[go: up one dir, main page]

ES2268182T3 - Transporte transepitelial especifico de receptores de inmunogenes. - Google Patents

Transporte transepitelial especifico de receptores de inmunogenes. Download PDF

Info

Publication number
ES2268182T3
ES2268182T3 ES03004479T ES03004479T ES2268182T3 ES 2268182 T3 ES2268182 T3 ES 2268182T3 ES 03004479 T ES03004479 T ES 03004479T ES 03004479 T ES03004479 T ES 03004479T ES 2268182 T3 ES2268182 T3 ES 2268182T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
fcrn
pharmaceutical preparation
igg
preparation according
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES03004479T
Other languages
English (en)
Inventor
Richard S. Blumberg
Neil E. Simister
Wayne I. Lencer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Brigham and Womens Hospital Inc
Brandeis University
Original Assignee
Brigham and Womens Hospital Inc
Brandeis University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/374,159 external-priority patent/US6086875A/en
Application filed by Brigham and Womens Hospital Inc, Brandeis University filed Critical Brigham and Womens Hospital Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2268182T3 publication Critical patent/ES2268182T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6056—Antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

Una preparación farmacéutica, para administración a una barrera epitelial de un paciente para suministrar una molécula a través de la barrera epitelial, que com- prende un conjugado de un copartícipe de unión a FcRn acoplado a dicha molécula, en la que el copartícipe de unión a FcRn en el conjugado se une a FcRn humano, y en la que la preparación se formula como una cápsula, comprimido, elixir o jarabe para administración a una barrera epitelial humana.

