JP2006524673A

JP2006524673A - ガンの処置のためのｈｓｐ９０阻害剤としてのピラゾール化合物

Info

Publication number: JP2006524673A
Application number: JP2006506168A
Authority: JP
Inventors: バリル−アロンソ，グザヴィエ; ディモック，ブライアン，ウィリアム; ドライスデール，マーティン，ジェームス
Original assignee: Institute of Cancer Research; Vernalis Cambridge Ltd; Cancer Research Technology Ltd
Current assignee: Institute of Cancer Research; Vernalis Cambridge Ltd; Cancer Research Technology Ltd
Priority date: 2003-04-28
Filing date: 2004-04-23
Publication date: 2006-11-02
Also published as: EP1620090A1; US7632855B2; WO2004096212A9; US20070072855A1; WO2004096212A1; GB0309637D0

Abstract

式(Ｉ)の化合物はHSP90活性の阻害剤であり、ガンのような増殖疾患の処置に有用である[式中、R₁、R₂及びR₃は本明細書中で定義されたとおりであり、Ｘは、-OR₄又は-NR₄R₅(ここで、R₄及びR₅は独立して、水素又は任意に置換していてもよいC₁〜C₆アルキルであるか、又はR₄及びR₅は、これらが付着している窒素と一緒になって、５〜８の環原子を有する任意に置換していてもよい窒素含有環を形成する)である]。

Description

本発明は、HSP90阻害活性を有する置換ピラゾール、過剰な又は不適切なHSP90活性によて媒介される疾患(例えば、ガン)に関連する医薬における該化合物の使用、及び該化合物を含有する医薬組成物に関する。

HSP90(熱ショックタンパク質90)は、ATP依存性の細胞内分子シャペロンである。腫瘍の発現型の駆動に決定的に重要である多くのシグナル伝達経路の調節への関与のため、及びある種の生物活性天然生成物がHSP90活性を介してその効果を発揮するとの発見のため、分子シャペロンHSP90は、現在、抗ガン薬開発のターゲットと見なされている。

発明の簡単な説明
本発明は、例えばガン細胞増殖の阻害のために、HSP90阻害剤としての置換ピラゾール化合物のクラスを使用することに関する。１つの環炭素原子上に芳香族置換を有し、別の環炭素原子上にアミド置換基の制限されたクラスを有する核ピラゾール環が、本発明に係る化合物の基本的な特性付ける特徴である。

発明の詳細な説明
本発明は、HSP90活性の阻害のための組成物の製造における、式(Ｉ)の化合物又はその塩、Ｎ-酸化物、水和物若しくは溶媒和物の使用を提供する：

［式中、
R₁は、式(IA)：
-Ar¹-(Alk¹)_p-(Z)_r-(Alk²)_s-Q (IA)
（ここで、任意の矛盾しない組合せで、
Ar¹は、任意に置換していてもよいアリール又はヘテロアリール基であり、
Alk¹及びAlk²は、任意に置換していてもよい二価のC₁〜C₆アルキレン又はC₂〜C₆アルケニレン基であり、
ｐ、ｒ及びｓは、独立して０又は１であり、
Ｚは、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-SO₂-、-C(=O)O-、-C(=O)NR^A-、-C(=S)NR^A-、-SO₂NR^A-、-NR^AC(=O)-、-NR^ASO₂-又は-NR^A-（ここで、R^Aは、水素又はC₁〜C₆アルキルである)であり、そして
Ｑは、水素又は任意に置換していてもよい炭素環式若しくは複素環式基である)
の基であり、

R₂ は、(ｉ) R₁に関して定義したとおりの式(IA)の基；
(ii) カルボキサミド基；又は
(iii) 非芳香族炭素環又は複素環(ここで、環炭素及び/又は環窒素は、式-(Alk¹)_p-(Z)_r-(Alk²)_s-Q (ここで、Ｑ、Alk¹、Alk²、Ｚ、ｐ、ｒ及びｓは、基(IA)に関して上記で定義したとおりである)の基により任意に置換されていてもよい)であり；そして

R₃は、水素、又はメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル(このいずれもがヒドロキシによって任意に置換していてもよい)であり；

Ｘは、-OR₄又は-NR₄R₅(ここで、R₄及びR₅は、独立して、水素又は任意に置換していてもよいC₁〜C₆アルキルであるか、又はR₄及びR₅は、これらが付着している窒素と一緒になって、５〜８の環原子を有する任意に置換していてもよい窒素含有環を形成する)である］。

式(Ｉ)に関して上記で定義した化合物のクラスは概して新規であり、本発明は、このクラス並びにそれらの塩、水和物及び溶媒和物の新規なメンバーを全て含む。

上記の構造(Ｉ)は、当然のことながら、構造(Ｉ¹)と互変性であり、本明細書においては、一方の互変体への何らかの言及は、他方の互変体を包含する：

本明細書中で用いられているように、
用語「カルボキシ基」は式 -COOHの基をいい；
用語「カルボキシエステル基」は、式 -COOR (ここで、Ｒは、ヒドロキシ化合物ROHに現実に又は概念的に由来する基である)の基をいい；そして
用語「カルボキサミド基」は、式-CONR_aR_b (ここで、-NR_aR_bは、アンモニア又はアミンHNR_aR_bに現実に又は概念的に由来する第１級又は第２級(環式を含む)アミノ基である)の基をいう。

