[go: up one dir, main page]

ES2999332T3 - Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate - Google Patents

Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate Download PDF

Info

Publication number
ES2999332T3
ES2999332T3 ES19196538T ES19196538T ES2999332T3 ES 2999332 T3 ES2999332 T3 ES 2999332T3 ES 19196538 T ES19196538 T ES 19196538T ES 19196538 T ES19196538 T ES 19196538T ES 2999332 T3 ES2999332 T3 ES 2999332T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
seq
peptide
cell
conjugate
contrast agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES19196538T
Other languages
English (en)
Inventor
Sang Jae Kim
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GemVax and Kael Co Ltd
Original Assignee
GemVax and Kael Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GemVax and Kael Co Ltd filed Critical GemVax and Kael Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2999332T3 publication Critical patent/ES2999332T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12N9/1276—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. reverse transcriptase or telomerase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/175—Amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/0817—Tripeptides with the first amino acid being basic the first amino acid being Arg
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C07K5/0823—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Pro-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1013—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1021—Tetrapeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07049—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. telomerase or reverse-transcriptase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Se describen un péptido que penetra en las células, un conjugado que es un ingrediente activo y un uso del mismo. Más específicamente, se describen el péptido que penetra en las células que tiene una secuencia de entre SEQ ID NO. 2 a SEQ ID NO. 178, un conjugado que comprende un péptido que es un fragmento de una secuencia de entre SEQ ID NO. 2 a SEQ ID NO. 178 o un péptido que tiene una secuencia que es al menos 80% homóloga con la secuencia del péptido, y una composición que comprende el conjugado. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado
Campo de la invención
La presente invención se refiere a péptidos de penetración celular derivados de la enzima telomerasa transcriptasa inversa humana (hTERT), a conjugados de los péptidos de penetración celular, a principios activos y a composiciones que comprenden el conjugado.
Antecedentes
Aunque las sustancias de bajo peso molecular, ácidos nucleicos, proteínas, nanopartículas, etc., tienen grandes potenciales como sustancias terapéuticas a nivel molecular, sus usos son limitados debido a la incompetencia para penetrar en los tejidos y la membrana celular. El desarrollo de un sistema para suministrar tales sustancias a la célula ha sido el área activa de investigación en las últimas dos décadas. El transporte de las sustancias dentro de la célula ha sido un tema de conversación en un tratamiento de procedimiento molecular. Las sustancias de bajo peso molecular, los ácidos nucleicos o las nanopartículas se transportaron dentro de la célula por varios reactivos, electroporación o choque térmico. Sin embargo, fue difícil encontrar un procedimiento adecuado de suministro de proteínas dentro de la célula sin interrumpir la actividad y la integridad de las proteínas. En la década de 1980, en la investigación realizada sobre el estudio de la capacidad de penetración celular del VIH, se descubrió que la proteína VIH-TAT que consiste en 11 aminoácidos específicos juega un papel importante en un proceso de transporte dentro de la célula. Por lo tanto, en la década de 1990, los estudios sobre cómo encontrar el procedimiento correcto para transportar proteínas dentro de la célula han sido el área intensa de investigación.
Se sabe que un telómero es una secuencia repetitiva de material genético encontrado en los extremos de cromosomas que evita que los cromosomas se dañen o se unan a otros cromosomas. La longitud del telómero se acorta en cada división celular y, después de un determinado número de divisiones celulares, la longitud del telómero se acorta extremadamente en la medida que la célula deja de dividirse y muere. Por otro lado, se sabe que el alargamiento de los telómeros amplía el lapso de vida de una célula. Por ejemplo, las células cancerosas excretan una enzima denominada telomerasa, que evita el acortamiento de los telómeros, dando como resultado de esta manera la proliferación de células cancerosas.
Los documentos WO 00/02581 A1, WO 2017/037395 y WO 03/038047 A2 divulgan ciertos péptidos derivados de la telomerasa.
Un objeto de esta invención es proporcionar un péptido novedoso.
Un objeto de la presente invención e proporcionar un péptido novedoso.
Se desvela además en el presente documento un péptido de penetración celular.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un péptido útil como un vehículo del principio activo en una célula.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un péptido útil como un vehículo del principio activo en una célula, especialmente administrar a la mitocondria localmente.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un péptido útil para la administración del principio activo a la mitocondria para la mejora, la profilaxis o el tratamiento de enfermedad o trastorno relacionado con la mitocondria.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un conjugado que se conjugan un principio activo y un péptido de penetración celular.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición que comprende un conjugado de un principio activo y un péptido de penetración celular.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprende un conjugado de un ingrediente activo y un péptido de penetración celular.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición cosmética funcional que comprende un conjugado de un ingrediente activo y un péptido de penetración celular.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición alimenticia saludable que comprende un conjugado de un ingrediente activo y un péptido de penetración celular.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un agente de contraste que comprende un conjugado de un ingrediente activo y un péptido de penetración celular.
Sumario de la invención
En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un conjugado de un péptido transportador de penetración celular y un principio activo, en el que el péptido transportador es un péptido que comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID N<o>: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ<i>D NO: 93, 30 SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 12 1 , SEQ ID NO: 141 , SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 111 , SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127 y SEQ ID NO: 113.
En un segundo aspecto, la presente invención se refiere al uso de un conjugado según la invención para contrastar una célula, opcionalmente una célula madre.
En un tercer aspecto, la presente invención se refiere a una composición que comprende el conjugado según la invención, que es una composición farmacéutica, una composición cosmética o una composición dietética.
En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento para administrar un principio activo en una célula, que comprende administrar el conjugado o la composición según la invención a una célula in vitro.
En un quinto aspecto, la presente invención se refiere a un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos cualquiera de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141 , SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 11 2, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144 , SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127 y SEQ ID NO: 113.
En una realización del primer aspecto de la invención, el péptido portador consta de 30 o menos aminoácidos.
En otra realización del primer aspecto de la invención, el principio activo es al menos uno seleccionado de una proteína, ácido nucleico, péptido, lípido, glicol-lípido, mineral, azúcar, nanopartícula, producto biológico, agente de contraste, fármaco y compuesto químico.
En otra realización del primer aspecto de la invención, el principio activo es una proteína o un péptido, opcionalmente una citocina, un anticuerpo, un fragmento de un anticuerpo, una enzima terapéutica, un receptor soluble o un ligando.
En otra realización del primer aspecto de la invención, donde el principio activo es al menos un agente de contraste, el agente de contraste se selecciona del grupo que consiste en un agente de contraste radiopaco, un agente de contraste paramagnético, un agente de contraste superparamagnético y un agente de contraste CT.
En otra realización del primer aspecto de la invención, en la que el principio activo es al menos un agente de contraste, el agente de contraste se basa en hierro. El agente de contraste puede ser, por ejemplo, un carboxilato de ferroceno.
En otra realización del primer aspecto de la invención, el péptido portador y el principio activo se conjugan a través de un enlace covalente, opcionalmente mediado por un enlazador; o un enlace no covalente.
En una realización del primer o tercer aspecto de la invención, en la que la composición del tercer aspecto es una composición farmacéutica, el conjugado o la composición farmacéutica es para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad.
En otra realización del primer o tercer aspecto de la invención, en la que la composición del tercer aspecto es una composición farmacéutica, el conjugado o la composición farmacéutica se utiliza en un procedimiento para administrar un principio activo en una célula, que comprende administrar el conjugado a un sujeto que lo necesite, en el que el péptido portador es un péptido de penetración celular que lleva a cabo la administración del principio activo en una célula, opcionalmente localmente en las mitocondrias dentro de una célula.
Aplicabilidad industrial
Los principios activos que son difíciles de transportar dentro de una célula pueden transportarse fácilmente dentro de una célula usando el péptido o el conjugado del péptido y los principios activos, desvelados en la presente invención. Esto significa que la efectividad de los principios activos puede aumentarse y por lo tanto la dosificación puede reducirse. Como resultado, los efectos secundarios debidos a la administración de fármacos pueden minimizarse y puede aumentarse la eficacia del tratamiento. Especialmente, como se administran los fármacos localmente en las mitocondrias, pueden mejorarse las enfermedades o los trastornos relacionados con las mitocondrias y puede aumentarse la eficacia de la profilaxis y el tratamiento de enfermedades. En un caso de cosméticos, con una pequeña cantidad de principios activos, puede crear un efecto excepcional. Al conjugar un péptido con una sustancia de contraste, puede usarse como sustancia de contraste para monitorizar un procedimiento de trasplante celular o células trasplantadas en un tratamiento celular. Especialmente, puede usarse eficazmente como sustancia de contraste para las células madre inyectadas dentro de un cuerpo.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 representa e ilustra que la captación celular de los números de células de una célula HeLa tratada después de que FITC se fusionó con el péptido pep1 de SEQ: 1 y se analizó por FACS. Las células de control se trataron solo con FITC.
La Figura 2 a la Figura 29 representan e ilustran que la captación celular de los números de células de una línea celular HeLa tratada después de que FITC se fusionó con el péptido de SEQ: 2 a SEQ: 178 y se analizó por FACS. Las células de control se trataron solo con FITC.
La Figura 30 a la Figura 51 representan e ilustran que la captación celular de los números de células de una célula Hur7 tratada después de que FITC se fusionó con el péptido de SEQ: 2 a SEQ: 178 y se analizó por FACS. Las células de control se trataron solo con FITC.
La Figura 52 a la Figura 69 representan e ilustran que la captación celular de los números de células de una línea celular humana de linfocitos T (Jurkat) tratada después de que FITC se fusionó con el péptido de SEQ: 2 a SEQ: 178 y se analizó FACS. Las células de control se trataron solo con FITC.
La Figura 70 representa e ilustra que el resultado de la toxicidad y la viabilidad celular de una célula HeLa tratada después de que FITC se fusionó con el péptido pep1 de SEQ: 1 y se analizó por citometría de flujo (Citometría de flujo). Las células de control se trataron solo con FITC.
La Figura 71 a la Figura 86 representan e ilustran que el resultado de la toxicidad y la viabilidad celular de una célula HeLa tratada después de que FITC se fusionó con el péptido de SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178 y se analizó por citometría de flujo (Citometría de flujo). Las células de control se trataron solo con FITC.
