[go: up one dir, main page]

JP2003523399A - 上皮細胞成長因子を有効成分とする安定した組成物 - Google Patents

上皮細胞成長因子を有効成分とする安定した組成物

Info

Publication number
JP2003523399A
JP2003523399A JP2001561341A JP2001561341A JP2003523399A JP 2003523399 A JP2003523399 A JP 2003523399A JP 2001561341 A JP2001561341 A JP 2001561341A JP 2001561341 A JP2001561341 A JP 2001561341A JP 2003523399 A JP2003523399 A JP 2003523399A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
egf
stable composition
composition according
carbomer
content
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2001561341A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3761816B2 (ja
Inventor
ゾン ファ ヤン
ザン ウォン リ
ミ ヨン ソン
ヨン ジュン キン
Original Assignee
ダエウン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ダエウン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド filed Critical ダエウン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド
Publication of JP2003523399A publication Critical patent/JP2003523399A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3761816B2 publication Critical patent/JP3761816B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • A61K9/703—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms characterised by shape or structure; Details concerning release liner or backing; Refillable patches; User-activated patches
    • A61K9/7038—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer
    • A61K9/7046—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer the adhesive comprising macromolecular compounds
    • A61K9/7053—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer the adhesive comprising macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl, polyisobutylene, polystyrene
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • A61K9/703—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms characterised by shape or structure; Details concerning release liner or backing; Refillable patches; User-activated patches
    • A61K9/7038—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer
    • A61K9/7046—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer the adhesive comprising macromolecular compounds
    • A61K9/7053—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer the adhesive comprising macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl, polyisobutylene, polystyrene
    • A61K9/7061—Polyacrylates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は、上皮細胞成長因子（epidermal growth factor, EGF）を有効成分とし、カルボキシビニルポリマーを基剤として含む安定した組成物に関する。 【解決手段】 本発明者らは、ＥＧＦを活性成分、または酸性高分子であるカルボキシビニルポリマーを基剤に用いてＥＧＦ製剤を製造する場合、セルロース系列の高分子等の基剤を用いる先行技術に比べ、安定性が著しく増加させていることを確認できた。従って、本発明に係る組成物は、眼科製剤、皮膚外用剤、化粧品製剤等で有用に使用することが出来るようになる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、上皮細胞成長因子（epidermal growth factor, EGF）を有効成分と