Description

Transporte transepitelial específico de receptores de inmunogenes.
La presente invención se refiere, en general, a métodos y productos para iniciar una respuesta inmunitaria contra un antígeno, y, en particular, se refiere a la administración transepitelial de antígenos para provocar tolerancia e inmunidad.
El sistema inmunitario de un mamífero se desarrolla durante la gestación y se convierte en activo en los fetos tardíos de mamíferos. Aunque activo, aún podría ser calificado como "inmaduro" porque no ha sido provocado por antígenos hasta un punto significativo; el feto está, en gran medida, protegido de los antígenos por la madre. Sin embargo, este sistema inmunitario "inmaduro" está complementado por la transferencia de inmunoglobulina materna al feto (o, en algunos casos, al neonato) para proporcionar inmunidad humoral durante las primeras semanas de vida independiente.
Las ratas y los ratones reciben la mayoría de la inmunoglobulina G materna (IgG) como lactantes, del calostro y la leche, aunque alguna es adquirida de forma prenatal. El ganado bovino también recibe IgG del calostro. En los conejos, la IgG es transportada al feto a través del saco vitelino. Se sabe poco sobre la transferencia de IgG al feto o al neonato en los seres humanos. La mayoría de las evidencias sugieren que las madres humanas transfieren inmunidad humoral a una descendencia sólo antes del nacimiento, aunque se cree que la IgA transferida a un neonato por la leche materna juega un papel en la protección del neonato contra infecciones entéricas.
El suministro de IgG materna a los fetos de mamíferos y/o neonatos requiere transporte a través de una barrera epitelial que es, en gran medida, impermeable a las macromoléculas. El transporte de macromoléculas a través de tal barrera epitelial puede darse por mecanismos no específicos y específicos mediados por receptor. Los mecanismos no específicos mediados por receptor están representados por sucesos de cribado paracelular, cuya eficiencia está inversamente relacionada con el peso molecular de la molécula transportada. El transporte de macromoléculas como IgG a través de esta ruta paracelular es sumamente ineficiente. Las descripciones del transporte de inmunoglobulinas mediado por receptor a través de células epiteliales intestinales están limitadas, hasta ahora, al receptor de inmunoglobulina polimérica y al receptor enterocítico para IgG (receptor Fc asociado a un complejo principal de histocompatibilidad (MHC) clase I). Estos dos sistemas receptores difieren en su especificidad para el isotipo de inmunoglobulina, en la dirección de transporte de inmunoglobulina a través de la célula epitelial, y en su expresión tisular específica. Ambos pueden jugar un papel en moldear el sistema inmunitario inmaduro.
El receptor de inmunoglobulina polimérica se expresa en las superficies basolaterales de enterocitos, hepatocitos y/o en las células epiteliales del conducto biliar. Transporta IgA e IgM poliméricas a las superficies apicales (luminales), concentrando estas inmunoglobulinas para defensa antimicrobiana y exclusión de antígenos.
El receptor enterocítico para IgG, que tiene homología con el MHC clase I de cadena pesada y que está asociado con beta_{2}-microglobulina (\beta_{2}M), se expresa en los enterocitos neonatales de la rata y del ratón. La IgG es transportada de forma transcelular en dirección de luminal a serosal a través del epitelio intestinal de los neonatos de estos roedores. En la superficie apical del enterocito, la porción Fc de la IgG se une al receptor enterocítico a un pH relativamente ácido del lumen (pH de, aproximadamente, 6,0). Siguiendo transcitosis a la membrana plasmática basolateral, la descarga de la inmunoglobulina se da a un pH de los fluidos intestinales relativamente neutro (pH de, aproximadamente, 7,4). El receptor Fc neonatal de los roedores (FcRn) podría ser responsable, por lo tanto, del suministro de IgG materna al neonato y, como tal, puede ser responsable de la adquisición pasiva de IgG durante este periodo.
En los seres humanos, la IgG materna es transportada activamente a través de la placenta. Se ha buscado el receptor responsable de este transporte durante muchos años. Se han aislado de la placenta varias proteínas de unión a IgG. El Fc\gammaRII se detectó en el endotelio de la placenta y el Fc\gammaRIII en sincitiotrofoblastos. Sin embargo, ambos receptores mostraron una relativamente baja afinidad por la IgG monomérica. Recientemente se informó del aislamiento a partir de la placenta de cDNA que codifica un homólogo humano del receptor enterocítico para IgG de la rata y del ratón (Story, C.M. et al., J. Exp. Med., Vol. 180:2377-2381, Diciembre 1994). Se informa de la secuencia completa de nucleótidos y de aminoácidos deducidos. Este receptor Fc para IgG puede ser el responsable del transporte de IgG materna al feto humano (e incluso posiblemente al neonato), ya que la molécula es sumamente homóloga, sobre su marco abierto de lectura, con la secuencia de FcRn de la rata (un 69% de la identidad de nucleótidos y un 65% de la identidad predicha de aminoácidos). La así llamada inmunización pasiva en el feto humano (y, posiblemente, en el neonato humano) puede ser ahora mejor entendida.
A diferencia de la inmunización pasiva, que implica complementar el sistema inmunitario del anfitrión con anticuerpos procedentes de otro, la inmunización activa implica la estimulación del propio sistema inmunitario del anfitrión para generar la deseada respuesta inmunitaria "in vivo". Los métodos de inmunización activa más ampliamente practicados en niños y adultos implican inyecciones de un inmunógeno, una vez como dosis inicial y después al menos una vez más como dosis de refuerzo. Estos métodos sufren muchos inconvenientes serios, incluyendo los riesgos asociados con el uso de agujas que pueden transmitir enfermedades como SIDA y hepatitis. (Cuando un paciente se hace tolerante a un alergeno, los problemas se agravan en esas repetidas inyecciones que a menudo se requieren a lo largo de un gran periodo de tiempo). Además, estos métodos no necesariamente activan de forma adecuada la primera línea de defensa contra muchos patógenos, es decir, la inmunidad mucosal. Las mucosas recubren las vías respiratorias, el sistema reproductor y el tracto gastrointestinal, y esta superficie mucosa representa el primer portal de entrada de muchas enfermedades. Sería sumamente deseable una vacuna oral, que sea fácil de administrar y que active la inmunidad mucosal.
La inmunización usando vacunas orales es problemática. A menudo se consigue poca, o no se consigue, respuesta inmunitaria. Para aumentar la respuesta inmunitaria, se han acoplado antígenos de interés a portadores que son conocidos por ser fuertemente inmunógenos. Por ejemplo, investigadores han administrado antígenos usando el bacilo de Calmette-Guérin (BCG) como portador, BCG es una bacteria usada originalmente como una vacuna oral contra la tuberculosis. Un problema con tales portadores es que el paciente desarrollará anticuerpos contra el propio portador, lo que puede ser molesto si se usa de nuevo el portador para administrar un antígeno diferente al mismo paciente. Hasta la fecha, no se ha probado con éxito ninguna estrategia general para vacunas orales.
En el pasado, inmunoglobulina y porciones de la misma se han conjugado con fármacos y agentes de imagen para fijar como objetivo y destruir poblaciones celulares y para alargar la semivida de ciertos agentes. Las inmunotoxinas son un ejemplo de tales conjugados. Sin embargo, tales conjugados nunca han sido propuestos como útiles para iniciar una respuesta inmunitaria.
Un pequeño trabajo se ha centrado en la capacidad tolerogénica de inmunoglobulinas acopladas a oligonucleótidos o a proteínas características de enfermedades autoinmunitarias. (Véanse PCT WO91/08773 y Borel & Borel, Journal of Immunological Methods, 126(1990) 159-168). Este trabajo se basa en la idea de que la inducción de tolerancia puede estar fuertemente influenciada por fracciones del portador y que los portadores de inmunoglobulina parecen ser fuertemente tolerogénicos. La IgG isóloga es el portador preferido, y la administración intravenosa fue el modo usado para administrar los conjugados de IgG. Aunque este trabajo se prolonga durante más de una década, la administración por vía oral se menciona sólo una vez y sólo para conjugados donde IgA es la inmunoglobulina portadora. De este modo, aunque se conocen en la técnica los conjugados tolerogénicos de inmunoglobulina, nunca se han sugerido tales conjugados como agentes para inducir una respuesta robusta contra un antígeno característico de un patógeno. (Por el contrario, la técnica sugiere que tales conjugados, si existen, harían tolerante a un sujeto contra un patógeno que sería sumamente indeseable). Además, nunca se ha sugerido que tales conjugados serían tolerógenos efectivos cuando la inmunoglobulina es IgG y el modo de administración es la administración por vía oral.
La invención implica el descubrimiento de que los antígenos pueden estar acoplados a moléculas que se unen al receptor FcRn, como inmunoglobulinas o porciones de las mismas, y suministrados a través de las barreras epiteliales por transporte activo a través del enterocito por receptores FcRn. La inmunoglobulina o porciones de la misma se une al receptor FcRn y actúa como un portador para el antígeno ya que la inmunoglobulina o porciones de la misma es transportada a través de la barrera epitelial por transporte mediado por FcRn. El receptor FcRn está presente en el tejido epitelial humano de niños y adultos, y la invención permite, por lo tanto, estrategias efectivas para inmunizar a los seres humanos.
La invención también proporciona un método para modular el sistema inmunitario de un mamífero. Se administra una cantidad efectiva de un conjugado de un antígeno y de un copartícipe de unión a FcRn a una barrera epitelial de un mamífero que necesita tal modulación inmunitaria. El antígeno se selecciona del grupo que consta de: un antígeno que es característico de un patógeno, un antígeno que es característico de una enfermedad autoinmunitaria, un antígeno que es característico de un alergeno y un antígeno que es característico de un tumor. En realizaciones preferidas, el copartícipe de unión a FcRn es IgG no específica o un fragmento de unión a FcRn de IgG. Más preferentemente, el copartícipe de unión a FcRn es un fragmento Fc de IgG. También se prefiere que el antígeno esté acoplado covalentemente al copartícipe de unión a FcRn. Preferentemente, el conjugado se administra por vía oral al epitelio intestinal, en un aerosol a los pulmones, o por vía intranasal. Tales preparaciones pueden ser no asépticas. Pueden suministrarse, además, agentes complementarios de potenciación, como se describe a continuación.
En un primer aspecto de la invención, se proporciona una preparación farmacéutica, para administración a una barrera epitelial de un paciente para administrar una molécula a través de la barrera epitelial, que comprende un conjugado de un copartícipe de unión a FcRn acoplado a dicha molécula, en la que el copartícipe de unión a FcRn en el conjugado se une a FcRn humano, y en la que la preparación se formula como una cápsula, comprimido, elixir o jarabe para administración a una barrera epitelial humana.
En un segundo aspecto de la invención, se proporciona una preparación farmacéutica, para administración a una barrera epitelial de un paciente para administrar una molécula a través de la barrera epitelial, que comprende un conjugado de un copartícipe de unión a FcRn acoplado a dicha molécula, en la que el copartícipe de unión a FcRn en el conjugado se une a FcRn humano, y en la que la preparación se formula como un aerosol para administración a una barrera epitelial humana.
Las preparaciones farmacéuticas de la invención pueden incluir un conjugado de un antígeno y un copartícipe de unión a FcRn, en el que el antígeno se selecciona del grupo que consta de: un antígeno que es característico de un patógeno, un antígeno que es característico de una enfermedad autoinmunitaria, un antígeno que es característico de un alergeno y un antígeno que es característico de un tumor. Los copartícipes de unión a FcRn preferidos son como se describió anteriormente. El conjugado está presente en una cantidad efectiva para modular la respuesta inmunitaria de un mamífero. La preparación farmacéutica también incluye un portador farmacéuticamente aceptable. Las preparaciones farmacéuticas de la invención pueden ser formuladas en forma de dosificación unitaria construida y organizada tanto para suministrar un portador epitelial como para administración por vía oral al epitelio intestinal, administración por vía aerosol al epitelio pulmonar, y administración por vía intranasal al epitelio nasal. De este modo, pastillas que contienen IgG (o una porción de unión a FcRn de la misma) acoplada a cualquiera de los antígenos como se caracterizaron anteriormente son aceptados por la presente invención.