Descripción detallada de la invención
Las proteínas, los ácidos nucleicos, los péptidos o los virus, etc. tienen un gran potencial para usarse como sustancias terapéuticas. Sin embargo, sus usos son limitados porque no pueden penetrar en los tejidos y la membrana celular debido a los tamaños del nivel molecular. Aunque, el tamaño de las moléculas es pequeño, no pueden penetrar la bicapa lipídica debido a la estructura o características de las moléculas. Por lo tanto, mediante el uso de electroporación, choque térmico, etc., hubo intentos de transportar proteínas, ácidos nucleicos, péptidos o virus dentro de la célula; fue difícil transferirlos sin dañar la membrana celular ni mantener los estados activos de las moléculas anteriores. Se han realizado muchos estudios ya que la proteína TAT (el activador Trans-Activador de la Transcripción) derivada del VIH (virus de inmunodeficiencia humana) ha demostrado funcionar como péptido penetrador celular que puede transportar enormes sustancias activas dentro de la célula. Específicamente, se han realizado estudios sobre sustancias que pueden transportar moléculas enormes tales como proteínas, ácidos nucleicos, péptidos o virus dentro de la célula sin provocar ninguna toxicidad, a diferencia de la proteína TAT que provoca toxicidad dentro de la célula. Por lo tanto, la presente invención se completó ya que los presentes inventores han descubierto que los péptidos derivados de la telomerasa tienen una efectividad sobresaliente como péptido de penetración celular sin una toxicidad notable.
Los péptidos se desvelan en SEQ ID NO: 1a SEQ ID NO: 178 mostrados en la Tabla 1 a la Tabla 5 a continuación. La SEQ ID NO: 179 es una secuencia de longitud completa de la proteína de la telomerasa humana. El péptido de SEQ ID NO: 1deriva de la telomerasa, en el que el péptido comprende 16 aminoácidos. Los péptidos de SEQ ID NO: 1a SEQ ID NO: 77, en los que el péptido comprende SEQ ID NO: 1. Los péptidos<de>SeQ<ID NO: 78 a SEQ ID NO: 178 son un fragmento de>SeQ<ID NO: 1. El "nombre" en la Tabla 1 a>continuación se usó para la distinción de los péptidos. Más de un péptido de los péptidos mencionados en SEQ ID NO: 1a SEQ ID NO: 6 puede comprender un "péptido sintético", un péptido sintetizado de áreas seleccionadas de la telomerasa. En la presente memoria descriptiva, el término "pep" en el presente documento se refiere a un péptido que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1o una cualquiera de las secuencias de aminoácidos entre la SEQ ID NO: 2 a la SEQ ID NO: 178 o, un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos por encima del 80 % de homología con las secuencias anteriormente mencionadas o un fragmento peptídico de los péptidos anteriormente mencionados.
[TABLA 1]
[TABLA 2]
[TABLA 3]
[TABLA 4]
[TABLA 5]
(continuación)
Un polinucleótido puede codificar un péptido que comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178, un péptido que tiene una homología superior al 80% con las secuencias mencionadas anteriormente, o un péptido que es un fragmento de los péptidos mencionados anteriormente. El polinucleótido anteriormente mencionado permite la producción de los péptidos en grandes cantidades. Por ejemplo, el cultivo de vectores que incluyen péptidos que codifican polinucleótidos permite la producción de péptidos en grandes cantidades.
Los péptidos desvelados en el presente documento pueden incluir un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos por encima del 80 %, por encima del 85 %, por encima del 90 %, por encima del 95 %, por encima del 96 %, por encima del 97 %, por encima del 98 % o por encima del 99 % de homología. Además, los péptidos desvelados en el presente documento pueden incluir un péptido que comprende una cualquiera de la secuencia de aminoácidos entre la SEQ ID NO: 2 a la SEQ ID NO: 178 o sus fragmentos y un péptido con más de 1 aminoácido transformado, más de 2 aminoácidos transformados, más de 3 aminoácidos transformados, más de 4 aminoácidos transformados, más de 5 aminoácidos transformados, más de 6 aminoácidos transformados o más de 7 aminoácidos transformados.
Los cambios en la secuencia de aminoácidos pueden pertenecer a la modificación de las características físicas y químicas del péptido. Por ejemplo, la transformación de aminoácidos puede realizarse mejorando la estabilidad térmica del péptido, alterando la especificidad del sustrato y cambiando el pH óptimo.
El término "aminoácido" en el presente documento incluye no solamente los 22 aminoácidos convencionales que se integran de forma natural en el péptido sino también los isómeros D y los aminoácidos transformados. Por lo tanto, en una realización específica de la presente invención, un péptido en el presente documento incluye un péptido que tiene D-aminoácidos. Por otro lado, un péptido puede incluir aminoácidos no convencionales tales como los que se han modificado post-traduccionalmente. Los ejemplos de modificación post-traduccional incluyen fosforilación, glucosilación, acilación (incluyendo acetilación, miristoilación, palmitoilación), alquilación, carboxilación, hidroxilación, glicación, biotinilación, ubicuitinilación, transformación en propiedades químicas (por ejemplo, desimidación por retirada de p, desamidación) y transformación estructural (por ejemplo formación de puentes disulfuros). Además, se incluyen cambios de aminoácidos y los cambios de aminoácidos se producen debido a una reacción química durante el procedimiento de combinación con reticuladores para la formación de un conjugado peptídico.
Un péptido desvelado en el presente documento puede ser un péptido de tipo silvestre que se ha identificado y aislado de fuentes naturales. Por otro lado, cuando se compara con los fragmentos peptídicos de una cualquiera de entre la secuencia amino SEQ ID NO: 2 a la SEQ ID NO: 178, los péptidos desvelados en el presente documento pueden ser mutantes artificiales que comprenden uno o más aminoácidos sustituidos, eliminados y/o insertados. La alteración de aminoácidos en el polipéptido de tipo silvestre - no solo en mutantes artificiales - comprende la sustitución conservativa de aminoácidos que no influyen en el plegamiento y o la activación de proteínas. Los ejemplos de sustitución conservativa pertenecen al grupo que consiste en aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos ácidos (ácido glutámico y ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina y asparaginas), aminoácidos hidrófobos (leucina, isoleucina, valina y metionina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptófano y tirosina) y aminoácidos pequeños (glicina, alanina, serina y treonina). Las sustituciones de aminoácidos que generalmente no alteran la actividad específica se conocen en la técnica de la presente invención. Las alteraciones más comunes producidas son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly y las alteraciones opuestas. Otro ejemplo de sustituciones conservativas se muestra en la siguiente Tabla 6.
[TABLA 6]
La transformación sustancial de las propiedades biológicas de los péptidos se realiza seleccionando una sustitución significativamente diferente en las siguientes efectividades: (a) la efectividad en el mantenimiento de la estructura del esqueleto del polipéptido en el área de sustitución, tales como láminas o estructuras helicoidales tridimensionales, (b) la efectividad en el mantenimiento de la carga eléctrica o la hidrofobicidad de la molécula en el área diana o (c) la efectividad en el mantenimiento de la mayor parte de la cadena lateral. Los restos naturales se dividen en grupos por las propiedades generales de la cadena lateral como las siguientes:
(1) hidrofobicidad: Norleucina, met, ala, val, leu, ile;
(2) hidrofilidad neutra: cys, ser, thr;
(3) acidez: asp, glu;
(4) basicidad: asn, gln, his, lys arg;
(5) resto que afecta la orientación de la cadena: gly, pro; y
(6) aromaticidad: trp, tyr, phe.
Las sustituciones no conservativas pueden realizarse intercambiando un miembro de las clases anteriores por diferentes clases. Cualquier resto de cisteína que no esté relacionado con el mantenimiento de la estructura tridimensional adecuada del péptido puede sustituirse típicamente por serina, aumentando de esta manera la estabilidad oxidativa de la molécula y evitando la reticulación inapropiada. Por el contrario, puede lograrse una mejora de la estabilidad añadiendo enlace o enlaces cisteína al péptido.
Los tipos alterados de variantes de aminoácidos de los péptidos son aquellos que cambiaron el patrón de glucosilación de anticuerpos. El término "cambio" en el presente documento se refiere a la eliminación de al menos un resto de carbohidrato que se encuentra en un péptido y/o la adición de al menos un resto glucosilado que no existe dentro de un péptido.
La glucosilación en péptidos está típicamente conectada a N o conectada a O. La expresión "conectado a N" en el presente documento se refiere a que los restos de carbohidratos están unidos a la cadena lateral de los restos de asparagina. Como secuencias de tripéptidos, asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina (en las que la X es cualquier aminoácido excepto prolina) son la secuencia de reconocimiento para unir enzimáticamente el resto de carbohidrato a la cadena lateral de la asparagina. Por lo tanto, con la presencia de una de estas secuencias de tripéptidos en un polipéptido, se crean los posibles sitios de glucosilación. "Glucosilación conectada a O" significa unir uno de azúcar N-acetilgalactosamina, galactosa o xilosa a aminoácidos de hidroxilo. Los aminoácidos de hidroxilo son más típicamente serina o treonina, pero pueden usarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina.
La adición del sitio de glucosilación a un péptido se realiza convenientemente cambiando la secuencia de aminoácidos para que contenga la secuencia de tripéptidos mencionada anteriormente (para sitios de glucosilación enlazada a N). Estos cambios pueden realizarse mediante la adición de al menos un resto de serina o treonina a la primera secuencia de anticuerpos o mediante sustitución con esos restos (para sitios de glucosilación enlazados a O).
En una realización de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un conjugado de un péptido transportador de penetración celular y un principio activo, donde el péptido actúa como un sistema de administración de fármacos para transportar más de un principio activo, donde el péptido comprende al menos al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO : 141, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEC ID NO: 112, SEC ID NO: 117, SEC ID NO: 144, SEC ID NO: 131, SEC ID NO: 142, SEC ID NO: 127, y SEQ ID NO: 113.
Un péptido que comprende cualquier secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178, un fragmento del péptido mencionado anteriormente o un péptido que tiene más del 80% de homología con la secuencia mencionada anteriormente, es seguro y tiene una eficacia sobresaliente. como péptido de penetración celular. Por lo tanto, el péptido se puede conjugar con un fármaco para transportar el fármaco al interior de la célula.