本明細書中で用いられているように、用語「(C₁〜C₆)アルキル」は、１〜６の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖のアルキル基をいい、例えば、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、ｔ-ブチル、ｎ-ペンチル及びｎ-ヘキシルを含む。

本明細書中で用いられているように、用語「二価の(C₁〜C₆)アルキレン基」は、１〜６の炭素原子及び２つの満たされていない結合価を有する飽和炭化水素鎖を意味する。

本明細書中で用いられているように、用語「(C₁〜C₆)アルケニル」は、２〜６の炭素原子を有し、少なくとも１つのＥ又はＺ配置の二重結合を含有する直鎖又は分枝鎖のアルケニル基をいい、例えばエテニル及びアリルを含む。

本明細書中で用いられているように、用語「二価の(C₂〜C₆)アルケニレン基」は、２〜６の炭素原子、少なくとも１つの二重結合及び２つの満たされていない結合価を有する炭化水素鎖を意味する。

本明細書中で用いられているように、用語「(C₁〜C₆)アルキニル」は、２〜６の炭素原子を有し、少なくとも１つの三重結合を含有する直鎖又は分枝鎖のアルケニル基をいい、例えば、エチニル及び２-プロピニル(prop-2-ynyl)を含む。

本明細書中で用いられているように、用語「シクロアルキル」は、３〜８の炭素原子を有する飽和炭素環式基をいい、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含む。

本明細書中で用いられているように、用語「シクロアルケニル」は、３〜８の炭素原子を有し、少なくとも１つの二重結合を含有する炭素環式基をいい、例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル及びシクロオクテニルを含む。

本明細書中で用いられているように、用語「アリール」は、単環、二環又は三環の炭素環式芳香族基をいう。このような基の例示は、フェニル、ビフェニル及びナフチルである。

本明細書中で用いられているように、用語「炭素環式」は、その環原子が全て炭素である環式基をいい、単環式アリール、シクロアルキル及びシクロアルケニル基を含む。

本明細書中で用いられているように、用語「ヘテロアリール」は、Ｓ、Ｎ及びＯから選択される１又はそれ以上のヘテロ原子を含有する単環式、二環式又は三環式の芳香族基をいう。このような基の例示は、チエニル、ベンズチエニル、フリル、ベンズフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンズチアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンズオキサゾリル、イソキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンズトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリル及びインダゾリルである。

本明細書中で用いられているように、制限のない用語「ヘテロサイクリル」又は「複素環式」は、上記で定義したような「ヘテロアリール」を含み、特に、Ｓ、Ｎ及びＯから選択される１又はそれ以上のヘテロ原子を含有する単環式、二環式又は三環式の非芳香族基を意味し、別のこのような基又は単環炭素環式基に共有結合している１又はそれ以上の前記ヘテロ原子を含有する単環式非芳香族基からなる基をもいう。このような基の例示は、ピロリル、フラニル、チエニル、ピペリジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピリミジニル、モルホリニル、ピペラジニル、インドリル、モルホリニル、ベンズフラニル、ピラニル、イソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、マレイミド及びスクシンイミド基である。

この用語が存在する文脈で特に明記されていない限り、本明細書中のいずれの部分でも適用されているように、用語「置換(された)」は、例えば、(C₁〜C₆)アルキル、(C₁〜C₆)アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ(C₁〜C₆)アルキル、メルカプト、メルカプト(C₁〜C₆)アルキル、(C₁〜C₆)アルキルチオ、ハロ(フルオロ及びクロロを含む)、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル(-CN)、オキソ、フェニル、-COOH、-COOR^A、-COR^A、-SO₂R^A、-CONH₂、-SO₂NH₂、-CONHR^A、-SO₂NHR^A、-CONR^AR^B、-SO₂NR^AR^B、-NH₂、-NHR^A、-NR^AR^B、-OCONH₂、-OCONHR^A、-OCONR^AR^B、-NHCOR^A、-NHCOOR^A、-NR^BCOOR^A、-NHSO₂OR^A、-NR^BSO₂OR^A、-NHCONH₂、-NR^ACONH₂、-NHCONHR^B、-NR^ACONHR^B、-NHCONR^AR^B又は-NR^ACONR^AR^B (ここで、R^A及びR^Bは、独立して、(C₁〜C₆)アルキル基である)から選択される少なくとも１つの置換基で置換されていることを意味する。用語「任意の置換基」は、前記の置換基の１つをいう。

本明細書中で用いられているように、用語「塩」は、塩基付加塩、酸付加塩及び第４級塩を含む。酸性である本発明の化合物は、水酸化アルカリ金属(例えば水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム)；水酸化アルカリ土類金属(例えば水酸化カルシウム、水酸化バリウム及び水酸化マグネシウム)のような塩基；有機塩基(例えばＮ-エチルピペリジン、ジベンジルアミンなど)と塩(医薬的に又は動物医薬的に許容される塩を含む)を形成できる。塩基性である化合物(Ｉ)は、無機酸(例えば、塩酸若しくは臭化水素酸のようなハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸又はリン酸など)と、そして有機酸(例えば、酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸及びｐ-トルエンスルホン酸など)と塩(医薬的又は動物医薬的に許容される塩を含む)を形成できる。

本発明のいくつかの化合物は、不斉炭素原子の存在により、１又はそれ以上の現実の又は潜在的なキラル中心を含有する。いくつかの不斉炭素原子の存在により、各キラル中心でＲ又はＳ立体配置を有する多くのジアステレオ異性体が生じる。本発明は、このようなジアステレオ異性体及びこれらの混合物を全て含む。