Las anteriores preparaciones farmacéuticas pueden ser administradas junto con agentes complementarios de potenciación, incluyendo adyuvantes, citoquinas, bioadhesivos y similares. Los mismos agentes complementarios de potenciación pueden estar acoplados a un copartícipe de unión a FcRn para facilitar el suministro de tales agentes a través de la barrera epitelial. Modos preferidos de administración incluyen, en general, dosificaciones por vía oral al epitelio intestinal, por vía aerosol a los pulmones, y por dosificación intranasal.
Realizaciones preferidas de la invención son como se describe a continuación o como se define en las sub-reivindicaciones.
En realizaciones preferidas de la invención, el conjugado incluyendo el antígeno cruza la barrera epitelial en una cantidad al menos doble de la cantidad en la que el antígeno cruza la barrera epitelial en una forma no conjugada. Así que es un objetivo de la invención desarrollar un mecanismo para incrementar la capacidad de un antígeno para cruzar una barrera epitelial.
Otro objetivo de la invención es desarrollar una nueva clase de inmunógenos y tolerógenos activos por vía oral.
Otro objetivo de la invención es desarrollar métodos mejorados para estimular la inmunidad mucosal.
La invención implica el descubrimiento de que el receptor FcRn humano está activo en el tejido epitelial adulto y el descubrimiento de que copartícipes de unión a FcRn como IgG o fragmentos Fc pueden ser usados para transportar otras moléculas, incluyendo antígenos, a través de barreras epiteliales. De esta manera, copartícipes de unión a FcRn como IgG o una porción de unión a FcRn de la misma pueden usarse para administrar un antígeno a través de una barrera epitelial al sistema inmunitario de un sujeto, iniciando, de este modo, una respuesta inmunitaria.
La invención es útil siempre que sea deseable estimular la administración de un antígeno al sistema inmunitario a través de una barrera epitelial. La invención puede ser así usada para suministrar antígenos a través del tejido epitelial intestinal, tejido epitelial pulmonar y otras superficies mucosas incluyendo las superficies nasales, superficies vaginales, superficies del colon y superficies del árbol biliar. La invención puede usarse para modular el sistema inmunitario de un sujeto tanto estimulando una respuesta de anticuerpos humorales contra un antígeno, como estimulando la actividad de células T, o estimulando la tolerancia a un antígeno. Como se usa en la presente memoria, sujeto significa: seres humanos, primates, caballos, vacas, ovejas, cerdos, cabras, perros, gatos, gallinas y roedores.
Cuando se administran antígenos tumorales, la invención puede ser usada para tratar sujetos que tienen enfermedades susceptibles de rechazo mediado por inmunidad, como tumores no sólidos o tumores sólidos de pequeño tamaño. También se contempla que la administración de antígenos tumorales por los métodos descritos en la presente memoria será útil para el tratamiento posterior para la eliminación de grandes tumores sólidos. La invención puede usarse también para tratar sujetos que se sospecha que padecen cáncer.
La invención implica la formación de un conjugado de un copartícipe de unión a FcRn y un antígeno. Por conjugado se entiende dos entidades unidas la una a la otra por cualquier medio fisicoquímico, incluyendo interacción hidrófoba entre un antígeno y las porciones hidrófobas no específicas de una molécula de anticuerpo, unión específica anticuerpo-antígeno, y acoplamiento covalente. La naturaleza del enlace preferido dependerá, entre otras cosas, del modo de administración y de los portadores farmacéuticos usados para administrar el conjugado en la barrera epitelial seleccionada. Por ejemplo, algunos enlaces no están tan bien adaptados como otros a resistir ciertos entornos como el estómago, pero pueden ser protegidos de ellos por sistemas de administración que eviten el estómago. Por supuesto, es importante que el enlace entre el copartícipe de unión a FcRn y el antígeno sea de tal naturaleza que no destruya la capacidad del copartícipe de unión a FcRn de unirse al receptor FcRn. Tales enlaces son muy conocidos por aquéllos expertos en la técnica; se proporcionan ejemplos en más detalle a continuación.
Un copartícipe de unión a FcRn significa cualquier entidad que pueda ser específicamente unida por el receptor FcRn con el consiguiente transporte activo por el receptor FcRn del copartícipe de unión a FcRn. Como se mencionó anteriormente, se ha aislado el receptor FcRn de varias especies de mamíferos, incluyendo los seres humanos. La secuencia del FcRn humano, del FcRn de la rata y del FcRn del ratón pueden encontrarse en Story, C.M. et al., J. Exp. Med., vol. 180:2377-2381, Diciembre 1994. La molécula de receptor FcRn ahora está bien caracterizada. El receptor FcRn se une a la IgG (pero no a otras clases de inmunoglobulinas como IgA, IgD, IgM e IgE) a un pH relativamente más bajo, transporta activamente la IgG de forma transcelular en dirección de luminal a serosal, y entonces libera la IgG a un pH relativamente más alto encontrado en los fluidos intersticiales. Como será reconocido por aquéllos expertos en la técnica, los receptores FcRn pueden ser aislados por clonación o usando purificación por afinidad, por ejemplo, anticuerpos monoclonales. Tales receptores FcRn aislados pueden entonces ser usados para identificar y aislar copartícipes de unión a FcRn, como se describe a continuación.
Los copartícipes de unión a FcRn incluyen la IgG completa, el fragmento Fc de la IgG, y otros fragmentos de la IgG que incluyen la región completa de unión para el receptor FcRn. La región de la porción Fc de la IgG que se une al receptor FcRn ha sido descrita basándose en cristalografía de rayos X (Burmeister, W.P. et al., Nature, 1994; 372:379-378). El área fundamental de contacto del Fc con el receptor FcRn está cerca de la unión de los dominios de C_{H}2 y el C_{H}3. Contactos potenciales son restos 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 y 314 el C_{H}2 y 385-387, 428 y 433-436 en el C_{H}3. (Estos sitios son distintos de aquéllos identificados, por comparación de subclases o por mutagénesis dirigida, como importantes para la unión del Fc al leucocito Fc\gammaRI y Fc\gammaRII). Los anteriores contactos Fc-FcRn están todos dentro de una única Ig de cadena pesada. Se ha señalado previamente que dos receptores FcRn pueden unirse a una única molécula de Fc. Los datos cristalográficos sugieren que en tal complejo, cada molécula de FcRn se une a un único polipéptido del homodímero del Fc.
Dada la anterior información, aquéllos expertos en la técnica reconocerán fácilmente que la región Fc de la IgG puede ser modificada según procedimientos bien reconocidos como la mutagénesis dirigida y similares, para producir IgG modificada o fragmentos Fc modificados o porciones de los mismos que estarán unidos por el receptor FcRn. Tales modificaciones incluyen modificaciones mínimas de los sitios de contacto del FcRn así como modificaciones dentro de los sitios de contacto que preservan o incluso intensifican la unión. Además, otros copartícipes de unión pueden ser identificados y aislados. Anticuerpos o porciones de los mismos específicos para el receptor FcRn y capaces de ser transportados por el FcRn una vez unidos, pueden ser identificados y aislados usando técnicas bien establecidas. Asimismo, bibliotecas molecularmente diversas generadas al azar pueden ser cribadas y moléculas que están unidas y son transportadas por receptores FcRn pueden ser aisladas usando técnicas convencionales. No se pretende que la invención esté limitada por la selección de ningún copartícipe de unión a FcRn particular. Donde el copartícipe de unión es IgG o una porción de unión a FcRn de la misma, la IgG o una porción de la misma puede ser preparada según procedimientos convencionales como se describe con más detalle a continuación.
El copartícipe de unión a FcRn está conjugado con un antígeno. El antígeno, como se usa en la presente memoria, se divide en cuatro clases: 1) antígenos que son característicos de un patógeno; 2) antígenos que son característicos de una enfermedad autoinmunitaria; 3) antígenos que son característicos de un alergeno; y 4) antígenos que son característicos de un tumor. Los antígenos incluyen, en general, polisacáridos, glicolípidos, glicoproteínas, péptidos, proteínas, carbohidratos y lípidos de las superficies celulares, citoplasma, núcleos, mitocondrias y similares.
Los antígenos que son característicos de un patógeno incluyen antígenos derivados de virus, bacterias, parásitos u hongos. Ejemplos de importantes patógenos incluyen Vibrio cholerae, Escherichia coli enterotóxico, rotavirus, Clostridium difficile, Shigella sp., Salmonella typhi, virus parainfluenza, virus influenza, Streptococcus pneumoniae, Borellia burgdorferi, HIV, Streptococcus mutans, Plasmodium falciparum, Staphylococcus aureus, virus de la rabia y virus de Epstein-Barr.
Los virus en general incluyen, pero no están limitados a, aquéllos pertenecientes a las siguientes familias: picornaviridae; caliciviridae; togaviridae; flaviviridae; coronaviridae; rhabdoviridae; filoviridae; paramyxoviridae; orthomyxoviridae; bunyaviridae; arenaviridae; reoviridae; retroviridae; hepadnaviridae; parvoviridae; papovaviridae; adenoviridae; herpesviridae; y poxviridae.
Las bacterias en general incluyen, pero no están limitadas a: P. aeruginosa; E. coli; Klebsiella sp.; Serratia sp.; Pseudomonas sp.; P. cepacia; Acinetobacter sp.; S. epidermis; E. faecalis; S. pneumoniae; S. aureus; Haemophilus sp.; Neisseria sp.; N. meningitidis; Bacteroides sp.; Citrobacter sp.; Branhamella sp.; Salmonella sp.; Shigella sp.; S. pyogenes; Proteus sp.; Clostridium sp.; Erysipelothrix sp.; Listeria sp.; Pasteurella multocida; Streptobacillus sp.; Spirillum sp.; Fusospirocheta sp.; Treponema pallidum; Borrelia sp.; Actinomycetes; Mycoplasma sp.; Chlamydia sp.; Rickettsia sp.; Spirochaeta; Legionella sp.; Mycobacteria sp.; Ureaplasma sp.; Streptomyces sp.; Trichomonas sp.; y P. mirabilis.
Los parásitos incluyen, pero no están limitados a: Plasmodium falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malaria; Toxoplasma gondii; Leishmania mexicana, L. tropica, L. major, L. aethiopica, L. donovani; Trypanosoma cruzi, T. brucei; Schistosoma mansoni, S. haematobium, S.japonium; Trichinella spiralis; Wuchereria bancrofti; Brugia malayi; Entamoeba histolytica; Enterobius vermicularis; Taenia solium, T. saginata; Trichomonas vaginalis, T. hominis, T. tenax; Giardia lamblia; Cryptosporidium parvum; Pneumocystis carinii; Babesia bovis, B. divergens, B. microti; Isospora belli, I. hominis; Dientamoeba fragilis; Onchocerca volvulus; Ascaris lumbricoides; Necator americanis; Ancylostoma duodenale; Strongyloides stercoralis; Capillaria philippinensis; Angiostrongylus cantonensis; Hymenolepis nana; Diphyllobothrium latum; Echinococcus granulosus, E. multilocularis; Paragonimus westermani, P. caliensis; Chlonorchis sinensis; Opisthorchis felineus, O. viverrini; Fasciola hepatica; Sarcoptes scabiei; Pediculus humanus; Phthirius pubis; y Dermatobia hominis.
Los hongos en general incluyen, pero no están limitados a: Cryptococcus neoformans; Blastomyces dermatitidis; Ajellomyces dermatitidis; Histoplasma capsulatum; Coccidioides immitis; Candida sp., incluyendo C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. guilliermondii y C. krusei; Aspergillus sp., incluyendo A. fumigatus, A. flavus y A. niger; Rhizopus sp.; Rhizomucor sp.; Cunninghammella sp.; Apophysomyces sp., incluyendo A. saksenaea, A. mucor y A. absidia; Sporothrix schenckii; Paracoccidioides brasiliensis; Pseudallescheria boydii; Torulopsis glabrata; y Dermatophytes sp.
