ES2928664T3

ES2928664T3 - Composiciones de insulina de acción rápida

Info

Publication number: ES2928664T3
Application number: ES16771021T
Authority: ES
Inventors: Michael Patrick Akers; Michael Edward Christe; Thomas Andrew Hardy; Ranajoy Majumdar; Chi A Nguyen; Chad D Paavola; Virender Kumar Sarin; Nanette Elizabeth Schulte
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2015-08-27
Filing date: 2016-08-19
Publication date: 2022-11-21
Anticipated expiration: 2036-08-19
Also published as: MD3340966T2; PE20180782A1; US20170056478A1; JO3749B1; JP6359780B2; RS63731B1; ECSP18014922A; LT3340966T; IL256939A; AU2016310475A1; TWI614025B; AU2016310475B2; CN107920992A; MX2018002482A; EP3340966A1; PT3340966T; DOP2018000059A; US20210169988A1; KR20180033276A; ZA201800511B

Abstract

La invención es una composición farmacéutica de insulina humana o análogo de insulina que incluye citrato, treprostinil y agentes estabilizantes, que tiene una acción farmacocinética y/o farmacodinámica más rápida que las formulaciones comerciales de productos análogos de insulina existentes y que es estable para uso comercial. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones de insulina de acción rápida

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de la diabetes con el fin de contrarrestar las excursiones postprandiales de glucosa en sangre y para el tratamiento agudo de la hiperglucemia. La composición, que comprende una insulina, citrato, treprostinil, cinc, un conservante y uno o más agentes estabilizadores adicionales seleccionados entre los compuestos que contienen magnesio y el cloruro de sodio, tiene una absorción más rápida de la insulina desde los sitios de inyección que las composiciones de insulina comerciales existentes y que es estable para su uso comercial. La composición es útil para proporcionar actividad de insulina a la hora de la comida, para uso en infusiones subcutáneas de insulina continuas (CSII) o un tratamiento agudo para la hiperglucemia cuando se necesita insulina.

El perfil de acción temporal de la insulina es importante para el control de los niveles de glucosa en sangre posprandiales. En las personas sanas, el páncreas segrega un pico de insulina en respuesta a los alimentos absorbidos, lo que provoca un aumento de los niveles de insulina en la sangre en varios minutos. En los individuos con diabetes de tipo 1 y en ciertos individuos con diabetes de tipo 2, debe administrarse insulina; sin embargo, la insulina administrada entra en la sangre lentamente desde el espacio subcutáneo. Una liberación inadecuada de insulina y un inicio demasiado lento al principio de la comida conducen a una hiperglucemia durante o inmediatamente después de la comida. Una duración prolongada de la acción del espacio subcutáneo conduce a un exceso de insulina entre las comidas que puede causar hipoglucemia postprandial.

Se han llevado a cabo esfuerzos previos para reducir el tiempo de acción de los productos de insulina. Los primeros esfuerzos para desarrollar estos productos incluyeron el desarrollo de nuevos análogos de insulina de "acción rápida", como la insulina lispro (^hU^mALOG®), la insulina aspart (NOVOLOG®) y la insulina glulisina (APIDRA®). La insulina lispro y la insulina aspart consiguen una acción rápida por medio de cambios en las secuencias de aminoácidos de la insulina humana que debilitan la interfaz dímero-dímero y alteran la estabilidad hexamérica en condiciones subcutáneas. La insulina glulisina también incluye cambios en las secuencias de las cadenas de aminoácidos de la insulina humana, y también carece de cinc y no forma hexámeros estabilizadores. Otro análogo de la insulina de acción rápida, pero aún en desarrollo, Fluorolog, incluye un único átomo de flúor unido al residuo Phe en la posición 24 de la cadena B de la insulina.

Los análogos de la insulina de acción rápida, insulina lispro, aspart y glusina empezaron a estar disponibles en la década de 1990 y principios de la de 2000. Sin embargo, incluso con los denominados análogos de insulina de acción rápida, el nivel máximo de insulina no se alcanza hasta 50 a 90 minutos después de la inyección. Esto es más lento que la insulina que libera un páncreas que funciona normalmente y no siempre coincide con los perfiles de absorción de glucosa.

Otra vía para lograr una acción rápida que se ha explorado es el uso de ingredientes o excipientes que mejoran el perfil de tiempo de acción de la insulina cuando se proporciona en combinación con ésta. Por ejemplo, el documento U.S. 8,324,157 afirma que se puede conseguir un inicio de acción más rápido en comparación con las terapias de insulina existentes añadiendo un compuesto nicotínico, tal como la nicotinamida, y el aminoácido arginina, y opcionalmente ácido glutámico. El documento US2013/0231281 desvela composiciones que comprenden una insulina y oligosacáridos, solos o en combinación con un compuesto polianiónico y afirma que dichas composiciones son de acción rápida. El documento US2014/0113856 desvela composiciones que contienen insulina en combinación con un quelante de cinc, tal como el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), otro excipiente descrito en la publicación como agente de "disolución/estabilización", tal como el ácido cítrico o el citrato de sodio, y un compuesto que contiene magnesio, y afirma que dichas composiciones tienen tasas de absorción más rápidas y disminuyen las concentraciones máximas. El documento US2015/0065423 describe composiciones que comprenden un péptido y un agente vasodilatador, desvela listas de agentes vasodilatadores de tres categorías diferentes, y proporciona datos sobre composiciones que contienen lispro de insulina y nitroglicerina y afirma que dichas formulaciones son de acción rápida.

El documento WO2015/120457 desvela formulaciones que contienen insulina en combinación con un quelante de cinc tal como el ácido etilendiamino-tetraacético (EDTA), un agente de disolución/estabilización tal como el ácido cítrico, una sal de magnesio, un compuesto de cinc y, opcionalmente, excipientes adicionales.

A pesar de los esfuerzos descritos anteriormente, sigue existiendo la necesidad de composiciones de insulina, destinadas a ser utilizadas durante las comidas, que tengan una absorción más rápida de la insulina en la sangre desde el lugar de la inyección; un inicio de acción más rápido que los productos de insulina existentes; y una estabilidad química y física durante el almacenamiento. La presente invención pretende proporcionar composiciones que satisfagan estas necesidades.

Sorprendentemente, se ha descubierto que las composiciones que contienen ciertas concentraciones tanto de citrato como de treprostinil tienen un perfil de acción temporal más rápido que las composiciones de insulina existentes en el mercado, y que la estabilidad química y física de las composiciones que contienen esas concentraciones tanto de citrato como de treprostinil puede mantenerse, sin eliminar las mejoras en la acción temporal, incluyendo en las composiciones cinc y uno o más agentes estabilizadores adicionales, tales como un tensioactivo, cloruro de magnesio o cloruro de sodio.

Por consiguiente, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden: una insulina; citrato, en una concentración de 5 a 25 mM; treprostinil, en una concentración de 0,04 a 20 pg/mL; cinc, en una concentración suficiente para proporcionar al menos 2 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina; un conservante; y uno o más agentes estabilizadores adicionales seleccionados entre compuestos que contienen magnesio y cloruro de sodio; y que tienen un pH de 7,0 a 7,8 a temperatura ambiente.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0.2 a aproximadamente 1 mM; poloxámero 188, en una concentración de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 0,12% p/v; cloruro de magnesio en una concentración resultante de una relación molar de cloruro de magnesio a citrato de aproximadamente 1:3; glicerol, en una concentración de aproximadamente 1 a aproximadamente 2mg/mL; y en el que el pH de la composición es de aproximadamente 7,0 a 7,8 a temperatura ambiente.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; poloxámero 188, en una concentración de aproximadamente 0,09 % p/v; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 1,61 mg/mL; y que tiene un pH de aproximadamente 7,4.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; poloxámero188, en una concentración de aproximadamente 0,06 a 0m12 % w/v; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 1,61 mg/mL; y que tiene un pH de aproximadamente 7,4.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 U/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 pg/mL; y cinc, en una concentración de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 2 mM

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 U/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 pg/mL; .cinc, en una concentración de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 2 mM; y magnesio, en una concentración que resulta en una relación molar de magnesio a citrato de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1:5.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 25 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 25 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 12 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50mM; y que tiene un pH de 7,4.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 lU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; glicerol, en una concentración de aproximadamente 12 mg/mL; y una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50mM.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,6 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; glicerol, en una concentración de aproximadamente 12 mg/mL; y una concentraciñon total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50; y que tiene un pH de aproximadamente 7,4.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; fosfato, en una concentración de aproximadamente 7mM; glicerol, en una concentración de aproximadamente 16 mg/mL a un pH de 7,4.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; y cinc, en una concentración de aproximadamente 0,7 a aproximadamente 1,7mM.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; y magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; y magnesio, en una concentración de aproximadamente 5mM.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10mM; y una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50mM.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10mM; y glicerol en una concentración de aproximadamente 12mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM; glicerol, en una concentración de aproximadamente 12 mg/mL; y una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 mM.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,7 a aproximadamente 1,7 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM; una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM; glicerol, en una concentración de aproximadamente 12 mg/mL; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM; glicerol, en una concentración de aproximadamente 12 mg/mL; y una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 mM; y metacresol, en una concentración de 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 200 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,8 mM; magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; glicerol, en una concentración de aproximadamente 12mg/mL; y una concentración total de cloruro de aproximadamente 10 a aproximadamente 50mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica de la presente invención para su uso en terapia. Más particularmente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica de la presente invención para su uso en el tratamiento de la diabetes. También se desvela, pero no se reivindica, el uso de una composición farmacéutica en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes.

