JP3382297B2 - 高純度デフェロキサミン塩の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は活性分としてデフェロキ
サミンＢを含有する発酵濾液から高純度デフェロキサミ
ン塩、好ましくはメタンスルホネート塩を調製する方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】文献から知られる多くのデフェロキサミ
ンの中でも、デフェロキサミンＢは最も価値のある１つ
であり、それは選択的イオン移動性物質であり、種々の
貧血症や鉄中毒の処置に使われ得る。

【０００３】デフェロキサミンＢの工業的規模の生産の
ためには、ストレプトマイセス・ピロサス(Streptomyce
s pilosus)菌株が利用され、これは鉄の不十分な培地で
デフェロキサミンＢを主に生産する（ベルギー特許明細
書６１９，５３２）。

【０００４】純粋なデフェロキサミンＢ成分の調製過程
で、デフェロキサミンと共に培地中の鉄(III)イオンに
よって形成されたフェリオキサミン錯体を分解するため
に８−ヒドロキシキノリンのメタノール溶液を発酵液に
加える。発酵液は、その後濾過され、過剰の８−ヒドロ
キシキノリンはアンバーライトＩＲ−４５イオン交換樹
脂により濾液から除去される。活性分はアンバーライト
ＩＲＣ−５０イオン交換樹脂に吸着され、０．２Ｍ塩酸
で溶出される。こうして多量の希釈溶出液が得られる。
溶出液中の活性分を濃縮および精製するために、溶液を
ｐＨ５でベンジルアルコールあるいはクロロホルムとフ
ェノールの１：１混合液を用いて抽出する。抽出物は再
び８−ヒドロキシキノリンで処理され、それにメチルイ
ソブチルケトンを加え、更に混合物を水で再抽出する。
過剰の８−ヒドロキシキノリンはクロロホルムで抽出除
去される。デフェロキサミンＢ塩酸塩を単離するため
に、水溶液は減圧下に濃縮され、分離された結晶は水と
メタノールおよび水とアセトンの混合物から再結晶され
る（ベルギー特許明細書６１９，５３２）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】前述したところから回
収操作はかなり厄介であると考えることが出来る。抽出
のために３種の異なった有機溶媒が３度使われ、再結晶
のために２種の異なった溶媒が利用される。溶媒を分離
すること、それらを回収操作に戻すこと、溶媒相に蓄積
された夾雑物を除去すること、不用物質を処理するこ
と、これらすべてが技術的に厄介な工程であり、問題を
含む操作である。

【０００６】デフェロキサミンＢは一般に水に易溶なメ
タンスルホネート塩の形で使われる。該メタンスルホネ
ート塩は、デフェロキサミンＢ塩酸塩の水溶液を水酸基
型のアニオン交換樹脂に通してまず塩基に変換し、その
後当量のメタンスルホン酸を含んでいる溶液をデフェロ
キサミンＢ塩基の水溶液に加えることにより、デフェロ
キサミンＢ塩酸塩から調製される。上記溶液を蒸発さ
せ、そうして得られたデフェロキサミンＢメタンスルホ
ネートを、水性のアルコールあるいはメタノールとアセ
トンの水性混合液から再結晶する（ベルギー特許明細書
６１６，１３９）。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、活性分
としてデフェロキサミンＢを含有する発酵液から高純度
デフェロキサミンＢ塩、特にメタンスルホネート塩を調
製する方法を提供するものであり、この方法は従来既知
の方法に比べて、より容易にそしてより経済的に行うこ
とが出来る。

【０００８】この発明は、デフェロキサミン塩、特に塩
酸塩が水溶液あるいは水と有機溶媒との混合液から塩析
によって分離出来ることの発見に基礎をおいている。我
々の経験によると、発酵濾液のイオン交換およびそれに
続く活性分を含んでいる溶出液の濃縮の後、活性分の分
離に際し、デフェロキサミンＢ塩酸塩は塩析操作によっ
て直接分離され得る。その結果、上記した有機溶媒によ
る抽出および再抽出を発酵液の処理操作から省略するこ
とが出来る。こうして得られた粗デフェロキサミンＢ塩
酸塩は、塩析の繰り返しあるいは再結晶、イオン交換の
繰返しなど、他の既知方法により精製され得る。そのた
め、塩析の適用は回収過程をより簡単にそしてより経済
的にするものである。

