組織の肉腫癌、骨組織癌、血液形成細胞癌、骨髄癌、多発性骨髄腫、白血病、原発性または続発性骨癌、骨に転移する腫瘍、神経および管腔臓器に浸潤する腫瘍、および神経構造付近の腫瘍のうちの１つまたは複数に起因する疼痛である、項目９に記載の使用。
（１１） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、
（ａ）ＣＧＲＰと結合し、
（ｂ）ＣＧＲＰがその受容体と結合することを遮断し、
（ｃ）ＣＧＲＰ受容体の活性化を遮断しもしくは低下させ、
（ｄ）ＣＧＲＰの生物活性を阻害、遮断、抑制しもしくは減少させ、
（ｅ）ＣＧＲＰのクリアランスを増加させ、かつ／または
（ｇ）ＣＧＲＰの合成、産生もしくは放出を阻害する、
前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（１２） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、
（ｉ）ヒト抗体であり、
（ｉｉ）ヒト化抗体であり、
（ｉｉｉ）モノクローナル抗体であり、
（ｉｖ）５０ｎＭ以下のＫｄ（表面プラズモン共鳴によって３７℃で測定）でＣＧＲＰと結合し、かつ／または
（ｖ）少なくとも７日間のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する、
前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（１３） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体がＣＧＲＰのＣ末端領域と特異的に結合する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（１４） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が配列ＧＳＫＡＦによって定義されるエピトープを特異的に認識する、項目１２に記載の使用。
（１５） 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号１または１９と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインを含む、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（１６） 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号２または２０と少なくとも９０％同一であるＶＬドメインを含む、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（１７） 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号１または１９と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインをさらに含む、項目１６に記載の使用。
（１８） 抗ＣＧＲＰ抗体が、
（ａ）配列番号３または２１に記載のＣＤＲ Ｈ１、
（ｂ）配列番号４または２２に記載のＣＤＲ Ｈ２、
（ｃ）配列番号５または２３に記載のＣＤＲ Ｈ３、
（ｄ）配列番号６または２４に記載のＣＤＲ Ｌ１、
（ｅ）配列番号７または２５に記載のＣＤＲ Ｌ２、
（ｆ）配列番号８または２６に記載のＣＤＲ Ｌ３、および
（ｇ）Ｌ１、Ｌ２およびＨ２の変異体
からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の使用。
（１９） 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号１と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインおよびアミノ酸配列が配列番号２と少なくとも９０％同一であるＶＬドメインを含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の使用。
（２０） 抗ＣＧＲＰ抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７を有する発現ベクターによって産生された重鎖を含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の使用。
（２１） 抗ＣＧＲＰ抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生された軽鎖を含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の使用。
（２２） 抗ＣＧＲＰ抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７およびＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生される、項目１から１４のいずれか一項に記載の使用。
（２３） １カ月に１、２、３または４回の皮下または静脈内の注射による末梢投与用に医薬品を調製する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（２４） ５〜１００ｍｇ／ｍｌの抗体濃度で、末梢投与用に医薬品を調製する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（２５） １〜１００ｍｇ／体重１ｋｇの抗体濃度で末梢投与用に医薬品を調製する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（２６） 医薬品が運動協調性または注意力のＣＮＳ機能障害を生じない、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（２７） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を中枢、脊髄またはくも膜下腔内に投与しない、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（２８） 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、中枢、脊髄またはくも膜下腔内侵入性の分子ではない、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
（２９） 抗ＣＧＲＰ抗体を、１つまたは複数のさらなる薬理学的に活性のある化合物と組み合わせて、別々に、連続的にまたは同時に投与する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（３０） １つまたは複数のさらなる薬理学的に活性のある化合物が、
（ｉ）オピオイド鎮痛剤、たとえば、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、レバロルファン、メサドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンまたはペンタゾシン、
（ｉｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、たとえば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンもしくはゾメピラック、またはその薬学的に許容できる塩、
（ｉｉｉ）バルビツレート鎮痛剤、たとえば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタルビタール、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、タルブタール、チアミラールもしくはチオペンタールまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｉｖ）鎮痛作用を有するベンゾジアゼピン、たとえば、クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムもしくはトリアゾラムまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖ）鎮痛作用を有するＨ_１拮抗剤、たとえば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミンもしくはクロルシクリジンまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖｉ）鎮痛剤、たとえば、グルテチミド、メプロバメート、メタカロンもしくはジクロラルフェナゾンまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖｉｉ）骨格筋弛緩剤、たとえば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモールもしくはオルフレナジンまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖｉｉｉ）ＮＭＤＡ受容体拮抗剤、たとえば、デキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）もしくはその代謝物デキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキノンまたはシス−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸、またはその薬学的に許容できる塩、
（ｉｘ）α−アドレナリン作用剤、たとえば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジンまたは４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタンスルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリン、
（ｘ）三環系抗鬱剤、たとえば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン、
（ｘｉ）抗痙攣剤、たとえば、カルバマゼピンまたはバルプロエート、
（ｘｉｉ）タキキニン（ＮＫ）拮抗剤、特にＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１拮抗剤、たとえば、（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾシノ［２，１−ｇ］［１，７］ナフトリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン（ＭＫ−８６９）、ラネピタント、ダピタントまたは３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチルアミノ］−２−フェニル−ピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）、
（ｘｉｉｉ）ムスカリン拮抗剤、たとえば、オキシブチン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロスピウムまたはダリフェナシン、 （ｘｉｖ）ＣＯＸ−２阻害剤、たとえば、セレコキシブ、ロフェコキシブまたはバルデコキシブ、
（ｘｖ）非選択的ＣＯＸ阻害剤（好ましくはＧＩ保護を有するもの）、たとえばニトロフルルビプロフェン（ＨＣＴ−１０２６）、
（ｘｖｉ）コールタール鎮痛剤、特にパラセタモール、
（ｘｖｉｉ）神経遮断剤、たとえばドロペリドール、
（ｘｖｉｉｉ）バニロイド受容体作用剤（たとえばレシニフェラトキシン）または拮抗剤（たとえばカプサゼピン）、
（ｘｉｘ）β−アドレナリン作用剤、たとえばプロプラノロール、
（ｘｘ）局所麻酔剤、たとえばメキシレチン、
（ｘｘｉ）コルチコステロイド、たとえばデキサメタゾン、
（ｘｘｉｉ）セロトニン受容体作用剤または拮抗剤、
（ｘｘｉｉｉ）コリン作動性（ニコチン性）鎮痛剤、
（ｘｘｉｖ）Ｔｒａｍａｄｏｌ（商標）、
（ｘｘｖ）ＰＤＥＶ阻害剤、たとえば、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタダラフィル、
（ｘｘｖｉ）α−２−δリガンド、たとえば、ガバペンチンまたはプレガバリン、および
（ｘｘｖｉｉ）カンナビノイド
から選択される、項目２９に記載の使用。
（３１） 治療有効量の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を個体に末梢投与することを含む、個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防する方法。
（３２） 個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防する医薬組成物であって、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体と薬学的に許容できる担体とを含み、末梢投与するために調製される医薬組成物。
（３３） （ａ）項目３２に記載の医薬組成物と、
（ｂ）慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防するために、治療有効量の前記医薬組成物を個体に末梢投与するための指示書と
を含むキット。

骨癌性疼痛モデルにおける、８グラムのフォンフレイ刺激に対する機械的過感受性に対する抗体Ｇ２の効果を示す図である。ＭＲＭＴ−１を注射したラットを、手術後の９日目に抗体Ｇ２またはビヒクル（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ２０）で治療した。手術後の増加性の体重増加によって示されるように、群は手術後の期間の間ずっと健康であった（データ示さず）。データは、７〜９匹のラット／群の平均±ＳＥＭである。それぞれの時点で、ビヒクル（vehicle）で治療した群に対して^＊ｐ＜０．０５であった。 骨癌性疼痛モデルにおける、１５グラムのフォンフレイ刺激に対する機械的過感受性に対する抗体Ｇ２の効果を示す図である。ＭＲＭＴ−１を注射したラットを、手術後の９日目にＧ２またはビヒクル（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ２０）で治療した。データは、７〜９匹のラット／群の平均±ＳＥＭである。それぞれの時点で、ビヒクルで治療した群に対して^＊ｐ＜０．０５であった。 ロータロッドによって測定した、歩行運動に対する抗体Ｇ２の効果を示す図である。２つの終点を調査した。骨癌性疼痛モデルにおける、化合物に誘発された運動協調性の機能障害の測度としての、落ちる潜時（Ａ）、および歩行運動に誘起された疼痛の測度としてのロータロッドスコア（Ｂ）を示す。ＭＲＭＴ−１を注射したラットを、手術後の９日目に抗体Ｇ２またはビヒクル（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ２０）で治療した。データは、７〜９匹のラット／群の平均±ＳＥＭである。それぞれの時点で、ビヒクルで治療した群に対して^＊ｐ＜０．０５であった。 抗体Ｇ１がα−ＣＧＲＰとＣＧＲＰ１受容体との結合を阻害することを実証する、結合アッセイデータを示す図である。 抗ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって測定した、抗ＣＧＲＰ濃度の血清レベル（ｕｇ／ｍｌ）対１０ｍｇ／ｋｇを静脈内投与した後の時間を示す図である。 抗ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって測定した、抗ＣＧＲＰ濃度の血清レベル（ｕｇ／ｍｌ）対１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇを静脈内投与した後の時間を示す図である。 Ｃ末端ＣＧＲＰ断片（ＣＧＲＰ２５〜３７）を用いたアラニンスキャンを示す図である。親和性の変化を親和性の損失の倍数で表し、これは、抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１がヒトα−ＣＧＲＰのＣ末端領域と結合することを示している。 Ｂｉａｃｏｒｅによる溶液競合を示す図である。配列がＣＧＲＰに関連しているＣＧＲＰ、ＣＧＲＰの断片またはペプチドを用いて、抗体Ｇ１の特異性を決定した。 ヒト、カニクイザル、ラット、マウス、イヌおよびウサギからのＣＧＲＰ配列を示す図である。種間で保存されていない残基に下線を引き、抗体Ｇ１のエピトープを太字で示した。 Ｇ１が、治療の９０分後から開始して皮膚の神経因性紅斑を阻害することを示すデータである。Ｇ１を静脈内投与によって投与した（１ｍｌ／ｋｇ）。データは、６〜８または１３匹のラット／群からのものである。それぞれの時点で、ビヒクル（リン酸緩衝溶液）で治療した群に対して^＊ｐ＝０．０５、^＊＊ｐ＝０．０１であった（ＡＮＯＶＡ）。（表１）２５℃でヒトα−ＣＧＲＰに対して測定した抗ＣＧＲＰ抗体のＫｄおよびＩＣ５０を示す表である［ｍｕＭａｂ７Ｅ９＝マウスのＧ１前駆体。ラットβ−ＣＧＲＰのそのＫ_Ｄ＝１ｎＭ。ＲＮ４９０１＝マウスツール、Ｇ１と同じエピトープを認識するが、ラットにおいて同じ親和性および選択性を示した（β−ＣＧＲＰ Ｋ_Ｄ＝１７ｎＭ）、Ｇ１＝ｍｕＭａｂ７Ｅ９からヒト化した抗体（ラットβＣＧＲＰのＫ_Ｄ＝０．１ｎＭ）］（表２）Ｂｉａｃｏｒｅによって決定した、Ｇ１の結合親和性を示す表である。