Además, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica, en el que el artículo de fabricación es un vial multiuso, un cartucho, un inyector de pluma reutilizable, un dispositivo de pluma desechable, un dispositivo de bomba para terapia de infusión subcutánea continua de insulina o un sistema de cierre de contenedor para su uso en un dispositivo de bomba para terapia de infusión subcutánea continua de insulina.

Cuando se usa en la presente memoria, el término "composición" se refiere a una combinación de insulina y los otros ingredientes o excipientes en la que la insulina y los otros ingredientes o excipientes se combinan en una sola formulación combinada, típicamente en una formulación acuosa.

Cuando se usa en la presente memoria, "insulina" significa insulina humana o una variante estructural de acción rápida, mutante o análoga de la insulina humana que tiene la actividad funcional pero un inicio de acción más rápido que la insulina humana. Algunos análogos de acción rápida de la insulina humana son la insulina lispro, la insulina aspart y la insulina glulisina. La insulina para productos comerciales se puede producir por medio de procedimientos de ADN recombinante o por síntesis química. Los procedimientos recombinantes son bien conocidos y se prefieren. Una molécula de insulina humana (Núm. de CAS 11061-68-0) está formada por dos cadenas de aminoácidos, A y B, cuyas secuencias son bien conocidas.

La cadena A de la insulina humana tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Asn (SEC. ID Núm.: 1).

La cadena B de la insulina humana tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr (SEC. ID Núm.: 2). Las cadenas están unidas por dos enlaces disulfuro: CysA7-CysB7 y CysA20-CysB19, La cadena A tiene un enlace disulfuro intracadena en CysA6-CysA11. La insulina humana tiene la fórmula empírica C257H383N55O77S6 y un peso molecular de 5808.

La insulina lispro, la sustancia farmacológica de HUMALOG®, es idéntica a la insulina humana en cuanto a su secuencia primaria de aminoácidos, excepto por una inversión de la secuencia natural de prolina-lisina en la cadena B en las posiciones 28 y 29 (insulina humana 28B-L-lisina-29B-L-prolina). Insulina lispro (Núm. de CAS 133107-64-9) ha demostrado ser equipotente a la insulina humana sobre una base molar, pero su efecto tras la inyección subcutánea es más rápido y de menor duración que el de la insulina humana soluble inyectada. HUMALOG® contiene m-cresol como conservante y agente estabilizador, un modificador de la tonicidad (glicerol), un agente amortiguador (fosfato sódico dibásico), un estabilizador (óxido de cinc) y un ajuste del pH para el vehículo.

Una molécula de insulina lispro está formada por la cadena A de la insulina humana (SEC. ID Núm. 1) reticulada con la cadena B de la insulina lispro, cuya secuencia de aminoácidos viene dada por la SEC. ID Núm. 3, a continuación: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Lys Pro Thr (SEC. ID Núm.: 3).

La fórmula química de la insulina lispro es C257H383N65O77S6 y su peso molecular es aproximadamente 5808. Una unidad de insulina lispro equivale a 0,0347 mg de insulina lispro.

Insulina aspart (Núm. de CAS 116094-23-6), la sustancia farmacológica de NOVOLOG®, es otro análogo de la insulina de inicio rápido. Su estructura consiste en la cadena A de la insulina humana (SEC. ID Núm. 1) y una cadena B en la que la Pro en B28 se sustituye por Asp (insulina humana Pro-B28-Asp), como se refleja en la siguiente secuencia de aminoácidos: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Asp Lys Thr (SEC. ID Núm.: 4).

La insulina aspart (insulina humana de ácido aspártico 28B) tiene la fórmula empírica C256H381N65O79S6 y un peso molecular de aproximadamente 5826. Una unidad de insulina aspart corresponde a 6 nmol, lo que corresponde a 0,035 mg de insulina aspart anhidra sin sal.

Insulina glulisina (Núm. de CAS 207748-29-6), la sustancia farmacológica de APIDRA®, es otro análogo de la insulina de inicio rápido. Una molécula de insulina glulisina está formada por la cadena A de la insulina humana (SEC. ID Núm. 1) y una cadena B modificada (Asn-B3-Lys, Lys-B29-Glu) en comparación con la insulina humana, como se refleja en la siguiente secuencia de aminoácidos: Phe Val Lys Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Glu Thr (SEC. ID Núm.: 5).

La insulina glulisina (ácido 3B-lisina-29B-glutámico-insulina humana) tiene la fórmula empírica C258H384N64O78S6 y un peso molecular de 5823. Una unidad de insulina glulisina corresponde aproximadamente a 0,0349 mg de insulina glulisina.

El siguiente esquema representa las secuencias de aminoácidos y los enlaces disulfuro de la insulina humana y de los análogos de la insulina de acción rápida que están actualmente aprobados para su uso en el tratamiento de las excursiones de la glucosa en sangre durante las comidas

Cadena A de insulina humana

Glv lie Val Giu Gln Cvs Cys Thr Ser lie C> s Ser Leu T\ rGIn Leu Glu Asn

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr

Lys (giuhsine)

Leu Val Cvs Gh Glu Arg Gly Phe Phe TvrThr Pro LvsThr

Glu (glulisine)

-------------- ' Asp (aspart)

Lys Pro (lispro)

En ciertas realizaciones, las composiciones de la presente invención tienen concentraciones de insulina de aproximadamente 40 a aproximadamente 500 UI/mL. En ciertas realizaciones, las composiciones de la presente invención tienen concentraciones de insulina de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 UI/mL. En ciertas realizaciones, las composiciones de la presente invención tienen concentraciones de insulina de aproximadamente 100 a aproximadamente 300 UI/mL. En ciertas realizaciones, las composiciones de la presente invención tienen concentraciones de insulina de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL. En ciertas realizaciones preferentes, las composiciones comprenden unas 100 U/mL o unas 200 U/mL.

En una realización, la insulina se selecciona del grupo que consiste en la insulina humana, o una variante estructural de acción rápida, mutante o análoga de la insulina humana, tal como la insulina lispro, la insulina aspart o la insulina glulisina. En una realización preferida, la insulina es una insulina lispro.

Las mejoras en el perfil de tiempo de acción de la insulina demostradas en la presente invención se logran mediante el uso de ciertas concentraciones específicas de citrato y treprostinil.

El término "citrato" se refiere a cualquier compuesto que contiene citrato de ion, que tiene el nombre químico de 2-hidroxipropano-1,2,3-tricarboxilato, fórmula molecular C6H5O7'3, y peso molecular de 189. El ion citrato está ampliamente distribuido en plantas y animales y es un componente natural de la dieta. Es un metabolito común en el metabolismo oxidativo y un componente importante del hueso. La Administración de Alimentos y Medicamentos de EE.UU. considera que un número de citratos son GRAS (generalmente considerados seguros) para su uso en alimentos, entre ellos los siguientes:

Varios compuestos que contienen citrato también se incluyen como ingredientes en los productos farmacéuticos parenterales de acuerdo con la base de datos de ingredientes inactivos de la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos, que incluyen, por ejemplo, el ácido cítrico, el ácido cítrico monohidratado, el ácido cítrico anhidro, el citrato de sodio, el citrato trisódico anhidro, el citrato trisódico dihidratado. El compuesto de citrato particular utilizado en las composiciones de la presente invención puede ser la forma ácida o varias formas de sal, especialmente las sales alcalinas (por ejemplo, de sodio y potasio) y/o los mono o dihidratos de las mismas. De ellos, se prefiere el citrato de sodio.

Se ha descubierto que la concentración de citrato que puede utilizarse en composiciones que son a la vez de acción rápida y estables oscila entre unos 5 y unos 25 mM. Ciertas composiciones tienen concentraciones de citrato de aproximadamente 15, aproximadamente 20 o aproximadamente 25 mM. Se ha comprobado que las concentraciones más altas de citrato pueden dar lugar a mayores mejoras en el tiempo de acción, pero también pueden dar lugar a mayores responsabilidades desde el punto de vista de la estabilidad. Por lo tanto, las composiciones con concentraciones de citrato en el extremo superior del intervalo requieren agentes estabilizadores adicionales para tener estabilidad química y física para el almacenamiento y uso a largo plazo, como se describe con más detalle a continuación.

