JP2002080377A - 生体組織の再生方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 簡便な操作で組織再生用細胞を分離濃縮し、
分離濃縮した組織再生用細胞を利用して生体組織を再生
する方法を提供すること。 【解決手段】 生体組織の再生に用いられる組織再生用
細胞と夾雑細胞とを含む細胞浮遊液を採取すること、採
取した細胞浮遊液を少なくとも夾雑細胞を通過させ組織
再生用細胞を捕捉する細胞分離フィルターに通液するこ
と、該細胞分離フィルターに流体を導入して細胞分離フ
ィルターにいったん捕捉された組織再生用細胞を回収す
ること、回収された組織再生用細胞を生体組織の再生に
使用することを含む生体組織の再生方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生体組織の再生に
用いられる組織再生用細胞と夾雑細胞とを含む細胞浮遊
液から組織再生用細胞を分離して、生体組織の再生に使
用する方法に関する。さらに詳細には、本発明は、いわ
ゆる組織工学を用いて生体組織の病変および／または欠
損を修復再生するために用いる細胞の分離および該細胞
を用いた修復再生方法に関する。得られた細胞は生体組
織再生用細胞を用いて行う各種生体組織病変および／ま
たは欠損の治療及び免疫学や細胞生物学等の基礎科学分
野で用いることが可能となる。

【０００２】

【従来の技術】近年、生体の組織または臓器（以下、単
に組織という）の幹および／または前駆細胞を用いて、
同組織をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで形成す
ることで組織の病変および／または欠損を治療する、い
わゆる組織工学（Ｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ。再生医学とも言う）が大変注目を集めており、世界
各国で研究開発が盛んに行われている（例えば、「月刊
組織培養工学」Ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．４、特集：組織工
学Ｉ（１９９８年４月）；同、Ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．
５、特集：組織工学ＩＩ（１９９８年５月））。

【０００３】骨髄や血液（末梢血、臍帯／胎盤血）中に
は骨や軟骨、血管などを形成する細胞の幹／前駆細胞で
ある間葉系幹／前駆細胞が含まれていることが明らかに
された（例えば、国際公開特許ＷＯ９５／２５１６４号
公報、ＷＯ９７／２６３２６号公報、英国公開特許ＧＢ
２３０１１１４Ａ号公報）。これらの細胞が存在する部
位には、しばしば赤血球などの夾雑細胞が混在してお
り、夾雑細胞を除去し組織再生用細胞を濃縮分離する必
要がある。国際公開特許ＷＯ９５／２５１６４号公報に
はＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ比重遠心法を用いて、
末梢血から、組織再生用細胞を濃縮分離する方法が開示
されている。また、英国公開特許ＧＢ２３０１１１４Ａ
号公報にはＰｅｒｃｏｌｌ比重遠心法を用いて骨髄から
組織再生用細胞を濃縮分離する方法が開示されている。
これら、比重遠心法がベースとなる方法は、免疫学や細
胞生物学、あるいは臨床検査医学などの実験室レベルで
は汎用される方法ではあるが、操作が煩雑で、しかもク
リーンベンチ内で行われるものの完全開放系の操作のた
め無菌性に難があり、臨床行為としては到底受け入れら
れる方法ではなかった。組織工学が実験室レベルの実験
医療から脱皮し、ルーチンの医療行為として発展するに
は、本分離濃縮操作の簡便化と非完全開放系での処理が
待望されていた。

【０００４】さらに、例えば骨髄を患者から採取して骨
髄の中の骨系前駆細胞を用いて骨欠損の治療に用いる場
合、患者が貧血を起こすため骨髄は大量に採取できない
という問題がある。この問題に対しては、同種血輸血あ
るいは貯血自己血による輸血という解決法もあるが、前
者はウイルス感染の危険を否定できず、後者は骨髄採取
とは別に自己血採血、保存という手間が追加されること
になり、別の問題を生むことになる。