【０００９】デフェロキサミンＢメタンスルホネートを
医薬的な目的に対し適切な品質で調製することは、濃縮
した塩の水溶液をメタンスルホネート型の弱塩基性アニ
オン交換樹脂に通すことおよびデフェロキサミンＢのメ
タンスルホネート塩を含む溶液の凍結乾燥により、純粋
なデフェロキサミンＢ塩、好ましくは塩酸塩から容易に
成し遂げることが出来ることもまた見出された。この方
法は、かなり不安定なデフェロキサミンＢ塩基の調製お
よびデフェロキサミンＢ塩酸塩から始まる塩形成の両方
が省略出来る点で好ましいものである。他にも、この発
明の方法に従って単離、精製されたデフェロキサミンＢ
塩酸塩は非常に純粋であるため、デフェロキサミンＢメ
タンスルホネートを含んでいるイオン交換の流出液を直
接凍結乾燥することが出来、従ってメタンスルホネート
塩の希釈溶液の濃縮による分離や再結晶もまた省略する
ことが出来る。

【００１０】我々の実験において、ストレプトマイセス
１０１／８７菌株（寄託番号ＭＩＭＮＧ１１４３）の培
養により、活性分としてデフェロキサミンＢを含有する
発酵液が調製された。

【００１１】発酵液は、弱酸性ｐＨでの活性分の分解を
避けるために、酸性あるいは中性のｐＨでスルホン酸塩
および／または塩化物塩の存在下、濾過される。このた
めに、塩化アンモニウムが使われるのが好ましい。

【００１２】デフェロキサミンは濾液から水素型の弱酸
性カチオン交換樹脂に結合する。我々の経験によると、
樹脂に結合する夾雑物の量を低減させるに適した条件を
確保することによって、樹脂の吸着能力を増大させるこ
とが出来る。このことは、上に明記したように弱酸性ｐ
Ｈで発酵液を濾過することおよび濾液を希釈することに
よって達成され得る。濾液のｐＨを好ましくは酢酸アン
モニウムあるいは塩化アンモニウムの緩衝液を用いて５
から８の間に保持するのが望ましい。

【００１３】イオン交換法の精製効果は、濾液中に存在
している一部の夾雑物を結合するためにデフェロキサミ
ンを吸着することが不可能なアンモニウム型の弱酸性カ
チオン交換樹脂を含んでいる先駆的なカラムを使用する
ことによって、高められる。

【００１４】イオン交換後、活性分は溶出液のｐＨ値に
関連して、２から１２の広範囲のｐＨで溶出され得る
が、希アルカリ溶液、例えば０．０５から１．５Ｍの水
酸化ナトリウムあるいは水酸化アンモニウム溶液で溶出
を行うのが好ましい。アルカリｐＨ値で溶出が行われて
いる間、大部分の夾雑物は、活性分を含む画分の出現に
先立ってカラムから分離され、従って活性分が−濾液と
比較して−集中的に得られる。

【００１５】活性分の分解は低温（０−５℃）にするこ
とで防ぐことが出来る。勾配溶離を行うこともまた望ま
しい。

【００１６】デフェロキサミンＢの分離前に、溶出液を
中性または弱酸性のｐＨに酸、好ましくは希塩酸を用い
て調整し、例えば真空内での蒸留あるいは超濾過により
穏やかに濃縮する。粗デフェロキサミンＢ塩は塩析処置
及び冷却により水性濃縮物から分離される。塩析のため
に塩化アンモニウムあるいは硫酸アンモニウムを用いる
のが好ましい。

【００１７】上記のようにして得られた粗生成物の精製
は、幾つかの方法、例えば水溶液から塩析操作を繰り返
す、あるいは水とアルコールの混合液から物質を再結晶
することによって行うことが出来る。後者の方法を適用
する場合、混合液に塩化アンモニウムを加えることによ
って再結晶の効率を上げることが出来る。付随した着色
剤やシリカゲルあるいは活性炭のようなほかの夾雑物吸
着剤またはカチオン交換樹脂を除くために、望ましくは
水素型の弱酸性カチオン交換樹脂が適用される場合があ
る。水溶液あるいは水とアルコールの混合液から塩析を
繰り返すことにより高い効率で精製を行うことが出来
る。

【００１８】上記操作および精製方法により、高純度デ
フェロキサミン塩、例えば純粋なデフェロキサミンＢ塩
酸塩が得られる。これらの塩は、水に溶かしてから、メ
タンスルホネート対イオンを含むイオン交換樹脂へ移す
ことにより、更に精製することなく、直接メタンスルホ
ネート塩に転化することが出来る。粗デフェロキサミン
Ｂ塩酸塩をイオン交換法によって精製するならば、活性
物質を含んでいる溶出物はｐＨを調整した後、メタンス
ルホネート型のイオン交換樹脂に直接移すことが出来
る。