して含有する安定した組成物に関するものである。さらに詳しくは、本発明は、
生物学的に活性を持つＥＧＦ及び水溶液でＥＧＦの安定性を著しく増加させるこ
とができるカルボキシビニルポリマーを基剤として含む安定した組成物に関する
ものである。
【従来の技術】
【０００２】 ＥＧＦは、ウロガストロン（urogastrone）として知られており、５３個のア
ミノ酸と３個の二硫化物（disulfide）結合を持つ分子量６０４５のポリペプチ
ドである。ＥＧＦは、上皮細胞と間葉(messenchymal)細胞とを含む各種細胞に対
し、類似分裂の促進、細胞成長の促進及び胃酸分泌の抑制などの活性が良好であ
るため、皮膚または角膜の創傷治療剤または胃潰瘍の治療剤として使用すること
が出来るものとして知られている（参照：米国特許第１４０９９８号；Carpente
r, Experimental Cell Research. 164:1~10, 1986）。
【０００３】 しかし、ＥＧＦは、試験管内では優れた上皮細胞分化促進機能を表わしている
が、ＥＧＦを実際の創傷部位に適用したときには、創傷治癒に若干の効果のみあ
るものの、ＥＧＦを用いた皮膚または角膜の創傷治療用の外用剤の開発は非常に
難しかった。
【０００４】 ＥＧＦは、生物学的に不安定だけでなく、物理学的においても不均質であるた
め治療効果を減少させ、分解産物によるアレルギーが発生される。従って、ＥＧ
Ｆは生体に直接適用する場合においては創傷治癒効果を十分に表わすことが出来
なかった。ＥＧＦは、常温で、特に水分の存在下で非常に不安定であり、創傷部
位において細胞がＤＮＡを合成できるように誘導するために、約８ないし１２時
間程度の潜伏期（lag time）を必要とする一方、ＥＧＦの半減期は約１時間程度
に非常に短く、目的とする効果を表わすことが出来ない。ＥＧＦは長期保管時、
室温だけでなく冷蔵保管状態においても物理学的に変性してしまう。ＥＧＦを皮
膚に適用すると、創傷部位に存在する蛋白質分解酵素によって、ＥＧＦが変性、
分解、凝集及び沈殿される過程によって生物学的活性を喪失する（参照：Mannin
g et al., Pharmaceutical Res., 6:903~917, 1989）。
【０００５】 ＥＧＦの短所のうち、生物学的不安定を克服し、十分な治療効果を表わすため
に、創傷回復に最も重要な最初の数日間ＥＧＦを創傷部位に随時に適用し、有効
濃度が持続的に維持されるようにすることが報告されている（参照：Franklin e
t., J. Lab. Clin. Med., 108:103~108,1986）。これによって、今までＥＧＦを
創傷部位に持続的に供給できる徐放性ＥＧＦ製剤を開発するための研究が行われ
てきた。
【０００６】 かかる研究の結果として、米国特許第４，９４４，９４８号は中性リン脂質と
陰に荷電されたリン脂質及びコレステロールを用いてＥＧＦを創傷部位に持続的
に供給するＥＧＦ／リポソームゲル剤形を開示している。また、ヨーロッパ特許
公報第３１２２０８号は、薬剤学的に許容される多様な水溶性または水膨潤性ポ
リマーを開示している。
【０００７】 しかし、これらの文献は、ＥＧＦを１２時間以上持続的に放出する剤形を提示
しているが、これらのＥＧＦは、長期保管中の安定性が確保されていないため、
工業的生産に不適合である。したがって、ＥＧＦが薬剤として創傷に対し十分な
治療効果を表わすためには、長期間生物学的活性が維持されるだけではなく、純
度及び均質性などの物理学的安定性をも維持すべき必要性が絶えず要求されてき
た。
【０００８】 かかる物理化学的安定性を維持してＥＧＦ活性の減少を防ぐための方法として
、ヨーロッパ特許公報第２０５０５１号は、０．０００１ないし０．００５重量
％のＥＧＦ、１ないし１０重量％の界面活性剤、５ないし４５重量％の脂肪質及
び０．３ないし０．８重量％の防腐剤を含有する皮膚または眼科用クリーム形態
の薬剤学的組成物を開示している。ヨーロッパ特許公報第267015号及び米国特許
第４，７１７，７１７号は、ＥＧＦに水溶性セルロース誘導体を添加して安定化
されたＥＧＦ含有組成物を記述している。また、ヨーロッパ特許公報第３９８６
１５号及び米国特許第５，１３０，２９８号は、ＥＧＦに薬剤学的に許容される
亜鉛などの金属陽イオンを添加し、ＥＦＧが亜鉛とイオン結合され、水溶液中で
のＥＧＦの分解を防ぎ、ＥＧＦを安定化させる方法を開示している。
【０００９】 しかし、上述した安定化剤を添加しても、ＥＧＦの安定性は４℃において略2
ヶ月間維持される。従って、ＥＧＦを皮膚外用剤として製剤化して創傷に直接適
用する場合、創傷治癒効果が十分に出ていないか、且つ製剤の安定性が低いため
、実際産業化に適用しにくいのが実情である。
【００１０】 従って、特別な治療剤のない皮膚潰瘍や角膜損傷のような難治性病理等に効果
的に用いられるＥＧＦを、十分な治療効果が発揮されながら、保管時に安定的に
ＥＧＦを保護し、適用時には担体から創傷部位へとＥＧＦを迅速に移行するＥＧ
Ｆ製剤を開発すべき必要性が台頭してきた。
【００１１】 このようなことから、本発明者らは、十分な創傷治癒及び良好な安定性を持つ
ＥＧＦ外用剤を開発するために、鋭意研究を続けた結果、ＥＧＦを有効成分とし
、酸性高分子であるカルボキシビニルポリマーを基剤として用いて外用剤を製造
