FI98703C - Menetelmä hirudiinijohdannaisen valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä hirudiinijohdannaisen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI98703C FI98703C FI892686A FI892686A FI98703C FI 98703 C FI98703 C FI 98703C FI 892686 A FI892686 A FI 892686A FI 892686 A FI892686 A FI 892686A FI 98703 C FI98703 C FI 98703C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- hirudin
- gly
- glu
- cys
- thr
- Prior art date
Links
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 6
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 8
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- -1 for example Chemical class 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- VJZRBVVLWLEXBB-VROPFNGYSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VJZRBVVLWLEXBB-VROPFNGYSA-N 0.000 description 1
- 101100313763 Arabidopsis thaliana TIM22-2 gene Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-M periodate Chemical compound [O-]I(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/10—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
Description
98703
Menetelmä hirudiinijohdannaisen valmistamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä hirudiini-johdannaisen valmistamiseksi, joka on muodostunut hirudiinista 5 tai sen fysiologisesti siedettävästä suolasta ja dekst-raanista, Sepharosesta tai polyetyleeniglykolista kantajana. Keksinnön mukaisesti valmistetuilla hirudiinijohdannaisilla on hidastunut vaikutus.
Hirudiinit ovat esim. tunnettuja julkaisuista EP-A 10 142 860, EP-A 158 564, EP-A 158 986, EP-A 168 342, EP-A
171 024, EP-A 193 175, EP-A 200 655, EP-A 209 061, EP-A 227 938, DE 3 445 517 AI, DE 3 805 540.6 ja Chang, FEBS,
Bd. 164 (1983) 307. Chang osoitti mm., että C-terminaali-set lyhennykset haittaavat voimakkaasti hirudiinin anti-15 tromboottista vaikutusta. Myös hirudiinien merkitystä an-tikoagulaatioterapiaan kuvattiin riittävästi [esim. P. Walsmann ja F. Markwardt; Pharmazie, 36 (1981) 653]. Siten se inhiboi spesifisesti trombiinia, mutta on muuten farmakologisesti tehoton, tämä tarkoittaa, että ei-toivottuja 20 sivuvaikutuksia ei ole tähän mennessä osoitettu.
Haittapuolena lääketieteelliselle käytölle verisuonitukoksen ennakkotorjunnassa voidaan kuitenkin pitää suhteellisen lyhyttä hirudiinin pysymistä eläin- tai ihmiskehossa [Richter et ai., Haematol. 115 (1988) 64; Markwardt ' 1. 25 et ai., Pharmazie 43 (1988) 202].
'l\ Keksinnön tehtävänä onkin siten löytää uusia hiru- • · · ’· diini johdannaisia, joilla on pidempi puoliintumisaika tai joiden eliminaatio on vähäistä.
• · ·.1.· Tämä tehtävä ratkaistaan yllättäen hirudiinijohdan- 30 naisilla, jotka ovat muodostuneet hirudiinistä tai sen fysiologisesti hyväksyttävästä suolasta ja kantajasta.
;1j1; Hirudiineinä tulevat kysymykseen esimerkiksi sivul- la 1 lainatuissa kirjallisuuskohdissa kuvatut yhdisteet, erityisesti julkaisuissa EP-A 171 024, EP-A 158 986, EP-A 35 209 061 ja DE 3 805 540.6 kuvatut yhdisteet, kuten esim.
2 98703 0 1 10 Leu-Thr-Tyr-Thr-Asp-Cys-Thr-Glu-Ser-Gly-Gin-Asn-Leu-Cys- 20 ^ Leu-Cys-Glu-Gly-Ser-Asn-Val-Cys-Gly-Gln-Gly-Asn-Lys-Cys- 30 40
Ile-Leu-Gly-Ser-Asp-Gly-Glu-Lys-Asn-Gin-Cys-Val-Thr-Gly- 50
Glu-Gly-Thr-Pro-Lys-Pro-Gin-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp-Phe-10 60
Glu-Glu-lie-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gin.