Los antígenos que son característicos de una enfermedad autoinmunitaria serán derivados, por regla general, de la superficie celular, citoplasma, núcleo, mitocondria y similares de los tejidos de mamíferos. Ejemplos incluyen antígenos característicos de uveítis (por ejemplo, antígeno S), diabetes Mellitus, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, tiroiditis de Hashimoto, miastenia grave, mixedema primario, hipertiroidismo, artritis reumatoide, anemia perniciosa, enfermedad de Addison, escleroderma, gastritis atrófica autoinmunitaria, menopausia prematura (algunos casos), infertilidad masculina (algunos casos), diabetes juvenil, síndrome de Goodpasture, pénfigo corriente, penfigoide, oftalmia simpática, uveítis facogénica, anemia hemolítica autoinmunitaria, púrpura trombocitopénica idiopática, leucocitopenia idiopática, cirrosis biliar primaria (algunos casos), colitis ulcerativa, síndrome de Sjögren, granulomatosis de Wegener, poli/dermatomiositis, y lupus eritematoso discoide.
Los antígenos que son alérgenos son, en general, proteínas o glicoproteínas, aunque los alérgenos también pueden ser haptenos alergénicos de bajo peso molecular que inducen alergia después de combinarse covalentemente con una proteína portadora (Remington's Pharmaceutical Sciences). Alérgenos incluyen antígenos derivados de pólenes, polvo, mohos, esporas, caspa de animales, insectos y alimentos. Ejemplos específicos incluyen los urusioles (pentadecilcatecol o heptadecilcatecol) del Toxicodendron sp. como la hiedra venenosa, el roble venenoso, el zumaque venenoso, y las lactonas sesquiterpenoides de la ambrosía y plantas emparentadas.
Los antígenos que son característicos de antígenos tumorales serán derivados, por regla general, de la superficie celular, citoplasma, núcleo, orgánulos y similares de células del tejido tumoral. Ejemplos incluyen antígenos característicos de proteínas tumorales, incluyendo proteínas codificadas por oncogenes mutados; proteínas virales asociadas con tumores; y mucinas tumorales y glicolípidos. Los tumores incluyen, pero no están limitados a, aquéllos de los siguientes emplazamientos de cáncer y tipos de cáncer: labio, nasofaringe, faringe y cavidad bucal, esófago, estómago, colon, recto, hígado, vesícula biliar, árbol biliar, páncreas, laringe, pulmón y bronquios, melanoma de piel, mama, cérvix del útero, útero, ovario, vejiga, riñón, cerebro y otras partes del sistema nervioso, tiroides, próstata, testículos, enfermedad de Hodgkin, linfoma distinto del de Hodgkin, mieloma múltiple y leucemia. Las proteínas virales asociadas con tumores serían aquéllas de las clases de virus comentadas anteriormente. Los antígenos característicos de tumores pueden ser proteínas no expresadas normalmente por una célula tumoral precursora, o puede ser una proteína que habitualmente se expresa en una célula tumoral precursora, pero que tiene una mutación característica de un tumor. Una característica de un antígeno tumoral puede ser una variante mutante de la proteína normal que tiene una actividad o distribución subcelular alteradas. Las mutaciones de genes que dan origen a antígenos tumorales, además de aquéllos especificados anteriormente, pueden estar en la región codificadora, en las regiones no codificadoras 5' ó 3', o en los intrones de un gen y pueden ser el resultado de mutaciones puntuales, marcos de lectura, eliminaciones, adiciones, duplicaciones, reordenaciones cromosómicas y similares. Alguien experto en la técnica está familiarizado con la amplia variedad de alteraciones en la normal estructura y expresión del gen que da origen a antígenos tumorales. Ejemplos específicos de antígenos tumorales incluyen: proteínas como idiotipo Ig de linfoma de células B, quinasa 4 ciclinodependiente mutante de melanoma, Pmel-17 (gp100) de melanoma, MART-1 (Melan A) de melanoma, proteína p15 de melanoma, tirosinasa de melanoma, MAGE 1, 2 y 3 de melanoma, carcinoma medular de tiroides, cáncer microcítico de pulmón, cáncer escamoso de colon y/o bronquios, BAGE de vejiga, melanoma, mama, y carcinoma espinocelular, gp75 de melanoma, antígeno oncofetal de melanoma; carbohidrato/lípidos como mucina muc1 de mama, páncreas, y cáncer ovárico, gangliósidos GM2 y GD2 de melanoma; oncogenes como p53 mutante de carcinoma, ras mutante de cáncer de colon y HER-2/protooncogen neu de carcinoma de mama; productos virales como proteínas de papilomavirus humano de cánceres escamosos de cérvix y esófago. También se contempla que antígenos tumorales proteínicos pueden estar representados por moléculas de HLA como péptidos específicos derivados de toda la proteína. El procesamiento metabólico de proteínas para producir péptidos antigénicos es muy conocido en la técnica; por ejemplo, véase la patente 5.342.774 de los EE.UU. (Boon et al.). Así, el presente método abarca la administración de péptidos antigénicos y tales péptidos en un polipéptido mayor o en la proteína completa que da origen a péptidos antigénicos. La administración de péptidos o proteínas antigénicos pueden dar origen a inmunidad humoral o celular.
Generalmente, los sujetos pueden recibir una cantidad efectiva del antígeno tumoral, y/o péptido derivado de aquél, por uno o más de los métodos detallados a continuación. Dosis iniciales pueden ir seguidas por dosis de refuerzo, seguidas por protocolos normalizados de inmunización en la técnica. La administración de antígenos tumorales puede estimular, de este modo, la proliferación de linfocitos T citolíticos.
En los casos de proteínas y antígenos peptídicos, se desea enlace covalente a un copartícipe FcRn para incluir la unión por enlaces peptídicos en una única cadena de polipéptido. Se usarían métodos consolidados (Samborook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 1989) para organizar DNA que codifica una proteína de fusión que consta del péptido antigénico o proteína y un copartícipe FcRn. Este DNA estaría situado en un vector de expresión y sería introducido en células bacterianas o eucariotas por métodos consolidados. La proteína de fusión sería purificada a partir de las células o a partir del medio de cultivo por métodos consolidados.
Cuando se administran, los conjugados de la presente invención se administran en preparaciones farmacéuticamente aceptables. Tales preparaciones pueden contener, rutinariamente, concentraciones farmacéuticamente aceptables de sal, agentes de tamponamiento, conservantes, portadores compatibles, agentes complementarios de potenciación inmunitaria tales como adyuvantes y citoquinas, y, opcionalmente, otros agentes terapéuticos. De este modo, se contemplan "cócteles" que incluyen los conjugados y los agentes. Los propios agentes pueden estar conjugados a copartícipes de unión a FcRn para potenciar el suministro de los agentes a través de las barreras epiteliales.
Los conjugados de la invención pueden ser administrados "per se" (puros) o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Cuando se usan en medicina, las sales deben ser farmacéuticamente aceptables, pero sales no farmacéuticamente aceptables pueden usarse convenientemente para preparar sales farmacéuticamente aceptables de las mismas y no son excluidas del alcance de esta invención. Tales sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no están limitadas a, aquéllas preparadas a partir de los siguientes ácidos: clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, maleico, acético, salicílico, p-toluensulfónico, tartárico, cítrico, matanosulfónico, fórmico, malónico, succínico, naftalen-2-sulfónico, y bencenosulfónico. Sales farmacéuticamente pueden también ser preparadas como sales alcalinometálicas o alcalinotérreas, como sales de sodio, potasio o calcio del grupo del ácido carboxílico.
Agentes de tamponamiento adecuados incluyen: ácido acético y una sal (1-2% P/V); ácido cítrico y una sal(1-3% P/V); ácido bórico y una sal (0,5-2,5% P/V); bicarbonato de sodio (0,5-1,0% P/V); y ácido fosfórico y una sal(0,8-2% P/V). Conservantes adecuados incluyen cloruro de benzalconio (0,003-0,03% P/V); clorobutanol (0,3-0,9% P/V); parabenos (0,01-0,25% P/V) y timerosal (0,004-0,02% P/V).
El término "portador" como se usa en la presente memoria, y descrito más a fondo a continuación, significa uno o más rellenos sólidos o líquidos, diluyentes o sustancias encapsulantes que son adecuadas para la administración a un ser humano o a otro mamífero. El "portador" puede ser un ingrediente orgánico o inorgánico, natural o sintético, con el que se combina el ingrediente activo para facilitar la administración.
Los componentes de las composiciones farmacéuticas son capaces de ser mezclados junto con los conjugados de la presente invención, y uno con otro, de forma que no hay interacción que mermara sustancialmente la deseada eficiencia farmacéutica. Los componentes de las formulaciones de medicamentos orales incluyen diluyentes, agregantes, lubricantes, agentes lubricantes, desintegrantes, agentes colorantes y agentes aromatizantes. Las sustancias encapsulantes para la preparación de formulaciones orales queratinizadas incluyen acetato ftalato de celulosa, acetato ftalato de polivinilo, ftalato de hidroxipropil metil celulosa y copolímeros del éster del ácido metacrílico. Se prefieren formulaciones orales sólidas como cápsulas o pastillas. Elixires y jarabes son también formulaciones orales muy conocidas. Los componentes de las formulaciones en aerosol incluyen ingredientes activos solubilizados, antioxidantes, mezclas de disolventes y propelentes para las formulaciones de soluciones, e ingredientes activos micronizados y suspendidos, agentes dispersantes y propelentes para las formulaciones en suspensión. Las formulaciones orales, en aerosol y nasales de la invención pueden distinguirse de las preparaciones inyectables de la técnica anterior porque tales formulaciones pueden ser no asépticas, mientras que las preparaciones inyectables deben ser asépticas.
El término "adyuvante" pretende incluir cualquier sustancia que se incorpora a, o es administrada simultáneamente con, los conjugados de la invención y que potencia de forma no específica la respuesta inmunitaria en el sujeto. Los adyuvantes incluyen compuestos de aluminio, por ejemplo, geles, hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio, y el adyuvante de Freund, completo o incompleto (en el que el conjugado se incorpora en la fase acuosa de una emulsión de agua en aceite de parafina). El aceite de parafina puede ser sustituido por diferentes tipos de aceites, por ejemplo, aceite de escualeno o de cacahuete. Otros materiales con propiedades adyuvantes incluyen BCG (Mycobacterium tuberculosis atenuado), fosfato de calcio, levamisol, isoprinosina, polianiones (por ejemplo, poli A:U) leucina, toxina de la tos ferina, toxina del cólera, lípido A, saponina y péptidos, por ejemplo, muramil dipéptido. Se pueden usar también como adyuvantes sales de tierras raras, por ejemplo, de lantano y cerio. La cantidad de adyuvantes depende del sujeto y del conjugado particular usado y puede ser fácilmente determinada por expertos en la técnica sin excesiva experimentación.
Otros agentes complementarios de potenciación inmunitaria, como las citoquinas, pueden ser administrados conjuntamente con los conjugados de la invención. Las citoquinas contempladas son aquéllas que potenciarán los efectos beneficiosos que resultan de administrar los inmunomoduladores según la invención. Las citoquinas son factores que apoyan el crecimiento y la maduración de las células, incluyendo los linfocitos. Se cree que la adición de citoquinas aumentará la actividad de citoquinas estimuladas "in vivo" realizando los métodos de la invención. Las citoquinas preferidas son interleucina (IL)-1, IL-2, gamma-interferón y el factor \alpha de necrosis tumoral. Se cree que otras citoquinas útiles son IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, eritropoyetina, factor inhibidor de leucemia, oncostatina M, factor neurotrófico ciliar, hormona de crecimiento, prolactina, ligando CD40, ligando CD27, ligando CD30, alfa-interferón, beta-interferón, y factor \beta de necrosis tumoral. Otras citoquinas conocidas para modular la actividad de las células T de una manera probablemente útil según la invención son factores de estimulación de colonias y factores de crecimiento incluyendo factores estimuladores de granulocitos y/o macrófagos (GM-CSF, G-CSF y CSF-1) y factores de crecimiento derivados de plaquetas, epidérmicos, de tipo insulínico, transformadores y de fibroblastos. La selección de las citoquinas particulares dependerá de la particular modulación del sistema inmunitario que se desee. La actividad de citoquinas en particulares tipos de células es conocida por aquéllos expertos en la técnica.
