JP2000351791A - ドキソルビシンの精製方法 - Google Patents
ドキソルビシンの精製方法Info
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- JP2000351791A JP2000351791A JP11161030A JP16103099A JP2000351791A JP 2000351791 A JP2000351791 A JP 2000351791A JP 11161030 A JP11161030 A JP 11161030A JP 16103099 A JP16103099 A JP 16103099A JP 2000351791 A JP2000351791 A JP 2000351791A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 効率のよいドキソルビシンの精製方法の提
供。 【解決手段】 粗精製ドキソルビシンからドキソルビシ
ンを吸着させた疎水性多孔質合成樹脂担体を、水混和性
有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に調整された水性溶
液による溶出操作にかけることによりドキソルビシンを
溶出し、こうして得られた溶出液から精製されたドキソ
ルビシンを回収する。
供。 【解決手段】 粗精製ドキソルビシンからドキソルビシ
ンを吸着させた疎水性多孔質合成樹脂担体を、水混和性
有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に調整された水性溶
液による溶出操作にかけることによりドキソルビシンを
溶出し、こうして得られた溶出液から精製されたドキソ
ルビシンを回収する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アントラサイクリ
ン抗生物質ドキソルビシンの高純度製品を得るための精
製方法に関する。
ン抗生物質ドキソルビシンの高純度製品を得るための精
製方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ドキソルビシン（アドリアマイシンとも
称されている）は、放線菌の培養液あるいはダウノマイ
シンを原料とした化学合成により得られることが知られ
ており、実験腫瘍に対して広域抗癌スペクトルを有する
アントラサイクリン抗生物質である（米国特許第３,５
９０,０２８号明細書参照）。そして、現に、癌化学療
法剤として臨床的にも広く利用されている。
称されている）は、放線菌の培養液あるいはダウノマイ
シンを原料とした化学合成により得られることが知られ
ており、実験腫瘍に対して広域抗癌スペクトルを有する
アントラサイクリン抗生物質である（米国特許第３,５
９０,０２８号明細書参照）。そして、現に、癌化学療
法剤として臨床的にも広く利用されている。
【０００３】ドキソルビシン（以下、「ＤＸ」と略記す
る）を初めとする類似のアントラサイクリン抗生物質
は、前記培養液あるいは反応液から粗精製したものを、
カチオン交換樹脂［例、Amberlite（商標）ＩＲＣ５
０］にかけ、塩化ナトリウム含有水または水と塩化ナト
リウムを含有するメタノールで溶離することにより、さ
らに精製されている（特公昭４９−４４３４７号、特開
昭５０−１５８８０号）。また、重合体状イオン交換樹
脂［例、Amberlite（商標）ＥＲ１８０］もしくはＣＭ
セファロース樹脂［例、Sepharose（商標）ＣＨＢ］に
前記抗生物質を吸着させた後、酸性の水と極性溶媒の混
合物を用いて溶離する工程を含む方法も公表されている
［特開昭５９−１１８７９７号ならびにそれに由来する
特公平４−３９４７６号：これらに対応する米国特許第
４,８６１,８７０号］。さらに、後者の公報には、上記
重合体状イオン交換樹脂で処理する前の予備精製工程に
おいて吸着性多孔質合成樹脂担体［例、Amberlite（商
標）ＸＡＤ２］に粗精製ＤＸを吸着させた後、水：メタ
ノール（７：３）（ｖ／ｖ）混合物を用いて前記抗生物
質を溶離することも記載されているが、溶離液はｐＨ調
整していない。しかも高純度のＤＸを得るためにはさら
なる精製を必要としている。
る）を初めとする類似のアントラサイクリン抗生物質
は、前記培養液あるいは反応液から粗精製したものを、
カチオン交換樹脂［例、Amberlite（商標）ＩＲＣ５
０］にかけ、塩化ナトリウム含有水または水と塩化ナト
リウムを含有するメタノールで溶離することにより、さ
らに精製されている（特公昭４９−４４３４７号、特開
昭５０−１５８８０号）。また、重合体状イオン交換樹
脂［例、Amberlite（商標）ＥＲ１８０］もしくはＣＭ
セファロース樹脂［例、Sepharose（商標）ＣＨＢ］に
前記抗生物質を吸着させた後、酸性の水と極性溶媒の混
合物を用いて溶離する工程を含む方法も公表されている
［特開昭５９−１１８７９７号ならびにそれに由来する
特公平４−３９４７６号：これらに対応する米国特許第
４,８６１,８７０号］。さらに、後者の公報には、上記
重合体状イオン交換樹脂で処理する前の予備精製工程に
おいて吸着性多孔質合成樹脂担体［例、Amberlite（商
標）ＸＡＤ２］に粗精製ＤＸを吸着させた後、水：メタ
ノール（７：３）（ｖ／ｖ）混合物を用いて前記抗生物
質を溶離することも記載されているが、溶離液はｐＨ調
整していない。しかも高純度のＤＸを得るためにはさら
なる精製を必要としている。
【０００４】以上の従来技術の吸着、溶離手段によれ
ば、一定の高純度ＤＸを得ることもできるようである
が、高純度製品を得ようとすればする程、目的とするＤ
Ｘの回収率が低下し、逆に回収率を高めようとすればす
る程、製品の純度を高めることができない。特に、培養
液あるいは培養液の粗精製液からＤＸを回収しようとす
る場合、その後の結晶化を初めとする精製工程により除
去することが困難な不純物（たとえば、後述するＨＰＬ
Ｃ分析でＤＸより保持時間の大きいもの）が精製ＤＸに
随伴してくる傾向がある。
ば、一定の高純度ＤＸを得ることもできるようである
が、高純度製品を得ようとすればする程、目的とするＤ
Ｘの回収率が低下し、逆に回収率を高めようとすればす
る程、製品の純度を高めることができない。特に、培養
液あるいは培養液の粗精製液からＤＸを回収しようとす
る場合、その後の結晶化を初めとする精製工程により除