一般技術
本発明の実施では、別段に指定しない限りは、当分野の技術範囲内にある、分子生物学（組換え技術が含まれる）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の慣用技術を用いる。そのような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ他編、１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓ他編、１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ他編、１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）、Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）、Ｔｈｅ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）、ならびにＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ他編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９３）などの文献に十分に記載されている。

定義
「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的と特異的結合することができる、免疫グロブリン分子である。本明細書中で使用するこの用語には、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｄＡｂなど）、単鎖抗体（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、キメラ抗体、二重特異性抗体、抗体の一部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置も包含される。抗体には、ＩｇＧ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＭなどの任意のクラス（またはそのサブクラス）の抗体が含まれ、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを様々なクラスに割り当てることができる。５つの主要な免疫グロブリンクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２へとさらに分け得る。様々な免疫グロブリンのクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。様々な免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。

「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含有する抗体断片である。二本鎖のＦｖ種では、この領域は、密に非共有会合した１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。単鎖のＦｖ種では、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインは、軽鎖と重鎖とが二本鎖のＦｖ種と類似の二量体構造で会合できるように、柔軟なペプチドリンカーによって共有結合していることができる。この立体配置で、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原結合特異性を定義する。しかし、単一の可変ドメイン（抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でも、一般に結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。

また、Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含めた、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端の数個の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆ（ａｂ‘）２断片とは、ヒンジ領域でジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である。

抗体は、１つまたは複数の結合部位を有することができる（抗原と組み合わさるため）。複数の結合部位が存在する場合、結合部位は、互いに同一であるか、または異なる場合がある。配列および／または抗原／エピトープ認識に関して、たとえば、天然に存在する免疫グロブリンは２つの同一の結合部位を有し、単鎖抗体またはＦａｂ断片は１つの結合部位を有する一方で、「二重特異性」または「二官能性」抗体（二重特異性抗体）は２つの異なる結合部位を有する。

「単離した抗体」とは、（１）その天然の状態でそれに付随する、他の天然で会合している抗体を含めた天然で会合している構成要素と会合していない、（２）同じ種からの他のタンパク質を含まない、（３）異なる種の細胞によって発現される、または（４）自然界に存在しない抗体をいう。

「モノクローナル抗体」とは、同種の抗体集団をいい、モノクローナル抗体は、抗原の選択的結合に関与しているアミノ酸（天然に存在するおよび天然に存在しないもの）からなる。モノクローナル抗体の集団は特異性が高く、単一の抗原性部位に対して誘導されている。用語「モノクローナル抗体」には、インタクトなモノクローナル抗体および完全長のモノクローナル抗体だけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体の一部分を含む融合タンパク質、ならびに所要の特異性の抗原認識部位および抗原と結合する能力を含む、免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置も包含される。抗体の供給源またはそれを作製する様式（たとえば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物によってなど）に関して、限定されることを意図しない。

本明細書中で使用する「ヒト化」抗体とは、特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２もしくは抗体の他の抗原結合部分配列など）であり、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、非ヒト（たとえばネズミ）抗体の形態をいう。大部分は、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および生物活性を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置き換えられている。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも導入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも見つからないが、抗体の性能をさらに洗練および最適化するために含められた残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。また、ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。抗体は、ＷＯ９９／５８５７２号に記載されているように修飾されたＦｃ領域を有し得る。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に関して変更されている１つまたは複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６個）を有し、これらは、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲに「由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。

本明細書中で使用する「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生される抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有する、および／または、当分野で知られているもしくは本明細書中に開示されている、ヒト抗体を作製する技術のいずれかによって作製された、抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義には、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。そのような例の１つは、マウス軽鎖およびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当分野で知られている様々な技術を用いて産生することができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリから選択する（Ｖａｕｇｈａｎ他、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９〜３１４、Ｓｈｅｅｔｓ他、１９９８、ＰＮＡＳ，（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１、Ｍａｒｋｓ他、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１）。また、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン座位を、トランスジェニック動物、たとえば、内在性免疫グロブリン遺伝子を部分的または完全に失活させたマウス内に導入することによっても、作製することができる。この手法は、米国特許第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号および第５，６６１，０１６号に記載されている。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対して誘導される抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化することによって調製し得る（そのようなＢリンパ球は、個体から回収するか、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化し得る）。たとえば、Ｃｏｌｅ他、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、ページ７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ他、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６〜９５、および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。

単鎖抗体（ｓｃＦｖ）とは、ＶＬおよびＶＨ領域を対合させて、それらが単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーを介して一価分子を形成する抗体である（Ｂｉｒｄ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３（１９８８））。

二重特異性抗体とは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上での２つドメイン間の対合が可能となるには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインが他方の鎖上の相補的ドメインと対合することを強いて２つの抗原結合部位を作製する、二価の二重特異性抗体である。

「キメラ抗体」とは、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列のそれぞれの一部分が、特定の種に由来するまたは特定のクラスに属する抗体中の対応する配列に相同的である一方で、鎖の残りのセグメントが別の抗体中の対応する配列に相同的である抗体をいう。典型的には、これらのキメラ抗体では、軽鎖および重鎖の両方の可変領域が、哺乳動物の１つの種に由来する抗体の可変領域を模倣する一方で、定常部分が、別の種に由来する抗体中の配列に相同的である。そのようなキメラ体の１つの明らかな利点は、たとえば、ヒト細胞調製物に由来する定常領域と組み合わせて、可変領域が、非ヒト宿主生物からの容易に入手可能なハイブリドーマまたはＢ細胞を用いた現在知られている供給源に好都合に由来することができることである。可変領域は調製の容易性の利点を有し、特異性がその供給源によって影響を受けない一方で、ヒトである定常領域は、抗体を注射した際にヒト対象から免疫応答を誘発させる可能性が、非ヒト源からの定常領域よりも低い。しかし、この定義はこの具体的な例に限定されない。

「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食、細胞表面受容体（たとえばＢ細胞受容体、ＢＣＲ）のダウンレギュレーションなどが含まれる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（たとえば抗体可変ドメイン）と一緒になることを必要とし、そのような抗体エフェクター機能を評価するための、当分野で知られている様々なアッセイを用いて評価することができる。

「天然配列Ｆｃ領域」は、自然界で見つかるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域とは異なるアミノ酸配列を含むが、それでも天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持している。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域中に、たとえば約１〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書中の変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と、好ましくは少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を保有する。

本明細書中で使用する「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞毒性細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応をいう。目的分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載のものなどの、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを用いて評価することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞が含まれる。あるいは、またはそれに加えて、目的分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、たとえば、Ｃｌｙｎｅｓ他、１９９８、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２〜６５６に開示されているものなどの動物モデルにおいて評価し得る。

本明細書中で使用する「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」とは、抗体のＦｃ領域と結合する受容体を説明している。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体と結合するものであり（γ受容体）、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれ、対立遺伝子変異体およびこれらの受容体の選択的スプライシングされた形態も含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれ、これらは類似のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なる。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、１９９１、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７〜９２、Ｃａｐｅｌ他、１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５〜３４、ならびにｄｅ Ｈａａｓ他、１９９５、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０〜４１に総説されている。また、「ＦｃＲ」には新生児受容体、ＦｃＲｎも含まれ、これは、母性ＩｇＧを胎児に移すことを司っている（Ｇｕｙｅｒ他、１９７６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７：５８７、およびＫｉｍ他、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：２４９）。

「補体依存性細胞傷害」および「ＣＤＣ」とは、補体の存在下における標的の溶解をいう。補体の活性化経路は、補体系の第１構成要素（Ｃ１ｑ）と同族抗原と複合体形成した分子（たとえば抗体）との結合によって開始される。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ、たとえば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３（１９９６）に記載されているものを行い得る。

本明細書中で使用する用語「Ｇ１」および「抗体Ｇ１」とは、互換性があるように使用され、受託番号ＡＴＣＣ−ＰＴＡ−６８６７およびＡＴＣＣ−ＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生される抗体をいう。重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号１および２に示す。抗体Ｇ１のＣＤＲ部分（コチアおよびカバットＣＤＲが含まれる）は、その内容の全体が本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ２００７／０５４８０９号の図５に図式的に描かれている。重鎖および軽鎖可変領域をコードしているポリヌクレオチドを配列番号９および１０に示す。抗体Ｇ１の特徴付けは、その内容の全体が本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ２００７／０５４８０９号の実施例に記載されている。Ｇ１は、神経ペプチドＣＧＲＰ（ａおよびｂ）の結合および活性ならびにＣＧＲＰ放出によって引き起こされるその神経因性血管拡張の効果を遮断する、ヒト化モノクローナル遮断抗体（ＩｇＧ２）である。Ｇ１は、ヒトおよびラットのＣＧＲＰで免疫化したマウスから調製し、マウス形質細胞腫細胞と融合した脾臓細胞を用いてスクリーニングで同定され、ｍｕＭａｂ７Ｅ９と命名された、マウス抗ＣＧＲＰ拮抗抗体前駆体に由来するＩｇＧ２Δａモノクローナル抗ＣＧＲＰ拮抗抗体である。Ｇ１は、ｍｕＭＡｂ７Ｅ９に由来する軽鎖および重鎖のＣＤＲを最も近いヒト生殖系列配列内に移植し、次いで、少なくとも１つの突然変異をそれぞれのＣＤＲ内に、２つのフレームワーク突然変異をＶＨ内に導入することによって作製した。２つの突然変異をＧ１のＦｃドメイン内に導入して、ヒトＦｃ受容体の活性化を抑制した。Ｇ１およびｍｕＭａｂ７Ｅ９は、同じエピトープを認識することが示されている。

本明細書中で使用する用語「Ｇ２」および「抗体Ｇ２」とは、互換性があるように使用され、Ｗｏｎｇ ＨＣ他、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１２：９３〜１０６（１９９３）に記載されている抗ラットＣＧＲＰマウスモノクローナル抗体をいう。重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号１９および２０に示す。重鎖および軽鎖可変領域をコードしているポリヌクレオチドを配列番号２７および２８に示す。抗体Ｇ２のＣＤＲ部分を配列番号２１〜２６に示す。Ｇ２は、Ｇ１と同じエピトープを認識することが示されている。

本明細書中で使用する、抗体の「免疫特異的」結合とは、抗体の抗原結合部位とその抗体によって認識される特異的抗原との間で起こる、抗原特異的結合の相互作用をいう（すなわち、ＥＬＩＳＡまたは他の免疫アッセイにおいて、抗体はタンパク質と反応し、非関連のタンパク質とは検出可能には反応しない）。

抗体またはポリペプチドと「特異的に結合」または「優先的に結合」するエピトープ（本明細書中で互換性があるように使用される）とは、当分野で十分に理解されている用語であり、そのような特異的または優先的な結合を決定する方法も、当分野で周知である。
分子は、別の細胞または物質と比較して、特定の細胞または物質とより頻繁に、より迅速に、より長く持続しておよび／またはより高い親和性で反応または会合する場合に、「特異的結合」または「優先的結合」を示すとされる。抗体は、他の物質と比較してより高い親和性、結合力、より迅速に、および／またはより長く持続して結合する場合に、標的と「特異的に結合」または「優先的に結合」する。また、この定義を読むことによって、たとえば、第１の標的と特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的と特異的または優先的に結合しても、しなくてもよいことも理解されよう。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」には、必ずしも排他的な結合を必要としない（ただし、含まれることができる）。一般に、必ずしもではないが、結合への言及は、優先的な結合を意味する。