El treprostinil es un análogo sintético de la prostaciclina, y tiene el nombre químico de ácido (1R,2R,3aS,9aS)-[[2,3,3a,4,9,9a-Hexahydro-2-hidroxi-1-[(3S)-3-hidroxioctil]-1H-benz[f]inden-5-il]oxi]acético (N° CAS 81846-19-7), con un peso molecular de 390,52 y una fórmula molecular de C23H34O5, el Treprostinil es el ingrediente activo de los productos farmacéuticos comerciales vendidos bajo los nombres comerciales de Remodulin®, Tyvaso® y Orenitran™, que están indicados para el tratamiento de la hipertensión arterial pulmonar para disminuir los síntomas asociados al ejercicio (Remodulin®) y para mejorar la capacidad de ejercicio (Tyvaso® y Orenitran™). Tyvaso® y Orenitran™ son, respectivamente, formas de dosificación inhalatoria y oral, y Remodulin® está indicado para uso subcutáneo o intravenoso en infusión continua. Remodulin® está actualmente disponible en concentraciones de 1, 2,5, 5 y 10 mg/mL, y cada mL contiene 3 mg de m-cresol, 6,3 mg de citrato de sodio, 5,3 mg (concentraciones de 1, 2,5 y 5 mg/mL) o 4,0 mg (concentración de 10 mg/mL) de cloruro de sodio, y agua para inyección.

Al igual que el citrato, el treprostinil se incluye para contribuir a la mejora del perfil de acción temporal de la insulina. Sin embargo, a diferencia del citrato, no se ha comprobado que un aumento de la concentración de treprostinil tenga un impacto negativo en la estabilidad. Sin embargo, debido a los potentes efectos vasodilatadores del treprostinil, la concentración de treprostinil en las composiciones de la presente invención no debe ser tan alta como para causar efectos sistémicos no deseados.

Además, la cantidad de insulina, y por lo tanto el volumen de la composición, administrada a un individuo dado en un momento dado se titula en base a los niveles de glucosa en sangre del individuo y/o la ingesta de carbohidratos prevista. En consecuencia, la cantidad total de treprostinil suministrada variará de una inyección a otra. Por ejemplo, en algunas circunstancias un diabético puede desear que se le administre tan sólo 1 unidad de insulina, lo que supondría un volumen total de inyección de tan sólo 10 pL de una composición de lispro insulina de 100 U/mL. Por otra parte, los dispositivos de inyección actualmente disponibles permiten dosis de hasta 80 U en una sola inyección; el volumen total de dicha dosis a partir de una composición de 100 U/mL sería más de un orden de magnitud superior al de la dosis de 1 unidad, y algunos pacientes con diabetes de tipo 2 pueden requerir una dosis de más de 100 unidades de insulina, lo que suele exigir más de una inyección.

De este modo, en las composiciones en las que la insulina y el treprostinil están presentes en una única formulación combinada, la concentración de treprostinil debe ser suficiente para contribuir a mejorar la acción temporal, incluso cuando se necesita una dosis relativamente pequeña de insulina, pero no debe ser tan alta como para causar efectos sistémicos no deseados cuando se necesita una dosis relativamente alta de insulina. La composición comprende treprostinil en una concentración de 0,04 a 20 pg/mL. En ciertas realizaciones, la composición comprende treprostinil en una concentración de aproximadamente 0,04 a aproximadamente 10 pg/mL. Una concentración preferida de treprostinil en las composiciones de insulina que tienen concentraciones de insulina que van de unas 100 a unas 200 U/mL es de unas 0,5 a unas 2 pg/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de treprostinil es de aproximadamente 1 pg/mL.

Como se ha descrito anteriormente, mientras que la adición de citrato conduce a mejoras en el tiempo de acción, también puede contribuir a mayores responsabilidades desde el punto de vista de la estabilidad. De este modo, las composiciones de la presente invención requieren uno o más agentes estabilizadores por encima de los incluidos en las formulaciones comerciales actualmente disponibles de análogos de la insulina de acción rápida. El o los agentes estabilizadores adicionales se seleccionan entre los compuestos que contienen magnesio y el cloruro de sodio.

Con respecto al cinc, las composiciones de la presente invención deben, como mínimo, incluir cinc en una concentración que proporcione al menos suficientes iones de cinc para que las moléculas de insulina formen hexámeros estabilizadores, que tienen 2 sitios de unión de cinc específicos y de alta afinidad. Véase, por ejemplo BioMetals 18:295-303 (2005), disponible en http://rd.springer.com/article/10.1007/s10534-005-3685-y. Los iones de cinc incorporados a estos hexámeros se denominan a veces cinc "ligado". Así, las composiciones de la presente invención deben incluir suficiente cinc para proporcionar al menos 2 iones de cinc por hexámero de insulina. En ciertas realizaciones de la presente invención que tienen, por ejemplo, concentraciones de insulina de aproximadamente 100 U/mL, aproximadamente 200 U/mL, aproximadamente 300 U/mL o aproximadamente 500 U/mL, la concentración mínima de cinc necesaria para proporcionar 2 iones de cinc por hexámero de insulina sería de aproximadamente 0,2 mM, aproximadamente 0,4 mM, aproximadamente 0,6 mM o aproximadamente 1 mM, respectivamente.

Sin embargo, la inclusión de un exceso de cinc -es decir, más cinc del que se uniría en los 2 sitios de unión de cinc específicos y de alta afinidad en los hexámeros de insulina descritos anteriormente- puede utilizarse para estabilizar aún más la composición. Este cinc se denomina a veces cinc "libre" o "no ligado". Las formulaciones que contienen cinc disponibles actualmente incluyen entre 2 y 4 iones de cinc por hexámero de insulina. Las formulaciones de 100 U/mL de insulina lispro (HUMALOG®) e insulina aspart (NOVOLOG®) tienen aproximadamente 3 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina, lo que corresponde a una concentración de aproximadamente 0,3 mM. La formulación de 200 U/mL de HUMALOG® disponible actualmente tiene aproximadamente 3,5 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina, lo que corresponde a una concentración de cinc de aproximadamente 0,7 mM. La formulación actual de 100 U/mL de insulina humana comercializada por Eli Lilly and Company (HUMULIN® R) contiene aproximadamente 2,3 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina, lo que corresponde a una concentración de cinc de aproximadamente 0,23 mM.

En ciertas composiciones de la presente invención, se ha encontrado que la inclusión de un exceso de cinc libre o no unido -es decir, cinc que no está unido en los 2 sitios específicos de unión de cinc de alta afinidad en los hexámeros de insulina descritos anteriormente- tiene un efecto estabilizador. Las composiciones que tienen aproximadamente 100 U/mL de insulina lispro y concentraciones de cinc de hasta aproximadamente 1 mM (lo que constituiría aproximadamente 0,2 mM de cinc ligado y aproximadamente 0,8 mM de cinc no ligado o libre) han resultado ser tanto de acción rápida como estables. Sin embargo, la inclusión de demasiado cinc libre o no unido puede atenuar las mejoras en el tiempo de acción. Por ejemplo, una composición que tiene aproximadamente 00 U/mL de insulina lispro con una concentración de cinc de aproximadamente 5 mM (que constituiría aproximadamente 4,8 mM de cinc no ligado) se encontró que no tenía las mejoras en el tiempo de acción visto en las composiciones con concentraciones de cinc más bajas. En ciertas realizaciones, la concentración de cinc oscila entre aproximadamente 0,2 a aproximadamente 2mM; aproximadamente 0,3 a aproximadamente 1,7 mM; aproximadamente 0,7 a aproximadamente 1,7 mM; aproximadamente 0,4 a aproximadamente 1mM, aproximadamente 0,4 a 0mM 8 mM o aproximadamente entre 0,6 y 0,9 mM. En ciertas realizaciones, la composición de cinc es de aproximadamente 0,3 mM, aproximadamente 0,4 mM, aproximadamente 0,5 mM, aproximadamente 0,6 mM,, aproximadamente 0,7 mM, aproximadamente 0,8 mM, aproximadamente 0,9 mM; aproximadamente 1 mM, aproximadamente 1,25 mM o aproximadamente 1,7 mM. En ciertas realizaciones que comprenden aproximadamente 100 U/mL de insulina lispro, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,6 mM. En ciertas realizaciones que comprenden aproximadamente 200 U/mL de insulina lispro, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,8 mM.