去することが困難な不純物（たとえば、後述するＨＰＬ
Ｃ分析でＤＸより保持時間の大きいもの）が精製ＤＸに
随伴してくる傾向がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】したがって本発明の目
的は、出発粗精製ＤＸから高純度ＤＸを高い回収率で、
しかも簡便な方法で得ることのできる精製方法を提供す
ることにある。
的は、出発粗精製ＤＸから高純度ＤＸを高い回収率で、
しかも簡便な方法で得ることのできる精製方法を提供す
ることにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、高純度製
品を得るためのイオン交換樹脂［例、Amberlite（商
標）ＥＲ１８０］を用いる処理に先立って、予備精製の
工程で使用することが従来提案されていた吸着性（もし
くは疎水性）合成樹脂担体を用い、特定の溶離（または
溶出）条件を選ぶことにより、高回収率でかつ高純度の
ＤＸが得られることを見い出した。たとえば、上記特開
昭５９−１１８７９７号公報に記載されているように、
高純度製品を得るためには、予備精製工程である疎水性
合成樹脂工程とイオン交換樹脂工程の併用が必須である
が、予備精製工程で使用されていたにすぎない疎水性合
成樹脂担体の使用だけで、上記課題が解決できることは
全く驚くべきことであろう。
品を得るためのイオン交換樹脂［例、Amberlite（商
標）ＥＲ１８０］を用いる処理に先立って、予備精製の
工程で使用することが従来提案されていた吸着性（もし
くは疎水性）合成樹脂担体を用い、特定の溶離（または
溶出）条件を選ぶことにより、高回収率でかつ高純度の
ＤＸが得られることを見い出した。たとえば、上記特開
昭５９−１１８７９７号公報に記載されているように、
高純度製品を得るためには、予備精製工程である疎水性
合成樹脂工程とイオン交換樹脂工程の併用が必須である
が、予備精製工程で使用されていたにすぎない疎水性合
成樹脂担体の使用だけで、上記課題が解決できることは
全く驚くべきことであろう。
【０００７】したがって本発明によれば、粗精製ＤＸか
らＤＸを吸着させた疎水性多孔質合成樹脂担体を、水混
和性有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に調整された水
性溶液による溶出操作にかけることによりＤＸを溶出
し、こうして得られた溶出液から精製されたＤＸを回収
することを特徴とするＤＸの精製方法が提供される。
らＤＸを吸着させた疎水性多孔質合成樹脂担体を、水混
和性有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に調整された水
性溶液による溶出操作にかけることによりＤＸを溶出
し、こうして得られた溶出液から精製されたＤＸを回収
することを特徴とするＤＸの精製方法が提供される。
【０００８】本発明にいう粗精製ＤＸ（ＤＸ）は、それ
を含有する培養液から、それ自体既知の分離もしくは精
製方法に従って菌体その他の不純物が除去され、ＤＸが
ある程度濃縮されているものであれば、ＤＸの含有率は
いかなるものであってもよい。このような分離もしくは
精製方法には上記従来技術として紹介した方法をも包含
される。また、発酵生産物であるダウノマイシンを原料
とし、その１４位をハロゲン化し、さらにこれを加水分
解する半合成工程を経て得られる一定の不純物を随伴す
るＤＸ含有処理物をも、本発明にいう粗精製ＤＸに包含
される。
を含有する培養液から、それ自体既知の分離もしくは精
製方法に従って菌体その他の不純物が除去され、ＤＸが
ある程度濃縮されているものであれば、ＤＸの含有率は
いかなるものであってもよい。このような分離もしくは
精製方法には上記従来技術として紹介した方法をも包含
される。また、発酵生産物であるダウノマイシンを原料
とし、その１４位をハロゲン化し、さらにこれを加水分
解する半合成工程を経て得られる一定の不純物を随伴す
るＤＸ含有処理物をも、本発明にいう粗精製ＤＸに包含
される。
【０００９】しかしながら、本発明方法がより効率的に
適用できるのは、ＤＸの相対純度が約８０％以上、好ま
しくは９０〜９８％の粗精製ＤＸに向けられる場合であ
る。本明細書で使用する場合の「相対純度」とは、試料
を後述するようなＨＰＬＣ分析した結果得られる各成分
の溶出挙動を示す総ピーク面積に対するＤＸ由来のピー
ク面積の割合を意味する。
適用できるのは、ＤＸの相対純度が約８０％以上、好ま
しくは９０〜９８％の粗精製ＤＸに向けられる場合であ
る。本明細書で使用する場合の「相対純度」とは、試料
を後述するようなＨＰＬＣ分析した結果得られる各成分
の溶出挙動を示す総ピーク面積に対するＤＸ由来のピー
ク面積の割合を意味する。
【００１０】粗精製ＤＸを吸着させるのに使用する疎水
性多孔質合成樹脂担体としては、本発明の目的に沿う性
能を有するものであればどの種類のものであってもよい
が、具体的にはスチレンとジビニルベンゼンから特殊な
方法で重合して得られる多孔質（もしくは多孔性）ポリ
マーを挙げることができる。このような多孔質ポリマー
は、製造方法に従って、比表面積、細孔容積を異にする
が、後述する本発明の具体例に沿って使用することによ
り、所定の効果を得ることができるものであれば、それ
らの物性により限定されるものでない。
性多孔質合成樹脂担体としては、本発明の目的に沿う性
能を有するものであればどの種類のものであってもよい
が、具体的にはスチレンとジビニルベンゼンから特殊な
方法で重合して得られる多孔質（もしくは多孔性）ポリ
マーを挙げることができる。このような多孔質ポリマー
は、製造方法に従って、比表面積、細孔容積を異にする
が、後述する本発明の具体例に沿って使用することによ
り、所定の効果を得ることができるものであれば、それ
らの物性により限定されるものでない。
【００１１】しかしながら、一般的に、比表面積が４０
０〜８００ｍ2／ｇの範囲にあり、細孔容積が０.６５０
〜１.５ｍｌ／ｇ にあるものが好適に使用できる。この
ような多孔質ポリマーは、市販されているものから選ぶ
こともでき、限定されるものでないが、三菱化学株式会
社製のダイヤイオン（商標）ＨＰ２０（以下、ＨＰ２０
と略記する）または同ＨＰ２０ＳＳ（以下、ＨＰ２０Ｓ
Ｓと略記する）を都合よく使用することができる。
０〜８００ｍ2／ｇの範囲にあり、細孔容積が０.６５０
〜１.５ｍｌ／ｇ にあるものが好適に使用できる。この