用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」とは、本明細書中で互換性があるように使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。
ポリマーは直鎖状または分枝状であってよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。また、この用語には、天然にまたは介入によって、たとえば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾、たとえば標識構成要素とのコンジュゲーションによって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。また、この定義には、たとえば、１つまたは複数のアミノ酸の類似体（たとえば非天然アミノ酸などが含まれる）、および当分野で知られている他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、ポリペプチドは、単鎖または会合した鎖として存在できることを理解されたい。

本明細書中で互換性があるように使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」とは、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいい、ＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドもしくは塩基、および／またはその類似体、または、ＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼによってポリマー内に取り込まれることができる任意の物質であることができる。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびその類似体などの、修飾されたヌクレオチドを含み得る。存在する場合は、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーをアセンブリする前または後に与え得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識構成要素とのコンジュゲーションなどによって、重合後にさらに修飾し得る。他の種類の修飾には、たとえば、「ｃａｐｓ」、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つまたは複数を類似体で置換すること、ヌクレオチド間修飾、たとえば、非荷電連結（たとえば、ホスホン酸メチル、リン酸トリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）および荷電連結（たとえば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を用いたもの、ペンダント部分を含有するもの、たとえば、タンパク質（たとえば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リシンなど）、インターカレーター（たとえば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレート剤（たとえば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された連結を有するもの（たとえばαアノマー核酸など）、ならびに非修飾形態のポリヌクレオチドが含まれる。さらに、糖中に通常存在するヒドロキシル基のいずれかを、たとえば、ホスホン酸基、リン酸基によって置き換える、標準の保護基によって保護する、または活性化させて追加のヌクレオチドとのさらなる連結を調製する、もしくは固体担体とコンジュゲートさせてもよい。５’および３’末端ＯＨは、リン酸化するか、またはアミンもしくは１〜２０個の炭素原子の有機キャップ基部分で置換することができる。他のヒドロキシルも、標準の保護基に誘導体化してもよい。また、ポリヌクレオチドは、たとえば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、α−アノマー糖、エピマー糖、たとえばアラビノース、キシロースまたはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環状類似体および脱塩基ヌクレオシド類似体、たとえばメチルリボシドを含めた、当分野で一般に知られているリボースまたはデオキシリボース糖の類似体も含有することができる。１つまたは複数のリン酸ジエステル連結を代替の連結基によって置き換えてもよい。これらの代替連結基には、それだけには限定されないが、リン酸がＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ_２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ_２（「ホルムアセタール」）によって置き換えられている実施形態が含まれる［式中、それぞれのＲまたはＲ’は、独立して、エーテル（−Ｏ−）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはアラルジルを含有していてもよい、Ｈまたは置換もしくは非置換のアルキル（１〜２０個のＣ）である］。ポリヌクレオチド中のすべての連結は同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めた本明細書中で言及するすべてのポリヌクレオチドに当てはまる。

抗体の「可変領域」とは、単独でまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域をいう。重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれ、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって結合された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。それぞれの鎖中のＣＤＲは、ＦＲによって非常に近位に一緒に保たれ、他方の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定する少なくとも２つの技術が存在する：（１）異種間の配列可変性に基づいた手法（すなわち、Ｋａｂａｔ他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（第５版、１９９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ））、および（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づいた手法（Ｃｈｏｔｈｉａ他、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７、Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉ他、（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７〜９４８））。本明細書中で使用するＣＤＲとは、いずれかの手法または両方の手法の組合せによって定義されたＣＤＲを指し得る。

抗体の「定常領域」とは、単独でまたは組み合わせた、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域をいう。

本明細書中で使用する「抗ＣＧＲＰ拮抗抗体」（「抗ＣＧＲＰ抗体」と互換性があるように呼ばれる）とは、ＣＧＲＰと結合してＣＧＲＰの生物活性および／または下流経路を阻害することができる抗体をいう。抗ＣＧＲＰ拮抗抗体には、ＣＧＲＰの生物活性を遮断し、それに拮抗し、それを抑制しまたは減少（顕著なものが含まれる）させる抗体が包含される。本発明の目的のために、用語「抗ＣＧＲＰ拮抗抗体」には、ＣＧＲＰ自体、ＣＧＲＰの生物活性、または生物活性の結果が、任意の有意義な度合で実質的に無効化、低下、または中和される、すべての既に同定した用語、表題、ならびに機能的状態および特徴が包含されることを明確に理解されたい。抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の例を本明細書中に提供する。

本明細書中で使用する「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、より好ましくは少なくとも９８％純粋、より好ましくは少なくとも９９％純粋な物質をいう。

「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物を取り込ませるためのベクターのレシピエントとなることができる、またはそうであった、個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、偶発的、または意図的な突然変異により、必ずしも元の親細胞と完全に同一（形態学またはゲノムＤＮＡ補体で）ではない場合がある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドを用いてｉｎ ｖｉｖｏで形質移入した細胞が含まれる。

本明細書中で使用する「治療」とは、有益または所望の臨床的結果を得るための手法である。本発明の目的のために、有益または所望の臨床的結果には、それだけには限定されないが、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の任意の態様の改善または緩和のうちの１つまたは複数が含まれる。本発明の目的のために、有益または所望の臨床的結果には、それだけには限定されないが、疼痛および／または慢性疼痛に関連する症状の重篤度の軽減、緩和のうちの１つまたは複数が含まれる。

「有効量」の薬物、化合物、または医薬組成物とは、疼痛感覚の緩和または減少などの臨床的結果を含めた有益または所望の結果をもたらすために十分な量である。有効量は、１つまたは複数の投与で投与することができる。本発明の目的のために、有効量の薬物、化合物、または医薬組成物とは、慢性疼痛または慢性疼痛に関連する症状の治療、寛解、強度の減少および／または予防に十分な量である。臨床的な状況で理解されるように、有効量の薬物、化合物、または医薬組成物は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せてまたは併せずに達成し得る。したがって、「有効量」とは、１つまたは複数の治療剤の投与の状況で考慮してもよく、１つまたは複数の他の薬剤と併せて望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合は、単一の薬剤を有効量で与えることを考慮し得る。

一実施形態では、本明細書中で「用に調製した」とは、医薬品が、末梢投与での使用に適切にパッケージおよび／または表示した単位用量などの形態であることを意味する。

慢性疼痛および／または慢性疼痛に関連する症状の「発生率の減少」とは、重篤度の減少（これらの状態に一般に使用されている他の薬物および／または治療の必要性および／または量（たとえばそれへの曝露）の減少が含まれることができる）、持続期間、および／または頻度のいずれかを意味する。

慢性疼痛および／または慢性疼痛に関連する症状を「寛解」とは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を投与しない場合と比較した、１つまたは複数の慢性疼痛の症状および／または慢性疼痛に関連する症状の軽減または改善を意味する。また、「寛解」には、症状の持続期間の短縮または減少も含まれる。

慢性疼痛および／または慢性疼痛に関連する症状を「和らげる」とは、本発明による抗ＣＧＲＰ拮抗抗体で治療した個体または個体集団における、慢性疼痛の１つまたは複数の望ましくない臨床徴候の程度の軽減を意味する。

本明細書中で使用する、慢性疼痛の発生を「遅延させること」とは、慢性疼痛および／または慢性疼痛に関連する症状の進行を先送りにする、妨害する、遅らせる、減速させる、安定にする、および／または延期することを意味する。この遅延は、病歴および／または治療する個体に応じて、様々な時間の長さであることができる。当業者には明らかなように、十分または有意な遅延には、個体が慢性疼痛を発生しないという点で、事実上、予防が包含されることができる。症状の発生を「遅延させる」方法とは、方法を使用しない場合と比較して、所定のタイムフレーム内で症状が発生する確率を減少させる、および／または所定のタイムフレーム内で症状の程度を減少させる方法である。そのような比較は、典型的には、統計的に有意な数の対象を用いた臨床的研究に基づいている。

「生体試料」には、個体から得た様々な試料種が包含され、診断または監視アッセイで使用することができる。この定義には、血液および生物学的起源の他の液体試料、生検標本または組織培養物もしくはそれに由来する細胞、およびその子孫などの固体組織試料が包含される。また、この定義には、その獲得後に任意の様式で、たとえば、試薬を用いた処理、可溶化、またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドなどの特定の構成要素について濃縮、または、切片作製のための半固体または固形物マトリックスへの包埋によって操作した試料も含まれる。用語「生体試料」には臨床的試料が包含され、また、培養中の細胞、細胞上清、細胞溶解液、血清、血漿、生体液、および組織試料も含まれる。

「個体」または「対象」とは、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、それだけには限定されないが、家畜（ウシなど）、スポーツ動物、ペット（ネコ、イヌおよびウマなど）、霊長類、マウスならびにラットが含まれる。

本明細書中で使用する「ベクター」とは、１つまたは複数の目的の遺伝子または配列を宿主細胞中に送達し、好ましくは発現させることができる構築体を意味する。ベクターの例には、それだけには限定されないが、ウイルスベクター、裸ＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、陽イオン縮合剤と会合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム内にカプセル封入したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などの特定の真核細胞が含まれる。

本明細書中で使用する「発現制御配列」とは、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的もしくは誘導性プロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーであることができる。発現制御配列は、転写させる核酸配列に作動可能に連結している。

本明細書中で使用する「薬学的に許容できる担体」には、活性成分と組み合わせた場合に、成分が生物活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である、任意の物質が含まれる。例には、それだけには限定されないが、標準の医薬担体のいずれか、たとえば、リン酸緩衝溶液、水、油／水乳濁液などの乳濁液、および様々な種類の湿潤剤が含まれる。エアロゾルまたは非経口投与用の好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液または通常（０．９％）生理食塩水である。そのような担体を含む組成物は、周知の慣用方法によって配合する（たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、１９９０、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照）。

本明細書中で使用する用語「末梢投与した」とは、物質、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を送達する経路をいい、特に、これは、中枢でない、脊髄でない、くも膜下腔内でない、ＣＮＳに直接送達しないことを意味する。この用語は、直前に記載したもの以外の投与経路をいい、経口、舌下、頬側、外用、直腸、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、経膣、硝子体内、関節内、関節周囲、局所または皮膚上である経路が含まれる。

本明細書中で使用する用語「末梢に作用する」とは、物質、化合物、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の作用部位をいい、前記部位は、中枢神経系とは対照的に末梢神経系内であり、前記化合物、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、末梢投与した場合に、障壁を通ってＣＮＳおよび脳に到達することができないことによって制限されるといわれる。用語「中枢侵入性」とは、物質が障壁を通って脳またはＣＮＳに到達することができることをいう。

本明細書中で使用する用語「Ｋ_ｏｆｆ」とは、抗体の、抗体／抗原複合体からの解離速度定数をいうことを意図する。

本明細書中で使用する用語「Ｋ_ｄ」とは、抗体−抗原の相互作用の解離定数をいうことを意図する。

本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療するための医薬品、ならびに個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療するための方法を対象とする。

第１の態様では、本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する医薬品を製造するための、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の使用であって、末梢投与用に医薬品を調製するか、または医薬品を末梢投与する使用を提供する。

第２の態様では、本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の予防および／または治療で使用するための抗ＣＧＲＰ拮抗抗体であって、末梢投与用に調製するか、または末梢投与する抗体を提供する。

第３の態様では、本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の発生または進行を寛解させる、制御する、発生率を減少させる、または遅延させる、医薬品を製造するための抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の使用であって、末梢投与用に医薬品を調製するか、または医薬品を末梢投与する使用を提供する。この態様の代替方法では、本発明は、慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の発生または進行を寛解させる、制御する、発生率を減少させる、または遅延させるために使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体であって、末梢投与用に調製するか、または末梢投与する抗体を提供する。