Las composiciones pueden comprender un tensioactivo. Los ejemplos de tensioactivos desvelados para su uso en composiciones farmacéuticas parenterales incluyen polisorbatos, tales como el polisorbato 20 (TWEEN® 20), polietilenglicoles tales como PEG 400, PEG 3000, TRITON™ X-100, polietilenglicoles tales como el polioxietileno (23) lauril éter (Núm. de CAS: 9002-92-0comercializado con el nombre comercial BRIJ®), ácidos grasos alcoxilados, tales como MYRJ™, polipropilenglicoles, copolímeros en bloque como el poloxámero 188 (Núm. CAS 9003-11-6, comercializado con el nombre comercial de PLURONIC® F-68) y poloxámero 407 (PL^uR^oNIC® F127), ésteres alquílicos de sorbitán (por ejemplo, SPAN®), aceite de ricino polietoxilado (por ejemplo, KOLLIPHOR®, CREMOPHOR®) y trehalosa y sus derivados, tales como el éster de laurato de trehalosa. En ciertas realizaciones, el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en polioxietileno (23) lauril éter, poloxámero 188 y éster de laurato de trehalosa. Más preferente es el poloxámero 188. En ciertas realizaciones, la concentración de tensioactivo oscila entre aproximadamente 0,003 y aproximadamente 2% p/v, entre aproximadamente 0,003 y aproximadamente 0,3% p/v, o entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 0,2% p/v. En las realizaciones preferentes en las que el tensioactivo es poloxámero 188, la concentración de poloxámero 188 oscila entre aproximadamente 0,06 y aproximadamente 0,12 p/v. En ciertas realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,06% p/v. En otras realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,09% p/v. En otras realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,12% p/v.

Otro agente estabilizador que puede utilizarse en las composiciones de la presente invención es el magnesio, que puede proporcionarse, por ejemplo, por medio de la adición de un compuesto que contenga magnesio, como el cloruro de magnesio, que tiene una fórmula molecular de MgCh y un peso molecular de 95,211. Mientras que el MgCl2 puede tener efectos estabilizadores en ciertas composiciones, las altas concentraciones de iones cloruro (Cl-) pueden provocar la cristalización de la insulina a bajas temperaturas, y las concentraciones de magnesio (Mg+2) que superen la concentración de citrato provocarán la precipitación de la insulina. De este modo, la cantidad máxima de magnesio que se puede incluir está limitada por la cantidad de citrato que se incluye. En ciertas realizaciones, cuando se utiliza MgCh como agente estabilizador en las composiciones de la presente invención, la relación molar entre el magnesio y el citrato oscila entre aproximadamente 1:10 y aproximadamente 1:2. En ciertas realizaciones, la relación de magnesio oscila entre 1:1 y 1:5 aproximadamente. Preferentemente, la relación molar entre el cloruro de magnesio y el citrato oscila entre 1:3 y 1:5 aproximadamente. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio oscila entre aproximadamente 1 y 15 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio oscila entre aproximadamente 1 y 5mM, entre 5 y aproximadamente 10mM o entre 10 y aproximadamente 15 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio es de aproximadamente 2,5, aproximadamente 5, aproximadamente 7,5 o aproximadamente 10 mM.

Otro agente estabilizador que puede utilizarse en las composiciones de la presente invención es un compuesto que contiene cloruro, tal como el cloruro de sodio, que tiene una fórmula molecular NaCl y un peso molecular de 58,44. El cloruro de sodio se utiliza en algunas formulaciones actualmente disponibles de análogos de insulina de acción rápida, tales como APTDRA® (insulina glulisina), que comprende 5 mg/mL de cloruro de sodio, NOVOLOG® (insulina aspart), que comprende 0,58 mg/mL de cloruro de sodio. En ciertas realizaciones de la presente invención en las que se utiliza cloruro de sodio como agente estabilizador, la concentración de cloruro de sodio oscila entre 1 y 50 mM aproximadamente. En ciertas realizaciones de la presente invención en las que se utiliza cloruro de sodio como agente estabilizador, la concentración de cloruro de sodio oscila entre 10 y 40 mM aproximadamente. En ciertas realizaciones, la concentración de cloruro de sodio oscila entre 15 y 25 mM aproximadamente. En ciertas realizaciones, la concentración de cloruro de sodio es de aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 7, aproximadamente 8, aproximadamente 9, aproximadamente 10, aproximadamente 11, aproximadamente 12, aproximadamente 13, aproximadamente 14, aproximadamente 15, aproximadamente 16, aproximadamente 17, aproximadamente 18, aproximadamente 19 o aproximadamente 20 mM.

Tanto el MgCl2 como el NaCl dan lugar a la adición de iones de cloruro (Cl-), y si el contenido total de cloruro de la composición es demasiado alto, la insulina en la composición puede cristalizar a bajas temperaturas y también puede provocar inestabilidad a altas temperaturas. Por lo tanto, si se utilizan MgCh y/o NaCl como agentes estabilizadores, debe tenerse en cuenta el contenido total de cloruro de la composición. A fin de determinar el contenido total de cloruro de una composición, hay que tener en cuenta no sólo los iones de cloruro que se pueden añadir a la composición por medio de la adición de cloruro de magnesio y/o cloruro de sodio como agentes estabilizadores, sino también por medio de la adición de otros componentes, por ejemplo, con el ingrediente farmacéutico activo (API) a granel de la insulina, por medio de la adición de pequeñas cantidades de HCl que pueden ser necesarias para ajustar el pH, y/o en relación con el suministro de Zn, que se puede añadir en forma de solución preparada por medio de la solubilización de óxido de cinc (ZnO) con HCl. Por lo tanto, la concentración total de cloruro de todas las fuentes debe ser considerada si se va a utilizar MgCh y/o NaCl como agentes estabilizadores. En cuanto a las concentraciones, se ha observado la cristalización de la insulina a baja temperatura en composiciones que contienen alrededor de 100 mM de NaCl, pero no se observaron tales problemas en composiciones que contenían hasta alrededor de 30 mM de cloruro total. Además, los problemas de cristalización a baja temperatura asociados con concentraciones de cloruro relativamente altas también se han encontrado sensibles a las concentraciones de citrato. Así, las composiciones de la presente invención que tienen concentraciones de citrato en el extremo inferior del intervalo previsto en la presente memoria pueden ser más tolerantes a concentraciones de cloruro relativamente más altas que las composiciones que tienen concentraciones de citrato en el extremo superior del intervalo previsto en la presente memoria. Por ejemplo, se ha observado que la adición de concentraciones de cloruro de sodio tan altas como 50 a 75 mM a formulaciones que contienen 25 mM de citrato conduce a problemas de cristalización a baja temperatura, pero tales problemas no se observan de forma consistente ni cuando se añade 50 mM de cloruro de sodio a una formulación de 15 mM de citrato ni cuando se añade 25 mM de cloruro de sodio a una formulación de 25 mM de citrato. El cloruro total añadido mediante el uso de NaCl y/o MgCh como agentes estabilizadores no debe ser superior a unos 50 mM. En ciertas realizaciones de la presente invención, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 10 y aproximadamente 50 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 13 y aproximadamente 45 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 20 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 35 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 20 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro es de aproximadamente 15mM; aproximadamente 16 mM; aproximadamente 17 mM; aproximadamente 18 mM; aproximadamente 19mM; aproximadamente 20 mM, aproximadamente 21 mM, aproximadamente 22 mM, aproximadamente 23 mM, aproximadamente 24 mM o aproximadamente 25 mM.

En ciertas realizaciones, la composición puede incluir más de un agente estabilizador adicional para garantizar que la composición mantenga un perfil de estabilidad comercialmente aceptable. Las composiciones de la presente invención incluyen exceso de cinc o magnesio. Las composiciones de la presente invención pueden incluir cinc, un tensioactivo, tal como el poloxámero 188, y cloruro de magnesio o cloruro de sodio.

Las composiciones de la presente invención incluyen uno o más conservantes, que proporcionan propiedades antimicrobianas y pueden proporcionar además beneficios de estabilidad. Las composiciones son estériles cuando se producen por primera vez, sin embargo, cuando la composición se suministra en un vial o cartucho de uso múltiple, se suele añadir un compuesto conservante antimicrobiano o una mezcla de compuestos que sea compatible con los demás componentes de la formulación con la suficiente fuerza para cumplir los requisitos reglamentarios y de farmacopea en materia de conservantes antimicrobianos. Véase Monografías de la Farmacopea de los Estados Unidos. Insulina lispro inyectable. USP29-NF24; Monografías de la Farmacopea Británica 2008 Volumen III: Insulin aspart injection; U.S. Pharmacopeia Monographs. Insulin assays; and U.S. Pharmacopeia general chapters. USP29-NF24. Rockville, MD: Convención Farmacopea de los Estados Unidos; 2005. Antimicrobial effectiveness testing;; págs. 2499 a 2500. Los conservantes preferidos son los ácidos arílicos y los compuestos fenólicos, o las mezclas de dichos compuestos. Las concentraciones efectivas se pueden determinar fácilmente mediante el uso de los procedimientos mencionados anteriormente. Entre los conservantes utilizados habitualmente en los productos de insulina se encuentra el fenol (Núm. de CAS 108-95-2fórmula molecular C6H5OH, peso molecular 94,11), y el m-cresol (Núm. de CAS 108-39-4fórmula molecular C7H8O, peso molecular 108,14). Las composiciones comerciales actuales, por ejemplo, contienen 3,15 mg/mL de m-cresol (HUMALOG® y APIDRA®), 1,72 mg/mL de m-cresol y 1,50 mg/mL de fenol (NOVOLOG®), y 2,5 mg/mL de m-cresol (HUMULIN® R U-500). En una realización, el conservante se selecciona del grupo que consiste en fenol y meta-cresol. Preferentemente, el conservante es metacresol. En ciertas realizaciones, la concentración de metacresol es de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 3,8 mg/mL. Preferentemente, la concentración de metacresol es de aproximadamente 3,15 mg/mL.