【０００５】一方、血液医学の分野においては、造血組
織、すなわち骨髄の再生である造血幹細胞移植は、すで
に通常の医療行為として確立されている。同分野で用い
る造血幹細胞の濃縮分離には、たとえば特開平８−１０
４６４３号公報で提案されている、簡便操作が特徴であ
るフィルター法が利用されている。また、造血組織以外
の生体組織再生用細胞についても、生体組織の病変およ
び／または欠損の治療への応用や基礎科学分野での利用
を目指して、本発明者らは、フィルター法による生体組
織再生用細胞の分離方法を開発し、特許出願した（特願
平１１−３４５５１５号）。これらの方法では、造血組
織あるいは造血組織以外の生体組織再生用細胞を分離回
収する方法は提供できたものの、分離回収した生体組織
再生用細胞を生体組織再生に有効に利用できるまでには
至っていなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は簡便な
操作かつ非完全開放系で組織再生用細胞を分離濃縮し、
分離濃縮した組織再生用細胞を利用して生体組織を再生
する方法を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らはかかる課題
を解決すべく、鋭意検討を進めた。その結果、造血幹細
胞の濃縮分離に用いるフィルターを用いて、造血組織以
外の組織再生用細胞の濃縮分離をも可能になるという驚
くべき発見を行い、さらに分離濃縮した造血組織や造血
組織以外の組織再生用細胞を用いて生体組織の再生をす
ることが可能であることを見出した。さらに検討を進め
た結果、本発明者らは、分離濃縮した生体組織再生用細
胞から生体組織の再生に適する再生方法の具体的な条件
を見出し、本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち本発明は、（１）生体組織の再生
に用いられる組織再生用細胞と夾雑細胞とを含む細胞浮
遊液を採取すること、採取した細胞浮遊液を少なくとも
夾雑細胞は通過し組織再生用細胞は捕捉する細胞分離フ
ィルターに通液すること、細胞分離フィルターに流体を
導入して細胞分離フィルターにいったん捕捉された組織
再生用細胞を回収すること、回収された組織再生用細胞
を生体組織の再生に使用することを含む生体組織の再生
方法、および（２）生体組織の再生に用いられる組織再
生用細胞と夾雑細胞とを含む細胞浮遊液を個体から採取
すること、採取した細胞浮遊液を少なくとも赤血球は通
過し組織再生用細胞は捕捉する細胞分離フィルターに通
液すること、細胞分離フィルターから通過流出した赤血
球を回収すること、細胞分離フィルターに流体を導入し
て細胞分離フィルターにいったん捕捉された組織再生用
細胞を回収すること、前記回収された赤血球を同一個体
または別の個体に輸血すること、および前記回収された
組織再生用細胞を生体組織の再生に使用することを含む
生体組織の再生方法、に関する。

【０００９】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明で言う生体組織とは、骨、軟骨、筋肉、腱などの
結合組織、造血組織、血管、神経、皮膚、毛髪、各種臓
器のことを言う。本発明で言う生体組織再生用細胞と
は、前述の組織を再生するために用いられる、前述の組
織の幹および／または前駆細胞のことを言い、例えば造
血幹細胞および／または造血前駆細胞、間葉系前駆細
胞、血管内皮前駆細胞、神経幹細胞などがあげられる
が、これらに限定されるものではない。また、生体組織
の再生は、当該組織の病変、欠損、傷害などで必要にな
るが、これらに限定されるものではない。夾雑細胞と
は、これらの細胞が存在する部位にしばしば混在する、
赤血球など本発明の組織の再生機能を有していない細胞
のことを言う。

【００１０】これらを含む細胞浮遊液とは、赤血球と生
体組織再生用細胞とを含むものならいずれでも良い．具
体的には、骨髄液、臍帯血（臍帯血管から採血されたも
のだけでなく、胎盤血管から採血されたものも含む）、
末梢血、リンパ液及びこれらに遠心分離等何らかの処理
を施したもの、あるいは各種臓器や組織から抽出した細
胞を何らかの液体に再浮遊したものがあげられる。たと
えば骨髄液、臍帯血などは造血組織の再生に用いられる
造血幹細胞と、造血組織を除く生体組織の再生に用いら
れる組織再生用細胞とを含み本発明で好適に用いられる
細胞浮遊液である。