Näitä hirudiinejä voidaan valmistaa asiantuntijalle yleisesti tunnettujen peptidikemian menetelmien mukaan, 15 ks. esim. Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, nidos 15/2, edullisesti kiinteäfaasisynteesin avulla, kuten esim. B. Merifield, J. Am. Chem. Soc. 85, 2149 (1963) tai R.C. Sheppard, Int. J. Peptide Protein res. 21, 118 (1983) kuvaavat tai vastaavien tunnettujen menetelmien 20 mukaan. Vaihtoehtoisesti voi asiantuntija saada mainittuja hirudiinejä tunnetuin geeniteknisin menetelmin.
Lisäksi tulevat seuraavat geeniteknologisin menetelmin muutetut hirudiinit kysymykseen. Edullisesti sellaiset, jolloin esim. kaksi sekvenssissä luonnollisesti ' I 25 olevasta kolmesta lysiinistä on korvattu luonnollisella aminohapolla, edullisesti Asg:llä, Asn:llä. Myös sellaiset I · · *· '· hirudiinit, jotka on muutettu suunnatulla N- (edullisesti • · · 1
Lys) tai C-terminaalisella (edullisesti Met) pidennyksel- • ♦ v.; lä. N-terminaalisessa pidennyksessä ovat sekvenssin kulus- 30 sa esiintulevat lysiinit korvattu toisella luonnollisella aminohapolla, edullisesti Asntllä, Argsllä.
Kantajina käytetään liukoisia kantajia, erityisesti polysakkarideja, kuten esim. dekstraania (MW 20 000 -75 000 dt) - edullisesti dekstraania (MW 70 000 dt) - tai 35 polyetyleeniglykolia (MW 1 500 - 15 000 dt) tai liukene- 3 98703 mattomia kantajia, kuten esim. Sepharoset, esimerkiksi CH-Sepharose 4B (Fa. Pharmacia), jotka kaikki on aktivoitu tunnettujen menetelmien mukaan, kuitenkin erityisesti käytetään dekstraania.
5 Hirudiinin suhde kantajaan voi vaihdella suuresti hirudiinijohdannaisissa. Se riippuu kantajan luonteesta ja reaktio-olosuhteista.
Keksintö käsittää menetelmän hirudiinijohdannaisen valmistamiseksi, jolle menetelmälle on tunnusomaista se, 10 mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään. Hirudiini siirretään aktiiviselle kantajalle lämpötilassa 0-25 eC, edullisesti 4 eC:ssa.
Keksinnön mukaisesti valmistetut hirudiinijohdannaiset ovat arvokkaita trombiini-inhibiittoreita, jotka 15 ovat erityisen hyviä siinä, että niillä on pidentynyt puoliintumisaika, mikä taas puolestaan mahdollistaa laajan käytön esim. verisuonitukoksen ennakkotorjunnassa.
Siten hirudiinejä ja hirudiinijohdannaisia käytetään esimerkiksi edullisesti sydänläppien (esim. teko-20 aine), keinotekoisten suonten, biokompatiibeleiden lääketieteellisten laitteiden, katetrien tai suodattimien, membraanien ja sellaisten materiaalien kuin esim. tavallisten hemidialyysilaitteiden keramiikan pintakerroksissa. Määritettäessä ja osoitettaessa tärkeitä veren komponent-'· 25 teja, on ongelmana, että tutkittava veri täytyy esikäsi- *·*·' teliä. Tämä voi tuoda mukanaan ongelmia sellaisten testien • · paikkansapitävyydelle. Koeputket, jotka on peitetty hiru-: diinillä, avaavat asiantuntijalle uusia mahdollisuuksia.
« · - Hirudiinilla ja hirudiini-johdannaisilla on lisäksi 30 käyttöä siirrännäisissä, joita käytetään mm. vaikutusai-neen hidastuneeseen vapauttamiseen, esim. osmoottiset mi-.·:*. nipumput, biologisesti hajotettavat mikrokapselit, sauvat, liposomivalmisteet.