【００１９】アニオン交換操作は、弱塩基性アニオン交
換樹脂を使用することによって、またデフェロキサミン
Ｂメタンスルホネート塩が分解するのを避けるため、冷
却下、好ましくは温度５℃と１０℃の間で行われる。活
性物質は凍結乾燥によって溶液から単離することが出来
る。

【００２０】本発明方法の利点は、所望のデフェロキサ
ミンＢメタンスルホネート塩が純粋なデフェロキサミン
塩から塩基に転化することなく１段階で得られるという
事実に存する。これによって、分解に対して不安定で水
に難溶な塩基の調製とこうして得られた希釈溶液からの
塩形成の両方を省略することが出来る。

【００２１】本発明方法の更なる利点は、塩析に基礎を
おく水からの結晶化中あるいは水からの再結晶中のいず
れかにおいても、活性分の単離と精製のために溶媒の使
用を必要としないことである。抽出操作が省略されるた
め、それに引き続く回収処理は経済的で簡単で安全にな
り、さらに活性分を高純度で効率良く発酵液から単離す
ることが出来る。

【００２２】この発明は、さらに次の実施例で何らの制
限を加えることなく説明され、なお、これら実施例で処
理される発酵液は、ストレプトマイセス１０１／８７菌
株（寄託番号ＭＩＭＮＧ１１４３）を使って培養したも
のである。

【００２３】実施例１ ２５０ｋｇの発酵液（活性分含量：８００ｇ）を硫酸で
ｐＨ５．８と６．２の間に調整した。発酵液は水洗下パ
ーライト層に通して濾過した。こうして得られた４５０
ｋｇの濾液をまずアンモニウム型のレワタイトＣＮＰ８
０樹脂１２．５ｌに通し、その後水素型のアンバーライ
トＩＲＣ５０樹脂２８ｌに通した。樹脂を水で洗浄し、
活性分は０から５℃で０．３Ｍアンモニア溶液で溶出さ
れた。活性分を含む溶出液のフラクションは、濾液に対
する収率の８５％である６７９ｇのデフェロキサミンＢ
を含んでいた。容量７６ｌのフラクションを希塩酸でｐ
Ｈ６．０から６．３に調整し、元容量の１０分の１まで
穏やかに濃縮した。その後７００ｇの塩化アンモニウム
を濃縮物に加え完全に溶解した後、その混合物を８７７
ｇの粗デフェロキサミンＢ塩酸塩を得るために冷却下で
結晶化した。それらは水とメタノールの１：４混合液か
ら再結晶され、乾燥し、５％水溶液の形で溶解し、計３
７ｇの活性炭で部分的に処理し、更にまず水素型のアン
バーライトＩＲＣ５０樹脂４００ｍｌ、次に塩化物型の
アンバーライトＩＲＡ９００樹脂４００ｍｌに通した。
このようにして得られた溶液を濃縮物の２０％まで緩や
かに濃縮し、デフェロキサミンＢ塩酸塩を４倍量のメタ
ノールを加えた後−１０℃で分離し、濾過、乾燥した。
こうして、メタンスルホネート塩の形成に適切な塩酸塩
３８５ｇを得た。活性分含量は光度法によって決定し、
９９．８％であった。純粋なデフェロキサミンＢ塩酸塩
から、５％水溶液を調製し、これらを５℃に冷却してメ
タンスルホネート型のアンバーライトＩＲＡ６８樹脂１
４００ｍｌに通した。こうして得られた溶液は３９６ｇ
のデフェロキサミンＢメタンスルホネート塩を得るため
に凍結乾燥を必要とした。活性分含量は光度法によって
決定し、９９．５％であった。