する場合に、従来の技術において基剤として用いられたセルロース系列の高分子
や中性高分子より創傷治療効果を十分に発揮するとともに、優れた安定性が確保
できることを明らかにした。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、ＥＧＦを有効成分とし、カルボキシビニルポリマー
を基剤として含め、ＥＧＦの生物学的及び物理学的に安定したＥＧＦ含有組成物
を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明に係る組成物は、ＥＧＦを有効成分に、またはカルボキシビニルポリマ
ーを基剤として含む。活性成分であるＥＧＦは、天然型ＥＧＦから分離するか、
組換ＤＮＡ技術を用いて製造できる。組成物中のＥＧＦ含有量は、ＥＧＦが薬理
学的に有効に作用できるように、製剤の総量に対して０．００１ないし１，００
０μｇ／ｇ、望ましくは、０．１ないし１００μｇ／ｇの範囲である。本発明に
係る組成物のｐＨは水溶液においてＥＧＦが変性されずに溶解された状態に維持
出来るようにするために、望ましくは４ないし８の範囲、さらに望ましくは、５
ないし７の範囲である。
【００１４】 本発明において基剤として用いられるカルボキシビニルポリマーは分子量１×
１０６ないし４×１０６程度のホモポリマーである。アクリル酸とアリールサッ
カロースとの架橋結合物であるカルボキシビニルポリマーは、１％水溶液への分
散時において、ｐＨ２．５ないし３．０を示す酸性高分子であり、１％未満の低
い濃度においても広い範囲の粘度を有するので、経口用懸濁剤や、ローション、
クリーム及びゲル剤に広く用いられている基剤である。また、カルボキシビニル
ポリマーは、カルボマー（Carbomer）９３４、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー
９４０、カルボマー９４１またはカルボマー９４７Ｐのように、その種類に関係
なく５６．０ないし６８．０％の比でカルボキシ基を含む。カルボキシビニルポ
リマーの含有量は、組成物の総量に対し、０．００１ないし５０重量％、望まし
くは、０．００５％ないし２５％、さらに望ましくは、０．０１ないし１０重量
％の範囲である。
【００１５】 本発明に係る組成物は、製薬上許容され得る添加剤、たとえば、安定化剤、賦
形剤、等方剤、保湿剤、ｐＨ調整剤などを追加して含有することができる。
【００１６】 本発明者らは、本発明に係るカルボキシビニルポリマーを含有するＥＧＦ製剤
と、その他の高分子を基剤として含有するＥＧＦ製剤を４℃及び２５℃において
６ヶ月間保管しながら安定性比較試験を行った。このとき、１０ｍＭリン酸緩衝
液に溶解させたＥＧＦを対照群として用いており、また、ＥＧＦの含有量はＥＬ
ＩＳＡ法を用いて分析した。その結果、本発明に係るカルボキシビニルポリマー
を基剤として含有するＥＧＦの製剤の場合に、広い濃度の範囲内で、他の基剤を
含有するＥＧＦ製剤に比べて優れた安定性を見せているだけではなく、リン酸緩
衝液に溶解させたＥＧＦよりも優れた安定性を見せた。かかる結果から、本発明
に係るＥＧＦ製剤において、ＥＧＦは、カルボキシビニルポリマー基剤の含有量
に関係なくカルボキシビニルポリマーを添加して安定化させることが出来、また
、このポリマーは、使用目的に応じて基剤として粘度調整して用いるか、安定化
剤として添加出来ることが確認された。
【００１７】 本発明に係るＥＧＦ含有組成物は、治療目的に応じて眼科製剤や、クリーム剤
、軟膏剤、ゲル剤、パッチ剤などの皮膚外用剤として応用でき、また、綿、ガー
ゼに塗布または貼付させて使用でき、必要に応じて凍結乾燥し保管して置き、適
切な溶剤に溶解させて使用することが出来る。また、皮膚外用製剤は化粧品剤形
に有用に用いられる。
【００１８】 以下、実施例を通じて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明がこれらの実
施例に限定されないものとして理解されるべきであろう。
【００１９】
【実施例】
実施例１：０．１％カルボマー含有点眼製剤 ＥＧＦ ０．５ｍｇ カルボマー ９３４Ｐ ０．１ｇ マンニトール ５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．０４ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０．０１ｇ 水酸化ナトリウム 適当量 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的には、マンニトール、パラオキシ安息香酸メチル及びパラオキシ
安息香酸プロピルを適当量の注射用蒸留水に溶解させた。カルボマー９３４Ｐ（
BFGoodrich，U.S.A）を溶液に加え攪拌して分散させる。次いで、溶液を水酸化
ナトリウムでｐＨを調節して滅菌した後、注射用蒸留水に溶解させたＥＧＦ（Da
ewoong Pharm., Korea）のろ過滅菌液を混合し、１００gの製剤を得た。
【００２０】 実施例２：ＥＧＦ含有１０ｍＭリン酸緩衝液 ＥＧＦ ０．５ｍｇ リン酸水素ナトリウム ０．１４ｇ 塩化ナトリウム ０．８８ｇ ２０％リン酸溶液 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的には、リン酸水素ナトリウムと塩化ナトリウムを適当量の注射用
蒸留水に溶解させ、２０％のリン酸溶液でｐＨを調節して滅菌した液に、注射用
蒸留水に溶解させたＥＧＦのろ過滅菌液を混合し、１００ｇの製剤を得た。