Es deseable igualar aproximadamente la tonicidad (es decir, la osmolalidad) de los fluidos corporales en el lugar de la inyección lo más cerca posible cuando se administran las composiciones porque las soluciones que no son aproximadamente isotónicas con los fluidos corporales pueden producir una dolorosa sensación de escozor cuando se administran. Por lo tanto, es deseable que las composiciones sean aproximadamente isotónicas con los fluidos corporales en los lugares de inyección. Si la osmolalidad de una composición en ausencia de un agente de tonicidad es suficientemente menor que la osmolalidad del tejido (para la sangre, aproximadamente 300 mOsmol/kg; el requisito de la Farmacopea Europea para la osmolalidad es > 240 mOsmol/kg), entonces se debe añadir generalmente un agente de tonicidad para elevar la tonicidad de la composición a aproximadamente 300 mOsmol/kg. La osmolaridad de la composición está determinada por las identidades y concentraciones de otros excipientes en la composición, que incluyen el o los agentes estabilizadores. Por lo tanto, las concentraciones de todos los diversos excipientes en una composición deben ser evaluadas para determinar si se debe añadir un agente de tonicidad y tales evaluaciones y determinaciones se hacen fácilmente utilizando técnicas estándar. Véase Remington: The Science and Practice of Pharmacy, David B. Troy y Paul Beringer, eds., Lippincott Williams & Wilkins, 2006, págs. 257 a 259 Remington: Essentials of Pharmaceutics, Linda Ed Felton, Pharmaceutical Press, 2013, págs. 277 a 300. Los agentes tonificantes típicos son el glicerol (glicerina), manitol y el cloruro de sodio. Si se requiere la adición de un agente de tonicidad, se prefiere el glicerol. En ciertas realizaciones la concentración de glicerol es de aproximadamente 1 a aproximadamente 16 mg/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de glicerol es de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 mg/mL, de aproximadamente 3 a aproximadamente 4 mg/mL, de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 mg/mL, de aproximadamente 7 a aproximadamente 8 mg/mL, de aproximadamente 9 a aproximadamente 10 mg/mL, de aproximadamente 11 a aproximadamente 12 mg/mL, de aproximadamente 13 a aproximadamente 14 mg/mL, o de aproximadamente 15 a aproximadamente 16 mg/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de glicerol es de aproximadamente 5, aproximadamente 12 o aproximadamente 16 mg/mL.

El citrato, que como se ha indicado anteriormente se añade para contribuir a mejorar la acción del tiempo, es conocido por tener también propiedades amortiguadoras, pero si se desea se puede incluir un compuesto amortiguador adicional. Los ejemplos de estos compuestos amortiguadores son los tampones de fosfato, tales como el fosfato sódico dibásico, o el acetato de sodio y el tris(hidroximetil)aminometano (TRIS). Si se necesita un compuesto amortiguador adicional, se prefieren los tampones TRIS o de fosfato. El pH de las composiciones comerciales de insulina suele estar en el intervalo de 7,2 a 7,6, con 7,4 ± 0,1 como pH objetivo común. El pH de las composiciones de la presente invención es típicamente de 7,0 a 7,8 y se ajusta mediante el uso de ácidos y bases fisiológicamente apropiados, típicamente ácido clorhídrico 10% e hidróxido de sodio 10%. Preferentemente, el pH es de aproximadamente 7,4.

La vía de administración de las composiciones de la presente invención será típicamente por inyección subcutánea autoadministrada, por ejemplo, mediante el uso de una jeringa o un dispositivo de pluma, o por terapia de infusión subcutánea continua de insulina con un dispositivo de bomba de insulina, aunque también se pueden utilizar las vías intravenosa, intradérmica o intraperitoneal.

Como se ha señalado anteriormente, la presente invención también proporciona un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica. En ciertas realizaciones, el artículo de fabricación es un vial multiuso. En otras realizaciones, el artículo de fabricación es un cartucho precargado multiuso. En otras realizaciones, el artículo de fabricación es un inyector de pluma reutilizable. En otras realizaciones, el artículo de fabricación es un dispositivo de pluma desechable. En otras realizaciones, el artículo de fabricación es un dispositivo de bomba para la terapia de infusión continua de insulina subcutánea. En otras realizaciones, el artículo de fabricación es un sistema de contención de cierre para uso en una bomba para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina.

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: una insulina; citrato, en una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 mM; treprostinil, en una concentración de aproximadamente 0,04 a aproximadamente 20 pg/mL; cinc, en una concentración suficiente para proporcionar al menos 2 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina; un conservante; y uno o más agentes estabilizadores adicionales seleccionados entre compuestos que contienen magnesio y cloruro de sodio; y que tiene un pH de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 7,8 a temperatura ambiente.

En ciertas realizaciones, la concentración de cinc oscila entre aproximadamente 0,2 y 2 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cinc oscila entre aproximadamente 0,2 y aproximadamente 1 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cinc oscila entre aproximadamente 0,6 y aproximadamente 0,8 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,6 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,7 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,8 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,9 mM. En ciertas realizaciones, la composición comprende un tensioactivo, que está presente en una concentración de aproximadamente 0,003 a aproximadamente 2 % p/v. En ciertas realizaciones, el tensioactivo es poloxámero 188. En ciertas realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,06 a aproximadamente 0,12% p/v. En ciertas realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,06 p/v. En ciertas realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,09 p/v. En ciertas realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,12 p/v.

En ciertas realizaciones, el uno o más agentes estabilizadores adicionales comprenden cloruro de magnesio, que está presente en una concentración que resulta en una relación molar de cloruro de magnesio a citrato de aproximadamente 1:2 a aproximadamente 1:10. En ciertas realizaciones, la relación de magnesio oscila entre 1:1 y 1:5 aproximadamente. En ciertas realizaciones, la relación molar entre el cloruro de magnesio y el citrato oscila entre 1:3 y 1:5 aproximadamente. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio oscila entre aproximadamente 1 y 15 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio oscila entre aproximadamente 1 y 5mM, entre 5 y aproximadamente 10mM o entre 10 y aproximadamente 15 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio es de aproximadamente 2,5, aproximadamente 5, aproximadamente 7,5 o aproximadamente 10 mM. En ciertas realizaciones, el uno o más agentes estabilizadores adicionales comprenden cloruro de sodio, que está presente en una concentración de aproximadamente 10 a aproximadamente 40 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro de sodio oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro no es más de 50 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 10 y aproximadamente 50 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 13 y aproximadamente 45 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 20 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 35 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 20 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro es de aproximadamente 15mM; aproximadamente 16 mM; aproximadamente 17 mM; aproximadamente 18 mM; aproximadamente 19mM; aproximadamente 20 mM, aproximadamente 21 mM, aproximadamente 22 mM, aproximadamente 23 mM, aproximadamente 24 mM o aproximadamente 25 mM.

En ciertas realizaciones, la concentración de insulina es de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 U/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de insulina es de aproximadamente 100 a aproximadamente 300 U/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de insulina es de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 U/mL. En ciertas realizaciones, la insulina es una insulina lispro.

En ciertas realizaciones, la concentración de citrato oscila entre aproximadamente 10 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de citrato es de aproximadamente 15 mM.

La composición comprende treprostinil en una concentración de aproximadamente 0,04 a aproximadamente 20 pg/mL. En ciertas realizaciones la concentración de treprostinil es de aproximadamente 0,04 a aproximadamente 10 pg/mL. En ciertas realizaciones la concentración de treprostinil es de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 pg/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de treprostinil es de aproximadamente 1 pg.

En ciertas realizaciones, el conservante es m-cresol. En ciertas realizaciones la concentración de m-cresol es de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 3,8 mg/mL. En ciertas realizaciones, la concentración de m-cresol es de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición además comprende un agente tonificante. En una realización, el agente tonificante es glicerol. En ciertas realizaciones la concentración de glicerol es de aproximadamente 1 a aproximadamente 15 mg/mL. En ciertas realizaciones la concentración de glicerol es de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica proporciona una captación de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es al menos un 20% más rápido que para las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato o treprostinil, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tal como: tiempo hasta la concentración máxima de insulina (Tmáx.); tiempo para alcanzar la mitad de la concentración máxima de insulina (A Tmáx. temprano); tiempo para alcanzar la mitad de la concentración máxima de insulina durante la fase de declive de la curva de concentración sobre el tiempo (A Tmáx. tardío); tiempo entre A Tmáx. temprano y tardío (dispersión de Tmáx.); porcentaje de la dosis total de insulina absorbida en diferentes momentos basado en el área fraccional bajo la curva de concentración de insulina (por ejemplo, AUCo-30min, AUCo-60min, AUCo-i20min, AUCo-i80min); tiempo para alcanzar la mitad de la concentración total de insulina (T50); tiempo para alcanzar la tasa máxima de infusión de glucosa (GIRmáx.), tiempo para alcanzar la mitad de la tasa máxima de infusión de glucosa (A GIRmáx. temprano); tiempo para alcanzar la mitad de la tasa de infusión de glucosa máxima durante la fase descendente de la curva de concentración sobre el tiempo (A GIRmáx. tardío); porcentaje de glucosa total infundida en diferentes momentos basados en el área fraccional bajo la curva GIR (por ejemplo, GIR0-30min, GIR0-60min, GIR0-i20min, GIR0-i80min).