【００１１】本発明で言う夾雑細胞は通過して生体組織
再生用細胞は捕捉する細胞分離フィルターとは、濾材を
液体導入口と液体導出口を有する容器に充填したもので
ある。濾材としては通常用いられている有核細胞捕捉材
であればいかなる材料も使用できるが、成形性、滅菌性
や細胞毒性が低いという点で好ましいものを例示する
と、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ア
クリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリカーボネー
ト、ポリアクリルアミド、ポリウレタン等の合成高分
子、アガロース、セルロース、酢酸セルロース、キチ
ン、キトサン、アルギン酸塩等の天然高分子、ヒドロキ
シアパタイト、ガラス、アルミナ、チタニア等の無機材
料、ステンレス、チタン、アルミニム等の金属があげら
れる。

【００１２】また、濾材の形状としては、織布、不織
布、スポンジ状構造体、膜等があげられる。不織布の場
合、後述する抗体等の特定の細胞に特異的に結合するい
わゆるバイオリガンド類を表面に固定しない場合は、通
常、繊維径は１．０μｍ以上３０μｍ以下であり、好ま
しくは１．０μｍ以上２０μｍ以下であり、さらにより
好ましくは１．５μｍ以上１０μｍ以下である。１．０
μｍ未満では回収必要細胞が強固に捕捉されてしまい回
収困難となる可能性がある。また、３０μｍを超えると
回収必要細胞が繊維に捕捉されず素通りする可能性が高
くなる。いずれの場合も回収率の低下につながるおそれ
があるので好ましくない。

【００１３】また、スポンジ状構造体を用いる場合、孔
径は通常２．０μｍ以上２５μｍ以下であり、好ましく
は３．０μｍ以上２０μｍ以下であり、さらにより好ま
しくは４．０μｍ以上１５μｍ以下である。２．０μｍ
未満では流れ性が著しく劣り、通液自体が困難になるお
それがあり、また２５μｍを超えると回収必要細胞の捕
捉率が低下し、回収率の低下を招くので好ましくない。

【００１４】この濾材を充填する、液体導入口と液体導
出口を有する容器の材質としては成形性や滅菌性に優
れ、細胞毒性が低いという点で好ましいものを例示する
と、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ア
クリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリカーボネー
ト、ポリアクリルアミド、ポリウレタン、塩化ビニル等
の合成高分子、ヒドロキシアパタイト、ガラス、アルミ
ナ、チタニア等の無機材料、ステンレス、チタン、アル
ミニウム等の金属があげられるが、これらに限定される
ものではない。容器の構造としては、形状は直方体、立
方体、円柱形、楕円柱形などがあげられるが、いずれの
形状でもよい。また、液体導入口と液体導出口の位置と
しては、液体導入口は濾材の最上層に液体を導入できる
位置であればよく、また液体導出口は濾材の最下層から
液体を導出できる位置であれば良い。

【００１５】本発明による生体組織再生用細胞の分離方
法は前述の生体組織再生用細胞と夾雑細胞とを含む細胞
浮遊液を、前述の細胞分離フィルターに通液した後、流
体を該フィルターに導入して捕捉されている生体組織再
生用細胞を回収するものであるが、回収用の流体を導入
する前に、該フィルターに微量残存する夾雑細胞を洗い
流す目的でリンスを行っても良い。リンス液としては細
胞に悪影響を及ぼさない液体であればいかなる液体も使
用可能であるが、いくつか例示すると生理食塩水、ダル
ベッコリン酸塩緩衝液（Ｄ−ＰＢＳ）やハンクス液（Ｈ
ＢＳＳ）などの緩衝液、ＲＰＭＩ１６４０などの培地が
あげられる。リンス液の導入方向としては生体組織再生
用細胞と夾雑細胞を含む細胞浮遊液の通液方向と同一方
向あるいは逆方向が考えられるが、同一方向の方が捕捉
された細胞が漏出する可能性が低い傾向にあるのでより
好ましい。