En una realización de la presente invención, un principio activo puede ser al menos uno seleccionado de proteínas, ácidos nucleicos, péptidos, lípidos, glucolípidos, minerales, azúcares, sustancias de contraste, fármacos y compuestos químicos. En una realización de la presente invención, los principios activos pueden ser péptidos. En una realización de la presente invención, los principios activos pueden ser citocinas, un anticuerpo, fragmentos de anticuerpo, enzimas terapéuticas, receptores solubles o ligandos.
Un péptido de penetración celular desvelado en el presente documento significa un péptido que puede transportar carga desdein vitroy/oin vivohacia el interior de la célula. Una "carga" desvelada en el presente documento comprende todas las sustancias que pueden transportarse dentro de la célula a través de conjugación con un péptido de penetración celular, por ejemplo, todas las sustancias que desean aumentar la efectividad de penetración celular, específicamente fármacos, cosméticos o principios activos de alimentos saludables, más específicamente sustancias que no pueden transportarse dentro de la célula por la vía general, más específicamente, azúcares, nanopartículas, formulación biológica, virus, sustancias de contraste u otros compuestos químicos que pueden tener proteínas, ácidos nucleicos, un péptido, minerales, glucosa como un ejemplo, pero no limitado a esos. Un "fármaco" desvelado en el presente documento es un concepto amplio que incluye una sustancia que se transportará para el alivio, la profilaxis, el tratamiento o el diagnóstico de enfermedades, heridas o un síntoma específico.
Un "péptido vehículo" desvelado en el presente documento es un péptido que puede transportar principios activos a un sitio diana a través de la conjugación con principios activos.
En una realización de la presente invención, la proteína o el péptido como carga comprenden uno o más de hormonas, análogo hormonal, enzima, inhibidores enzimáticos, proteínas (o péptidos) de transferencia de señal, anticuerpo y vacuna, pero no limitado a esos. En una realización de la presente invención, un ácido nucleico es una molécula que pueden ser moléculas de ADN o de ARN espontáneas o artificiales, ya sean monocatenarias o bicatenarias. La molécula de ácido nucleico puede ser una o más ácidos nucleicos del mismo tipo (por ejemplo, que tienen una misma secuencia de nucleótidos) o ácidos nucleicos de diferentes tipos. Las moléculas de ácido nucleico comprenden uno o más ADN, ADNc, ADN señuelo, ARN, ARNip, miARN ARNhp, ARNtp, ARNnop, ARNnp PNA, oligómero antisentido, plásmidos y otros ácidos nucleicos modificados, pero no limitado a esos. En una realización de la presente invención, el virus comprende el virus entero o el núcleo del virus que incluye los ácidos nucleicos del virus. En una realización de la presente invención, una sustancia química es una indicación amplia que comprende una sustancia natural o sintética que puede actuar como un fármaco.
Un fenómeno en el que la expresión de ADN específica está controlada por ARN bicatenario (ARNbc) en un procedimiento de expresión de ADN se denomina interferencia de ARN; iARN. Desde que el fenómeno se descubrió por primera vez en C. elegans en 1998, se descubrió que el fenómeno es común en las plantas, moscas de la fruta y mamíferos (Fire y col., Nature, 391:806-811, 1998; Novina y Sharp, Nature, 430:161-164, 2004).
La interferencia de ARN está mediada por ARNbc que tiene 19-25 pb que entra en las células, tras lo que se combina con RISC (complejo silenciador inducido por ARN). La unión de la cadena antisentido de ARNbc a la secuencia complementaria de ARNm desencadena la degradación del ARNm diana por la enzima endonucleasa encontrada en el complejo RISC (Rana, T. M., Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 8:23-36, 2007; Tomari, Y. y Zamore, P. D., Genes Dev., 19: 517-529, 2005). En otras palabras, el ARNip está implicado en la interferencia de ARN al suprimir la producción de proteínas específicas y por lo tanto al interferir con la expresión de ADN. El ARNip que consiste en 19-23 nucleótidos, forma un par de bases de acuerdo con el orden complementario de ARNm para el ARN mensajero específico (ARNm) para formar ARN bicatenario. Después de eso, el ARN bicatenario se desintegra especialmente al mismo tiempo que se retira el ARN mensajero de las células. El ARNip se ha destacado como una sustancia para la terapia génica porque mostró un efecto sobresaliente en la supresión de la expresión de ADN específico en estudios recientes en animales. El ARNip con activación más alta y selección precisa de ADN, se ha estudiado durante los últimos 20 años y se espera que reemplace los oligonucleótidos antisentido que actualmente se usan como remedio. Por lo tanto, muchas compañías farmacéuticas están desarrollando un remedio basado en ARNip. En comparación con los oligonucleótidos antisentido existentes, se sabe que el ARNip inhibe la expresión génica con una cantidad 10 veces menor e inhibe solamente genes diana con una selectividad sobresaliente de genes. La técnica de ARNip, especialmente para el fin del tratamiento, tiene una gran ventaja ya que puede diseñarse fácilmente en comparación con otros fármacos y tiene características tales como alta selectividad diana e inhibición de la expresión génica específica. Además, dado que la supresión de la expresión génica por interferencia de ARN utiliza el mecanismo presente de forma naturalin vivo,la toxicidad es baja. Sin embargo, el ARNip tiene la desventaja de que no puede transportarse fácilmente a una célula ya que no puede penetrar en la membrana celular ya que es aniónico y se descompone fácilmente en un corto período de tiempo debido a la baja estabilidadin vivo.Esta desventaja del ARNip puede resolverse conjugando con un péptido vehículo descrito en el presente documento.
En una realización de la presente invención, la efectividad de los principios activos, la carga, son células cancerosas, células inmunológicas o células fibroblastos. Específicamente, entre las células cancerosas comprenden una célula cancerosa cualquiera seleccionada del grupo que consiste en: células cancerosas hepáticas, células cancerosas de mama y células de leucemia, entre las células inmunológicas comprenden una célula inmunológica cualquiera seleccionada del grupo que consiste en: linfocitos T, células B y monocitos.
En una realización de la presente invención, los principios activos anteriores han de localizarse en el citoplasma y el péptido vehículo transporta los principios activos anteriores al citoplasma localmente.
En una realización de la presente invención, los principios activos anteriores han de localizarse en la mitocondria y el péptido vehículo transporta los principios activos anteriores a la mitocondria localmente.
En una realización de la presente invención, los fármacos transportados dentro de la célula por el péptido de penetración celular pueden comprender uno o más transportadores de fármacos como liposoma, micelas, nanopartículas, partículas magnéticas o puntos cuánticos.
La expresión "sustancia de contraste" desvelada en el presente documento es una indicación amplia que comprende todas las sustancias usadas para contrastar estructuras o fluidos dentro del cuerpo en formaciones de imágenes médicas. Una sustancia de contraste apropiada comprende agente de contraste radioopaco, un agente de contraste paramagnético, un agente de contraste superparamagnético, CT (tomografía computarizada) y otras sustancias de contraste, pero no limitado a esos. Por ejemplo, un agente de contraste radioopaco (para formación de imágenes de rayos X) comprenderá un compuesto de yodo inorgánico y un compuesto de yodo orgánico (por ejemplo, diatrizoato), metales radiopacos y sus sales (por ejemplo, plata, oro, platino, etc.) y otros compuestos radioopacos (por ejemplo, sales de calcio, sales de bario tales como sulfato de bario, tántalo y tántalo oxidado). Una sustancia de contraste paramagnético apropiada (para formación de imágenes de RM) comprende ácido gadolinio dietilen triaminopentaacético (Gd-DTPA) y sus derivados, otro gadolinio, manganeso, hierro, disprosio, cobre, europio, erbio, cromo, complejo de níquel y cobalto, por ejemplo, ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecan-N,N',N",N'"-tetraacético (DOTA), ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecan-N,-N',N"-triacético (DO3A), ÁCIDO 1,4,7-triazaciclononano-N,N',N"-TRIACÉTICO (NOTA), ácido 1,4,8,10-tetraazaciclotetradecano-N,N',N",N"'-tetraacético (TETA), ácido hidroxibenciletilendiamina diacético (HBED). Una sustancia de contraste superparamagnética apropiada (para formación de imágenes de RM) comprende magnetita, óxido de hierro súper paramagnético (SPlO), óxido de hierro superparamagnético ultrapequeño (USPIO) y óxido de hierro monocristalino. Otras sustancias de contraste apropiadas son agentes de contraste CT yodados, no yodados, iónicos y no iónicos, una sustancia de contraste como etiqueta rotativa o agente eficaz para el diagnóstico.
Otros ejemplos de sustancias de contraste comprenden p-galactosidasa, Proteína Verde Fluorescente, Proteína Cian Fluorescente, luciferasa, pero no limitado a esos, y un gen marcador que codifica proteínas que pueden detectarse fácilmente cuando se expresan dentro de las células. Pueden usarse varios marcadores tales como radionúclidos, harina, enzima, enzima-sustrato, cofactores enzimáticos, inhibidores enzimáticos, ligandos (especialmente hapteno).
En un ejemplo de la presente invención, una sustancia de contraste es el ácido ferrocenocarboxílico de la fórmula química 2 a continuación. La estructura del ferroceno se muestra en la fórmula química 1.
En un ejemplo de la presente invención, un conjugado de péptido de penetración celular y una sustancia de contraste es Ferrocenocarboxílico-pep (Ferrocenocarboxílico-pep) que se muestra en la fórmula química 3 a continuación.
En una realización de la presente invención, un péptido o composición puede fusionarse con uno o más marcadores detectables. Los marcadores pueden ser compuestos que pueden detectarse en respuestas químicas, físicas o enzimáticas, o compuestos que generan señales directa o indirectamente en las respuestas. El marcaje y la detección después de eso pueden realizarse de acuerdo con el procedimiento conocido en la técnica (por ejemplo, Sambrook, J. y Russel, D.W.(2001); y Lottspeich, F. y Zorbas H. (1998) Bioanalytik, Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg/Berlín, Alemania). Los marcadores comprenden marcador fluorescente, marcador enzimático, marcador cromogénico, marcador luminiscente, marcador de radiación, hapteno, biotina, complejo de metal, oro metal y coloidal, pero no limitado a esos. Todas las formas de estos marcadores son bien conocidas en este campo de trabajo, pueden obtenerse comercialmente de diversos proveedores.