Keksinnön mukaisesti valmistetut hirudiini-johdan-35 naiset osoittavat, että hirudiini on mahdollista saattaa 4 98703 reagoimaan suurimolekulaarisen kantajamateriaalin kanssa, jolloin yllättäen hirudiiniaktiivisuus säilyy. Hirudiinin farmakokineettinen käyttäytyminen muuttuu edullisesti. Kun injisoidaan hirudiinia ja dekstraani-hirudiinia vertaile-5 vassa kokeessa rottiin ja mitataan plasmakonsentraatio trombiiniestotestin avulla, niin on tunnin kuluttua mitattavissa n. 10-kertaisesti pienemmällä dekstraani-hiru-diinimäärällä trombiiniesto. Eräs lisäetu on yllättäen puoliintumisajan pidentymisessä. Se on dekstraani-hiru-10 diinilla 6-7 tuntia, kun se hirudiinilla on 1 - 2 tuntia (Markwardt et ai. Pharmazie 43 (1988) 202).
Seuraavien esimerkkien, joissa käytetään saksalaisessa patenttihakemuksessa 3 805 540.6 kuvattua isohiru-diinia ("Leu-Thr-hirudiini"), pitäisi valaista keksintöä, 15 kuitenkin niin ettei sitä rajoiteta. Asiantuntija on täysin perillä siitä, että kaikki tunnetut hirudiinit voidaan muuntaa samanarvoisiksi käytetyn hirudiinin kanssa kantajan avulla ja myös sivulla 2 kuvatut hirudiinit. Tällöin voivat olosuhteet yksittäisille reaktioille vaihdella.
20 Esimerkki 1
Hirudiinin valmistaminen
Hirudiinin synteesi tapahtuu esimerkiksi hiivasoluissa, jotka saksalaisen patenttihakemuksen P 3 805 540.6 (HOE 88/F 043) mukaan erittävät hirudiinia. Sen jälkeen ! 25 hirudiini rikastetaan HP20-pylväskromatografiässä (saksa- * *. lainen patenttihakemus P 3 738 541.0; HOE 87/F 337). Dia- « · · ’· '· lyysin jälkeen ja sitä seuraavan affiniteettikromatogra- ’·’ * fian Trombin-Seharose'ssa jälkeen (Walsmann, P.: Pharmazie
• C
v.* 36 (1981) 860 - 861) tapahtuu lopullinen puhdistaminen 30 käänteisfaasi-HPLC:ssä.
Synteesi voi tapahtua myös muiden tunnettujen gee-niteknisten tai peptidikemian menetelmien avulla.
5 98703
Esimerkki 2
Hirudiinin käyttäminen ja sen jälkeinen trombiini-estotesti
Naaras- ja koiras-Wistar-rottia, joiden kehonpaino 5 on noin 300 g, tainnutetaan etyyliuretaanilla (1,5 g/ kg i.p.)· Rottiin laitetaan i.v. 1 000 AT-U/kg hirudiini-joh-dannaista tai autenttista "Leu-Thr-hirudiinia", joka on liuotettu fysiologiseen keittosuolaliuokseen. Verenottoa varten istutetaan eläimiin katetri päänvaltimoon. Anti-10 trombiiniaktiivisuuden määrittämiseksi otetaan eläimistä verta ja käsitellään sitraatilla. 0,1 ml siten käsiteltyä verta sekoitetaan 0,2 ml:n kanssa Tris/HCl-puskuria (0,1 mol/1; pH 7,4) ja esi-inkuboidaan 37 eC:ssa. Sen jälkeen, kun on lisätty 0,1 ml trombiiniliuosta (10 NIH-U/ml), mää-15 ritetään hyytymisaika koagulaatiomittarin avulla Schnit-gerin ja Grossin mukaan. Kokeen kanssa rinnakkain tehdään kalibrointikäyrä referenssiplasmalla, ja luetaan kulloinenkin plasma-hirudiini- tai plasma-hirudiini-johdan-nainen-konsentraatio käyrältä.