R₁基
本発明の１つの実施形態では、R₁は、式(IB)：

[式中、R₆は、クロロ、ブロモ、C₁〜C₆アルキル又はシアノである]を有する。

別の実施形態では、R₁は、式(IC)：

[式中、Alk¹、Alk²、ｐ、ｒ、ｓ、Ｚ及びＱは、式(IA)に関して請求項１で定義したとおりであり、Ｒは、１又はそれ以上の任意の置換基を表す]を有する。この場合、Ｒは、フェニル環の４位で-OHであり、置換基-(Alk¹)_p-(Z)_r-(Alk²)_s-Qは、フェニル環の５位にあることが、現在のところ好ましい。(IC)型の構造の１つのクラスでは、ｒは０であり、Ｑは水素又は任意に置換されていてもよいフェニルであり、これらの場合において、ｓは０であり得、ｐは１であり得、Alk¹は、未置換で二価のC₁〜C₆アルキレン又はC₂〜C₆アルケニレン基(例えば、-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-又は-CH=CH-)であり得る。(IC)型の構造の別のクラスでは、ｐ、ｒ及びｓは各々０であり得、Ｑは任意に置換されていてもよいフェニルであり得る。

R₂基
R₂が(ｉ)タイプ、すなわち式(IA)の基である場合、例として、フェニル、２-、３-若しくは４-ピリジル、２-若しくは３-フラニル、２-若しくは３-チエニル及びチアゾリル(ここで、任意の置換基には、「置換」の定義において上記で列挙した置換基のいずれか、例えばメトキシ、エトキシ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びトリフルオロメチルが含まれる)が挙げられる。R₂が４位でC₁〜C₆アルコキシ(例えばメトキシ又はエトキシ)、フルオロ、クロロ、ブロモ、モルホリノメチル、ピペラジノ、Ｎ-メチルピペラジノ又はピペリジノによって置換されているフェニルである化合物が、現在のところ好ましい。また、R₂が任意に置換されていてもよいC₁〜C₆アルキル(例えば、任意に置換されていてもよいメチル、エチル、ｎ-プロピル又はイソ-プロピル)により４位で置換されているフェニルである化合物も好ましい。加えて、R₂が任意に置換されていてもよいモルホリノC₁〜C₆アルキル-、チオモルホリノC_1-6アルキル-、ピペラジノC_1-6アルキル-、メチルピペラジノC_1-6アルキル-又はジエチルアミノにより４位で置換されているフェニルである化合物が好ましい。さらに、R₂が-NH₂、-NHR^A、-NR^AR^B、-NHCOR^A、-NHCOOR^A、-NR^BCOOR^A、-NHSO₂OR^A、-NR^BSO₂OR^A、-NHCONH₂、-NR^ACONH₂、-NHCONHR^B、-NR^ACONHR^B、-NHCONR^AR^B又は-NR^ACONR^AR^B(ここで、R^A及びR^Bは独立して、(C₁〜C₆)アルキル基である)により４位で置換されているフェニルである化合物が好ましい。なおさらに、R₂が任意に置換されていてもよいピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ又はチオモルホリノにより４位で置換されているフェニルである化合物が好ましい。

R₂が上記(ii)タイプのカルボキサミド基であるとき、例として、式-CONR^B(Alk)_nR^Aが挙げられる(ここで、

Alkは、二価のアルキレン、アルケニレン又はアルキニレン基、例えば-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH=CH-又は-CH₂CCCH₂-基であり、Alk基は任意に置換されていてもよく、
ｎは０又は１であり、
R^Bは、水素又はC₁〜C₆アルキル又はC₂〜C₆アルケニル基、例えばメチル、エチル、ｎ-若しくはイソ-プロピル又はアリルであり、
R^Aは、ヒドロキシ、又は任意に置換されていてもよい炭素環、例えばヒドロキシ及び/又はクロロ-置換フェニル及び3,4メチレンジオキシフェニル；又はへテロサイクリル、例えばピリジル、フリル、チエニル、Ｎ-ピペラジニル又はＮ-モルホリニルであり、これらの複素環のいずれも置換されていてもよく、

或いは、R^A及びR^Bは、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｏ、Ｓ及びＮから選択される１又はそれ以上の追加のヘテロ原子を任意に含有していてもよく且つ１又はそれ以上の環Ｃ又はＮ原子上で任意に置換されていてもよいＮ-複素環を形成する(このようなＮ-複素環の例としては、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニル及びＮ-フェニルピペラジニルが挙げられる))。

R₃基
R₃は水素又はメチルであることが現在のところ好ましい。また、R₃が水素以外であるとき、これが結合している炭素中心での立体化学配置は、Ｄアミノ酸のものであることが好ましい。

Ｘ基
本発明に係る化合物の１つの好ましいクラスにおいて、Ｘは、-OR₄又は-NHR₄である(ここで、R₄は、任意にヒドロキシで置換されていてもよいC₁〜C₆アルキル、又は第１級、第２級、第３級若しくは環式のアミノ基(例えばモルホリノ、ピペリジニル又はピペラジニル基)であり、後者は第２の窒素上で任意にC₁〜C₆アルキルにより置換されていてもよい)。

