JP2002504518A - 部分的に構造化されたミセルー様凝集体を形成する、２５％を超えるヘリックス−含有率を有するｇｌｐ−１誘導体 - Google Patents
部分的に構造化されたミセルー様凝集体を形成する、２５％を超えるヘリックス−含有率を有するｇｌｐ−１誘導体Info
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、改良された溶解性及び/又は安定性のGLP−1誘導体を含んで成る医薬組成物、及びGLP−1又はそのフラグメント又は類似体の溶解性及び/又は安定性を改良するための方法に関する。
Description
【０００１】 発明の分野： 本発明は、改良された溶解性及び/又は安定性のGLP−1誘導体を含んで成る医 薬生組成物、及びGLP−1、又はそのフラグメント又は類似体の溶解性及び/又は 安定性を改良するための方法に関する。
【０００２】 発明の背景： ペプチドは、医薬的実務において広く使用されており、そしてそれらは組換え
技法により生成され得るので、それらの重要性はまた年々高まるであろうことが
予測され得る。
技法により生成され得るので、それらの重要性はまた年々高まるであろうことが
予測され得る。
【０００３】 インスリン分泌を調節するホルモンは、インスリンの初期のそして強化された
放出を促進する、腸における栄養物の存在及び吸収に応答して胃腸粘膜から放出
されるホルモングループを示す、いわゆるエンテロインスラーアクシス（entero
insular axis）に属する。インスリン分泌に対する増強効果、いわゆるインクレ
チン効果は、たぶん、通常のグルコース耐性のために必須である。
放出を促進する、腸における栄養物の存在及び吸収に応答して胃腸粘膜から放出
されるホルモングループを示す、いわゆるエンテロインスラーアクシス（entero
insular axis）に属する。インスリン分泌に対する増強効果、いわゆるインクレ
チン効果は、たぶん、通常のグルコース耐性のために必須である。
【０００４】 多くの胃腸ホルモン、たとえばガストリン及びセクレチン（コレシストキニン
はヒトにおいてインスリン向性ではない）はインスリン向性ではないが、しかし
単なる生理学的に重要なもの、すなわちインクレチン効果を担当するホルモング
ルコース依存性インスリン向性ポリペプチド（GIP）及びグルカゴン様ペプチド −１（GLP−１）である。インスリン向性効果のために、1973年（１）に単離さ れたGIPは、糖尿病学者間で相当の興味を誘引した。しかしながら、その後に行 われた多くの研究は、GIPの欠陥分泌がインスリン依存性糖尿病（IDDM）又はイ ンスリン非依存性糖尿病（NIDDM）の病因論に包含されないことを明確に示した 。
はヒトにおいてインスリン向性ではない）はインスリン向性ではないが、しかし
単なる生理学的に重要なもの、すなわちインクレチン効果を担当するホルモング
ルコース依存性インスリン向性ポリペプチド（GIP）及びグルカゴン様ペプチド −１（GLP−１）である。インスリン向性効果のために、1973年（１）に単離さ れたGIPは、糖尿病学者間で相当の興味を誘引した。しかしながら、その後に行 われた多くの研究は、GIPの欠陥分泌がインスリン依存性糖尿病（IDDM）又はイ ンスリン非依存性糖尿病（NIDDM）の病因論に包含されないことを明確に示した 。
【０００５】 さらに、インスリン向性ホルモンとして、GIPはNIDDMにおいて最も無能である
ことが見出された（２）。他のインクレチンホルモン、すなわちGLP−１は既知 の最も可能性あるインスリン向性物質である（３）。GIPとは異なって、驚くべ きことには、それはNIDDM患者におけるインスリン分泌を刺激することに効果的 である。さらに、及び他のインスリン向性ホルモン（たぶん、セクレチンを除く
）に比較して、それはまた、グルカゴン分泌を強く阻害する。それらの作用のた
めに、それはNIDDMを有する患者においては、特に効果を低める明白な血液グル コースを有する。
ことが見出された（２）。他のインクレチンホルモン、すなわちGLP−１は既知 の最も可能性あるインスリン向性物質である（３）。GIPとは異なって、驚くべ きことには、それはNIDDM患者におけるインスリン分泌を刺激することに効果的 である。さらに、及び他のインスリン向性ホルモン（たぶん、セクレチンを除く
）に比較して、それはまた、グルカゴン分泌を強く阻害する。それらの作用のた
めに、それはNIDDMを有する患者においては、特に効果を低める明白な血液グル コースを有する。
【０００６】 GLP−１、すなわちプログルカゴンの生成物（４）は、セクレチン−VIPファミ
リーのペプチドの最も若いメンバーの１つであるが、しかしグルコース代謝及び
胃腸分泌代謝において調節機能を有する重要な腸ホルモンとしてすでに確立され
ている（５）。グルカゴン遺伝子は膵臓及び腸において異なって処理される。膵
臓（９）においては、その処理は、１）プログルカゴン（PG）の位置33−61を占
めるグルカゴン自体；２）しばしば、グリセリン関連膵臓ペプチド、すなわちGR
PPと呼ばれる30個のアミノ酸（PG(1−30)）のN−末端ペプチド（10, 11）；３）
PG（64−69）に対応するヘキサペプチド；及び４）最終的に、２つのグルカゴン
様配列が隠されている、いわゆる主要プログルカゴンフラグメント（PG（72−15
8））（９）の形成及び同時の分泌を導く。
リーのペプチドの最も若いメンバーの１つであるが、しかしグルコース代謝及び
胃腸分泌代謝において調節機能を有する重要な腸ホルモンとしてすでに確立され
ている（５）。グルカゴン遺伝子は膵臓及び腸において異なって処理される。膵
臓（９）においては、その処理は、１）プログルカゴン（PG）の位置33−61を占
めるグルカゴン自体；２）しばしば、グリセリン関連膵臓ペプチド、すなわちGR
PPと呼ばれる30個のアミノ酸（PG(1−30)）のN−末端ペプチド（10, 11）；３）
PG（64−69）に対応するヘキサペプチド；及び４）最終的に、２つのグルカゴン
様配列が隠されている、いわゆる主要プログルカゴンフラグメント（PG（72−15
8））（９）の形成及び同時の分泌を導く。
【０００７】 グルカゴンは単に生物学的活性生成物と思われる。対照的に、腸粘膜において
は、それは、大きな分子に隠されているグルカゴンであるが、ところが２つのグ
ルカゴン様ペプチドが別々に形成される（８）。次の生成物が形成され、そして
同時に分泌される：１）残基番号33−61を占めるグルカゴン配列を有する、PG（
１−69）に対するグリセンチン（12）；２）不活性である、本来考えられている
PG（72−107）アミド又は108としてではなく、GLP−１（7−36）アミド（PG（78
−107）アミド）（13）。
は、それは、大きな分子に隠されているグルカゴンであるが、ところが２つのグ
ルカゴン様ペプチドが別々に形成される（８）。次の生成物が形成され、そして
同時に分泌される：１）残基番号33−61を占めるグルカゴン配列を有する、PG（
１−69）に対するグリセンチン（12）；２）不活性である、本来考えられている
PG（72−107）アミド又は108としてではなく、GLP−１（7−36）アミド（PG（78
−107）アミド）（13）。
【０００８】 少量のC−末端グリシン−延長されているが、しかし同じ程度に生物活性的なG
LP−１（７−37）（PG（78−108））アミド（14）、すなわち３）介在ペプチド −２（PG（111−122）アミド）（15）；及びGLP−２（PG（126−158））（15, 1
6）がまた形成される。グリセンチンの画分がさらに、GRPP（PG（１−30））及 びオキシントモジュリン（PG（33−69）に分解される（17, 18）。それらのペプ
チドのうち、GLP−１が最も著しい生物学的活性を有する。
LP−１（７−37）（PG（78−108））アミド（14）、すなわち３）介在ペプチド −２（PG（111−122）アミド）（15）；及びGLP−２（PG（126−158））（15, 1
6）がまた形成される。グリセンチンの画分がさらに、GRPP（PG（１−30））及 びオキシントモジュリン（PG（33−69）に分解される（17, 18）。それらのペプ
チドのうち、GLP−１が最も著しい生物学的活性を有する。
【０００９】 GLP−1のアミノ酸配列は、例えばSchmidtなど.（Diabetologia 28: 704-707 (
1984)）により与えられている。GLP−1（７−37）及びその類似体の興味ある薬 理学的性質は、最近、一層の注目を集めて来たが、それらの分子の構造について
は、ほとんど知られていない。ミセルにおけるGLP−１の二次構造は、Thortonな
ど.(Biochemistry 33: 3532-3539 (1994))により記載されているが、しかし通常
の溶液においては、GLP−１は非常に柔軟な分子であると思われる。驚くべきこ とには、本発明は、この比較的小さく且つ非常に柔軟な分子の誘導体化が、その
血漿プロフィールが非常に延長され、そしてさらに、活性保持している化合物を
もたらすことを見出した（PCC出願番号DK97/00340号）。
1984)）により与えられている。GLP−1（７−37）及びその類似体の興味ある薬 理学的性質は、最近、一層の注目を集めて来たが、それらの分子の構造について
は、ほとんど知られていない。ミセルにおけるGLP−１の二次構造は、Thortonな
ど.(Biochemistry 33: 3532-3539 (1994))により記載されているが、しかし通常
の溶液においては、GLP−１は非常に柔軟な分子であると思われる。驚くべきこ とには、本発明は、この比較的小さく且つ非常に柔軟な分子の誘導体化が、その
血漿プロフィールが非常に延長され、そしてさらに、活性保持している化合物を
もたらすことを見出した（PCC出願番号DK97/00340号）。
【００１０】 多くの注目がアシル化されたGLP−１誘導体の薬理学的性質に向けられて来た が、それらの物理−化学的性質及び溶液構造性質については、これまでほとんど
知られていない。そのような知識は、たとえば生成、精製及び配合作業の間、合
理的な取り扱いのために必要条件であり、そして結果的には、延長機構のための
構造的基礎の理解のために重要である。
知られていない。そのような知識は、たとえば生成、精製及び配合作業の間、合
理的な取り扱いのために必要条件であり、そして結果的には、延長機構のための
構造的基礎の理解のために重要である。
【００１１】 GLP−1及びGLP−1の類似体、及びそれらのフラグメントは、例えばI型及びII 型糖尿病の処理において実質的に有用である。しかしながら、溶解性の制限及び
内因性ジアミノペプチジルペプチダーゼの作用に対する低い安定性が、それらの
化合物の有用性を制限し、そして従って、この分解における改良性の必要性がま
だ存在する。従って、改良された溶解性及び安定性を有するGLP−１誘導体を含 んで成る医薬溶液を提供することが、本発明の１つの目的である。
内因性ジアミノペプチジルペプチダーゼの作用に対する低い安定性が、それらの
化合物の有用性を制限し、そして従って、この分解における改良性の必要性がま
だ存在する。従って、改良された溶解性及び安定性を有するGLP−１誘導体を含 んで成る医薬溶液を提供することが、本発明の１つの目的である。
【００１２】 参考文献： １．Pederson RA. Gastric inhibitory Polypeptide. In Walsh JH, Dockray
GJ (eds) Gut peptides: Biochemistry and Physiology. Raven Press, New Yor
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1988; 9; 122-134. ３．Orskov C. Glucagon-like peptide-1, a new hormone of the enteroinsu
lar axis. Diabeto-logia 1992; 35: 701-711. ４．Bell Gl, Sanchez-Pescador R, Layboum PJ, Najarian RC. Exon doplica
ion and divergence in the human preproglucagon gene. Nature 1983; 304: 3
68-371. ５．Holst JJ. Glucagon-like peptide-1 (GLP-1)-a newly discovered GL ho
rmone. Gastroenterology 1994; 107: 1848-1855.
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【００１３】 ６．Holst JJ. Gut glucagon, enteroglucagon, gut GLI, glicentin-current
status. Gastroenterology 1983; 84: 1602-1613. ７．Holst JJ, Orskov C. Glucagon and other proglucagon-derived peptide
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n OV. Glucagon-like peptides GLP-1 and GLP-2, predicted products of the
glucagon gene, are secreted separately from the pig small, but not pancr
eas. Endocrinology 1986; 119 : 1467-1475. ９．Holst JJ, Bersani M, Johnsen AH, Kofod H, Hartmann B, Orskov C. Pr
oglucagon processing in porcine and human pancreas. J Biol Chem, 1994; 2
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glucagon gene, are secreted separately from the pig small, but not pancr
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【００１４】 10．Moody AH, Holst JJ, Thim L, Jensen SL. Relationship of glicentin t
o proglucagon and glucagon in the porcine pancreas. Nature 1981; 289: 51
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glicentin-related pancreatic peptide (proglucagon fragment) from porcine
pancreas. Biochim Biophys Acta 1982; 2: 139-141. 12．Thim L, Moody AJ. The primary structure of glicentin (proglucagon)
. Regul Pept 1981; 2: 139-151. 13．Orskov C. Bersani M, Johnsen AH, Hojrup P, Holst JJ. Complete sequ
ences of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) from human and pig small intest
ine. J. Biol. Chem. 1989; 264: 12826-12829.
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and secretion of amidated and glycine-extended glucagon-like peptide-1 (
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ll intesine. J. Biol. Chem. 1988; 263: 8621-8624, 16. Orskov C, Buhl T, Rabenhoj L, Kofod H, Holst JJ: Carboxypeptidase-
B-like processing of the C-terminus of glucagon-like peptide-2 in pig an
d human small intestine. FEBS letters, 1989; 247: 193-106. 17．Holst JJ. Evidence that enteroglucagon (11) is identical with the
C-terminal sequence (residues 33-69) of glicentin. Biochem J. 1980; 187:
337-343.
and secretion of amidated and glycine-extended glucagon-like peptide-1 (
GLP-1) in man, Diabetes 1991; 43: 535-539. 15．Buhl T. Thim L, Kofod H. Orskov C, Harling H, & Holst JJ: Naturall
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【００１６】 18．Bataille D, Tatemoto K, Gespach C, Jornvall H, Rosselin G, Mutt V.
Isolation of glucagon-37 (bioactive enteroglucagon/oxyntomodulin) from
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gical effects of GLP-1 7-36amide and GLP-1 7-37 in healthy volunteers ar
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ucagon-like peptide-1 (7-36) amide and glucose-dependent insulinotropic
polypeptide secretion in response to nutrient ingestion in man: acute po
st-prandial and 24-h secreion pattems. J Endocrinol 1993; 138: 159-166.
Isolation of glucagon-37 (bioactive enteroglucagon/oxyntomodulin) from
porcine jejuno-ileum. Characte-risation of the peptide. FEBS Lett 1982;
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ucagon-like peptide-1 (7-36) amide and glucose-dependent insulinotropic
polypeptide secretion in response to nutrient ingestion in man: acute po
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【００１７】 21．Kolligs F, Fehmann HC, Goke R, Goke B. Reduction of the incretin e
ffect in rats by the glucagon-like peptide-1 receptor antagonist exendin
(9-39) amide. Diabetes 1995; 44: 16-19. 22．Wang Z, Wang RM, Owji AA, Smith DM, Ghatei M, Bloom SR. Glucagon-l
ike peptide-1 is a physiological incretin in rat. J. Clin. Invest. 1995;
95: 417-421. 23．Thorens B. Expression cloning of the pancreatic b cell receptor fo
r the gluco-incretin hormone glucagon-like peptide 1. Proc Natl Acad Sci
1992; 89: 8641-4645. 24．Scrocchi. L, Auerbach AB, Joyner AL, Drucker DJ. Diabetes in mice
with targeted disruption of the GLP-1 receptor gene. Diabetes 1995; 45:
21A.
ffect in rats by the glucagon-like peptide-1 receptor antagonist exendin
(9-39) amide. Diabetes 1995; 44: 16-19. 22．Wang Z, Wang RM, Owji AA, Smith DM, Ghatei M, Bloom SR. Glucagon-l
ike peptide-1 is a physiological incretin in rat. J. Clin. Invest. 1995;
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【００１８】 25．Fehmann HC, Goke R, Goke B. Cell and molecular biology of the incr
etin hormones glucagon-like peptide-1 (GLP-1) and glucose-dependent insu
lin releasing polypeptide (GLP). Endocrine Reviews, 1995; 16: 390-410. 26．Gromada J, Dissing S, Bokvist K, Renstrom E, Frokjiaer-Jensen J, W
ulff BS. Rorsman P. Glucagon-like peptide 1 increases cytoplasmic calciu
m in insulin-secreting bTC3-cells by enhancement of intracellular calciu
m mobilisation. Diabetes 1995; 44: 767-774. 27．Holz GG, Leech CA, Habener JF. Activation of a cAMP-regulated Ca2+
-signaling pathway in pancreatic β-cells by the insulinotropic hormone
glucagon-like peptide-1. J Biol Chem, 1996; 270: 17749-17759.
etin hormones glucagon-like peptide-1 (GLP-1) and glucose-dependent insu
lin releasing polypeptide (GLP). Endocrine Reviews, 1995; 16: 390-410. 26．Gromada J, Dissing S, Bokvist K, Renstrom E, Frokjiaer-Jensen J, W
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m in insulin-secreting bTC3-cells by enhancement of intracellular calciu
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【００１９】 28．Holz GG, Kuhitreiber WM, Habener JF. Pancreatic bata-cells are ren
dered glucose competent by the insulinotropic hormone glucagon-like pept
ide-1 (7-37). Nature 1993; 361: 363-365. 29．Orskov C, Holst JJ, Nielsen OV: Effect of truncated glucagon-like
peptide-1 (proglucagon 78-107 amide) on endocrine secretion fromo pig pa
ncreas, antrum and stomach. Endocrinology 1988; 123: 2009-2013. 30．Hvidberg A, Toft Nieisen M, Hilsted J, Orskov C, Holst JJ. Effect
of glucagon-like peptide-1 (proglucagon 78-107 amide) on hepatic glucose
production in healthy man. Metabolism 1994; 43: 104-108. 31．Qualmann C, Nauck M, Holst JJ, Orskov C, Creutzfeldt W. Insulinotr
opic actions of intravenous glucagon-like peptide-1 (7-36 amide) in the
fasting state in healthy subjects Acta Diabetologica, 1995; 32: 13-16.
dered glucose competent by the insulinotropic hormone glucagon-like pept
ide-1 (7-37). Nature 1993; 361: 363-365. 29．Orskov C, Holst JJ, Nielsen OV: Effect of truncated glucagon-like
peptide-1 (proglucagon 78-107 amide) on endocrine secretion fromo pig pa
ncreas, antrum and stomach. Endocrinology 1988; 123: 2009-2013. 30．Hvidberg A, Toft Nieisen M, Hilsted J, Orskov C, Holst JJ. Effect
of glucagon-like peptide-1 (proglucagon 78-107 amide) on hepatic glucose
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【００２０】 32．Nauck MA, Heimesaat MM, Orskov C, Holst JJ, Ebiert R, Creutsfeldt
W. Preserved incretin activity of GLP-1 (7-36 amide) but not of syntheti
c human GIP in patients with type 2-diabetes mellitus. J Clin Invest 199
3; 91: 301-307. 33．Nauck MA, Kleine N, Orskov C, Hoist JJ, Willms B, Creutzfeldt W. N
ormalisation of fasting hyperglycaemia by exogenous GLP-1(7-36 amide) in
type 2-diavetic patients. Diabetologia 1993; 36: 741-744. 34．Creutzfeldt W, Kleine N, Willms B, Orskov C, Holst JJ, Nauck MA. G
lucagonostatic actions and reduction of fasting Hyperglycaemia by exogen
ous gIucagon-liem, peptide-1 (7-36 amide) in type I diabetic patients. D
iabetes Care 1996; 19: 580-586.
W. Preserved incretin activity of GLP-1 (7-36 amide) but not of syntheti
c human GIP in patients with type 2-diabetes mellitus. J Clin Invest 199
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ormalisation of fasting hyperglycaemia by exogenous GLP-1(7-36 amide) in
type 2-diavetic patients. Diabetologia 1993; 36: 741-744. 34．Creutzfeldt W, Kleine N, Willms B, Orskov C, Holst JJ, Nauck MA. G
lucagonostatic actions and reduction of fasting Hyperglycaemia by exogen
ous gIucagon-liem, peptide-1 (7-36 amide) in type I diabetic patients. D
iabetes Care 1996; 19: 580-586.
【００２１】 35．Schjoldager BTG, Mortensen PE, Christiansen J. Orskov C, Holst JJ.