【００２１】 実施例３：０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム含有点眼製剤 ＥＧＦ ０．５ｍｇ カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．５ｇ （ＣＭＣ） ソルビトール ５．４７ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．０５ｇ 水酸化ナトリウム 適当量 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的には、ソルビトールとパラオキシ安息香酸メチルを適当量の注射
用蒸留水に溶解させた後、カルボキシメチルセルロースナトリウムを溶液に加え
攪拌して分散させる。溶液を水酸化ナトリウムでｐＨを調節した後滅菌し、注射
用蒸留水に溶解させたＥＧＦのろ過滅菌液を混合し、１００ｇの製剤を得た。
【００２２】 実施例４：１％カルボマー含有外用ゲル剤 ＥＧＦ ５ｍｇ カルボマー９３４Ｐ １ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．２ｇ プロピレングリコール ２０ｇ 水酸化ナトリウム 適当量 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的には、パラオキシ安息香酸メチルを適当量の注射用蒸留水に溶解
させ、カルボマー９３４Ｐを溶液に加え攪拌して分散させる。次いで、溶液のｐ
Ｈを水酸化ナトリウムで調節し後、溶液をプロピレングリコールを混合して加熱
滅菌した。ここへ注射用蒸留水に溶解させたＥＧＦのろ過滅菌した液を混合し、
１００ｇの製剤を得た。
【００２３】 実施例５：１５％ポロキサマー含有外用製剤 ＥＧＦ ５ｍｇ ポロキサマー４０７ １５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．２ｇ リン酸水素ナトリウム ２７２．１８ｍｇ 塩化ナトリウム ６６６．２２ｍｇ リン酸 適当量 プロピレングリコール ２０ｇ 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的に、リン酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム及びリン酸を前記比
率の量を用いてリン酸塩緩衝液を製造し、防腐剤であるパラオキシ安息香酸メチ
ルを溶解させた後、ポロキサマー４０７（BASF, Germany）を溶液に加え攪拌し
て分散させる。次いで、溶液をプロピレングリコールと混合し活性成分であるＥ
ＧＦを加え、１００gの製剤を得た。
【００２４】 実施例６：０．１％カルボマー含有クリーム製剤 ＥＧＦ ０．０５ｍｇ グリセリン ４．５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０．０５ｇ カルボマー９４０ ０．１ｇ ステアリルアルコール １．７５ｇ セチルアルコール ４．００ｇ スパン＃６０ ０．５０ｇ Polyoyl #40 stearate ２．００ｇ トリエタノールアミン 適当量 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的には、グリセリン及びパラオキシ安息香酸メチルを適当量の注射
用蒸留水に溶解させた後、カルボマー９４０（BF Goodrich，U.S.A）を溶液に加
え攪拌して分散させる。その後、パラオキシ安息香酸プロピル及び残りの原料を
溶液に加えて溶かしながら乳化し、トリエタノールアミンでｐＨを調節して溶液
を滅菌した後、注射用蒸留水に溶解させたＥＧＦ（Daewoong Pharm., Korea）の
ろ過滅菌液を混合し、１００gの製剤を得た。
【００２５】 実施例７：０．１％カルボマー含有軟膏製剤 ＥＧＦ ０．５ｍｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．１０ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０．０５ｇ カルボマー９４０ ０．１ｇ 蜜ロウ ５ｇ 鉱物油 ４５ｇ ボラックス ０．２ｇ マイクロスタリンワックス ７．００ｇ パラフィンワックス １０ｇ 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的に、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、
カルボマー９４０Ｐ（BF Goodrich，U.S.A）を適当量の注射用蒸留水に溶解また
は分散させる。その後、残りのワックス類原料を溶液に加えて加温しながら、乳
化した。次いで溶液に乳化滅菌した後、注射用蒸留水に溶解させたＥＧＦ（Daew
oong Pharm., Korea）のろ過滅菌液を混合し、１００gの製剤を得た。
【００２６】 実施例８：１％カルボマー含有パッチ製剤 ＥＧＦ １．０ｍｇ ポリビニルアルコール ２０ｇ ポリビニルピロリドン １５ｇ カルボマー９４０ １ｇ ポリエチレングリコール４０００ ５ｇ グリセロール ３ｇ 注射用蒸留水 適当量 総量 １００ｇ 通常の方法によって、上述した成分を指定された比率の量を用いて、製剤を製
造した。具体的には、カルボマー９４０（BF Goodrich，U.S.A）、ポリビニルア
ルコール、ポリビニルピロリドン、ＰＥＧ４００、グリセロールを適当量の注射
用蒸留水に溶解または分散させる。その後、溶液を加温して均質化した後、注射
用蒸留水に溶解させたＥＧＦ（Daewoong Pharm., Korea）のろ過滅菌液を混合し
、１００gの製剤を得た。その後、溶液をモールドに注いでパッチ形態に製造し
た。
【００２７】 実験例１：眼科用製剤の安定性試験 実施例１において製造したカルボマー含有点眼剤の安定性試験のためにＥＧＦ
安定化作用があるものとして知られた実施例２のカルボキシメチルセルロース含