別の好ましいクラスでは、Ｘは、-NR₄R₅である(ここで、R₄及びR₅は、これらが結合している窒素と一緒になって、モルホリノ、ピペリジニル又はピペラジニル環(これらは、第２窒素上で任意にC₁〜C₆アルキルにより置換されていてもよい)を形成する)。

本発明に係る具体的化合物としては、実施例のものが含まれる。
本発明に係る化合物は、文献の方法(例えば、本明細書中の予備的な実施例に記載の方法及びこれに類似する方法)によって製造されてもよい。

したがって、Ｘが-OR₄である式(Ｉ)の化合物は、式(II)のカルボン酸を式(III)のアミノ酸とカップリングさせることにより製造してもよい。

Ｘが-OHである式(Ｉ)の化合物は、エステル化合物(III)の加水分解により製造してもよい。この化合物は、アミンHNR₄R₅と縮合させてＸが-NR₄R₅である式(Ｉ)の化合物を製造してもよい。

本発明の化合物はHSP90の阻害剤であり、したがって過剰の又は不適切なHSP90活性によって媒介される疾患(例えばガン)；Ｃ型肝炎(HCV)のようなウイルス性疾患(Waxman、2002)；例えば移植時における、免疫抑制(Bijlmakers、2000及びYorgin、2000)；慢性関節リウマチ、喘息、多発性硬化症(MS)、Ｉ型糖尿病、狼瘡、乾癬及び炎症性腸疾患のような抗炎症性疾患(Bucci、2000)；嚢胞性線維症(Fuller、2000)；血管新生に関連する疾患(Hur、2002及びKurebayashi、2001)；糖尿病性網膜症、血管腫、乾癬、子宮内膜症及び腫瘍血管新生の処置に有用である。

本発明のHsp90阻害剤はまた、化学療法誘発毒性に対して正常細胞を保護し得、そしてアポトーシスを経ないことが基礎的要因である疾患に有用であり得る。このようなHsp90阻害剤はまた、細胞ストレス又は熱ショックタンパク質応答に誘導される疾病において有用であり得、例えば、心臓(Hutter、1996及びTrost、1998)及び脳内(Plumier、1997及びRajder、2000)におけるHsp70の上昇に起因する低酸素−虚血性傷害からの保護に有益であり得る。Hsp90阻害剤はまた、タンパク質のミスフォールディング又は凝集が主要な原因因子である疾患、例えばスクラピー/CJD、ハンチントン病及びアルツハイマー病(Sittler、2001；Trazelt、1995及びWinklhofer、2001)において有用であり得る。

したがって、本発明はまた：
(ｉ)哺乳動物(特にヒト)において過剰の又は不適切なHSP90活性により媒介される疾患又は状態の処置の方法であって、上記で定義したような式(Ｉ)の化合物又はその塩、水和物若しくは溶媒和物の、該HSP90活性の阻害に有効な量を哺乳動物に投与することを含む方法；及び
(ii)ヒト又は動物の医薬、特に過剰の又は不適切なHSP90活性により媒介される疾患又は状態の処置に使用するための、上記で定義したような式(Ｉ)の化合物又はその塩、水和物若しくは溶媒和物
を提供する。

任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルは、用いられる具体的化合物の活性、年齢、体重、身体全体の健康、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄速度、薬の組合せ、並びに治療を受ける特定の疾患の原因となる機序及び重篤度を含む種々の要因に依存することが理解される。
一般に、経口投与可能な製剤に適切な用量は、通常、1日当り１回、２回又は３回で、0.1〜3000 mgの範囲であるか、又は注入若しくは他の経路により投与される当該１日量に等しい量である。しかし、最適な用量レベル及び投薬頻度は、当該分野で慣例の臨床試験によって決定される。

本発明に係る化合物は、その薬物動態特性と合致するいずれか経路による投与のために調製できる。経口投与可能な組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、トローチ剤、液体又はゲル製剤(例えば、経口用、局所用又は無菌非経口用溶液若しくは懸濁液)の形態であり得る。経口投与のための錠剤及びカプセル剤は、単位用量提示形態であり得、通常の賦形剤、例えば結合剤(例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント又はポリビニルピロリドン)；充填剤(例えば乳糖、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン)；打錠滑沢剤(例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ)；崩壊剤(例えばバレイショデンプン)又は許容される湿潤剤(例えばラウリル硫酸ナトリウム)を含有してもよい。錠剤は、通常の製薬実務で周知の方法によりコーティングされてもよい。

経口液体製剤は、例えば水性若しくは油性の懸濁液、溶液、乳液、シロップ若しくはエリキシルの形態であってもよいし、又は使用前に水若しくは他の適切なビヒクルで再構成する乾燥生成物として提供されてもよい。このような液体製剤は、通常の添加剤、例えば懸濁剤(例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、食用硬化油脂)；乳化剤(例えばレシチン、ソルビタンモノオレエート又はアラビアゴム)；非水性ビヒクル(食用油を含み得る)(例えばアーモンド油、ヤシ油、グリセリンのような油状エステル、プロピレングリコール又はエチルアルコール)；防腐剤(例えばメチル若しくはプロピルｐ-ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸)、及び所望により通常の芳香剤又は着色剤を含有してもよい。

皮膚に対する局所適用のために、薬物はクリーム、ローション又は軟膏にされ得る。薬物のために使用され得るクリーム又は軟膏の製剤は、例えば英国薬局方のような製剤学の標準的な教科書に記載されているように、当該分野において周知の通常の製剤である。