GLP-1 (glucagon-like peptide-1) and truncated GLP-1, fragments of human
proglucagon, inhibit gastric acid secretion in man. Dis, Sci. 1989; 35:
703-708. 36．Wettergren A, Schjoldager B, Mortensen PE, Myhre J, Christiansen J
, Holst JJ. Truncated GLP-1 (proglucagon 72-107 amide) inhibits gastric
and pancreatic function in man. Dig Dis Sci 1993; 38: 665-673. 37．Layer P, Holst JJ, Grandt D, Goebell H: ileal release of glucagon-
like peptide-1 (GLP-1): association witu inhibition of gastric acid in h
umans. Dig Dis Sci 1995; 40: 1074-1082.
GLP-1 (glucagon-like peptide-1) and truncated GLP-1, fragments of human
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and pancreatic function in man. Dig Dis Sci 1993; 38: 665-673. 37．Layer P, Holst JJ, Grandt D, Goebell H: ileal release of glucagon-
like peptide-1 (GLP-1): association witu inhibition of gastric acid in h
umans. Dig Dis Sci 1995; 40: 1074-1082.
【００２２】 38．Layer P, Holst JJ. GLP-1: A Humoral mediator of the ileal brake in
humans? Digestion 1993; 54: 385-386. 39．Nauck M, Ettler R, Niedereichholz U, Orskov C, Hoist JJ, Schmiegel
W. Inhibition of gastric emptying by GLp-1(7-36 mide) or (7-37): effect
s on postprandial glycaemia and insulin secretion. Abstract. Gut 1995; 3
7 (suppl.2): A124. 40．Schic RR, vorm Walde T, Zimmermann JP, Schusdziarra V, Classen M.
Glucagon-like peptide 1-a novel brain peptide involved in feeding regula
tion, in Ditchuneit H, Gries FA, Hauner H, Schusdziarra V, Wechsler JG (
eds.) Obesity in Europe. John Libbey & Company ltd, 1994: pp.363-367.
humans? Digestion 1993; 54: 385-386. 39．Nauck M, Ettler R, Niedereichholz U, Orskov C, Hoist JJ, Schmiegel
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s on postprandial glycaemia and insulin secretion. Abstract. Gut 1995; 3
7 (suppl.2): A124. 40．Schic RR, vorm Walde T, Zimmermann JP, Schusdziarra V, Classen M.
Glucagon-like peptide 1-a novel brain peptide involved in feeding regula
tion, in Ditchuneit H, Gries FA, Hauner H, Schusdziarra V, Wechsler JG (
eds.) Obesity in Europe. John Libbey & Company ltd, 1994: pp.363-367.
【００２３】 41．Tang-Christensen M, Larsen PH, Goke R, Fink-Jensen A, Jessop DS, M
oller M, Sheikh S. Brain GLP-1 (7-36) amide receptors play a major role
in regulation of food and water intake. Am. J. Physiol., 1996, in press. 42．Turton MD, O'Shea D, Gunn I, Beak SA, Edwards CMB, Meeran K, et al
. A role for glucagon-like peptide-1 in the regulation of feeding. Natur
e 1996; 379: 69-72. 43．Willms B, Werner J, Creutzfeldt W, Orskov C, Holst JJ, Nauck M, in
hibition of gastric emptying by glucagon-like peptide-1 (7-36 amide) in
patients with type-2-diabetes mellitus. Diabetologia 1994; 37, suppl. 1:
A118.
oller M, Sheikh S. Brain GLP-1 (7-36) amide receptors play a major role
in regulation of food and water intake. Am. J. Physiol., 1996, in press. 42．Turton MD, O'Shea D, Gunn I, Beak SA, Edwards CMB, Meeran K, et al
. A role for glucagon-like peptide-1 in the regulation of feeding. Natur
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hibition of gastric emptying by glucagon-like peptide-1 (7-36 amide) in
patients with type-2-diabetes mellitus. Diabetologia 1994; 37, suppl. 1:
A118.
【００２４】 44．Larsen J, Jallad N, Damsbo P. One-week continuous infusion of GLP-
1 (7-37) improves glycaemic control in NIDDM. Diabetes 1996; 45, suppl.
2: 233A. 45．Ritzel R, Orskov C, Holst JJ, Nauck MA. Pharmacokinetic, insulinot
ropic, and gludagonostatic properties of GLP-1 (7-36 amide) after subcut
aneous injection in healthy volunteers. Dose-response relationships. Dia
betologia 1995; 38: 720-725. 46．Deacon CF, Johnsen AH, Holst JJ. Degradation of glucagon-like pept
ide-1 by human plasima in vitro yields an N-terminally truncated peptide
that is a major endogenous metabolite in vivo. J Clin Endocrinol Metab
1995; 80: 952-957.
1 (7-37) improves glycaemic control in NIDDM. Diabetes 1996; 45, suppl.
2: 233A. 45．Ritzel R, Orskov C, Holst JJ, Nauck MA. Pharmacokinetic, insulinot
ropic, and gludagonostatic properties of GLP-1 (7-36 amide) after subcut
aneous injection in healthy volunteers. Dose-response relationships. Dia
betologia 1995; 38: 720-725. 46．Deacon CF, Johnsen AH, Holst JJ. Degradation of glucagon-like pept
ide-1 by human plasima in vitro yields an N-terminally truncated peptide
that is a major endogenous metabolite in vivo. J Clin Endocrinol Metab
1995; 80: 952-957.
【００２５】 47．Deacon CF, Nauck MA, Toft-nielsen M, Pridal L, Willms B, Holst JJ.
1995. Both subcutaneous and intravenously administered glucagon-like pe
ptide-1 are rapidly degraded from the amino terminus in type II diabetic
patients and in healthy subjects. Diabetes 44: 1126-1131.
1995. Both subcutaneous and intravenously administered glucagon-like pe
ptide-1 are rapidly degraded from the amino terminus in type II diabetic
patients and in healthy subjects. Diabetes 44: 1126-1131.
【００２６】 発明の要約： ヒトGLP−１は、回腸、膵臓及び脳におけるL−細胞において合成されるプレプ
ログルカゴンに起因する37個のアミノ酸残基のペプチドである。GLP−1(7-36)ア
ミド、GLP−１(7-37)及びGLP−2を提供するために、プレプログルカゴンのプロ セッシングが、主にL−細胞において生じる。単純なシステムが、このペプチド のフラグメント及び類似体を記載するために使用される。従って、たとえばGly8 −GLP−１（7−37）は、アミノ酸残基１〜６を欠失し、そして位置８における天
然に存在するアミノ酸残基（Ala）をGlyにより置換することによって、GLP−１ に形式的に由来するGLP−１のフラグメントを示す。
ログルカゴンに起因する37個のアミノ酸残基のペプチドである。GLP−1(7-36)ア
ミド、GLP−１(7-37)及びGLP−2を提供するために、プレプログルカゴンのプロ セッシングが、主にL−細胞において生じる。単純なシステムが、このペプチド のフラグメント及び類似体を記載するために使用される。従って、たとえばGly8 −GLP−１（7−37）は、アミノ酸残基１〜６を欠失し、そして位置８における天
然に存在するアミノ酸残基（Ala）をGlyにより置換することによって、GLP−１ に形式的に由来するGLP−１のフラグメントを示す。
【００２７】 同様に、Lys34（Nε−テトラデカノイル）−GLP−１（7−37）は、位置34にお
けるLys残基のε−アミノ基がテトラデカノイル化されているGLP-1（7−37）を 示す。この情況において、C−末端延長されたGLP−１類似体が言及される場合、
位置38におけるアミノ酸残基は、特にことわらない限りArgであり、位置39にお ける任意のアミノ酸残基は、特にことわらない限り、またArgであり、そして位 置40での任意のアミノ酸残基は、特にことわらない限りAspである。
けるLys残基のε−アミノ基がテトラデカノイル化されているGLP-1（7−37）を 示す。この情況において、C−末端延長されたGLP−１類似体が言及される場合、
位置38におけるアミノ酸残基は、特にことわらない限りArgであり、位置39にお ける任意のアミノ酸残基は、特にことわらない限り、またArgであり、そして位 置40での任意のアミノ酸残基は、特にことわらない限りAspである。
【００２８】 また、C−末端延長された類似体が位置41, 42, 43, 44に延長する場合、この 延長のアミノ酸配列は、特にことわらない限り、ヒトプレプログルカゴンにおけ
るその対応する配列における通りである。 PCT出願番号DK97/00340号は，非常に延長されることが見出されている種々のG
LP−1誘導体を記載する。GLP−１及びGLP−１類似体は、定義される溶液構造に 起因しない分子であるが、本発明者は、それらの延長されたGLP−１誘導体のい くつかが広い濃度範囲にわたって安定できる部分的に構造体化されたミセル−様
凝集形で存在できることを見出した。
るその対応する配列における通りである。 PCT出願番号DK97/00340号は，非常に延長されることが見出されている種々のG
LP−1誘導体を記載する。GLP−１及びGLP−１類似体は、定義される溶液構造に 起因しない分子であるが、本発明者は、それらの延長されたGLP−１誘導体のい くつかが広い濃度範囲にわたって安定できる部分的に構造体化されたミセル−様
凝集形で存在できることを見出した。
【００２９】 円二色性（CD）は、GLP−１誘導体がそれらの濃度に関係なく、一定の部分的 に構造体化された配置（structured conformation）を有することを示すために 使用される。対照的に、通常のGLP−１(7-37)に関しては、ヘリックス含有率の 上昇が、ペプチド自己−会合を伴って、10−15％〜30−35％（500μmの濃度で）
で、濃度の上昇と共に見出される。水溶液において部分的に構造体化されたミセ
ル−様凝集体を形成するGLP−１誘導体に関しては、ヘリックス含有率は、10μM
の濃度で30％以上の含有率で存続する。この凝集され、構造体化された配置は、
なんらの追加の構造−誘導成分（structure-inducing component）も必要としな
いで、水又は希釈水性緩衝液に存在する誘導体の固有の性質である。
で、濃度の上昇と共に見出される。水溶液において部分的に構造体化されたミセ
ル−様凝集体を形成するGLP−１誘導体に関しては、ヘリックス含有率は、10μM
の濃度で30％以上の含有率で存続する。この凝集され、構造体化された配置は、
なんらの追加の構造−誘導成分（structure-inducing component）も必要としな
いで、水又は希釈水性緩衝液に存在する誘導体の固有の性質である。
【００３０】 従って、その広い観点においては，本発明は、22±2℃で水中において、222nm
でCDにより測定される場合、約10μMのペプチド濃度で、25％以上，好ましくは2
5%〜50%のへリックス含有率を有するGLP−１誘導体を含んで成る医薬組成物に関
する。 部分的にヘリカルのミセル−様凝集体のサイズは、サイズ排除クロマトグラフ
ィーにより推定される。同様に、ペプチドの見掛け（決定的なミセル濃度）CMC は、適切な色素の存在下で濃度依存性蛍光から推定され得る（たとえば、Brito,
R. &VaZ, W. (1986) Anal. Biochem. 152: 250-255 ）。
でCDにより測定される場合、約10μMのペプチド濃度で、25％以上，好ましくは2
5%〜50%のへリックス含有率を有するGLP−１誘導体を含んで成る医薬組成物に関
する。 部分的にヘリカルのミセル−様凝集体のサイズは、サイズ排除クロマトグラフ
ィーにより推定される。同様に、ペプチドの見掛け（決定的なミセル濃度）CMC は、適切な色素の存在下で濃度依存性蛍光から推定され得る（たとえば、Brito,
R. &VaZ, W. (1986) Anal. Biochem. 152: 250-255 ）。
【００３１】 誘導体が水溶液において部分的に構造体化されたミセル−様凝集体配座を有す
ることにより、生来のペプチドに比較して、溶液においては、それらの誘導体は
より溶解性で且つ安定性になる。高められた溶解性及び安定性は、医薬製剤、た
とえば５mMのリン酸緩衝液（pH6.9）を添加された0.1MのNaCl溶液における誘導 体及び正常GLP−1（7−37）についての静置の９日後の溶解性を比較することに よって見出され得る。
ることにより、生来のペプチドに比較して、溶液においては、それらの誘導体は
より溶解性で且つ安定性になる。高められた溶解性及び安定性は、医薬製剤、た
とえば５mMのリン酸緩衝液（pH6.9）を添加された0.1MのNaCl溶液における誘導 体及び正常GLP−1（7−37）についての静置の９日後の溶解性を比較することに よって見出され得る。
【００３２】 本発明においては、用語“類似体”は、親ペプチドの１又は複数のアミノ酸残
基が他のアミノ酸残基により置換されており、そして／又は親ペプチドの１又は
複数のアミノ酸残基が欠失しており、そして／又は１又は複数のアミノ酸残基が
、親ペプチドに付加されているペプチドを示すために使用される。そのような付
加は、親ペプチドのN−末端もしくはC−末端で、又は両者で生じ得る。 用語“誘導体”とは、親ペプチドの１又は複数のアミノ酸残基が、たとえばア
ルキル化、アシル化、エステル形成又はアミド形成により化学的に修飾されてい
るペプチドを示すために、本明細書においては使用される。
基が他のアミノ酸残基により置換されており、そして／又は親ペプチドの１又は
複数のアミノ酸残基が欠失しており、そして／又は１又は複数のアミノ酸残基が
、親ペプチドに付加されているペプチドを示すために使用される。そのような付
加は、親ペプチドのN−末端もしくはC−末端で、又は両者で生じ得る。 用語“誘導体”とは、親ペプチドの１又は複数のアミノ酸残基が、たとえばア
ルキル化、アシル化、エステル形成又はアミド形成により化学的に修飾されてい
るペプチドを示すために、本明細書においては使用される。
【００３３】 用語“GLP−１誘導体”とは、GLP−１又はそのフラグメントの誘導体を示すた
めに、本明細書においては使用される。本明細書においては、そのような誘導体
が形式的に由来する親ペプチドは、誘導体の“GLP−１成分”として、ところど ころで言及されている。 好ましい態様においては、本発明は、請求項１記載の医薬組成物に関し、ここ
でGLP−１誘導体の濃度は、0.5mg/ml以上、好ましくは約5mg/ml以上、より好ま しくは、約10mg/ml以上、そして好ましくは約100mg/ml以下である。
めに、本明細書においては使用される。本明細書においては、そのような誘導体
が形式的に由来する親ペプチドは、誘導体の“GLP−１成分”として、ところど ころで言及されている。 好ましい態様においては、本発明は、請求項１記載の医薬組成物に関し、ここ
でGLP−１誘導体の濃度は、0.5mg/ml以上、好ましくは約5mg/ml以上、より好ま しくは、約10mg/ml以上、そして好ましくは約100mg/ml以下である。
【００３４】 本発明の医薬組成物は好ましくは、親ペプチドの少なくとも1つのアミノ酸残 基が、結合された親油性置換基を有するGLP−１誘導体を含んで成る。位置18〜3
8、好ましくは26〜34におけるアミノ酸残基のいずれか1つに結合された親油性−
置換基を有するGLP−１誘導体を含んで成る組成物がより好ましい。
8、好ましくは26〜34におけるアミノ酸残基のいずれか1つに結合された親油性−
置換基を有するGLP−１誘導体を含んで成る組成物がより好ましい。
【００３５】 本発明の医薬組成物は、好ましくはさらに、１又は複数の次の物質を含んで成
る： ・医薬的に許容できるビークル又はキャリヤー； ・好ましくは、塩化ナトリウム、マンニトール、及びグリセロールから成る群
から選択された等張剤； ・好ましくは、フェノール、m−クレゾール、メチルp−ヒドロキシベンゾエー
ト、ブチルp−ヒドロキシベンゾエート及びベンジルアルコールから成る群から 選択された保存剤；
る： ・医薬的に許容できるビークル又はキャリヤー； ・好ましくは、塩化ナトリウム、マンニトール、及びグリセロールから成る群
から選択された等張剤； ・好ましくは、フェノール、m−クレゾール、メチルp−ヒドロキシベンゾエー
ト、ブチルp−ヒドロキシベンゾエート及びベンジルアルコールから成る群から 選択された保存剤；
【００３６】 ・好ましくは、酢酸ナトリウム、シトレート、グリシルグリシン、ヒスチジン
、２−フェニルエタノール及びリン酸ナトリウムから成る群から選択された緩衝
液；及び ・好ましくはポロキシマー（poloxymer）188、ツイン（Tween）20及びツイン8
0から選択された、GLP−１誘導体の溶解性及び／又は安定性を改良することがで
きる界面活性剤。
、２−フェニルエタノール及びリン酸ナトリウムから成る群から選択された緩衝
液；及び ・好ましくはポロキシマー（poloxymer）188、ツイン（Tween）20及びツイン8
0から選択された、GLP−１誘導体の溶解性及び／又は安定性を改良することがで
きる界面活性剤。
【００３７】 好ましい態様においては、本発明の医薬組成物は、親油性置換基が4〜40個の 炭素原子、好ましくは8〜25個の炭素原子を含んで成るGLP−１誘導体を含んで成
る。 親油性置換基は、好ましくは、その親油性置換基のカルボキシル基がアミノ酸
残基のアミノ基とアミド結合を形成するような態様でアミノ酸残基に結合され、
又は親油性置換基は、その親油性置換基のアミノ基がアミノ酸残基のカルボキシ
ル基とアミド結合を形成するような態様でアミノ酸残基に結合される。
る。 親油性置換基は、好ましくは、その親油性置換基のカルボキシル基がアミノ酸
残基のアミノ基とアミド結合を形成するような態様でアミノ酸残基に結合され、
又は親油性置換基は、その親油性置換基のアミノ基がアミノ酸残基のカルボキシ
ル基とアミド結合を形成するような態様でアミノ酸残基に結合される。
【００３８】 好ましい態様においては、本発明の医薬組成物は、親油性置換基がスペーサー
により親ペプチドに結合したGLP−１誘導体を含んで成る。 スペーサーは好ましくは、１つの態様においては、親ペプチドのアミノ基と親
油性置換基のアミノ基との間で架橋を形成する、１〜７個のメチレン基、好まし
くは２個のメチレン基を有する枝なしアルカンα,ω−ジカルボン酸基である。 スペーサーは好ましくは、１つの態様においては、Cysを除くアミノ酸残基、 又はジペプチド、たとえばCly-Lys, 又は親ペプチドのアミノ基と親油性置換基 のアミノ基との間に架橋を形成する、１〜７個のメチレン基、好ましくは２〜４
個のメチレン基を有するいずれかの枝なしのアルカンα,ω−アミノ酸である。
により親ペプチドに結合したGLP−１誘導体を含んで成る。 スペーサーは好ましくは、１つの態様においては、親ペプチドのアミノ基と親
油性置換基のアミノ基との間で架橋を形成する、１〜７個のメチレン基、好まし
くは２個のメチレン基を有する枝なしアルカンα,ω−ジカルボン酸基である。 スペーサーは好ましくは、１つの態様においては、Cysを除くアミノ酸残基、 又はジペプチド、たとえばCly-Lys, 又は親ペプチドのアミノ基と親油性置換基 のアミノ基との間に架橋を形成する、１〜７個のメチレン基、好ましくは２〜４
個のメチレン基を有するいずれかの枝なしのアルカンα,ω−アミノ酸である。
【００３９】 好ましい態様においては、親油性置換基は、部分的に又は完全に水素化された
シクロペンタンフェナトレン骨格を含んで成る。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は直鎖又は枝分かれ鎖のア
ルキル基である。
シクロペンタンフェナトレン骨格を含んで成る。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は直鎖又は枝分かれ鎖のア
ルキル基である。
【００４０】 親油性置換基は好ましくは、直鎖又は枝分かれ鎖の脂肪酸のアシル基であり、
前記アシル基は好ましくは次の通りである： ・CH3(CH2)nCO-（ここで、ｎは４〜38である）、好ましくはCH3(CH2)6CO-, CH 3 (CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-,
CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-及びCH3(CH2)22CO-を含んで成る群から選択され ；又は ・直鎖又は枝分かれ鎖のアルカンα,ω−ジカルボン酸基であり；あるいは ・HOOC(CH2)mCO-（ここで、ｍは４〜38、好ましくは４〜24である）を含んで 成る群から選択され、より好ましくは、HOOC(CH2)14CO-, HOOC(CH2)16CO-, HOOC
(CH2)18CO-, HOOC(CH2)20CO-及びHOOC(CH2)22CO-を含んで成る群から選択される
。
前記アシル基は好ましくは次の通りである： ・CH3(CH2)nCO-（ここで、ｎは４〜38である）、好ましくはCH3(CH2)6CO-, CH 3 (CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-,
CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-及びCH3(CH2)22CO-を含んで成る群から選択され ；又は ・直鎖又は枝分かれ鎖のアルカンα,ω−ジカルボン酸基であり；あるいは ・HOOC(CH2)mCO-（ここで、ｍは４〜38、好ましくは４〜24である）を含んで 成る群から選択され、より好ましくは、HOOC(CH2)14CO-, HOOC(CH2)16CO-, HOOC
(CH2)18CO-, HOOC(CH2)20CO-及びHOOC(CH2)22CO-を含んで成る群から選択される
。
【００４１】 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式CH3(CH2)p((CH2)qCO
OH) CHNH-CO(CH2)2CO-（式中、ｐ及びｑは整数であり、そしてｐ＋ｑは８〜33、
好ましくは12〜28の整数である）で表される基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式CH3(CH2)rCO-NHCH(C
OOH)(CH2)2CO-（式中、ｒは10〜24の整数である）で表される基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式CH3(CH2)sCO-NHCH((
CH2)2COOH)CO-（式中、ｓは８〜24の整数である）で表される基である。
OH) CHNH-CO(CH2)2CO-（式中、ｐ及びｑは整数であり、そしてｐ＋ｑは８〜33、
好ましくは12〜28の整数である）で表される基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式CH3(CH2)rCO-NHCH(C
OOH)(CH2)2CO-（式中、ｒは10〜24の整数である）で表される基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式CH3(CH2)sCO-NHCH((
CH2)2COOH)CO-（式中、ｓは８〜24の整数である）で表される基である。