【００１６】捕捉した細胞を回収するために該フィルタ
ーに導入する流体としては細胞に悪影響を及ぼさない流
体であればいかなる流体も使用できるが、いくつか例示
すると、生理食塩水、Ｄ−ＰＢＳ（ダルベッコリン酸塩
緩衝液）、ＨＢＳＳ（ハンクス液）などの緩衝液、ＲＰ
ＭＩ−１６４０などの培地があげられる。これらの液体
に、細胞保護、栄養補給、抗凝固性付与、凍結保存時の
凍害防止、粘度向上（回収率向上に有効な場合がある）
等の目的で必要に応じ、アルブミン、グロブリン、グル
コース、サッカロース、トレハロース、クエン酸化合
物、ＥＤＴＡ、ジメチルスルホキシド、デキストラン、
ポリビニルピロリドン、グリセリン、キチン誘導体、ヒ
ドロキシエチルデンプン、ゼラチン等を添加してもよ
い。また、ここで言う流体とは、液体単体のみならず、
空気、アルゴン、窒素など細胞に悪影響を及ぼさない気
体を混合したものも含まれる。流体の導入方向としては
生体組織再生用細胞と夾雑細胞とを含む細胞浮遊液の通
液方向と同一方向あるいは逆方向が考えられるが、逆方
向の方が高い回収率が得られる傾向にあるのでより好ま
しい。

【００１７】本発明による生体組織用細胞の分離方法に
おいては、夾雑細胞は細胞分離フィルターを通過する
が、この通過した夾雑細胞を回収して何らかの目的に利
用することもできる。たとえば、細胞浮遊液が骨欠損患
者から得られた骨髄で、生体組織の再生に用いられる細
胞が骨系前駆細胞で、同細胞を用いて骨欠損の治療（骨
の再生）を行う場合、夾雑細胞は赤血球であり、この細
胞分離フィルターから通過流出した赤血球を血液バッグ
等に回収・保存し、基礎科学実験用赤血球検体としての
利用や人工赤血球の原料となるヘモグロビンの採取目的
に用いることができる。また、輸血用血液として患者に
輸血することもでき、骨髄採取による貧血を防止するこ
とができ好ましい。

【００１８】本発明の生体組織の再生方法においては少
なくとも組織再生用細胞を含む細胞浮遊液を個体から採
取するが、その採取方法は、たとえば骨髄であれば骨髄
穿刺針を用いるなど適宜選択する。本発明では細胞分離
フィルターにいったん捕捉させ回収した生体組織再生用
細胞を前述の個体に移植できるのみならず、別の個体へ
の移植、あるいは生体外で生体組織の再生に利用するこ
とができる。細胞分離フィルターから通過流出した赤血
球は、基礎科学実験用赤血球検体としての利用や人工赤
血球の原料となるヘモグロビンの採取目的に用いること
ができる。また、輸血用血液として患者に輸血すること
もでき、特に前述の個体に輸血した場合は、個体の貧血
予防になるためより好ましい。

【００１９】本発明で得られた生体組織再生用細胞は、
そのまま、あるいは必要に応じさらなる分離精製、培
養、活性化、分化誘導、増幅、遺伝子導入、凍結保存、
ＷＯ９７／２６３２６号公報で提案されているハイドロ
キシアパタイトなどの骨補填材との複合化、Ｊ．Ｂｉｏ
ｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．（Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｍｅ
ｄ．）ｖｏｌ．４８，１９９９で提案されている人工関
節との複合化、第３４回日本人工臓器学会大会予稿集Ｓ
１−１で提案されている人工血管との複合化などの各種
処理が施された後、各種生体組織の病変および／または
欠損の治療や基礎科学分野の研究に用いられる。具体的
には、本発明では、細胞分離フィルターから５％Ｆｅｔ
ａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）含有Ｍｉｎ
ｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥ
Ｍ）で回収した生体組織再生用細胞分離液を５％ＣＯ₂
雰囲気で２週間培養した後、Ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ，Ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，
Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅを添加した１５％ＦＢＳ含
有ＭＥＭでさらに２週間培養したところ、ｉｎ ｖｉｔ
ｏｒｏで骨を形成させることができた。本発明は、この
ような細胞分離フィルターから回収した組織再生用細胞
から生体組織再生を行うために必要な条件を初めて見出
したものである。