有製剤と比較し、４℃または２５℃で保管しながら２、４、８及び１８週の時間
経過に伴いＥＧＦの含有量変化を測定した。このとき、実施例2の１０ｍＭのリ
ン酸緩衝液に溶解させた試料を標準液とし、ＥＧＦ含有量は、Quantikine EGF F
LISA kit（R&D, U.S.A.）を用いてＥＬＩＳＡ法で定量した。
【００２８】 表１は、４℃でのＥＧＦ点眼剤の安定性を標準液と比較した結果を示しており
、表２は、２５℃でのＥＧＦ含有点眼剤の安定性を標準液と比較した結果を示し
ている。
【００２９】
【表１】
【００３０】 表１に示すように、４℃条件下において、リン酸緩衝液中のＥＧＦ含有量は、
８週目に約１０％まで低下されたが、カルボマー製剤とカルボキシメチルセルロ
ース製剤は、8週までＥＧＦ含有量の低下はなかった。しかし、４℃条件下で１
８週間保管した場合、リン酸緩衝液及びカルボマー製剤のＥＧＦ含有量は８週ま
で変化がないのに比べ、カルボキシメチルセルロース製剤の場合は、１８週目に
８７．３％までＥＧＦの含有量が低下された。
【００３１】
【表２】
【００３２】 表２に示されるように、同一の製剤を２５℃において保管する場合、リン酸緩
衝液製剤でＥＧＦ含有量は、２週目に約２０％まで低下されており、カルボキシ
メチルセルロース製剤の場合にも４週目から含有量が低下し始めて継続的なＥＧ
Ｆの含有量低下を見せている。しかし、実施例１の製剤においてＥＧＦ含有量は
８週目までも殆ど変化がなかった。実施例１の製剤を常温で１８週間保管したと
きのＥＦＧ含有量は、約１３％のみ低下した。従って、カルボマー製剤の場合、
常温保管でＥＧＦの安定性が著しく増加していることを確認することが出来た。
【００３３】 試験例２：外用ゲル剤の安定性試験 実施例４において製造されたカルボマー外用ゲル剤の安定性試験のために、水
溶液での誘電率（dielectric constant）を低めて蛋白質の安定化に寄与し、ま
た、天然高分子である外用剤の基剤として広く用いられるポロキサマー外用剤と
比較し、４℃または２５℃において保管しながら１８週間外用ゲル剤の含有量変
化を推定した。このとき、１０ｍMリン酸緩衝液に溶解させた液を標準液に使用
し、ＥＧＦ含有量は、Quantikine EGF ELISA kit（R&D. U. S. A.）のＥＬＩＳ
Ａ法で評価した。
【００３４】 表３は、４℃での外用ゲル剤の安定性を示しており、表４は、２５℃での外用
ゲル剤の安定性を示したものである。
【００３５】
【表３】
【００３６】
【表４】
【００３７】 表３に示すように、カルボマーやポロキサマー製剤、いずれも８週間の冷蔵保
管時には、ＥＧＦ含有量の低下が殆ど観察されていないのに比べ、１８週目にポ
ロキサマー製剤は、約１０％のＥＧＦ含有量低下を表した。しかし、表４に示す
ように、１％カルボマー製剤の場合、１８週目までＥＧＦ含有量の低下が殆ど観
察されないが、プロキサマー製剤やリン酸緩衝液製剤は、いずれも８週目に約２
０％のＥＧＦ含有量低下が表われており、１８週目にも続けて含有量低下が表わ
れたが、その程度は、プロキサマーのほうが大きかった。点眼剤の場合からわか
るように、ポリマーを基剤として用いる場合、時間の経過びよる含有量低下の程
度がリン酸緩衝液より増加しており、その原因はポリマーが長期保管時に、ＥＧ
Ｆの分解をさらに促進するためである。従って、カルボマーを基剤として用いた
製剤の場合のみに、ＥＧＦの安定性を著しく向上させることを確認出来た。
【００３８】 試験例３：クリーム剤、軟膏剤、パッチ剤の安定性試験 実施例６、実施例７及び実施例８において製造されたカルボマー含有剤の安定
性試験のために、４℃または２５℃において保管しながら、２、４、８及び１８
週の時間変化に伴い製剤のＥＧＦ含有量変化を測定した。このとき、実施例２の
１０ｍＭの燐酸緩衝液に溶解させた試料を標準液に用い、ＥＧＦの含有量は、Qu
antikine EGF ELISA kit（R&D, U.S.A）のＥＬＩＳＡ法で定量した。
【００３９】 表５及び表６は、４℃でのクリーム剤、軟膏剤、パッチ剤の安定性を示したも
のである。
【００４０】
【表５】
【００４１】
【表６】
【００４２】 表５に示すように、ＥＧＦ含有量の低下が殆ど観察されず、表６に示すように
、室温保管においてもＥＧＦ含有量低下が殆ど観察されなかった。従って、剤形
に関係なくカルボマーを基剤として用いて製剤のＥＧＦ安定性を改善出来ること
を確認した。
【００４３】
【発明の効果】
前記試験結果からわかるように、本発明は、生物学的に活性であるＥＧＦにカ
ルボキシビニルポリマーを基剤として含有し、生物学及び物理学的安定性を維持
する安定したＥＧＦ組成物を提供する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/32 Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/00 17/02 17/02 27/02 27/02 Ａ６１Ｋ 37/24 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ソン ミ ヨン 大韓民国 449−840 キョンギド ヨンイ ンシ スジウプ プンドクチェンリ スジ テッジゲバツ ２ジグ シンチェンマウル ヒョンデ・アパート 805−1302 (72)発明者 キン ヨン ジュン 大韓民国 132−020 ハンスンシ ドボン グ バンハッドン 498−64 Ｆターム(参考） 4C076 AA06 AA09 AA12 AA77 CC19 EE08 FF63 4C084 AA02 AA03 BA20 BA23 DB53 MA17 MA28 MA32 MA58 MA63 NA03 ZA33 ZA89