20 Esimerkki 3
Dekstraani-hirudiini "Leu-Thr-hirudiinin" kytkeminen dekstraaniin (MW 70 000 dt) tapahtuu Parikh, J. et ai. menetelmän mukaan, ··, Meth. Enzymol 34 (1974) 77. Sitä varten aktivoidaan deks- 25 traani käsittelemällä meta-perjodaatilla 4 *C:ssa ja sen * *. jälkeen dialysoidaan ja lyofilisoidaan. 2 g aktivoitua • · · *· ” dekstraania liuotetaan sitten 285 ml:aan 0,1 mol/1 nat- riumfosfaattipuskuriin (pH 8,8) huoneenlämpötilassa, jääh- :.v dytetään liuos 4 eC:een, lisätään 20 mg hirudiinia ja in- 30 kuboidaan 14 tuntia 4 *C:ssa. Sen jälkeen erotetaan 75 ml :*·.. ja lyofilisoidaan. Sen jälkeen, kun on poistettu pienimo- #· ® : ·': lekulaariset puskurisuolat geelisuodatuksella (Sephadex G-25, 1 cm x 100 cm), lyofilisoidaan liuos uudelleen.
Reaktio tapahtuu ainakin yhden kolmesta lysiinistä ja ak-35 tivoidun dekstraanin välillä.
6 98703
Muodostuneen Schiffschen emäksen pelkistämiseksi lisätään 75 mg NaBH«:ää 75 ml:aan inkuboitua liuosta, sekoitetaan 40 minuuttia 4 *C:ssa ja sen jälkeen dialysoi-daan liuosta vettä vastaan 24 tuntia 4 *C:ssa (membraani: 5 Servapor Dialysis Lubing; läpimitta 10 mm, Fa. Serva Feinbiochemica GmbH Heidelberg). Sitten geelisuodatus Sep-hadex® G-25:ssä ja lyofilisaatio. Dekstraani-hirudiini puhdistetaanThrombin-Sepharose-affiniteettikromatografian avulla vastaavasti kuin esimerkissä 1. Dekstraani-hirudii-10 ni-aktiviteetin määritys tapahtuu Griesbach et ai. menetelmän mukaan (Thromb. Res. 37 (1985) 347 - 350). Tällöin mitataan trombiinin katalysoiman Chromozym TH:n pilkkomisen esto. Sovitettuna molaariselle pohjalle vastaa mitattu aktiivisuus hirudiinin aktiivisuutta. Näin puhdistettu 15 dekstraani-hirudiini laitetaan esimerkin 2 mukaan wistar-rottiin i.v. Tunnin kuluttua löydetään rottien plasmasta havaittava konsentraatio. Tätä voidaan kuvata vertailutes-tissä vain n. 10-kertaisesti suuremmalla hirudiiniannok-sella. Jos seurataan plasman hirudiinikonsentraatiota 20 edelleen, niin havaitaan aineen poistumiselle 6-7 tunnin puoliintumisaika. Tämä on selvä pidentyminen verrattuna hirudiineihin (1-3 tuntia). Käytetyt koe-eläimet eivät osoita käyttäytymisessään häiriötä.
i Esimerkki 4 25 Sepharose-hirudiini 8 mg hirudiinia liuotetaan 2 ml:aan 0,1 M NaHC03:a « · · *· ” ja 0,5 M NaCl:a pH = 8,0:ssa. 400 mg aktivoitua CH- • · · * Sepharose 4 B:tä (Pharmacia) turvotetaan valmistajan oh- • · *.v jeiden mukaan. Sitten lisätään proteiiniliuos kantajan
30 päälle ja annetaan seistä 1,5 tuntia 23 *C:ssa. Sen jäl-keen imetään ja annetaan immobi li saatin seistä jäljelle jääneiden sitomisryhmien inaktivoimiseksi 1 tunti 0,1 M
♦ TRlS:ssa, pH = 8,0. Sen jälkeen pestään kantaja valmistajan ohjeiden mukaan.