第４の態様では、本発明は、有効量の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を個体に末梢投与することを含む、個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する方法を提供する。

第５の態様では、本発明は、有効量の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を個体に末梢投与することを含む、個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状の発生または進行を寛解させる、制御する、発生率を減少させる、または遅延させる方法を提供する。

本発明の好ましい実施形態によれば、個体は、好ましくは哺乳動物、たとえば、ウマ、ネコもしくはイヌなどのコンパニオンアニマルまたはヒツジ、ウシもしくはブタなどの家畜である。最も好ましくは、哺乳動物はヒトである。

本発明の好ましい実施形態によれば、経口、舌下、頬側、外用、直腸、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、経膣、硝子体内、関節内、関節周囲、局所または皮膚上の投与用に医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を調製する。

さらなる好ましい実施形態によれば、慢性疼痛が発生する前および／またはその間および／またはその後での末梢投与用に医薬品を調製する。

一実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、投与後に末梢に作用する。一実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、中枢、脊髄またはくも膜下腔内に投与しない。

本発明の好ましい実施形態によれば、慢性疼痛は、慢性侵害受容性疼痛、慢性神経因性疼痛、慢性炎症性疼痛、線維筋痛症、突出痛および持続性疼痛のうちの１つまたは複数を含む。慢性疼痛は、痛覚過敏、アロディニア、中枢感作、末梢感作、脱抑制および促通増大のうちの１つまたは複数を含み得る。

本発明のさらなる好ましい実施形態によれば、慢性疼痛は、癌性疼痛、好ましくは、好ましくは腺組織における腺癌、臓器の胚性組織における芽細胞腫、上皮組織における癌腫、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合組織または支持組織における肉腫、副腎癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、結合組織の肉腫癌、骨組織癌、血液形成細胞癌、骨髄癌、多発性骨髄腫、白血病、原発性または続発性骨癌、骨に転移する腫瘍、神経および管腔臓器に浸潤する腫瘍、神経構造付近の腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される悪性疾患または癌から生じる癌性疼痛である。さらに好ましくは、癌性疼痛は、内臓痛、好ましくは膵臓癌および／または腹部の転移から生じる内臓痛を含む。さらに好ましくは、癌性疼痛は、体性痛、好ましくは、骨癌、骨への転移、手術後疼痛、結合組織の肉腫癌、骨組織癌、骨髄の血液形成細胞癌、多発性骨髄腫、白血病、原発性または続発性骨癌のうちの１つまたは複数から生じる体性痛を含む。

本発明の好ましい実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体はＣＧＲＰと結合し、より好ましくは、ＣＧＲＰと結合して、ＣＧＲＰ受容体と結合するＣＧＲＰの能力を阻害する。
好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ヒトおよびげっ歯類のＣＧＲＰ、好ましくはヒトおよびラットのＣＧＲＰの両方と結合する。より好ましくは、抗体はヒトＣＧＲＰと結合し、さらに好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ヒトα−ＣＧＲＰまたはヒトα−ＣＧＲＰおよび／もしくはβ−ＣＧＲＰと結合する。最も好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、以下の機能的特徴：（ａ）ＣＧＲＰと結合すること、（ｂ）ＣＧＲＰとその受容体（複数可）との結合を遮断すること、（ｃ）ｃＡＭＰ活性化を含めたＣＧＲＰ受容体の活性化を遮断または低下させること、（ｄ）受容体結合および／またはＣＧＲＰに対する細胞応答の誘発などの、ＣＧＲＰシグナル伝達によって媒介される下流経路を含めた、ＣＧＲＰの生物活性を、阻害、遮断、抑制しまたは減少させること、（ｅ）慢性疼痛の任意の態様を予防、寛解、または治療すること、（ｆ）ＣＧＲＰのクリアランスを増加させること、ならびに（ｇ）ＣＧＲＰの合成、産生または放出を阻害する（減少させる）ことのうちいずれか１つまたは複数を示す抗体である。

Ｇ１およびＧ２を含めた本発明の抗体は、ＣＧＲＰと結合して、たとえば血清中におけるその生物学的利用能を除去することで、ＣＧＲＰがその受容体に接近すること、下流の細胞応答ならびに紅斑および血管拡張などのＣＧＲＰの生物学的効果を防止することが知られている。

本発明のさらなる好ましい実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＣＧＲＰの断片、より好ましくはＣＧＲＰの断片および完全長のＣＧＲＰと結合する。好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＣＲＧＰのＣ末端領域または断片と結合する。ＣＲＧＰのＣ末端領域または断片は、好ましくは、ＣＧＲＰのアミノ酸１９〜３７もしくは２５〜３７もしくは２９〜３７、または３０〜３７、あるいは３１〜３７を含む。さらなる実施形態では、ＣＲＧＰのＣ末端領域または断片は、好ましくは、ＣＧＲＰのアミノ酸３２〜３７、最も好ましくは３３〜３７を含む。好ましくは、ＣＧＲＰは、α−ＣＧＲＰまたはβ−ＣＧＲＰのどちらかであり、さらに好ましくはヒトまたはげっ歯類であり、さらに好ましくはヒトまたはラットであり、より好ましくはヒトであり、さらに好ましくはヒトのα−ＣＧＲＰまたはβ−ＣＧＲＰであり、最も好ましくはヒトα−ＣＧＲＰである。

本発明のさらなる好ましい実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、アミノ酸配列ＧＳＫＡＦと特異的に結合する。好ましくは、ＣＧＲＰの配列ＧＳＫＡＦは、好ましくは位置３３〜３７の、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が結合するエピトープであり、最も好ましくは、配列は、好ましくはＣＧＲＰの位置３３〜３７の、末端がＣＧＲＰのアミノ酸Ｇ３３およびＦ３７によって定義されている、Ｘが任意のアミノ酸であることができるＧＸＸＸＦである。

一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰのアミノ酸Ｇ３３〜Ｆ３７によって定義されるエピトープと特異的に結合する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を提供する。抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、アミノ酸配列ＧＳＫＡＦによって定義されるエピトープと特異的に結合し得る。一実施形態では、本発明は、本発明の様々な態様に定義されている使用および方法における、そのような抗体の使用を提供する。

一実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＣＧＲＰ受容体の活性化を阻害または予防する。好ましくは、抗ＣＧＲＰ抗体は、０．０００１（０．１ｎＭ）〜５００μＭのＩＣ５０を有する。一部の好ましい実施形態では、ＩＣ５０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイで測定して、０．０００１μＭから、２５０μＭ、１００μＭ、５０μＭ、１０μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、もしくは０．５ｎＭのいずれかまたはほぼその値である。一部のさらなる好ましい実施形態では、ＩＣ５０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイで測定して、５００ｐＭ、または１００ｐＭ、または５０ｐＭのいずれかより小さい。さらにより好ましい実施形態では、ＩＣ５０は１．２ｎＭまたは３１ｎＭである。

さらなる好ましい実施形態では、使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＣＧＲＰもしくはＣＧＲＰの断片、またはＣＧＲＰの断片および完全長のＣＧＲＰ、好ましくはＣＲＧＰのＣ末端領域もしくは断片、好ましくは（ＣＧＲＰのアミノ酸１９〜３７もしくは２５〜３７もしくは２９〜３７または３０〜３７、あるいは３１〜３７を含む）ＣＲＧＰのＣ末端領域もしくは断片との結合について、本明細書中で上述した抗体と競合することができる。
さらなる実施形態では、ＣＲＧＰのＣ末端領域または断片は、好ましくは、ＣＧＲＰのアミノ酸３２〜３７、最も好ましくは３３〜３７を含む。

さらなる好ましい実施形態では、本発明で使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）好ましくはαまたはβ、好ましくはβ、より好ましくはげっ歯類またはヒト、最も好ましくはヒトである、ＣＧＲＰもしくはＣＧＲＰの断片、またはＣＧＲＰの断片および完全長のＣＧＲＰ、好ましくはＣＲＧＰのＣ末端領域もしくは断片、好ましくは（ＣＧＲＰのアミノ酸１９〜３７もしくは２５〜３７もしくは２９〜３７または３０〜３７、あるいは３１〜３７、好ましくはアミノ酸３２〜３７、最も好ましくは３３〜３７を含む）ＣＧＰＲのＣ末端領域もしくは断片と結合すること、
（ｂ）エピトープ配列ＧＳＫＡＦ、好ましくは（ａ）に定義したＣＧＲＰのアミノ酸位置３３〜３７と、より好ましくはＸが任意のアミノ酸である配列ＧＸＸＸＦ、好ましくは（ａ）に定義したＣＧＲＰのアミノ酸位置３３〜３７のＧＸＸＸＦと結合すること、
（ｃ）実質的に同じＫｄおよび／または実質的に同じＫ_ｏｆｆで（ａ）または（ｂ）に記載のように結合すること、および／または
（ｄ）好ましくはαまたはβ、好ましくはβ、より好ましくはげっ歯類またはヒト、最も好ましくはヒトである、ＣＧＲＰと結合してＣＧＲＰの生物活性および／または下流経路を阻害／それに拮抗すること
について、本明細書中で上述した抗ＣＧＲＰ拮抗抗体、特に本明細書中に記載したＧ１またはＧ２と競合することができる抗体である。

抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、好ましくは、０．０００００１μＭ（０．００１ｎＭ）または０．００００１μＭ（０．０１ｎＭ）〜５００μＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＧＲＰ、ＣＧＲＰの領域またはＣＧＲＰの断片と結合する。一部の好ましい実施形態では、結合親和性（Ｋｄ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイで測定して、０．０００００１μＭまたは０．００００１μＭから、２５０μＭ、１００μＭ、５０μＭ、１０μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、０．０５ｎＭ、もしくは０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭ、０．００１ｎＭのいずれかの間、またはほぼその値である。一部のさらなる好ましい実施形態では、結合親和性（Ｋｄ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイで測定して、５００ｐＭ、または１００ｐＭ、５０ｐＭ、または１０ｐＭ、５ｐＭ、１ｐＭのいずれかより小さい。さらにより好ましい実施形態では、結合親和性（Ｋｄ）は０．０４ｎＭまたは１６ｎＭである。

本発明で使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ、ＳｃＦｖなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）抗体、その突然変異体、抗体の一部分を含む融合タンパク質（たとえばドメイン抗体）、ヒト化抗体、ならびに、抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミノ酸配列変異体、および共有的に修飾された抗体を含めた、所要の特異性の抗原認識部位を含む、免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置の群から選択され得る。抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源であり得る（キメラまたはヒト化抗体が含まれる）。
一部の実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体はヒト化されていてよいが、より好ましくはヒトである。好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は単離されている、さらに好ましくは実質的に純粋である。抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が抗体断片である場合は、断片は、好ましくは、元の抗体の機能的特徴、すなわち、上記機能的特徴に記載したＣＧＲＰ結合および／または拮抗活性を保持している。

抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の例は当分野で知られている。したがって、本発明の好ましい実施形態によれば、本発明で使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、好ましくは、（ｉ）ＷＯ２００７／０５４８０９号、（ｉｉ）ＷＯ２００７／０７６３３６号、（ｉｉｉ）Ｔａｎ他、Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．（Ｌｏｎｄ）．８９：５６５〜７３、１９９５、（ｉｖ）Ｓｉｇｍａ（Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳ）、製品番号Ｃ７１１３（クローン＃４９０１）、（ｖ）Ｐｌｏｕｒｄｅ他、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１４：１２２５〜１２２９、１９９３のいずれかに一般にもしくは具体的に開示されている抗ＣＧＲＰ抗体、または、
（ａ）前記抗体の断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ、ＳｃＦｖなど）、
（ｂ）前記抗体の軽鎖、
（ｃ）前記抗体の重鎖、
（ｄ）前記抗体の軽鎖および／もしくは重鎖からの１つもしくは複数の可変領域、
（ｅ）前記抗体の１つもしくは複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５もしくは６個のＣＤＲ）、
（ｆ）前記抗体の重鎖からのＣＤＲ Ｈ３、
（ｇ）前記抗体の軽鎖からのＣＤＲ Ｌ３、
（ｈ）前記抗体の軽鎖からの３つのＣＤＲ、
（ｉ）前記抗体の重鎖からの３つのＣＤＲ、
（ｊ）前記抗体の軽鎖からの３つのＣＤＲおよび重鎖からの３つのＣＤＲ、
（ｋ）（ａ）〜（ｊ）のうちの任意の１つもしくは複数
を含む、もしくはそれからなるものである。

本発明の好ましい実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は抗体Ｇ２または抗体Ｇ１である。本発明の最も好ましい実施形態によれば、使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、特許出願ＷＯ２００７／０５４８０９号に具体的に開示されている抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１であるか、または、ＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体を含み、また、Ｇ１と機能的に等価な抗体、すなわち、その機能的特徴、たとえば、ＣＲＧＰの結合または拮抗活性に顕著な影響を与えない、アミノ酸残基の保存的置換またはアミノ酸の１つもしくは複数の欠失もしくは付加を含む抗体、ならびに活性および／または結合が増強または低下した変異体も含まれる。本明細書中で使用する用語「Ｇ１」および「抗体Ｇ１」とは、互換性があるように使用され、特許出願ＷＯ２００７／０５４８０９号に開示されている、受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６８６７およびＡＴＣＣ ＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生された抗体をいう。

本発明のさらなる実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、（ａ）抗体Ｇ１またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｂ）抗体Ｇ１の断片もしくは領域またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｃ）抗体Ｇ１の軽鎖またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｄ）抗体Ｇ１の重鎖またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｅ）抗体Ｇ１の軽鎖および／もしくは重鎖からの１つもしくは複数の可変領域またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｆ）抗体Ｇ１の１つもしくは複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５もしくは６個のＣＤＲ）またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｇ）抗体Ｇ１の重鎖からのＣＤＲ Ｈ３またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｈ）抗体Ｇ１の軽鎖からのＣＤＲ Ｌ３またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｉ）抗体Ｇ１の軽鎖からの３つのＣＤＲまたはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｊ）抗体Ｇ１の重鎖からの３つのＣＤＲまたはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、（ｋ）抗体Ｇ１の軽鎖からの３つのＣＤＲおよび／もしくは重鎖からの３つのＣＤＲまたはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体、ならびに（ｌ）（ｂ）〜（ｋ）のうちの任意の１つを含む抗体から選択されるポリペプチドを含む、またはそれからなる。また、本発明は、上記のうちの任意の１つまたは複数を含むポリペプチドも提供する。一部の実施形態では、少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲは、Ｇ１の少なくとも１、２、３、４、５もしくは６個のＣＤＲまたはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体と、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。

ＣＤＲ領域の決定は、十分に当業者の能力範囲内にある。一部の実施形態では、ＣＤＲは、カバットおよびコチアＣＤＲの組合せであることができることを理解されよう。一部の実施形態では、ＣＤＲはカバットＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲはコチアＣＤＲである。

抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、好ましくは、抗体Ｇ１の断片もしくは領域（たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ、ＳｃＦｖなど）またはＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるその変異体を含む、またはそれからなる。好ましくは、前記断片または領域は、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の機能的特徴、たとえば、ＣＧＲＰの結合活性および／または拮抗活性を有し、抗体Ｇ１の軽鎖および／もしくは重鎖からの１つもしくは複数の可変領域、または軽鎖および／もしくは重鎖からの１つもしくは複数のＣＤＲを含有する、軽鎖、重鎖、断片のうちの１つまたは複数を含む、またはそれからなる。

本発明のさらなる好ましい実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、特許出願ＷＯ２００７／０７６３３６号の、配列番号２８〜３２からなる群から選択される配列を有するペプチドを含む、軽鎖可変領域ＬＣＶＲおよび／または配列番号３４〜３８からなる群から選択される配列を有するペプチドを含む、重鎖可変領域ＨＣＶＲを含む。

さらに好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、特許出願ＷＯ２００７／０７６３３６号の表１に示される配列番号のＬＣＶＲポリペプチドを含み、特許出願ＷＯ２００７／０７６３３６号の表１に示される配列番号のＨＣＶＲポリペプチドをさらに含む。

本発明のさらなる実施形態によれば、使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、特許出願ＷＯ２００７／０７６３３６号の配列番号８〜１３からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ）および／または配列番号１４〜２２からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ）を含む。

特許出願ＷＯ２００７／０７６３３６号の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を作製および単離する方法、ならびにそのＣＧＲＰ結合および拮抗剤の特徴付けを実証するデータは、特許出願ＷＯ２００７／０７６３３６号に記載されている。

好ましくは、本発明で使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、アミノ酸配列が、本明細書中に提示する配列番号１または配列番号１９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるＶＨドメインを含む。

好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、アミノ酸配列が、本明細書中に提示する配列番号２または配列番号２０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるＶＬドメインを含む。

抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、好ましくは、アミノ酸配列が、本明細書中に提示する配列番号１および２または配列番号１９および２０と、それぞれ少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。

好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、アミノ酸配列が本明細書中に提示する配列番号１と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインおよびアミノ酸配列が配列番号２と少なくとも９０％同一であるＶＬドメインを含む。

あるいは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、好ましくは、アミノ酸配列が本明細書中に提示する配列番号１９と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインおよびアミノ酸配列が配列番号２０と少なくとも９０％同一であるＶＬドメインを含む。

抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、好ましくは、（ａ）配列番号３または２１に記載のＣＤＲ Ｈ１、（ｂ）配列番号４または２２に記載のＣＤＲ Ｈ２、（ｃ）配列番号５または２３に記載のＣＤＲ Ｈ３、（ｄ）配列番号６または２４に記載のＣＤＲ Ｌ１、（ｅ）配列番号７または２５に記載のＣＤＲ Ｌ２、（ｆ）配列番号８または２６に記載のＣＤＲ Ｌ３、ならびに（ｇ）ＷＯ２００７／０５４８０９号の表６に示されるＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２およびＣＤＲ Ｈ２の変異体からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。

本発明の好ましい実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥなどの任意の種類の定常領域、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４などの任意のアイソタイプからのものであり得る。

さらに好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７を有する発現ベクターによって産生された重鎖を含む。さらに好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生された軽鎖を含む。さらに好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７およびＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生される。

好ましくは、本発明で使用する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、本明細書中で定義する抗体Ｇ１または抗体Ｇ２である。

本発明のさらなる実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、たとえばＷＯ２００７／０５４８０９号に記載されている、修飾された定常領域を含む。好ましくは、修飾された定常領域は、補体媒介性の溶解を始動しない、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を刺激しない、ミクログリアを活性化しないように、部分的に免疫学的に不活性を含めて免疫学的に不活性である。好ましくは、修飾された定常領域は、これらの活性のうちの１つまたは複数が減少している。最も好ましくは、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３〜２６２４、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、および／またはＵＫ特許出願第９８０９９５１．８号に記載のように修飾されている。本発明の好ましい実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、Ａ３３０、Ｐ３３１からＳ３３０、Ｓ３３１（アミノ酸の番号付けは野生型ＩｇＧ２配列を参照）の突然変異を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）
２９：２６１３〜２６２４。

特許出願ＷＯ２００７／０５４８０９号の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を作製および単離する方法、ならびにそのＣＧＲＰ結合および拮抗剤の特徴付けを実証するデータは、特許出願ＷＯ２００７／０５４８０９号に記載されている。前記特許出願の配列番号１〜１４の配列は、本明細書中でそれぞれ配列番号１〜１４として提供する。

本発明のさらなる実施形態によれば、１週間に１〜７回、さらに好ましくは１カ月に１〜４回、さらに好ましくは６カ月の期間中に１〜６回、さらに好ましくは１年間に１〜１２回末梢投与するために医薬品を調製する。好ましくは、１日１回、２、３、４、５もしくは６日毎に１回、週１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、月１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または年１回から選択される期間で末梢投与するために医薬品を調製する。好ましい実施形態によれば、経口、舌下、頬側、外用、直腸、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内もしくは筋肉内、心臓内投与、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、経膣、硝子体内、皮膚上、関節内、関節周囲または局所のうちの１つまたは複数から選択される経路によって末梢投与するために医薬品を調製する。

本発明のさらなる実施形態によれば、０．１〜２００ｍｇ／ｍｌの抗体濃度、好ましくは、約０．１、または０．１から、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０もしくは２００ｍｇ／ｍｌのいずれか１つ＋／−１０％の誤差またはほぼその濃度、最も好ましくは５０ｍｇ／ｍｌで、末梢投与用に医薬品を調製する。

本発明のさらなる実施形態によれば、０．１〜２００ｍｇ／体重１ｋｇの抗体濃度、好ましくは、約０．１、または０．１から、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０もしくは２００ｍｇ／体重１ｋｇのいずれか１つ＋／−１０％の誤差またはほぼその濃度、最も好ましくは１０ｍｇ／ｋｇで、末梢投与用に医薬品を調製する。

本発明の好ましい実施形態によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８または２１０日間＋／−１日のいずれか１つより長い、さらに好ましくは、７、８、９、１０、１１、または１２カ月のいずれか１つより長いｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する。

好ましくは、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、６日間より長いｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する。

本発明のさらなる好ましい実施形態、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、中枢神経系および／または認知障害の効果を生じない。好ましくは、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、健忘症、錯乱、離人症、感覚鈍麻、異常思考、閉口障害、回転性眩暈、アカシジア、アパシー、運動失調、口囲錯感覚、ＣＮＳ刺激、情緒不安定、多幸症、幻覚、敵意、知覚過敏、多動、筋緊張低下、協調運動障害、性欲増加、躁病反応、筋クローヌス、神経痛、神経障害、精神病、癲癇発作、異常発語、昏迷、自殺念慮、眩暈、傾眠、不眠症、不安、振戦、鬱病または錯感覚のうちの任意の１つまたは複数を誘発しない。最も好ましくは、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、運動協調性または注意力の機能障害を誘発しない。

本発明のさらなる実施形態によれば、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、呼吸器、腎臓または胃腸管系の機能障害を生じない。

本発明のさらなる実施形態によれば、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、物理的および／または心理学的な依存性の効果を生じない。好ましくは、医薬品および／または抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、オピエート、ベンゾジアゼピン、フェンシクリジン（ＰＣＰ）、もしくはＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体、またはＣＮＳ刺激剤に対する親和性を実証せず、また、鎮静性または多幸性の効果もまったく生じない。

一実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、投与後に、中枢疼痛感覚の発生または進行を寛解させる、制御する、発生率を減少させる、または遅延させる。

別の実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の効果は、同じ慢性疼痛のモデルにおけるＮＳＡＩＤＳおよび／またはオピエートの効果と等価および／またはそれより優れている。一実施形態では、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、不応性の疼痛集団の治療に有用である。