活性成分はまた、無菌媒体中で非経口的に投与され得る。使用するビヒクル及び濃度に依存して、薬物はビヒクルに懸濁させるか又は溶解させることができる。有利には、ビヒクル中に、局所麻酔剤のような補助剤、防腐剤及び緩衝剤を溶解することができる。

以下の実施例は、本発明の具体的化合物の製造及び活性を説明する。

実験の部

スキーム１：５-アミドの製造のための一般スキーム
1-(5-クロロ-2,4-ジヒドロキシ-フェニル)-2-(4-メトキシ-フェニル)-エタノン

４-クロロレゾルシノール(１当量)及びパラ-メトキシフェニル酢酸(１当量)を三フッ化ホウ素ジエチルエーテル化合物(５当量)中で合わせ、窒素下で90℃まで３時間加熱した。反応物を室温まで冷却させ、次いで10％NaOAc(水溶液)に滴下して加えた。混合物を一晩静置し、生じた固体を真空濾過により集めた。固体を真空下で乾燥させて、1-(5-クロロ-2,4-ジヒドロキシ-フェニル)-2-(4-メトキシ-フェニル)-エタノンを得た。
LC/MC保持時間2.485分 [M+H]⁺ 293.2/295.2 塩素分割パターン。

6-クロロ-7-ヒドロキシ-3-(4-メトキシ-フェニル)-4-オキソ-4H-クロメン-2-カルボン酸メチルエステル

1-(5-クロロ-2,4-ジヒドロキシ-フェニル)-2-(4-メトキシ-フェニル)-エタノン(１当量)を無水ピリジン中に取り、氷浴上で０℃まで冷却した。メチルクロロオキソアセテート(３当量)を滴下して加え、溶液に栓をして一晩冷蔵庫中に静置した。

明るい橙色の溶液を、100ml １Ｍ HCl(水溶液)に注意深く加え、２×70ml DCM中に抽出させた。有機相を合わせ、２×50ml塩水で洗浄した。全てを真空中で濃縮して黄色固体を得た。これを、１Ｍ HCl(水溶液)とメタノールとの１：１混合物中に懸濁した。全てを還流にて４時間加熱した。冷却させた。
反応混合物を真空中で濃縮して、淡黄色固体として6-クロロ-7-ヒドロキシ-3-(4-メトキシ-フェニル)-4-オキソ-4H-クロメン-2-カルボン酸メチルエステルを得た。
LC保持時間2.423分 [M+H]⁺ 361.2/363.2 塩素分割パターン。

6-クロロ-7-ヒドロキシ-3-(4-メトキシ-フェニル)-4-オキソ-4H-クロメン-2-カルボン酸

6-クロロ-7-ヒドロキシ-3-(4-メトキシ-フェニル)-4-オキソ-4H-クロメン-2-カルボン酸メチルエステルを、飽和NaHCO₃(水溶液)：メタノールの２：１混合物中に取り、全てを65℃で５時間加熱した。溶液を室温まで冷却し、真空中で濃縮してメタノールを除去した。残渣の水溶液を１Ｍ HCl(水溶液)で酸性化し、黄褐色の沈殿物を溶液から取り出した。これを、真空濾過により集め、水、及びジエチルエーテルで洗浄して、6-クロロ-7-ヒドロキシ-3-(4-メトキシ-フェニル)-4-オキソ-4H-クロメン-2-カルボン酸を得た。
LC保持時間1.814分 347.2/349.2 塩素分割パターン。

5-(5-クロロ-2,4-ジヒドロキシ-フェニル)-4-(4-メトキシ-フェニル)-2H-ピラゾール-3-カルボン酸

6-クロロ-7-ヒドロキシ-3-(4-メトキシ-フェニル)-4-オキソ-4H-クロメン-2-カルボン酸(１当量)をエタノール中に取り、ヒドラジン水和物(３当量)を加えた。溶解を助けるため、数滴のNaHCO₃(水溶液)を加え、次いで全てを窒素下で70℃にて２時間加熱した。溶液を室温まで冷却し、真空中で褐色油に濃縮した。これを、１Ｍ HCl(水溶液)とジエチルエーテルとの間で分配する。有機相を合わせ、１Ｍ HCl(水溶液)で洗浄し、MgSO₄上で乾燥させ、真空中で濾過及び濃縮して、黄色の泡として5-(5-クロロ-2,4-ジヒドロキシ-フェニル)-4-(4-メトキシ-フェニル)-2H-ピラゾール-3-カルボン酸を得た。
LC保持時間2.020分 [M+H]⁺ 361.2/363.2 塩素分割パターン。

アミドの一般的合成

方法１
5-(5-クロロ-2,4-ジヒドロキシ-フェニル)-4-(4-メトキシ-フェニル)-2H-ピラゾール-3-カルボン酸(１当量)を、無水ジクロロメタン中に懸濁物として取った。得られた溶液を窒素下で０℃に冷却した。1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(３当量)を加え、続いてN-メチルモルホリン(10当量)、N-エチル-N'-(3ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドHCl(３当量)及びアミン(２当量)を加えた。全てを室温まで一晩撹拌した。得られた溶液をジクロロメタンで希釈し、１Ｍ HCl(水溶液)、飽和NaHCO₃(水溶液)及び飽和NaCl(水溶液)で抽出させ、次いでMgSO₄上で乾燥させ、真空中で濾過及び濃縮した。残渣を分取(preparative)LC/MSにより精製してアミド生成物を得た。