ような多孔質ポリマーは、市販されているものから選ぶ
こともでき、限定されるものでないが、三菱化学株式会
社製のダイヤイオン（商標）ＨＰ２０（以下、ＨＰ２０
と略記する）または同ＨＰ２０ＳＳ（以下、ＨＰ２０Ｓ
Ｓと略記する）を都合よく使用することができる。
【００１２】上記のような、粗精製ＤＸを吸着させた疎
水性多孔質合成樹脂担体からのＤＸの溶出は、本発明に
よれば、水混和性有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に
調整された水性溶液を用いて実施される。水混和性有機
溶媒は本発明の目的に沿う限り特に限定されるものでな
いが、経済性と溶出効率の両者を兼ね備えたものとして
は、メタノール、エタノール、イソプロパノールおよび
アセトンを挙げることができる。これらのうち、特に好
適なものは、メタノールおよびアセトンである。このよ
うな溶媒を使用するとき、これらの溶媒と水溶液は、使
用する溶媒によって最適混合比が変動するので限定でき
ないが、一般的に、溶媒：水溶液の比は、それぞれ容量
基準で、１０：９０〜７０：３０の割合で使用できる。
たとえば、メタノールを使用する場合には、メタノー
ル：水溶液の比は、２０：８０〜７０：３０、特に、約
５０：５０の割合で使用でき、アセトンを使用する場合
には、アセトン：水溶液の比は、１０：９０〜３０：７
０、特に１５：８５〜２５：７５の割合で使用できる。
水性多孔質合成樹脂担体からのＤＸの溶出は、本発明に
よれば、水混和性有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に
調整された水性溶液を用いて実施される。水混和性有機
溶媒は本発明の目的に沿う限り特に限定されるものでな
いが、経済性と溶出効率の両者を兼ね備えたものとして
は、メタノール、エタノール、イソプロパノールおよび
アセトンを挙げることができる。これらのうち、特に好
適なものは、メタノールおよびアセトンである。このよ
うな溶媒を使用するとき、これらの溶媒と水溶液は、使
用する溶媒によって最適混合比が変動するので限定でき
ないが、一般的に、溶媒：水溶液の比は、それぞれ容量
基準で、１０：９０〜７０：３０の割合で使用できる。
たとえば、メタノールを使用する場合には、メタノー
ル：水溶液の比は、２０：８０〜７０：３０、特に、約
５０：５０の割合で使用でき、アセトンを使用する場合
には、アセトン：水溶液の比は、１０：９０〜３０：７
０、特に１５：８５〜２５：７５の割合で使用できる。
【００１３】これらの有機溶媒を含有する水性溶液は、
特にｐＨ２.５〜５に調整されていることが必要であ
る。ｐＨが２.５より低いと、一般的に得られる製品に
おけるＤＸの相対純度が低くなる傾向があり、特にその
後の精製工程で除去しにくい不純物が増加する傾向があ
る。一方、ｐＨが６を超えるとＤＸの溶出に要する溶出
液量が多くなる傾向があり、またＤＸの溶液中での安定
性が低くなる傾向もある。この有機溶媒含有水性溶液の
ｐＨ調整は、無機もしくは有機酸または必要により緩衝
剤を併用して行うことができる。酸としては、特に塩酸
を好ましいものとして挙げることができる。緩衝化に使
用できる緩衝剤は、製品に悪影響を及ぼさないものであ
れば、いかなる緩衝剤であってもよい。限定されるもの
でないが、かような緩衝剤としては、重フタル酸カリウ
ム−ＨＣｌ、グリココール酸−ＨＣｌ、クエン酸ナトリ
ウム−ＨＣｌ、クエン酸カリウム−ＨＣｌ、クエン酸カ
リウム−クエン酸、コハク酸−Ｎａ2Ｂ4Ｏ7、酢酸ナト
リウム−ＨＣｌ、酢酸ナトリウム−酢酸、クエン酸−Ｎ
ａ2ＨＰＯ4、酒石酸−酒石酸ナトリウム、乳酸−乳酸ナ
トリウム、アコニチン酸−ＮａＯＨ、コハク酸−ＮａＯ
Ｈ等を挙げることができる。これらのうち、特に、クエ
ン酸ナトリウム−ＨＣｌが好ましい。
特にｐＨ２.５〜５に調整されていることが必要であ
る。ｐＨが２.５より低いと、一般的に得られる製品に
おけるＤＸの相対純度が低くなる傾向があり、特にその
後の精製工程で除去しにくい不純物が増加する傾向があ
る。一方、ｐＨが６を超えるとＤＸの溶出に要する溶出
液量が多くなる傾向があり、またＤＸの溶液中での安定
性が低くなる傾向もある。この有機溶媒含有水性溶液の
ｐＨ調整は、無機もしくは有機酸または必要により緩衝
剤を併用して行うことができる。酸としては、特に塩酸
を好ましいものとして挙げることができる。緩衝化に使
用できる緩衝剤は、製品に悪影響を及ぼさないものであ
れば、いかなる緩衝剤であってもよい。限定されるもの
でないが、かような緩衝剤としては、重フタル酸カリウ
ム−ＨＣｌ、グリココール酸−ＨＣｌ、クエン酸ナトリ
ウム−ＨＣｌ、クエン酸カリウム−ＨＣｌ、クエン酸カ
リウム−クエン酸、コハク酸−Ｎａ2Ｂ4Ｏ7、酢酸ナト
リウム−ＨＣｌ、酢酸ナトリウム−酢酸、クエン酸−Ｎ
ａ2ＨＰＯ4、酒石酸−酒石酸ナトリウム、乳酸−乳酸ナ
トリウム、アコニチン酸−ＮａＯＨ、コハク酸−ＮａＯ
Ｈ等を挙げることができる。これらのうち、特に、クエ
ン酸ナトリウム−ＨＣｌが好ましい。
【００１４】塩酸のみを使用してｐＨ調整すると、本操
作以降のＤＸ回収の際にクロロホルム等の有機溶媒によ
る抽出工程等の塩の置換工程を省略することができ、他
の酸の使用により生じる塩または緩衝剤を除去する工程
を省略できる点で有利である。
作以降のＤＸ回収の際にクロロホルム等の有機溶媒によ
る抽出工程等の塩の置換工程を省略することができ、他
の酸の使用により生じる塩または緩衝剤を除去する工程
を省略できる点で有利である。
【００１５】上記樹脂担体からそれに吸着しているＤＸ
を溶出する操作条件は、ＤＸまたは樹脂担体に変性など
の悪影響を及ぼさない温度であれば、どのような温度で
あってもよいが、ほぼ室温（１０〜３０℃）付近での操
作を選ぶのが都合よい。さらに、かような樹脂担体は、
通常、カラムに充填した態様で操作するのがよいが、こ
れに限定されない。
を溶出する操作条件は、ＤＸまたは樹脂担体に変性など
の悪影響を及ぼさない温度であれば、どのような温度で
あってもよいが、ほぼ室温（１０〜３０℃）付近での操
作を選ぶのが都合よい。さらに、かような樹脂担体は、
通常、カラムに充填した態様で操作するのがよいが、こ
れに限定されない。
【００１６】粗精製ＤＸを吸着させた疎水性多孔質合成
樹脂担体の調製は、上記溶出に悪影響を及ぼさない方法
に従ったものであれば、どのような方法でＤＸが前記樹