【００４２】 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式−NHCH(COOH)(CH2)4 NH-CO(CH2)uCH3（式中、uは８〜18の整数である）で表される基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式−NHCH(COOH)(CH2)4 NH-COCH((CH2)2COOH)NH-CO(CH2)wCH3（式中、wは10〜16の整数である）で表され
る基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式−NHCH(COOH)(CH2)4 NH-CO(CH2)2CH(COOH)NH-CO(CH2)xCH3（式中、xは10〜16の整数である）で表され
る基である。
る基である。 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式−NHCH(COOH)(CH2)4 NH-CO(CH2)2CH(COOH)NH-CO(CH2)xCH3（式中、xは10〜16の整数である）で表され
る基である。
【００４３】 もう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、式−NHCH(COOH)(CH2)4 NH-CO(CH2)2CH(COOH)NH-CO(CH2)yCH3（式中、ｙは０又は１〜22の整数である） で表される基である。 好ましい態様においては、本発明の医薬組成物は、親ペプチドがGLP−1（A−B
）（ここで、Aは１〜７の整数であり、そしてBは38〜45の整数である）、又はそ
の類似体であるGLP−1誘導体を含んで成る。
）（ここで、Aは１〜７の整数であり、そしてBは38〜45の整数である）、又はそ
の類似体であるGLP−1誘導体を含んで成る。
【００４４】 親ペプチドは、好ましくは、１つの態様においては、GLP−1（７−35）；GLP −１（７−36）；GLP−１（７−36）アミド；GLP−１（７−37）；GLP−１（７ −38）；GLP−1（７−39）；GLP−1（７−40）及びGLP−1（７−41）；並びにそ
れらの類似体を含んで成る群から選択される。 親ペプチドは、好ましくは、１つの態様においては、GLP−1（１−35）；GLP −１（１−36）；GLP−１（１−36）アミド；GLP−１（１−37）；GLP−１（１ −38）；GLP−1（１−39）；GLP−1（１−40）及びGLP−1（１−41）；並びにそ
れらの類似体を含んで成る群から選択される。
れらの類似体を含んで成る群から選択される。 親ペプチドは、好ましくは、１つの態様においては、GLP−1（１−35）；GLP −１（１−36）；GLP−１（１−36）アミド；GLP−１（１−37）；GLP−１（１ −38）；GLP−1（１−39）；GLP−1（１−40）及びGLP−1（１−41）；並びにそ
れらの類似体を含んで成る群から選択される。
【００４５】 さらにもう１つの態様においては、親ペプチドは、下記式I：
【化３】
【００４６】 ［式中、位置8でのXaaがAla, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp 又はLy
sであり、 位置9でのXaaがGlu, Asp 又はLysであり、 位置11でのXaaがThr, Ala, Gly, Ser, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置14でのXaaがSer, Ala, Gly, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置16でのXaaがVal, Ala, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Tyr, Glu, Asp又はLys
であり、 位置17でのXaaがSer，Ala, Gly, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、
sであり、 位置9でのXaaがGlu, Asp 又はLysであり、 位置11でのXaaがThr, Ala, Gly, Ser, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置14でのXaaがSer, Ala, Gly, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置16でのXaaがVal, Ala, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Tyr, Glu, Asp又はLys
であり、 位置17でのXaaがSer，Ala, Gly, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、
【００４７】 位置18でのXaaがSer, Ala, Gly, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置19でのXaaがTyr, Phe, Trp, Glu, Asp又はLysであり、 位置20でのXaaがLeu, Ala, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLys
であり、 位置21でのXaaがGlu, Asp又はLysであり、 位置22でのXaaがGly, Ala, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置23でのXaaがGln, Asn, Arg, Glu, Asp又はLysであり、 位置24でのXaaがAla, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Arg, Glu, Asp又はLys
であり、
であり、 位置21でのXaaがGlu, Asp又はLysであり、 位置22でのXaaがGly, Ala, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置23でのXaaがGln, Asn, Arg, Glu, Asp又はLysであり、 位置24でのXaaがAla, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Arg, Glu, Asp又はLys
であり、
【００４８】 位置25でのXaaがAla, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置26でのXaaがLys, Arg, Gln, Glu, Asp又はHisであり、 位置27でのXaaがGlu, Asp又はLysであり、 位置30でのXaaがAla, Gly, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置31でのXaaがTrp, Phe, Tyr, Glu, Asp又はLysであり、 位置32でのXaaがLeu, Gly, Ala, Ser, Thr, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、
【００４９】 位置33でのXaaがVal, Gly, Ala, Ser, Thr, Leu, Ile, Glu, Asp又はLysであ り、 位置34でのXaaがLys, Arg, Glu, Asp又はHisであり、 位置35でのXaaがGly, Ala, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、 位置36でのXaaがArg, Lys, Glu, Asp又はHisであり、 位置37でのXaaがGly, Ala, Ser, Thr, Leu, Ile, Val, Glu, Asp又はLysであ り、あるいは欠失しており、 位置38でのXaaがArg, Lys, Glu, Asp又はHisであり、あるいは欠失しており、 位置39でのXaaがArg, Lys, Glu, Asp又はHisであり、あるいは欠失しており、
【００５０】 位置40でのXaaがAsp, Glu又はLysであり、あるいは欠失しており、 位置41でのXaaがPhe, Trp, Tyr, Glu, Asp又はLysであり、あるいは欠失して おり、 位置42でのXaaがPro, Lys, Glu又はAspであり、あるいは欠失しており、 位置43でのXaaがGlu, Asp又はLysであり、あるいは欠失しており、 位置44でのXaaがGlu, Asp又はLysであり、あるいは欠失しており、そして 位置45でのXaaがVal, Glu, Asp又はLysであり、あるいは欠失している］
【００５１】 で表されるGLP−１類似体、そのC-1-6-エステル、そのアミド、C-1-6-アルキル アミド、C-1-6-ジアルキルアミド、及び/又はその医薬的に許容できる塩に関し 、但し (i) 位置37, 38, 39, 40, 41, 42, 43,又は44でのアミノ酸が欠失している場 合、そのアミノ酸の下流の個々のアミノ酸もまた欠失しており、 (ii) 前記GLP−１類似体の誘導体がわずか１つのLysを含み、 (iii) Lysのε−アミノ酸が、親油性置換基により置換され、 (iv) GLP−１類似体の誘導体とGLP−１のその対応する生来形との間での異な ったアミノ酸の合計数が６を越えない。
【００５２】 本発明の医薬組成物は好ましくは、合計15個まで、好ましくは10個まで、より
好ましくは６個までのアミノ酸残基が、遺伝子コードによりコードされ得るα−
アミノ酸残基により置換されているGLP−１誘導体を含んで成る。 親ペプチドは、最も好ましくは、下記群の１つから選択される：
好ましくは６個までのアミノ酸残基が、遺伝子コードによりコードされ得るα−
アミノ酸残基により置換されているGLP−１誘導体を含んで成る。 親ペプチドは、最も好ましくは、下記群の１つから選択される：
【００５３】
【化４】
【００５４】 本発明はさらに、GLP−１、又はそのフラグメント又は類似体の溶解性及び／ 又は安定性を改良するための方法に関し、ここで親油性置換基が親ペプチドのア
ミノ酸残基のいずれか１つに導入されていること特徴とする。 この方法によれば、親油性置換基は好ましくは、位置18〜38、好ましくは26〜
34のアミノ酸残基のいずれか１つに導入される。 親油性置換基は好ましくは、4〜40個の炭素原子、より好ましくは8〜25個の炭
素原子を含んで成る。
ミノ酸残基のいずれか１つに導入されていること特徴とする。 この方法によれば、親油性置換基は好ましくは、位置18〜38、好ましくは26〜
34のアミノ酸残基のいずれか１つに導入される。 親油性置換基は好ましくは、4〜40個の炭素原子、より好ましくは8〜25個の炭
素原子を含んで成る。
【００５５】 好ましい態様においては、親油性置換基は、直鎖又は枝分かれ鎖の脂肪酸のア
シル基であり；好ましくはアシル基は、CH3(CH2)nCO-（ここで、ｎは４〜38であ
る）、好ましくはCH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-
, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-及びCH3(CH2) 22 CO-を含んで成る群から選択される。 GLP−１親ペプチドは好ましくは、GLP−1（A−B）（ここで、Aは１〜７の整数
であり、そしてBは38〜45の整数である）、又はその類似体である。
シル基であり；好ましくはアシル基は、CH3(CH2)nCO-（ここで、ｎは４〜38であ
る）、好ましくはCH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-
, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-及びCH3(CH2) 22 CO-を含んで成る群から選択される。 GLP−１親ペプチドは好ましくは、GLP−1（A−B）（ここで、Aは１〜７の整数
であり、そしてBは38〜45の整数である）、又はその類似体である。
【００５６】 １つの好ましい態様においては、GLP−１は、GLP−1（７−35）；GLP−１（７
−36）；GLP−１（７−36）アミド；GLP−１（７−37）；GLP−１（７−38）；G
LP−1（７−39）；GLP−1（７−40）及びGLP−1（７−41）；並びにそれらの類 似体を含んで成る群から選択される。 １つの好ましい態様においては、GLP−１は、GLP−1（１−35）；GLP−１（１
−36）；GLP−１（１−36）アミド；GLP−１（１−37）；GLP−１（１−38）；G
LP−1（１−39）；GLP−1（１−40）及びGLP−1（１−41）；並びにそれらの類 似体を含んで成る群から選択される。
−36）；GLP−１（７−36）アミド；GLP−１（７−37）；GLP−１（７−38）；G
LP−1（７−39）；GLP−1（７−40）及びGLP−1（７−41）；並びにそれらの類 似体を含んで成る群から選択される。 １つの好ましい態様においては、GLP−１は、GLP−1（１−35）；GLP−１（１
−36）；GLP−１（１−36）アミド；GLP−１（１−37）；GLP−１（１−38）；G
LP−1（１−39）；GLP−1（１−40）及びGLP−1（１−41）；並びにそれらの類 似体を含んで成る群から選択される。
【００５７】 発明の詳細な説明： GLP−１誘導体の作用の満足すべき延長されたプロフィールを得るためには、G
LP−１成分に結合される親油性置換基は、4〜40個の炭素原子、特に8〜25個の炭
素原子を含んで成る。親油性置換基は、それが結合されるアミノ酸残基とアミド
結合を形成する親油性置換基のカルボキシル基によりGLP−１成分のアミノ基に 結合され得る。
LP−１成分に結合される親油性置換基は、4〜40個の炭素原子、特に8〜25個の炭
素原子を含んで成る。親油性置換基は、それが結合されるアミノ酸残基とアミド
結合を形成する親油性置換基のカルボキシル基によりGLP−１成分のアミノ基に 結合され得る。
【００５８】 他方では、親油性置換基は、その親油性置換基のアミノ基がアミノ酸残基のカ
ルボキシル基とアミド結合を形成するような態様で、前記アミノ酸残基に結合さ
れ得る。さらなる選択として、親油性置換基はエステル結合を通してGLP−１成 分に結合される。形式的には、エステルは、GLP−１成分のカルボキシル基と置 換基のヒドロキシル基との間の反応により、又はGLP−１成分のヒドロキシル基 と置換基のカルボキシル基との間の反応により形成され得る。さらなる態様とし
て、親油性置換基は、GLP−１成分の第一アミノ基中に導入されるアルキル基で あり得る。
ルボキシル基とアミド結合を形成するような態様で、前記アミノ酸残基に結合さ
れ得る。さらなる選択として、親油性置換基はエステル結合を通してGLP−１成 分に結合される。形式的には、エステルは、GLP−１成分のカルボキシル基と置 換基のヒドロキシル基との間の反応により、又はGLP−１成分のヒドロキシル基 と置換基のカルボキシル基との間の反応により形成され得る。さらなる態様とし
て、親油性置換基は、GLP−１成分の第一アミノ基中に導入されるアルキル基で あり得る。
【００５９】 本発明の１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、スペーサーのカル
ボキシルキが、GLP−１成分のアミノ基とアミド結合を形成するような手段で、 スペーサーによりGLP−１成分に結合される。適切なスペーサーの例は、琥珀酸 、Lys、Gly又はAsp、又はジペプチド、たとえばGly−Lysである。スペーサーが 琥珀酸である場合、その1つのカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミ ド結合を形成することができ、そして他のカルボキシル基は親油性置換基のアミ
ノ基とアミド結合を形成することができる。
ボキシルキが、GLP−１成分のアミノ基とアミド結合を形成するような手段で、 スペーサーによりGLP−１成分に結合される。適切なスペーサーの例は、琥珀酸 、Lys、Gly又はAsp、又はジペプチド、たとえばGly−Lysである。スペーサーが 琥珀酸である場合、その1つのカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミ ド結合を形成することができ、そして他のカルボキシル基は親油性置換基のアミ
ノ基とアミド結合を形成することができる。
【００６０】 スペーサーがLys, Glu又はAspである場合、そのカルボキシル基はアミノ酸基 のアミノ基とアミド結合を形成することができ、そしてそのアミノ基は親油性置
換基のカルボキシル基とアミド結合を形成することができる。Lysがスペーサー として使用される場合、さらなるスペーサーが、多くの場合、Lysのε−アミノ 基と親油性置換基との間に挿入され得る。
換基のカルボキシル基とアミド結合を形成することができる。Lysがスペーサー として使用される場合、さらなるスペーサーが、多くの場合、Lysのε−アミノ 基と親油性置換基との間に挿入され得る。
【００６１】 １つの好ましい態様においては、そのようなスペーサーは、Lysのε−アミノ 基と及び親油性置換基に存在するアミノ基とアミド結合を形成する琥珀酸である
。もう１つの好ましい態様においては、そのような追加のスペーサーは、Lysの ε−アミノ基と１つのアミド結合を形成し、そして親油性置換基、すなわちNε −アシル化されたリシン残基に存在するカルボキシル基ともう１つのアミド結合
を形成するGlu又はAspである。
。もう１つの好ましい態様においては、そのような追加のスペーサーは、Lysの ε−アミノ基と１つのアミド結合を形成し、そして親油性置換基、すなわちNε −アシル化されたリシン残基に存在するカルボキシル基ともう１つのアミド結合
を形成するGlu又はAspである。
【００６２】 本発明のもう１つの好ましい態様においては、親油性置換基は、負に荷電され
得る基を有する。負に荷電され得る１つの好ましい基は、カルボン酸基である。 親ペプチドは、前記ペプチドをコードし、そしてポリペプチドを発現できるDN
A配列を含む宿主細胞を、ペプチドの発現を可能にする条件下で適切な栄養培地 において培養し、この後、その得られるペプチドを培養物から回収することを含
んで成る方法により生成され得る。
得る基を有する。負に荷電され得る１つの好ましい基は、カルボン酸基である。 親ペプチドは、前記ペプチドをコードし、そしてポリペプチドを発現できるDN
A配列を含む宿主細胞を、ペプチドの発現を可能にする条件下で適切な栄養培地 において培養し、この後、その得られるペプチドを培養物から回収することを含
んで成る方法により生成され得る。
【００６３】 細胞を培養するために使用される培地は、宿主細胞を増殖するのに適切ないず
れかの従来の培地、たとえば適切な補充物を含む最少培地又は複雑培地であり得
る。適切な培地は、市販されており、又は公開されたレセピ−（たとえば、Amer
ican Type Culture Collection のカタログにおけるような）から調製され得る 。
れかの従来の培地、たとえば適切な補充物を含む最少培地又は複雑培地であり得
る。適切な培地は、市販されており、又は公開されたレセピ−（たとえば、Amer
ican Type Culture Collection のカタログにおけるような）から調製され得る 。
【００６４】 次に、細胞により生成されるペプチドが、従来の方法、たとえば培地から宿主
細胞を遠心分離又は濾過により分離し、その上清液又は濾液のタンパク質成分を
塩、たとえば硫酸アンモニウムにより沈殿せしめることによって、培養培地から
回収され得、問題のペプチドの形に依存して、種々のクロマトグラフィー方法、
たとえばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、親和性
クロマトグラフィー又は同様のものにより精製される。
細胞を遠心分離又は濾過により分離し、その上清液又は濾液のタンパク質成分を
塩、たとえば硫酸アンモニウムにより沈殿せしめることによって、培養培地から
回収され得、問題のペプチドの形に依存して、種々のクロマトグラフィー方法、
たとえばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、親和性
クロマトグラフィー又は同様のものにより精製される。
【００６５】 親ペプチドをコードするDNA配列は、標準的技法に従って、ゲノム又はcDNAラ イブラリーを調製し、そして合成オリゴヌクレオチドプローブを用いてのハイブ
リダイゼーションにより、ペプチドのすべて又は一部をコードするDNA配列をク スリーニングすることによって得られるゲノム又はcDNA起源のものであり得る（
たとえば、Sambrook, J. Fritsch, EF and Maniatis, T. Molecular Cloning: A
Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989
を参照のこと）。
リダイゼーションにより、ペプチドのすべて又は一部をコードするDNA配列をク スリーニングすることによって得られるゲノム又はcDNA起源のものであり得る（
たとえば、Sambrook, J. Fritsch, EF and Maniatis, T. Molecular Cloning: A
Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989
を参照のこと）。
【００６６】 ペプチドをコードするDNA配列はまた、確立された標準の方法、たとえばBeauc
age and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869により記載さ れるホスホアミジット方法、又はMatthes など., EMBO Journal 3 (1984), 801-
8051により記載される方法により、合成的に調製され得る。DNA配列はまた、た とえばアメリカ特許第4,683,202号、又はSaikiなど., Science 239 (1988), 487
-491に記載のようにして、特異的プライマーを用いてのポリメラーゼ鎖反応によ
り調製され得る。
age and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869により記載さ れるホスホアミジット方法、又はMatthes など., EMBO Journal 3 (1984), 801-
8051により記載される方法により、合成的に調製され得る。DNA配列はまた、た とえばアメリカ特許第4,683,202号、又はSaikiなど., Science 239 (1988), 487
-491に記載のようにして、特異的プライマーを用いてのポリメラーゼ鎖反応によ
り調製され得る。
【００６７】 DNA配列は、組換えDNA方法に便利にゆだねられ得る、いずれかのベクター中に
挿入され得、そしてそのベクターの選択はしばしば、それが導入されるべき宿主
細胞に依存するであろう。従って、ベクターは、自律的に複製するベクター、す
なわちその複製が染色体複製に無関係である、染色体外実在物として存在するベ
クター、たとえばプラスミドであり得る。他方では、ベクターは、宿主細胞中に
挿入される場合、その宿主細胞ゲノム中に組み込まれ、そしてそれが組み込まれ
た染色体と共に複製されるベクターであり得る。
挿入され得、そしてそのベクターの選択はしばしば、それが導入されるべき宿主
細胞に依存するであろう。従って、ベクターは、自律的に複製するベクター、す
なわちその複製が染色体複製に無関係である、染色体外実在物として存在するベ
クター、たとえばプラスミドであり得る。他方では、ベクターは、宿主細胞中に
挿入される場合、その宿主細胞ゲノム中に組み込まれ、そしてそれが組み込まれ
た染色体と共に複製されるベクターであり得る。
【００６８】 ベクターは好ましくは、ペプチドをコードするDNA配列が、DNAの転写のために
必要とされる追加のセグメント、たとえばプロモーターに作用可能に連結される
発現ベクターである。プロモーターは、選択の宿主細胞において転写活性を示す
いずれかのDNA配列であり得、そして宿主細胞に対して同種であるか又は異種の いずれかであるタンパク質をコードする遺伝子に由来する。種々の宿主細胞にお
いて本発明のペプチドをコードするDNAの転写を指令するための適切なプロモー ターの例は、当業者において良く知られている（たとえば、Sambrook など., 前
記を参照のこと）。
必要とされる追加のセグメント、たとえばプロモーターに作用可能に連結される
発現ベクターである。プロモーターは、選択の宿主細胞において転写活性を示す
いずれかのDNA配列であり得、そして宿主細胞に対して同種であるか又は異種の いずれかであるタンパク質をコードする遺伝子に由来する。種々の宿主細胞にお
いて本発明のペプチドをコードするDNAの転写を指令するための適切なプロモー ターの例は、当業者において良く知られている（たとえば、Sambrook など., 前
記を参照のこと）。
【００６９】 ペプチドをコードするDNA配列はまた、必要なら、適切なターミネーター、ポ リアデニル化シグナル、転写エンハンサー配列および翻訳エンハンサー配列の操
作可能的に連結され得る。本発明の組換えベクターはさらに、問題の宿主細胞に
おいてベクターの複製を可能にするDNA配列を含んで成る。 ベクターはまた、選択マーカー、たとえばその生成物が宿主細胞における欠損
を補充し、又は薬物、たとえばアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン
、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ヒグロマイシン又はメトトレキセート
に対する耐性を付与する遺伝子を含んで成ることができる。
作可能的に連結され得る。本発明の組換えベクターはさらに、問題の宿主細胞に
おいてベクターの複製を可能にするDNA配列を含んで成る。 ベクターはまた、選択マーカー、たとえばその生成物が宿主細胞における欠損
を補充し、又は薬物、たとえばアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン
、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ヒグロマイシン又はメトトレキセート
に対する耐性を付与する遺伝子を含んで成ることができる。
【００７０】 宿主細胞の分泌経路中に本発明の親ペプチドを方向づけるためには、分泌シグ
ナル配列（また、リーダー配列、プレプロ配列又はプレ配列としても知られてい
る）が、組換えベクターに供給され得る。分泌シグナル配列は、ペプチドをコー
ドするDNA配列に、読み取り枠を整合して連結される。分泌シグナル配列は通常 、ペプチドをコードするDNA配列の5'側に位置する。分泌シグナル配列は、ペプ チドと通常関係している配列であり得、又はもう１つの分泌されたシグナルをコ
ードする遺伝子からであり得る。
ナル配列（また、リーダー配列、プレプロ配列又はプレ配列としても知られてい
る）が、組換えベクターに供給され得る。分泌シグナル配列は、ペプチドをコー
ドするDNA配列に、読み取り枠を整合して連結される。分泌シグナル配列は通常 、ペプチドをコードするDNA配列の5'側に位置する。分泌シグナル配列は、ペプ チドと通常関係している配列であり得、又はもう１つの分泌されたシグナルをコ
ードする遺伝子からであり得る。
【００７１】 本発明のペプチドをコードするDNA配列、プロモーター及び任意には、ターミ ネーター及び/又は分泌シグナル配列をそれぞれ連結し、そして複製のために必 要な情報を含む適切なベクター中にそれらを挿入するために使用される方法は、
当業者に良く知られている（たとえば、Sambrook など.,前記を参照のこと）。
当業者に良く知られている（たとえば、Sambrook など.,前記を参照のこと）。
【００７２】 DNA配列又は組換えベクターが導入される宿主細胞は、本発明のペプチドを生 成することができるいずれかの細胞であり得、そして細菌、酵母菌類及び高等真
核細胞を包含する。当業者において良く知られ、そして使用される適切な宿主細
胞の例は、E.コリ（E.coli）、サッカロミセス・セレビシアエ（Saccharomyces