【００２０】

【実施例】以下に実施例により本発明をより詳細に説明
するが、本発明はこれらにより限定されるものではな
い。

【実施例１】１．細胞分離フィルター 平均繊維径２．３μｍのポリエステル不織布（目付約６
０ｇ／ｍ²、嵩高約０．３ｍｍ）１８枚と平均繊維径１
２μｍのポリエステル不織布（目付約１００ｇ／ｍ²、
嵩高約０．４７ｍｍ）１６枚を重ね、押し切りカッター
で３５ｍｍ角に切断し細胞分離フィルター材とした。こ
の細胞分離フィルター材を容器外寸（縦×横×厚み）４
１×４１×１８ｍｍで液体流出口と液体流入口を対角線
上に持つポリカーボネート製容器の出口側に平均繊維径
１２μｍのポリエステル不織布がくるように充填して細
胞分離フィルターとした。この細胞分離フィルターの入
口側には図１に示すように先端がスパイク２で、途中に
細胞回収バッグ６への分岐を有する三方活栓４を有する
チューブを接続した。また、細胞分離回収フィルター１
の出口側には途中に三方活栓５を有し、末端が赤血球バ
ッグ３に接続されるチューブを接続し図１に示す細胞分
離回収装置とした。

【００２１】２．原料細胞浮遊液 常法によりヒト骨髄液３ｍｌを採取し、ただちに６単位
／ｍｌヘパリン添加Ｄ−ＰＢＳ３ｍｌと混和し、細胞分
離操作直前に１５％Ｆｅｔａｌ ＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕ
ｍ（ＦＢＳ、ギブコ社製）含有Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓ
ｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ、シグマ社製）６０
ｍｌで希釈して原料細胞浮遊液とした。

【００２２】３．細胞分離回収操作 １．で作製した細胞分離回収装置のスパイク２に２．の
原料細胞浮遊液入り血液バッグ（以下、血液バッグ）を
接続した。三方活栓４は血液バッグと細胞分離フィルタ
ー１のみが連通する方向に、三方活栓５は細胞分離フィ
ルター１と赤血球バッグのみが連通する方向にして原料
細胞浮遊液を細胞分離フィルターに落差で通液濾過し、
フィルターから流出した赤血球を赤血球バッグに回収し
た。空になった血液バッグを生理食塩水入りバッグと交
換し、フィルターに１００ｍｌの生理食塩水を通液し、
フィルター内に微量残存する赤血球を洗い流し、この洗
液も赤血球バッグに回収した。次に三方活栓５に１５％
ＦＢＳ含ＭＥＭ３０ｍｌを入れた３０ｍｌ注射器（ルア
ーロック口）を接続し、三方活栓５は注射器と細胞分離
フィルター１のみが連通する方向にし、三方活栓４は細
胞分離フィルター１と細胞回収バッグ６のみが連通する
方向にした。次に注射器のプランジャーを手で押すこと
で細胞分離回収フィルター１に捕捉されている細胞（以
下、組織再生用細胞）を回収バッグ６に回収した。

【００２３】４．培養操作 ３．で回収した組織再生用細胞を１５ｍｌをＴ７５ティ
ッシュカルチャーフラスコに入れ５％ＣＯ₂インキュベ
ータで２週間培養した後、付着細胞を公知のトリプシン
を用いる方法で剥離、回収した。

【００２４】５．評価 赤血球バッグ３に回収された赤血球数を測定した。赤血
球数は自動血球カウンターを用いて測定した。原料細胞
浮遊液中の赤血球数、赤血球バッグ中の赤血球数とこれ
らから算出した赤血球回収率を表１に示す。

【表１】

【００２５】また、細胞回収バッグに回収された有核細
胞数を自動血球カウンターを用いて測定した。原料細胞
浮遊液中の有核細胞数、細胞回収バッグ中の有核細胞
数、これらから算出した有核細胞回収率を表２に示す。
なお、有核細胞の全てが組織再生用細胞ではないが、組
織再生用細胞はこの有核細胞に含まれている。

【表２】

【００２６】Ｉｎ ｖｉｔｒｏの骨形成は、以下の方法
で評価した。すなわち、回収した５×１０⁴の細胞を直
径３５ｍｍの培養用ディッシュに入れ、１０ｍＭのＧｌ
ｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、８２μｇ／ｍｌのＶｉ
ｔａｍｉｎ Ｃ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、１０ｎＭのＤｅ
ｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（いずれも最終濃度）を添加し
た１５％ＦＢＳ含ＭＥＭで２週間培養を行った後、アリ
ザリン染色およびアルカリフォスファターゼ染色で評価
した。