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica proporciona una captación de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es al menos un 30%, al menos un 40% y al menos un 50% más rápido que para las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato o treprostinil, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tales como los descritos anteriormente.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica proporciona una captación de insulina en la sangre, un inicio de acción y/o una duración de acción que es entre aproximadamente el 20 y el 50%, entre aproximadamente el 20 y el 30%, entre aproximadamente el 30 y el 40% o entre aproximadamente el 40 y el 50% más rápida que la de las composiciones que contienen la misma insulina pero que no contienen citrato o treprostinil, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos descritos anteriormente.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica no incluye ningún agente quelante adicional, tal como el EDTA, ningún agente vasodilatador adicional, tal como la nitroglicerina, y/o ningún oligosacárido.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir el almacenamiento de al menos 24 meses a 2 a 8 °C y hasta 28 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir el almacenamiento de al menos 36 meses a 2 a 8 °C y hasta 28 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables.

En ciertas realizaciones, la composición es estable para permitir su uso en un dispositivo de bomba para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina hasta 7 días.

La invención se ilustra además con los siguientes ejemplos, que no deben interpretarse como limitativos.

Ejemplos

Estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos

Insulina lispro formulada con 0,5 pg/ml de treprostinil y/o 15 mM de citrato de sodio

Se utilizaron cerdos miniatura de Yucatán (edad promedio 23 meses, peso corporal promedio 45 kg), diabéticos (inducidos por el aloxano), castrados y machos, con puertos de acceso vascular previamente instalados, bajo la supervisión del personal y los veterinarios. Los animales diabéticos se alojan individualmente y tienen acceso a agua fresca en todo momento. Se alimentan con dos comidas al día de una dieta estándar y reciben insulina basal y prandial de mantenimiento adecuada dos veces al día para controlar su condición de diabéticos.

Los artículos de prueba (Composiciones A, B y C en la tabla siguiente) se formulan al añadir las cantidades indicadas de citrato y/o treprostinil a un vial de Humalog®. La cantidad necesaria de treprostinil se extrae de un vial de Remodulin® de 1 mg/mL. Cada mL de Remodulin® también contiene 3 mg de m-cresol, 6,3 mg de citrato de sodio y 5,3 mg de cloruro de sodio, por lo que la adición de treprostinil a las composiciones de prueba también provoca la adición de pequeñas cantidades de estos excipientes, así como una ligera dilución de los excipientes de Humalog®. Sin embargo, se cree que estas pequeñas cantidades no afectan a las propiedades de las composiciones, por lo que no se reflejan en la Tabla 1 que aparece a continuación.

Tabla 1.

El día anterior al estudio, los animales fueron alimentados con la mitad de su ración diaria y recibieron 0,2 U/kg de Insulina Humalog® Mix 75/25 en su administración de mantenimiento de la mañana. Todos los animales del estudio pasaron la noche en ayunas y no recibieron la insulina ni la comida de la noche antes de la administración del fármaco el día del estudio.

En la mañana del estudio, todos los animales fueron colocados en arneses para su sujeción y se accedió a sus puertos de acceso vascular (equipados para la toma de muestras de sangre) y se comprobó su permeabilidad. Los animales fueron distribuidos aleatoriamente en grupos de tratamiento.

Este fue un diseño cruzado completo con n=20. Se retiene un animal de dos de las cuatro partes debido a la no patencia del puerto, por lo que las composiciones A y C son n=19 mientras que la composición B y Humalog® son n=20.

Después de recolectar dos muestras de sangre de referencia (-30 y -20 min), los animales fueron devueltos a sus corrales y se les alimentó con ~300 g. Veinte minutos después de la presentación de la comida totalmente consumida, los animales fueron inyectados con el artículo de prueba por vía subcutánea en el flanco (0 min) con una jeringa de insulina Terumo (0,3 o 0,5 ml con aguja de 1/2"). Todos los animales del estudio tuvieron acceso a agua limpia y fresca durante el resto del periodo de recolección de sangre.

Se tomaron muestras de sangre seriadas (2,0 mL cada una) de cada animal en los siguientes momentos: -30, -20 (inmediatamente después de la alimentación), 0 (justo antes de la dosis), 5, 10, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 150, 180, 240 y 360 minutos después de la dosis Sc .

Las muestras de sangre (anticoagulante: ninguno [suero]) se mantuvieron a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos pero no más de 2 horas para permitir la coagulación. A continuación, el suero se separó por centrifugación y se dividió en dos alícuotas que se almacenaron congeladas a aproximadamente -70 °C.

Las concentraciones de glucosa en suero se determinaron mediante el uso de un analizador de química clínica AU480 automatizado (Beckman Coulter, Inc., Brea, California). La alícuota para la PK fue enviada a EMD Millipore Corp., St. Charles, MO, en hielo seco por un servicio de envío al día siguiente e incluyó un manifiesto detallado de la muestra.

Los datos de la glucosa sérica se representan en la Tabla 2 a continuación como media (mg/dL) /-(SEM) a menos que se especifique lo contrario.

Tabla 2.

Las concentraciones de insulina sérica para el análisis de PK se miden mediante el uso de un RIA de insulina total Los límites inferior y superior de cuantificación para el ensayo son 20 pM y 5000 pM, respectivamente. Los valores por debajo del límite inferior de cuantificación se asumen como 20 pM. Los análisis farmacocinéticos no compartimentales se llevan a cabo con Phoenix WinNonlin v6.3. Los parámetros PK derivados de las concentraciones de insulina en suero se proporcionan en la Tabla 3 a continuación.

Tabla 3.

Este estudio apoya que las composiciones de la presente invención tienen una acción farmacocinética y/o farmacodinámica mejorada.

Insulina lispro formulada con 10 mM de citrato y/o 10 mg/mL de treprostinil

Se realiza un estudio sobre las composiciones que comprenden concentraciones variables de citrato y/o 10 pg/mL de treprostinil en cerdos miniatura de Yucatán diabéticos (inducidos por Alloxan) y castrados (edad media de 24 meses, peso corporal medio de 43 kg) siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

Los artículos de prueba (Composiciones D-H en la tabla siguiente) se formulan al añadir las cantidades indicadas de citrato y/o treprostinil a un vial de Humalog®. Al igual que en el estudio descrito anteriormente, la cantidad necesaria de treprostinil se extrae de un vial de Remodulin® de 1 mg/mL, por lo que la adición de treprostinil a las composiciones de prueba también provoca la adición de pequeñas cantidades de m-cresol, citrato de sodio y cloruro de sodio, así como una ligera dilución de los excipientes de Humalog®. Sin embargo, se cree que estas pequeñas cantidades no afectan a las propiedades de las composiciones, por lo que no se reflejan en la Tabla 4 que aparece a continuación.

Tabla 4.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo de 19 cerdos en el que cada cerdo es estudiado en cada artículo de prueba. Unos pocos animales no participan en el estudio debido a la no patencia del puerto, por lo que las formulaciones D y E son n=18 mientras que las formulaciones F-H son n=19 y Humalog® n=17.

Los datos de la glucosa sérica se representan en la Tabla 5 a continuación como media (mg/dL) /-(SEM) a menos que se especifique lo contrario.

Tabla 5.

Las concentraciones de insulina en suero y los parámetros de PK para Humalog® y las Composiciones E, F y H se generan y analizan generalmente como se ha descrito anteriormente, y los resultados de PK se proporcionan en la tabla 6 a continuación.

Tabla 6.

Insulina lispro formulada con 15 mM de citrato y 0,6-9,3 pg/mL de treprostinil

Se lleva a cabo un estudio sobre las composiciones que comprenden 15 mM de citrato, cinc y/o una variación de treprostinil en cerdos miniatura (de 25 años promedio, y peso corporal de 43kg promedio) de Yucatán diabéticos (inducidos por Alloxan), castrados, siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

Los artículos de prueba (Composiciones I-M en la tabla siguiente) se formulan al añadir las cantidades indicadas de citrato y/o treprostinil, así como MgCh y/o NaCl en las composiciones especificadas a continuación, a un vial de Humalog®. Al igual que en el estudio descrito anteriormente, la cantidad necesaria de treprostinil se extrae de un vial de Remodulin® de 1 mg/mL, por lo que la adición de treprostinil a las composiciones de prueba también provoca la adición de pequeñas cantidades de m-cresol, citrato de sodio y cloruro de sodio, así como una ligera dilución de los excipientes de Humalog®. Sin embargo, se cree que estas pequeñas cantidades no afectan a las propiedades de las composiciones, por lo que no se reflejan en la Tabla 7 que aparece a continuación.