cerevisiae）又は哺乳類BHK又はCHO細胞系であるが、但しそれらだけには限定さ
れない。
核細胞を包含する。当業者において良く知られ、そして使用される適切な宿主細
胞の例は、E.コリ（E.coli）、サッカロミセス・セレビシアエ（Saccharomyces
cerevisiae）又は哺乳類BHK又はCHO細胞系であるが、但しそれらだけには限定さ
れない。
【００７３】 本発明のGLP−１成分として有用であり得る化合物の例は、GLP−１(7-37)及び
その機能的誘導体を含んで成るペプチドフラグメント及びインスリン向性剤とし
てのその使用に関する国際特許出願番号WO87／06941(The General Hospital Cor
pration)に記載される。
その機能的誘導体を含んで成るペプチドフラグメント及びインスリン向性剤とし
てのその使用に関する国際特許出願番号WO87／06941(The General Hospital Cor
pration)に記載される。
【００７４】 さらに、GLP−１類似体は、GLP−１(7-36)及びその機能的誘導体を含んで成り
、そしてGLP−１(1-36)又はGLP−１(1-37)のインスリン向性活性を超えるインス
リン向性活性を有するペプチドフラグメント、及びインスリン向性剤としてのそ
れらの使用に関する国際特許出願番号WO90/11296号(The General Hospital Corp
ration)に記載される。 国際特許出願番号WO91/11457(Buckley など.,)は、本発明のGLP−１成分とし ても有用であり得る活性GLP−１ペプチド7−34、7−35、7−36及び7−37の類似 体を開示する。
、そしてGLP−１(1-36)又はGLP−１(1-37)のインスリン向性活性を超えるインス
リン向性活性を有するペプチドフラグメント、及びインスリン向性剤としてのそ
れらの使用に関する国際特許出願番号WO90/11296号(The General Hospital Corp
ration)に記載される。 国際特許出願番号WO91/11457(Buckley など.,)は、本発明のGLP−１成分とし ても有用であり得る活性GLP−１ペプチド7−34、7−35、7−36及び7−37の類似 体を開示する。
【００７５】 組成物の調製及び投与： 本発明のGLP−１誘導体を含む医薬組成物は、そのような処理の必要な患者に 非経口又は経口投与され得る。非経口投与は、注射器、任意にはペン型注射器に
よる皮下、筋肉内又は静脈内注射により行われ得る。他方では、非経口投与は、
注入ポンプにより行われ得る。さらなる選択は、鼻又は肺用噴霧の形でのGLP−1
誘導体の投与のために粉末又は液体でありえる組成物である。さらなる選択とし
て、本発明のGLP−1誘導体を含む医薬組成物ははまた、たとえばパッチ、任意に
はイオン導入パッチから、経皮、又は粘膜、たとえば頬投与され得る。
よる皮下、筋肉内又は静脈内注射により行われ得る。他方では、非経口投与は、
注入ポンプにより行われ得る。さらなる選択は、鼻又は肺用噴霧の形でのGLP−1
誘導体の投与のために粉末又は液体でありえる組成物である。さらなる選択とし
て、本発明のGLP−1誘導体を含む医薬組成物ははまた、たとえばパッチ、任意に
はイオン導入パッチから、経皮、又は粘膜、たとえば頬投与され得る。
【００７６】 本発明のGLP−１誘導体を含む医薬組成物は、従来の技法により、たとえばRem
ington's Pharmaceutical Science, 1985 又はRemington : The Science and Pr
actice of Pharmacy, 19th Edition, 1995 に記載のようにして調製され得る。 従って、本発明のGLP−1誘導体を含む注射組成物は、所望する最終生成物を付
与するために成分を適切に溶解し、そして混合することを包含する、医薬産業の
従来の技法を用いて調製され得る。
ington's Pharmaceutical Science, 1985 又はRemington : The Science and Pr
actice of Pharmacy, 19th Edition, 1995 に記載のようにして調製され得る。 従って、本発明のGLP−1誘導体を含む注射組成物は、所望する最終生成物を付
与するために成分を適切に溶解し、そして混合することを包含する、医薬産業の
従来の技法を用いて調製され得る。
【００７７】 1つの方法によれば、GL−1誘導体は、調製される組成物の最終体積よりも幾分
少ない量の水に溶解される。等張剤、保存剤及び緩衝液は必要により添加され、
そして溶液のpH値は、必要なら、酸、たとえば塩酸、又は塩基、たとえば水酸化
ナトリウム水溶液を用いて、必要により調節される。最終的に、溶液の体積は、
成分の所望する濃度を付与するために水により調節される。 一定のペプチドの鼻腔内投与のための組成物は、たとえばヨーロッパ特許第27
2097号（Novo Nordisk A/S）又はWO93/18785号に記載のようにして調製され得る
。
少ない量の水に溶解される。等張剤、保存剤及び緩衝液は必要により添加され、
そして溶液のpH値は、必要なら、酸、たとえば塩酸、又は塩基、たとえば水酸化
ナトリウム水溶液を用いて、必要により調節される。最終的に、溶液の体積は、
成分の所望する濃度を付与するために水により調節される。 一定のペプチドの鼻腔内投与のための組成物は、たとえばヨーロッパ特許第27
2097号（Novo Nordisk A/S）又はWO93/18785号に記載のようにして調製され得る
。
【００７８】 本発明の1つの好ましい態様によれば、GLP−1誘導体を含む医薬組成物は、注 射による投与のために適切な組成物の形で提供される。そのような組成物はすぐ
に使用するために注射溶液であり得、又はそれは多量の固体組成物、たとえば注
射の前、溶媒い溶解されるべきである凍結乾燥された生成物であり得る注射溶液
は好ましくは、約0.5mg/ml以上、好ましくは約5mg/ml以上、より好ましくは約10
mg/ml以上のGLP−1誘導体、及び好ましくは約100mg/ml以下のGLP−1誘導体を含 む。
に使用するために注射溶液であり得、又はそれは多量の固体組成物、たとえば注
射の前、溶媒い溶解されるべきである凍結乾燥された生成物であり得る注射溶液
は好ましくは、約0.5mg/ml以上、好ましくは約5mg/ml以上、より好ましくは約10
mg/ml以上のGLP−1誘導体、及び好ましくは約100mg/ml以下のGLP−1誘導体を含 む。
【００７９】 本発明のGLP−1誘導体を含む医薬組成物は、種々の疾病の処理に使用され得る
。使用される特定のGLP−1誘導体及びいずれかの患者のための最適な用量レベル
は、処理される疾病、及び種々の要因、たとえば使用される特定のペプチドの効
率、年齢、体重、物質的活性、及び患者の食事、他の薬物との可能な組み合わせ
、及び患者の重症度に依存するであろう。本発明のGLP−1誘導体の投与量は、当
業者により個々の患者のために決定されることが推薦される。
。使用される特定のGLP−1誘導体及びいずれかの患者のための最適な用量レベル
は、処理される疾病、及び種々の要因、たとえば使用される特定のペプチドの効
率、年齢、体重、物質的活性、及び患者の食事、他の薬物との可能な組み合わせ
、及び患者の重症度に依存するであろう。本発明のGLP−1誘導体の投与量は、当
業者により個々の患者のために決定されることが推薦される。
【００８０】 特に、GLP−1誘導体を含む医薬組成物は、インスリン非依存性糖尿病の処理及
び/又は肥満の処理のために有用であろうことが予測される。 本発明は次の例によりさらに例示されるが、しかしながらそれらの例は、本発
明の範囲を限定するものではない。
び/又は肥満の処理のために有用であろうことが予測される。 本発明は次の例によりさらに例示されるが、しかしながらそれらの例は、本発
明の範囲を限定するものではない。
【００８１】 ［実施例］ 例： 10mMのトリス緩衝液（pH8及び23℃）に溶解されるペプチドについてのペプチ ド濃度の関数としての222nmでの円二色計（CD）を用いて、GLP−1（７−37）、 及び本発明の医薬配合物のために適切な次の８種のGLP−1誘導体についての測定
した：
した：
【００８２】 誘導体 親油性置換基の位置 (a) 26 (b) 26 (c) 23 (d) 34 (e) 38 (f) 26 (g) 26 (h) 18
【００８３】 (a)は、Arg34Lys26(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1(7-
37)-OHであり； (b)は、Arg34Lys26(Nε-(γ−グルタミル(Nε-リトコイル))) GLP-1(7-37)-OH
であり； (c)は、Arg26,34Lys23(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1
(7-37)-OHであり； (d)は、Arg26Lys34(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1(7-
37)-OHであり；
37)-OHであり； (b)は、Arg34Lys26(Nε-(γ−グルタミル(Nε-リトコイル))) GLP-1(7-37)-OH
であり； (c)は、Arg26,34Lys23(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1
(7-37)-OHであり； (d)は、Arg26Lys34(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1(7-
37)-OHであり；
【００８４】 (e)は、Gly8Glu37Arg26,34Lys38(Nε-(γ−グルタミル(Nε-オクタデカノイル
))) GLP-1(7-38)-OHであり； (f)は、Arg34Lys26(Nε-(ヘキサデカノイル)) GLP-1(7-37)-OHであり； (g)は、Arg34Lys26(Nε-(γ−アミノブチロイル(Nε-ヘキサデカノイル))) GL
P-1(7-37)-OHであり； (h)は、Arg26,34Lys18(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1
(7-37)-OHである。
))) GLP-1(7-38)-OHであり； (f)は、Arg34Lys26(Nε-(ヘキサデカノイル)) GLP-1(7-37)-OHであり； (g)は、Arg34Lys26(Nε-(γ−アミノブチロイル(Nε-ヘキサデカノイル))) GL
P-1(7-37)-OHであり； (h)は、Arg26,34Lys18(Nε-(γ−グルタミル(Nε-ヘキサデカノイル))) GLP-1
(7-37)-OHである。
【００８５】 結果は図１に示される。CDシグナルは、ペプチドにおけるα−ヘリックスの平
均含有率に比例し、すなわち−１のCD値はそれらの条件下で10%のα−ヘリック ス含有率に対応することを注意すること。前記図は、修飾されていないGLP−１(
7-37)の濃度が25〜1000μMの間で上昇するにつれて、α−ヘリックス含有率が、
より長いオリゴマーの形成と共に、約15%から約35%に上昇することを示す。この
濃度依存性挙動とは対照的に、前記図は、ヘリックス含有率が同じ条件下で、部
分的に構造体化されたミセル−様凝集体を形成する一連のアシル化されたGLP-1 誘導体に関して、高いまま存続し、そして1〜200μMの濃度とは実質的に無関係 であること示す。
均含有率に比例し、すなわち−１のCD値はそれらの条件下で10%のα−ヘリック ス含有率に対応することを注意すること。前記図は、修飾されていないGLP−１(
7-37)の濃度が25〜1000μMの間で上昇するにつれて、α−ヘリックス含有率が、
より長いオリゴマーの形成と共に、約15%から約35%に上昇することを示す。この
濃度依存性挙動とは対照的に、前記図は、ヘリックス含有率が同じ条件下で、部
分的に構造体化されたミセル−様凝集体を形成する一連のアシル化されたGLP-1 誘導体に関して、高いまま存続し、そして1〜200μMの濃度とは実質的に無関係 であること示す。
【００８６】 市販の化学物質についての次の頭字語が使用される： DMF：N,N−ジメチルホルムアミド、 DCC：N,N−ジシクロヘキシルカルボジイミド、 NMP：N−メチル−２−ピロリドン、 EDPA：N−エチル−N,N−ジイソプロピルアミン、 EGTA：エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）−N,N,N',N' −四酢酸、
【００８７】 GTP：グアノシン5'−トリリン酸、 TFA：トリフルオロ酢酸、 THF：テトラヒドロフラン、 H-Glu(OH)-OBut：L−グルタミン酸α−tert−ブチルエステル、 Cap−ONSu：オクタン酸２,５−ジオキソピリジン−１−イルエステル、 Lau−ONSu：ドデカン酸２,５−ジオキソピロリジン−1−イルエステル、 Myr−ONSu：テトラデカン酸２,５−ジオキソピロリジン−1−イルエステル、 Pal−ONSu：ヘキサデカン酸２,５−ジオキソピロリジン−1−イルエステル、 Ste−ONSu：オクタデカン酸２,５−ジオキソピロリジン−1−イルエステル、
【００８８】 略語： PDMS：プラズマ・デゾープション質量分析法、 MALDI−MS：マトリックス・アシステッドレーザーデゾープション/イオン化質
量分析法、 HPLC：高性能液体クロマトグラフィー、 amu：原子質量単位、 Lit-Glu(ONSu)-OBut：Nα−リトコリル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエス
テルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Cap-Glu(ONSu)-OBut：Nα−オクタノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエ
ステルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
量分析法、 HPLC：高性能液体クロマトグラフィー、 amu：原子質量単位、 Lit-Glu(ONSu)-OBut：Nα−リトコリル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエス
テルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Cap-Glu(ONSu)-OBut：Nα−オクタノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエ
ステルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
【００８９】 Cac-Glu(ONSu)-OBut：Nα−デカノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエス
テルγ−２,５−ジオキソピロリジン−1−イルエステル、 Lau-Glu(ONSu)-OBut：Nα−ドデカノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエ
ステルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Myr-Glu(ONSu)-OBut：Nα−テトラデカノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチ
ルエステルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Pal-Glu(ONSu)-OBut：Nα−ヘキサデカノイル−(L)−グルタミン酸α−ｔ−ブ
チル−γ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
テルγ−２,５−ジオキソピロリジン−1−イルエステル、 Lau-Glu(ONSu)-OBut：Nα−ドデカノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエ
ステルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Myr-Glu(ONSu)-OBut：Nα−テトラデカノイル−L−グルタミン酸α−ｔ−ブチ
ルエステルγ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Pal-Glu(ONSu)-OBut：Nα−ヘキサデカノイル−(L)−グルタミン酸α−ｔ−ブ
チル−γ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
【００９０】 Ste-Glu(ONSu)-OBut：Nα−オクタデカノイル−(L)−グルタミン酸α−ｔ−ブ
チル−γ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Lau-β-Ala-ONSu：Nβ−ドデカノイル−β−アラニン２,５−ジオキソピロリ ジン−1−イルエステル、 Pal-β-Ala-ONSu：Nβ−ヘキサデカノイル−β−アラニン２,５−ジオキソピ ロリジン−1−イルエステル、 Lau-GABA-ONSu：Nγ−ドデカノイル−γ−アミノ酪酸２,５−ジオキソピロリ ジン−1−イルエステル、
チル−γ−２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、 Lau-β-Ala-ONSu：Nβ−ドデカノイル−β−アラニン２,５−ジオキソピロリ ジン−1−イルエステル、 Pal-β-Ala-ONSu：Nβ−ヘキサデカノイル−β−アラニン２,５−ジオキソピ ロリジン−1−イルエステル、 Lau-GABA-ONSu：Nγ−ドデカノイル−γ−アミノ酪酸２,５−ジオキソピロリ ジン−1−イルエステル、
【００９１】 Myr-GABA-ONSu：Nγ−テトラデカノイル−γ−アミノ酪酸２,５−ジオキソピ ロリジン−1−イルエステル、 Pal-GABA-ONSu：Nγ−ヘキサデカノイル−γ−アミノ酪酸２,５−ジオキソピ ロリジン−1−イルエステル、 Ste-GABA-ONSu：Nγ−オクタデカノイル−γ−アミノ酪酸２,５−ジオキソピ ロリジン−1−イルエステル、 Pal-Isonip-ONSu：N−ヘキサデカノイル−ピペリジン−４−カルボン酸２,５ −ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
【００９２】 Pal-Glu(OBut)-ONSu：Nα−ヘキサデカノイル−L−グルタミン酸α−２,５− ジオキソピロリジン−１−イルエステルγ−ｔ−ブチルエステル、 HOOC-(CH2)6-COONSU：ω−カルボキシヘプタン酸２,５−ジオキソピロリジン −１−イルエステル、 HOOC-(CH2)10-COONSU：ω−カルボキシウンデカン酸２,５−ジオキソピロリジ
ン−１−イルエステル、 HOOC-(CH2)12-COONSU：ω−カルボキシトリデカン酸２,５−ジオキソピロリジ
ン−１−イルエステル、
ン−１−イルエステル、 HOOC-(CH2)12-COONSU：ω−カルボキシトリデカン酸２,５−ジオキソピロリジ
ン−１−イルエステル、
【００９３】 HOOC-(CH2)14-COONSU：ω−カルボキシペンタデカン酸２,５−ジオキソピロリ
ジン−１−イルエステル、 HOOC-(CH2)16-COONSU：ω−カルボキシヘプタデカン酸２,５−ジオキソピロリ
ジン−１−イルエステル、 HOOC-(CH2)18-COONSU：ω−カルボキシノナデカン酸２,５−ジオキソピロリジ
ン−１−イルエステル。
ジン−１−イルエステル、 HOOC-(CH2)16-COONSU：ω−カルボキシヘプタデカン酸２,５−ジオキソピロリ
ジン−１−イルエステル、 HOOC-(CH2)18-COONSU：ω−カルボキシノナデカン酸２,５−ジオキソピロリジ
ン−１−イルエステル。
【００９４】 分析： プラズマデゾープション質量分析法：サンプル調製 ： サンプルを、0.1％TFA/EtOH(1:1)中に、１μg/μlの濃度で溶解する。そのサ ンプル溶液（５〜10μl）を、ニトロセルロース標的物（Bio-ion AB, Uppsala,
Sweden）上に配置し、そして２分間、前記標的物表面への吸着を可能にする。続
いて、標的物を、２×25μlの0.1％TFAによりすすぎ、そして回転乾燥せしめる 。最終的に、ニトロセルロース標的物を標的カロウセル（carrousel）に配置し 、そして質量分光計中に導入する。
Sweden）上に配置し、そして２分間、前記標的物表面への吸着を可能にする。続
いて、標的物を、２×25μlの0.1％TFAによりすすぎ、そして回転乾燥せしめる 。最終的に、ニトロセルロース標的物を標的カロウセル（carrousel）に配置し 、そして質量分光計中に導入する。
【００９５】MS分析 ： PDMS分析を、Bio-ion 20 time-of-flight 装置（Bio-ion Nordic AB, Uppsala
, Sweden）を用いて行った。15kVの加速電圧を適用し、そして252-Cf分断フラグ
メントによるニトロセルロース表面の衝撃により形成される分子イオンを停止検
出器に対して促進した。得られるtime-of-flight スペクトルを、それぞれ、m/z
1及び30で、H+及びNO+イオンを用いて真の質量スペクトルに対応せしめた。質 量スペクトルは、一般的に、15〜20分に対応する1.0×106分断現象のために蓄積
された。得られる割り当てられた質量はすべて、同位体的に平均化された分子質
量に対応する。質量割り当ての精度は一般的に、0.1％よりも良好である。
, Sweden）を用いて行った。15kVの加速電圧を適用し、そして252-Cf分断フラグ
メントによるニトロセルロース表面の衝撃により形成される分子イオンを停止検
出器に対して促進した。得られるtime-of-flight スペクトルを、それぞれ、m/z
1及び30で、H+及びNO+イオンを用いて真の質量スペクトルに対応せしめた。質 量スペクトルは、一般的に、15〜20分に対応する1.0×106分断現象のために蓄積
された。得られる割り当てられた質量はすべて、同位体的に平均化された分子質
量に対応する。質量割り当ての精度は一般的に、0.1％よりも良好である。
【００９６】MALDI−MS ： MALDI−TOF MS分析を、遅延された抽出を備えつけられ、そして直線モードで
作動するVoyager RP装置（PerSeptive Biosystems Inc., Framingham, MA）を用
いて行った。α−シアノ−４−ヒドロキシ−桂皮酸がマトリックスとして使用さ
れ、そして質量割り当ては、外部検量に基づいた。
作動するVoyager RP装置（PerSeptive Biosystems Inc., Framingham, MA）を用
いて行った。α−シアノ−４−ヒドロキシ−桂皮酸がマトリックスとして使用さ
れ、そして質量割り当ては、外部検量に基づいた。
【００９７】例１ ．Arg26,34,Lys36(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-3 6)-OHの合成 Arg26,34,Lys36GLP-1(7-36)-OH(12.2mg, 3.67μモル)、EDPA（13.3mg, 103μ モル）、NMP（1.71ml）及び水（855μl）の混合物に、NMP（148μl）中、PCT出 願番号PCT/DK97/00340号に記載のようにして調製されたPal-Glu(ONSu)-OBut(5.9
4mg, 11μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し
、そして室温でさらに90分間、静置した。
4mg, 11μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し
、そして室温でさらに90分間、静置した。
【００９８】 反応を、水（0.6ml）中、グリシン（6mg, 81μモル）の溶液の添加により急冷
した。酢酸アンモニウム（38ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合 物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５ ％水性アセトニトリル（20ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）に よる溶出によりカートリッジから遊離した。
した。酢酸アンモニウム（38ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合 物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５ ％水性アセトニトリル（20ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）に よる溶出によりカートリッジから遊離した。
【００９９】 溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 3
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（3.1mg, 23%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
695±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3694±3amu（理 論値3694amu）である。
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（3.1mg, 23%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
695±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3694±3amu（理 論値3694amu）である。
【０１００】例２ ．Arg26,34,Lys36(Nε-(γ-グルタミル(Nα-オクタデカノイル)))GLP-1(7-3 6)-OHの合成 Arg26,34,Lys36GLP-1(7-36)-OH(12.2mg, 3.7μモル)、EDPA（13.3mg, 103μモ
ル）、NMP（1.71ml）及び水（855μl）の混合物に、NMP（1ml）中、PCT出願番号
PCT/DK97/00340号に記載のようにして調製されたSte-Glu(ONSu)-OBut(6.25mg, 1
1μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そし
て室温でさらに90分間、静置した。
ル）、NMP（1.71ml）及び水（855μl）の混合物に、NMP（1ml）中、PCT出願番号
PCT/DK97/00340号に記載のようにして調製されたSte-Glu(ONSu)-OBut(6.25mg, 1
1μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そし
て室温でさらに90分間、静置した。
【０１０１】 反応を、水（0.6ml）中、グリシン（6mg, 81μモル）の溶液の添加により急冷
した。酢酸アンモニウム（54ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合 物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５ ％水性アセトニトリル（20ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）に よる溶出によりカートリッジから遊離した。
した。酢酸アンモニウム（54ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合 物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５ ％水性アセトニトリル（20ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）に よる溶出によりカートリッジから遊離した。