En una realización de la presente invención, una carga puede combinarse directamente con un péptido. En otra realización de la presente invención, una carga puede ser combinada con un péptido a través de diversos tipos de enlaces tales como enlaces covalentes o no covalentes. Una carga, por ejemplo, puede combinarse con el N-terminal o C-terminal del péptido en una realización de la presente invención. Por ejemplo, una carga puede estar unida al péptido mediante enlaces disulfuro o enlaces covalentes. Los enlaces covalentes son los enlaces que una carga puede unirse a la a-amina del glutamato N-terminal, o la amina de los restos de lisina C-terminales. Además, un péptido y una carga pueden combinarse mediante un enlace no covalente, que puede tener un péptido o una carga puede encapsular al otro en forma de cápsula.
En otra realización de la presente invención, un péptido puede combinarse con una carga a través de un enlazador. Por ejemplo, un péptido puede combinarse con una carga uniendo una carga a un conector después de introducir un conector tales como el conector Hynic (ácido 6-hidrazinopiridin-3-carboxílico), a la a-amina del glutamato N-terminal, o la amina de los restos de lisina C-terminales.
En otra realización de la presente invención, cuando una carga es ADN o ARN, el grupo SH (grupo tiol) se introduce en el péptido y el grupo maleimida se introduce en el ADN o ARN, después, el grupo SH del péptido y el grupo maleimida de ADN o ARN se combinan, creando así un enlace entre la carga y el péptido.
En otra realización de la presente invención, cuando una carga es un péptido o proteína, el ADN que expresa una carga se combina con el ADN que expresa un péptido vehículo, y al expresar esto, una carga y un péptido pueden combinarse como una forma de proteína de fusión. Los ejemplos específicos de combinación por una proteína de fusión son los siguientes: cuando se fabrica el cebador para la producción de proteína de fusión, un nucleótido que codifica un péptido vehículo se une en frente de un nucleótido que expresa una carga y el nucleótido obtenido se inserta en un vector tales como el vector pET usando una enzima de restricción y el nucleótido se expresa mediante transformación en una célula tales como BL-21 (DE3). En este momento, una proteína de fusión debe expresarse eficazmente al tratarla con un agente inductor de la expresión como IPTG (isopropil-1-tio-S-D-galactopiranósido). Después, la proteína de fusión expresada se purifica mediante purificación con etiqueta His y se dializa con PBS y se añade a un kit para concentrarla mediante centrifugación en tal condición durante 5 a 2o minutos a 2.000 a 4.000 rpm.
En una realización de la presente invención, un péptido vehículo se combina con sustancias de tinción, sustancias fluorescentes, específicamente FITC (isotiocianato de fluoresceína) o GFP (proteína fluorescente verde). En una realización de la presente invención, FITC se combina con el grupo amino (NH3+) de lisina en el N-terminal o C-terminal de un péptido vehículo. En el caso de un péptido, en el que la lisina no existe en su extremo, el péptido puede combinarse con FITC a través de un conector que incluye lisina.
El péptido portador descrito en el presente documento que es el péptido que comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 121 , SEQ ID NO: 141 , SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 11 1 , SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ N° ID: 107, N° ID SEC: 148, N° ID SEC: 112, N° ID SEC: 117, N° ID SEC: 144, N° ID SEC: 131 , N° ID SEC: 142 , SEQ ID NO: 127 y SEQ ID NO: 113 se pueden combinar con una carga en una fracción molar de 1:1, pero se puede combinar en una fracción molar distinta de 1:1. Por ejemplo, una fracción molar de CPP y una carga puede ser más de 2:1, específicamente, más de 2:1, más de 3:1, más de 4:1, más de 5:1, más de 6:1, más de 7:1 , más de 8:1, más de 9:1 o más de 10:1.
Esto significa que numerosas moléculas de péptidos vehículo pueden combinarse con una molécula de carga. Las numerosas moléculas de péptidos vehículo pueden combinarse en serie o en paralelo. "Combinado en serie" significa que un péptido vehículo y una molécula de carga han de combinarse en los aminoácidos terminales. "Combinado en paralelo" significa que han de combinarse en un sitio distinto de los aminoácidos terminales. Por otro lado, la fracción molar de un péptido vehículo y una carga puede ser más de 1:2. Esto significa que una molécula de péptido vehículo puede combinarse con numerosos números de una molécula de carga. Por ejemplo, una fracción molar de un péptido vehículo y una carga puede ser 1:2, específicamente, más de 1:2, más de 1:3, más de 1:4, más de 1:5, más de 1:6, más de 1:7, más de 1:8, más de 1:9 o más de 1:10.
Puede encontrar fácilmente una vía de movimiento del péptido combinado con isotiocianato de fluoresceína. Por lo tanto, un péptido vehículo en una realización de la presente invención se usará para obtener imágenes celulares o detectar una ruta de suministro de fármacos dentro de una célula.
En una realización de la presente invención, la composición cosmética o alimenticia que comprende un principio activo; y se proporciona el péptido; en el que el péptido comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 11 1, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 11 7, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 13 1, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127, y SEQ ID NO: 11 3. En otra realización de la presente invención, se proporciona una composición cosmética o alimenticia que comprende un conjugado del péptido y los ingredientes activos; en el que el péptido comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 12 1, SEQ ID NO: 14 1, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 11 1, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 13 1, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127 y SEQ ID NO: 113.
En una realización de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica, cosmética o alimenticia con una capacidad sobresaliente para transportar ingredientes activos dentro de una célula, que comprende un conjugado del péptido y un principio activo; en el que el péptido comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 12 1, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 11 1, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 11 7, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEC ID N° : 127, y SEQ ID NO: 113.
La mitocondria, como un orgánulo central en el metabolismo energético de una célula eucariota, es un primer orgánulo intracelular que se sabe que está relacionado con enfermedades humanas (Luft R, Ikkos D, Palmieri G, Ernster L, Afzelius B: A case of severe hypermetabolism of non thyroid origin with a defect in the maintenance of mitochondrial respiratory control: a correlated clinical, biochemical, and morphological study, J Clin Invest 41: 1776-804, 1962).
Dado que las mitocondrias juegan un papel importante en el control del metabolismo energético de las células y la apoptosis, actúan como una diana principal para diversos fármacos terapéuticos. Además, este orgánulo está implicado en el control de la concentración de calcio dentro de la célula, la cadena respiratoria mitocondrial actúa como un sistema de transporte de electrones que es importante en la producción de energía y provoca la producción de especies reactivas de oxígeno. Como resultado, la función mitocondrial anormal tiene una estrecha relación con enfermedades de adultos tales como la diabetes, cardiomiopatía, infertilidad, ceguera, enfermedades renales/hepáticas y accidente cerebrovascular (Modica-Napolitano KS, Singh KK: April mitochondria as targets for detection and treatment of cancer. Expert Rev Mol Med 11:1-19, 2002). Además, se está sugiriendo que las mutaciones genéticas mitocondriales estén implicadas en el estallido del envejecimiento, enfermedad neuronal degenerativa y cáncer, etc.
El sistema de administración dirigido a las mitocondrias se puede proporcionar de acuerdo con una realización de la presente invención y puede comprender cualquiera de los conjugados mencionados anteriormente, en el que el péptido transportador se mueve a las mitocondrias intracelulares localmente y desempeña un papel de mitocondrias intracelulares locales que suministran los ingredientes activos mencionados, en el que el péptido dirigido a mitocondrias mencionado anteriormente puede ser el péptido que tiene al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107 , SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127 y SEQ ID NO: 113.
Se puede proporcionar la composición de ajuste de la actividad de las mitocondrias, en la que la composición comprende un conjugado de un péptido de la invención y un péptido transportado para la administración, en el que el péptido transportador se mueve localmente hacia las mitocondrias intracelulares y desempeña un papel de mitocondrias intracelulares locales que administran los ingredientes activos mencionados. , en el que el péptido dirigido a las mitocondrias mencionado anteriormente puede ser la composición que tiene al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO : 122, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEC ID N° : 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127 y SEQ ID NO: 113.
La composición de ajuste de la actividad mitocondrial de acuerdo con una realización de la presente invención, en la que la composición para el tratamiento de enfermedades o trastornos relacionados con las mitocondrias, la prevención, la inhibición del progreso o el alivio de los síntomas como una composición farmacéutica, en la que el principio activo se tratará para una enfermedad o trastorno relacionado con las mitocondrias, la prevención, la inhibición del progreso o el alivio de los síntomas.
Las "enfermedades relacionadas con las mitocondrias" desveladas en el presente documento comprenden enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, MELAS (Encefalomiopatía mitocondrial con acidemia láctica y episodios similares a accidentes cerebrovasculares); MERRF (mioclono, epilepsia y miopatía con fibras rojas irregulares; NARP/MILS (debilidad muscular neurogénica, ataxia, retinitis pigmentosa/síndrome de Leigh heredado de la madre); LHON (neuropatía óptica hereditaria de Lebers); KSS (Síndrome de Kearns-Sayre); PMPS (Síndrome de médula ósea-páncreas de Pearson); CPEO (oftalnoplegia externa progresiva crónica); Síndrome de Reye; Síndrome de Alper; Síndrome de deleción de ADNmt múltiple; síndrome de agotamiento de ADNmt; Deficiencia del complejo I; Deficiencia del complejo II (SDH); Deficiencia del complejo III; Deficiencia de citocromo c oxidasa (COX, complejo IV); Deficiencia de complejo V; Deficiencia de translocador de nucleótidos de adenina (ANT); Deficiencia de piruvato deshidrogenasa (PDH); Aciduria del ácido etilmalónico con acidemia de ácido láctico; Aciduria de ácido 3-metil glutacónico con acidemia de ácido láctico; epilepsia refractaria que representa una disminución durante la infección; Síndrome de Asperger que representa una disminución durante la infección; Autismo que representa una disminución durante la infección; trastorno por déficit de atención e hiperactividad (TDAH); Parálisis cerebral que representa una disminución durante la infección; Alexia que representa una disminución durante la infección; Trombocitopenia hereditaria materna; Leucemia; MNGIE (miopatía mitocondrial, neuropatía periférica y autonómica, disfunción gastrointestinal y epilepsia); Síndrome de MARIAHS (ataxia mitocondrial, infección recrudescente, afasia, hipouricemia/hipomielinización, convulsiones y aciduria de ácido dicarboxílico); Distonía ND6; Síndrome de vómitos cíclicos que representa una disminución durante la infección; Aciduria de ácido 3-hidroxiisobutírico que tiene acidemia de ácido láctico; Diabetes con acidemia de ácido láctico; Síndrome neural reactivo de uridina (URNS); Necrosis del estriado bilateral familiar (FBSN); Pérdida auditiva relacionada con aminoglucósidos; Miocardiopatía relajada; Linfoma de bazo; Síndrome de Wolframs; Síndrome de deleciones de ADN de mitocondrias múltiples; y Síndrome de acidosis tubular renal/diabetes/ataxia, pero no limitado a esos.