Las cantidades exactas de las anteriores citoquinas usadas en la invención dependerá de diversos factores, incluyendo el conjugado seleccionado, la dosis y pauta de dosificación seleccionadas, la forma de administración y las características del sujeto. Las cantidades exactas seleccionadas pueden ser determinadas sin excesiva experimentación, particularmente ya que una cantidad umbral será cualquier cantidad que potencie la deseada respuesta inmunitaria. De este modo, se cree que son útiles cantidades de nanogramos a miligramos, dependiendo del modo de administración, aparte de ello cantidades de nanogramos a microgramos son probablemente las más útiles porque los niveles fisiológicos de citoquinas son proporcionalmente bajos.
Las preparaciones de la invención se administran en cantidades efectivas. Una cantidad efectiva es aquella cantidad de un conjugado que estimulará, a solas o junto con dosis adicionales, una respuesta inmunitaria como se desea. Esto puede implicar la estimulación de una respuesta de anticuerpos humorales que resulta en un incremento de la valoración de anticuerpos en el suero, inmunidad mucosal mejorada, una expansión clonal de linfocitos T citotóxicos o tolerancia a un antígeno, que incluye un autoantígeno. Se cree que serán efectivas dosis en el intervalo de 1 nanogramo/kilogramo a 100 miligramos/kilogramo, dependiendo de la forma de administración. Se cree que el intervalo preferido está entre aproximadamente 500 nanogramos y 500 microgramos/kilogramo, y más preferentemente entre 1 microgramo y 100 microgramos/kilogramo. La cantidad absoluta dependerá de una diversos factores, incluyendo el conjugado seleccionado, la modulación inmunitaria deseada, si la administración es en una única o en múltiples dosis, y los parámetros individuales del paciente incluyendo la edad, condición física, tamaño y peso. Para el tratamiento de un sujeto con un tumor, el tamaño, tipo, situación y metástasis del tumor pueden ser tenidos en cuenta cuando se determina la cantidad de conjugado a administrar. Estos factores son muy conocidos para aquéllos expertos en la técnica y pueden ser dirigidos sin más que una experimentación rutinaria.
Están disponibles diversas rutas de administración. La forma particular seleccionada dependerá, por supuesto, del conjugado particular seleccionado, de la condición particular que es tratada y de la dosis requerida para eficacia terapéutica. Los métodos de esta invención, por lo general, implican administrar los conjugados de la invención en una superficie epitelial. Las formas preferidas de administración son por vía oral, intrapulmonar, intrabiliar e intranasal.
Las composiciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificaciones unitarias y pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Todos los métodos incluyen la etapa de conducir el conjugado conjuntamente con un portador que constituye uno o más ingredientes secundarios. En general, las composiciones se preparan conduciendo, uniformemente e íntimamente, el conjugado conjuntamente con un líquido portador, un sólido portador finamente dividido, o ambos, y después, si es necesario, dando forma al producto.
Otros sistemas de administración pueden incluir sistemas de administración de liberación programada, liberación retrasada o liberación sostenida. Tales sistemas pueden evitar administraciones reiteradas de los conjugados de la invención, aumentando la comodidad del sujeto y del médico. Están disponibles muchos tipos de sistemas de liberación/administración y son conocidos por expertos en la técnica. Incluyen sistemas basados en polímeros como ácido poliláctico y poliglicólico, polianhídridos y policaprolactonas; recubrimientos de cera, pastillas comprimidas que usan agregantes y excipientes convencionales, y similares. Se conocen sistemas de polímero bioadhesivo para potenciar la administración de un material en el epitelio intestinal, y están descritos en la aplicación PCT publicada WO93/21906. Se describen también en la aplicación PCT publicada WO 93/19660, cápsulas para administrar agentes en el epitelio intestinal.
Ejemplos Materiales Abreviaturas
BSA, albúmina del suero bovino; cDNA, ácido desoxirribonucleico complementario; CT-B, subunidad B de la toxina del cólera; DMEM, medio de Eagle modificado por Dulbecco; DMSO, dimetilsulfóxido; DOC, desoxicolato; ECL, quimioluminiscencia aumentada; ELISA, ensayo con sustancias inmunoabsorbentes unidas a enzimas; HBSS-, solución salina equilibrada de Hank sin calcio ni magnesio; HEPES, ácido N-[2-hidroxietil]piperacin-N'-[2-etanosulfónico]; hGH, hormona humana de crecimiento; IEC, células epiteliales intestinales; KI, yoduro de potasio; MHC, complejo principal de histocompatibilidad; NaOH, hidróxido de sodio; NH_{4}Cl, cloruro de amonio; NHS-rodamina, N-hidroxisuccinimidil-rodamina; RNA, ácido ribonucleico; RT-PCR, reacción en cadena de la transcriptasa inversa-polimerasa; SATA, S-acetiltioacetato de N-succinimidilo; SDS-PAGE, electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sodio; sulfo-LC-SPDP, hexanoato de sulfosuccinimidil 6-[3-(2-piridilditio)propionamido]; sulfo-NHS-biotina, sulfosuccinimidobiotina; sulfo-SMCC, 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo.
Productos químicos
Los Kits de cDNA Cycle se compraron a Invitrogen (San Diego, CA). La polimerasa Taq se compró a Perkin-Elmer Cetus (Norwalk, CT). Los Kits de CircumVent® se compraron a New England Biolabs (Beverly, MA). Los productos químicos radionúclidos y radiactivos se compraron a DuPont/NEN (Boston, MA). HBSS- y DMEM se compraron a GIBCO/Life Technologies (Gaithersburg, MD). El RPMI 1640 se compró a Cellgro (Herndon, VA). La L-glutamina se compró a Cellgro. La proteína A-Sefarosa se compró a Pharmacia Biotech (Piscataway, NJ). La peroxidasa de estreptavidina-rábano picante, sulfo-LC-SPDP, sulfo-NHS-biotina, sulfo-SMCC, SATA y ficina inmovilizada se compraron a Pierce (Rockford, IL). Los ratones Balb/c se compraron a Charles River Laboratories (Wilmington, MA). Los kits de ECL se compraron a Amersham (Arlington Heights, IL). La plasmina, AvidChrom-proteína A, proteína G-Sefarosa, BSA, subunidad B de la toxina del cólera, anticuerpos anti-hGH y todos los demás productos químicos se compraron a Sigma (St. Louis, MO).
Ejemplo 1 Expresión de mRNA de FcRn en las células primarias y estirpes celulares del epitelio intestinal humano
Se extrajo todo el RNA de enterocitos humanos adultos por metodología estándar muy conocida en la técnica (Sambrook et al., ibid.). Se usó un microgramo de RNA de cada tipo de célula como una plantilla para preparar el sustrato de cDNA para la reacción en cadena de la polimerasa-transcriptasa inversa (RT-PCR) usando un Kit de cDNA Cycle (Invitrogen, San Diego, CA). Se realizaron treinta ciclos de PCR en el cDNA usando polimerasa Taq (Perkin-Elmer Cetus, Norwalk, CT) según las instrucciones del fabricante usando cebadores TGCTGGGCTGTGAACTG y CGCTTTTAGCAGTCGGAA. Las condiciones del ciclo de PCR fueron: desnaturalización a 94ºC durante 1 minuto, hibridación a 55ºC durante 2 minutos, y extensión a 72ºC durante tres minutos. Los productos de amplificación se separaron por electroforesis en un gel de agarosa al 1,5% y se visualizaron por tinción con bromuro de etidio, que mostró la presencia del producto de amplificación esperado de, aproximadamente, 800 pares de bases, en todas las muestras excepto en las células epiteliales adultas del colon. Para confirmar la identidad del producto de amplificación del RT-PCR, se suprimió la banda del DNA del gel de agarosa, subclonado en pCR II (Invitrogen, San Diego, CA) y se secuenció usando un kit Prism® de secuenciación cíclica por terminadores desoxi-colorantes (Applied Biosystems, Foster City, CA) usando cebadores tanto de vector como de secuencia de FcRn humano. Los productos de reacción fueron analizados en un secuenciador Applied Biosystems. La secuencia de los productos de amplificación fijó exactamente la secuencia del gen de FcRn, confirmando la identidad del gen expresado.
Ejemplo 2 Detección de mRNA de FcRn por transferencia Northern
Para confirmar la expresión del FcRn en las células adultas y estirpes celulares del epitelio intestinal humano, se preparó una transferencia Northern usando las muestras de RNA preparadas como se describió en el Ejemplo 1 a partir de enterocitos humanos adultos, y a partir de dos estirpes celulares de adenocarcinoma humano con origen en el colon, Caco-2 y HT-29. Las muestras de RNA se resolvieron por electroforesis en un gel de formaldehído/agarosa y se transfirieron a una membrana de nylon por procedimientos estándar (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 1989). La membrana se probó usando una sonda de 120 pares de bases radiomarcadas con ^{32}P de la región 3' no traducida del FcRn por métodos estándar. Los autorradiogramas de la transferencia Northern demostraron la presencia de 1,5 kilobases de hFcRn transcrito tanto en los enterocitos como en las estirpes celulares. Por lo tanto, se demostró la expresión del FcRn en células y estirpes celulares del epitelio intestinal humano por dos métodos diferentes de detección de RNA.
Ejemplo 3 Marcado e inmunoprecipitación del receptor Fc asociado a MHC Clase I (FcRn) de células epiteliales intestinales
La expresión del FcRn en células epiteliales intestinales humanas fue confirmada por inmunoprecipitación de la proteína. Las células Caco-2 fueron metabólicamente marcadas usando ^{35}S-metionina (DuPont/NEN, Boston, MA) y las proteínas fueron extraídas por métodos muy conocidos en la técnica (Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual). Se usó un antisuero específico de FcR de cadena pesada asociado a MHC clase I de conejo policlonal anti rata unido a proteína A-Sefarosa para inmunoprecipitar el FcRn a partir de los extractos celulares, usando métodos estándar (el FcRn puede ser purificado por métodos muy consolidados, Simister and Rees 1985, European J. Immunology, 15:733-8, y usado para inmunizar ratas seguido de recogida del suero, Harlow and Lane, supra.). Los inmunoprecipitados se resolvieron por SDS-PAGE y se visualizaron por autorradiografía. Se observó una proteína FcRn de 48 kilodaltons, confirmando la expresión observada al nivel del RNA.
Ejemplo 4 Expresión de la proteína FcRn en la superficie celular de células epiteliales intestinales humanas
Se separaron aproximadamente 3x10^{7} células epiteliales intestinales HT-29 de platos de cultivo hístico por métodos no enzimáticos y se lavaron cuatro veces con solución salina equilibrada de Hank enfriada con hielo que no contenía ni calcio ni magnesio (HBSS-, GIBCO/Life Technologies, Gaithersburg, MD). Para marcar proteínas de la superficie celular, las células lavadas se incubaron dos veces durante 20 minutos con 1,5 mililitros de sulfo-NHS-biotina de 0,5 mg/ml (Pierce, Rockford, IL) en DMSO. Las células marcadas se lavaron cinco veces con NH_{4}Cl 50 mM, se incubaron 20 minutos con 10 ml de RPMI 1640 (Cellgro, Rendón, VA) conteniendo L-glutamina 1 mM (Mediatech, Washington, DC), y se lavaron cuatro veces con HBSS-. Se lisaron las células, entonces se preclarificaron toda la noche con perlas de proteína A-Sefarosa (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) usando técnicas estándar muy conocidas en la técnica. Se añadieron SDS y ácido desoxicólico (DOC) al sobrenadante a unas concentraciones finales de 0,1% y 0,5%, respectivamente. Los lisados se preclarificaron con suero normal de conejo y se inmunoprecipitaron con anticuerpos Fc asociados a MHC clase I de conejo policlonal anti rata por métodos muy conocidos en la técnica. Los inmunoprecipitados se resolvieron por SDS-PAGE y se transfirieron a membranas de nitrocelulosa. La membrana de nitrocelulosa se trató para incubación con peroxidasa de estreptavidina-rábano picante diluida 1:10.000 (Pierce, Rockford, IL) como recomendaba el fabricante. La membrana se procesó entonces para detección de la peroxidasa de rábano picante unida, usando un kit ECL (Amersham, Arlington Heights, IL). Se detectó la luz emitida por descomposición del sustrato de quimioluminiscencia por exposición de la membrana a película fotosensible. La exposición de la película mostró que el FcRn se expresaba en la superficie de las células epiteliales intestinales HT-29.
Ejemplo 5 Actividad funcional de FcRn humano en la superficie celular de las células epiteliales intestinales