【００２４】実施例２ 実施例に従って得られた８００ｍｌの濾液に１．２８ｇ
の酢酸アンモニウムを加えた。完全に溶解した後、濾液
を水素型のアンバーライトＩＲＣ５０樹脂７００ｍｌに
通した。混合物を水洗し、発酵液に対して９０％の収率
である２３ｇのデフェロキサミンＢを含む主なフラクシ
ョン１１００ｍｌを得るために１Ｍのアンモニア溶液で
溶出した。溶出液を１Ｍ塩酸でｐＨ６．０−６．２に調
整し、減圧下で元容量の５分の１まで濃縮した。濃縮物
を５℃に冷却し、分離した物質を２４時間で濾過し、乾
燥した。こうして粗デフェロキサミンＢ塩酸塩３０ｇを
得た。これらをその後水とメタノール１：４の混合液２
５０ｍｌで溶解し、溶液を１．３ｇの炭素で処理した。
不純物を除去した溶液を２４時間−１０℃で保ち、分離
したデフェロキサミンＢ塩酸塩を濾過し、微量の溶媒混
合液で洗浄し、更に乾燥した。こうして得られた１８．
８ｇのデフェロキサミンＢ塩酸塩を２９０ｍｌのイオン
除去水に溶解し、水素型のヴァリオンＫＣＯ樹脂１０ｍ
ｌに通して、その樹脂を１０ｍｌのイオン除去水で洗浄
した。溶液を水素型のヴァリオンＡＤＭ樹脂でｐＨ５．
５に調整し、２℃に冷却し、更にメタンスルホネート型
のアンバーライトＩＲＡ６８樹脂７０ｍｌに通した。デ
フェロキサミンＢメタンスルホネート塩を含んでいるイ
オン交換溶出液のフラクションを集め、濾過し、凍結乾
燥を要した。こうしてデフェロキサミンＢメタンスルホ
ネート塩１８ｇを得た。活性分含量は光度法によって決
定し、９９．４％であった。

【００２５】実施例３ 活性物質７５ｇを含む純粋なデフェロキサミンＢ塩酸塩
を４０℃で１１００ｍｌのイオン除去水に撹拌溶解す
る。その後、溶液を５℃に冷却し、カラムに詰めたメタ
ンスルホネート型のアンバーライトＩＲＡ６８アニオン
交換樹脂３００ｍｌの固定下地に流速１５０ｍｌ／時で
移した。イオン交換の後、その樹脂を予め冷却しておい
たイオン除去水２００ｍｌで洗浄した。フラクションを
集め、そうして得られた溶液を繊維フリーで濾過し、凍
結乾燥した。こうしてデフェロキサミンＢメタンスルホ
ネート塩を８６ｇ得た。活性分含量は光度法によって決
定し、９９．５％であった。調製の効率は純粋な塩酸塩
に対して９７％である。

【００２６】実施例４ 実施例１に従って得られた６００ｇの粗デフェロキサミ
ン塩酸塩を５℃で２０％塩化アンモニウム９９０ｍｌを
用いて懸濁する。懸濁液は２４時間同温度に保たれ、そ
して濾過される。こうして得られたヌッチェ上の湿った
生成物を６０℃で１３００ｍｌのイオン除去水に溶解し
た。完全に溶解した後、溶液を５℃に冷却し、分離した
物質を４８時間で濾過した。こうして得られた湿ったデ
フェロキサミンＢ塩酸塩を４５℃で水とメタノール１：
３の混合液２０００ｍｌを用いて溶解し、更に−１０℃
に冷却する。分離した生成物を２４時間で濾過し、真空
乾燥器で乾燥した。こうして純粋なデフェロキサミンＢ
塩酸塩１９５ｇを得た。活性分含量は光度法によって決
定し、９９．６％であった。

【００２７】実施例５ 発酵液２５ｋｇを１Ｍ塩酸塩を用いてｐＨ値６．０と
６．３の間に調整し、その発酵液を濾過した。濾液を３
ｌのレワタイトＣＮＰ８０樹脂に流速４．５ｌ／時で通
した。イオン交換の後、樹脂を６ｌのイオン除去水で洗
浄した。活性分を０．２Ｍ塩酸で溶出した。こうして得
られた３０ｌの溶出液をｐＨ値５．０と５．２の間に調
整し、５００ｍｌに濃縮した。濃縮物に５００ｍｌのメ
タノールと３０ｇの塩化アンモニウムを撹拌しながら加
えた。その混合物を０℃に冷却し２４時間静止させた。
濾過および乾燥後活性分５９ｇを含んでいる粗生成物を
得た。