Las moléculas de ácido nucleico que codifican los polipéptidos mencionados anteriormente pueden por eemplo tener secuencias de bases de GAA GCG CGC CCG GCG CTG ACC AGC CGC CTG CGC TTT ATT CCG AAA. Los ácidos nucleicos pueden introducirse en la célula hospedadora de acuerdo con un procedimiento conocido por los expertos en la materia. Por ejemplo, los procedimientos conocidos pueden ser el procedimiento de transformación por el procedimiento de fosfato de calcio, liposoma, electroporación, poniendo en contacto un virus y una célula o microinyección directamente en la célula, etc. La célula hospedadora es una célula eucariota superior, por ejemplo, células de mamífero, o células eucariotas inferiores, tales como una célula de levadura, o células procariotas, tales como una célula bacteriana. Las células hospedadoras procariotas apropiadas para la transformación pueden ser las especies que pertenecen a E. coli, Bacillus subtillis, Salmonella typhimurium, Pseudomonas, Streptomyces y especies de microbacterias, como ejemplos.
El vector que incluye las moléculas de ácido nucleico mencionadas anteriormente es generalmente un vector de expresión recombinante y comprende, el origen de replicación que permite una transformación de la célula hospedadora y un marcador seleccionable (por ejemplo, dihidrofolato reductasa para el cultivo de células eucariotas o tolerancia a neomicina, tolerancia a tetraciclina o a ampicilina en E. coli o el gen TRP1 de S.cerevisiae) y el promotor para controlar la transcripción de secuencias de recubrimiento de proteínas. Los vectores de expresión disponibles son, por ejemplo, plásmidos bacterianos conocidos tales como SV40, derivados de pcDNA y plásmidos bacterianos conocidos tales como colE1, pCR1, pBR322, pMal-C2, pET, pGEX (Smith, y col., Gene 67:31-40(1988)), plásmidos tales como pMB9 y su derivado RP4, ADN de fago que es lo mismo que numerosos derivados del fago I tales como NM989, ADN de fago tales como M13 y ADN de fago monocatenario de tipo filamento; plásmido de levadura, por ejemplo, ADN o vector de fago inducido a partir de una combinación de plásmido modificado para usar secuencias de supresión de expresión y ADN de fago. Los vectores de expresión de mamíferos comprenden el origen de replicación, un promotor apropiado y un potenciador. Además, pueden comprender sitios obligatorios de unión a ribosomas, sitios de poliadenilación, donador de empalme y parte del receptor, secuencias de terminación de la transcripción y secuencias no transcripcionales de entablado 5'. Los vectores de expresión de mamíferos pueden comprender un promotor inducible, por ejemplo, un vector que contiene el promotor de dihidrofolato reductasa, cualquier vector de expresión que contenga casete de expresión DHFR o vector de coamplificación DHFR/metotrexato tales como pED (Randal J, kaufman, 1991, Randal J. Kaufman, Current Protocols in Molycular Biology, 16, 12(1991)). O, el vector de co-amplificación de glutamina sintetasa/metionina sulfoximina, por ejemplo, pEE14 (Celltech), Virus Epstein-Barr (VEB) o un vector que dirige la expresión episómica bajo el control del antígeno nuclear (EBNA), por ejemplo, pueden usarse pREP4 (Invitrogen), pCEP4 (Invitrogen), pMEP4 (Invitrogen), pREP8 (Invitrogen), pREP9 (Invitrogen) y pEBVHis (Invitrogen). Los vectores de expresión de mamíferos seleccionables son Rc/CMV (Invitrogen) y pRc/RSV (Invitrogen), etc. Los vectores de expresión de mamíferos del virus vacuna que pueden usarse en la presente invención son pSC11, pMJ601, pTKgptF1S, etc.
El sistema de vector de expresión de levadura que puede ser usado es el vector pYES2 sin fusión (Invitrogen), pYESHisA, B, C de fusión (Invitrogen), vector pRS, etc.
Los vectores mencionados anteriormente pueden introducirse en diversas células, tales como células de mamíferos que son especialmente las células derivadas de humanos, o bacterias, levaduras, hongos, insectos, nematodos y células vegetales. Los ejemplos de células apropiadas son células VERO, células HeLa, por ejemplo, N.° de ATCC CCL2, línea celular CHO, por ejemplo, N.° de ATCC CCL61, células COS, por ejemplo célula COS-7 y célula N.° de ATCC CRL 1650, W138, BHK, HepG2, 3T3, por ejemplo, N.° de ATCC CRL6361,<A549, PC12, célula K562, célula 293, célula Sf9, por ejemplo, N.° de>ATcC<CRL1711 y célula Cv1, tales como>N.° de ATCC CCL70, etc.
Otras células apropiadas que pueden ser usadas son cepas de células hospedadoras procariotas, por ejemplo, las cepas pertenecientes aE. coli(por ejemplo, cepa DH5-a),Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, Pseudomonas, Streptomyces y Staphylococcus.
En una realización de la presente invención, la composición puede contener 0,1 pg/mg a 1 mg/mg, específicamente 1 pg/mg a 0,5 mg/mg, más específicamente 10 pg/mg a 0,1 mg/mg de un péptido que<comprende al menos una secuencia de aminoácidos de>SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 104, SEQID NO: 111, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127, y SEQ ID NO: 113.<Cuando el péptido está contenido en el intervalo mencionado>anteriormente, toda la seguridad y estabilidad de la composición puede satisfacerse y ser apropiada en términos de rentabilidad.
En una realización de la presente invención, la composición puede tener aplicación con todos los animales incluyendo humano, perro, pollo, cerdo, vaca, oveja, cobaya y mono.
En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica puede ser para administración a través de vía oral, rectal, transdérmica, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, en la médula ósea, por medios epidurales o subcutáneos.
Las formas de administración oral pueden ser, pero no se limitan a, comprimidos, píldoras, cápsulas blandas o duras, gránulos, polvos, solución o emulsión. Las formas de administración no oral pueden ser, pero no se limitan a, inyecciones, goteos, lociones, pomadas, geles, cremas, suspensiones, emulsiones, supositorio, parche o pulverizador.
En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica, si es necesario, puede contener aditivos, tales como diluyentes, excipientes, lubricantes, aglutinantes, disgregantes, tampones, dispersantes, tensioactivos, agentes colorantes, aromáticos o edulcorantes. En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica puede fabricarse por procedimientos convencionales de la industria en la técnica.
En una realización de la presente invención, el principio activo de la composición médica puede variar de acuerdo con la edad del paciente, el sexo, el peso, la patología y el estado, la vía de administración o el juicio del prescriptor. La dosificación basada en estos factores se determina dentro de los niveles de los expertos en la materia y la dosis diaria, por ejemplo, puede ser, pero no se limita a, 0,1 pg/kg/día a 1 g/kg/día, específicamente 1 pg/kg/día a 10 mg/kg/día, más específicamente 10 pg/kg/día a 1 mg/kg/día, más específicamente 50 pg/kg/día a 100 pg/kg/día. En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica puede ser para administración, pero no se limita a, 1 a 3 veces al día.
En una realización de la presente invención, la composición cosmética puede proporcionarse en todas las formas apropiadas para aplicaciones tópicas. Por ejemplo, las formas pueden proporcionarse como soluciones, emulsiones obtenidas por dispersión de fase oleaginosa en agua, emulsión obtenida por dispersión de agua en fase oleaginosa, suspensión, sólido, gel, polvo, pasta, espuma o aerosol. Estas formas pueden fabricarse por procedimientos convencionales de la industria en la técnica.
En una realización de la presente invención, la composición cosmética puede incluir, dentro de niveles que no dañarán el efecto principal, otros ingredientes que pueden aumentar deseablemente el efecto principal. En una realización de la presente invención, la composición cosmética puede incluir adicionalmente humectante, agentes emolientes, tensioactivos, absorbentes de UV, conservantes, fungicidas, antioxidantes, agente de ajuste de pH, pigmentos orgánicos o inorgánicos, aromáticos, agente refrigerante o antitranspirante. Los expertos en la materia pueden decidir la proporción de formulación de los ingredientes mencionados anteriormente dentro de niveles que no perjudiquen el fin y los efectos de la presente invención, y la proporción de formulación basada en el peso total de la composición cosmética puede ser del 0,01 al 5 % en peso, específicamente del 0,01 al 3 % en peso.
En una realización de la presente invención, la composición alimentaria no se limita a las formas, pero por ejemplo pueden ser gránulos, polvo, formas líquidas y sólidas. Cada forma puede formarse con ingredientes comúnmente usados en la industria elegidos apropiadamente por los expertos en la materia, además del principio activo, y puede aumentar el efecto con otros ingredientes.
La decisión de dosificación sobre el principio activo mencionado anteriormente está dentro del nivel de los expertos en la materia y la dosificación diaria por ejemplo puede ser de 1 pg/kg/día a 10 mg/kg/día, más específicamente 10 pg/kg/día a 1 mg/kg/día, más específicamente 50 pg/kg/día a 100 pg/kg/día, pero no se limita a estos números y puede variar de acuerdo con la edad, el estado de salud, complicaciones y otros diversos factores.
Los términos usados en el presente documento pretenden usarse para describir las realizaciones, no para limitar la presente invención. Los términos sin números delante no son para limitar la cantidad, sino para mostrar que puede haber más de una cosa del término usado. Las expresiones "que incluye", "que tiene" y "que comprende" se interpretarán abiertamente (es decir, "incluyendo pero no limitado a").