脂担体に吸着されたものであってもよい。しかしなが
ら、具体的な調製は、粗精製ドキソルビシンを含むｐＨ
約１〜５に調整された水溶液と前記担体との接触により
その担体にＤＸを吸着させ、次いでｐＨ約１〜５の酸性
水でＤＸ吸着樹脂担体を洗浄することによるのが好まし
い。上記の粗精製ドキソルビシン含有液および酸性水の
ｐＨ調節は、上述したような酸または緩衝剤を使用して
行ってもよいが、好ましくは、塩酸を使用することがで
きる。また、酸性水のｐＨは、約４付近に調節すること
が、特に好ましい。このような酸性水による洗浄は、洗
浄液中に不純物の存在が認められなくなるまで続ける。
この際、酸性水は、通常、樹脂量の２〜６倍量使用され
る。
樹脂担体の調製は、上記溶出に悪影響を及ぼさない方法
に従ったものであれば、どのような方法でＤＸが前記樹
脂担体に吸着されたものであってもよい。しかしなが
ら、具体的な調製は、粗精製ドキソルビシンを含むｐＨ
約１〜５に調整された水溶液と前記担体との接触により
その担体にＤＸを吸着させ、次いでｐＨ約１〜５の酸性
水でＤＸ吸着樹脂担体を洗浄することによるのが好まし
い。上記の粗精製ドキソルビシン含有液および酸性水の
ｐＨ調節は、上述したような酸または緩衝剤を使用して
行ってもよいが、好ましくは、塩酸を使用することがで
きる。また、酸性水のｐＨは、約４付近に調節すること
が、特に好ましい。このような酸性水による洗浄は、洗
浄液中に不純物の存在が認められなくなるまで続ける。
この際、酸性水は、通常、樹脂量の２〜６倍量使用され
る。
【００１７】以上の本発明方法によって精製されたＤＸ
は、必要により、同一または異なる構成からなる上記方
法で繰り返し処理してもよい。
は、必要により、同一または異なる構成からなる上記方
法で繰り返し処理してもよい。
【００１８】また、上記の方法により精製されたＤＸ含
有画分からのＤＸの回収は、有機溶媒を留去した後、そ
の溶液から、クロロホルムなどを使用するそれ自体既知
の抽出方法により達成することができる。例えば、相対
純度が一定値以上の画分を集め、その溶液を水酸化ナト
リウムなどでｐＨ約８．５に調節し、溶液量と同量のク
ロロホルム−メタノール混液（５：１）を加えてＤＸを
抽出し、有機溶媒相を減圧下に濃縮した後、これにＤＸ
に対して等モルの塩酸を含むメタノール溶液を加えて塩
酸ＤＸを析出せしめ、析出した塩酸ＤＸを濾取すればよ
い。
有画分からのＤＸの回収は、有機溶媒を留去した後、そ
の溶液から、クロロホルムなどを使用するそれ自体既知
の抽出方法により達成することができる。例えば、相対
純度が一定値以上の画分を集め、その溶液を水酸化ナト
リウムなどでｐＨ約８．５に調節し、溶液量と同量のク
ロロホルム−メタノール混液（５：１）を加えてＤＸを
抽出し、有機溶媒相を減圧下に濃縮した後、これにＤＸ
に対して等モルの塩酸を含むメタノール溶液を加えて塩
酸ＤＸを析出せしめ、析出した塩酸ＤＸを濾取すればよ
い。
【００１９】塩酸によりｐＨ調整した洗浄液および有機
溶媒含有水性溶液を用いて精製するときには、クロロホ
ルム−メタノール混液などによる抽出工程を省略してＤ
Ｘ含有画分から回収することができる。例えば、相対純
度が一定値以上のＤＸ含有画分を集め、減圧下に濃縮
し、これにアセトンなどの貧溶媒を加えてＤＸを析出せ
しめ、析出したＤＸを濾取すればよい。
溶媒含有水性溶液を用いて精製するときには、クロロホ
ルム−メタノール混液などによる抽出工程を省略してＤ
Ｘ含有画分から回収することができる。例えば、相対純
度が一定値以上のＤＸ含有画分を集め、減圧下に濃縮
し、これにアセトンなどの貧溶媒を加えてＤＸを析出せ
しめ、析出したＤＸを濾取すればよい。
【００２０】
【実施例】以下、具体例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、これらの例は、本発明ならびに本発明の作
用および効果の理解をより容易にする目的で提供するも
のである。
説明するが、これらの例は、本発明ならびに本発明の作
用および効果の理解をより容易にする目的で提供するも
のである。
【００２１】実施例１：低純度ＤＸの精製−クエン酸緩
衝液（以下、ＣＢＳという）（ｐＨ３.５）、溶媒比率
（１５：８５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．５、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）（１５：８５）で
溶出させた。下記の条件でＤＸ溶出分画（各６．２５ｍ
ｌ）のＨＰＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ
以上の分画を集めた。その結果、回収率５７％、回収溶
液量２２８ｍｌ、相対純度９９．８９％であった。
衝液（以下、ＣＢＳという）（ｐＨ３.５）、溶媒比率
（１５：８５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．５、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）（１５：８５）で
溶出させた。下記の条件でＤＸ溶出分画（各６．２５ｍ
ｌ）のＨＰＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ
以上の分画を集めた。その結果、回収率５７％、回収溶
液量２２８ｍｌ、相対純度９９．８９％であった。
【００２２】ＨＰＬＣ分析条件： カラム：ＺＯＲＢＡＸ，ＴＭＳ、 ２５０×４.６ｍｍ
i.d.（ヒューレット・パッカード社製） カラム温度：４０℃ 移動相：水−アセトニトリル−メタノール−リン酸(５
４０：２９０：１７０：２）＋ドデシル硫酸ナトリウム
１．０ｇ／ｌ（ｐＨ３．６、２Ｎ水酸化ナトリウム） 流速：１.５ｍｌ／ｍｉｎ 検出：４９５ｎｍ
i.d.（ヒューレット・パッカード社製） カラム温度：４０℃ 移動相：水−アセトニトリル−メタノール−リン酸(５
４０：２９０：１７０：２）＋ドデシル硫酸ナトリウム
１．０ｇ／ｌ（ｐＨ３．６、２Ｎ水酸化ナトリウム） 流速：１.５ｍｌ／ｍｉｎ 検出：４９５ｎｍ
【００２３】実施例２：低純度ＤＸの精製−ＣＢＳ（ｐ
Ｈ３.５）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．５、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）（２０：８０）で
溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分
析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集め
た。その結果、回収率８３％、回収溶液量１２１ｍｌ、
相対純度９９．９３％であった。
Ｈ３.５）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．５、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）（２０：８０）で
溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分
析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集め
た。その結果、回収率８３％、回収溶液量１２１ｍｌ、
相対純度９９．９３％であった。
【００２４】実施例３：低純度ＤＸの精製−ＣＢＳ（ｐ
Ｈ３.５）、溶媒比率（２５：７５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．５、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.０）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）（２５：７５）で
溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分
析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集め
た。その結果、回収率９６％、回収溶液量９４ｍｌ、相
対純度９９．９６％であった。
Ｈ３.５）、溶媒比率（２５：７５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．５、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.０）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.５）（２５：７５）で
溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分
析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集め
た。その結果、回収率９６％、回収溶液量９４ｍｌ、相
対純度９９．９６％であった。
【００２５】実施例４：低純度ＤＸの精製−ＣＢＳ（ｐ
Ｈ３.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.０）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.０）（２０：８０）で
溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分
析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集め
た。その結果、回収率８６％、回収溶液量１０１ｍｌ、
相対純度９９．９１％であった。
Ｈ３.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.０）５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ３.０）（２０：８０）で
溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分
析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集め
た。その結果、回収率８６％、回収溶液量１０１ｍｌ、
相対純度９９．９１％であった。
【００２６】実施例５：低純度ＤＸの精製−ＣＢＳ（ｐ
Ｈ４.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ４．０）５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ４．０）（２０：８
０）で溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰ
ＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画
を集めた。その結果、回収率８９％、回収溶液量２４１
ｍｌ、相対純度９９．８５％であった。
Ｈ４.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水２５ｍｌで洗浄し、続けて
０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ４．０）５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−０.１ＭＣＢＳ（ｐＨ４．０）（２０：８
０）で溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰ
ＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画
を集めた。その結果、回収率８９％、回収溶液量２４１
ｍｌ、相対純度９９．８５％であった。
【００２７】実施例６：低純度ＤＸの精製−塩酸水（ｐ
Ｈ３.０）、溶媒比率（１０：９０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１０：９０）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率８９％、回収溶液量６０ｍｌ、相対純度
９９．９２％であった。
Ｈ３.０）、溶媒比率（１０：９０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１０：９０）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率８９％、回収溶液量６０ｍｌ、相対純度
９９．９２％であった。
【００２８】実施例７：低純度ＤＸの精製−塩酸水（ｐ