Para mostrar que el FcRn expresado en la superficie celular de las células epiteliales intestinales era funcional, se probó la capacidad de células Caco-2 y de células epiteliales intestinales del yeyuno (IECs) para unir fragmentos Fc de anticuerpo. Se repartieron Caco-2 e IECs de yeyuno en tubos de microcentrífuga (2x10^{6} células por tubo) y se sedimentaron a 2000 rpm durante 2-3 minutos a 4ºC. Los sedimentos celulares se lavaron una vez con DMEM conteniendo HEPES 20 mM, a pH 6,0 o pH 8,0 a 4ºC y se volvieron a suspender en 0,2 ml del mismo medio. Se transfirieron las suspensiones celulares a 12 placas de pocillos para ensayo. Se adicionó el fragmento ^{125}I-Fc (200 ng/ml, 4x10^{-9} M) en DMEM conteniendo HEPES 20 mM, KI 1,0 mM y gelatina de pescado al 0,1%, a pH 6,0 o pH 8,0 con o sin 0,5 mg/ml de IgG humana sin marcar (3,3x10^{-6} M), a cada pocillo. Se permitió a las células unirse a IgG o a Fc a 37ºC durante dos horas en una atmósfera humidificada, con un 5% de CO_{2}. Se transfirieron las células a tubos de microcentrífuga y se sedimentaron a 2000 rpm durante 2-3 minutos a 4ºC. El ^{125}I-Fc no unido fue eliminado lavando una vez los sedimentos celulares con DMEM frío conteniendo HEPES 20 mM, a pH 6,0 o pH 8,0 a 4ºC. Las células fueron degradadas en 0,5 ml de NaOH 0,1 M y la disolución resultante se transfirió a viales de centelleo. El ^{125}I se cuantificó usando un contador gamma CliniGamma 1272 (LKB Wallac, Piscataway, NJ). Tanto las células Caco-2 como las IECs adultas de yeyuno se unieron específicamente a ^{125}I-Fc a pH 6,0 pero no a pH 8,0, demostrando unión funcional pH-dependiente como se observó para el FcRn neonatal de rata y FcRn humano clonado (Story et al., J. Exp. Med. 180:2377-2381; Diciembre 1994).
Ejemplo 6 Preparación de inmunoglobulina G humana
La inmunoglobulina G no específica purificada de seres humanos, ratón, rata, cabra, cerdo, vaca, y otras especies se puede comprar a vendedores comerciales como Sigma Chemical Co., Pierce Chemical, HyClone Laboratories, ICN Biomedicals y Organon Teknika-Cappel.
La inmunoglobulina G también se puede aislar por precipitación de suero sanguíneo en sulfato de amonio. El precipitado de proteína es adicionalmente fraccionado por cromatografía de intercambio iónico o cromatografía de filtración por gel, para aislar IgG no específica considerablemente purificada. Por IgG no específica se entiende que no es dominante una única especificidad entre la población o grupo de anticuerpos.
La inmunoglobulina G también puede purificarse a partir del suero sanguíneo por adsorción a la proteína A unida a un soporte sólido como proteína A-Sefarosa (Pharmacia), AvidChrom-proteína A (Sigma), o proteína G-Sefarosa (Sigma). Otros métodos de purificación de IgG son muy conocidos para personas expertas en la técnica y se pueden usar con el objetivo de aislar IgG no específica.
Ejemplo 7 Preparación del fragmento Fc de inmunoglobulina G humana
Para preparar los fragmentos Fc de IgG humana, la IgG aislada como en el Ejemplo 6 se somete a una digestión con papaína inmovilizada (Pierce) según el protocolo recomendado por el fabricante. Otras proteasas que digieren la IgG para producir fragmentos intactos de Fc que pueden unirse a receptores Fc, por ejemplo, plasmina (Sigma) o ficina inmovilizada (Pierce), son conocidas por artesanos expertos y pueden ser usadas para preparar fragmentos Fc. La inmunoglobulina digerida es después incubada con una matriz de afinidad como proteína A-Sefarosa o proteína G-Sefarosa. Las porciones no unidas de IgG fueron eluidas de la matriz de afinidad por lavado extensivo en lotes o en forma de columnas. Las fragmentos Fc de IgG son entonces eluidos por adición de un tampón que es incompatible con la unión Fc-adsorbente. Se pueden emplear también otras metodologías efectivas en la purificación de los fragmentos Fc.
Ejemplo 8 Conjugación de compuestos a fragmentos Fc de inmunoglobulina humana
Para administrar compuestos mediante el mecanismo de transporte FcRn, tales compuestos pueden estar acoplados a la IgG completa o a fragmentos Fc. La química de reticulación y los reactivos efectivos para tales objetivos son muy conocidos en la técnica. La naturaleza del reactivo de reticulación usado para conjugar la IgG completa o los fragmentos Fc al compuesto a ser administrado no están restringidos por la invención. Se puede usar cualquier agente de reticulación a condición de que a) la actividad del compuesto esté retenida, y b) el enlace del FcRn de la porción Fc del conjugado no esté desfavorablemente afectado.
Un ejemplo de una reticulación efectiva, en un paso, de Fc y un compuesto es la oxidación de Fc con peryodato de sodio en un tampón de fosfato de sodio durante 30 minutos a temperatura ambiente, seguido de incubación durante toda la noche a 4ºC con el compuesto a ser conjugado. La conjugación también puede realizarse derivatizando tanto el compuesto como los fragmentos Fc con hexanoato de sulfosuccinimidil 6-[3-(2-piridilditio)propionamido] (sulfo-LC-SPDP, Pierce) durante 18 horas a temperatura ambiente. Los conjugados también pueden preparase derivatizando fragmentos Fc y el compuesto que se desea administrar con diferentes reactivos de reticulación que posteriormente formarán una unión covalente. Un ejemplo de esta reacción es la derivatización de fragmentos Fc con 4-(N-maleimidometil)-ciclo-hexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo (Sulfo-SMCC, Pierce) y el compuesto a ser conjugado con el Fc es tiolado con S-acetiltioacetato de N-succinimidilo (SATA). Los compuestos derivatizados se purifican libres de reticulador y se combinan a temperatura ambiente durante una hora para permitir la reticulación. Otros reactivos de reticulación que comprenden los grupos funcionales aldehído, imido, ciano, halógeno, carboxilo, carboxilo activado, anhídrido y maleimido son conocidos por personas expertas en la técnica y también pueden usarse para la conjugación de compuestos a fragmentos Fc. La elección del reactivo de reticulación dependerá, por supuesto, de la naturaleza del compuesto que se desea conjugar al Fc. Los reactivos de reticulación descritos anteriormente son efectivos para conjugaciones proteína-proteína. Si el compuesto a ser conjugado es un carbohidrato o tiene un resto carbohidrato, entonces reactivos reticulación heterobifuncional como ABH, M_{2}C_{2}H, MPBH y PDPH son útiles para la conjugación con una molécula proteínica de unión a FcRn (Pierce Chemical Co., Rockford, IL). Otro método de conjugar proteínas y carbohidratos está descrito por Brumeanu et al. (Genetic Engineering News, 1 de Octubre, 1995, pág. 16). Si el compuesto a ser conjugado es un lípido o tiene un resto lipídico que sea conveniente como un sitio de conjugación para la molécula de unión a FcRn, entonces se pueden usar reticuladores como SPDP, SMPB y sus derivados (Pierce Chemical Co., Rockford, IL). También es posible conjugar por medios no covalentes cualquier molécula que se deba administrar. Una forma conveniente de conseguir conjugación no covalente es suscitar anticuerpos del compuesto a ser administrado, como anticuerpos monoclonales, por métodos muy conocidos en la técnica, y seleccionar un anticuerpo monoclonal que tenga la correcta región de Fc y las propiedades de unión al antígeno deseadas. El antígeno a ser administrado está entonces preunido al anticuerpo monoclonal portador. En todas las anteriores reacciones de reticulación es importante purificar los compuestos derivatizados libres de reactivo de reticulación. Es también importante purificar el conjugado final sustancialmente libre de reaccionantes no conjugados. La purificación se puede conseguir por cromatografías de afinidad, de filtración por gel y de intercambio iónico basadas en las propiedades de cualquiera de los dos componentes del conjugado. Un método especialmente preferido es una etapa inicial de purificación por afinidad usando proteína A-Sefarosa para retener el Fc y los conjugados Fc-compuesto, seguido de cromatografía de filtración por gel o de intercambio iónico basadas en la masa, tamaño o carga del conjugado de Fc. El paso inicial de este esquema de purificación asegura que el conjugado se unirá al FcRn que es un requerimiento esencial de la invención.
Ejemplo 9 Administración facilitada por IgG de un antígeno ajeno a través de la barrera epitelial intestinal
Para probar la capacidad de conjugados de copartícipe de unión a Fc-antígeno para ser transportados a través de barreras epiteliales, se conjugan antígenos ajenos a moléculas de IgG para la administración a ratones. Un antígeno ajeno conveniente es la rodamina teñida fluorescente, ya que puede ser visualizada en secciones semidelgadas congeladas del epitelio intestinal. La rodamina está covalentemente ligada a la IgG no específica del ratón, preparada como se describe en el Ejemplo 6, a la subunidad B de la toxina del cólera (Sigma) y a ovoalbúmina (Sigma) por incubación con succinil-rodamina (Molecular Probes, Eugene, OR) como recomienda el fabricante. El conjugado IgG-rodamina se purifica por cromatografía de afinidad con proteína G-Sefarosa. Después de diálisis para eliminar los succinil-rodamina, toxina B del cólera (CT-B)-rodamina y ovoalbúmina-rodamina no conjugados, los conjugados se purifican por cromatografía de filtración por gel o de intercambio iónico. Se valora la presencia de conjugados determinando la fluorescencia en fracciones del eluido. Puede analizarse la unión funcional de los conjugados de IgG y de la subunidad CT-B por unión a FcRn y gangliósido GM1, respectivamente. Los toxina B del cólera-rodamina y ovoalbúmina-rodamina sirven como controles positivo y negativo, respectivamente.
Se administran 0,2 nanomoles de los tres conjugados de rodamina descritos anteriormente a ratones Balb/c, con o sin 0,2 nanomoles de toxina del cólera sin marcar como adyuvante no específico, por administración por vía intragástrica en presencia de 75 micromoles de NaHCO_{3} y 20 mg/ml de inhibidor de la tripsina de la soja para inhibir la degradación gástrica. Después de 6 horas se sacrifican los ratones y se extirpa el intestino, se congela y se procesa para seccionamiento semidelgado. Se examina la fluorescencia intracelular iluminando secciones del epitelio intestinal en un microscopio de fluorescencia. La presencia de fluorescencia en las células epiteliales intestinales del ratón alimentado con IgG-rodamina indica que los conjugados de IgG son transportados de forma efectiva en dirección de apical a basolateral a través de la barrera epitelial intestinal. El FcRn es capaz de transportar inmunógenos como conjugados con copartícipes de unión a FcRn.
Ejemplo 10 Respuesta inmunitaria mucosal del ratón al conjugado antígeno-IgG administrado por vía oral por transcitosis mediada por FcRn
Se usaron ratones transgénicos homocigóticos para eliminación de \beta_{2}-microglobulina (un componente crítico de la función Fc-receptor) y sus compañeros normales salvajes de la basura, para estudios de generación de respuesta inmunitaria mucosal. Si la rodamina-IgG suscita una respuesta inmunitaria mucosal uniéndose a los receptores Fc de la membrana apical, se debería encontrar una respuesta inmunitaria positiva en los ratones salvajes pero no en los que carecen de gen de \beta_{2}-microglobulina. En contraste, rodamina-subunidad B de la toxina del cólera (CT-B) deberían suscitar una respuesta inmunitaria positiva tanto en los ratones salvajes como en los "knockout" ya que la transcitosis de CT-B a través de la barrera epitelial no es dependiente de la unión a los receptores Fc de la membrana apical. La rodamina-ovoalbúmina no entra en las vesículas transcitóticas (pero puede entrar en el epitelio intestinal por endocitosis de fase fluida) y no debería suscitar una respuesta inmunitaria en ningún tipo de ratón.
Se inmunizaron por vía oral tres grupos de ratones salvajes y los ratones deficientes en el gen de \beta_{2}-microglobulina con los tres conjugados de rodamina descritos en el Ejemplo 9. Se dirigieron experimentos paralelos con la adición de 0,2 nanomoles de la toxina del cólera como adyuvante no específico. Se administraron por vía intragástrica cantidades equimoleculares de los conjugados de rodamina. Se "inmunizaron" los ratones por este método cada 10 días un total de tres veces. Dos semanas después de la tercera inmunización oral se sacrificaron los ratones y se determinó la respuesta inmunitaria rodamina-específica por ELISA en las secreciones intestinales y en el suero por metodología estándar. Inmunoglobulinas anti-rodamina del suero fueron más evidentes en los ratones salvajes alimentados con los conjugados de rodamina de CT-B e IgG. Los ratones Knockout, carentes de \beta_{2}-microglobulina, generaron una respuesta inmunitaria mucosal a rodamina-CT-B pero no a rodamina-IgG, indicando que la transcitosis mediada por receptor juega un papel esencial en la respuesta inmunitaria mucosal. El conjugado rodamina-ovoalbúmina de control suscitó poca o ninguna respuesta inmunitaria en cualquiera de los ratones salvajes o deficientes en el gen de \beta_{2}-microglobulina.