Se usa la mención del intervalo de números en lugar de indicar números separados dentro del intervalo, así que a menos que se indique explícitamente, cada número puede leerse como números separados integrados en el presente documento. Los valores finales de todos los intervalos se incluyen en el intervalo y pueden combinarse de forma independiente.
A menos que se indique lo contrario o se contradiga claramente en contexto, todos los procedimientos mencionados en el presente documento pueden realizarse en el orden apropiado. El uso de una realización cualquiera y todas las realizaciones o lenguaje ejemplar (por ejemplo, que usa "como ~"), a menos que esté incluido en las reivindicaciones, se usa para describir más claramente la presente invención, no para limitar el ámbito de la presente invención. Cualquier lenguaje en el presente documento fuera de las reivindicaciones no debe interpretarse como una necesidad de la presente invención. A menos que se defina de otra manera, los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen un significado normalmente entendido por un experto en la materia a la que pertenece la presente invención.
Las realizaciones preferidas de la presente invención son el mejor modo conocido por los inventores para realizar la presente invención. Puede resultar claro para los expertos en la materia después de leer las declaraciones antes de las variaciones en las realizaciones preferidas. Los presentes inventores esperan que aquellos expertos en la materia puedan usar las variaciones adecuadamente y que la presente invención se lleve a cabo de otras maneras distintas a las listadas en el presente documento. Por lo tanto, la presente invención, según lo permitido por la ley de patentes, incluye equivalentes y variaciones de los mismos, de los puntos clave de la invención establecidos en las reivindicaciones adjuntas. Además, todas las posibles variaciones dentro de cualquier combinación de los componentes anteriormente mencionados se incluyen en la presente invención, salvo que se indique explícitamente de otra manera o contradiga al contexto.
Ejemplo 1: Síntesis de péptido
Los péptidos de SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178 se sintetizaron de acuerdo con el procedimiento existente de síntesis de péptidos en fase sólida. En detalle, los péptidos se sintetizaron acoplando cada aminoácido del C-terminal a través de la síntesis de péptidos en fase sólida Fmoc, SPPS, usando ASP48S (Peptron, Inc., Daejeon ROK). Los péptidos con su primer aminoácido en el C-terminal uniéndose a la resina se usaron de la siguiente manera:
Resina NH<2>-Lys(Boc)-2-cloro-tritilo
Resina NH<2>-Ala-2-cloro-tritilo
Resina NH<2>-Arg(Pbf)-2-cloro-tritilo
Todos los materiales de aminoácidos para sintetizar el péptido estaban protegidos por Fmoc en el N-terminal y los restos de aminoácidos estaban protegidos por Trt, Boc, t-Bu (t-butiléster), Pbf (2,2,4,6,7-pentametil dihidrobenzofuran-5-sulfonilo) que pueden disolverse en ácido. Tales como:
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ahx-OH, ácido Trt-Mercaptoacético.
HBTU[2-(1H-Benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetametilaminio hexafluorofosfato]/HOBt [N-hidroxibenzotriazol]/NMM[4-metilmorfolina] se usaron como reactivos de acoplamiento. En el 20 % de DMF, se usó piperidina para retirar Fmoc. Para retirar la protección del resto o para separar el péptido sintetizado de la resina, se usó cóctel de escisión [TFA (ácido trifluoroacético)/TIS (triisopropilsilano)/EDT (etanoditiol)/H<2>O = 92,5/2,5/2,5/2,5].
Los péptidos se sintetizaron usando el armazón de fase sólida añadiendo cada aminoácido con los procedimientos secuenciales como sigue; protección de aminoácidos, reacción de acoplamiento, lavado y desprotección. Después de cortar el péptido sintetizado de la resina, se purificó por HPLC y se verificó la síntesis por MS y después se secó por congelación.
El procedimiento de síntesis de péptidos específico se describe mediante lo siguiente con el ejemplo de Pep1 (EARPALLTSRLRFIPK).
1) Acoplamiento
El aminoácido (8 equivalentes) protegido con Resina NH<2>-Lys(Boc)-2-cloro-tritilo se fundió en el agente de acoplamiento HBTU (8 equiv.)/HOBt (8 equiv.)/NMM (16 equiv.) y tras la adición de DMF, la mezcla de reacción se incubó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se lavó secuencialmente con DMF, MeOH y DMF.
2) Desprotección de Fmoc
Después de la adición de piperidina al 20 % en DMF, la mezcla de reacción se incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos 2 veces, después se lavó secuencialmente con DMF, MeOH y DMF.
3) Fabricar el marco básico del péptido repitiendo las reacciones 1 y 2 repetidamente.
4) Escisión: Añadir el Cóctel de Escisión al péptido completamente sintetizado y separar el péptido de la resina.
5) Añadir éter dietílico pre-enfriado a la mezcla y después centrifugar la mezcla de reacción para precipitar los péptidos.
6) Después de la purificación por Prep-HPLC, comprobar el peso molecular por CL/EM y liofilizar para obtener los péptidos en forma de polvo.
Ejemplo 2: Preparación de conjugado pep(CPP)-FITC
(1) Preparación del conjugado FITC-CPP
Un conjugado de los péptidos con SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178 combinado con FITC se fabricó como sigue, por ejemplo, un conjugado de pep1 y FITC, en otras palabras, se fabricó FITC-enlazador-pep1 como sigue.
El marco básico del péptido, (Resina NH<2>-enlazador-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-cloro-Tritilo) que se obtuvo de acuerdo con los procedimientos de fabricación descritos en el Ejemplo 1, se hizo reaccionar con FITC. Específicamente, FITC (fluoresceína-5-isotiocianato) (8 equivalentes) y DIPEA (N, N-diisopropiletilamina) (16 equivalentes) se fundieron en DMF. Se añadió la solución de DMF y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, después se lavó secuencialmente con DMF, MeOH y DMF. Como resultado, se obtuvo la resina FITC-enlazador-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-cloro-tritilo. El enlazador en el presente documento es ácido 6-aminohexanoico, Ahx. Se añadió TFA/TIS/H<2>O = 95/2,5/2,5 al péptido fabricado sobre la resina y el conjugado se separó de la resina. Se añadió un éter dietílico pre-enfriado a la mezcla obtenida y se usó centrifugación para precipitar los conjugados peptídicos. Después de la purificación por Prep-HPLC, la pureza se confirmó con la HPLC analítica y el peso molecular se determinó por CL/EM. El péptido sintetizado como se describió anteriormente se verificó como FITC-pep1 mediante la confirmación del peso molecular por CL/EM. Después los conjugados se liofilizaron.
(2) Preparación de un conjugado CPP-FITC
El marco básico del péptido, (Resina NH<2>-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Dde)-2-cloro-Tritilo) se generó de acuerdo con los procedimientos de fabricación descritos en el Ejemplo 2 1. (1). Para introducir selectivamente FITC al C-terminal del péptido, el N-terminal del péptido estaba protegido de Boc. Después, el di-ferc-dicarbonato de butilo (30 equivalentes) y DIPEA (30 equivalentes) se fundieron en DMF. La solución de DMF se añadió al péptido y se incubó a temperatura ambiente durante 2 horas y el péptido se lavó secuencialmente con DMF, MeOH y<d>M<f>. Como resultado, se obtuvo la resina Boc-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Dde)-2-cloro-tritilo. Se usó hidrazina en 2 % de DMF para retirar Dde, que es el grupo protector del resto Lys C-terminal para añadir FITC al C-terminal de Lys. Después, FITC (8 equivalentes) y DIPEA (16 equivalentes) se fundieron en DMF que se añadió a la mezcla de reacción peptídica y la mezcla se incubó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se lavó secuencialmente con DMF, MeOH, DMF. Como resultado, se obtuvo la resina Boc-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(FITC)-2-cloro-tritilo. Se añadió TFA/TIS/H<2>O = 95/2,5/2,5 para separar el péptido de la resina. Se añadió éter dietílico preenfriado a la mezcla, y se usó centrifugación para precipitar los péptidos. Después de la purificación por Prep-HPLC, La pureza se confirmó con la HPLC analítica y el peso molecular se confirmó con CL/EM. Las sustancias obtenidas se verificaron como pep1-FITC mediante la confirmación del peso molecular por CL/EM. Después los conjugados se liofilizaron. También se prepararon los conjugados de SEQ ID NO:2 a SEQ ID NO: 178 de péptido-FITC de la misma manera que se describe anteriormente para pep1-FITC.
Ejemplo 3: Propiedad de penetración de un conjugado de Ferrocenocarboxílico-CCP
El aminoácido (8 equivalentes) protegido con Resina NH<2>-Lys(Boc)-2-cloro-triitilo y agente de acoplamiento HBTU(8 equivalentes)/HoBt(8 equivalentes)/NMM(16 equivalentes) se fundieron en DMF para el acoplamiento. La solución de DMF se añadió y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, después se lavó con DMF, MeOH, DMF en ese orden. Después de eso, se añadió piperidina al 20 % en DMF para la desprotección de Fmoc y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 5 minutos, 2 veces, después se lavó con DMF, MeOH, DMF en ese orden. Repitiendo las reacciones anteriores, se fabricó el marco básico del péptido, Resina NH<2>-E(OtBu)-A-R(Pbf)-PA-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Dde)-2-cloro-tritilo. Se añadió hidrazina en 2 % de DMF para retirar Dde que es el grupo protector de los restos de Lys C-term. Después de eso, Ácido ferrocenocarboxílico (Sigma Aldrich n.° de Cat. 46264, 16 equivalentes) y agente de acoplamiento HBTU(16 equivalentes)/HoBt(16 equivalentes)/NMM(32 equivalentes) se fundieron en DMF. La solución de DMF se añadió y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, después se lavó con DMF, MeOH y DMF en ese orden. SE añadió TFA/TIS/H<2>O=95/2,5/2,5 a la resina de péptido anteriormente sintetizada para separar el péptido de la resina. Se añadió éter dietílico de enfriamiento a la mezcla obtenida y se usó centrifugación para precipitar los péptidos reunidos. El precipitado se purificó por HPLC y se confirmó con EM. Después, los péptidos se liofilizaron.