本発明のさらなる態様によれば、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を、１つまたは複数のさらなる薬理学的に活性のある化合物または薬剤、好ましくは慢性疼痛の治療に有用な化合物または薬剤と組み合わせて、別々に、連続的にまたは同時に投与する、本発明の任意の他の態様による使用または方法を提供する。好ましくは追加の薬剤は、以下のうちの１つまたは複数から選択される：
（ｉ）オピオイド鎮痛剤、たとえば、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、レバロルファン、メサドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンまたはペンタゾシン、
（ｉｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、たとえば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンもしくはゾメピラック、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤、セレコキシブ、ロフェコキシブ、メロキシカム、ＪＴＥ−５２２、Ｌ−７４５，３３７、ＮＳ３９８、またはその薬学的に許容できる塩、
（ｉｉｉ）バルビツレート鎮痛剤、たとえば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタルビタール、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、タルブタール、チアミラールもしくはチオペンタールまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｉｖ）鎮痛作用を有するベンゾジアゼピン、たとえば、クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムもしくはトリアゾラムまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖ）鎮痛作用を有するＨ_１拮抗剤、たとえば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミンもしくはクロルシクリジンまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖｉ）鎮痛剤、たとえば、グルテチミド、メプロバメート、メタカロンもしくはジクロラルフェナゾンまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖｉｉ）骨格筋弛緩剤、たとえば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモールもしくはオルフレナジンまたはその薬学的に許容できる塩、
（ｖｉｉｉ）ＮＭＤＡ受容体拮抗剤、たとえば、デキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）もしくはその代謝物デキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキノンまたはシス−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸、またはその薬学的に許容できる塩、
（ｉｘ）α−アドレナリン作用剤、たとえば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジンまたは４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタンスルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリン、
（ｘ）三環系抗鬱剤、たとえば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン、
（ｘｉ）抗痙攣剤、たとえば、カルバマゼピンまたはバルプロエート、
（ｘｉｉ）タキキニン（ＮＫ）拮抗剤、特にＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１拮抗剤、たとえば、（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾシノ［２，１−ｇ］［１，７］ナフトリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン（ＭＫ−８６９）、ラネピタント、ダピタントまたは３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチルアミノ］−２−フェニル−ピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）、
（ｘｉｉｉ）ムスカリン拮抗剤、たとえば、オキシブチン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロスピウムまたはダリフェナシン、
（ｘｉｖ）ＣＯＸ−２阻害剤、たとえば、セレコキシブ、ロフェコキシブまたはバルデコキシブ、
（ｘｖ）非選択的ＣＯＸ阻害剤（好ましくはＧＩ保護を有するもの）、たとえばニトロフルルビプロフェン（ＨＣＴ−１０２６）、
（ｘｖｉ）コールタール鎮痛剤、特にパラセタモール、
（ｘｖｉｉ）神経遮断剤、たとえばドロペリドール、
（ｘｖｉｉｉ）バニロイド受容体作用剤（たとえばレシニフェラトキシン）または拮抗剤（たとえばカプサゼピン）、
（ｘｉｘ）β−アドレナリン作用剤、たとえばプロプラノロール、
（ｘｘ）局所麻酔剤、たとえばメキシレチン、
（ｘｘｉ）コルチコステロイド、たとえばデキサメタゾン、
（ｘｘｉｉ）セロトニン受容体作用剤または拮抗剤、
（ｘｘｉｉｉ）コリン作動性（ニコチン性）鎮痛剤、
（ｘｘｉｖ）Ｔｒａｍａｄｏｌ（商標）、
（ｘｘｖ）ＰＤＥＶ阻害剤、たとえば、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタダラフィル、
（ｘｘｖｉ）α−２−δリガンド、たとえば、ガバペンチンまたはプレガバリン、
（ｘｘｖｉｉ）カンナビノイド、ならびに
（ｘｘｖｉｉｉ）抗鬱剤、たとえば、アミトリプチリン（Ｅｌａｖｉｌ）、トラゾドン（Ｄｅｓｙｒｅｌ）、およびイミプラミン（Ｔｏｆｒａｎｉｌ）または抗痙攣剤、たとえば、フェニトイン（Ｄｉｌａｎｔｉｎ）もしくはカルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ）。

本発明のさらなる態様によれば、個体において、慢性疼痛および／もしくは慢性疼痛の症状を予防および／もしくは治療する、または慢性疼痛および／もしくは慢性疼痛の症状の発生もしくは進行を寛解させる、制御する、発生率を減少させる、もしくは遅延させるための医薬組成物であって、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体と薬学的に許容できる担体および／または賦形剤とを含み、末梢投与するために調製される医薬組成物を提供する。

本発明のさらなる態様によれば、
（ａ）上記定義した医薬組成物と、
（ｂ）慢性疼痛および／もしくは慢性疼痛の症状を予防および／もしくは治療する、または慢性疼痛および／もしくは慢性疼痛の症状の発生もしくは進行を寛解させる、制御する、発生率を減少させる、もしくは遅延させるために、有効量の前記医薬組成物を個体に末梢投与するための指示書と
を含むキットを提供する。

キットには、本明細書中に記載の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体またはポリペプチドと、本発明の方法および使用のいずれかに従った使用説明書とを含有する、１つまたは複数の容器が含まれ得る。キットは、個体が慢性疼痛を患っているまたは慢性疼痛を患う危険性にあるかどうかを同定することに基づいて、治療に適した個体を選択する説明をさらに含み得る。
医薬組成物を末梢投与するための指示書には、意図する治療の用量、投薬スケジュールおよび投与経路に関する情報が含まれ得る。

本発明のそれぞれの態様の好ましい特長は、必要な変更を加えてそれぞれの他の態様に同等に当てはまる。

以下、本発明を、例示的であるが本発明を制限することを意図しない、以下の実施例を参照して記載する。

以下の実施例および図は、抗体Ｇ１、抗ヒトＣＧＲＰヒトモノクローナル抗体および抗体Ｇ２、抗ラットＣＧＲＰマウスモノクローナル抗体に関して行う（Ｗｏｎｇ ＨＣ他、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１２：９３〜１０６（１９９３））。

（実施例１）
げっ歯類の癌の機械的疼痛モデルの設定
使用した腫瘍細胞は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ロンドン）から寄付された同系のＭＲＭＴ−１ラット乳腺癌細胞である。細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、１％のＬ−グルタミン、２％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含むＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。０．１％ｗ／ｖのトリプシンを用いた手短な洗浄を２回実施してフラスコに接着した細胞を遊離させ、その後、同体積の１０％のＦＣＳで中和し、続いて、溶液を３分間、１２００ｒｐｍで遠心分離した。ペレットを洗浄し、ハンクス培地中に再懸濁させ、血球計算器を使用して、死滅したＭＲＭＴ−１細胞の数を決定するためにトリパンブルー染色を用いて細胞の濃度を計算した。その後、観察された細胞の数に従って溶液を希釈することによって、最終濃度３×１０^３個の細胞を得た。最終溶液は注射時まで氷上に保った。

手術時に１７０ｇに近い体重の雄のスプラーグ−ドーリーラットを用いて癌モデルを作製した。ハロタンまたはイソフルラン（１．５〜２％）、６６％のＮ_２Ｏおよび３３％のＯ_２を用いてラットで麻酔を誘発し、肢を適切な領域にわたって剃毛し、クロルヘキシジン（Ａｎｉｍａｌｃａｒｅ Ｌｔｄ，ＵＫ）で消毒した。脛骨の遠位末端の前内側表面を露出させるために小さな切開を行った。０．７ｍｍの歯科用ドリルを用いて骨膜に穴を開け、これを通して、２ｃｍのポリシーンチューブを脛骨の髄質内腔の中に１ｃｍ入れた。
ハミルトンシリンジを使用して、事前に調製した１０μｌの３×１０^３個のＭＲＭＴ−１細胞を、チューブを通して腔内に注入した。その後、チューブを取り外し、骨修復材（ＩＲＭ、米国Ｄｅｎｔｓｐｌｙ）を用いて穴を塞いだ。その後、創傷を０．９％の生理食塩水で灌注し、金属クリップで閉じた。Ｓａｈｍ動物を同じ手順で手術したが、１０μｌのハンクス液を単独で注入した。動物は、収容ケージに戻すことができるときまで温度調節された回復ボックスに入れた。

（実施例２）
癌性疼痛モデルにおけるげっ歯類抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ２の評価
機械的刺激に対する挙動の試験では、同側および対側の後足の両方の足底表面にフォンフレイフィラメント（Ｎｏｒｔｈ Ｃｏａｓｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｃ．、米国）を使用する。ラットをメッシュの床を備えたＰｅｒｓｐｅｘキュービクルに入れ、１０分間順化させた。それぞれのフォンフレイは、それぞれの後足に１０回ずつ、同側および対側に交互に、各回２〜３秒間ずつ施用した。使用したフォンフレイフィラメントは１、５、９および１５ｇの屈曲力を有し、上昇するフォンフレイ力の間には５分間の期間をおいた。
侵害防御機構応答（持ち上げ）は、後足を活発に退かせることによって定義され、それぞれのフォンフレイでそれぞれの足を持ち上げる回数を記録し（最大１０回）、応答の割合として表した。

広範な静的、機械的、冷却性、および統合された刺激に対する過感受性を減弱化させるげっ歯類抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ２の有効性の評価、およびこの妥当性確認された癌誘発骨痛モデルにおけるバックグラウンドの基底疼痛挙動を実施した。測定された応答は、モルヒネおよびガバペンチンなどの標準の鎮痛治療によって減弱化される。すべての測定は同じ科学者によってブラインド様式で行った（化合物／対照が何であるかおよび動物の治療に関してブラインド）。

Ｇ２を９日目に静脈内で１０ｍｇ／ｋｇ与え、ラットを２時間後、その後、１０、１１、１２日目、その後、治療の１４〜１８日後に試験した（図１）。

Ｇ２は、より高い強度の機械的刺激に対する挙動応答に顕著な効果を有していた。フォンフレイ８ｇに対する退く頻度は注射の２時間後に減少し、１１および１２日目にビヒクルで治療した群で見られたよりも有意に減少していた（注射後の２および３日目、ｐ＝それぞれ０．０１６４および０．０３１１）。実際、Ｇ２で治療した動物は、ここではベースライン値に近い疼痛スコアを有していた。１４日目には（Ｇ２注射後の５日目）には、Ｇ２とビヒクルで治療した群との間で識別可能な差異がなかった。どちらの群も、ＭＲＭＴ−１注射後の１８日目（治療後の９日目）までにはフォンフレイ８ｇに対して同様のレベルの過感受性に達していた。

フォンフレイ１５ｇに対する過感受性の、同様の逆転も明らかであった。ビヒクルで治療した群におけるフォンフレイ１５ｇに対する過感受性の減少は注射後２時間で明らかであり、薬物投与の２および３日後に有意性が見られた（ｐ＝それぞれ０．０２および０．０３）。この減少は、Ｇ２を投与した６日後に失われ、ここで、どちらの群もＭＲＭＴ−１注射の１８日後までに同様の最大の退く頻度に達した（図２）。

