JP2011182797A5 - - Google Patents

Claims (18)

1. ヘルパーウイルスの不存在下で感染性インフルエンザウイルスの作製方法であって、
   （ａ）ヘルパーウイルスの不存在下で、
   （ｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ１ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ２ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｉｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＨＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＰ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｖｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｖｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＭ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｖｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＳ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｉｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＡポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ１ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｘｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ２ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、および
   （ｘｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＮＰポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター
   を含んでなる複数のオルトミクソウイルスを含む組成物を宿主細胞に導入する工程、および
   （ｂ）該宿主細胞から感染性インフルエンザウイルスを単離する工程
   を含むことを特徴とする、方法。
2. 感染性インフルエンザウイルスを少なくとも１×１０³ｐｆｕ／ｍｌ生産する、請求項１記載の方法。
3. 該細胞に、さらに、
   （ｘｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＨＡポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター
   （ｘｉｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＰポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｘｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＭ１ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
   （ｘｖｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＭ２ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、および
   （ｘｖｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＳ２ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター
   を導入する工程を含む、請求項１または２記載の方法。
4. 感染性インフルエンザウイルスを少なくとも１×１０⁴ｐｆｕ／ｍｌ生産する、請求項３記載の方法。
5. プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター、Ｔ７プロモーターおよびＴ３プロモーターからなる群より選ばれるプロモーターである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
6. プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩプロモーターである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. プロモーターがヒトＲＮＡポリメラーゼＩプロモーターである、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
8. 転写終結配列がＲＮＡポリメラーゼＩ転写終結配列、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ転写終結配列、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ転写終結配列およびリボザイムからなる群より選ばれる転写終結配列である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
9. ２以上のベクターが物理的に連結されている、請求項１〜８にずれかに記載の方法。
10. １以上のベクターが別々のプラスミド上にある、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
11. 宿主細胞にベクターを導入する前に、さらに、インフルエンザＰＡ ｃＤＮＡ、インフルエンザＰＢ１ ｃＤＮＡ、インフルエンザＰＢ２ ｃＤＮＡ、インフルエンザＨＡ ｃＤＮＡ、インフルエンザＮＰ ｃＤＮＡ、インフルエンザＮＡ ｃＤＮＡ、インフルエンザＭ ｃＤＮＡまたはインフルエンザＮＳ ｃＤＮＡの１以上に少なくとも１の突然変異を導入する工程を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
12. 宿主細胞にベクターを導入する前に、さらに、インフルエンザＨＡ ｃＤＮＡに少なくとも１の突然変異を導入する工程を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
13. １以上のベクターが、さらに、インフルエンザウイルスの３’および５’非コーディング配列を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
14. ベクターが免疫原性ペプチドまたはワクチンとして有用なタンパク質をコードする、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
15. 宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
16. インフルエンザビリオンを含む組成物でトランスフェクトされた細胞からヘルパーウイルスの不存在下で調製される感染性組換えインフルエンザウイルス調製物であって、インフルエンザビリオンのウイルス性内部タンパク質が培養により成長するのに十分適応したインフルエンザウイルス株もしくは弱毒化インフルエンザウイルス株、または両者に由来し、かつ、該インフルエンザビリオンのウイルス性抗原タンパク質が病原性インフルエンザウイルス株に由来し、さらに、
    該インフルエンザウイルスが、
    （ｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ１ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ２ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＨＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＰ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＭ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＳ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＡポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ１ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｘｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ２ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、および
    （ｘｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＮＰポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター
    を含んでなり、
    宿主細胞において（ｉ）−（ｘｉｉ）のベクターの発現により該インフルエンザウイルスのゲノムｖＲＮＡを含む機能的なウイルス性リボヌクレオプロテイン（ＲＮＰ）が生成され、かつ、ヘルパーウイルスを含まない、システムにより生産される、ことを特徴とするインフルエンザウイルス調製物。
17. インフルエンザビリオンを含む組成物でトランスフェクトされた細胞からヘルパーウイルスの不存在下で調製される感染性組換えインフルエンザウイルス調製物であって、該インフルエンザビリオンが、
    （ｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ１ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ２ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＨＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＰ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＭ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＳ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＡポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ１ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｘｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ２ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、および
    （ｘｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＮＰポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター
    を含んでなり、
    宿主細胞において（ｉ）−（ｘｉｉ）のベクターの発現により該インフルエンザウイルスのゲノムｖＲＮＡを含む機能的なウイルス性リボヌクレオプロテイン（ＲＮＰ）が生成され、かつ、ヘルパーウイルスを含まず、（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）におけるプロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩプロモーターであり、転写終結配列がＲＮＡポリメラーゼＩ終結配列である、システムを有する宿主細胞から生産される、ことを特徴とするインフルエンザウイルス調製物。
18. インフルエンザビリオンを含むインフルエンザウイルス特異的組成物の調製方法であって、
    （ｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ１ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＰＢ２ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＨＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＰ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＡ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＭ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｖｉｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザウイルスＮＳ ｃＤＮＡと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｉｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＡポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｘ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ１ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、
    （ｘｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＰＢ２ポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター、および
    （ｘｉｉ）転写終結配列に連結したインフルエンザＮＰポリペプチドをコードするＤＮＡセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含むベクター
    を含んでなり、
    宿主細胞において（ｉ）−（ｘｉｉ）のベクターの発現により該インフルエンザウイルスのゲノムｖＲＮＡを含む機能的なウイルス性リボヌクレオプロテイン（ＲＮＰ）が生成される、インフルエンザウイルスを生成するためのシステムを、有する宿主細胞インフルエンザビリオンを精製する工程であって、
    該ベクターが宿主細胞中に導入され、
    該インフルエンザビリオンのウイルス内部タンパク質が、培養において増殖に十分に適応化されたインフルエンザウイルス株もしくは弱毒化されたインフルエンザウイルス株、または両方からのものであり、かつ、
    該インフルエンザビリオンのウイルス抗原タンパク質が病原性インフルエンザウイルス株からのものである、
    工程を含んでなり、かつ、
    該システムがヘルパーウイルスを含まない、調製方法。