方法２
前記酸(１当量)を無水ジクロロメタン中に取り、溶液を窒素下で０℃まで冷却した。トリエチルアミン(６当量)を加え、続いて4-(ジメチルアミノ)ピリジン(0.5当量)を加えた。無水ジクロロメタン中の溶液としてのジ-tert-ブチルジカルボネート(３当量)を、30分間にわたって滴下して加え、続いて前記アミン(２当量)を加えた。反応混合物を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を１Ｍ HCl(水溶液)で洗浄し、次いで塩水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥させた。溶液を真空中で濾過及び濃縮した。
この粘性物質(gum)をメタノール中に溶解した。過剰な１Ｍ Na₂CO₃(水溶液)を加え、溶液を窒素下に80℃まで８時間加熱し、次いで室温に冷却して戻した。残渣を分取LC/MSにより精製した。

スキーム２：５-位伸長アミドの合成
方法３

前記酸(１当量)を無水ジクロロメタン中に取り、溶液を窒素下で０℃まで冷却した。トリエチルアミン(６当量)を加え、続いて4-(ジメチルアミノ)ピリジン(0.5当量)を加えた。無水ジクロロメタン中の溶液としてのジ-tert-ブチルジカルボネート(３当量)を、30分間にわたって滴下して加えた。反応混合物を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を１Ｍ HCl(水溶液)で洗浄し、次いで塩水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥させた。溶液を真空中で濾過及び濃縮した。
LC/MC保持時間2.86分 [M-Boc]⁺ 505.4/507.4 塩素分割パターン。

このカルボン酸(１当量)を無水ジクロロメタンに溶解させた。得られた溶液を窒素下で０℃まで冷却した。1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(３当量)を加え、続いてN-メチルモルホリン(８当量)、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドHCl(３当量)及びH-D-ALA-OMe.HCl(２当量)を加えた。全てを室温まで一晩撹拌した。得られた溶液をジクロロメタンで希釈し、１Ｍ HCl(水溶液)、飽和NaHCO₃(水溶液)及び飽和NaCl(水溶液)で抽出させ、次いでMgSO₄上で乾燥させ、真空中で濾過及び濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した(１％ MeOH-DCMで溶出)。
LC/MC保持時間2.97分 [M-H]⁺ 646.5/648.5 塩素分割パターン。

前記エステル(１当量)を水：1,4-ジオキサンの１：１溶液中に取った。１Ｍ LiOH(水溶液)を加え、全てを窒素下にて90分間室温にて撹拌した。
反応混合物を水で希釈し、ジエチルエーテルで洗浄した。水性相を１Ｍ HCl(水溶液)で酸性化し、ジクロロメタン中に抽出させた。有機相をMgSO₄上で乾燥させ、真空中で濾過及び濃縮して、泡としてカルボン酸を得た。
LC/MC保持時間2.851分 632.5/634.5

前記カルボン酸(１当量)を無水ジクロロメタン中に溶解した。得られた溶液を窒素下で０℃まで冷却した。1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(３当量)を加え、続いてN-メチルモルホリン(８当量)、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドHCl(３当量)及びアミン(２当量)を加えた。全てを室温まで一晩撹拌した。得られた溶液をジクロロメタンで希釈し、１Ｍ HCl(水溶液)、飽和NaHCO₃(水溶液)及び飽和NaCl(水溶液)で抽出させ、次いでMgSO₄上で乾燥させ、真空中で濾過及び濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した(１％ MeOH-DCMで溶出)。

この粘性物質(gum)をメタノール中に溶解した。過剰な１Ｍ Na₂CO₃(水溶液)を加え、溶液を窒素下に80℃まで８時間加熱し、次いで室温に冷却して戻した。残渣を分取LC/MSにより精製した。

蛍光偏光アッセイ
蛍光偏光[蛍光異方性としてもまた知られる]は、溶液中の蛍光種の旋光度を測定する。ここで、分子が大きいほど、蛍光発光は偏光する。蛍光体が偏光した光で励起されると、発せられる光も偏光する。分子サイズは、蛍光発光の偏光に正比例する。フルオロセイン標識プローブ(RBT0045864-FAM)は、HSP90[完全長ヒト、完全長酵母又はＮ末端ドメインHSP90]に結合し、異方性[プローブ−タンパク質複合体の旋光度]が測定される。

化合物をアッセイプレートに加え、平衡にさせ、異方性を再度測定する。異方性の何らかの変化は、HSP90への化合物の競合的結合によるプローブの遊離に起因する。

材料
化学物質は、商業的に入手可能な最高級の純度のものであり、全ての水溶液は、AR水で作製される。
１）Costar96ウェルブラックアッセイプレート#3915
２）(ａ)100mM Tris pH7.4；(ｂ)20mM KCl；(ｃ)６mM MgCl₂のアッセイ緩衝液。室温にて貯蔵。
３）BSA(ウシ血清アルブミン)10mg/ml(New England Biolabs #B9001S)
４）100％ DMSO貯蔵濃度で20mM RBT0045864(ピラゾール)。RTにて暗所中で貯蔵。自家製、K_d ^- 200μM(使用するタンパク質に依存して)。実効濃度は、AR水に希釈した200nMであり、４℃にて貯蔵。アッセイ中の最終濃度80nM。
５）E.coli発現ヒト完全長HSP90タンパク質。95％より高い純度に精製(例えば、Panaretouら、EMBO J., Vol.17, pp.4829-4836, 1998)及び−80℃にて50μLアリコートで貯蔵。