Tabla 7.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo de 17 cerdos en el que cada cerdo es estudiado en cada artículo de prueba. Algunos animales no participan en el estudio debido a la falta de patencia del puerto o a una baja glucosa de referencia. Los datos de Humalog® son n=17, la composición I es n=17, la composición J es n = 16, la composición K es n=15, la composición L es n=16 y la composición M es n=16.

Los datos de la glucosa sérica se representan en la Tabla 8 a continuación como media (mg/dL) /- SEM a menos que se especifique lo contrario.

Tabla 8.

Las concentraciones de insulina en suero y los parámetros de PK se generan y analizan generalmente como se ha descrito anteriormente, y los resultados de PK se proporcionan en la tabla 9 a continuación.

Tabla 9.

Insulina lispro formulada con 10 pg/mL de treprostinil y 15 o 25 mM de citrato

Se realiza un estudio sobre las composiciones que comprenden 10 pg/mL de treprostinil y 15 o 25 mM de citrato en cerdos miniatura de Yucatán, diabéticos (inducidos por el aloxano) y castrados (edad media de 33 meses, peso corporal medio de 49 kg), siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

Los artículos de prueba (Composiciones N y O en la tabla siguiente) se formulan al añadir las cantidades indicadas de citrato, treprostinil, NaCl y MgCh a un vial de Humalog®. Al igual que en el estudio descrito anteriormente, la cantidad necesaria de treprostinil se extrae de un vial de Remodulin® de 1 mg/mL, por lo que la adición de treprostinil a las composiciones de prueba también provoca la adición de pequeñas cantidades de m-cresol, citrato de sodio y cloruro de sodio, así como una ligera dilución de los excipientes de Humalog®. Sin embargo, se cree que estas pequeñas cantidades no afectan a las propiedades de las composiciones, por lo que no se reflejan en la Tabla 10 que aparece a continuación.

Tabla 10.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo de 20 cerdos en el que cada cerdo es estudiado en cada artículo de prueba. Un animal no participa en el grupo de la Composición N debido a la no patencia del puerto o a la baja glucosa basal, los datos son n=19 para ese grupo. Los datos de la glucosa sérica se representan en la Tabla 11 a continuación como media (mg/dL) /- SEM a menos que se especifique lo contrario.

Tabla 11.

En conjunto, los estudios descritos anteriormente apoyan que las composiciones de la presente invención tienen una acción farmacocinética y/o farmacodinámica más rápida que las formulaciones comerciales de los productos análogos a la insulina existentes.

Estudios de estabilidad

Se evalúa la estabilidad de la insulina lispro cuando se formula con una gama de concentraciones de citrato, treprostinil y otros excipientes. Las composiciones de las formulaciones ejemplares, que se muestran en la tabla 12 a continuación, se preparan al formular el ingrediente farmacéutico activo de la insulina lispro con los otros excipientes indicados.

Tabla 12.

Las soluciones se filtran con un filtro de vacío Steriflip de 50 ml con membrana PES de 0,22 pM (Cat#: SCGP00525, EMD Millipore, Billerica, MD) y se distribuyeron en viales de 10 ml con tapa engarzada o en cartuchos de insulina de vidrio de 3 ml, y se incubaron a 4 °C y 30 °C respectivamente. Las muestras a 4 °C se almacenan sin agitación durante 64 días, mientras que las muestras a 30 °C se incuban sin agitación durante 36 días, seguidos de un período de uso simulado de 28 días. En la simulación de uso se invierte el contenedor y se extrae una muestra de cada vial o cartucho tres veces al día durante 28 días. Se realizan dos sorteos en cada punto de tiempo en días anteriores o posteriores a cualquier sábado, domingo o festivo. Se extraen alícuotas de 80 |jl de cada vial utilizando la jeringa de insulina Terumo U-100 (1/2 cc 27 G x 1^") y 30 j l de cada cartucho utilizando el HumaPen Luxura HD con la aguja Comfort Point 6mm (31 G x %").

Las muestras se recogen a partir del día 36 (día 1 del período de uso a 30 °C), el día 50 y el día 64 para ser analizadas mediante el uso decromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa (RP-HpLC) y cromatografía analítica de exclusión por tamaño (SEC).

Todas las formulaciones también se evalúan en cartuchos de insulina de vidrio de 3 mL a 37 °C mientras se agita a ~100 rpm. Esta condición pretende ser indicativa de la estabilidad en la terapia de infusión continua de insulina subcutánea. Las muestras finales de esta condición se analizan mediante RP-HPLC y SEC.

Se lleva a cabo un análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa (RP-HPLC) para evaluar la pureza de las proteínas en cada composición en los puntos de tiempo de estabilidad, mediante el uso de un detector UV a 214 nm. Cada muestra (5 j l) se separa a 40 °C mediante el uso de una columna de Zorbax 300SB-C18, de resolución rápida 4,6 X 150 mm 3,5-Micron column (pieza número 863973-902) a 40 °C a un caudal de 0,6 mL/minuto y una fase móvil A (sulfato 50 mM, pH 2,3 20% acetonitrilo (v/v)) y fase móvil B (sulfato 50 mM, pH 2,3 50% acetonitrilo (v/v)). El gradiente de la fase móvil B a los 0, 3, 15, 21, 26, 27, 27,5 y 35,0 min es de 21, 25, 25, 30, 80, 80, 21 y 21%, respectivamente. El contenido de insulina se calcula mediante el uso de RP-HPLC al combinar las integraciones del área del pico principal de insulina y el área de A21, y al dividir luego por un estándar de insulina lispro. La pérdida de insulina para las muestras de formulación en comparación con el control de Humalog® es inferior al 5% para todas las muestras hasta 64 días a 4 °C y 30 °C. El porcentaje de la muestra fuera del pico principal con A21 se calcula dividiendo el área del pico principal cromatográfico por el área total del pico y restando esa área y A21 de 100. El porcentaje fuera del área del pico principal es inferior al 1,76% para todas las muestras a 4 °C durante 64 días y al 2,48% para todas las muestras a 30 °C durante 64 días.

Cada muestra (10 jL ) se separa a temperatura ambiente mediante el uso de una columna Sepax Zenix-C SEC-80, 7,8 x 300 mm, 3 jm de partículas (Núm. de Cat. 233080-7830) a un caudal de 1,0 mL /minuto con elución isocrática de la fase móvil (0,1% de TFA, 50% de ACN) durante un tiempo de ejecución de 25 minutos.

El porcentaje de alto peso molecular (% de HMWP) se calcula por medio de la integración del % de área total de todos los picos que eluyen antes del pico principal. Los resultados (% de HMWP) figuran en las tablas siguientes. La formación de HMWP es inferior al 1% para todas las muestras hasta los 64 días a 4 °C y 30 °C, y la formación de HMWP en las muestras que contienen citrato es comparable a la formación de HMWP en las muestras de control de Humalog®.

Tabla 13. Viales almacenados a 4 °C: contenido de insulina, unidades/mL.

Tabla 14. Viales almacenados a 4 °C: otras sustancias relacionadas, por ciento.

Tabla 15. Frascos almacenados a 4 °C: especies de alto peso molecular, por ciento.

Tabla 16. Viales almacenados a 30 °C: contenido de insulina, unidades/mL.

Tabla 17. Viales almacenados a 30 °C: otras sustancias relacionadas, por ciento.

Tabla 18. Frascos almacenados a 30 °C: especies de alto peso molecular, por ciento.

Tabla 19. Cartuchos de 3 ml almacenados 14 días a 37 °C con agitación.

Se realiza un estudio de estabilidad adicional en el que las formulaciones que contienen insulina lispro y diferentes concentraciones de citrato, treprostinil, cinc y otros excipientes se someten a diferentes condiciones. Se preparan 24 formulaciones que contienen citrato y dos formulaciones de control que no contienen citrato. Las concentraciones de citrato, cloruro de magnesio, Zn, cloruro total, treprostinil y poloxámero en las formulaciones se indican en la Tabla 20.

Tabla 20. Formulaciones probadas

Se prepara una formulación madre de concentrado de lispro que comprende 200 U/mL de insulina lispro, 24,2 mg de glicerina/mL, 6,30 mg de metacresol/mL y 0,6 mM de cinc en agua para operaciones estériles a granel. La formulación se ajusta al pH con ácido clorhídrico para disolver la insulina lispro y luego se ajusta con hidróxido de sodio a un pH de 7,40.