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】生物学的活性のある上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）を有効成分と
    し、カルボキシビニルポリマーを基剤として含む安定した組成物。
  2. 【請求項２】生物学的活性のあるＥＧＦが、天然資源から分離するかまたは
    ＤＮＡ組換技術を用いて製造した請求項１に記載の安定した組成物。
  3. 【請求項３】ＥＧＦの含有量が製剤の総量に対して、濃度が０．００１ない
    し１０００μｇ／ｇである請求項１に記載の安定した組成物。
  4. 【請求項４】ＥＧＦの含有量が製剤の総量に対して、濃度が０．１ないし１
    ００μｇ／ｇである請求項１に記載の安定した組成物。
  5. 【請求項５】水溶液中の組成物のｐＨが４ないし８の範囲である請求項１に
    記載の安定した組成物。
  6. 【請求項６】カルボキシビニルポリマーがカルボマー９３４、カルボマー９
    ３４Ｐ、カルボマー９４０、カルボマー９４１またはカルボマー９４７Ｐからな
    る群より選択された請求項１に記載の安定した組成物。
  7. 【請求項７】カルボキシビニルポリマーの含有量が組成物の総量に対し、０
    ．００１ないし５０重量%である安定した請求項１に記載のＥＧＦ組成物。
  8. 【請求項８】カルボキシビニルポリマーの含有量が組成物の総量に対し、０
    ．００５ないし２５重量%である請求項１に記載の安定した組成物。
  9. 【請求項９】カルボキシビニルポリマーの含有量が組成物の総量に対し、０
    ．０１ないし１０重量%である請求項１に記載の安定した組成物。
  10. 【請求項１０】点眼剤である請求項１に記載の安定した組成物。
  11. 【請求項１１】外用剤である請求項１に記載の安定した組成物。
  12. 【請求項１２】クリーム剤である請求項１１に記載の安定した組成物。
  13. 【請求項１３】軟膏剤である請求項１１に記載の安定した組成物。
  14. 【請求項１４】ゲル剤である請求項１１に記載の安定した組成物。
  15. 【請求項１５】パッチ剤である請求項１１に記載の安定した組成物。
  16. 【請求項１６】組成物が、綿、ガーゼ等に塗布または貼着させたものである
    請求項１１に記載の安定した組成物。
JP2001561341A 2000-02-21 2001-02-06 上皮細胞成長因子を有効成分とする安定した組成物 Expired - Lifetime JP3761816B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR2000-8116 2000-02-21
KR10-2000-0008116A KR100366439B1 (ko) 2000-02-21 2000-02-21 상피세포 성장인자를 유효성분으로 하는 안정한 약제학적조성물
PCT/KR2001/000170 WO2001062276A1 (en) 2000-02-21 2001-02-06 A stable composition comprising epidermal growth factor as an active ingredient