Ejemplo 4: Penetración celular experimental del conjugado pep(CPP)-FITC
(1) Penetración celular experimental de la línea celular HeLa
Cultivo celular
La línea celular de adenocarcinoma de cuello uterino de Homo sapiens como líneas celulares HeLa se adquirieron de ATCC (American Type Cell Culture). Las células se cultivaron en MEM suplementado con suero bovino fetal al 10% (Invitrogen, Ee .UU.), sales de Earle, aminoácidos no esenciales, piruvato sódico y 100 |jg/ml de penicilina y 10 unidades/ml de estreptomicina y se cultivaron a 37 °C, en una incubadora de CO2 al 5 %.
Análisis de citometría de flujo y microscopía confocal de penetración celular
La citometría de flujo y el análisis de microscopio confocal se realizaron para comparar el grado de captación celular de las células que se trataron con la SEQ ID NO: 2 con la SEQ ID NO: 178, pep (CPP) y control.
La línea celular se dividió en una placa de 6 pocillos y se cultivó en un medio que contenía suero bovino fetal al 10 % (Invitrogen, EE.UU.), 100 jg/m l de penicilina, 100 unidades/ml de estreptomicina a 37 °C, incubadora al 5 % de CO2 durante 12 horas. Después de lavar la línea celular con PBS, se indujeron ayunas en Medio Esencial Mínimo durante una hora. Se trataron 20 jM de cada péptido vehículo y se cultivaron a 37 °C durante una hora. Después de repetir la etapa de lavar las células con PBS tres veces, se trató con tripsina-EDTA durante 10 minutos a 37 °C para separar el péptido vehículo en el exterior de la célula. Las células se recogieron con PBS refrigerado y se realizó una centrifugación para repetir la etapa de lavar las células tres veces. Después de eso, las células se suspendieron en 0,5 ml de PBS que contenía 4 % de paraformaldehído y se analizó la fluorescencia de las células usando FACS Calibur (Becton Dickinson). Se comparó el aspecto de la captación celular del control y diversos péptidos combinados con FITC y se analizó por IFM (Intensidad de fluorescencia media).
Los resultados son como se muestran en las Figuras 2 a 29. La Figura 1 muestra los resultados para el pep 1 de SEQ ID NO: 1, sometida a la referencia. Los resultados de los análisis mostrados en las Figuras 2 a 29 se dan con detalle en la Tabla 7 a continuación.
�� (2) Propiedad de penetración celular de la línea celular Huh7
Cultivo celular
La línea celular de carcinoma hepatocelular humano como líneas Huh7 se adquirió de ATCC (American Type Cell Culture) y se usó como células suspendidas. Las células se cultivaron en MEM suplementado con suero bovino fetal al 10% (Invitrogen, EE.UU.), sales de Earle, aminoácidos no esenciales, piruvato sódico y 100 |jg/ml de penicilina y 10 unidades/ml de estreptomicina y se cultivaron a 37 °C, en una incubadora de CO2 al 5 %.
El análisis de detección de penetración celular usado por citometría de flujo
Para confirmar la penetración celular de los péptidos, las líneas celulares Huh7 se trataron con SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178 y se analizaron por citometría de flujo. El procedimiento analizado también se confirmó de la misma manera que se describió anteriormente en el ejemplo (1) en líneas celulares Hela. Además, El resultado se mostró en la Figura 30 a la Figura 51.
(3) Penetración celular experimental en líneas celulares de linfocitos T humanos
Cultivo celular
La línea celular de leucemia de linfocitos T humanos como Jurkat se adquirió de ATCC (American Type Cell Culture) y se usó como células suspendidas. Las células se cultivaron en RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al 10 % (Invitrogen, EE.UU.), Earle) aminoácidos no esenciales de Earle, piruvato sódico y 100 en ATCC (American Type unidades/ml de estreptomicina y se cultivaron a 37 °C, en una incubadora de CO2 al 5 %.
El análisis de detección de penetración celular usado por citometría de flujo
Para confirmar la penetración celular de los péptidos, las líneas celulares de leucemia de linfocitos T humanos se trataron con SEQ ID NO: 2 a SEQ ID NO: 178 y se analizaron por citometría de flujo. El procedimiento analizado también se confirmó de la misma manera que se describió anteriormente en el ejemplo (1) en líneas celulares Hela. Además, El resultado se mostró en la Figura 52 a la Figura 69.
Los linfocitos (linfocito) derivados humanos se separaron de la sangre humana sana (50 m) y después se recogió la capa de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y los linfocitos se usaron por una solución de separación Biocoll (Biochrom AG, Berlín, Alemania).
(4) Análisis de viabilidad celular y toxicidad
La línea celular se dividió en una placa de 96 pocillos y se cultivaron en un medio que contenía suero bovino fetal al 10% (Invitrogen, EE.UU.), 100 jg/m l de penicilina, 100 unidades/ml de estreptomicina a 37 °C, incubadora al 5 % de CO2 durante 12 horas. Después de lavar la línea celular con PBS, se indujeron ayunas en Medio Esencial Mínimo durante una hora. Se trataron 20 jM de cada péptido vehículo y se cultivaron a 37 °C durante una hora. Después de cultivar las células, se analizó la viabilidad celular y la toxicidad usada por el ensayo MTT. Los resultados se mostraron en la Figura 16 a la Figura 21.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado de un péptido transportador que penetra en las células y un principio activo, en el que el péptido transportador es un péptido que comprende al menos una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ N° ID: 93, N° ID SEC: 122, N° ID SEC: 121, N° ID SEC: 141, N° ID SEC: 104, N° ID SEC: 111, N° ID SEC: 146, N° ID SEC: 130, N° ID SEC : 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127, y SEQ ID NO: 113.
2. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el péptido portador consiste en 30 o menos aminoácidos.
3. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el principio activo es al menos uno seleccionado de una proteína, ácido nucleico, péptido, lípido, glicol-lípido, mineral, azúcar, nanopartícula, producto biológico, agente de contraste, fármaco y compuesto químico.
4. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el principio activo es una proteína o un péptido, opcionalmente una citoquina, un anticuerpo, un fragmento de un anticuerpo, una enzima terapéutica, un receptor soluble o un ligando.
5. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el agente de contraste se selecciona del grupo que consiste en un agente de contraste radiopaco, un agente de contraste paramagnético, un agente de contraste superparamagnético y un agente de contraste CT.
6. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el agente de contraste se basa en hierro.
7. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el agente de contraste es un carboxilato de ferroceno.
8. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el péptido portador y el principio activo se conjugan a través de
a) un enlace covalente, opcionalmente mediado por un enlazador; o
b) un enlace no covalente.
9. Uso de un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para contrastar una célula, opcionalmente una célula madre.
10. Una composición que comprende el conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que es una composición farmacéutica, una composición cosmética o una composición de alimentos saludables.
11. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición farmacéutica de la reivindicación 10 para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad.
12. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 para uso en un procedimiento para administrar un principio activo en una célula, que comprende administrar el conjugado a un sujeto que lo necesite,
en el que el péptido portador es un péptido de penetración celular que logra la administración del principio activo en una célula, opcionalmente localmente en las mitocondrias dentro de una célula.
13. Un procedimiento para administrar un principio activo en una célula, que comprende administrar el conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición de acuerdo con la reivindicación 10 a una célulain vitro.
14. Un péptido que consiste en una cualquiera secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:77, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 127, y SEQ ID NO: 113.
ES19196538T 2012-09-19 2013-09-17 Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate Active ES2999332T3 (en)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20120104144 2012-09-19
KR20120104173 2012-09-19
KR20120109207 2012-09-28
KR20120109216 2012-09-28
KR20130017046 2013-02-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2999332T3 true ES2999332T3 (en) 2025-02-25

Family

ID=50341706

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES19196538T Active ES2999332T3 (en) 2012-09-19 2013-09-17 Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate
ES13838276T Active ES2758451T3 (es) 2012-09-19 2013-09-17 Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES13838276T Active ES2758451T3 (es) 2012-09-19 2013-09-17 Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado

Country Status (8)

Country Link
US (4) US9572900B2 (es)
EP (2) EP2899201B1 (es)
JP (5) JP6517692B2 (es)
KR (1) KR102201429B1 (es)
CN (3) CN113699133B (es)
ES (2) ES2999332T3 (es)
TW (1) TWI616531B (es)
WO (1) WO2014046490A1 (es)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6262721B2 (ja) 2012-05-11 2018-01-17 ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド 敗血症の予防用または治療用の組成物
EP3428181A3 (en) 2012-05-11 2019-02-20 KAEL-GemVax Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