プロトコル
１）ウェル11A及び12A(＝FP BLNK)に100μl １×緩衝液を添加。

２）アッセイミックスを調製。プローブは光感受性であるので、バケットに蓋をして、全ての反応剤を氷上に維持する。
ｉ. 最終濃度ⁿ
・１×Hsp90 FP緩衝液 10 ml １×
・BSA 10mg/ml(NEB) 5.0 μl ５μg/ml
・プローブ 200μM 4.0 μl 80nM
・ヒト完全長Hsp90 6.25μl 200nM
３）他の全てのウェルに100μlアッセイミックスを分注。
４）プレートを密封し、暗所で室温にて20分間放置して平衡化。

化合物希釈プレート−１×３希釈系列
１）透明な96ウェルｖ底プレート[#VWR007/008/257]において、10μlの100％DMSOをウェルB1〜H11に加える
２）ウェルA1〜A11に、17.5μlの100％DMSOを加える
３）A1に2.5μlのcpdを加える。これにより2.5mM[50×]貯蔵cpdを得る(cpdを20mMと仮定して)。
４）ウェルA2〜A10について繰り返す。列11及び12にはコントロール。
５）行Ａから行Ｂに５μl移す(列12は除く)。ウェルを混合する。
６）行Ｂから行Ｃに５μl移す。ウェルを混合する。
７）行Ｇまで繰り返す。
８）行Ｈ(これが０行である)には化合物を加えない。
９）これにより、50μMから0.07μMまでの１×３希釈系列が作成される。
10）ウェルB12において、20μlの100μM標準化合物を調製する。
11）第１のインキュベーション後、アッセイプレートをFusion(商標)a-FPプレートリーダー(Packard BioScience, Pangbourne, Berkshire, UK)上で読み取る。
12）第１の読み取り後、２μlの希釈化合物を列１〜10について各ウェルに加える。列11[標準曲線を提供する]には、化合物B11〜H11のみを加える。２μlの100mM標準cpdをウェルB12〜H12[陽性コントロールである]に加える。
０コントロール及び陽性ウェルからZ'因子を算出する。これは、代表的には、0.7〜0.9の値を与える。

Claims

HSP90活性の阻害のための組成物の製造における式(Ｉ)：

[式中、
R₁は、式(IA)：
-Ar¹-(Alk¹)_p-(Z)_r-(Alk²)_s-Q (IA)
（ここで、任意の矛盾しない組合せで、
Ar¹は、任意に置換していてもよいアリール又はヘテロアリール基であり、
Alk¹及びAlk²は、任意に置換していてもよい二価のC₁〜C₆アルキレン又はC₂〜C₆アルケニレン基であり、
ｐ、ｒ及びｓは、独立して０又は１であり、
Ｚは、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-SO₂-、-C(=O)O-、-C(=O)NR^A-、-C(=S)NR^A-、-SO₂NR^A-、-NR^AC(=O)-、-NR^ASO₂-又は-NR^A-（ここで、R^Aは水素又はC₁〜C₆アルキルである)であり、そして
Ｑは、水素又は任意に置換していてもよい炭素環式若しくは複素環式基である)
の基であり、
R₂は、(ｉ) R₁に関して定義したとおりの式(IA)の基；
(ii) カルボキサミド基；又は
(iii) 非芳香族炭素環又は複素環(ここで、環炭素及び/又は環窒素は、式-(Alk¹)_p-(Z)_r-(Alk²)_s-Q (ここで、Ｑ、Alk¹、Alk²、Ｚ、ｐ、ｒ及びｓは、基(IA)に関して上記で定義したとおりである)の基により任意に置換されていてもよい)であり；そして
R₃は、水素、又はメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル(このいずれもがヒドロキシによって任意に置換していてもよい)であり；
Ｘは、-OR₄又は-NR₄R₅(ここで、R₄及びR₅は独立して、水素又は任意に置換していてもよいC₁〜C₆アルキルであるか、又はR₄及びR₅は、これらが付着している窒素と一緒になって、５〜８の環原子を有する任意に置換していてもよい窒素含有環を形成する)である]の化合物又はその塩、Ｎ-酸化物、水和物若しくは溶媒和物の使用。
式(Ｉ)の化合物において、R₁が式(IB)：