Ｈ３.０）、溶媒比率（１５：８５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１５：８５）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９９％、回収溶液量３４ｍｌ、相対純度
９９．９４％であった。
Ｈ３.０）、溶媒比率（１５：８５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１５：８５）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９９％、回収溶液量３４ｍｌ、相対純度
９９．９４％であった。
【００２９】実施例８：低純度ＤＸの精製−塩酸水（ｐ
Ｈ３.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（２０：８０）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９９％、回収溶液量２５ｍｌ、相対純度
９９．７４％であった。
Ｈ３.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（２０：８０）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９９％、回収溶液量２５ｍｌ、相対純度
９９．７４％であった。
【００３０】実施例９：低純度ＤＸの精製−塩酸水（ｐ
Ｈ３.０）、溶媒比率（１０：９０）、負荷量２倍− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１０：９０）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８０％、回収溶液量５４ｍｌ、相対純
度９９．９３％であった。
Ｈ３.０）、溶媒比率（１０：９０）、負荷量２倍− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１０：９０）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８０％、回収溶液量５４ｍｌ、相対純
度９９．９３％であった。
【００３１】実施例１０：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ３.０）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８１％、回収溶液量３８ｍｌ、相対純
度９９．９１％であった。
（ｐＨ３.０）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８１％、回収溶液量３８ｍｌ、相対純
度９９．９１％であった。
【００３２】実施例１１：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（１５：８５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（１５：８５）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９８％、回収溶液量４０ｍｌ、相対純度
９９．９６％であった。
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（１５：８５）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（１５：８５）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９８％、回収溶液量４０ｍｌ、相対純度
９９．９６％であった。
【００３３】実施例１２：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（２０：８０）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９９％、回収溶液量２９ｍｌ、相対純度
９９．８１％であった。
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（２０：８０）− 低純度ＤＸ粉末５００ｍｇ（ＤＸ含量３９７ｍｇ、相対
純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５ｍ
ｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５
ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、ア
セトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（２０：８０）で溶出さ
せ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を行
い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。そ
の結果、回収率９９％、回収溶液量２９ｍｌ、相対純度
９９．８１％であった。
【００３４】実施例１３：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（１０：９０）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（１０：９０）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８０％、回収溶液量５４ｍｌ、相対純
度９９．９４％であった。
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（１０：９０）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（１０：９０）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８０％、回収溶液量５４ｍｌ、相対純
度９９．９４％であった。
【００３５】実施例１４：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８２％、回収溶液量４３ｍｌ、相対純
度９９．９０％であった。