【０１０２】 溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 3
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（3.7mg, 27%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
723±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3722±3amu（理 論値3722amu）である。
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（3.7mg, 27%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
723±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3722±3amu（理 論値3722amu）である。
【０１０３】例３ ．リトコール酸２,５−ジオキソピロリジン−１−イルエステルの合成 無水THF（120ml）及び無水アセトニトリル（30ml）の混合物中、リトコール酸
（lithocholic acid）（5.44g, 14.3mモル）の溶液に、N−ヒドロキシスクシン イミド（1.78g, 15mモル）を添加した。その混合物を10℃に冷却し、無水THF（3
0ml）中、DCC（3.44g, 16.7mモル）の溶液を滴下し、そして得られる混合物を室
温で16時間撹拌した。反応混合物を濾過し、そしてジクロロメタン（450ml）と1
0％水性Na2CO3(150ml)との間に分配した。
（lithocholic acid）（5.44g, 14.3mモル）の溶液に、N−ヒドロキシスクシン イミド（1.78g, 15mモル）を添加した。その混合物を10℃に冷却し、無水THF（3
0ml）中、DCC（3.44g, 16.7mモル）の溶液を滴下し、そして得られる混合物を室
温で16時間撹拌した。反応混合物を濾過し、そしてジクロロメタン（450ml）と1
0％水性Na2CO3(150ml)との間に分配した。
【０１０４】 相を分離し、そして有機相を、10％水性Na2CO3(150ml)、水（２×150ml）によ
り洗浄し、そしてMgSO4上で乾燥せしめた。溶媒を真空下で濃縮した。残留物を 、ジクロロメタン（30ml）及びｎ−ヘプタン（30ml）の混合物から結晶化した。
沈殿物を真空乾燥オーブンにおいて36時間乾燥せしめ、標記化合物（3.46g, 51%
）を得た。
り洗浄し、そしてMgSO4上で乾燥せしめた。溶媒を真空下で濃縮した。残留物を 、ジクロロメタン（30ml）及びｎ−ヘプタン（30ml）の混合物から結晶化した。
沈殿物を真空乾燥オーブンにおいて36時間乾燥せしめ、標記化合物（3.46g, 51%
）を得た。
【０１０５】例４ ．Lit-Glu(ONSu)-OButの合成 H-Glu(OH)-OBut(1.28g, 6.33mモル)、DMF（88ml）及びEDPA（0.82g, 6.33mモ ル）、及び例３に記載のようにして調製されたリトコール酸２,５−ジオキソピ ロリジン−1−イルエステルの懸濁液を、室温で16時間撹拌した。その反応混合 物を真空下で濃縮し、そして残留物を酢酸エチル（40ml）に溶解した。得られる
溶液を、５％水性クエン酸（２×25ml）、ブライン（10ml）により洗浄し、そし
て濾過した。
溶液を、５％水性クエン酸（２×25ml）、ブライン（10ml）により洗浄し、そし
て濾過した。
【０１０６】 溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物をDMF（12ml）に溶解した。得られる溶 液を、クエン酸の10％水溶液に滴下し、それにより生成物が沈殿する。沈殿物を
集め、そして氷水により洗浄し、そして真空下で乾燥せしめた。粗生成物を、ｎ
−ヘプタン（40ml）及び２−プロパノール（17ml）の混合物から再結晶化した。
沈殿物を真空乾燥オーブンにおいて４時間乾燥せしめ、遊離酸中間体を付与した
。DMF（18ml）中、その遊離酸中間体の溶液に、ヒドロキシスクシンイミド（0.4
5g, 3.91mモル）、続いてジクロロメタン（18ml）中、DCC（0.73g, 3.56mモル）
の溶液を添加した。
集め、そして氷水により洗浄し、そして真空下で乾燥せしめた。粗生成物を、ｎ
−ヘプタン（40ml）及び２−プロパノール（17ml）の混合物から再結晶化した。
沈殿物を真空乾燥オーブンにおいて４時間乾燥せしめ、遊離酸中間体を付与した
。DMF（18ml）中、その遊離酸中間体の溶液に、ヒドロキシスクシンイミド（0.4
5g, 3.91mモル）、続いてジクロロメタン（18ml）中、DCC（0.73g, 3.56mモル）
の溶液を添加した。
【０１０７】 得られる混合物を周囲温度で18時間撹拌し、そして次に、濾過した。濾液を真
空下で固体に濃縮し、そして残留物をジクロロメタン（25ml）に溶解し、そして
濾過を反復し、溶媒を真空下で除去し、発泡体を得た。残留物を還流ｎ−ヘプタ
ン（35ml）に溶解し、そして生成物を２−プロパノールの添加により結晶化した
。沈殿物を集め、冷ｎ−ヘプタンにより洗浄し、35℃で真空下で乾燥せしめ、標
記化合物（1.34g, 57%）を得た。
空下で固体に濃縮し、そして残留物をジクロロメタン（25ml）に溶解し、そして
濾過を反復し、溶媒を真空下で除去し、発泡体を得た。残留物を還流ｎ−ヘプタ
ン（35ml）に溶解し、そして生成物を２−プロパノールの添加により結晶化した
。沈殿物を集め、冷ｎ−ヘプタンにより洗浄し、35℃で真空下で乾燥せしめ、標
記化合物（1.34g, 57%）を得た。
【０１０８】例５ ．Arg34,Lys26(Nε-(γ-グルタミル(Nα-リトコリル)))GLP-1(7-37)-OHの合 成 Arg34,Lys26GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 340μモル）
、NMP（5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（1ml）中、例４に記載のよ うにして調製されたLit-Glu(ONSu)-OBut(24mg, 37μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに75分間、静置し
た。
、NMP（5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（1ml）中、例４に記載のよ うにして調製されたLit-Glu(ONSu)-OBut(24mg, 37μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに75分間、静置し
た。
【０１０９】 反応を、水（2ml）中、グリシン（20mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷
した。酢酸アンモニウム（128ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合
物を２つの等しい部分に分け、そして個々の部分を、Varian 5g C8 Mega Bond E
lut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセトニトリル（2×25ml
）により洗浄し、そして最終的に、TFF（2×25ml）による溶出によりカートリッ
ジから遊離した。組み合わされた溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シ
アノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステ ムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
した。酢酸アンモニウム（128ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合
物を２つの等しい部分に分け、そして個々の部分を、Varian 5g C8 Mega Bond E
lut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセトニトリル（2×25ml
）により洗浄し、そして最終的に、TFF（2×25ml）による溶出によりカートリッ
ジから遊離した。組み合わされた溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シ
アノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステ ムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１１０】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（5mg, 11%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3823±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3871±3amu（理論値3871amu）である。
0％であった。標記化合物（5mg, 11%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3823±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3871±3amu（理論値3871amu）である。
【０１１１】例６ ．Arg26,Lys34(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-37)- OHの合成 Arg26,Lys34GLP-1(7-37)-OH(18mg,5.3μモル)、EDPA（19.3mg, 149μモル）、
NMP（2.52ml）及び水（1.26ml）の混合物に、NMP（215μl）中、Pal-Glu(ONSu)-
OBut(8.6mg, 16μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽 く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（0.88ml）中、グ
リシン（8.8mg, 117μモル）の溶液の添加により急冷した。
NMP（2.52ml）及び水（1.26ml）の混合物に、NMP（215μl）中、Pal-Glu(ONSu)-
OBut(8.6mg, 16μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽 く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（0.88ml）中、グ
リシン（8.8mg, 117μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１１２】 酢酸アンモニウム（50ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１１３】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（6mg, 30%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3752±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3751±3amu（理論値3751amu）である。
0％であった。標記化合物（6mg, 30%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3752±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3751±3amu（理論値3751amu）である。
【０１１４】例７ ．デスアミの−His7,Arg26,Lys34(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイ ル)))GLP-1(7-37)-OHの合成 デスアミの−His7,Arg26,Lys34GLP-1(7-37)-OH(14.3mg, 4.2μモル)、EDPA（1
5.3mg, 119μモル）、NMP（2ml）及び水（1ml）の混合物に、NMP（171μl）中、
Pal-Glu(ONSu)-OBut(6.84mg, 12.7μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を
室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに50分間、静置した。反応を、水
（700μl）中、グリシン（7mg, 99μモル）の溶液の添加により急冷した。
5.3mg, 119μモル）、NMP（2ml）及び水（1ml）の混合物に、NMP（171μl）中、
Pal-Glu(ONSu)-OBut(6.84mg, 12.7μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を
室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに50分間、静置した。反応を、水
（700μl）中、グリシン（7mg, 99μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１１５】 酢酸アンモニウム（42ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１１６】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（5.6mg, 35%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3738±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3737±3amu（理論値3737amu）である 。
0％であった。標記化合物（5.6mg, 35%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3738±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3737±3amu（理論値3737amu）である 。
【０１１７】例８ ．Gly8,Arg26,34,Lys38(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP- 1(7-38)-OHの合成 Gly8,Arg26,34,Lys38GLP-1(7-38)-OH(11.8mg,3.4μモル)、EDPA（12.1mg, 94 μモル）、NMP（1.65ml）及び水（0.83ml）の混合物に、NMP（135μl）中、Pal-
Glu(ONSu)-OBut(5.4mg, 10μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で ５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに75分間、静置した。反応を、水（553 μl）中、グリシン（5.5mg, 73.7μモル）の溶液の添加により急冷した。
Glu(ONSu)-OBut(5.4mg, 10μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で ５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに75分間、静置した。反応を、水（553 μl）中、グリシン（5.5mg, 73.7μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１１８】 酢酸アンモニウム（36ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond ElutR上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセト ニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶出によ りカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シア
ノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステム を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
arian 5g C8 Mega Bond ElutR上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセト ニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶出によ りカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シア
ノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステム を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１１９】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（5mg, 38%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3895±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3894±3amu（理論値3894amu）である。
0％であった。標記化合物（5mg, 38%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3895±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3894±3amu（理論値3894amu）である。
【０１２０】例９ ．Gly8,Glu37,Arg26,34,Lys38 (Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル )))GLP-1(7-38)-OHの合成 Gly8,Glu37,Arg26,34,Lys38 GLP-1(7-38)-OH(9mg,2.48μモル)、EDPA（9mg, 6
9.4μモル）、NMP（1.25ml）及び水（0.63ml）の混合物に、NMP（100μl）中、P
al-Glu(ONSu)-OBut(4mg, 7.4μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温 で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに105分間、静置した。反応を、水（4
10μl）中、グリシン（4.1mg, 54.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
9.4μモル）、NMP（1.25ml）及び水（0.63ml）の混合物に、NMP（100μl）中、P
al-Glu(ONSu)-OBut(4mg, 7.4μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温 で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに105分間、静置した。反応を、水（4
10μl）中、グリシン（4.1mg, 54.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１２１】 酢酸アンモニウム（27ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（15ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（15ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１２２】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（2.9mg, 29%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3967±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3967±3amu（理論値3967amu）である 。
0％であった。標記化合物（2.9mg, 29%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3967±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3967±3amu（理論値3967amu）である 。
【０１２３】例10 ．Gly8,Glu37,Arg26,34,Lys38 (Nε-(γ-グルタミル(Nα-オクタデカノイル )))GLP-1(7-38)-OHの合成 Gly8,Glu37,Arg26,34,Lys38 GLP-1(7-38)-OH(9mg,2.5μモル)、EDPA（9mg, 69
.4μモル）、NMP（1.25ml）及び水（0.63ml）の混合物に、NMP（105μl）中、St
e-Glu(ONSu)-OBut(4.2mg, 7.4μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温
で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに105分間、静置した。反応を、水（4
09μl）中、グリシン（4.1mg, 54.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
.4μモル）、NMP（1.25ml）及び水（0.63ml）の混合物に、NMP（105μl）中、St
e-Glu(ONSu)-OBut(4.2mg, 7.4μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温
で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに105分間、静置した。反応を、水（4
09μl）中、グリシン（4.1mg, 54.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１２４】 酢酸アンモニウム（27ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（15ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（15ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１２５】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（3.2mg,32%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分
析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3995±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3994±3amu（理論値3995amu）である。
0％であった。標記化合物（3.2mg,32%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分
析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3995±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3994±3amu（理論値3995amu）である。
【０１２６】例11 ．Cap-Glu(ONSu)-OButの合成 無水アセトニトリル（10ml）中、オクタン酸（5g, 34.7mモル）及びN−ヒドロ
キシスクシンイミド（4g, 34.7mモル）の溶液に、無水ジクロロメタン（15ml） 中、DCC（7.15g, 34.7mモル）の溶液を添加し、そして得られる反応混合物を室 温で16時間撹拌した。沈殿された固体を濾過し、そしてｎ−ヘプタン（40ml）及
び２−プロパノール（2ml）の混合物から再結晶化した。沈殿物を真空乾燥オー ブンにおいて16時間乾燥せしめ、中間体Cap-ONSuを得た。
キシスクシンイミド（4g, 34.7mモル）の溶液に、無水ジクロロメタン（15ml） 中、DCC（7.15g, 34.7mモル）の溶液を添加し、そして得られる反応混合物を室 温で16時間撹拌した。沈殿された固体を濾過し、そしてｎ−ヘプタン（40ml）及
び２−プロパノール（2ml）の混合物から再結晶化した。沈殿物を真空乾燥オー ブンにおいて16時間乾燥せしめ、中間体Cap-ONSuを得た。
【０１２７】 粗エステル中間体（3.9g, 16.2mモル）、(L)-H-Glu(OH)-OBut(3.28g, 16.2mモ
ル)、DMF（268ml）及びEDTA（2.1g, 16.2mモル）の懸濁液を室温で16時間撹拌し
た。その反応混合物を真空下で濃縮し、そして残留物を酢酸エチル（50ml）に溶
解した。得られる溶液を５％水性クエン酸（２×25ml）により洗浄した。溶媒を
真空下で濃縮し、そして残留物をDMF（36ml）に溶解した。その得られる溶液を クエン酸（357ml）の10％水溶液に滴下し、そして酢酸エチル（200ml）により抽
出し、そしてMgSO4上で乾燥せしめた。
ル)、DMF（268ml）及びEDTA（2.1g, 16.2mモル）の懸濁液を室温で16時間撹拌し
た。その反応混合物を真空下で濃縮し、そして残留物を酢酸エチル（50ml）に溶
解した。得られる溶液を５％水性クエン酸（２×25ml）により洗浄した。溶媒を
真空下で濃縮し、そして残留物をDMF（36ml）に溶解した。その得られる溶液を クエン酸（357ml）の10％水溶液に滴下し、そして酢酸エチル（200ml）により抽
出し、そしてMgSO4上で乾燥せしめた。
【０１２８】 溶媒を真空下で濃縮し、粗グルタミン酸中間体を得た。その粗グルタミン酸中
間体、N−ヒドロキシスクシンイミド（1.85g, 16.1mモル）及びDMF（25ml）の混
合物に、ジクロロメタン（15ml）中、DCC（3.32g, 16.1mモル）の溶液を添加し た。得られる混合物を周囲温度で20時間撹拌した。その反応混合物を濾過し、そ
して溶媒を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム（40〜63μm）上で精 製し、ジクロロメタン及びアセトニトリルの混合物（1:1）により溶出し、標記 化合物（0.63g, 全体的に６％）を得た。
間体、N−ヒドロキシスクシンイミド（1.85g, 16.1mモル）及びDMF（25ml）の混
合物に、ジクロロメタン（15ml）中、DCC（3.32g, 16.1mモル）の溶液を添加し た。得られる混合物を周囲温度で20時間撹拌した。その反応混合物を濾過し、そ
して溶媒を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム（40〜63μm）上で精 製し、ジクロロメタン及びアセトニトリルの混合物（1:1）により溶出し、標記 化合物（0.63g, 全体的に６％）を得た。
【０１２９】例12 ．デスアミノ−His7,Arg26,Lys34(Nε-(γ-グルタミル(Nα-オクタノイル)) )GLP-1(7-37)-OHの合成 脱アミの−His7,Arg26,Lys34GLP-1(7-37)-OH(14.3mg, 4.2μモル)、EDPA（15.