結果は、Ｇ２が転移性骨癌ラットモデルで経験される侵害性の疼痛を減少させることを示している。

（実施例３）
運動機能障害のロータロッド試験
骨癌性疼痛モデルで試験したさらなる終点は異所運動であった（ロータロッドによる）。この試験では、同じ条件下で同じ試験に供した抗体で治療した動物と対照動物とを比較する、歩行運動機能障害の測度を得る。ロータロッド試験は、フランジによって分けられた４つの回転するドラムからなり、モーター駆動のドラムを加速させる（Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ、Ｃｏｍｅｒｉｏ、イタリアＶＡ）。所定の試験では、ラットを回転しているロッド上に乗せ、回転速度を２分間で４から１６ｒｐｍ加速させる。最大性能の時間は、典型的には１２０秒間に設定される。それぞれの動物は、一般に、１日３回の試験を１時間間隔で、手術後の連続した数日間受ける。ロッドから落ちる潜時は、３回の試験の平均として表す。強制異所運動中のロータロッドから落ちる潜時は、抗体Ｇ２群とビヒクル群との間では差異が見られなかった（図３）。これは、Ｇ２は運動協調性または注意力に関与する経路を損なわないことを示唆しており、抗体によって生じるＣＮＳ副作用の欠如を示している。

（実施例４）
結合アッセイ
結合アッセイは、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞におけるヒトα−ＣＧＲＰとＣＧＲＰ１−受容体との結合の遮断における、抗ＣＧＲＰ抗体Ｇ１およびＧ２のＩＣ_５０を測定するために行った。用量応答曲線をプロットし、方程式：Ｋ_ｉ＝ＩＣ_５０／（１＋（［リガンド］／Ｋ_Ｄ）を使用してＫ_ｉ値を決定した。図４では、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞中に存在するヒトα−ＣＧＲＰとＣＧＲＰ１−受容体との平衡解離定数Ｋ_Ｄ＝0.37nＭである。報告されたＩＣ_５０値（ＩｇＧ分子に関して）を結合部位に対して変換し、その結果、反応表面を提供する、低レベル（典型的には１００応答単位）で個々のフローセルに捕捉させたＮ−ビオチン標識ヒトおよびラットα−ＣＧＲＰ、一方で参照チャネルとして使用する未改変のフローセルを用いて、Ｂｉａｃｏｒｅによって決定した親和性（Ｋ_Ｄ）とその値を比較することができた。Ｇ１をチップ表面で滴定した。結合親和性は運動速度定数の商から推論した（Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）。表１を参照。

ヒトαおよびβＣＧＲＰに対するＧ１の結合親和性は等価であった（Ｋｄ＝それぞれ０．１５５および０．１５２ｎＭ）。ラットαおよびβＣＧＲＰに対するＧ２の結合親和性は等価であった（それぞれ１６および１７ｎＭ）。さらに、Ｇ１の結合親和性は、α−ＣＧＲＰに対してヒトにおいてラットよりも４０倍強力であり（Ｋｄ＝それぞれ０．０４２および１．２２ｎＭ）、β−ＣＧＲＰに対してヒトおよびラットで同等に強力であった（Ｋｄ＝それぞれ０．１５５および０．１５２ｎＭ）。また、抗体Ｇ１は、良好な種間の選択性を実証し、抗体Ｇ２と同じ親和性でラットα−ＣＧＲＰと結合する（約１．２ｎＭ）。表２。

Ｇ１は、ヒトおよびカニクイザルのα−およびβ−ＣＧＲＰと高い親和性で結合する（Ｋ_Ｄ＝それぞれ６３および１５５ｐＭ）。Ｇ１は、ヒト／カニクイザルのＣＧＲＰに対して種の選択性を示し、他の種、たとえばラットからのα−およびβ−ＣＧＲＰとはより低い親和性で結合する（Ｋ_Ｄ＝それぞれ２．５７ｎＭおよび１５２ｐＭ）。

（実施例５）
抗ＣＧＲＰのｉｎ ｖｉｖｏ半減期
ラットにおける抗ＣＧＲＰの血清測定である図５は、７日間の階層で半減期を示す。抗体は約１５０，０００の分子量を有しており末梢に限定される（図５ａ、５ｂ）、すなわち、これは中枢神経系内へとわたらず、または血液脳関門を越えない。

（実施例６）
抗ＣＧＲＰ抗体の選択性
本発明者らは、Ｂｉａｃｏｒｅチップを用いて事前に混合したｍＡｂ＋ペプチドの複合体の遊離濃度を「プローブ」することによって、ヒトまたはラットのＣＧＲＰに対する抗体Ｇ１の特異性を決定した。予想通り、抗体Ｇ１とヒトまたはラットのＣＧＲＰともにプレインキュベーションした場合は、応答が完全に遮断された。対照的に、Ｇ１を過剰のアミリン、カルシトニンまたはアドレノメデュリンとプレインキュベートした場合は対照応答（Ｇ１＋緩衝液）に匹敵し、これは、Ｇ１がこれらのペプチドと複合体を形成しなかったことを実証している（図７）。

（実施例７）
抗体Ｇ１結合エピトープの同定
相互作用分析は、２５℃、ストレプトアビジンでコーティングした（ＳＡ）センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、スウェーデンＵｐｐｓａｌａ）を備えたＢｉａｃｏｒｅ３０００（商標）システムで、標準のＢｉａｃｏｒｅランニング緩衝液（ＨＢＳ−Ｐ）を用いて実施した。最初に、Ｎ−ビオチン標識した２５〜３７のヒトα−ＣＧＲＰ断片が、完全長のＮ−ビオチン標識したヒトα−ＣＧＲＰと同じ親和性で抗体Ｇ１と結合したことを確認した。その後、位置２７〜３７の間のそれぞれのアミノ酸を個々にアラニンへと突然変異させ、野生型断片と比較した親和性の損失の倍数を表した。Ｎ−ビオチン標識した断片を低レベル（典型的には１００応答単位）で個々のフローセル上に捕捉させて反応表面を提供した一方で、未改変のフローセルは参照チャネルとして役割を果たした。抗体Ｇ１の精製したＦａｂ断片を作製した。２倍希釈系列の１μＭを最高濃度として用いて、Ｆａｂ断片をチップで滴定した。会合および解離の相を１００μｌ／分でそれぞれ１分間および５分間監視した。表面は、３５％のエタノール＋２５ｍＭのＮａＯＨ＋０．５ＭのＮａＣｌの混合物で再生した。

アラニンスキャンの結果は、抗体Ｇ１が、ヒトα−ＣＧＲＰのＣ末端領域、特に残基２５〜３７と結合することを示し、また、ある領域と特異的結合することを示し（すなわち、特異的結合領域を突然変異させた場合に親和性の損失が顕著に増加する）、これはエピトープと定義することができ、最後の５個のＣ末端アミノ酸内、すなわちＧ３３Ａ〜Ｆ３７Ａにある。親和性の最も著名な変化は、Ｇ３３ＡおよびＦ３７Ａの突然変異によって生じる（図６）。Ｃ末端のＰｈｅは、関連ペプチドおよび遺伝子ファミリーメンバーに対する、ＣＧＲＰに対する抗体Ｇ１の選択性に重要である（図８）。

したがって、一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰのアミノ酸Ｇ３３〜Ｆ３７によって定義されるエピトープと特異的に結合する抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を提供する。抗ＣＧＲＰ拮抗抗体は、アミノ酸配列ＧＳＫＡＦによって定義されるエピトープ、より詳細には、Ｘが任意のアミノ酸であることができるＧＸＸＸＦとして定義されるＣＧＲＰのエピトープと特異的に結合する場合があり、Ｇ３３およびＦ３７が、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の高親和性結合を定義するために最も重要なエピトープの残基である。

（実施例８）
物理的または心理学的な依存性の指標の分析
抗体Ｇ１または抗体Ｇ２はどちらもＣＮＳ侵入を実証しない。さらに、どちらかの抗体を以前の実施例で使用したレベルで投薬した動物（ラット）の長期観察では、対照動物と比較して鎮静または刺激／多幸性の挙動などの有害なＣＮＳ事象が現れなかった。これらの観察は、抗体の依存性の危険性が存在せず、したがって、現在の疼痛治療で使用されている現在のオピエートを超える、抗体の顕著に改善された安全性が存在することを示している。

（実施例９）
胃腸管系有害作用の指標の分析
抗体Ｇ２を用いた１カ月間のｉｎ ｖｉｖｏラット研究および抗体Ｇ１を用いた１週間の比較研究により、対照動物と比較して、挙動、食物摂取、糞便生産または組織病理学について有害な胃腸管系の効果が観察されなかったことが実証された。これらの観察は、抗体の胃腸管系の危険性が存在せず、したがって、現在の疼痛治療で使用されている現在のＮＳＡＩＤを超える、抗体の顕著に改善された安全性が存在することを示している。

（実施例１０）
抗ＣＧＲＰ拮抗抗体としてのＧ１およびＧ２
ＣＧＲＰの生物活性の既知の結果は、ｉｎ ｖｉｖｏで送達した場合の神経因性紅斑の発生である。Ｇ１およびＧ２は、ｉｎ ｖｉｖｏで神経因性紅斑の発生を防止するという点で抗ＣＧＲＰ拮抗抗体であることが実証されている。

神経因性皮膚紅斑ラットモデルを用いて、Ｇ１の有効性を、ＣＧＲＰ効果をｉｎ ｖｉｖｏで遮断するその能力について試験した。ラット内の伏在神経を電気刺激し、神経末端からのＣＧＲＰ放出を引き起こして血管拡張をもたらし、生じる血流の変化は、レーザードップラー（Ｄｏｐｌｅｒ）方法を用いて測定することができる。

血流パラメータの変化は、曲線下面積（ＡＵＣ、任意のドップラーフラックス単位の変化を時間に乗算したもの）として表した。ＣＧＲＰ受容体拮抗剤ＣＧＲＰ_８〜３７（４００ｎｍｏｌ／ｋｇ、静脈内）を、モデルの特異性を確証するための陽性対照として用いた（データ示さず）。それぞれの動物について投薬前のＧ１の効果を決定するために、刺激に対するベースラインの血流応答を、それぞれ３０分間隔の２回の伏在神経の刺激を用いて確立した。２回目の刺激の血流応答がベースラインレベルまで戻った後に（刺激の約１０分後）ラットをＧ１で治療し、３０分間隔でさらに４回の刺激を行った。

結果（図９）により、ビヒクルで治療した動物では、血流応答の顕著な変化は実証されなかったが、Ｇ１で治療したラットでは、投薬の９０および１２０分後から開始して、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで血流応答の顕著な低下が示された。同様の活性がG２を用いて達成された。さらに、さらなる神経因性紅斑および血管拡張のモデルの試験では、Ｇ１が静脈内投薬の７日後に顕著な効果を示した（伏在神経刺激モデルにおける予測ＥＤ_５０＝６ｕｇ／ｍｌ）。行った試験からの結論は、Ｇ１およびＧ２が抗ＣＧＲＰ拮抗活性を実証することである。抗体の同様のＣＧＲＰ機能の遮断能力は、Ｚｅｌｌｅｒ Ｊ他、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００８年１２月、１５５（７）：１０９３〜１０３、Ｅｐｕｂ ２００８年９月８日の出版物にも示されている。