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2003523399A true JP2003523399A (ja) 2003-08-05
JP3761816B2 JP3761816B2 (ja) 2006-03-29

Family

ID=19648192

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001561341A Expired - Lifetime JP3761816B2 (ja) 2000-02-21 2001-02-06 上皮細胞成長因子を有効成分とする安定した組成物

Country Status (13)

Country Link
US (2) US20030050238A1 (ja)
EP (1) EP1178818A4 (ja)
JP (1) JP3761816B2 (ja)
KR (1) KR100366439B1 (ja)
CN (1) CN1362883A (ja)
AU (1) AU3240301A (ja)
BR (1) BR0104587A (ja)
CA (1) CA2368364A1 (ja)
HK (1) HK1047712A1 (ja)
ID (1) ID30336A (ja)
MX (1) MXPA01010566A (ja)
RU (1) RU2222344C2 (ja)
WO (1) WO2001062276A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009545587A (ja) * 2006-08-02 2009-12-24 ダエウォン カンパニー リミテッド エステル化レシチンを用いたナノリポソーム及びその製造方法、及びこれを含む皮膚疾患の予防又は治療用組成物
JP2010505942A (ja) * 2006-10-09 2010-02-25 デウン カンパニー，リミテッド 上皮細胞増殖因子を含有する安定な口内炎治療用液状組成物
JP2010215526A (ja) * 2009-03-13 2010-09-30 Pias Arise Kk 皮膚外用組成物

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100366439B1 (ko) * 2000-02-21 2003-01-09 주식회사 대웅 상피세포 성장인자를 유효성분으로 하는 안정한 약제학적조성물
TWI348912B (en) * 2002-03-12 2011-09-21 Method and composition for treating skin wounds with epidermal growth factor
CN101172091B (zh) * 2007-09-25 2011-04-27 北京美福源生物医药科技有限公司 含人血清白蛋白与皮肤细胞生长因子的融合蛋白护肤产品制备工艺和用途
TW200505394A (en) * 2003-06-06 2005-02-16 Asahi Medical Co Material promoting wound healing
US8481049B2 (en) 2005-05-27 2013-07-09 Bharat Biotech International Limited Methods for treating a wound using epidermal growth factor formulation
KR100748390B1 (ko) * 2005-11-14 2007-08-10 주식회사 대웅 상피세포성장인자를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형
GB0916124D0 (en) 2009-09-15 2009-10-28 Univ Cardiff Method and kit for the classification and prognosis of wounds
GB201021182D0 (en) 2010-12-14 2011-01-26 Univ Cardiff Methdo and kit for the classification and prognosis of chronic wounds
GB201103898D0 (en) 2011-03-08 2011-04-20 Univ Cardiff Molecular targets for healing or treating wounds
ES2502691B1 (es) * 2013-09-25 2015-07-07 Sani-Red, S.L. Método de conservación y estabilización de proteínas, aplicable para desarrollos industriales de formulaciones de productos sanitarios, farmacéuticos y cosméticos
CN105078784B (zh) * 2014-04-25 2018-07-20 张文炜 肽类护肤品及其制备方法
CN104644464A (zh) * 2015-02-06 2015-05-27 深圳唯美度生物科技有限公司 一种提高细胞活力的防干燥油及其制备方法
KR101777910B1 (ko) 2015-04-30 2017-09-13 주식회사 제네웰 만성창상 치료용 조성물, 이의 제조방법 및 이를 이용한 만성창상 치료용 드레싱재
KR20180060701A (ko) 2016-11-29 2018-06-07 주식회사 엔씨엘바이오 표피 생장 인자를 함유하는 피부 상태 개선용 조성물