Claims (18)

1. Una preparación farmacéutica, para administración a una barrera epitelial de un paciente para suministrar una molécula a través de la barrera epitelial, que comprende un conjugado de un copartícipe de unión a FcRn acoplado a dicha molécula, en la que el copartícipe de unión a FcRn en el conjugado se une a FcRn humano, y en la que la preparación se formula como una cápsula, comprimido, elixir o jarabe para administración a una barrera epitelial humana.
2. Una preparación farmacéutica, para administración a una barrera epitelial de un paciente para suministrar una molécula a través de la barrera epitelial, que comprende un conjugado de un copartícipe de unión a FcRn acoplado a dicha molécula, en la que el copartícipe de unión a FcRn en el conjugado se une a FcRn humano, y en la que la preparación se formula como un aerosol para administración a una barrera epitelial humana.
3. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la molécula es un antígeno o un agente terapéutico.
4. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la molécula es una citoquina.
5. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 4, en la que la citoquina es una interleucina, un factor de crecimiento, un interferón, o un factor de necrosis tumoral.
6. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 5, en la que la citoquina es alfa-interferón.
7. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 5, en la que la citoquina es beta-interferón.
8. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 4, en la que la citoquina es eritropoyetina.
9. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la molécula es un antígeno característico de un tumor.
10. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la molécula es un antígeno característico de un patógeno.
11. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la molécula es un antígeno característico de un alergeno.
12. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la molécula es un antígeno característico de una enfermedad autoinmunitaria.
13. Una preparación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en la que el copartícipe de unión a FcRn es IgG no específica o un fragmento de unión a FcRn de IgG.
14. Una preparación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en la que el copartícipe de unión a FcRn es un fragmento Fc de IgG.
15. Una preparación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en la que el copartícipe de unión a FcRn está acoplado covalentemente a la molécula.
16. Una preparación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 3 a 15, en la que la preparación se construye y organiza para administración a una barrera epitelial como una dosificación oral.
17. Una preparación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 15, en la que la preparación se construye y organiza para administración a una barrera epitelial como una dosificación en aerosol.
18. Una preparación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 15, en la que la preparación se construye y organiza para administración a una barrera epitelial como una dosificación intranasal.
ES03004479T 1995-01-17 1996-01-17 Transporte transepitelial especifico de receptores de inmunogenes. Expired - Lifetime ES2268182T3 (es)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/374,159 US6086875A (en) 1995-01-17 1995-01-17 Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US374159 1995-01-17
US57817195A 1995-12-29 1995-12-29
US578171 1995-12-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2268182T3 true ES2268182T3 (es) 2007-03-16