（ｐＨ４.０）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ４．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ４．０）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８２％、回収溶液量４３ｍｌ、相対純
度９９．９０％であった。
【００３６】実施例１５：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ２.５）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ２．５、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ２．５）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８５％、回収溶液量３８ｍｌ、相対純
度９９．８３％であった。
（ｐＨ２.５）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ２．５、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ２．５）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率８５％、回収溶液量３８ｍｌ、相対純
度９９．８３％であった。
【００３７】実施例１６：低純度ＤＸの精製−塩酸水
（ｐＨ５.０）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ５．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ５．０）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率９４％、回収溶液量４９ｍｌ、相対純
度９９．８７％であった。
（ｐＨ５.０）、溶媒比率（１５：８５）、負荷量２倍
− 低純度ＤＸ粉末１０００ｍｇ（ＤＸ含量７９４ｍｇ、相
対純度９７．８％）を酸性水（ｐＨ５．０、塩酸）２５
ｍｌに溶解して、この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２
５ｍｌ）に通液した。同酸性水５０ｍｌで洗浄した後、
アセトン−塩酸水（ｐＨ５．０）（１５：８５）で溶出
させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画のＨＰＬＣ分析を
行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上の分画を集めた。
その結果、回収率９４％、回収溶液量４９ｍｌ、相対純
度９９．８７％であった。
【００３８】実施例１７：ＤＸ反応液の精製−塩酸水
（ｐＨ３.０）、溶媒比率（１０：９０）− １４−ブロモドキソルビシン１０００ｍｇを水１７ｍｌ
に溶解した。これにギ酸ナトリウム水溶液（ギ酸ナトリ
ウム３３８ｍｇ／水３ｍｌ、ｐＨ５．９）を加え、窒素
置換しながら２０時間攪拌した。得られた反応終了液
（ｐＨ４）に０．１Ｎ塩酸３０ｍｌおよび酸性水（ｐＨ
３．０、塩酸）を加えた（液量７５ｍｌ、ＤＸ含量約６
５０ｍｇ）。この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５ｍ
ｌ）に通液した。酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）５０ｍｌ
で洗浄した後、アセトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１
０：９０）で溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画
のＨＰＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上
の分画を集めた。その結果、回収率７８％、回収溶液量
５４ｍｌ、相対純度９８．８９％であった。
（ｐＨ３.０）、溶媒比率（１０：９０）− １４−ブロモドキソルビシン１０００ｍｇを水１７ｍｌ
に溶解した。これにギ酸ナトリウム水溶液（ギ酸ナトリ
ウム３３８ｍｇ／水３ｍｌ、ｐＨ５．９）を加え、窒素
置換しながら２０時間攪拌した。得られた反応終了液
（ｐＨ４）に０．１Ｎ塩酸３０ｍｌおよび酸性水（ｐＨ
３．０、塩酸）を加えた（液量７５ｍｌ、ＤＸ含量約６
５０ｍｇ）。この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム（２５ｍ
ｌ）に通液した。酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）５０ｍｌ
で洗浄した後、アセトン−塩酸水（ｐＨ３．０）（１
０：９０）で溶出させ、実施例１の条件でＤＸ溶出分画
のＨＰＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／ｍｌ以上
の分画を集めた。その結果、回収率７８％、回収溶液量
５４ｍｌ、相対純度９８．８９％であった。
【００３９】実施例１８：ＤＸ反応液の精製−塩酸水
（ｐＨ３.０）、溶媒比率（１５：８５）− 実施例１７と同様に調製したドキソルビシン含有反応終
了液（ｐＨ４）に０．１Ｎ塩酸３０ｍｌおよび酸性水
（ｐＨ３．０、塩酸）を加えた（液量７５ｍｌ、ＤＸ含
量約６５０ｍｇ）。この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム
（２５ｍｌ）に通液した。酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）
５０ｍｌで洗浄した後、アセトン−塩酸水（ｐＨ３．
０）（１５：８５）で溶出させ、実施例１の条件でＤＸ
溶出分画のＨＰＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／
ｍｌ以上の分画を集めた。その結果、回収率８８％、回
収溶液量５４ｍｌ、相対純度９９．９１％であった。
（ｐＨ３.０）、溶媒比率（１５：８５）− 実施例１７と同様に調製したドキソルビシン含有反応終
了液（ｐＨ４）に０．１Ｎ塩酸３０ｍｌおよび酸性水
（ｐＨ３．０、塩酸）を加えた（液量７５ｍｌ、ＤＸ含