3mg, 119μモル）、NMP（2ml）及び水（1ml）の混合物に、NMP（135μl）中、例
11に記載されるようにして調製されたCap-Glu(ONSu)-OBut(6.8mg, 12.7μモル) の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温で
さらに2時間、静置した。
3mg, 119μモル）、NMP（2ml）及び水（1ml）の混合物に、NMP（135μl）中、例
11に記載されるようにして調製されたCap-Glu(ONSu)-OBut(6.8mg, 12.7μモル) の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温で
さらに2時間、静置した。
【０１３０】 反応を、水（698μl）中、グリシン（7mg, 93μモル）の溶液の添加により急 冷した。酢酸アンモニウム（42ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混 合物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を ５％水性アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml） による溶出によりカートリッジから遊離した。
【０１３１】 溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 3
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（4.1mg, 27%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
626±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3625±3amu（理 論値3625amu）である。
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（4.1mg, 27%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
626±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3625±3amu（理 論値3625amu）である。
【０１３２】例13 ．Glu37,Arg26,34,Lys38 (Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイ ル)))GLP-1(7-38)-OHの合成 Glu37,Arg26,34,Lys38 GLP-1(7-38)-OH(17.6mg,4.9μモル)、EDPA（17.6mg, 1
36μモル）、NMP（1.23ml）及び水（2.46ml）の混合物に、NMP（197μl）中、Pa
l-Glu(ONSu)-OBut(7.9mg, 14.6μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室 温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに２時間、静置した。反応を、水（
804μl）中、グリシン（8mg, 107μモル）の溶液の添加により急冷した。
36μモル）、NMP（1.23ml）及び水（2.46ml）の混合物に、NMP（197μl）中、Pa
l-Glu(ONSu)-OBut(7.9mg, 14.6μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室 温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに２時間、静置した。反応を、水（
804μl）中、グリシン（8mg, 107μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１３３】 酢酸アンモニウム（49ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を
、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシ ステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１３４】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（5.1mg, 26%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3981±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3980±3amu（理論値3981amu）である 。
0％であった。標記化合物（5.1mg, 26%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3981±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3980±3amu（理論値3981amu）である 。
【０１３５】例14 ．Arg34,Lys26(Nε-(γ-グルタミル(Nα-オクタデカノイ ル)))GLP-1(7-37)-OHの合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 341μモル）、NMP （5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（517μl）中、Ste-Glu(ONSu)-OBu t (20.7mg, 36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽 く振盪し、そして室温でさらに120分間、静置した。反応を、水（2.01ml）中、 グリシン（20.1mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１３６】 酢酸アンモニウム（120ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物を
Varian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水 性アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による 溶出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物
を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFA システムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
Varian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水 性アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による 溶出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物
を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFA システムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１３７】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（15.4mg, 34%）を単離し、そして生成物をPDMSにより
分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3781±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3780±3amu（理論値3779amu）である 。
0％であった。標記化合物（15.4mg, 34%）を単離し、そして生成物をPDMSにより
分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3781±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3780±3amu（理論値3779amu）である 。
【０１３８】例15 ．Arg34,Lys26(Nε-デカノイル) GLP-1(7-37)-OHの合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(20mg, 5.9μモル)、EDPA（21.4mg, 165μモル）、NMP（
2.8ml）及び水（1.4ml）の混合物に、NMP（119μl）中、Cac-ONSu (4.8mg, 17.7
μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そし て室温でさらに120分間、静置した。反応を、水（98μl）中、グリシン（9.8mg,
130μモル）の溶液の添加により急冷した。
2.8ml）及び水（1.4ml）の混合物に、NMP（119μl）中、Cac-ONSu (4.8mg, 17.7
μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そし て室温でさらに120分間、静置した。反応を、水（98μl）中、グリシン（9.8mg,
130μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１３９】 得られる混合物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のア セトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100 ％であった。標記化合物（7.4mg, 35%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分
析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3539±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3538±3amu（理論値3538amu）である。
カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100 ％であった。標記化合物（7.4mg, 35%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分
析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3539±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3538±3amu（理論値3538amu）である。
【０１４０】例16 ．Arg34,Lys26(Nε-(ヘキサデカノイル)) GLP-1(7-37)-OHの合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 340μモル）、NMP （2.88ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（3.3ml）中、Pal-ONSu (12.9mg,
36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、 そして室温でさらに110分間、静置した。反応を、水（201μl）中、グリシン（2
0.1mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷した。
36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、 そして室温でさらに110分間、静置した。反応を、水（201μl）中、グリシン（2
0.1mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１４１】 溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300
SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエン
トは60分で、０〜100％であった。標記化合物（15mg, 3４%）を単離し、そして 生成物をPDMSにより分析した。
SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエン
トは60分で、０〜100％であった。標記化合物（15mg, 3４%）を単離し、そして 生成物をPDMSにより分析した。
【０１４２】例17 ．Arg26,34,Lys27(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-3 7)-OHの合成 Arg26,34,Lys27GLP-1(7-37)-OH(11.6mg, 3.4μモル)、EDPA（12.3mg, 94.9μ モル）、NMP（1.6ml）及び水（0.8ml）の混合物に、NMP（137μl）中、Pal-Glu(
ONSu)-OBut(5.5mg, 10.2μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５ 分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（560μl
）中、グリシン（5.6mg, 74.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
ONSu)-OBut(5.5mg, 10.2μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５ 分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（560μl
）中、グリシン（5.6mg, 74.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１４３】 酢酸アンモニウム（34ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、
シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシス テムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し
、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合 物（2.1mg, 16%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、
シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシス テムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し
、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合 物（2.1mg, 16%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
【０１４４】例18 ．Arg26,34,Lys23(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-3 7)-OHの合成 Arg26,34,Lys23GLP-1(7-37)-OH(11.6mg, 3.4μモル)、EDPA（12.3mg, 94.9μ モル）、NMP（1.6ml）及び水（0.8ml）の混合物に、NMP（137μl）中、Pal-Glu(
ONSu)-OBut(5.5mg, 10.2μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５ 分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（560μl
）中、グリシン（5.6mg, 74.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
ONSu)-OBut(5.5mg, 10.2μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５ 分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（560μl
）中、グリシン（5.6mg, 74.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１４５】 酢酸アンモニウム（34ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、
シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシス テムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し
、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合 物（3.1mg, 24%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、
シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシス テムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し
、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合 物（3.1mg, 24%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
【０１４６】例19 ．Arg26,34,Lys18(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-3 7)-OHの合成 Arg26,34,Lys18GLP-1(7-37)-OH(11.7mg, 3.4μモル)、EDPA（12.2mg, 94.6μ モル）、NMP（1.6ml）及び水（0.8ml）の混合物に、NMP（137μl）中、Pal-Glu(
ONSu)-OBut(5.5mg, 10.2μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５ 分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（560μl
）中、グリシン（5.6mg, 74.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
ONSu)-OBut(5.5mg, 10.2μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５ 分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反応を、水（560μl
）中、グリシン（5.6mg, 74.6μモル）の溶液の添加により急冷した。
【０１４７】 酢酸アンモニウム（34ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をV
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、
シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシス テムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し
、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合 物（1.9mg, 15%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
arian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性
アセトニトリル（15ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶 出によりカートリッジから遊離した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、
シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシス テムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し
、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合 物（1.9mg, 15%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
【０１４８】例20 ．Arg34,Lys26(Nε-(オクタノイル)) GLP-1(7-37)-OHの合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 340μモル）、NMP （5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（106μl）中、例10に記載のよう にして調製されたCap-ONSu (8.7mg, 36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混
合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに115分間、静置した。反 応を、水（200μl）中、グリシン（20mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷 した。
合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに115分間、静置した。反 応を、水（200μl）中、グリシン（20mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷 した。
【０１４９】 溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300
SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエン
トは60分で、０〜100％であった。標記化合物（18.8mg, 44%）を単離し、そして
生成物をPDMSにより分析した。
SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエン
トは60分で、０〜100％であった。標記化合物（18.8mg, 44%）を単離し、そして
生成物をPDMSにより分析した。
【０１５０】例21 ．Arg34,Lys26(Nε-(ドデカノイル)) GLP-1(7-37)-OHの合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 341μモル）、NMP （5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（271μl）中、例10に記載のよう にして調製されたLap-ONSu (8.8mg, 36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混
合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに100分間、静置した。反 応を、水（200μl）中、グリシン（20.1mg, 268μモル）の溶液の添加により急 冷した。
合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに100分間、静置した。反 応を、水（200μl）中、グリシン（20.1mg, 268μモル）の溶液の添加により急 冷した。
【０１５１】 溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300
SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエン
トは60分で、０〜100％であった。標記化合物（18mg, 42%）を単離し、そして生
成物をPDMSにより分析した。
SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエン
トは60分で、０〜100％であった。標記化合物（18mg, 42%）を単離し、そして生
成物をPDMSにより分析した。
【０１５２】例22 ．Pal−GABA−ONSuの合成 DMF(200ml) 中、Pal−GABA(3g, 8.48mモル), γ−アミノ酪酸(0.87g, 8.48mモ
ル)の混合物を、室温で60時間撹拌した。その反応混合物を濾過し、そして濾液 を、10%水性クエン酸(500ml)に滴下した。沈殿されたN−アシル化された中間体 を集め、そして真空下で乾燥せしめた。DMF(35ml)中、乾燥された中間体の懸濁 液に、ジクロロメタン(20ml)中、DCC(1.45g, 7.0mモル) の溶液を添加した。そ の得られる混合液を室温で20時間撹拌し、そして次に濾過した。溶媒を真空下で
除去し、固体残留物を付与した。その残留物を、n−ヘプタン(50ml) 及び２−プ
ロパノール(2.5ml)の混合物から再結晶化し、標記化合物(2.5g, 75%)を得た。
ル)の混合物を、室温で60時間撹拌した。その反応混合物を濾過し、そして濾液 を、10%水性クエン酸(500ml)に滴下した。沈殿されたN−アシル化された中間体 を集め、そして真空下で乾燥せしめた。DMF(35ml)中、乾燥された中間体の懸濁 液に、ジクロロメタン(20ml)中、DCC(1.45g, 7.0mモル) の溶液を添加した。そ の得られる混合液を室温で20時間撹拌し、そして次に濾過した。溶媒を真空下で
除去し、固体残留物を付与した。その残留物を、n−ヘプタン(50ml) 及び２−プ
ロパノール(2.5ml)の混合物から再結晶化し、標記化合物(2.5g, 75%)を得た。
【０１５３】例23 ．Arg34,Lys26(Nε-(γ−アミノブチロイル(Nγ−ヘキサデカノイル)))GLP -1(7-37)-OHの合成 Arg34,Lys26GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 341μモル）
、NMP（5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（400μl）中、例20に記載の
ようにして調製されたPal-GABA-ONSu (16mg, 36.5μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに100分間、静置 した。
、NMP（5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（400μl）中、例20に記載の
ようにして調製されたPal-GABA-ONSu (16mg, 36.5μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに100分間、静置 した。
【０１５４】 反応を、水（200μl）中、グリシン（20.1mg, 268μモル）の溶液の添加によ り急冷した。溶媒を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（
Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロ マトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリル
グラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（15.8mg, 35%）を単離
し、そして生成物をPDMSにより分析した。
Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロ マトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリル
グラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（15.8mg, 35%）を単離
し、そして生成物をPDMSにより分析した。
【０１５５】例24 ．Nα−ヘキサデカノイル−D−グルタミン酸α−t−ブチルエステル−γ− 2,5−ジオキソピロリジン−１イルエステルの合成 DMF(538ml) 中、Pal-ONSu(6.64g, 18.8mモル)、D−グルタミン酸α−tert−ブ
チルエステル(4.5g, 18.8mモル)及びEDPA(4.85g, 37.5mモル)の混合物を、室温 で60時間撹拌した。溶媒を除去し、そして残留物を酢酸エチル(175ml)に溶解し た。その得られた溶液を10％水性クエン酸(２×125ml) により抽出し、そして有
機相を真空下で濃縮した。
チルエステル(4.5g, 18.8mモル)及びEDPA(4.85g, 37.5mモル)の混合物を、室温 で60時間撹拌した。溶媒を除去し、そして残留物を酢酸エチル(175ml)に溶解し た。その得られた溶液を10％水性クエン酸(２×125ml) により抽出し、そして有
機相を真空下で濃縮した。
【０１５６】 残留物をDMF(60ml)に溶解し、そしてその得られる混合物を10％水性クエン酸(
500ml) にゆっくりと添加した。沈殿された化合物を集め、そして真空下で乾燥 せしめ、粗N−アシル化されたグルタミン酸中間体を付与した。その粗中間体をD
MF(35ml)に溶解し、そしてジクロロメタン(70ml)中、DCC(3.5g, 17mモル)の溶液
を添加した。その得られる混合物を室温で20時間撹拌し、そして次に濾過した。
濾液を真空化で濃縮し、そして固体残留物をn−ヘプタン(75ml) 及び２−プロパ
ノール(5ml)の混合物から再結晶化し、標記化合物(5.2g, 50%)を得た。
500ml) にゆっくりと添加した。沈殿された化合物を集め、そして真空下で乾燥 せしめ、粗N−アシル化されたグルタミン酸中間体を付与した。その粗中間体をD
MF(35ml)に溶解し、そしてジクロロメタン(70ml)中、DCC(3.5g, 17mモル)の溶液
を添加した。その得られる混合物を室温で20時間撹拌し、そして次に濾過した。
濾液を真空化で濃縮し、そして固体残留物をn−ヘプタン(75ml) 及び２−プロパ
ノール(5ml)の混合物から再結晶化し、標記化合物(5.2g, 50%)を得た。
【０１５７】例25 ．Arg34,Lys26(Nε-(γ−D−グルタミル (Nα−ヘキサデカノイル))) GLP-1 (7-37)-OHの合成 Arg34,Lys26GLP-1(7-37)-OH(41.1mg, 12.2μモル)、EDPA（44mg, 341μモル）
、NMP（5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（491μl）中、Nα−ヘキサ デカノイル−D−グルタミン酸α−t−ブチルエステル−γ−2,5−ジオキソピロ リジン−１イルエステル(19.7ml, 36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混合
物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに95分間、静置した。
、NMP（5.76ml）及び水（2.88ml）の混合物に、NMP（491μl）中、Nα−ヘキサ デカノイル−D−グルタミン酸α−t−ブチルエステル−γ−2,5−ジオキソピロ リジン−１イルエステル(19.7ml, 36.5μモル)の溶液を添加した。その反応混合
物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに95分間、静置した。
【０１５８】 反応を、水（2ml）中、グリシン（20mg, 268μモル）の溶液の添加により急冷
し、そしてその得られる混合物を等しい部分に分け、そして個々の部分を、Vari
an 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性ア セトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶出 によりカートリッジから遊離した。
し、そしてその得られる混合物を等しい部分に分け、そして個々の部分を、Vari
an 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性ア セトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶出 によりカートリッジから遊離した。
【０１５９】 その組み合わされた溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピ
ルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いて カラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセ
トニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（10.5mg, 2
3%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
ルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いて カラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセ
トニトリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（10.5mg, 2
3%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。
【０１６０】例26 ．Lys34(Nε-(γ-グルタミル(Nα-テトラデカノイル)))GLP-1(7-37)の合成 GLP-1(7-37)-OH(33.6mg, 8.9μモル)、EDPA（32.4mg, 250μモル）、NMP（2.1
ml）及び水（2.1ml）の混合物に、NMP（228μl）中、PCT出願番号PCT/DK97/0034
0号に記載のようにして調製されたMyr-Glu(ONSu)-OBut(9.1mg, 17.9μモル)の溶
液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさら
に80分間、静置した。
ml）及び水（2.1ml）の混合物に、NMP（228μl）中、PCT出願番号PCT/DK97/0034
0号に記載のようにして調製されたMyr-Glu(ONSu)-OBut(9.1mg, 17.9μモル)の溶
液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさら
に80分間、静置した。
【０１６１】 反応を、水（1.47ml）中、グリシン（14.8mg, 197μモル）の溶液の添加によ り急冷した。酢酸アンモニウム（100ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られ
る混合物を2つの等しい部分に分け、そして個々の部分を、Varian 5g C8 Mega B
ond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセトニトリル（２
×25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（２×25ml）による溶出によりカ ートリッジから遊離した。
る混合物を2つの等しい部分に分け、そして個々の部分を、Varian 5g C8 Mega B
ond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセトニトリル（２
×25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（２×25ml）による溶出によりカ ートリッジから遊離した。
【０１６２】 組み合わされた溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカ
ラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラ ムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニ
トリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（0.19mg, 0/6% ）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンにつ
いてのm/z値は、3693±３であることが見出された。従って、得られる分子量は 、3692±3amu（理論値3695amu）である。
ラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラ ムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニ
トリルグラジエントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（0.19mg, 0/6% ）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンにつ
いてのm/z値は、3693±３であることが見出された。従って、得られる分子量は 、3692±3amu（理論値3695amu）である。
【０１６３】例27 ．Arg26,34,Lys8(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-37 )の合成 Arg26,34,Lys8GLP-1(7-37)-OH(10.3mg, 3μモル)、EDPA（10.8mg, 83μモル）
、NMP（1.441ml）及び水（0.72ml）の混合物に、NMP（120μl）中、PCT出願番号
PCT/DK97/00340号に記載のようにして調製されたPal-Glu(ONSu)-OBut(4.8mg, 8.
9μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そし
て室温でさらに70分間、静置した。
、NMP（1.441ml）及び水（0.72ml）の混合物に、NMP（120μl）中、PCT出願番号
PCT/DK97/00340号に記載のようにして調製されたPal-Glu(ONSu)-OBut(4.8mg, 8.
9μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そし
て室温でさらに70分間、静置した。
【０１６４】 反応を、水（490μl）中、グリシン（4.9mg, 65.3μモル）の溶液の添加によ り急冷した。酢酸アンモニウム（30ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られ る混合物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合 物を５％水性アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25m
l）による溶出によりカートリッジから遊離した。
l）による溶出によりカートリッジから遊離した。
【０１６５】 溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 3
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（3.2mg, 28%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
836±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3835±3amu（理 論値3836amu）である。
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（3.2mg, 28%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
836±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3835±3amu（理 論値3836amu）である。
【０１６６】例28 ．Lau-Glu(ONSu)-OButの合成 DMF(344mｌ)中、H-Glu-OBut（３g, 15mモル）の溶液に、DMF（74ml）中、例10
におけるCap-ONSuについて記載されるのと類似する態様で調製されたLau-ONSu（
4.5g, 15mモル）の溶液を添加した。得られる混合物を室温で18時間撹拌し、そ して溶媒を真空下で除去した。油状残留物を酢酸エチル(150ml)と5％水性クエン
酸(250ml)との間に分けた。有機相を真空下で濃縮した。残留物をDMF(40ml)に溶
解し、そしてその溶液を、10％水性クエン酸溶液(350ml)に滴下した。
におけるCap-ONSuについて記載されるのと類似する態様で調製されたLau-ONSu（
4.5g, 15mモル）の溶液を添加した。得られる混合物を室温で18時間撹拌し、そ して溶媒を真空下で除去した。油状残留物を酢酸エチル(150ml)と5％水性クエン
酸(250ml)との間に分けた。有機相を真空下で濃縮した。残留物をDMF(40ml)に溶
解し、そしてその溶液を、10％水性クエン酸溶液(350ml)に滴下した。
【０１６７】 沈殿された生成物を集め、水により洗浄し、そして真空下で18時間乾燥せしめ
、中間体の遊離酸を付与した。DMF(25ml)中、前記遊離酸中間体に、N−ヒドロキ
シスクシンイミド(1.7ｇ，14.8mモル)及びジクロロメタン(52ml)中、N−(3−ジ メチルアミノプロピル)−N'−エチルカルボジイミド(2.58g, 13.5mモル)の溶液 を添加した。
、中間体の遊離酸を付与した。DMF(25ml)中、前記遊離酸中間体に、N−ヒドロキ
シスクシンイミド(1.7ｇ，14.8mモル)及びジクロロメタン(52ml)中、N−(3−ジ メチルアミノプロピル)−N'−エチルカルボジイミド(2.58g, 13.5mモル)の溶液 を添加した。
【０１６８】 得られる混合物を室温で18時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去した。油状
残留物を、ジクロロメタン（80ml）と水（80ml）との間に分けた。有機相を５％
水性クエン酸により洗浄し、MgSO4において乾燥せしめ、そして真空下で固体に 濃縮した。固体残留物をn-ヘプタン(77ml)及び2-プロパノール(50ml)の混合物か
ら結晶化し、そして最終的に、n-ヘプタン(76ml)から再結晶化し、標記化合物（
2.96g, 4６％）を付与した。
残留物を、ジクロロメタン（80ml）と水（80ml）との間に分けた。有機相を５％
水性クエン酸により洗浄し、MgSO4において乾燥せしめ、そして真空下で固体に 濃縮した。固体残留物をn-ヘプタン(77ml)及び2-プロパノール(50ml)の混合物か
ら結晶化し、そして最終的に、n-ヘプタン(76ml)から再結晶化し、標記化合物（
2.96g, 4６％）を付与した。
【０１６９】例29 ．Arg34,Lys26(Nε-(γ-グルタミル(Nα-ドデカノイル)))GLP-1(7-37)の合 成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(20.6mg, 6.1μモル)、EDPA（22mg, 171μモル）、NMP（
2.88ml）及び水（1.44ml）の混合物に、NMP（255μl）中、例26に記載のように して調製されたLau-Glu(ONSu)-OBut(10.2mg, 21.2μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに75分間、静置し
た。
2.88ml）及び水（1.44ml）の混合物に、NMP（255μl）中、例26に記載のように して調製されたLau-Glu(ONSu)-OBut(10.2mg, 21.2μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに75分間、静置し
た。
【０１７０】 反応を、水（100μl）中、グリシン（10mg, 134μモル）の溶液の添加により 急冷した。酢酸アンモニウム（61ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる 混合物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物 を５％水性アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml ）による溶出によりカートリッジから遊離した。溶出物を真空下で濃縮し、そし
て残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニト リル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
て残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセトニト リル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１７１】 カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜10
0％であった。標記化合物（8.2mg, 36%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3693±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3692±3amu（理論値3693amu）である 。
0％であった。標記化合物（8.2mg, 36%）を単離し、そして生成物をPDMSにより 分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3693±３であることが 見出された。従って、得られる分子量は、3692±3amu（理論値3693amu）である 。
【０１７２】例30 ．Lau−β−Ala−ONSuの合成 DMF（400ml）中、上記に類似する態様で調製されたLau−ONSu（4.25g，14.3m モル）の溶液に、EDPA(1.84g, 14.3mモル)及びβ−アラニン(1.27g, 14.3mモル)
を添加した。得られる混合物を周囲温度で18時間撹拌した。水（250ml）及びDMF
（50ml）を添加し、そしてその溶液を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除
去し、固形物を付与した。固体残留物をDMF（50ml）に溶解し、そしてその溶液 を、クエン酸（200ml）の５％水溶液に滴下した。沈殿物を集め、水（50ml）に より洗浄し、そして真空下で乾燥せしめ、標記化合物（3.6g, 93%）を得た。
を添加した。得られる混合物を周囲温度で18時間撹拌した。水（250ml）及びDMF
（50ml）を添加し、そしてその溶液を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除
去し、固形物を付与した。固体残留物をDMF（50ml）に溶解し、そしてその溶液 を、クエン酸（200ml）の５％水溶液に滴下した。沈殿物を集め、水（50ml）に より洗浄し、そして真空下で乾燥せしめ、標記化合物（3.6g, 93%）を得た。
【０１７３】例31 ．Pal−β−Ala−ONSuの合成 DMF（400ml）中、Pal−ONSu（4.25g，14.3mモル）の溶液に、EDPA(1.84g, 14.
3mモル)及びβ−アラニン(1.27g, 14.3mモル)を添加した。得られる混合物を周 囲温度で18時間撹拌した。水（250ml）及びDMF（50ml）を添加し、そしてその溶
液を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、固形物を付与した。固体残
留物をDMF（50ml）に溶解し、そしてその溶液を、クエン酸（200ml）の５％水溶
液に滴下した。沈殿物を集め、水（50ml）により洗浄し、そして真空下で乾燥せ
しめ、標記化合物（3.6g, 93%）を得た。
3mモル)及びβ−アラニン(1.27g, 14.3mモル)を添加した。得られる混合物を周 囲温度で18時間撹拌した。水（250ml）及びDMF（50ml）を添加し、そしてその溶
液を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、固形物を付与した。固体残
留物をDMF（50ml）に溶解し、そしてその溶液を、クエン酸（200ml）の５％水溶
液に滴下した。沈殿物を集め、水（50ml）により洗浄し、そして真空下で乾燥せ
しめ、標記化合物（3.6g, 93%）を得た。
【０１７４】例32 ．Myr-GABA-ONSuの合成 DMF(350mｌ)中、Myr-ONSu（4g, 12.3mモル）の溶液に、EDPA（1.58g, 12.3mモ
ル）及びγ−アミノ酪酸(1.26g, 12.3mモル)を添加した。得られる混合物を室温
で18時間撹拌した。水（50ml）を添加し、そしてその溶液を室温で１時間撹拌し
た。溶媒を真空下で除去し、固形物を付与した。固体残留物をDMF(75ml)に溶解 し、そしてその溶液を、5％水性クエン酸溶液(250ml)に滴化した。沈殿物を集め
、水(100ml)により洗浄し、そして真空化で乾燥せしめ、中間体の遊離酸(3.67g,
19.1mモル)を付与した。
ル）及びγ−アミノ酪酸(1.26g, 12.3mモル)を添加した。得られる混合物を室温
で18時間撹拌した。水（50ml）を添加し、そしてその溶液を室温で１時間撹拌し
た。溶媒を真空下で除去し、固形物を付与した。固体残留物をDMF(75ml)に溶解 し、そしてその溶液を、5％水性クエン酸溶液(250ml)に滴化した。沈殿物を集め
、水(100ml)により洗浄し、そして真空化で乾燥せしめ、中間体の遊離酸(3.67g,
19.1mモル)を付与した。
【０１７５】 DMF(330ml)中、前記遊離酸中間体(3g, 9.6mモル)、N−ヒドロキシスクシンイ ミド(1.65ｇ，14.4mモル)及びN−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチルカ ルボジイミド塩酸塩(3.67g, 19.1mモル)の溶液を室温で18時間撹拌し、そして溶
媒を真空下で除去した。固体残留物を、ジクロロメタン（100ml）に溶解し、そ してブライン(100ml)により洗浄した。有機相をMgSO4において乾燥せしめ、そし
て真空化で固体に濃縮した。固体残留物をn-ヘプタン(75ml)から再結晶化し、標
記化合物（2.8g, 71％）を得た。
媒を真空下で除去した。固体残留物を、ジクロロメタン（100ml）に溶解し、そ してブライン(100ml)により洗浄した。有機相をMgSO4において乾燥せしめ、そし
て真空化で固体に濃縮した。固体残留物をn-ヘプタン(75ml)から再結晶化し、標
記化合物（2.8g, 71％）を得た。
【０１７６】例33 ．Pal−β−Ala−ONSuの合成 DMF（100ml）中、Pal−ONSu（0.9g，2.8mモル）の溶液に、N−ヒドロキシスク
シンイミド(0.35ｇ，3mモル)及びN−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチル
カルボジイミド (0.79g, 4.1mモル)を添加した。得られる混合物を周囲温度で40
時間撹拌しそして溶媒を真空下で除去した。固体残留物を、水（50ml）とジクロ
ロメタン（50ml）との間に分けた。有機相を集め、MgSO4において乾燥せしめ、 そして溶媒を真空下で除去し、標記化合物（1.1g, 94%）を得た。
シンイミド(0.35ｇ，3mモル)及びN−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチル
カルボジイミド (0.79g, 4.1mモル)を添加した。得られる混合物を周囲温度で40
時間撹拌しそして溶媒を真空下で除去した。固体残留物を、水（50ml）とジクロ
ロメタン（50ml）との間に分けた。有機相を集め、MgSO4において乾燥せしめ、 そして溶媒を真空下で除去し、標記化合物（1.1g, 94%）を得た。
【０１７７】例34 ．Arg34,Lys26(Nε-(β-アラニル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-37)の 合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(19.2mg, 5.7μモル)、EDPA（20.5mg, 159μモル）、NMP
（2.7ml）及び水（1.35ml）の混合物に、NMP（181μl）中、例31に記載のように
して調製されたPal-β-Ala-ONSu (7.2mg, 17μモル)の溶液を添加した。その反 応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。
反応を、水（93μl）中、グリシン（9.3mg, 125μモル）の溶液の添加により急 冷した。
（2.7ml）及び水（1.35ml）の混合物に、NMP（181μl）中、例31に記載のように
して調製されたPal-β-Ala-ONSu (7.2mg, 17μモル)の溶液を添加した。その反 応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。
反応を、水（93μl）中、グリシン（9.3mg, 125μモル）の溶液の添加により急 冷した。
【０１７８】 反応混合物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセト ニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラ
ムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％で あった。標記化合物（11.6mg, 55%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析 した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3694±３であることが見出 された。従って、得られる分子量は、3693±3amu（理論値3693amu）である。
ムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％で あった。標記化合物（11.6mg, 55%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分析 した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3694±３であることが見出 された。従って、得られる分子量は、3693±3amu（理論値3693amu）である。
【０１７９】例35 ．Pal-Glu(OBut)-ONSuの合成 DMF(300mｌ)中、H-Glu(OH)-OBut（2.9g, 11.3mモル）及びPal-ONSu(3.98g, 11
.3mモル)の溶液に、EDPA（3.2g, 24.8mモル）の溶液を添加した。得られる混合 物を室温で18時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、油状物を付与した。油
状残留物をDMF（60ml）に溶解しそしてその溶液をクエン酸の10％水溶液（300ml
）に滴下し、沈殿物を形成した。
.3mモル)の溶液に、EDPA（3.2g, 24.8mモル）の溶液を添加した。得られる混合 物を室温で18時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、油状物を付与した。油
状残留物をDMF（60ml）に溶解しそしてその溶液をクエン酸の10％水溶液（300ml
）に滴下し、沈殿物を形成した。
【０１８０】 沈殿物を集め、水(25ml)により洗浄し、そして真空下で乾燥せしめ、中間体の
遊離酸(4.44g, 89%)を付与した。前記遊離酸中間体(4g, 9.1mモル)を、DMF(50ml
)に溶解し、そしてN−ヒドロキシスクシンイミド(1.15ｇ，10mモル)及びジクロ ロメタン(52ml)中、N−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチルカルボジイミ
ド塩酸塩(2.6 g, 13.6mモル)の溶液を添加した。得られる混合物を室温で60時間
撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、標記粗化合物（8.2g）を得た。
遊離酸(4.44g, 89%)を付与した。前記遊離酸中間体(4g, 9.1mモル)を、DMF(50ml
)に溶解し、そしてN−ヒドロキシスクシンイミド(1.15ｇ，10mモル)及びジクロ ロメタン(52ml)中、N−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチルカルボジイミ
ド塩酸塩(2.6 g, 13.6mモル)の溶液を添加した。得られる混合物を室温で60時間
撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、標記粗化合物（8.2g）を得た。
【０１８１】例36 ．Arg34,Lys26(Nε-(α-グルタミル(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP-1(7-37) の合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(25.6mg, 7.6μモル)、EDPA（27.4mg, 212μモル）、NMP
（3.5ml）及び水（1.75ml）の混合物に、NMP（305μl）中、例33に記載のように
して調製されたPal-Glu(OBut)-ONSu(12.2mg, 22.7μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに100分間、静置 した。
（3.5ml）及び水（1.75ml）の混合物に、NMP（305μl）中、例33に記載のように
して調製されたPal-Glu(OBut)-ONSu(12.2mg, 22.7μモル)の溶液を添加した。そ
の反応混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに100分間、静置 した。
【０１８２】 反応を、水（125μl）中、グリシン（12.5mg, 168μモル）の溶液の添加によ り急冷した。酢酸アンモニウム（72.5ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得ら れる混合物をVarian 5g C8 Mega Bond Elut（商標）上で溶離し、固定された化 合物を５％水性アセトニトリル（25ml）により洗浄し、そして最終的に、TFF（3
0ml）による溶出によりカートリッジから遊離した。
0ml）による溶出によりカートリッジから遊離した。
【０１８３】 溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 3
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（6.1mg, 22%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
751±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3750±3amu（理 論値3751amu）である。
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（6.1mg, 22%）を単離し、そし て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
751±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3750±3amu（理 論値3751amu）である。
【０１８４】例37 ．Ste-GABA-ONSuの合成 DMF(270mｌ)中、Ste-ONSu（3g, 7.9mモル）の溶液に、水(ml)中、EDPA（１g,
7.9mモル）及びγ−アミノ酪酸(0.81, 7.9mモル)の溶液を添加した。得られる懸
濁液を周囲温度で18時間撹拌し、そして真空下で50mlの最終体積に濃縮した。得
られる懸濁液を、クエン酸の5％水溶液（300ml）に添加し、それにより沈殿物を
形成した。沈殿物を集め、水(50ml)により洗浄し、そして真空下で4時間乾燥せ しめ、中間体の遊離酸(2.8g, 97%)を付与した。
7.9mモル）及びγ−アミノ酪酸(0.81, 7.9mモル)の溶液を添加した。得られる懸
濁液を周囲温度で18時間撹拌し、そして真空下で50mlの最終体積に濃縮した。得
られる懸濁液を、クエン酸の5％水溶液（300ml）に添加し、それにより沈殿物を
形成した。沈殿物を集め、水(50ml)により洗浄し、そして真空下で4時間乾燥せ しめ、中間体の遊離酸(2.8g, 97%)を付与した。
【０１８５】 NMP(300ml)中、前記遊離酸中間体(2.6g, 7mモル)、 N−ヒドロキシスクシンイ
ミド(1.25ｇ，10.5mモル)及びN−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチルカ ルボジイミド塩酸塩(2.69 g, 14mモル)の混合物を70時間撹拌し、そして溶媒を 真空下で除去し固形物を付与した。固体残留物を、ジクロロメタン（100ml）に 溶解し、そしてブライン(2×100ml)により洗浄した。有機相をMgSO4において乾 燥せしめ、そして真空下で固体に濃縮した。固体残留物をn-ヘプタン(75ml)から
再結晶化し、標記化合物（2.2g, 67％）を付与した。
ミド(1.25ｇ，10.5mモル)及びN−(3−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチルカ ルボジイミド塩酸塩(2.69 g, 14mモル)の混合物を70時間撹拌し、そして溶媒を 真空下で除去し固形物を付与した。固体残留物を、ジクロロメタン（100ml）に 溶解し、そしてブライン(2×100ml)により洗浄した。有機相をMgSO4において乾 燥せしめ、そして真空下で固体に濃縮した。固体残留物をn-ヘプタン(75ml)から
再結晶化し、標記化合物（2.2g, 67％）を付与した。
【０１８６】例38 ．Pal-Isonip-ONSuの合成 DMF(350ml)中、文献（Kreutzberger, van der Goot, Arch. Pharm., 307, 197
4）に記載のようにして調製された１−ヘキサデカノイルベンゾトリアゾール（3
g, 8.4mモル）の懸濁液に、EDPA（1.08g, 8.4mモル）及び水（20ml）中、ピペリ
ジン−４−カルボン酸の溶液を添加した。その得られた懸濁液を室温で12時間撹
拌し、そして次に、真空下で油状物に濃縮した。その油状残留物を、クエン酸の
５％水溶液（300ml）に滴下し、それにより沈殿物を形成した。沈殿物を集め、 そして水（50ml）により洗浄し、真空下で２時間乾燥せしめ、遊離酸中間体（3g
, 97%）を得た。
4）に記載のようにして調製された１−ヘキサデカノイルベンゾトリアゾール（3
g, 8.4mモル）の懸濁液に、EDPA（1.08g, 8.4mモル）及び水（20ml）中、ピペリ
ジン−４−カルボン酸の溶液を添加した。その得られた懸濁液を室温で12時間撹
拌し、そして次に、真空下で油状物に濃縮した。その油状残留物を、クエン酸の
５％水溶液（300ml）に滴下し、それにより沈殿物を形成した。沈殿物を集め、 そして水（50ml）により洗浄し、真空下で２時間乾燥せしめ、遊離酸中間体（3g
, 97%）を得た。
【０１８７】 DMF（250ml）中、その遊離酸中間体（2.8g, 7.6mモル）及びN−ヒドロキシス クシンイミド（1.31g, 11.4mモル）の溶液に、N−（３−ジメチルアミノプロピ ル）−N'−エチルカルボジイミド塩酸塩（2.92g, 15.2mモル）を添加した。得ら
れる混合物を周囲温度で18時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、油状物を
得た。油状残留物を、ジクロロメタン（100ml）に溶解し、そしてブライン(50ml
)により洗浄し、MgSO4において乾燥せしめ、そして真空下で濃縮し、標記化合物
（4.1g）を得た。
れる混合物を周囲温度で18時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、油状物を
得た。油状残留物を、ジクロロメタン（100ml）に溶解し、そしてブライン(50ml
)により洗浄し、MgSO4において乾燥せしめ、そして真空下で濃縮し、標記化合物
（4.1g）を得た。
【０１８８】例39 ．Arg34,Lys26(Nε-(ピペリジニル−４−カルボニル(Nα-ヘキサデカノイ ル)))GLP-1(7-37)の合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(25mg, 7.4μモル)、EDPA（26.7mg, 207μモル）、NMP（
3.5ml）及び水（1.75ml）の混合物に、NMP（343μl）中、例36に記載のようにし
て調製されたPal-Isonip-ONSu(13.7mg, 30μモル)の溶液を添加した。その反応 混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反
応を、水（122μl）中、グリシン（12.2mg, 163μモル）の溶液の添加により急 冷した。
3.5ml）及び水（1.75ml）の混合物に、NMP（343μl）中、例36に記載のようにし
て調製されたPal-Isonip-ONSu(13.7mg, 30μモル)の溶液を添加した。その反応 混合物を室温で５分間、軽く振盪し、そして室温でさらに90分間、静置した。反
応を、水（122μl）中、グリシン（12.2mg, 163μモル）の溶液の添加により急 冷した。
【０１８９】 反応混合物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 300SB-CN）及び標準のアセト ニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラ
ムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％で あった。標記化合物（１２mg, ４４%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3734±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3733±3amu（理論値3733amu）である。
ムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエントは60分で、０〜100％で あった。標記化合物（１２mg, ４４%）を単離し、そして生成物をPDMSにより分 析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3734±３であることが見 出された。従って、得られる分子量は、3733±3amu（理論値3733amu）である。
【０１９０】例40 ．Arg34,Lys26(Nε-(γ-グルタミル(Nα-デカノイル)))GLP-1(7-37)の合成 Arg34GLP-1(7-37)-OH(25mg, 7.4μモル)、EDPA（26.7mg, 207μモル）、NMP（
3.5ml）及び水（1.75ml）の混合物に、NMP（252μl）中、Cac-Glu(ONSu)- OBut
(10mg, 22.1μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振
盪し、そして室温でさらに140分間、静置した。反応を、水（122μl）中、グリ シン（12.2mg, 162μモル）の溶液の添加により急冷した。酢酸アンモニウム（7
3ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をVarian 5g C8 Mega Bond
Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセトニトリル（25ml ）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶出によりカートリッジ から遊離した。
3.5ml）及び水（1.75ml）の混合物に、NMP（252μl）中、Cac-Glu(ONSu)- OBut
(10mg, 22.1μモル)の溶液を添加した。その反応混合物を室温で５分間、軽く振
盪し、そして室温でさらに140分間、静置した。反応を、水（122μl）中、グリ シン（12.2mg, 162μモル）の溶液の添加により急冷した。酢酸アンモニウム（7
3ml）の0.5％水溶液を添加し、そして得られる混合物をVarian 5g C8 Mega Bond
Elut（商標）上で溶離し、固定された化合物を５％水性アセトニトリル（25ml ）により洗浄し、そして最終的に、TFF（25ml）による溶出によりカートリッジ から遊離した。
【０１９１】 溶出物を真空下で濃縮し、そして残留物を、シアノプロピルカラム（Zorbax 3
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（12.2mg, 45%）を単離し、そし
て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
669.7±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3668.7±3amu （理論値3667amu）である。
00SB-CN）及び標準のアセトニトリル/TFAシステムを用いてカラムクロマトグラ フィーにより精製した。カラムを65℃に加熱し、そしてアセトニトリルグラジエ
ントは60分で、０〜100％であった。標記化合物（12.2mg, 45%）を単離し、そし
て生成物をPDMSにより分析した。陽子化された分子イオンについてのm/z値は、3
669.7±３であることが見出された。従って、得られる分子量は、3668.7±3amu （理論値3667amu）である。
【０１９２】 医薬製剤の例： 下記“pH7.4の8mMのリン酸緩衝液”とは、pH7.4に調節された（水酸化ナトリ ウム及び/又は塩酸を用いて）、4mMのNaH2PO4・2H2O及びNa2HPO4・2H2O溶液を意
味する。 下記“化合物１”は、Arg34,Lys26(Nε-(γ-Glu(Nα-テトラデカノイル)))GLP
-1(7-37)を意味する。
味する。 下記“化合物１”は、Arg34,Lys26(Nε-(γ-Glu(Nα-テトラデカノイル)))GLP
-1(7-37)を意味する。
【０１９３】 下記“化合物２”は、Arg34,Lys26(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP
-1(7-37)を意味する。 下記“化合物３”は、Arg34,Lys36(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP
-1(7-36)を意味する。 下記“化合物４”は、Arg26,Lys34(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP
-1(7-37)を意味する。 下記“化合物５”は、Gly6,Glu37,Arg26,34,Lys38(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデ
カノイル)))GLP-1(7-38)を意味する。
-1(7-37)を意味する。 下記“化合物３”は、Arg34,Lys36(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP
-1(7-36)を意味する。 下記“化合物４”は、Arg26,Lys34(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデカノイル)))GLP
-1(7-37)を意味する。 下記“化合物５”は、Gly6,Glu37,Arg26,34,Lys38(Nε-(γ-Glu(Nα-ヘキサデ
カノイル)))GLP-1(7-38)を意味する。
【０１９４】一般例A ： 化合物： 2-7.5mg/ml; マンニトール： 34-50mg/ml; フェノール： 5-7.5mg/ml; pH7.4の8mMのリン酸緩衝液。 マンニトール及びフェノールを、pH7.4に予備調節されたリン酸緩衝液に溶解 した。この後、化合物をゆっくり撹拌しながら溶解した。pHを水酸化ナトリウム
及び/又は塩酸を用いて、7.4に調節した。最終的に、製剤を、適切なフィルター
を通しての濾過により殺菌した。
及び/又は塩酸を用いて、7.4に調節した。最終的に、製剤を、適切なフィルター
を通しての濾過により殺菌した。
【０１９５】 次の特定の製剤を、一般例A下での方法を用いて生成した：例A１ ： 化合物１： 2.0mg/ml; マンニトール： 38mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０１９６】例A2 ： 化合物１： 5mg/ml; マンニトール： 36.9mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０１９７】例A3 ： 化合物１： 7.5mg/ml; マンニトール： 34mg/ml; フェノール： 7.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０１９８】例A4 ： 化合物2： 2.0mg/ml; マンニトール： 38mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０１９９】例A5 ： 化合物2： 5mg/ml; マンニトール： 36.9mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２００】例A6 ： 化合物2： 7.5mg/ml; マンニトール： 34mg/ml; フェノール： 7.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０１】例A7 ： 化合物3： 2.0mg/ml; マンニトール： 38mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０２】例A8 ： 化合物3： 5mg/ml; マンニトール： 36.9mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０３】例A9 ： 化合物3： 7.5mg/ml; マンニトール： 34mg/ml; フェノール： 7.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０４】例A１0 ： 化合物4： 2.0mg/ml; マンニトール： 38mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０５】例A１1 ： 化合物4： 5mg/ml; マンニトール： 36.9mg/ml; フェノール： 5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０６】例A１2 ： 化合物4： 7.5mg/ml; マンニトール： 34mg/ml; フェノール： 7.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２０７】一般例B ： 化合物： 2-7.5mg/ml; マンニトール： 34-50mg/ml; ベンジルアルコール：5-7.5mg/ml; pH7.4の8mMのリン酸緩衝液。
【０２０８】 マンニトール及びベンジルアルコールを、pH7.4に予備調節されたリン酸緩衝 液に溶解した。この後、化合物をゆっくり撹拌しながら溶解した。pHを水酸化ナ
トリウム及び/又は塩酸を用いて、7.4に調節した。最終的に、製剤を、適切なフ
ィルターを通しての濾過により殺菌した。
トリウム及び/又は塩酸を用いて、7.4に調節した。最終的に、製剤を、適切なフ
ィルターを通しての濾過により殺菌した。
【０２０９】 次の特定の製剤を、一般例B下での方法を用いて生成した：例B１ ： 化合物１： 2.0mg/ml; マンニトール： 38mg/ml; ベンジルアルコール：5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１０】例B2 ： 化合物１： 7.5mg/ml; マンニトール： 19mg/ml; ベンジルアルコール：18mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１１】例B3 ： 化合物2： 2.0mg/ml; マンニトール： 25mg/ml; ベンジルアルコール：14mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１２】例B4 ： 化合物2： 7.5mg/ml; マンニトール： 19mg/ml; ベンジルアルコール：18mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１３】例B5 ： 化合物3： 2.0mg/ml; マンニトール： 25mg/ml; ベンジルアルコール：14mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１４】例B6 ： 化合物3： 7.5mg/ml; マンニトール： 19mg/ml; ベンジルアルコール：18mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１５】例B7 ： 化合物5： 2.0mg/ml; マンニトール： 25mg/ml; ベンジルアルコール：14mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１６】例B8 ： 化合物5： 7.5mg/ml; マンニトール： 19mg/ml; ベンジルアルコール：18mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１７】一般例C ： 化合物： 2-7.5mg/ml; マンニトール： 42-44mg/ml; メタクレゾール： 2.5-4.0mg/ml; pH7.4の8mMのリン酸緩衝液。 マンニトール及びメタクレゾールを、pH7.4に予備調節されたリン酸緩衝液に 溶解した。この後、化合物をゆっくり撹拌しながら溶解した。pHを水酸化ナトリ
ウム及び/又は塩酸を用いて、7.4に調節した。最終的に、製剤を、適切なフィル
ターを通しての濾過により殺菌した。
ウム及び/又は塩酸を用いて、7.4に調節した。最終的に、製剤を、適切なフィル
ターを通しての濾過により殺菌した。
【０２１８】 次の特定の製剤を、一般例C下での方法を用いて生成した：例C１ ： 化合物１： 2.0mg/ml; マンニトール： 44mg/ml; メタクレゾール： 2.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２１９】例C2 ： 化合物１： 7.5mg/ml; マンニトール： 42mg/ml; メタクレゾール： 4mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２２０】例C3 ： 化合物2： 2.0mg/ml; マンニトール： 44mg/ml; メタクレゾール： 2.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２２１】例C4 ： 化合物2： 7.5mg/ml; マンニトール： 42mg/ml; メタクレゾール： 4mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２２２】例C5 ： 化合物3： 2.0mg/ml; マンニトール： 44mg/ml; メタクレゾール： 2.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２２３】例C6 ： 化合物3： 7.5mg/ml; マンニトール： 42mg/ml; メタクレゾール： 4mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２２４】例C7 ： 化合物5： 2.0mg/ml; マンニトール： 44mg/ml; メタクレゾール： 2.5mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【０２２５】例C8 ： 化合物5： 7.5mg/ml; マンニトール： 42mg/ml; メタクレゾール： 4mg/ml; pH7.4の8mMの リン酸緩衝液： 100mlまで。
【図１】 図1は、10mMのトリス緩衝液（pH8）及び23℃において溶解されたアシル化され
たGLP−1誘導体についてのペプチド濃度の関数としての222nmでの円二色計(CD) を示す。
たGLP−1誘導体についてのペプチド濃度の関数としての222nmでの円二色計(CD) を示す。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年４月１７日（２０００．４．１７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【表１】 を含んで成る群から選択される、GLP−1誘導体を含んで成る請求項１１〜32のい
ずれか１項記載の医薬組成物。
ずれか１項記載の医薬組成物。
【表２】 を含んで成る群から選択される、GLP−1誘導体を含んで成る請求項１〜32のいず
れか１項記載の医薬組成物。
れか１項記載の医薬組成物。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，Ｇ Ｈ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 フースフェルト，ペル オラフ デンマーク国，デーコー−1411 コペンハ ーゲン コー，５．エムエフ．，アプレビ ース プラッズ 27 (72)発明者 ニールセン，ペル フランクリン デンマーク国，デーコー−3500 ベルレー ゼ，ダルセー パルク 59 (72)発明者 カールスホルム，ニールス セー． デンマーク国，デーコー−2720 バンレー ゼ，クラウスホルムバイ 38 (72)発明者 オルセン，ヘレ ビルク デンマーク国，デーコー−3450 アレレ ズ，スコレロッデン 23 (72)発明者 ビョルン，セーレン エリック デンマーク国，デーコー−2800 リンビ ー，マリー グルベス アレ 47 Ｆターム(参考） 4C076 AA11 BB11 DD08 DD22 DD26 DD37 DD38 DD51 FF15 FF36 4C084 AA02 BA01 BA19 CA59 DB35 MA66 NA02 NA03 ZC351 4H045 AA10 AA30 BA19 CA40 DA30 EA27
Claims (42)
- 【請求項１】 22±2℃で水中において222nmで円二色計（CD）により測定さ
れる場合、約10μMのペプチド濃度で、25％以上、好ましくは25％〜50％の範囲 のヘリックス含有率を有するグルカゴン−様ペプチド−１（GLP−1）誘導体を含
んで成る医薬組成物。 - 【請求項２】 前記GLP−1誘導体の濃度が、0.5mg/ml以上、好ましくは約5m
g/ml以上、より好ましくは約10mg/ml以上、及び好ましくは約100mg/ml以下であ る請求項１記載の医薬組成物。 - 【請求項３】 前記親ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基が、結合さ
れる親油性置換基を有するGLP−1誘導体を含んで成る請求項１又は２記載の医薬
組成物。 - 【請求項４】 位置18〜38、好ましくは26〜34におけるアミノ酸残基のいず
れか１つの残基に結合される親油性置換基を有するGLP−1誘導体を含んで成る請
求項３記載の医薬組成物。 - 【請求項５】 医薬的に許容できるビークル又はキャリヤーをさらに含んで
成る請求項１〜４のいずれか1項記載の医薬組成物。 - 【請求項６】 塩化ナトリウム、マンニトール及びグリセロールから成る群
から好ましくは選択された等張剤をさらに含んで成る請求項１〜５のいずれか１
項記載の医薬組成物。 - 【請求項７】 フェノール、ｍ−クレゾール、メチルｐ−ヒドロキシベンゾ
エート、ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート及びベンジルアルコールから成る群
から好ましくは選択された保存剤をさらに含んで成る請求項１〜６のいずれか１
項記載の医薬組成物。 - 【請求項８】 酢酸ナトリウム、シトレート、グリシルグリシン、ヒスチジ
ン、２−フェニルエタノール及びリン酸ナトリウムから成る群から好ましくは選
択された緩衝液をさらに含んで成る請求項１〜７のいずれか１項記載の医薬組成
物。 - 【請求項９】 ポロキシマー188、ツイーン20及びツイーン80から好ましく は選択された、GLP−1誘導体の溶解性及び/又は安定性を改良することができる 界面活性剤をさらに含んで成る請求項１〜８のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 【請求項１０】 前記親油性置換基が、４〜40個の炭素原子、好ましくは８
〜25個の炭素原子を含んで成るGLP−1誘導体を含んで成る請求項１〜９のいずれ
か１項記載の医薬組成物。 - 【請求項１１】 前記親油性置換基が、その親油性置換基のカルボキシル基
がアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成するような態様でアミノ酸残基に
結合されているGLP−1誘導体を含んで成る請求項１〜10のいずれか１項記載の医
薬組成物。 - 【請求項１２】 前記親油性置換基が、その親油性置換基のカルボキシル基
がアミノ酸残基のカルボキシル基とアミド結合を形成するような態様でアミノ酸
残基に結合されているGLP−1誘導体を含んで成る請求項１〜11のいずれか１項記
載の医薬組成物。 - 【請求項１３】 前記親油性置換基がスペーサーにより親ペプチドに結合さ
れているGLP−1誘導体を含んで成る請求項1〜12のいずれか１項記載の医薬組成 物。 - 【請求項１４】 前記スペーサーが、親ペプチドのアミノ基と親油性置換基
のアミノ基との間で架橋を形成する、１〜７個のメチレン基、好ましくは２個の
メチレン基を有する枝なしアルカンα,ω−ジカルボン酸基である請求項13記載 の医薬組成物。 - 【請求項１５】 前記スペーサーが、Cysを除くアミノ酸残基、又はジペプ チド、たとえばCly-Lys、又は親ペプチドのアミノ基と親油性置換基のアミノ基 との間に架橋を形成する、１〜７個のメチレン基、好ましくは２〜４個のメチレ
ン基を有するいずれかの枝なしのアルカンα,ω−アミノ酸である請求項13記載 の医薬組成物。 - 【請求項１６】 前記親油性置換基が、部分的に又は完全に水素化されたシ
クロペンタノフェナトレン骨格を含んで成るGLP−1誘導体を含んで成る請求項１
〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項１７】 前記親油性置換基が直鎖または枝分かれ鎖のアルキル基で
ある請求項３〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項１８】 前記親油性置換基が直鎖又は枝分かれ鎖のアシル基である
GLP−1誘導体を含んで成る請求項３〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項１９】 前記アシル基が、CH3(CH2)nCO-（ここで、ｎは４〜38であ
る）、好ましくはCH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-
, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-及びCH3(CH2) 22 CO-を含んで成る群から選択される請求項18記載の医薬組成物。 - 【請求項２０】 前記親油性置換基が、直鎖又は枝分かれ鎖のアルカンα、
ω−ジカルボン酸のアシル基であるGLP-1誘導体を含んで成る請求項3〜15のいず
れ１項記載医薬組成物。 - 【請求項２１】 前記アシル基が、HOOC(CH2)mCO-（ここで、ｍは４〜38、 好ましくは４〜24である）を含んで成る群から選択され、より好ましくは、HOOC
(CH2)14CO-, HOOC(CH2)16CO-, HOOC(CH2)18CO-, HOOC(CH2)20CO-及びHOOC(CH2)2 2 CO-を含んで成る群から選択される請求項20記載の医薬組成物。 - 【請求項２２】 前記親油性置換基が、式CH3(CH2)p((CH2)qCOOH) CHNH-CO(
CH2)2CO-（式中、ｐ及びｑは整数であり、そしてｐ＋ｑは８〜33、好ましくは12
〜28の整数である）で表される基であるGLP-1誘導体を含んで成る請求項3〜15の
いずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２３】 前記親油性置換基が、式CH3(CH2)rCO-NHCH(COOH)(CH2)2CO
-（式中、ｒは10〜24の整数である）で表される基であるGLP-1誘導体を含んで成
る請求項3〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２４】 前記親油性置換基が、式CH3(CH2)sCO-NHCH((CH2)2COOH)CO
-（式中、ｓは８〜24の整数である）で表される基であるGLP-1誘導体を含んで成
る請求項3〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２５】 前記親油性置換基が、式−NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)uC
H3（式中、uは８〜18の整数である）で表される基であるGLP-1誘導体を含んで成
る請求項3〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２６】 前記親油性置換基が、式−NHCH(COOH)(CH2)4NH-COCH((CH2 )2COOH)NH-CO(CH2)wCH3（式中、wは10〜16の整数である）で表される基であるGL
P-1誘導体を含んで成る請求項3〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２７】 前記親油性置換基が、式−NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)2C
H(COOH)NH-CO(CH2)xCH3（式中、xは10〜16の整数である）で表される基であるGL
P-1誘導体を含んで成る請求項3〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２８】 前記親油性置換基が、式−NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)2C
H(COOH)NH-CO(CH2)yCH3（式中、ｙは０又は１〜22の整数である）で表される基 であるGLP-1誘導体を含んで成る請求項3〜15のいずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項２９】 親ペプチドがGLP−1（A−B）（ここで、Aは１〜７の整数 であり、そしてBは38〜45の整数である）、又はその類似体であるGLP−1誘導体 を含んで成る請求項１〜28のいずれか１項記載の医薬組成物。
- 【請求項３０】 親ペプチドが、GLP−1（７−35）；GLP−１（７−36）；G
LP−１（７−36）アミド；GLP−１（７−37）；GLP−１（７−38）；GLP−1（７
−39）；GLP−1（７−40）及びGLP−1（７−41）；並びにそれらの類似体を含ん
で成る群から選択される請求項29記載の医薬組成物。 - 【請求項３１】 親ペプチドが、GLP−1（１−35）；GLP−１（１−36）；G
LP−１（１−36）アミド；GLP−１（１−37）；GLP−１（１−38）；GLP−1（１
−39）；GLP−1（１−40）及びGLP−1（１−41）；並びにそれらの類似体を含ん
で成る群から選択される請求項29記載の医薬組成物。 - 【請求項３２】 合計15個までの、好ましくは10個までの、より好ましくは
６個までのアミノ酸残基が、遺伝子コードによりコードされ得るいずれかのα−
アミノ酸残基により置換されているGLP−1誘導体を含んで成る請求項１〜31のい
ずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項３３】 親ペプチドが、 【化１】 を含んで成る群から選択される、GLP−1誘導体を含んで成る請求項１１〜32のい
ずれか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項３４】 親ペプチドが、 【化２】 を含んで成る群から選択される、GLP−1誘導体を含んで成る請求項１〜32のいず
れか１項記載の医薬組成物。 - 【請求項３５】 GLP−1、又はそのフラグメント又は類似体の溶解性及び/ 又は安定性を改良するための方法であって、親油性置換基が親ペプチドのアミノ
酸残基のいずれか1つに導入されることを特徴とする方法。 - 【請求項３６】 親油性置換基が、位置18〜38、好ましくは26〜34のアミノ
酸残基のいずれか1つに導入される請求項35記載の方法。 - 【請求項３７】 前記親油性位置基が、４〜40個の炭素原子、好ましくは８
〜25個の炭素原子を含んで成る請求項35又は36記載の方法。 - 【請求項３８】 前記親油性置換基が、直鎖又は枝分かれ鎖の脂肪酸のアシ
ル基である請求項35〜37のいずれか１項記載の方法。 - 【請求項３９】 前記アシル基が、CH3(CH2)nCO-（ここで、ｎは４〜38であ
る）、好ましくはCH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-
, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-及びCH3(CH2) 22 CO-を含んで成る群から選択される請求項36記載の方法。 - 【請求項４０】 前記GLP−１がGLP−1（A−B）（ここで、Aは１〜７の整数
であり、そしてBは38〜45の整数である）、又はその類似体である請求項35〜39 のいずれか１項記載の方法。 - 【請求項４１】 前記GLP−１が、GLP−1（７−35）；GLP−１（７−36）；
GLP−１（７−36）アミド；GLP−１（７−37）；GLP−１（７−38）；GLP−1（ ７−39）；GLP−1（７−40）及びGLP−1（７−41）；並びにそれらの類似体を含
んで成る群から選択される請求項40記載の方法。 - 【請求項４２】 前記GLP−１が、GLP−1（１−35）；GLP−１（１−36）；
GLP−１（１−36）アミド；GLP−１（１−37）；GLP−１（１−38）；GLP−1（ １−39）；GLP−1（１−40）及びGLP−1（１−41）；並びにそれらの類似体を含
んで成る群から選択される請求項40記載の方法。
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