7 98703
Proteiini-kytkeytymissaanto on 5 %. Biologinen aktiivisuus määritetään nitrossa esimerkin 2 mukaan. Käsitellystä plasmasta eristetään Sepharose-hirudiini, pestään 1 - 1,5 M NaCl-liuoksella ja tehdään estotesti uudelleen.
5 Mitattu aktiivisuus on 1. mittauksen virherajojen sisäpuolella.
• · • · • · · • · · « · • · 4 « « · • · · *.v m # 9 · • ·« • « · • · · • ♦ · I · · • ·
Claims (4)
- 98703
- 1. Menetelmä hirudiini-johdannaisen valmistamiseksi, joka on muodostunut hirudiinista tai sen fysiologises-5 ti siedettävästä suolasta ja dekstraanista, Sepharosesta tai polyetyleeniglykolista kantajana, tunnettu siitä, että hirudiini saatetaan reagoimaan aktivoidun kantajan kanssa lämpötilassa 0-25 °C, jotta kantaja sitoutuu kovalenttisesti.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hirudiini on 0 1 10 Leu-Thr-Tyr-Thr-Asp-Cys-Thr-Glu-Ser-Gly-Gin-Asn-Leu-Cys- 20
- 15 Leu- Cys-Glu-Gly-Ser-Asn-Val-Cys-Gly-Gln-Gly-Asn-Lye-Cys- 30 40 I1e-Leu-Gly-Ser-Asp-Gly-Glu-Lys-Asn-Gin-Cys-Vai-Thr-Gly- 50 Glu-Gly-Thr-Pro-Lys-Pro-Gln-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp-Phe- 20 60 Glu-Glu- Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gin tai sen fysiologisesti siedettävä suola. k • · * 9 9 9· • · ♦ e · M I i : : • 4 i : . t 9 98703
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI935707A FI104232B (fi) | 1988-06-04 | 1993-12-17 | Hirudiinijohdannaisten käyttö trombiini-inhibiittoreina |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3819079A DE3819079A1 (de) | 1988-06-04 | 1988-06-04 | Hirudin-derivate mit verzoegerter wirkung |
| DE3819079 | 1988-06-04 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI892686A0 FI892686A0 (fi) | 1989-06-01 |
| FI892686L FI892686L (fi) | 1989-12-05 |
| FI98703B FI98703B (fi) | 1997-04-30 |
| FI98703C true FI98703C (fi) | 1997-08-11 |
Family
ID=6355879
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI892686A FI98703C (fi) | 1988-06-04 | 1989-06-01 | Menetelmä hirudiinijohdannaisen valmistamiseksi |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5538946A (fi) |
| EP (1) | EP0345616B1 (fi) |
| JP (1) | JP2804514B2 (fi) |
| KR (1) | KR0140884B1 (fi) |
| AT (1) | ATE130315T1 (fi) |
| AU (1) | AU625215B2 (fi) |
| CA (1) | CA1340197C (fi) |
| CY (1) | CY2025A (fi) |
| DE (2) | DE3819079A1 (fi) |
| DK (1) | DK175103B1 (fi) |
| ES (1) | ES2080732T3 (fi) |
| FI (1) | FI98703C (fi) |
| GR (1) | GR3018364T3 (fi) |
| HK (1) | HK1006024A1 (fi) |
| HU (1) | HU204851B (fi) |
| IE (1) | IE72201B1 (fi) |
| IL (1) | IL90507A0 (fi) |
| NO (1) | NO177312C (fi) |
| NZ (1) | NZ229402A (fi) |
| PT (1) | PT90743B (fi) |
| ZA (1) | ZA894180B (fi) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2000887A1 (en) * | 1988-11-01 | 1990-05-01 | Cecilia S.L. Ku | Thromboresistant materials and methods for making same |
| EP0502962B1 (de) * | 1989-12-01 | 1996-03-13 | BASF Aktiengesellschaft | Hirudin-Muteine und deren Polyalkylenglykolkonjugate |
| JP2975632B2 (ja) * | 1990-03-30 | 1999-11-10 | 生化学工業株式会社 | グリコサミノグリカン修飾プロテイン |
| GB2247239A (en) * | 1990-08-22 | 1992-02-26 | Ciba Geigy Ag | Hirudin conjugates with polyoxyethylene |
| DE4041185A1 (de) * | 1990-12-21 | 1992-06-25 | Knoll Ag | Verwendung von hirudin und dessen muteinen zur kombinationsbehandlung von tumoren |
| DE4437502A1 (de) * | 1993-12-02 | 1995-06-08 | Basf Ag | Hirudin-Konjugate aus Hirudin und lipophilen Verbindungen |
| DE4342154A1 (de) * | 1993-12-10 | 1995-06-14 | Behringwerke Ag | Amidinophenylalaninderivate, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und diese enthaltende Mittel als Antikoagulantien |