量約６５０ｍｇ）。この溶液をＨＰ２０ＳＳのカラム
（２５ｍｌ）に通液した。酸性水（ｐＨ３．０、塩酸）
５０ｍｌで洗浄した後、アセトン−塩酸水（ｐＨ３．
０）（１５：８５）で溶出させ、実施例１の条件でＤＸ
溶出分画のＨＰＬＣ分析を行い、ＤＸ濃度５００μｇ／
ｍｌ以上の分画を集めた。その結果、回収率８８％、回
収溶液量５４ｍｌ、相対純度９９．９１％であった。
Claims (9)
- 【請求項１】 粗精製ドキソルビシンからドキソルビシ
ンを吸着させた疎水性多孔質合成樹脂担体を、水混和性
有機溶媒を含有するｐＨ２.５〜５に調整された水性溶
液による溶出操作にかけることによりドキソルビシンを
溶出し、こうして得られた溶出液から精製されたドキソ
ルビシンを回収することを特徴とするドキソルビシンの
精製方法。 - 【請求項２】 粗精製ドキソルビシンを吸着させた疎水
性多孔質合成樹脂担体が、粗精製ドキソルビシンを含む
ｐＨ約１〜５に調整された水溶液と疎水性多孔質合成樹
脂担体との接触により前記担体にドキソルビシンを吸着
させ、次いでｐＨ約１〜５の酸性水溶液でドキソルビシ
ンを吸着した前記担体を洗浄することにより調製される
請求項１記載の精製方法。 - 【請求項３】 前記酸性水溶液のｐＨが約２．５〜３．
５である請求項２記載の精製方法。 - 【請求項４】 ドキソルビシンを吸着した前記担体を洗
浄するのに用いられる前記酸性水溶液のｐＨが塩酸によ
り調整されたものである請求項２または３記載の精製方
法。 - 【請求項５】 前記有機溶媒を含有する水性溶液のｐＨ
が塩酸により調整されており、そして前記有機溶媒がア
セトンである請求項１〜４のいずれかに記載の精製方
法。 - 【請求項６】 前記アセトンを含有する水性溶液が、ア
セトン：水溶液の容量比が１０：９０〜３０：７０の範
囲にある請求項５記載の精製方法。 - 【請求項７】 前記有機溶媒を含有する水性溶液のｐＨ
が塩酸により調整されており、そして前記有機溶媒がメ
タノールである請求項１〜４のいずれかに記載の精製方
法。 - 【請求項８】 前記有機溶媒を含有する水性溶液が、メ
タノール：水溶液の容量比が２０：８０〜７０：３０の
範囲にある請求項７記載の精製方法。 - 【請求項９】 粗精製ドキソルビシンが、相対純度９０
〜９８％を有する請求項１〜８のいずれかに記載の精製
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11161030A JP2000351791A (ja) | 1999-06-08 | 1999-06-08 | ドキソルビシンの精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11161030A JP2000351791A (ja) | 1999-06-08 | 1999-06-08 | ドキソルビシンの精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000351791A true JP2000351791A (ja) | 2000-12-19 |
Family
ID=15727273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11161030A Pending JP2000351791A (ja) | 1999-06-08 | 1999-06-08 | ドキソルビシンの精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000351791A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100351718B1 (ko) * | 1999-11-02 | 2002-09-11 | 보령제약 주식회사 | 4'-에피-독소루비신의 정제방법 |
| CN104774229A (zh) * | 2014-01-10 | 2015-07-15 | 浙江华谱新创科技有限公司 | 一种阿霉素及其衍生物的制备方法 |
| WO2017075994A1 (zh) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种表柔比星或其盐酸盐的分离纯化方法 |
| CN111574574A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-08-25 | 苏州赛分科技有限公司 | 多柔比星的纯化方法 |
| US20210308358A1 (en) * | 2016-05-31 | 2021-10-07 | Penumbra, Inc. | Methods and apparatus for extracting doxorubicin from blood and measuring doxorubicin in blood |
-
1999
- 1999-06-08 JP JP11161030A patent/JP2000351791A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100351718B1 (ko) * | 1999-11-02 | 2002-09-11 | 보령제약 주식회사 | 4'-에피-독소루비신의 정제방법 |
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| CN108350015A (zh) * | 2015-11-05 | 2018-07-31 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种表柔比星或其盐酸盐的分离纯化方法 |
| US20210308358A1 (en) * | 2016-05-31 | 2021-10-07 | Penumbra, Inc. | Methods and apparatus for extracting doxorubicin from blood and measuring doxorubicin in blood |
| CN111574574A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-08-25 | 苏州赛分科技有限公司 | 多柔比星的纯化方法 |
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