[式中、R₆は、クロロ、ブロモ、C₁〜C₆アルキル又はシアノである]を有する請求項１に記載の使用。
式(Ｉ)の化合物において、R₁が式(IC)：

[式中、Alk¹、Alk²、ｐ、ｒ、ｓ、Ｚ及びＱは、式(IA)に関して請求項１で定義したとおりであり、Ｒは１又はそれ以上の任意の置換基を表す]を有する請求項１に記載の使用。
Ｒがフェニル環の４位において-OHであり、置換基-(Alk¹)_p-(Z)_r-(Alk²)_s-Qがフェニル環の５位にある請求項２に記載の使用。
ｒが０であり、Ｑが水素又は任意に置換されていてもよいフェニルである請求項４に記載の使用。
ｓが０であり、ｐが１であり、Alk¹が未置換で二価のC₁〜C₆アルキレン又はC₂〜C₆アルケニレン基である請求項５に記載の使用。
Alk¹が-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-又は-CH=CH-である請求項５に記載の使用。
ｐ、ｒ及びｓが各々０である請求項４に記載の使用。
R₂が、メトキシ、エトキシ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ又はトリフルオロメチルの１又はそれ以上により任意に置換されていてもよいフェニル、２-、３-若しくは４-ピリジル、２-若しくは３-フラニル、２-若しくは３-チエニル又はチアゾリルである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
R₂が、任意に置換されていてもよいフェニルである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
R₂が、４位において、(ｉ)C₁〜C₆アルコキシ、例えばメトキシ又はエトキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、モルホリノメチル、ピペラジノ、Ｎ-メチルピペラジノ又はピペリジノ、(ii)任意に置換されていてもよいC_1-6アルキル、例えば、任意に置換されていてもよいメチル、エチル、ｎ-プロピル又はイソ-プロピル、(iii)任意に置換されていてもよいモルホリノC_1-6アルキル-、チオモルホリノC_1-6アルキル-、ピペラジノC_1-6アルキル-、メチルピペラジノC_1-6アルキル-又はジエチルアミノ、(iv)-NH₂、-NHR^A、-NR^AR^B、-NHCOR^A、-NHCOOR^A、-NR^BCOOR^A、-NHSO₂OR^A、-NR^BSO₂OR^A、-NHCONH₂、-NR^ACONH₂、-NHCONHR^B、-NR^ACONHR^B、-NHCONR^AR^B又は-NR^ACONR^AR^B(ここで、R^A及びR^Bは独立して(C₁〜C₆)アルキル基である)、或いは(ｖ)任意に置換されていてもよいピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ又はチオモルホリノにより置換されているフェニルである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
R₂が式-CONR^B(Alk)_nR^A
（ここで、
Alkは、任意に置換されていてもよい二価のアルキレン、アルケニレン又はアルキニレン基であり
ｎは０又は１であり、
R^Bは、水素又はC₁〜C₆アルキル又はC₂〜C₆アルケニル基であり、
R^Aは、ヒドロキシ又は任意に置換されていてもよい炭素環若しくは複素環であり、
或いは、R^A及びR^Bは、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｏ、Ｓ及びＮから選択される１又はそれ以上の追加のヘテロ原子を任意に含有していてもよく且つ１又はそれ以上の環Ｃ又はＮ原子上で任意に置換されていてもよいＮ-複素環を形成する)のカルボキサミド基である請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
Alkが、任意に置換されていてもよい-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH=CH-又は-CH₂CCCH₂-基であり、
ｎは０又は１であり、
R^Bは、水素、メチル、エチル、ｎ-若しくはイソ-プロピル又はアリルであり、
R^Aは、ヒドロキシ、又はヒドロキシ及び/若しくはクロロ-置換されたフェニル、3,4メチレンジオキシフェニル、ピリジル、フリル、チエニル、Ｎ-ピペラジニル若しくはＮ-モルホリニルであり、
或いは、R^A及びR^Bは、これらが結合している窒素と一緒になって、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニル又はＮ-フェニルピペラジニル環を形成する請求項１２に記載の使用。
ｎが０であり、R^Bが水素であり、R^Aがヒドロキシ又は任意に置換されていてもよい炭素環若しくは複素環である請求項１２に記載の使用。
R₃が水素である請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
R₃が水素以外であり、これが結合している炭素中心での立体化学配置がＤアミノ酸のものである請求項１〜１４のいずれかに記載の使用。
Ｘが-OR₄又は-NHR₄(ここで、R₄は、任意にヒドロキシで置換されていてもよいC₁〜C₆アルキル、又は第１級、第２級、第３級若しくは環式のアミノ基である)である請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
Ｘが-NR₄R₅(ここで、R₄及びR₅は、これらが結合している窒素と一緒になって、モルホリノ、ピペリジニル又はピペラジニル環(これらの環は、第２窒素上で任意にC₁〜C₆アルキルにより置換されていてもよい)を形成する)である請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
過剰の又は不適切なHSP90活性の阻害に有効な量の請求項１〜１５のいずれか１項に規定の式(Ｉ)の化合物又はその塩、水和物若しくは溶媒和物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物において過剰の又は不適切なHSP90活性により媒介される疾患又は状態の処置の方法。
免疫抑制のため、又はガン；ウイルス性疾患；慢性関節リウマチ、喘息、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、狼瘡、乾癬及び炎症性腸疾患のような炎症性疾患；嚢胞性線維症；糖尿病性網膜症、血管腫及び子宮内膜症のような血管新生に関連する疾患の処置のため、又は化学療法誘発毒性に対する正常細胞の保護のため、アポトーシスを経ないことが基礎的要因である疾患、又は心臓及び脳内におけるHsp70の上昇に起因する低酸素−虚血性傷害、スクラピー/CJD、ハンチントン病及びアルツハイマー病からの保護のための、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用又は請求項１６に記載の方法。
ヒト又は動物の医薬に使用するための請求項１〜１８のいずれか１項に規定の式(Ｉ)の化合物又はその塩、水和物若しくは溶媒和物。
請求項１〜１８のいずれか１項に規定の式(Ｉ)の化合物又はその塩、溶媒和物若しくは水和物。
本明細書中のいずれかの実施例に記載された構造を有する化合物又はその塩、溶媒和物若しくは水和物。
請求項２２又は２３に規定の化合物を医薬的又は動物医薬的に許容可能なキャリアと共に含む医薬又は動物医薬組成物。