【００２８】実施例６ 発酵液の濾液５ｋｇに含まれる活性分を、水素型のアン
バーライトＩＲＣ５０樹脂５５０ｍｌに結合させ、その
後０．５Ｍのアンモニア溶液で溶出した。活性溶出液
（１．４ｌ）を希硫酸溶液でｐＨ値５．５と５．７の間
に調整し、その溶出液を１００ｍｌまで濃縮し、更に５
℃に撹拌冷却した。混合物を２４時間静止させ、分離し
た生成物を濾過し、乾燥した。こうして粗デフェロキサ
ミン硫酸塩１４．４ｇを純度６６％で得た。粗生成物か
ら純粋なデフェロキサミン硫酸塩を、塩析が硫酸アンモ
ニウムで行われたという違いはがあるが、実施例４に明
記した方法に従って調製した。デフェロキサミン硫酸塩
を実施例３で明記した方法に従って純粋なデフェロキサ
ミンＢメタンスルホネート塩６．５ｇに転化した。活性
分含量は光度法によって決定し、９９．４％であった。

フロントページの続き (72)発明者 ヴィルモス・ケーリ ハンガリー、ハー−4028デブレツェン、 ケメーニュ・ジェー・ウート７番 (72)発明者 ヤーノス・バーリント ハンガリー、ハー−4032デブレツェン、 ペーチ・ウート５番 (72)発明者 アンタル・コヴァーチェ ハンガリー、ハー−4031デブレツェン、 ハドハージ・ウート72番 (72)発明者 ユディト・シラージ ハンガリー、ハー−4031デブレツェン、 トロムビタース・ウート10番 (72)発明者 シャーンドル・ホルカイ ハンガリー、ハー−4032デブレツェン、 トゥローツィ・ウート10番 (72)発明者 フェレンツ・ヴィンツィ ハンガリー、ハー−4031デブレツェン、 ヴィンツェルレール・ウート４番 (72)発明者 ラースロー・エセニュイ ハンガリー、ハー−4028デブレツェン、 ベケチュ・ウート14番 (72)発明者 チャバ・サボー ハンガリー、ハー−4027デブレツェン、 ファーイ・ア・ウート21番 (72)発明者 ヤーノス・エルデーリュイ ハンガリー、ハー−4034デブレツェン、 フェーレジハージ・ウート９番 (72)発明者 ネルリ・シャス ハンガリー、ハー−4027デブレツェン、 イボイア・ウート16番 (72)発明者 イローナ・ヒメジ ハンガリー、ハー−4031デブレツェン、 デレーク・ウート67番 (56)参考文献 特開 平３−34964（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07C 259/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (11)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 活性分としてデフェロキサミンＢを含有
   する発酵濾液から、当該活性分をイオン交換樹脂に吸着
   せしめ、次いで当該活性分を溶出、精製することによ
   り、デフェロキサミン塩を高純度で調製するに当たり、
   デフェロキサミン塩の分離をその水性溶液からの塩析に
   よって行うことを特徴とする、デフェロキサミン塩の製
   造法。
2. 【請求項２】 溶出液をデフェロキサミン塩の分離のた
   めの塩析に付するに先立って、当該溶出液を濃縮するこ
   とを特徴とする請求項１記載の製造法。
3. 【請求項３】 塩析を行う際の水性溶液の媒質が水であ
   る請求項１または２記載の製造法。
4. 【請求項４】 塩析を行う際の水性溶液の媒質が水と有
   機溶媒の混合物である請求項１または２記載の製造法。
5. 【請求項５】 塩析により分離されたデフェロキサミン
   塩をさらに塩析またはその他の精製手段により精製する
   ことを特徴とする請求項１または２記載の製造法。
6. 【請求項６】 塩析により分離されたデフェロキサミン
   塩をデフェロキサミンのメタンスルホネート塩として取
   得するか、デフェロキサミンのメタンスルホネート塩に
   変換する請求項１または２記載の製造法。
7. 【請求項７】 デフェロキサミンのメタンスルホネート
   塩に変換するに当たり、デフェロキサミン塩の水溶液を
   対イオンとしてメタンスルホン酸アニオンを含むイオン
   交換樹脂と処理することを特徴とする請求項１または２
   記載の製造法。
8. 【請求項８】 イオン交換前に、濾液のｐＨを緩衝液を
   用いて５から８の間に保つことを特徴とする請求項１記
   載の製造法。
9. 【請求項９】 ０．０５から１．５Ｍのアンモニアある
   いは水酸化ナトリウム溶液で溶出させることを特徴とす
   る請求項１または２記載の製造法。
10. 【請求項１０】 水とメタノール、水とエタノール、あ
    るいは水とアセトンのような水と有機溶媒の混合物を用
    いて塩析するために使用することを特徴とする請求項１
    ないし３のいずれかに記載の製造法。
11. 【請求項１１】 温度２５℃以下でイオン交換法により
    メタンスルホネート塩を形成させることを特徴とする請
    求項１ないし４のいずれかに記載の製造法。