Family

ID=27006452

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES96903522T Expired - Lifetime ES2194973T3 (es) 1995-01-17 1996-01-17 Transporte de inmunogenes transepitelial especifico del receptor.
ES03004479T Expired - Lifetime ES2268182T3 (es) 1995-01-17 1996-01-17 Transporte transepitelial especifico de receptores de inmunogenes.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES96903522T Expired - Lifetime ES2194973T3 (es) 1995-01-17 1996-01-17 Transporte de inmunogenes transepitelial especifico del receptor.

Country Status (9)

Country Link
EP (3) EP0805628B1 (es)
JP (2) JP4026848B2 (es)
AT (2) ATE331438T1 (es)
CA (1) CA2210656C (es)
DE (2) DE69636312T2 (es)
DK (2) DK0805628T3 (es)
ES (2) ES2194973T3 (es)
PT (1) PT1323346E (es)
WO (1) WO1996022024A1 (es)

Families Citing this family (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US6086875A (en) * 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US7888466B2 (en) 1996-01-11 2011-02-15 Human Genome Sciences, Inc. Human G-protein chemokine receptor HSATU68
IT1289608B1 (it) * 1997-02-05 1998-10-15 Angelini Ricerche Spa Composizione per uso terapeutico o diagnostico somministrabile per via intranasale,sublinguale o vaginale
EP1254177A1 (en) * 2000-02-03 2002-11-06 Hammarström, Lennart RUMINANT MHC CLASS I-LIKE Fc RECEPTORS
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
KR20120053525A (ko) 2000-06-16 2012-05-25 캠브리지 안티바디 테크놀로지 리미티드 면역특이적으로 ＢＬｙＳ에 결합하는 항체
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
EP1683865A3 (en) 2001-02-02 2006-10-25 Eli Lilly & Company Mammalian proteins and in particular CD200
CA2437811A1 (en) 2001-02-09 2002-08-22 Human Genome Sciences, Inc. Human g-protein chemokine receptor (ccr5) hdgnr10
EP1385864B1 (en) 2001-04-13 2010-06-09 Human Genome Sciences, Inc. Anti-VEGF-2 antibodies
US7265208B2 (en) 2001-05-01 2007-09-04 The Regents Of The University Of California Fusion molecules and treatment of IgE-mediated allergic diseases
MXPA03010037A (es) * 2001-05-01 2004-06-30 Univ California Moleculas de fusion y metodos para tratamiento de enfermedades inmunes.
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
CA2479212A1 (en) * 2002-03-15 2003-09-25 Brigham And Women's Hospital, Inc. Central airway administration for systemic delivery of therapeutics
AU2003226065B2 (en) 2002-04-12 2009-02-26 Ludwig Institute For Cancer Research, Ltd Recombinant anti-interleukin-9 antibodies
AT502293B1 (de) * 2002-05-15 2008-03-15 Igeneon Krebs Immuntherapie Immunogener, monoklonaler antikörper
JP2006513139A (ja) * 2002-07-03 2006-04-20 ザ・ブリガーム・アンド・ウーメンズ・ホスピタル・インコーポレーテッド 治療薬の全身性送達のための中央部気道投与
EP1923464A1 (en) 2002-08-30 2008-05-21 Japan Science and Technology Agency Ligase of a hyperthermostable bacterium and chip using the same
AU2004206250B8 (en) 2003-01-21 2009-09-17 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide encoding a novel acyl coenzyme a, monoacylglycerol acyltransferase-3 (MGAT3), and uses thereof
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
WO2004091510A2 (en) 2003-04-11 2004-10-28 Medimmune, Inc. Recombinant il-9 antibodies and uses thereof
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
AU2012200470B2 (en) * 2003-05-06 2014-12-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Immunoglobulin Chimeric Monomer-Dimer Hybrids
TWI353991B (en) * 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
ES2333598T5 (es) 2003-05-06 2013-09-04 Biogen Idec Hemophilia Inc Proteinas quimericas del factor de coagulacion fc para tratar la hemofilia.
AU2016244273B2 (en) * 2003-05-06 2018-10-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Immunoglobulin Chimeric Monomer-Dimer Hybrids
CA2524615A1 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Tolerogen, Ltd. Immunoglobulin conjugates of autoantigens and their use in the prevention of disease
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
DK1817340T3 (da) 2004-11-12 2012-08-13 Xencor Inc Fc-varianter med ændret binding til fcrn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
BRPI0611069A2 (pt) 2005-05-06 2010-11-09 Zymogenetics Inc anticorpo monoclonal, anticorpo humanizado, fragmento de anticorpo, uso de um antagonista, e, hibridoma
WO2007008604A2 (en) 2005-07-08 2007-01-18 Bristol-Myers Squibb Company Single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent edema and methods of use thereof
CA2624189A1 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
AU2006302254B2 (en) 2005-10-06 2011-05-26 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
EP1933873A4 (en) 2005-10-13 2009-12-02 Human Genome Sciences Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PATIENTS WITH POSITIVE DISEASES FOR SELF-ANTIBODIES
AU2007244683A1 (en) 2006-04-27 2007-11-08 Pikamab, Inc. Methods and compositions for antibody therapy
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
ME01786B (me) 2006-08-14 2014-09-20 Xencor Inc Optimizovana antitela usmerena na cd19
KR101314362B1 (ko) 2006-08-28 2013-10-10 라 졸라 인스티튜트 포 앨러지 앤드 이뮤놀로지 길항성 인간 ｌｉｇｈｔ-특이적 인간 모노클로날 항체
DK2594586T3 (en) 2006-09-01 2014-11-17 Zymogenetics Inc Monoclonal il-31 antibodies and methods of use thereof
US20080096208A1 (en) 2006-09-06 2008-04-24 Connors Richard W Biomarkers for assessing response to c-met treatment
AU2007299843B2 (en) 2006-09-18 2012-03-08 Xencor, Inc Optimized antibodies that target HM1.24
WO2008048545A2 (en) 2006-10-16 2008-04-24 Medimmune, Llc. Molecules with reduced half-lives, compositions and uses thereof
US20100209434A1 (en) 2007-03-30 2010-08-19 Medimmune, Llc Antibody formulation
CN101970488B (zh) 2007-12-07 2014-06-18 津莫吉尼蒂克斯公司 对il-31特异的人源化抗体分子
EP2235059B1 (en) 2007-12-26 2015-02-18 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
EP2260102A1 (en) 2008-03-25 2010-12-15 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating cancer by down-regulating frizzled-4 and/or frizzled-1
US8150140B2 (en) 2008-12-22 2012-04-03 Ngr Inc. System and method for a semiconductor lithographic process control using statistical information in defect identification
EP2405920A1 (en) 2009-03-06 2012-01-18 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Novel therapy for anxiety
EP2241323A1 (en) 2009-04-14 2010-10-20 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Tenascin-W and brain cancers
EP2437767B1 (en) 2009-06-01 2015-07-08 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives and uses thereof
ES2553440T3 (es) 2009-08-13 2015-12-09 Crucell Holland B.V. Anticuerpos contra el virus sincitial respiratorio humano (VSR) y método de uso
EP3381937A3 (en) 2009-08-13 2018-10-31 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
EP2292266A1 (en) 2009-08-27 2011-03-09 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Treating cancer by modulating copine III
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
WO2011035205A2 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Calmune Corporation Antibodies against candida, collections thereof and methods of use
WO2011036118A1 (en) 2009-09-22 2011-03-31 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating cancer by modulating mex-3
WO2011045352A2 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Novartis Forschungsstiftung Spleen tyrosine kinase and brain cancers
US20120213801A1 (en) 2009-10-30 2012-08-23 Ekaterina Gresko Phosphorylated Twist1 and cancer
WO2011091078A2 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Xencor, Inc. Antibody fc variants with enhanced complement activity
US20130004519A1 (en) 2010-03-05 2013-01-03 Ruth Chiquet-Ehrismann Smoci, tenascin-c and brain cancers
EP2561076A1 (en) 2010-04-19 2013-02-27 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Modulating xrn1
US20130089538A1 (en) 2010-06-10 2013-04-11 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute forBiomedical Researh Treating cancer by modulating mammalian sterile 20-like kinase 3
MX343298B (es) 2010-07-09 2016-11-01 Crucell Holland Bv Anticuerpos contra el virus sincitial respiratorio (rsv) humano y metodos de uso.
MY192639A (en) 2010-07-09 2022-08-29 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
US20130171159A1 (en) 2010-09-10 2013-07-04 Brian Arthur Hemmings Phosphorylated twist1 and metastasis
WO2012038744A2 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Genome Research Limited Detecting mutations
EP2640738A1 (en) 2010-11-15 2013-09-25 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Anti-fungal agents
US9540443B2 (en) 2011-01-26 2017-01-10 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies
WO2012168259A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 11 (ptpn11) and triple-negative breast cancer
JP2015502741A (ja) 2011-11-04 2015-01-29 ノバルティス アーゲー 低比重リポタンパク質関連タンパク質６（ｌｒｐ６）−半減期延長構築物
US20140314787A1 (en) 2011-11-08 2014-10-23 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Treatment for neurodegenerative diseases
WO2013068432A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Early diagnostic of neurodegenerative diseases
US20140363448A1 (en) 2012-01-02 2014-12-11 Novartis Ag Cdcp1 and breast cancer
US20150266961A1 (en) 2012-03-29 2015-09-24 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Fridrich Miescher Institute Inhibition of interleukin-8 and/or its receptor cxcr1 in the treatment of her2/her3-overexpressing breast cancer
EP2866831A1 (en) 2012-06-29 2015-05-06 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating diseases by modulating a specific isoform of mkl1
EP2870242A1 (en) 2012-07-05 2015-05-13 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research New treatment for neurodegenerative diseases
NZ731881A (en) 2012-07-25 2022-07-29 Celldex Therapeutics Inc Anti-kit antibodies and uses thereof
CA2887129A1 (en) 2012-10-09 2014-04-17 Igenica, Inc. Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
JP6824735B2 (ja) 2013-06-06 2021-02-03 ピエール、ファーブル、メディカマン 抗Ｃ１０ｏｒｆ５４抗体およびその使用方法
ES2761587T3 (es) 2013-08-07 2020-05-20 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Res Nuevo método de cribado para el tratamiento de la ataxia de Friedreich
AU2014332442B2 (en) 2013-08-26 2019-12-19 Biontech Research And Development, Inc. Nucleic acids encoding human antibodies to Sialyl-Lewis
EA035324B1 (ru) 2013-12-24 2020-05-28 Ардженкс Бвба АНТАГОНИСТЫ НЕОНАТАЛЬНЫХ Fc-РЕЦЕПТОРОВ (FCRN) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
AU2015209131B2 (en) 2014-01-24 2020-06-25 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Binding proteins and methods of use thereof
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US8961992B1 (en) 2014-04-02 2015-02-24 Tunitas Therapeutics, Inc. Epsigam fusion protein
MX2016014824A (es) 2014-05-13 2017-03-23 Bioatla Llc Proteinas biologicas condicionalmente activas.
EP3142700B1 (en) 2014-05-16 2021-03-03 Medimmune, LLC Molecules with altered neonate fc receptor binding having enhanced therapeutic and diagnostic properties
KR102614642B1 (ko) 2014-06-04 2023-12-19 바이오엔테크 리서치 앤드 디벨롭먼트 인코포레이티드 강글리오사이드 ｇｄ２에 대한 사람 단클론 항체
US20170137824A1 (en) 2014-06-13 2017-05-18 Indranil BANERJEE New treatment against influenza virus
WO2016036916A1 (en) 2014-09-03 2016-03-10 Bioatla, Llc Discovering and producing conditionally active biologic proteins in the same eukaryotic cell production hosts
US20170298360A1 (en) 2014-09-24 2017-10-19 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Lats and breast cancer
SI3333191T1 (sl) 2014-12-11 2021-03-31 Pierre Fabre Medicament Proti C10ORF54 protitelesa in uporaba le-teh
EP3262217A4 (en) 2015-02-24 2018-07-18 BioAtla LLC Conditionally active biological proteins
CN114504652A (zh) 2015-03-03 2022-05-17 科马布有限公司 抗体、用途和方法
JP7118884B2 (ja) * 2015-07-17 2022-08-16 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ｆｃ結合抗原の粘膜ワクチン接種によって免疫寛容を誘導するための方法及び医薬組成物
CA2995838A1 (en) 2015-08-19 2017-02-23 Rutgers, The State University Of New Jersey Novel methods of generating antibodies
AU2016332725A1 (en) 2015-09-29 2018-03-22 Celgene Corporation PD-1 binding proteins and methods of use thereof
WO2017072669A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Tenascin-w and biliary tract cancers
KR102714709B1 (ko) 2015-11-02 2024-10-07 바이오아트라, 인코퍼레이티드 조건부 활성 폴리펩티드
SG11201901950TA (en) 2016-09-19 2019-04-29 Celgene Corp Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
JP2019534859A (ja) 2016-09-19 2019-12-05 セルジーン コーポレイション Ｐｄ−１結合タンパク質を使用して白斑を治療する方法
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
JP7610349B2 (ja) 2017-04-22 2025-01-08 イミュノミック セラピューティックス， インコーポレイテッド 改良ｌａｍｐ構築物
BR112019023014A2 (pt) 2017-05-02 2020-05-19 Immunomic Therapeutics Inc constructos de lamp aperfeiçoados compreendendo antígenos de câncer
CN111630069B (zh) 2017-10-13 2024-05-31 勃林格殷格翰国际有限公司 针对Thomsen-nouvelle(Tn)抗原的人抗体
EP3720877A1 (en) 2017-12-08 2020-10-14 Argenx BVBA Use of fcrn antagonists for treatment of generalized myasthenia gravis
AU2019283673B2 (en) 2018-06-08 2023-12-07 argenx BV Compositions and methods for treating immune thrombocytopenia
IL280199B2 (en) 2018-07-20 2025-08-01 Pf Medicament Receptor for vista
PE20211491A1 (es) 2018-09-27 2021-08-11 Celgene Corp PROTEINAS DE FIJACION A SIRPa Y METODOS DE USO DE ESTAS
MA56102A (fr) 2019-06-07 2022-04-13 Argenx Bvba Formulations pharmaceutique d'inhibiteurs de fcrn appropriées pour une administration par voie sous-cutanée
CN121203032A (zh) 2019-10-18 2025-12-26 免疫治疗有限公司 包含癌抗原的改良lamp构建物
FI4087875T3 (fi) 2020-01-08 2024-10-25 argenx BV Vastasyntyneen ihmisen Fc-reseptorin (FcRn) antagonisteja pemfigus-häiriöiden hoitoon
CN116322776A (zh) 2020-08-03 2023-06-23 詹森生物科技公司 用于病毒治疗剂中的多向生物转运的材料和方法
JP2023540082A (ja) 2020-09-04 2023-09-21 ラトガース，ザ ステート ユニバーシティ オブ ニュー ジャージー ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン及び抗体
US20230382978A1 (en) 2020-10-15 2023-11-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibody specific for sars-cov-2 receptor binding domain and therapeutic methods
WO2022087274A1 (en) 2020-10-21 2022-04-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibodies that neutralize type-i interferon (ifn) activity
KR20230126727A (ko) 2020-12-30 2023-08-30 이뮤노믹 쎄라퓨틱스, 인크. 항-hvem 항체
EP4271482A2 (en) 2020-12-31 2023-11-08 Alamar Biosciences, Inc. Binder molecules with high affinity and/ or specificity and methods of making and use thereof
AU2022224636A1 (en) 2021-02-19 2023-09-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single domain antibodies that neutralize sars-cov-2
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
AU2023291783A1 (en) 2022-06-15 2024-12-12 argenx BV Fcrn binding molecules and methods of use
CN119948051A (zh) 2022-07-15 2025-05-06 詹森生物科技公司 用于改善抗原结合可变区的生物工程化配对的材料和方法
WO2024130158A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding extended serum half-life interleukin-22 for the treatment of metabolic disease
WO2025104604A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Anti-respiratory syncytial virus antibodies and uses thereof
WO2025155971A1 (en) 2024-01-19 2025-07-24 Immunomic Therapeutics, Inc Anti-activin receptor 1c (alk-7) receptor antibodies

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL78775A (en) * 1985-05-15 1992-06-21 Biotech Australia Pty Ltd Oral vaccines
WO1991008773A1 (en) * 1989-12-07 1991-06-27 The Center For Blood Research Tolerogenic immunoglobulin-protein conjugates
US5349053A (en) * 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
DE59109032D1 (de) * 1990-06-28 1998-09-03 Hoechst Ag Fusionsproteine mit immunglobulinanteilen, ihre Herstellung und Verwendung
WO1993020834A1 (en) * 1992-04-10 1993-10-28 Brigham And Women's Hospital Methods and compositions for oral delivery of therapeutic agents
CA2153391C (en) * 1993-01-11 2000-08-15 Kenneth Rock Inducing cytotoxic t lymphocyte responses
US5698679A (en) * 1994-09-19 1997-12-16 National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine Product and process for targeting an immune response

Also Published As

Publication number Publication date
EP1658772A8 (en) 2007-01-10
DE69627820T2 (de) 2004-04-08
EP1323346A3 (en) 2003-11-26
PT1323346E (pt) 2006-10-31
EP1658772A3 (en) 2007-01-17
ATE331438T1 (de) 2006-07-15
EP0805628B1 (en) 2003-05-02
DK0805628T3 (da) 2003-07-14
WO1996022024A1 (en) 1996-07-25
EP0805628A1 (en) 1997-11-12
CA2210656C (en) 2011-07-05
DE69636312T2 (de) 2007-06-06
JP2002515850A (ja) 2002-05-28
CA2210656A1 (en) 1996-07-25
JP2008007513A (ja) 2008-01-17
EP1658772A2 (en) 2006-05-24
ATE238668T1 (de) 2003-05-15
JP4026848B2 (ja) 2007-12-26
ES2194973T3 (es) 2003-12-01
EP0805628A4 (en) 1999-03-24
EP1323346A2 (en) 2003-07-02
DE69636312D1 (de) 2006-08-10
EP1323346B1 (en) 2006-06-28
DK1323346T3 (da) 2006-10-30
DE69627820D1 (de) 2003-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2268182T3 (es) Transporte transepitelial especifico de receptores de inmunogenes.
US6086875A (en) Receptor specific transepithelial transport of immunogens
ES2258820T3 (es) Transporte transepitelial de agentes terapeuticos especifico de receptores.
US7060274B2 (en) Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
ES2349779T3 (es) Formulaciones de anticuerpos y de proteínas a concentración elevada.
ES2546175T3 (es) Conjugados transportadores de péptidos inmunogénicos y métodos para producirlos
ES2369664T3 (es) Lipopéptidos inmunogénicos novedosos que comprenden epítopos de células t cooperadoras y de células b.
US12371672B2 (en) Compositions and methods for antigen targeting to CD180
CN103906760B (zh) 用作抗原掩蔽剂的人乳铁蛋白衍生肽
HK1091685A (en) Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US9944684B2 (en) CETP antigenic peptide and fusion protein and their composition and applications
HK1196379B (en) Human lactoferrin derived peptide for use as an antigen masking agent