【００２７】６．結果 本分離操作により組織再生用細胞を分離回収できるこ
と、及び、得られた組織再生細胞用細胞は図２に示すご
とくｉｎ ｖｉｔｒｏで骨を形成する能力を有すること
が明らかになった。図２においては、矢印で囲んだ部分
に石灰化が観察され、骨を形成していることが確認でき
る。また、赤血球バッグには原料細胞浮遊液の赤血球の
９０％という高い回収率で赤血球が回収されていた。

【００２８】

【実施例２】１．細胞分離フィルター 実施例１のフィルターに通液性を高めるために以下の方
法で親水性ポリマーをコートする以外は同様な操作を行
った。すなわち、実施例１のフィルターにヒドロキシエ
チルメタクリレート・ジメチルアミノエチルメタクリレ
ート共重合体（モル比＝９７：３）の１％エタノール溶
液１５ｍＬを該細胞分離フィルターの液体流入口から通
エキし、窒素ガスで余分なポリマー溶液をパージした
後、６０℃で８時間以上真空乾燥機で乾燥させ細胞分離
フィルターとした。本フィルターを実施例１と同様な回
路を接続し、細胞分離回収装置とした。

【００２９】２．原料細胞浮遊液 実施例１と同様の原料細胞浮遊液を用いた。 ３．細胞分離回収操作 実施例１と同様な細胞分離回収操作を行った。

【００３０】４．培養操作 実施例１と同様な培養操作を行った。 ５．評価 実施例１と同様に骨形成および回収した赤血球の評価を
行った。原料細胞浮遊液中の赤血球数、赤血球バッグ中
の赤血球数とこれらから算出した赤血球回収率を表３に
示す

【表３】 ６．結果 実施例１と同様な骨形成像が得られた。また、赤血球バ
ッグには原料細胞浮遊液の赤血球の９１％という高い回
収率で赤血球が回収されていた。

【００３１】

【発明の効果】以上示したように本発明によれば簡便な
操作かつ非完全開放系で原料細胞浮遊液中の組織再生用
細胞を機能を維持したまま分離濃縮でき、分離濃縮した
組織再生用細胞が組織再生能力を有していることが分か
った。また同時に赤血球も高率に回収できるので、組織
工学が実験室レベルの実験医療から脱皮し、ルーチンの
医療行為への発展に貢献すること極めて大である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１の生体組織再生用細胞分離装置の模式
図である。

【図２】実施例１で分離された細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ
骨形成の状態を示した写真である。

【符号の説明】

１ 細胞分離フィルター ２ スパイク ３ 赤血球バッグ ４ 三方活栓 ５ 三方活栓 ６ 細胞回収バッグ ７ 細胞回収用流体の注入手段

フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B065 AA90X AC20 BB25 BC01 BC21 BC42 BD18 CA44 4C077 BB02 CC01 EE01 KK11 LL02 LL12 NN02 NN18 PP08 PP10 PP12 PP13 4C087 AA01 AA02 AA04 BB34 BB44 BB63 DA03 DA17 ZB21

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】生体組織の再生に用いられる組織再生用細
   胞と夾雑細胞とを含む細胞浮遊液を採取すること、採取
   した細胞浮遊液を少なくとも夾雑細胞を通過させ組織再
   生用細胞を捕捉する細胞分離フィルターに通液するこ
   と、該細胞分離フィルターに流体を導入して細胞分離フ
   ィルターにいったん捕捉された組織再生用細胞を回収す
   ること、回収された組織再生用細胞を生体組織の再生に
   使用することを含む生体組織の再生方法。
2. 【請求項２】生体組織の再生に用いられる組織再生用細
   胞と夾雑細胞とを含む細胞浮遊液を個体から採取するこ
   と、採取した細胞浮遊液を少なくとも赤血球を通過させ
   生体組織再生用細胞を捕捉する細胞分離フィルターに通
   液すること、細胞分離フィルターから通過流出した赤血
   球を回収すること、該細胞分離フィルターに流体を導入
   して細胞分離フィルターにいったん捕捉された組織再生
   用細胞を回収すること、前記回収された赤血球を同一個
   体または別の個体に輸血すること、および前記回収され
   た組織再生用細胞を生体組織の再生に使用することを含
   む生体組織の再生方法。