EP2873678B8 (en) 2012-07-11 2024-07-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Conjugate comprising a cell-penetrating peptide and compositions comprising same
US20150125438A1 (en) 2012-07-20 2015-05-07 Sang Jae Kim Anti-Inflammatory Peptides and Composition Comprising the Same
ES2999332T3 (en) 2012-09-19 2025-02-25 Gemvax & Kael Co Ltd Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate
TWI616530B (zh) * 2012-09-19 2018-03-01 傑姆維克斯＆凱爾有限公司 穿膜胜肽以及包含該胜肽之共軛物及組成物（一）
TWI655204B (zh) 2012-09-19 2019-04-01 韓商傑姆維克斯＆凱爾有限公司 穿膜胜肽以及包含該胜肽之共軛物及組成物(三)
ES2743919T3 (es) 2012-09-19 2020-02-21 Gemvax & Kael Co Ltd Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado
CN105263508B (zh) 2013-04-19 2019-10-25 珍白斯凯尔有限公司 治疗和预防缺血性损伤的组合物
RU2725744C2 (ru) 2013-06-07 2020-07-03 Джемвакс Энд Каэл Ко., Лтд. Биологические маркеры, которые могут быть использованы в иммунотерапии рака
WO2014204281A1 (ko) 2013-06-21 2014-12-24 주식회사 카엘젬백스 호르몬 분비 조절제, 이를 포함하는 조성물, 및 이를 사용한 호르몬 분비 조절 방법
RU2661596C2 (ru) 2013-10-23 2018-07-17 Джемвакс Энд Каэл Ко., Лтд. Композиция для лечения и профилактики доброкачественной гиперплазии простаты
EP3072519B1 (en) 2013-11-22 2020-08-19 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having angiogenesis inhibitory activity and composition containing same
WO2015093854A1 (ko) 2013-12-17 2015-06-25 주식회사 카엘젬백스 전립선 암 치료용 조성물
KR102373603B1 (ko) 2014-04-11 2022-03-14 주식회사 젬백스앤카엘 섬유증 억제 활성을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
WO2015167067A1 (ko) 2014-04-30 2015-11-05 주식회사 카엘젬백스 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물, 키트 및 이식 방법
KR102413243B1 (ko) 2014-12-23 2022-06-27 주식회사 젬백스앤카엘 안질환 치료 펩티드 및 이를 포함하는 안질환 치료용 조성물
US10835582B2 (en) 2015-02-27 2020-11-17 Gemvax & Kael Co. Ltd. Peptide for preventing hearing loss, and composition comprising same
WO2016190660A1 (ko) 2015-05-26 2016-12-01 주식회사 젬백스앤카엘 신규 펩티드 및 이를 포함한 조성물
EP3318265B1 (en) 2015-07-02 2021-08-18 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having anti-viral effect and composition containing same
CN117018162A (zh) 2016-04-07 2023-11-10 珍白斯凯尔有限公司 具有增加端粒酶活性和延长端粒的效果的肽以及组合物
WO2017192761A1 (en) * 2016-05-03 2017-11-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Propionyl-coa carboxylase compositions and uses thereof
KR102042758B1 (ko) * 2017-06-28 2019-11-08 주식회사 엘지생활건강 경피투과도가 향상된 신경전달물질 조절 펩타이드 화장료 조성물
WO2023026994A1 (ja) 2021-08-21 2023-03-02 武田薬品工業株式会社 ヒトトランスフェリンレセプター結合ペプチド－薬物コンジュゲート
US20240366775A1 (en) 2021-08-24 2024-11-07 Peptidream Inc. Human transferrin receptor binding antibody-peptide conjugate

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6846968B1 (en) * 1988-02-26 2005-01-25 Large Scale Biology Corporation Production of lysosomal enzymes in plants by transient expression
US5738996A (en) * 1994-06-15 1998-04-14 Pence, Inc. Combinational library composition and method
US7390891B1 (en) * 1996-11-15 2008-06-24 Amgen Inc. Polynucleotides encoding a telomerase component TP2
AR009416A1 (es) * 1996-11-15 2000-04-12 Amgen Inc Nuevos genes que codifican proeinas de telomerasa
GB9705519D0 (en) 1997-03-18 1997-05-07 Anmat Technology Limited Activation of peptides
JP2002514928A (ja) * 1997-07-01 2002-05-21 キャンビア バイオシステムス リミティド ライアビリティー カンパニー 脊椎動物テロメラーゼ遺伝子およびタンパク質ならびにその使用
US7030211B1 (en) * 1998-07-08 2006-04-18 Gemvax As Antigenic peptides derived from telomerase
US6831060B2 (en) * 1999-05-07 2004-12-14 Genentech, Inc. Chimpanzee erythropoietin (CHEPO) polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7078491B1 (en) 2000-09-21 2006-07-18 Amgen Inc. Selective binding agents of telomerase
AUPR769701A0 (en) * 2001-09-14 2001-10-11 Li, He Telomerase inhibitory peptides and uses thereof
CN1194007C (zh) * 2001-10-25 2005-03-23 北京百泰博创医药科技有限公司 P6a的代谢产物的分离、合成及其在医学中的应用
WO2003038047A2 (en) * 2001-10-29 2003-05-08 Baylor College Of Medicine Human telomerase reverse transcriptase as a class-ii restricted tumor-associated antigen
WO2003086284A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-23 University Of Utah Research Foundation Colon tumor specific binding peptides
US8128908B2 (en) 2004-04-30 2012-03-06 University Of Florida Research Foundation, Inc. Nanoparticles and their use for multifunctional bioimaging
WO2006108211A1 (en) 2005-02-25 2006-10-19 The Murdoch Childrens Research Institute Fragments of von willebrand factor a-related protein
EP1748067A1 (en) 2005-07-29 2007-01-31 Institut Pasteur Polynucleotides encoding MHC class I-restricted hTERT epitopes, analogues thereof or polyepitopes
US20090068158A1 (en) * 2005-12-09 2009-03-12 Medin Jeffrey A Thymidylate kinase mutants and uses thereof
WO2007069068A2 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Diatos Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
KR100859972B1 (ko) 2006-02-20 2008-09-25 이화여자대학교 산학협력단 막투과 단백질 도메인 펩타이드
EP2044211A2 (en) * 2006-06-09 2009-04-08 Bio Pur AG A method for the detection of enzymatic reactions
CN101616928B (zh) * 2007-01-29 2015-04-15 株式会社普罗赛尔制药 新型大分子转导域及其识别方法和用途
US8378070B2 (en) * 2007-03-12 2013-02-19 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Peptides for the regulation of neurotransmitter sequestration and release
JP5170407B2 (ja) * 2007-03-30 2013-03-27 国立大学法人九州工業大学 糖尿病合併症検査用試薬
EP1994942A1 (en) * 2007-05-25 2008-11-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Pharmaceutical compositions comprising telomerase, and uses thereof
WO2009025871A1 (en) 2007-08-23 2009-02-26 University Of Medicine And Dentistry Of Nj Telomerase reverse transcriptase variant
CN101848925A (zh) * 2007-09-05 2010-09-29 健泰科生物技术公司 有生物学活性的、含c-端精氨酸的肽
US8252282B2 (en) 2008-06-19 2012-08-28 University Of Medicine & Dentistry Of New Jersey Nuclear telomerase reverse transcriptase variant
KR20100006939A (ko) * 2008-07-10 2010-01-22 한국생명공학연구원 융합 단백질 전달을 통한 세포의 리프로그래밍 방법
ES2334315B1 (es) 2008-07-29 2011-02-28 Universitat Pompeu Fabra Peptidos con capacidad de penetracion celular y sus usos.
WO2010037395A2 (en) * 2008-10-01 2010-04-08 Dako Denmark A/S Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring
KR101169030B1 (ko) * 2009-01-21 2012-07-26 애니젠 주식회사 신규한 세포막 투과 도메인 및 이를 포함하는 세포내 전달 시스템
BRPI1008230B1 (pt) 2009-05-20 2019-05-28 Toray Industries, Inc. Peptídeo de penetração celular e composição farmacêutica
EP2289558A1 (en) 2009-08-25 2011-03-02 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Bisphosphonate-prodrugs
US9657068B2 (en) * 2010-02-16 2017-05-23 Ultimovacs As Telomerase polypeptide vaccine for treating cancer
KR101263212B1 (ko) 2010-05-28 2013-05-10 성신여자대학교 산학협력단 신규한 세포막 투과성 펩타이드 및 그의 용도
WO2011150494A1 (en) 2010-05-30 2011-12-08 The Governing Council Of The University Of Toronto Mitochondrial penetrating peptides as carriers for anticancer compounds
CN102311493B (zh) * 2010-07-02 2014-06-04 中国科学院上海生命科学研究院 一种抑制端粒酶活性的肽及其制备方法和应用
KR101348284B1 (ko) 2010-09-09 2014-01-03 주식회사 나이벡 인간 유래 세포 투과성 펩타이드와 생리활성 펩타이드 결합체 및 그 용도
EP3428181A3 (en) * 2012-05-11 2019-02-20 KAEL-GemVax Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
EP2873678B8 (en) * 2012-07-11 2024-07-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Conjugate comprising a cell-penetrating peptide and compositions comprising same
US20150125438A1 (en) 2012-07-20 2015-05-07 Sang Jae Kim Anti-Inflammatory Peptides and Composition Comprising the Same
TWI655204B (zh) 2012-09-19 2019-04-01 韓商傑姆維克斯＆凱爾有限公司 穿膜胜肽以及包含該胜肽之共軛物及組成物(三)
ES2999332T3 (en) 2012-09-19 2025-02-25 Gemvax & Kael Co Ltd Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate
ES2743919T3 (es) 2012-09-19 2020-02-21 Gemvax & Kael Co Ltd Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado
RU2725744C2 (ru) 2013-06-07 2020-07-03 Джемвакс Энд Каэл Ко., Лтд. Биологические маркеры, которые могут быть использованы в иммунотерапии рака
EP3020724A4 (en) 2013-07-12 2017-01-18 Gemvax & Kael Co., Ltd. Cell-penetrating peptide and conjugate comprising same
WO2016190660A1 (ko) 2015-05-26 2016-12-01 주식회사 젬백스앤카엘 신규 펩티드 및 이를 포함한 조성물
WO2017066349A1 (en) 2015-10-13 2017-04-20 Symic Ip, Llc Ve-cadherin binding bioconjugate

Also Published As

Publication number Publication date
EP2899201A4 (en) 2016-06-01
JP6517692B2 (ja) 2019-05-22
EP3611184A1 (en) 2020-02-19
TW201416446A (zh) 2014-05-01
JP7007423B2 (ja) 2022-01-24
JP2016500513A (ja) 2016-01-14
JP2019176854A (ja) 2019-10-17
US11844845B2 (en) 2023-12-19
KR102201429B1 (ko) 2021-01-12
US9572900B2 (en) 2017-02-21
TWI616531B (zh) 2018-03-01
KR20150060764A (ko) 2015-06-03
JP2020178689A (ja) 2020-11-05
JP2022062012A (ja) 2022-04-19
CN104981478B (zh) 2019-02-22
US20150343095A1 (en) 2015-12-03
US10245327B2 (en) 2019-04-02
EP2899201B1 (en) 2019-09-11
ES2758451T3 (es) 2020-05-05
CN113699133A (zh) 2021-11-26
EP3611184B1 (en) 2024-12-11
WO2014046490A1 (ko) 2014-03-27
US20240181090A1 (en) 2024-06-06
JP7627726B2 (ja) 2025-02-06
US20190269803A1 (en) 2019-09-05
US20170112942A1 (en) 2017-04-27
JP6708770B2 (ja) 2020-06-10
CN104981478A (zh) 2015-10-14
CN107312759A (zh) 2017-11-03
EP3611184C0 (en) 2024-12-11
JP7328375B2 (ja) 2023-08-16
JP2023153945A (ja) 2023-10-18
EP2899201A1 (en) 2015-07-29
CN113699133B (zh) 2024-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2999332T3 (en) Cell penetrating peptide, conjugate comprising the same, and composition comprising conjugate
ES2802253T3 (es) Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado
ES2743919T3 (es) Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado
ES2981865T3 (es) Conjugado que comprende un péptido de penetración celular y composiciones que comprenden el mismo