以下に、本発明の実施に有用な抗体配列を示す。

抗体配列
抗体Ｇ１重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）

抗体Ｇ１軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）

抗体Ｇ１ ＣＤＲ Ｈ１（伸長されたＣＤＲ）（配列番号３）
ＧＦＴＦＳＮＹＷＩＳ

抗体Ｇ１ ＣＤＲ Ｈ２（伸長されたＣＤＲ）（配列番号４）
ＥＩＲＳＥＳＤＡＳＡＴＨＹＡＥＡＶＫＧ

抗体Ｇ１ ＣＤＲ Ｈ３（配列番号５）
ＹＦＤＹＧＬＡＩＱＮＹ

抗体Ｇ１ ＣＤＲ Ｌ１（配列番号６）
ＫＡＳＫＲＶＴＴＹＶＳ

抗体Ｇ１ ＣＤＲ Ｌ２（配列番号７）
ＧＡＳＮＲＹＬ

抗体Ｇ１ ＣＤＲ Ｌ３（配列番号８）
ＳＱＳＹＮＹＰＹＴ

抗体Ｇ１重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号９）

抗体Ｇ１軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号１０）

抗体Ｇ１重鎖完全抗体のアミノ酸配列（本明細書中に記載した修飾されたＩｇＧ２が含まれる）（配列番号１１）

抗体Ｇ１軽鎖完全抗体のアミノ酸配列（配列番号１２）

抗体Ｇ１重鎖完全抗体のヌクレオチド配列（本明細書中に記載した修飾されたＩｇＧ２が含まれる）（配列番号１３）

抗体Ｇ１軽鎖完全抗体のヌクレオチド配列（配列番号１４）

ヒトおよびラットのＣＧＲＰのアミノ酸配列比較（ヒトα−ＣＧＲＰ（配列番号１５）、ヒトβ−ＣＧＲＰ（配列番号１６）、ラットα−ＣＧＲＰ（配列番号１７）、およびラットβ−ＣＧＲＰ（配列番号１８））：

抗体Ｇ２重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１９）

抗体Ｇ２軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２０）

抗体Ｇ２ ＣＤＲ Ｈ１（伸長されたＣＤＲ）（配列番号２１）
ＳＳＶＭＨ

抗体Ｇ２ ＣＤＲ Ｈ２（伸長されたＣＤＲ）（配列番号２２）
ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ

抗体Ｇ２ ＣＤＲ Ｈ３（配列番号２３）
ＧＧＮＤＧＹ

抗体Ｇ２ ＣＤＲ Ｌ１（配列番号２４）
ＳＡＳＳＳＩＳＳＩＹＬＨ

抗体Ｇ２ ＣＤＲ Ｌ２（配列番号２５）
ＲＡＳＮＬＡＳ

抗体Ｇ２ ＣＤＲ Ｌ３（配列番号２６）
ＱＱＧＳＴＩＰＦＴ

抗体Ｇ２重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２７）

抗体Ｇ２軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２８）

抗体Ｇ２重鎖完全抗体のアミノ酸配列（Ｆｃドメインは含まれない）（配列番号２９）

抗体Ｇ２軽鎖完全抗体のアミノ酸配列（配列番号３０）

抗体Ｇ２重鎖完全抗体のヌクレオチド配列（Ｆｃドメインは含まれない）（配列番号３１）

抗体Ｇ２軽鎖完全抗体のヌクレオチド配列（配列番号３２）

Claims (33)

1. 慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を予防および／または治療する医薬品を製造するための、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体の使用。
2. 末梢投与するために医薬品を調製する、請求項１に記載の使用。
3. 医薬品を末梢投与する、請求項１に記載の使用。
4. 経口、舌下、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、関節内、関節周囲、局所および／または筋肉内に投与するために医薬品を調製する、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
5. 皮下または静脈内に投与するために医薬品を調製する、請求項４に記載の使用。
6. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、投与後に末梢に作用する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
7. 慢性疼痛が、慢性侵害受容性疼痛、慢性神経因性疼痛、慢性炎症性疼痛、線維筋痛症、突出痛および持続性疼痛のうちの１つまたは複数を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
8. 慢性疼痛が、痛覚過敏、アロディニア、中枢感作、末梢感作、脱抑制および促通増大のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項７に記載の使用。
9. 慢性疼痛が癌性疼痛である、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
10. 癌性疼痛が、以下の状態：腺組織における腺癌、臓器の胚性組織における芽細胞腫、上皮組織における癌腫、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合組織または支持組織における肉腫、副腎癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、結合組織の肉腫癌、骨組織癌、血液形成細胞癌、骨髄癌、多発性骨髄腫、白血病、原発性または続発性骨癌、骨に転移する腫瘍、神経および管腔臓器に浸潤する腫瘍、および神経構造付近の腫瘍のうちの１つまたは複数に起因する疼痛である、請求項９に記載の使用。
11. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、
    （ａ）ＣＧＲＰと結合し、
    （ｂ）ＣＧＲＰがその受容体と結合することを遮断し、
    （ｃ）ＣＧＲＰ受容体の活性化を遮断しもしくは低下させ、
    （ｄ）ＣＧＲＰの生物活性を阻害、遮断、抑制しもしくは減少させ、
    （ｅ）ＣＧＲＰのクリアランスを増加させ、かつ／または
    （ｇ）ＣＧＲＰの合成、産生もしくは放出を阻害する、
    前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
12. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、
    （ｉ）ヒト抗体であり、
    （ｉｉ）ヒト化抗体であり、
    （ｉｉｉ）モノクローナル抗体であり、
    （ｉｖ）５０ｎＭ以下のＫｄ（表面プラズモン共鳴によって３７℃で測定）でＣＧＲＰと結合し、かつ／または
    （ｖ）少なくとも７日間のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する、
    前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
13. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体がＣＧＲＰのＣ末端領域と特異的に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
14. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が配列ＧＳＫＡＦによって定義されるエピトープを特異的に認識する、請求項１２に記載の使用。
15. 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号１または１９と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
16. 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号２または２０と少なくとも９０％同一であるＶＬドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
17. 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号１または１９と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインをさらに含む、請求項１６に記載の使用。
18. 抗ＣＧＲＰ抗体が、
    （ａ）配列番号３または２１に記載のＣＤＲ Ｈ１、
    （ｂ）配列番号４または２２に記載のＣＤＲ Ｈ２、
    （ｃ）配列番号５または２３に記載のＣＤＲ Ｈ３、
    （ｄ）配列番号６または２４に記載のＣＤＲ Ｌ１、
    （ｅ）配列番号７または２５に記載のＣＤＲ Ｌ２、
    （ｆ）配列番号８または２６に記載のＣＤＲ Ｌ３、および
    （ｇ）Ｌ１、Ｌ２およびＨ２の変異体
    からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。
19. 抗ＣＧＲＰ抗体が、アミノ酸配列が配列番号１と少なくとも９０％同一であるＶＨドメインおよびアミノ酸配列が配列番号２と少なくとも９０％同一であるＶＬドメインを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。
20. 抗ＣＧＲＰ抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７を有する発現ベクターによって産生された重鎖を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。
21. 抗ＣＧＲＰ抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生された軽鎖を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。
22. 抗ＣＧＲＰ抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６８６７およびＰＴＡ−６８６６を有する発現ベクターによって産生される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。
23. １カ月に１、２、３または４回の皮下または静脈内の注射による末梢投与用に医薬品を調製する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
24. ５〜１００ｍｇ／ｍｌの抗体濃度で、末梢投与用に医薬品を調製する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
25. １〜１００ｍｇ／体重１ｋｇの抗体濃度で末梢投与用に医薬品を調製する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
26. 医薬品が運動協調性または注意力のＣＮＳ機能障害を生じない、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
27. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を中枢、脊髄またはくも膜下腔内に投与しない、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
28. 抗ＣＧＲＰ拮抗抗体が、中枢、脊髄またはくも膜下腔内侵入性の分子ではない、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
29. 抗ＣＧＲＰ抗体を、１つまたは複数のさらなる薬理学的に活性のある化合物と組み合わせて、別々に、連続的にまたは同時に投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の使用。
30. １つまたは複数のさらなる薬理学的に活性のある化合物が、
    （ｉ）オピオイド鎮痛剤、たとえば、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、レバロルファン、メサドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンまたはペンタゾシン、
    （ｉｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、たとえば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンもしくはゾメピラック、またはその薬学的に許容できる塩、
    （ｉｉｉ）バルビツレート鎮痛剤、たとえば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタルビタール、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、タルブタール、チアミラールもしくはチオペンタールまたはその薬学的に許容できる塩、
    （ｉｖ）鎮痛作用を有するベンゾジアゼピン、たとえば、クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムもしくはトリアゾラムまたはその薬学的に許容できる塩、
    （ｖ）鎮痛作用を有するＨ_１拮抗剤、たとえば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミンもしくはクロルシクリジンまたはその薬学的に許容できる塩、
    （ｖｉ）鎮痛剤、たとえば、グルテチミド、メプロバメート、メタカロンもしくはジクロラルフェナゾンまたはその薬学的に許容できる塩、
    （ｖｉｉ）骨格筋弛緩剤、たとえば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモールもしくはオルフレナジンまたはその薬学的に許容できる塩、
    （ｖｉｉｉ）ＮＭＤＡ受容体拮抗剤、たとえば、デキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）もしくはその代謝物デキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキノンまたはシス−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸、またはその薬学的に許容できる塩、
    （ｉｘ）α−アドレナリン作用剤、たとえば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジンまたは４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタンスルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリン、
    （ｘ）三環系抗鬱剤、たとえば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン、
    （ｘｉ）抗痙攣剤、たとえば、カルバマゼピンまたはバルプロエート、
    （ｘｉｉ）タキキニン（ＮＫ）拮抗剤、特にＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１拮抗剤、たとえば、（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾシノ［２，１−ｇ］［１，７］ナフトリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン（ＭＫ−８６９）、ラネピタント、ダピタントまたは３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチルアミノ］−２−フェニル−ピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）、
    （ｘｉｉｉ）ムスカリン拮抗剤、たとえば、オキシブチン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロスピウムまたはダリフェナシン、
    （ｘｉｖ）ＣＯＸ−２阻害剤、たとえば、セレコキシブ、ロフェコキシブまたはバルデコキシブ、
    （ｘｖ）非選択的ＣＯＸ阻害剤（好ましくはＧＩ保護を有するもの）、たとえばニトロフルルビプロフェン（ＨＣＴ−１０２６）、
    （ｘｖｉ）コールタール鎮痛剤、特にパラセタモール、
    （ｘｖｉｉ）神経遮断剤、たとえばドロペリドール、
    （ｘｖｉｉｉ）バニロイド受容体作用剤（たとえばレシニフェラトキシン）または拮抗剤（たとえばカプサゼピン）、
    （ｘｉｘ）β−アドレナリン作用剤、たとえばプロプラノロール、
    （ｘｘ）局所麻酔剤、たとえばメキシレチン、
    （ｘｘｉ）コルチコステロイド、たとえばデキサメタゾン、
    （ｘｘｉｉ）セロトニン受容体作用剤または拮抗剤、
    （ｘｘｉｉｉ）コリン作動性（ニコチン性）鎮痛剤、
    （ｘｘｉｖ）Ｔｒａｍａｄｏｌ（商標）、
    （ｘｘｖ）ＰＤＥＶ阻害剤、たとえば、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタダラフィル、
    （ｘｘｖｉ）α−２−δリガンド、たとえば、ガバペンチンまたはプレガバリン、および
    （ｘｘｖｉｉ）カンナビノイド
    から選択される、請求項２９に記載の使用。
31. 治療有効量の抗ＣＧＲＰ拮抗抗体を個体に末梢投与することを含む、個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防する方法。
32. 個体において慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防する医薬組成物であって、抗ＣＧＲＰ拮抗抗体と薬学的に許容できる担体とを含み、末梢投与するために調製される医薬組成物。
33. （ａ）請求項３２に記載の医薬組成物と、
    （ｂ）慢性疼痛および／または慢性疼痛の症状を治療および／または予防するために、治療有効量の前記医薬組成物を個体に末梢投与するための指示書と
    を含むキット。