| DE4404168A1 (de) * | 1994-02-10 | 1995-08-17 | Hoechst Ag | Hirudinderivate und Verfahren zu deren Herstellung |
| DE19533817C2 (de) * | 1995-09-13 | 1999-12-09 | Max Planck Gesellschaft | Komplex-gebundene Hemmstoffe aktivierbarer Stoffwechselenzyme als molekulare Marker zur Diagnostik und Therapieüberwachung |
| US6562781B1 (en) | 1995-11-30 | 2003-05-13 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates |
| US6491965B1 (en) | 1995-11-30 | 2002-12-10 | Hamilton Civic Hospitals Research Development, Inc. | Medical device comprising glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates |
| US7045585B2 (en) | 1995-11-30 | 2006-05-16 | Hamilton Civic Hospital Research Development Inc. | Methods of coating a device using anti-thrombin heparin |
| US5856452A (en) | 1996-12-16 | 1999-01-05 | Sembiosys Genetics Inc. | Oil bodies and associated proteins as affinity matrices |
| DE19915862A1 (de) * | 1999-04-08 | 2000-10-12 | Max Planck Gesellschaft | Verwendung von molekulargewichtserweitertem Hirudin als Antikoagulans bei der extrakorporalen Nierenersatztherapie |
| US6809076B2 (en) * | 2000-03-20 | 2004-10-26 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Use of anticoagulant agents in the extracorporeal treatment of blood |
| US6818392B2 (en) | 2000-12-06 | 2004-11-16 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus and uses thereof |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1979000638A1 (en) * | 1978-02-17 | 1979-09-06 | Thin Conductive Coating Oester | A method of producing thrombosis-resistant surfaces |
| DE2930542A1 (de) * | 1979-07-27 | 1981-02-12 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate und verfahren zu ihrer herstellung |
| CA1341417C (fr) * | 1984-03-27 | 2003-01-21 | Paul Tolstoshev | Vecteurs d'expression de l'hirudine, cellules transformees et procede de preparation de l'hirudine |
| US4666884A (en) * | 1984-04-10 | 1987-05-19 | New England Deaconess Hospital | Method of inhibiting binding of von Willebrand factor to human platelets and inducing interaction of platelets with vessel walls |
| DE3438296A1 (de) * | 1984-04-18 | 1985-11-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue polypeptide mit blutgerinnungshemmender wirkung, verfahren zu deren herstellung bzw. gewinnung, deren verwendung und diese enthaltende mittel |
| EP0168342B1 (de) * | 1984-06-14 | 1991-07-03 | Ciba-Geigy Ag | Verfahren zur Herstellung von Thrombin-Inhibitoren |
| DE3429430A1 (de) * | 1984-08-10 | 1986-02-20 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von hirudin und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
| DE3500268A1 (de) * | 1985-01-05 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Praeparate mit verzoegerter wirkung, verfahren zu deren herstellung sowie entsprechende mittel zur human- bzw. veterinaermedizinischen anwendung |
| DE3506992A1 (de) * | 1985-02-27 | 1986-08-28 | Plantorgan Werk Heinrich G.E. Christensen, KG, 2903 Bad Zwischenahn | Modifizierte hirudine, verfahren zu deren herstellung und pharmazeutische mittel, die diese wirkstoffe enthalten |
| FR2593518B1 (fr) * | 1985-05-02 | 1989-09-08 | Transgene Sa | Vecteurs d'expression et de secretion de l'hirudine par les levures transformees |
| DE3689525D1 (de) * | 1985-07-17 | 1994-02-24 | Hoechst Ag | Neue Polypeptide mit blutgerinnungshemmender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung bzw. Gewinnung, deren Verwendung und diese enthaltende Mittel. |
| DE3541856A1 (de) * | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Hoechst Ag | Eukaryotische fusionsproteine, ihre herstellung und verwendung sowie mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