Las formulaciones que contienen citrato se preparan al diluir el concentrado de lispro con los volúmenes apropiados de soluciones madre de excipientes: citrato de sodio, cloruro de magnesio, óxido de cinc, treprostinil y poloxamer 188. A fin de lograr el contenido de cloruro deseado, se añade una solución madre de cloruro de sodio a algunas formulaciones. A continuación, las soluciones se ajustan a un pH de 7,30 a 7,50 con NaOH o HCl y se llenan de agua hasta el volumen necesario para las operaciones estériles a granel.

Las formulaciones sin citrato se preparan al diluir el concentrado de lispro con los volúmenes adecuados de agua para operaciones estériles a granel o agua para operaciones estériles a granel y solución de cloruro de sodio. Las solución se ajusta a un pH de 7,30 a 7,50 con NaOH o HCl y se llenan de agua hasta el volumen necesario para las operaciones estériles a granel.

Las formulaciones se filtran estérilmente y luego se transfieren volumétricamente a viales de vidrio de 10 mL con un llenado de 10,3 mL, se tapan y se sellan con engarce. Se llenan 20 viales por lote.

El estudio incluye someter viales de cada formulación a una de las tres condiciones diferentes, como se describe a continuación.

Tabla 21.

Como se indica en la tabla anterior, las condiciones de estrés térmico y estrés acumulativo incluyen someter primero los viales a una simulación de estrés de envío abreviada, que se realiza como se describe en el Procedimiento 3A (2008) de la Asociación Internacional de Tránsito Seguro (ISTA). Para la condición de estrés térmico, los viales se colocan en almacenamiento vertical estático a 30°C. Para la condición de estrés acumulativo, los viales se someten a una simulación de uso por parte del paciente. La simulación de uso por parte del paciente se lleva a cabo al extraer 8 unidades de aire en cualquier jeringa de insulina, introducir la aguja en el vial mientras éste está en posición vertical, asegurárse de que la punta de la aguja no toca la solución de insulina, inyectar aire en el vial, invertir el vial y la jeringa, retirar 8 unidades de la solución del producto, eliminar cualquier burbuja de aire en la jeringa moviendo lentamente el émbolo para empujar la burbuja de vuelta al vial (repitiendo si es necesario) y ajustar el émbolo de la jeringa para que la dosis final sea de 8 unidades, retirar la jeringa y colocar el vial de nuevo en la incubadora a 30°C. Este proceso se repite en tres dosis diarias durante 32 días. Cuando no se dosifican, los viales se almacenan en posición vertical a 30°C.

La estabilidad química se comprueba por medio de cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) y HPLC de fase inversa (RP-HPLC). Se realiza un análisis RP-HPLC para evaluar la pureza de las proteínas en cada formulación mediante el uso de un detector UV a 214 nm. Cada muestra (5 j l) se separa a 40 °C mediante el uso de una columna de Halo Peptide ES-C18, 4,6 X 150 mm 2,7 (pieza número 92124-702) a 40 °C con un caudal de 1,0 mL/minuto y una fase móvil A (50 mM sulfato, pH 2,3 20% acetonitrilo (v/v)) y una fase móvil B (50 mM sulfato, pH 2,3 50% acetonitrilo (v/v)). El gradiente de la fase móvil B a los 0, 2, 17, 22, 25, 29, 29,5 y 35 min es de 25, 25, 27, 40, 90, 90, 25 y 25%, respectivamente. El contenido de insulina se calcula al combinar las integraciones de las áreas de los picos principales de insulina y de los picos B3 y dividirlas por un estándar de insulina lispro. Cada muestra (50 |jL) se separa a temperatura ambiente mediante el uso de una columna Sepax Zenix-C SEC-80, 7,8 x 300 mm, 3 |jm de partículas (Núm. de Cat. 233080-7830) a 5 °C a un caudal de 1,0 mL /minuto con elución isocrática de la fase móvil (0,1% de TFA, 50% de ACN) durante un tiempo de ejecución de 25 minutos. El porcentaje de alto peso molecular (% de HMWP) se calcula por medio de la integración del % de área total de todos los picos que eluyen antes del pico principal. Un vial de cada una de las formulaciones PP y QQ sometidas a las condiciones de estrés acumulativo no pudo ser muestreado debido a la formación de partículas. Se probaron todos los demás viales y todos los resultados estuvieron dentro de los criterios de aceptación de insulina lispro tanto para la potencia (95 -105 U/mL) como para el HMWP (NMT 1,5%).

La estabilidad física se evalúa por medio de pruebas de apariencia visual en las que se inspeccionan visualmente las muestras. Las muestras se clasifican como pases que son claros, incoloros y esencialmente libres de partículas visibles. Todas las muestras de todas las formulaciones pasan la prueba de apariencia visual en todos los puntos de tiempo en las condiciones de control y de estrés térmico. Los resultados de las pruebas de apariencia visual para la condición de estrés acumulativo se proporcionan en la tabla 22 a continuación.

Tabla 22.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende:

a. una insulina;

b. citrato, en una concentración de 5 a 25 mM;

c. treprostinil, en una concentración de 0,04 a 20 pg/mL;

d. cinc, en una concentración suficiente para proporcionar al menos 2 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina;

d. un conservante; y

f. Uno o más agentes estabilizadores adicionales seleccionados entre los compuestos que contienen magnesio y el cloruro de sodio;

y que tenga un pH de 7,0 a 7,8 a temperatura ambiente.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la concentración de cinc es de 0,2 a 2 mM.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en la que la concentración de cinc es de 0,6 a 0,8mM.

4. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el o los agentes estabilizadores adicionales comprenden un compuesto que contiene magnesio.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, en la que el compuesto que contiene magnesio está presente en una concentración que resulta en una relación molar de magnesio a citrato de 1:2 a 1:10.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 4 o de la reivindicación 5, en la que el compuesto que contiene magnesio es cloruro de magnesio.

7. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que la concentración de insulina es de aproximadamente 100 U/mL a 300 U/mL.

8. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la insulina es insulina lispro.

9. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que la concentración de citrato es de 15 a 25 mM.

10. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que la concentración de treprostinil es de 0,04 a 10 pg/mL.

11. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que el conservante es m-cresol.

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, en la que la concentración de m-cresol es de 2,5 a 3,8 mg/mL.

13. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la que el uno o más agentes estabilizadores adicionales comprenden cloruro de sodio.

14. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que la concentración de cloruro es de 10 a 50 mM.

15. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, que además comprende un agente de tonicidad.

16. La composición farmacéutica de la reivindicación 15, donde el agente de tonicidad es glicerol, donde la concentración de glicerol es de 1 a 15 mg/mL.

17. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 que comprende:

a. una insulina, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL;

b. citrato, en una concentración de 5 a 25 mM;

c. treprostinil, en una concentración de 0,5 a 2pg/mL; y

d. cinc, en una concentración de 0,2 a aproximadamente 2 mM.

18. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, en la que la concentración de citrato es de 15 a 25 mM.

19. La composición farmacéutica de la reivindicación17 o 18, en la que la concentración de cinc es de 0,6 a 0,9 mM.

20. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, comprende además un compuesto que contiene magnesio, en una concentración que da lugar a una relación molar de magnesio a citrato de 1:3 a 1:5.

21. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, que tiene un pH de aproximadamente 7,4.

22. La composición farmacéutica de la reivindicación 17 en la que:

a. la insulina lispro está en una concentración de aproximadamente 100 U/mL;

b. citrato en una concentración de aproximadamente 15 mM;

c. el treprostinil está en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; y

d. el cinc está en una concentración de aproximadamente 0,6 mM;

y que además comprende:

e. cloruro de magnesio en una concentración de aproximadamente 5 mM;

f. m-cresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL;

g. glicerol, en una concentración de unos 12 mg/mL;

y con un pH de aproximadamente 7,4.

23. La composición farmacéutica de la reivindicación 17 en la que:

a. la insulina lispro está en una concentración de aproximadamente 200 U/mL;

b. citrato en una concentración de aproximadamente 15 mM;

c. el treprostinil está en una concentración de aproximadamente 1 pg/mL; y

d. el cinc está en una concentración de aproximadamente 0,8 mM;

y que además comprende:

e. cloruro de magnesio en una concentración de aproximadamente 5 mM;

f. m-cresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y

g. glicerol, en una concentración de unos 12 mg/mL;

y con un pH de aproximadamente 7,4.

24. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, para su uso en terapia.

25. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, para su uso en el tratamiento de la diabetes.

26. Un artículo de fabricación que comprende cualquiera de las composiciones farmacéuticas de las reivindicaciones 1 a 23, en el que el artículo de fabricación se selecciona entre un vial de uso múltiple, un cartucho de uso múltiple, un inyector de pluma reutilizable, un dispositivo de pluma desechable, un dispositivo de bomba para terapia de infusión subcutánea continua de insulina y un sistema de cierre de contenedor para uso en un dispositivo de bomba para terapia de infusión subcutánea continua de insulina.