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4717717A (en) * 1986-11-05 1988-01-05 Ethicon, Inc. Stabilized compositions containing epidermal growth factor
NZ235556A (en) * 1986-11-05 1991-06-25 Ethicon Inc Breast milk substitute containing recombinant human egf
NZ226171A (en) * 1987-09-18 1990-06-26 Ethicon Inc Gel formulation containing polypeptide growth factor
IN172390B (ja) * 1989-07-18 1993-07-10 Ethicon Inc
JPH05132426A (ja) * 1991-02-15 1993-05-28 Takeda Chem Ind Ltd 骨組織の形成促進剤
CU22405A1 (es) * 1993-07-05 1996-01-31 Cigb Composicion cosmetica para el cuidado de la piel
US6541447B1 (en) * 1999-09-01 2003-04-01 B & M Healthcare Technologies, Inc. Wound healing composition and method for use thereof
KR100377397B1 (ko) * 1999-12-23 2003-03-26 주식회사 대웅 레티놀 및 표피성장인자를 함유하는 피부보호 화장료 조성물
KR100366439B1 (ko) * 2000-02-21 2003-01-09 주식회사 대웅 상피세포 성장인자를 유효성분으로 하는 안정한 약제학적조성물

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009545587A (ja) * 2006-08-02 2009-12-24 ダエウォン カンパニー リミテッド エステル化レシチンを用いたナノリポソーム及びその製造方法、及びこれを含む皮膚疾患の予防又は治療用組成物
JP2010505942A (ja) * 2006-10-09 2010-02-25 デウン カンパニー，リミテッド 上皮細胞増殖因子を含有する安定な口内炎治療用液状組成物
US9155697B2 (en) 2006-10-09 2015-10-13 Daewoong Co., Ltd. Stable liquid compositions for treating stomatitis comprising epidermal growth factor
JP2010215526A (ja) * 2009-03-13 2010-09-30 Pias Arise Kk 皮膚外用組成物

Also Published As

Publication number Publication date
US20030050238A1 (en) 2003-03-13
EP1178818A1 (en) 2002-02-13
CN1362883A (zh) 2002-08-07
BR0104587A (pt) 2002-01-08
ID30336A (id) 2001-11-22
KR100366439B1 (ko) 2003-01-09
RU2222344C2 (ru) 2004-01-27
CA2368364A1 (en) 2001-08-30
HK1047712A1 (zh) 2003-03-07
MXPA01010566A (es) 2002-11-04
AU3240301A (en) 2001-09-03
EP1178818A4 (en) 2009-05-13
US20050186280A1 (en) 2005-08-25
KR20010081888A (ko) 2001-08-29
JP3761816B2 (ja) 2006-03-29
WO2001062276A1 (en) 2001-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3761816B2 (ja) 上皮細胞成長因子を有効成分とする安定した組成物
JP2763815B2 (ja) 表皮成長因子を含有する安定化された組成物
DE69617723T2 (de) Wachsumsfaktoren enthaltende gelformulierungen
WO2005070451A1 (en) Pharmaceutical composition comprising non-glycosylated erythropoietin
CN100420439C (zh) 双胍衍生物在制备具有瘢痕形成作用的医药产品中的应用
JP4627727B2 (ja) 多価金属無機塩被覆レチノイン酸ナノ粒子含有組成物
JP2001522804A (ja) 浸透増強および刺激減少システム
JP2002531526A (ja) 無水状態の局所的皮膚調製剤
JP3236916B2 (ja) 細胞及び組織を再生させる活性を有する薬剤、該薬剤を含有する安定化された組成物及びそれらの治療的、外科的及び美容学的用途
JP2010505942A (ja) 上皮細胞増殖因子を含有する安定な口内炎治療用液状組成物
WO2005023282A1 (ja) 生理活性タンパク質またはペプチドを含有するナノ粒子およびその製造方法、ならびに当該ナノ粒子からなる外用剤
AU2001277767B2 (en) Skin wound healing promoters
JP3624158B2 (ja) ヒト上皮成長因子を含有する皮膚外用剤組成物
JP4096115B2 (ja) 皮膚創傷治癒促進剤
JP3572092B2 (ja) 線維芽細胞成長因子含有フィルム製剤
CN113134075B (zh) 一种抗菌肽乳膏及其制备方法
JP3827259B2 (ja) 表皮角質化促進剤
US11497765B1 (en) Thioctamer expedites wound healing
KR100231805B1 (ko) 인간상피세포 성장인자를 함유하는 피부외용제 조성물
MXPA00008669A (en) Topical composition containing human epidermal growth factor
JP3026330B2 (ja) アゼラスチン或いはその塩類含有経皮適用製剤
JPH09194379A (ja) 皮膚創傷治療剤
JPH0757728B2 (ja) 皮膚用製剤

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20050816

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20051031

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20060104

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20060111

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

Ref document number: 3761816

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090120

Year of fee payment: 3

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100120

Year of fee payment: 4

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110120

Year of fee payment: 5

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120120

Year of fee payment: 6

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130120

Year of fee payment: 7

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140120

Year of fee payment: 8

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term