-
1988
- 1988-06-04 DE DE3819079A patent/DE3819079A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-05-30 EP EP89109772A patent/EP0345616B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-30 DE DE58909493T patent/DE58909493D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-30 AT AT89109772T patent/ATE130315T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-05-30 ES ES89109772T patent/ES2080732T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-01 HU HU892808A patent/HU204851B/hu unknown
- 1989-06-01 AU AU35955/89A patent/AU625215B2/en not_active Expired
- 1989-06-01 FI FI892686A patent/FI98703C/fi active IP Right Grant
- 1989-06-02 IL IL90507A patent/IL90507A0/xx unknown
- 1989-06-02 KR KR1019890007560A patent/KR0140884B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-02 ZA ZA894180A patent/ZA894180B/xx unknown
- 1989-06-02 DK DK198902707A patent/DK175103B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-06-02 NZ NZ229402A patent/NZ229402A/en unknown
- 1989-06-02 JP JP1139378A patent/JP2804514B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-02 NO NO892267A patent/NO177312C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-06-02 PT PT90743A patent/PT90743B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-06-02 CA CA000601593A patent/CA1340197C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-12 IE IE181589A patent/IE72201B1/en not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-05 US US07/895,436 patent/US5538946A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-12-12 GR GR950403492T patent/GR3018364T3/el unknown
-
1998
- 1998-02-20 CY CY202598A patent/CY2025A/xx unknown
- 1998-06-11 HK HK98105201A patent/HK1006024A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI98703C (fi) | Menetelmä hirudiinijohdannaisen valmistamiseksi | |
| FI102183B (fi) | Menetelmä uusien trombiini-inhibiittoreiden valmistamiseksi | |
| FI120348B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen trombiini-inhibiittorin valmistamiseksi | |
| KR100380124B1 (ko) | 인자Xa억제제 | |
| JP4537581B2 (ja) | ＶＩＩａ因子阻害剤 | |
| US5256559A (en) | Methods and compositions for inhibiting platelet aggregation | |
| JPS62501011A (ja) | ヒルディン−ｐａとその誘導体、それらの製造法と応用 | |
| JP2000501082A (ja) | グリコサミノグリカン―アンチトロンビンｉｉｉ／ヘパリン補因子ｉｉ結合体 | |
| EP0372670A2 (en) | Hirudin peptides for inhibiting platelet aggregation | |
| WO1990003391A1 (en) | Hirudin peptides | |
| NZ337639A (en) | Hybrid dendroaspin based polypeptide comprising RGD motif and further amino acid sequence, preparation, pharmaceutical composition comprising it | |
| Markwardt | The comeback of hirudin as an antithrombotic agent | |
| FI104232B (fi) | Hirudiinijohdannaisten käyttö trombiini-inhibiittoreina | |
| KR100330465B1 (ko) | 삼관능성항트롬빈및항혈소판펩티드 | |
| US5786330A (en) | Peptide compounds which are therapeutically active in the cascade of blood coagulation, process for preparing them and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP3333177A1 (en) | Multi-target compound with anticoagulation and antiplatelet activity, preparation method therefor, and use thereof | |
| WO2002076965A1 (en) | Non peptide mimetics based on the active sequence s42fllr46 of the thrombin receptor for the treatment of thrombosis and cancer | |
| BG61670B2 (bg) | Инхибитори на тромбина |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: AVENTIS PHARMA DEUTSCHLAND GMBH |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH Free format text: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH |