ES2250502T3

ES2250502T3 - Microparticulas con un perfil de liberacion mejorado y procedimient0 para su preparacion.

Info

Publication number: ES2250502T3
Application number: ES01984822T
Authority: ES
Inventors: Thomas Kissel; Ruland Fridrich; Peter Schneider
Original assignee: Merckle GmbH
Current assignee: Merckle GmbH
Priority date: 2000-12-13
Filing date: 2001-12-11
Publication date: 2006-04-16
Anticipated expiration: 2021-12-11
Also published as: PL363716A1; US20040115277A1; BR0116077A; HUP0302363A3; RU2291686C2; SK7172003A3; CY1105442T1; WO2002047664A2; WO2002047664A3; HK1054689A1; CA2431285A1; JP2004515527A; WO2002047664A8; CZ20031559A3; NO20032657L; NO20032657D0; EE200300279A; AU3323902A; HUP0302363A2; EP1341522B1

Abstract

Procedimiento para la producción de micropartículas destinadas a la liberación retardada de una sustancia activa, caracterizado porque a) una composición que contiene la sustancia activa se añade a una solución orgánica de un polímero y se dispersa en ella, b) la emulsión o dispersión resultante en a) se añade a una fase externa y se dispersa en ella, teniendo la fase externa en el momento de la adición una temperatura de 0ºC a 20ºC, y c) se elimina el disolvente orgánico, sometiendo a la dispersión o emulsión resultante en b) a una presión de menos que 1.000 mbar, o introduciendo un gas inerte en la dispersión o emulsión resultante en b).

Description

Micropartículas con un perfil de liberación mejorado y procedimiento para su preparación.

El presente invento se refiere a micropartículas destinadas a la liberación retardada de una sustancia activa con actividad fisiológica, las cuales contienen por lo menos una sustancia activa y una matriz polimérica. Las micropartículas conformes al invento poseen una característica de liberación especialmente ventajosa. El invento se refiere también a procedimientos para la producción de tales micropartículas.

En el caso de la administración de medicamentos es con frecuencia deseable obtener, a lo largo de un prolongado período de tiempo, un nivel de la sustancia activa en plasma lo más constante que sea posible. Esto es difícil de conseguir, en particular en el caso de que la correspondiente sustancia activa se descomponga o deposite con rapidez en el cuerpo. Con el fin de evitar aplicaciones repetidas en cortos intervalos de tiempo, se propusieron diferentes formas medicamentosas de depósito, que tienen como meta poner en libertad a lo largo de un prolongado período de tiempo una cantidad lo más constante que sea posible de una sustancia activa. Tales formas medicamentosas de depósito tienen con frecuencia la forma de micropartículas, que se pueden administrar por vía parenteral, por ejemplo en forma de un implante o mediante una inyección subcutánea. Por regla general, tales formas medicamentosas comprenden una matriz polimérica, en la que está distribuida la sustancia activa ("microesferas"), o un núcleo que contiene la sustancia activa, el cual está rodeado por una capa que contiene polímeros ("microcápsulas").

En el estado de la técnica se conocen diferentes procedimientos para producir micropartículas.

En el caso del denominado procedimiento W/O/W, primeramente una fase acuosa que contiene la sustancia activa (W1) se dispersa en una solución orgánica del polímero (O), la resultante emulsión W1/O se dispersa luego en una fase acuosa adicional (la denominada fase externa; W2). El polímero es coacervado mediante la eliminación del disolvente orgánico y forma micropartículas. Mediante el respectivo procedimiento de dispersamiento se puede influir sobre el tamaño de las partículas. La formación de las micropartículas depende finalmente todavía de la posibilidad de separar el disolvente por evaporación. Por lo tanto, el procedimiento de doble emulsionamiento W/O/W se denomina también como "método / técnica de evaporación / extracción del disolvente". Después de haberse endurecido las micropartículas y eliminado el disolvente, se obtienen unas micropartículas que contienen la sustancia activa. Con frecuencia, tales micropartículas contienen sustancias acrecentadoras de la viscosidad, tales como p. ej. gelatinas.

En el estado de la técnica se conocen asimismo procedimientos S/O/W, en los que la sustancia activa no se presenta en una solución acuosa, sino como un material sólido (S). El material sólido es dispersado luego directamente en la fase orgánica (O). Las demás etapas corresponden al procedimiento W/O/W.

Finalmente, existen los denominados procedimientos S/O/O, en los que la fase externa no es ninguna fase acuosa, sino una fase no acuosa, que contiene un coloide protector o un emulsionante.

Es deseable mantener lo más pequeña que sea posible la cantidad de micropartículas que se han de administrar a los pacientes. Por ejemplo, el volumen de micropartículas, que se han de inyectar, debería ser lo más pequeño que sea posible, para que, entre otras cosas, sean menores los dolores al realizar la inyección. Por lo tanto, el contenido de sustancia activa en las micropartículas debería ser lo más alto que sea posible. La carga con sustancia activa es una importante característica de las micropartículas. Se establece diferencia entre el grado práctico y el grado teórico de carga. Como sinónimos para el grado práctico de carga se utilizan también las expresiones de grado efectivo de carga o contenido efectivo de sustancia activa. El grado teórico de carga se define de la siguiente manera:

Grado teórico de carga en % = \frac{\text{Masa de sustancia activa x 100}}{\text{Masa de (sustancia activa + polímero + sustancias aditivas})}

En tales casos de trata de la masa de los componentes empleados durante la producción. El contenido efectivo de sustancia activa se define de la siguiente manera.

Contenido efectivo de sustancia activa en % = \frac{\text{Masa de sustancia activa en mg x 100}}{\text{Cantidad pesada de micropart\text{í}culas en mg}}

La relación entre el contenido efectivo de la sustancia activa y el grado teórico de carga se designa como rendimiento de encapsulación. El rendimiento de encapsulación es un importante parámetro del proceso y constituye una medida de la efectividad del procedimiento:

Rendimiento de encapsulación en % = \frac{\text{Contenido efectivo de sustancia activa x 100}}{\text{Grado teórico de carga}}

Es asimismo un importante criterio el perfil de liberación de las micropartículas. La liberación de las sustancias activas se puede dividir, en lo referente al tiempo, de una manera basta en tres fases. En una fase inicial de "estallido" [del inglés burst] se ponen en libertad usualmente en un período de tiempo relativamente corto considerables cantidades de la sustancia activa contenida en las micropartículas. En parte, se trata en este caso de la sustancia activa, que se encuentra sobre la superficie de las partículas, o cerca de ella. La cantidad de la sustancia activa puesta en libertad en la fase de "estallido" debería ser lo más pequeña que sea posible. En la fase de "retardo" [del inglés lag] que sigue a continuación, en las formulaciones hasta ahora conocidas en el estado de la técnica, la liberación de sustancia activa es despreciablemente pequeña, en particular cuando se emplean polímeros de PLGA como agentes formadores de matriz. Sería deseable que durante la fase de "retardo" se efectúe una entrega de la sustancia activa lo más constante que sea posible a lo largo del período de tiempo de liberación. En la fase final de la "bioerosión", las partículas se hidrolizan y de esta manera, mediante una gran pérdida de masa y una gran pérdida de peso molecular, liberan de modo acrecentado la sustancia activa. Idealmente, ya durante la fase de "retardo" se pondría en libertad toda la cantidad de sustancia activa.

Kishida y colaboradores (1990) en J. Controlled Release 13, 83-89 investigan la influencia del grado de carga, de la lipofilia de la sustancia activa y de la velocidad de eliminación del disolvente, en la sustancia lipófila Sudan III en comparación con el etoposido polar. Se mostró, en el caso de emplearse un poli(alcohol vinílico) como estabilizador, que la eliminación del disolvente durante la fase de endurecimiento mediante diferentes ajustes del vacío, no tiene ninguna influencia sobre la liberación.

En la cita de Cleland y colaboradores (1997) J. Controlled Release 47, 135-150 se investiga, para un procedimiento W/O/W con PLGA para la encapsulación de gp120, la influencia de la viscosidad cinemática del polímero en la emulsión primaria y del consumo de diclorometano en exceso en la fase externa sobre la carga y la liberación de la sustancia activa durante la fase de "estallido".

El documento de solicitud de patente internacional WO 00/40221 divulga micropartículas a base de una matriz polimérica, las cuales tienen un perfil sigmoidal de liberación.

Una misión del presente invento es la de poner a disposición micropartículas que tengan un ventajoso perfil de liberación.

De modo sorprendente, se encontró que se obtienen micropartículas con una liberación total más alta, cuando la fase externa, a la que se añade la emulsión primaria, es enfriada previamente. En la presente solicitud se considera como liberación total aprovechable, la porción porcentual de la cantidad total de sustancia activa contenida en las micropartículas, que se pone en libertad en el transcurso de 900 horas a partir del comienzo de la liberación. Asimismo, se encontró que la cantidad de la sustancia activa puesta en libertad durante la fase de "estallido" se puede reducir de modo importante, eliminando de una manera acelerada el disolvente orgánico. Esto se realiza o bien mediante el recurso de que después de haber dispersado la emulsión primaria en la fase externa, la emulsión o dispersión resultante se somete a una baja presión, o mediante el recurso de que un gas inerte se conduce a través de la emulsión o dispersión resultante, lo cual conduce a una eliminación más rápida del disolvente orgánico.

El presente invento se refiere, por lo tanto, a un procedimiento para la producción de micropartículas destinadas a la liberación retardada de una sustancia activa, caracterizado porque

a): una composición que contiene la sustancia activa se añade a una solución orgánica de un polímero y se dispersa en ella,

b): la emulsión o dispersión resultante en a) se añade a una fase externa y se dispersa en ella, teniendo la fase externa en el momento de la adición una temperatura de 0ºC a 20ºC, y

c): se elimina el disolvente orgánico, sometiendo a la dispersión o emulsión resultante en b) a una presión de menos que 1.000 mbar, o introduciendo un gas inerte en la dispersión o emulsión resultante en b).

Como sustancias activas en las micropartículas se pueden emplear todas las sustancias activas con actividad fisiológica. Preferiblemente, debería tratarse de sustancias solubles en agua. Ejemplos de sustancias activas, que se pueden utilizar, son vacunas, agentes antitumorales, antipiréticos, analgésicos, sustancias antiinflamatorias, sustancias activas que tienen una influencia sobre la coagulación de la sangre, tales como por ejemplo heparina, antitusivos, sedantes, relajantes musculares, antiulcerosos, antialérgicos, vasodilatadores, sustancias antidiabéticas, agentes contra la tuberculosis, formulaciones de hormonas, anticonceptivos, sustancias inhibidoras de la resorción ósea, inhibidores de la angiogénesis, etc. Usualmente, como sustancias activas se utilizan péptidos o proteínas. Ejemplos de posibles sustancias activas del tipo de péptidos o proteínas son calcitonina de salmón (sCT), lisozima, citocromo C, eritropoietina (EPO), hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), buserelina, goserelina, triptorelina, leuprorelina, vasopresina, gonadorelina, felipresina, carbetocina, albúmina de suero bovino (BSA), oxitocina, toxoide de tétanos, bromocriptina, hormona liberadora de la hormona de crecimiento (GHRH), somatostatina, insulina, factor de necrosis de tumores, (TNF), factor estimulante de colonias (CSF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), bradicinina, urocinasa, asparaginasa, neurotensina, la sustancia P, calicreina, un polipéptido inhibidor gástrico (GIP), el factor liberador de la hormona de crecimiento (GRF), prolactina, hormona adrenocorticotrópica (ACTH), hormona liberadora de tirotropina (TRH), hormona estimulante del tiroides (TSH), hormona estimulante de melanocitos (MSH), hormona paratiroidea [= parathormona] (LH), gastrina, glucagón, encefalina, proteína morfogenética ósea (BMP), \alpha-, \beta-, \gamma-interferones, angiotensina, timopoyetina y factor humoral tímico (THF).

Las sustancias activas, que son péptidos o bien proteínas, pueden proceder de una fuente natural o, por el contrario, se pueden preparar y aislar por vía recombinante. Las sustancias activas preparadas por vía recombinante se pueden diferenciar de las correspondientes sustancias activas naturales, por ejemplo, en el tipo y la extensión de las modificaciones posteriores a la traducción, pero también en la secuencia primaria. Las sustancias activas modificadas de tal manera, pueden poseer otras propiedades distintas, tales como una actividad farmacológica modificada, un comportamiento modificado de segregación, etc. Todas las tales "variantes" de sustancias activas naturales están abarcadas por el invento. Otras posibles sustancias activas son heparina y ácidos nucleicos tales como moléculas de ADN y ARN. Las moléculas de ADN se pueden presentar en una forma lineal o circular. Puede tratarse también de plásmidos o vectores, en particular de vectores de expresión. Un ejemplo de esto es el vector de expresión pcDNA3 que se describe en el documento WO 98/51321.

Finalmente, están abarcados también vectores víricos, que se emplean para la terapia génica. En tal caso, se pueden emplear también complejos a base de quitosana, alginato de sodio u otros polímeros catiónicos, tales como una poli(etilenimina) o poli(lisina) u otros aminoácidos catiónicos. El ácido nucleico empleado puede ser monocatenario o bicatenario (de una sola hebra o de dos hebras). Un ADN monocatenario puede utilizarse, por ejemplo, en forma de oligonucleótidos antisentido. Pueden emplearse también fragmentos "desnudos" de ácido nucleico; en estos casos el ácido nucleico no está unido con otras sustancias.

La concentración de sustancia activa es dependiente, entre otras cosas, de la respectiva sustancia activa y del tipo del tratamiento, para el que éstas se deben utilizar. Las sustancias activas del tipo de péptidos / proteínas se emplean por regla general en una concentración de 0,01 a 30%, de modo preferido de 0,5 a 15%, sobre todo de 1,0 a 7,5%, referida a la masa polimérica empleada.

La fase orgánica, no miscible con agua, sirve para la disolución del polímero degradable biológicamente. En este caso, el polímero se disuelve en un apropiado disolvente orgánico, en el que no es soluble la sustancia activa. Ejemplos de tales disolventes orgánicos son acetato de etilo, acetona, dimetil-sulfóxido, tolueno, cloroformo, etanol, metanol, etc. Se prefiere especialmente el diclorometano. La concentración del polímero en la fase orgánica es usualmente más alta que 5% (p/v = en peso/volumen), preferiblemente de 5 a 50%, del modo más preferido de 15 a 40%.

Como polímeros, que forman la matriz polimérica de las micropartículas, se pueden utilizar todos los polímeros biodegradables y biológicamente compatibles. Éstos pueden ser de origen natural o sintético. Ejemplos de polímeros de origen natural son albúmina, gelatina y carragenano. Ejemplos de polímeros sintéticos, que se pueden utilizar en el procedimiento conforme al invento, son polímeros de ácidos grasos (p.ej. poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido cítrico), poli(ácido málico), poli(ácido láctico - caprolactona, etc.), poli(ésteres de ácido \alpha-ciano-acrílico), poli(ácido \beta-hidroxi-butírico), poli(oxalatos de alquileno) (p. ej. poli(oxalato de trimetileno), poli(oxalato de tetrametileno), etc.), poli(ortoésteres), poli(ortocarbonatos) y otros policarbonatos (p. ej. poli(carbonato de etileno), poli(carbonato de etileno y propileno, etc.), poli(aminoácidos) (p. ej. poli(ácido \gamma-bencil-L-glutámico), poli-(L-alanina), poli(ácido \gamma-metil-L-glutámico), etc.), y ésteres de ácido hialurónico, etc. Otros copolímeros biocompatibles son poliestireno, poli(ácido metacrílico), copolímeros de ácido acrílico y ácido metacrílico, poli(aminoácidos), estearato de dextrano, etil-celulosa, acetil-celulosa, nitro-celulosa, copolímeros de anhídrido de ácido maleico, copolímeros de etileno y acetato de vinilo, tales como poli(acetato de vinilo), poli(acrilamida), etc. Los mencionados polímeros se pueden utilizar a solas o en combinación unos con otros. Ellos pueden utilizarse en forma de copolímeros o en forma de una mezcla de dos o más de los polímeros. También se pueden emplear sus sales. Entre los mencionados polímeros se prefieren copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico (PLGA). Se prefieren polímeros de PLGA con una composición de 0:100 a 100:0 de ácido láctico a ácido glicólico, y con un peso molecular de 2.000 a 2.000.000 Da. Son especialmente preferidos los polímeros de PLGA que tienen un peso molecular de 2.000 a 200.000 Da y una relación de ácido láctico a ácido glicólico de 25:75 a 75:25 o de 50:50. En tal caso se pueden emplear también L-PLA o D,L-PLA o bien mezclas de éstos, o copolímeros de ellos.

La composición que contiene la sustancia activa puede ser una solución acuosa, por ejemplo en el caso de la aplicación del procedimiento W/O/W. Entonces, usualmente, la sustancia activa se disuelve en agua o en una solución tamponadora, y se dispersa directamente en la solución orgánica del polímero. La resultante emulsión W1/O o primaria se inyecta luego en la fase acuosa externa (W2) que contiene eventualmente un coloide protector, y se dispersa con sustancias coadyuvantes usuales. Después de esta etapa, resulta la doble emulsión o emulsión W1/O/W2. Después de una fase de endurecimiento, las resultantes micropartículas se separan de la fase acuosa externa, y después de ello se pueden liofilizar. En el caso de un gran volumen de W1 y de una baja viscosidad de la solución de polímero, se obtienen microcápsulas en el caso del procedimiento W/O/W. Por ejemplo, una relación en volumen W1:O:W2 de 1:10:1.000 conduciría a la formación de "microesferas", y una relación en volumen 9:10:1.000 conduciría a la formación de microcápsulas.

La composición que contiene la sustancia activa puede presentarse sin embargo también en forma de un material sólido. En tal caso, la sustancia activa es dispersada en forma sólida directamente en la solución orgánica de polímero. Las demás etapas de la producción corresponden a las del procedimiento W/O/W. Mediante otras etapas adicionales del procedimiento, puede pasar a utilizarse un procedimiento o bien S/O/W o S/O/O.

En determinadas formas de realización del procedimiento conforme al invento, la fase externa es una solución acuosa (W2). Esta solución acuosa puede contener un emulsionante o un coloide protector. Ejemplos de coloides protectores son un poli(alcohol vinílico), una poli(vinilpirrolidona), un poli(etilenglicol), etc. Se prefiere un poli(alcohol vinílico). Por ejemplo, se pueden emplear diferentes poli(alcoholes vinílicos) obtenibles de la entidad Clariant, tales como Mowiol® 18-88, Mowiol® 4-88, Mowiol® 47-88 o Mowiol® 20-98. Los coloides protectores se emplean usualmente en una concentración de 0,01% a 10%, se prefieren las concentraciones de 0,01% a 5%. El peso molecular de los coloides protectores puede estar situado entre 2.000 y 1.000.000 Da, de modo preferido entre 2.000 y 200.000 Da. Los volúmenes de la emulsión primaria W1/O y de la fase externa deberían tener entre ellos una relación de 1:5 a 1:1.000.

De manera alternativa, como fase externa puede pasar a emplearse también una denominada fase "oleosa", que no es miscible con la emulsión primaria ("procedimiento W/O/O o bien S/O/O"). Por ejemplo, se pueden emplear un aceite de silicona o un aceite de parafina, que contienen un emulsionante y/o un coloide protector. Al contrario que en el caso del empleo de una fase externa acuosa, en el caso de utilizarse una fase externa "oleosa" puede estar contenido un emulsionante o un coloide protector. Ejemplos de emulsionantes en la fase oleosa externa son Span, Tween o Brij, de una manera preferida en una concentración de 0,01 a 10% en peso.

Conforme al invento, la fase externa tiene una temperatura de 0 a 20ºC, cuando la emulsión primaria es añadida a la fase externa y es dispersada en ella. De una manera preferida, esta temperatura es de 0ºC a 10ºC, de manera más preferida de 3º a 7ºC, y de una manera sumamente preferida de alrededor de 5ºC. Asimismo se prefiere que la emulsión o dispersión resultante en tal caso sea a continuación atemperada ulteriormente en los mencionados intervalos de temperaturas, por ejemplo en un reactor de laboratorio. De una manera sumamente preferida, después de haber dispersado la emulsión primaria en la fase externa hasta el final del endurecimiento de las micropartículas, se mantiene la temperatura conforme al invento.

De acuerdo con el procedimiento conforme al invento, también el disolvente orgánico se elimina de una manera acelerada. Esto se puede realizar mediante el recurso de que la emulsión o dispersión, que resulta por dispersamiento de la emulsión primaria en la fase externa, es sometida a una depresión, es decir a una presión que es menor que la presión atmosférica. Conforme al invento, la emulsión o dispersión se puede someter a una presión de menos que 1.000 mbar, de una manera preferida a una presión de 500 mbar o menos, de una manera sumamente preferida a una presión de 50 a 150 mbar. Mediante este vacío, el disolvente orgánico se elimina con mayor rapidez. El vacío se puede aplicar ventajosamente durante el endurecimiento de las micropartículas, cuando se emplea un reactor de laboratorio para la producción de las micropartículas. Como alternativa a la aplicación de una depresión, el disolvente orgánico se puede también eliminar de una manera acelerada, introduciendo un gas inerte en la emulsión o dispersión. Como gases inertes se pueden utilizar por ejemplo gases nobles, pero se prefiere el nitrógeno. Mediante la insuflación de nitrógeno, el disolvente orgánico volátil se elimina con mayor rapidez.

En una forma de realización especialmente preferida, el endurecimiento de las micropartículas se efectúa a una temperatura más baja, es decir en un intervalo de temperaturas comprendidas entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 10ºC, de una manera preferida en torno a aproximadamente 5ºC y bajo una presión reducida, es decir una presión de 500 mbar o menos. De manera especialmente preferida, se aplica en este caso un vacío, es decir una presión entre aproximadamente 50 y aproximadamente 100 mbar (milibares).

Se encontró también que la presencia de quitosana en micropartículas hace posibles unos grados de carga con sustancia activa más altos que en el caso de micropartículas del estado de la técnica. Para la producción de las micropartículas del presente invento, se puede utilizar por consiguiente también quitosana. La quitosana es un polímero, que se puede obtener por desacetilación de quitina, que es un polisacárido que se presenta en insectos y cangrejos. Es usualmente un polisacárido con una cadena lineal que está constituida a base de 2-amino-2-desoxi-\beta-D-glucopiranosa (GlcN), estando unidos los monómeros en \beta-(1,4) (con una desacetilación del 100%). En el caso de una desacetilación incompleta resultan sin embargo formulaciones de quitosana, que todavía tienen diferentes proporciones de 2-acetamido-2-desoxi-\beta-D-glucopiranosa (GlcNaC) en la cadena del polisacárido.

De acuerdo con el invento, la quitosana puede tener diferentes grados de desacetilación. Una quitosana desacetilada prácticamente en un 100% contiene en lo esencial solamente GlcN y ya nada más de GlcNAc. Preferiblemente, la quitosana conforme al invento tiene un grado de desacetilación de 25 a 100%, de una manera sumamente preferida de 50 a 100%.

La relación en peso de la sustancia activa con actividad fisiológica a la quitosana es de una manera preferida de 1:0,01 a 1:25, de una manera más preferida de 1:0,01 a 1:10, de una manera sumamente preferida de 1:1. La relación se indica en peso/peso.

Usualmente, se utiliza una quitosana con un peso molecular de 10.000 a 2.000.000 Da, de una manera preferida con 40.000 a 400.000 Da. En la mayor parte de los casos, la quitosana se disuelve en un ácido acético al 0,001% hasta 70%, de una manera preferida en un ácido acético al 0,01% a 10% (m/m = en masa/masa). Conforme al invento, las partículas se pueden producir por un procedimiento W/O/W, S/O/W o S/O/O. La sustancia activa se puede disolver junto con quitosana en ácido acético, o primeramente se puede disolver en agua y luego dispersar con la quitosana disuelta. Este gel de quitosana y sustancia activa se dispersa luego directamente en la solución orgánica del polímero (W/O/W). La solución de quitosana y sustancia activa se puede también secar por atomización. y el polvo sólido se puede dispersar luego directamente en la solución orgánica de polímero (S/O/W; S/O/O).

La concentración de quitosana en la fase interna en el caso del procedimiento W/O/W es por lo general de 0,01% a 50% de quitosana, referida a la masa polimérica, pero preferiblemente de 0,01% a 25% de quitosana, referida a la masa polimérica. La relación en peso de sustancia activa con actividad fisiológica a la quitosana debería ser de 1:0,01 a 1:25, de una manera preferida de 1:0,1 a 1:10, de una manera sumamente preferida de 1:1. Si se utiliza el procedimiento S/O/W, se debería emplear una concentración del complejo de quitosana y sustancia activa de 0,01% a 50%, de una manera preferida de 0,1% a 25%, referida a la masa de polímero.

El invento se refiere también a micropartículas, que se pueden producir mediante el procedimiento conforme al invento. Tales microparículas tienen ventajosas propiedades en cuanto a su perfil de liberación. Así, es muy baja la cantidad de sustancia activa que se pone en libertad durante la fase de "estallido". Asimismo, una gran parte de la sustancia activa contenida en las micropartículas se pone en libertad durante la fase de "retardo". La liberación total de sustancia activa es por lo tanto muy alta. El presente invento se refiere por consiguiente a micropartículas que contienen una matriz polimérica y por lo menos una sustancia activa con actividad fisiológica, caracterizadas porque, de acuerdo con el perfil de liberación in vitro de las micropartículas

a): en el transcurso de 24 horas a partir del comienzo de la liberación se libera menos de un 25% de la cantidad total de sustancia activa; y

b): en el transcurso de 900 horas a partir del comienzo de la liberación se ha liberado por lo menos un 80% de la cantidad total de sustancia activa.

Los datos acerca de la liberación de una sustancia activa en esta solicitud se refieren a la liberación, determinada in vitro, en un aparato para liberación de acuerdo con un procedimiento expuesto en el Ejemplo 5. Es conocido que la liberación de una sustancia activa en este procedimiento in vitro se asemeja a la liberación in vivo.

No se conocen hasta ahora en el estado de la técnica micropartículas con un perfil de liberación tan ventajoso. Las micropartículas del estado de la técnica tienen una liberación más alta durante la fase de "estallido" y/o un liberación muy pequeña durante la fase de "retardo", de manera tal que la liberación total es baja. De esta manera, existe el peligro de que tan sólo durante la fase de "bioerosión", que sigue a continuación, se ponga en libertad de nuevo una alta cantidad de sustancia activa.

Las micropaertículas conforme al invento ponen en libertad, en el transcurso de 24 horas a partir del comienzo de la liberación, menos de un 25% de la cantidad total de sustancia activa, de una manera preferida menos de un 20%, de una manera sumamente preferida menos de un 15%.

Asimismo, las micropartículas tienen la propiedad de que en el transcurso de 900 horas a partir del comienzo de la liberación se libera por lo menos un 80% de la cantidad total contenida de sustancia activa, de una manera preferida por lo menos un 85%, de una manera sumamente preferida por lo menos un 90%.

Las micropartículas conformes al invento muestran una liberación, que en el período de tiempo comprendido entre 48 horas y 900 horas después del comienzo de la liberación, de una manera preferida en el período de tiempo comprendido entre 24 horas y 900 horas después del comienzo de la liberación, se efectúa en lo esencial de acuerdo con una cinética de orden cero. Esto significa que durante un período de tiempo de más de 30 días se pone en libertad diariamente una cantidad esencialmente constante de sustancia activa. De una manera preferida, en el período de tiempo comprendido entre 48 horas y 900 horas después del comienzo de la liberación, se libera diariamente de un 1,5% a un 2,5% de la cantidad total de sustancia activa, preferiblemente de un 2% a un 2,5%.

Las micropartículas conformes al invento tienen usualmente un diámetro de 1 a 500 \mum, de una manera preferida de 1 a 200 \mum, de una manera todavía más preferida de 1 hasta menos de 150 \mum, de una manera sumamente preferida de 1 a 100 \mum. Éstas pueden ser esencialmente de forma esférica o pueden tener otra forma distinta. En el caso de que las partículas no sean de forma esférica, ha de entenderse como el diámetro la máxima extensión en el espacio de una partícula. La matriz polimérica puede estar estructurada en tal caso como una envoltura, que rodea a un núcleo, o como un "entramado" que atraviesa a toda la partícula. Las micropartículas del presente invento abarcan, por consiguiente, tanto partículas que tienen un núcleo que contiene una sustancia activa, que está rodeado por una capa polimérica (microcápsulas), como también partículas que tienen una matriz polimérica, en la que está distribuida la sustancia activa ("microesferas").

En una forma especial de realización, las micropartículas pueden contener también quitosana. Las propiedades y las concentraciones, conformes al invento, de quitosana son como antes se han indicado. Tales partículas muestran un más alto grado efectivo de carga con sustancia activa.

Un aspecto adicional del presente invento es un medicamento, que comprende las micropartículas conformes al invento, eventualmente junto con sustancias coadyuvantes farmacéuticamente compatibles.

El presente invento pone a disposición por primera vez unas micropartículas, que combinan una baja liberación de sustancia activa durante la fase de "estallido" con una alta liberación total. Además de esto, las micropartículas conformes al invento muestran una evolución esencialmente lineal de la liberación de sustancia activa durante la fase de "retardo". Mediante las micropartículas conformes al invento, es posible una liberación de la sustancia activa a lo largo de varias semanas e incluso de varios meses. Éstas son apropiadas por lo tanto en particular para una aplicación por vía subcutánea / intramuscular.

La Figura 1 muestra la dependencia del rendimiento de encapsulación (VE) con respecto de la presión empleada durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a una temperatura constante de 5ºC. El rendimiento de encapsulación aumenta con una presión decreciente.

La Figura 2 muestra la dependencia del rendimiento de encapsulación (VE) con respecto de la presión empleada durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a una temperatura constante de 20ºC. Al contrario que en la Figura 1, se investigan aquí solamente dos presiones, a saber la presión atmosférica y 500 mbar. También a 20ºC se puede reconocer que una presión más baja durante el endurecimiento conduce a un más alto rendimiento de encapsulación.

La Figura 3 muestra la dependencia de la liberación in vitro de lisozima en el caso de la insuflación de nitrógeno (N_{2}) durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a diferentes temperaturas (5ºC y 20ºC). Además, se muestra el perfil de liberación in vitro de micropartículas, en las que el disolvente se había separado por evaporación a 50ºC durante la fase de endurecimiento. En tal caso se puede reconocer una liberación total más baja al emplearse temperaturas más altas. Además, mediante la disminución de la temperatura desde 20ºC hasta 5ºC se llega a una liberación inicial disminuida en torno a un 6% y a una elevada liberación total de 99,7%, frente a 79,3% a 20ºC después de una liberación durante 1.074 horas. Además, la curva "N_{2} a 5ºC" muestra una liberación más baja de la sustancia activa durante la fase de "estallido".

En la Figura 4 se representa el resultado del Ejemplo 9. Mediante el empleo de una presión baja y de temperaturas bajas se llega a un "estallido" bajo después de 5 h, de 22,4% a 5ºC y a un vacío de 100 mbar y a una liberación total más alta, de 90,5%. A 20ºC y a una presión de 100 mbar, la liberación total es solamente de 62,8% después de 912 horas.

La Figura 5 muestra el perfil de liberación de dos formulaciones tratadas independientemente una de otra a una presión de 100 mbar y a 5ºC durante el endurecimiento de las micropartículas en el reactor de laboratorio. Por lo tanto, mediante el procedimiento conforme al invento se pueden producir de una manera reproducible unas micropartículas, que tienen en lo esencial el mismo perfil de liberación. Como se puede observar a partir de estas series de datos, las micropartículas muestran una liberación ampliamente lineal.

Los siguientes Ejemplos deben explicar el invento con mayor detalle.

Ejemplo 1 Producción de las micropartículas de acuerdo con el procedimiento W/O/W (Ejemplo comparativo) Micropartículas con lisozima

Para la producción de micropartículas a base de PLA o PLGA, cargadas con péptidos, se utilizó el siguiente procedimiento de "evaporación / extracción del disolvente": 2,00 g de un polímero de PLGA (RG 503 H de la entidad Boehringer Ingelheim) en una jeringa Omnifix que tiene una capacidad de 20 ml con una conexión Luer y un tapón de cierre Combi ajustado, se disuelven totalmente de un modo normalizado en 5,7 ml de diclorometano (DCM) (densidad del DCM = 1,32 g/ml [Merck Index]) (al 35% m/v = en masa/volumen). 100,00 mg/ml de lisozima se disuelven con ligera agitación por medio de un agitador magnético en un vial para HPLC (cromatografía en fase líquida de alto rendimiento) con una capacidad de 4 ml en agua destilada o en un tampón, hasta alcanzar la transparencia. Luego se inyectan 1.000 \mul de la solución de péptido en la solución de polímero y se dispersan con una herramienta Ultraturrax SN-10 G durante 60 segundos (s) a 13.500 revoluciones por minuto (rpm). La emulsión primaria (W1/O) se inyecta luego a partir de la jeringa Omnifix en 500 ml de una solución de un poli(alcohol vinílico) (PVA) al 0,1%, previamente enfriada a 5ºC (Mowiol 18-88: P.M. (peso molecular) = 130 kDa, grado de hidrólisis 88%) y simultáneamente se dispersa con la herramienta Ultraturrax SN-18 G durante 60 s a 13.500 rpm, de manera tal que resulta una doble emulsión W1/O/W2. Ésta se deja endurecer durante 3 h a la temperatura ambiente (TA) en un vaso de precipitados abierto, con una capacidad de 600 ml, bajo la presión atmosférica a 240 rpm mediante un aparato agitador en serie IKA y con agitadores centrífugos de 2 paletas.

La emulsión doble total, con las micropartículas endurecidas contenidas en ella, se centrifuga luego con unos vasos de centrífuga en la Megafuge de Heraeus 1.0 a 3.000 rpm durante 3 minutos, y el material sobrenadante de la fase W2 se separa por decantación. A continuación, las micropartículas se añaden a través de un filtro de succión con una capacidad de 500 ml (borosilicato 3.3; tamaño de poros 4) y se lava por lo menos 3 veces con agua destilada. En tal caso, las micropartículas, que se han obtenido sobre el material sinterizado (frita), se suspenden de nuevo con una poca cantidad de agua destilada y se lavan, con el fin de eliminar los residuos de PVA.

Las micropartículas obtenidas se reúnen y se añaden a recipientes previamente tarados, y luego se liofilizan. Las micropartículas se colocan en la instalación Delta 1 A conectada a las condiciones de servicio, y se someten a una desecación principal durante por lo menos 120 h a -60ºC y a un vacío de 0,01 mbar. A continuación, sigue una desecación posterior durante 24 h a 10ºC y a un vacío de 0,01 mbar, con el fin de eliminar los últimos restos del disolvente restante y de agua. Las micropartículas se pesan en los recipientes y se calcula el rendimiento.

Ejemplo 2 Producción de las micropartículas de acuerdo con el procedimiento S/O/W (Ejemplo comparativo)

La producción se efectúa de acuerdo con las condiciones del procedimiento W/O/W con una variación en la primera etapa de producción, que consiste en que no se disuelve una cantidad definida de péptido o proteína, sino que ésta se añade en forma liofilizada o secada por atomización directamente al polímero disuelto (35% m/m) en DCM y se dispersan mediante una herramienta Ultraturrax SN-10 G durante 30 s a 13.500 rpm. Esta resultante suspensión S/O o primaria se dispersa luego en la fase externa, de manera tal que resulta una emulsión S/O/W. La producción ulterior sigue de una manera análoga a las condiciones del procedimiento W/O/W.

Ejemplo 3 Producción de las micropartículas mediante un reactor de laboratorio

Para la producción de micropartículas según el procedimiento W/O/W o S/O/W mediante una instalación de tratamiento en condiciones controladas, se utilizó un reactor de laboratorio IKA LA-R 1.000. Se emplearon las condiciones del procedimiento W/O/W o S/O/W (véanse los Ejemplos 1 y 2). En tal caso, la emulsión primaria se prepara en una jeringa Omnifix y luego se inyecta, a través de uno de los orificios de la tapa del reactor, en la solución al 0,1% de PVA previamente dispuesta en el reactor de laboratorio IKA (con una capacidad de 500 ml), previamente ajustada a una determinada temperatura con dispersamiento durante 60 s mediante una herramienta Ultraturrax T 25 con SN-18 G a 13.500 rpm. Después de haberse terminado el dispersamiento, la Ultraturrax se saca del reactor IKA y se cierra el recipiente del reactor. Entonces se puede aplicar una determinada presión. En los siguientes Ejemplos, junto a la presión atmosférica se emplearon principalmente las presiones de 500 mbar o 100 mbar. A continuación, se efectúa el endurecimiento de las micropartículas bajo presión constante con un agitador de ancla a 40 rpm durante 3 h y a una temperatura constante. Se pueden ajustar diferentes temperaturas. En la mayor parte de los casos, se emplearon las temperaturas de 20ºC o 5ºC. La separación y la liofilización de las micropartículas se efectúan tal como ya se describió para el procedimiento W/O/W o S/O/W.

La instalación comprende un recipiente de reactor con una capacidad de 1 l y se puede atemperar a través de un fondo de doble pared del recipiente a una temperatura en el intervalo de -30ºC a 180ºC. El atemperamiento se efectúa a través de un termostato con recirculación. La aplicación de un vacío se efectúa con una bomba de vacío MZ 2 C de Jahnke & Kunkel. Además, se captan la temperatura del contenido del reactor y del líquido de refrigeración, el vacío, la velocidad de agitación y la velocidad de rotación del Ultraturrax por medio de sensores de medición (PT 100 para la temperatura) y se transmiten al equipo lógico (sotfware). El control de la instalación para el proceso se efectúa a través del programa lógico Labworldsoft versión 2.6.

Ejemplo 4 Método para la determinación de la carga de las micropartículas con sustancia activa

La determinación de la carga de las micropartículas con sustancia activa se efectuó de acuerdo con el método modificado de Sah y colaboradores (A new strategy to determine the actual Protein Content of poly(lactide-co-gycolide) Microspheres [Una nueva estrategia para determinar el contenido real en cuanto a proteínas de microesferas de poli(lactida-co-glicolida)]; Journal of Pharmac. Sciences; 1997; 86; (11); páginas 1.315-1.318). Las micropartículas se disuelven en una solución de DMSO / 0,5% de SDS / NaOH 0,1 N, a continuación, a partir de esta solución, se lleva a cabo un ensayo BCA (Lowry y colaboradores, Protein measurement with the Folin Phenol Reagent [Medición de proteínas con el reactivo fenol folina]; J. Biol. Chem.; 193; páginas 265-275; 1951). Con esto se determina el grado efectivo de carga de las micropartículas.

Ejemplo 5 Determinación de la liberación in vitro

La liberación acumulada de lisozima, en % de la lisozima total contenida en las micropartículas, se investigó de la siguiente manera:

Para la determinación de la liberación de sustancia activa a partir de las micropartículas, se pesaron e introdujeron en cada caso 20 mg de micropartículas (por cada carga una formulación triple). Las micropartículas se añadieron a vasos de Pyrex, que tienen un tapón Schott de rosca GL18 con una junta de estanqueidad de teflón. Las micropartículas se mezclaron cada vez con 5 ml de un tampón para liberación de Mc.Ilvaine-Whiting (acerca de su composición véase más adelante). A continuación, las muestras se colocaron dentro del aparato para liberación (a 6 rpm; 37ºC). El aparato para liberación comprende una placa de montura universal a base de un polipropileno, destinada a recibir recipientes de Eppendorf o vasos de Pyrex. La placa con los recipientes se puede poner en un movimiento rotatorio dentro de un alojamiento atemperable, de manera tal que los recipientes giran en torno a su eje transversal. El número de revoluciones se puede ajustar de un modo continuo (sin escalones) a 6-60 rpm. El atemperamiento de todo el recinto interno se efectúa a través de una circulación de aire caliente. La primera muestra se tomó después de aproximadamente dos horas, la segunda después de aproximadamente seis horas, la tercera después de aproximadamente 24 horas y la cuarta después de 48 horas, y las demás a intervalos en cada caso de tres días. Los vasos de Pyrex se centrifugaron en la centrifugadora (Megafuge 1.0, Heraeus, Hanau) a 3.000 rpm (4.700 g) durante 3 minutos, y a continuación, con una pipeta de Pasteur, se retiró lo más completamente que fuese posible el tampón sobrenadante. Después de esto se añadieron a los vasos de nuevo 5 ml de un tampón, y las muestras se introdujeron de nuevo en el aparato para liberación. El tampón se protegió con respecto de la luz y se conservó a 4ºC en un armario
frigorífico.

Composición del tampón para liberación de Mc.Ilvaine-Whiting:

0,0094 M de ácido cítrico

0,1812 M de hidrógeno fosfato de disodio

0,01% (p/v) de Tween 20 para la biología molecular

0,025% (p/v) de aziduro de sodio

pH 7,4

en agua destilada

La solución de péptido, sacada con pipeta desde los recipientes de Eppendorf o de los vasos de Pyrex, se transfirió a viales para HPLC con una capacidad de 4 ml, que tenían una junta de estanqueidad de teflón perforable y un cierre giratorio, y o bien se analizó inmediatamente por HPLC o se conservó a -30ºC. Luego, las muestras, antes del análisis por HPLC, se descongelaron durante dos horas a la temperatura ambiente, y en tal caso se agitaron a mano brevemente múltiples veces. Se procuró obtener una solución totalmente transparente después de la descongela-
ción.

El análisis por HPLC se efectuó en una columna para HPLC de Waters con una bomba W600, un automuestreador Autosampler 717, un detector de fluorescencia Satin 474 y un programa lógico Millenium 3.15 software. Los ajustes para lisozima fueron:

-: Velocidad de flujo (caudal) 1 ml/min,

-: Tampón A = 0,1% de TFA (ácido trifluoroacético) en agua,

-: Tampón B = 0,1% de TFA en acetonitrilo,

-: Gradiente: 80% de A, 20% de B en 10 minutos hasta 60% de A, 40% de B; hasta 12 minutos a 80% de A, 20% de B

-: Longitud de onda de excitación = 280 nm,

-: Longitud de onda de emisión = 340 nm con una ganancia Gain = 100, una atención 256 Attention y una desviación típica STD

-: Atemperamiento de la estufa de la columna a 40ºC

-: Columna: TSK Gel RP 18, NP; 5 \mum; 5 mm x 4,6 mm

-: Los agentes eluyentes se desgasificaron previamente mediante helio o ultrasonidos, y durante la analítica se desgasificaron mediante agentes desgasificadores.

-: Por cada grupo de muestras se analizaron series normalizadas de 0,05 a 4 \mug de lisozima / ml de tampón para liberación con un volumen de inyección de 100 \mul y de 10 a 100 \mug de lisozima / ml de tampón para liberación con un volumen de inyección de 10 \mul como patrón.

El método antes descrito para la determinación de la liberación in vitro, se refiere a lisozima como sustancia activa y por lo tanto no es utilizable para leuprorelina. Para la determinación de otras sustancias activas, tales como por ejemplo leuprorelina, deben modificarse algunos parámetros, tales como p.ej. la columna utilizada, los medios tamponadores y la longitud de onda utilizada. Sin embargo, estas modificaciones son evidentes para un experto en la
especialidad.

Ejemplo 6

Se investigó la influencia sobre el rendimiento de encapsulación de una presión disminuida durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a 5ºC. De acuerdo con el Ejemplo 3, se produjeron según un procedimiento S/O/W tres formulaciones para micropartículas en diferentes condiciones. En la formulación 1 el endurecimiento de las micropartículas se efectuó a la presión atmosférica, en la formulación 2 a 500 mbar, y en la formulación 3 a 100 mbar. En los casos de todas las formulaciones, el endurecimiento se efectuó a 5ºC. Se determinó la carga efectiva con sustancia activa de las formulaciones de micropartículas de acuerdo con el procedimiento expuesto en el Ejemplo 4, y a partir de ésta se calculó el rendimiento de encapsulación (VE). El resultado se representa en la Figura 1. El rendimiento de encapsulación aumenta con una presión decreciente.

Ejemplo 7

Igual que en el Ejemplo 6, unas formulaciones para micropartículas, que se habían preparado en diferentes condiciones en un reactor de laboratorio, se investigaron en cuanto a su rendimiento de encapsulación. En la formulación 1 el endurecimiento de las micropartículas se efectuó bajo la presión atmosférica, y en la formulación 2 a 500 mbar. En los casos de ambas formulaciones el endurecimiento se efectuó a 20ºC. A continuación, se determinó el rendimiento de encapsulación. Como se puede deducir a partir de la Figura 2, también con una temperatura de elaboración de 20ºC aumenta el rendimiento de encapsulación con una presión decreciente.

Ejemplo 8

Se produjeron micropartículas de acuerdo con el procedimiento S/O/W en tres diferentes condiciones en un reactor de laboratorio. En las formulaciones 1 y 2 se insufló nitrógeno a 5ºC o bien a 20ºC dentro del reactor de laboratorio durante el endurecimiento de las micropartículas. En la formulación 3, el disolvente se separó por evaporación a 50ºC durante la fase de endurecimiento. Se determinó la liberación in vitro de lisozima en el caso de las micropartículas de las tres formulaciones, de acuerdo con el procedimiento expuesto en el Ejemplo 5.

El resultado se muestra en la Figura 3. En el caso de emplearse unas temperaturas más altas, puede observarse una más baja liberación total. Por disminución de la temperatura desde 20ºC hasta 5ºC, se llega a una liberación inicial disminuida en un 6% y a una elevada liberación total de 99,7% después de 1.074 horas, en comparación con 79,3% a 20ºC.

Ejemplo 9

Se prepararon cinco formulaciones para micropartículas en diferentes condiciones de acuerdo con el procedimiento S/O/W:

-: a 20ºC durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio bajo la presión atmosférica ("20ºC")

-: a 5ºC durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio bajo la presión atmosférica ("5ºC")

-: a 20ºC durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a 100 mbar ("20ºC inmediatamente 100 mbar")

-: a 5ºC durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a 100 mbar ("5ºC inmediatamente 100 mbar")

-: De acuerdo con el Ejemplo 2 en un vaso de precipitados, habiendo sido enfriada previamente a 5ºC la fase externa y habiéndose agitado la emulsión de S/O/W a la temperatura ambiente y a la presión atmosférica, después de haber dispersado la fase S/O en la fase externa. En tal caso, se llegó en el transcurso de 30 minutos a un ajuste de la temperatura de las micropartículas, que se estaban endureciendo, a la temperatura ambiente ("5ºC y solo inicial pre-enfriamiento en vaso").

Se determinó la liberación in vitro de lisozima a partir de micropartículas de las cinco formulaciones. El resultado se muestra en la Figura 4.

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Una parte de los resultados se recopila en la siguiente Tabla 1:

TABLA 1

	"Estallido" después	Liberación total	Cantidad liberada
	de 5 h	después de 912 h	linealmente
			(diferencia entre
			"estallido" y
			liberación total)
Vaso de precipitados para S/O/W con	27,5%	100%	aproximadamente
enfriamiento inicial de 5ºC			72,5%
Reactor de laboratorio a 20ºC, 1.013	37,6%	71,1%	aproximadamente
mbar			33,5%
Reactor de laboratorio a 5ºC, 1.013	26,1%	85,5%	aproximadamente
mbar			59,5%
Reactor de laboratorio a 20ºC, 100	17,6%	62,8%	aproximadamente
mbar			45,2%
Reactor de laboratorio a 5ºC, 100	22,4%	90,5%	aproximadamente
mbar			68%

\vskip1.000000\baselineskip

En el caso de la formulación situada dentro del vaso de precipitados puede observarse un "estallido" de 27,5% después de 5 horas. El "estallido" a 20ºC y 1.013 mbar es manifiestamente más alto, con un valor de 37,6%. Si son enfriadas las micropartículas que se están endureciendo, también es más bajo el valor de "estallido". Además, a 5ºC y 1.013 mbar se muestra una liberación total, de 85,5%, manifiestamente más alta que a 20ºC y 1.013 mbar después de una liberación durante 912 horas. Por empleo de un vacío, se puede disminuir adicionalmente la liberación en la fase de "estallido".

Ejemplo 10

Se prepararon en condiciones idénticas dos formulaciones para micropartículas, independientemente una de otra, en un reactor de laboratorio de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Las condiciones eran: 5ºC y 100 mbar durante el endurecimiento de las micropartículas.

Se determinó la liberación in vitro de las dos formulaciones para micropartículas de acuerdo con el Ejemplo 5. El resultado se muestra en la Figura 5. De una manera reproducible se pueden preparar formulaciones para micropartículas con unas propiedades de liberación esencialmente idénticas.

Ejemplo 11 Influencia de la presión y de la temperatura en el caso de leuprolina-MP de acuerdo con el procedimiento W/O/W

Se investigó la influencia sobre las propiedades de las micropartículas, de una presión y una temperatura disminuidas durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a 5ºC. Se prepararon, tal como se describe en el Ejemplo 1, según un procedimiento W/O/W, dos formulaciones para micropartículas en diferentes condiciones. En tal caso se utilizó acetato de leuprorelina como sustancia activa.

En la formulación 1, el endurecimiento de las micropartículas se efectuó a 5ºC y 100 mbar y en la formulación 2 a 25ºC y 1.000 mbar. Se calculó la carga efectiva de sustancia activa de las formulaciones para micropartículas, tal como en el procedimiento expuesto con mayor detalle en el Ejemplo 4, y a partir de ésta se calculó el rendimiento de encapsulación (VE). El resultado se representa en la Figura 6. El rendimiento de encapsulación aumenta con una presión decreciente.

Ejemplo 12 Influencia de la presión, de la temperatura y de la adición de quitosana

Se investigó la influencia sobre las propiedades de las micropartículas de una presión y una temperatura disminuidas durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a 5ºC. Tal como se describe en el Ejemplo 1, se preparó según un procedimiento W/O/W una formulación para micropartículas con la adición de una quitosana (P.M. = 150.000). En tal caso se utilizó como sustancia activa el acetato de leuprorelina.

En la formulación 1, el endurecimiento de las micropartículas se efectuó a 5ºC y 100 mbar. Se determinó la carga efectiva con sustancia activa de las formulaciones para micropartículas de acuerdo con el procedimiento representado en el Ejemplo 4, y a partir de ésta se calculó el rendimiento de encapsulación (VE). El resultado se representa en la Figura 7.

En este caso se puede reconocer que en comparación con la formulación 1, del Ejemplo 11 (preparación según W/O/W sin adición de quitosana, pero con empleo de un vacío y de una temperatura) se efectúan una VE aumentada y una liberación retardada. Esta formulación demuestra que mediante la adición de una quitosana se pueden conseguir resultados todavía mejores.

Ejemplo 13 Influencia de la presión y de la temperatura en el caso de micropartículas de acetato de leuprorelina según el procedimiento S/O/W

Se investigó la influencia sobre las propiedades de las micropartículas de una presión y de una temperatura disminuidas, durante el endurecimiento de las micropartículas en un reactor de laboratorio a 5ºC. De acuerdo con el Ejemplo 2 se prepararon según un procedimiento S/O/W dos formulaciones para micropartículas en diferentes condiciones. En tal caso, se utilizó como sustancia activa acetato de leuprorelina. En la formulación 1, el endurecimiento de las micropartículas se efectuó a 5ºC y 100 mbar y en la formulación 2 a 25ºC y 1.000 mbar. Se determinó la carga efectiva con sustancia activa de las formulaciones para micropartículas de acuerdo con el procedimiento expuesto en el Ejemplo 4, y a partir de ésta se calculó el rendimiento de encapsulación (VE). El VE es más alto en un factor de 2,25 en el caso de utilizarse un vacío y una temperatura disminuida. En la Figura 8 se representa la liberación in vitro de estas micropartículas con acetato de leuprorelina.

Claims

1. Procedimiento para la producción de micropartículas destinadas a la liberación retardada de una sustancia activa, caracterizado porque

2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la temperatura es de 0ºC a 10ºC.

3. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque la temperatura es de 3ºC a 7ºC.

4. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la dispersión o emulsión resultante en la etapa b) se atempera ulteriormente, durante la eliminación del disolvente orgánico, a una temperatura de 0ºC a 20ºC.

5. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizado porque la dispersión o emulsión resultante en la etapa b) se atempera ulteriormente, durante la eliminación del disolvente orgánico, a una temperatura de 0ºC a 10ºC.

6. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el disolvente orgánico se elimina, sometiendo a la dispersión o emulsión resultante en la etapa b) a una presión de 50 a 150 mbar.

7. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el disolvente orgánico se elimina, introduciendo un gas inerte, preferiblemente nitrógeno, en la dispersión o emulsión resultante en b).

8. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque como polímero se utiliza un poli(ácido láctico), un poli(ácido glicólico) o un copolímero de ácido láctico y ácido glicólico.

9. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la solución orgánica del polímero contiene diclorometano como disolvente.

10. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la concentración del polímero en la solución orgánica del polímero es de 5 a 50% (p/v).

11. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la composición que contiene la sustancia activa es una solución acuosa.

12. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la composición que contiene la sustancia activa consiste en sustancias sólidas.

13. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la composición que contiene la sustancia activa se pone a disposición mediante el recurso de que se seca por atomización una solución que contiene la sustancia activa.

14. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque como fase externa se emplea una solución acuosa.

15. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 14, caracterizado porque la fase externa acuosa contiene un emulsionante y/o un coloide protector.

16. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 15, caracterizado porque el coloide protector se selecciona entre el conjunto que consta de un poli(alcohol vinílico), una poli(vinilpirrolidona) y un poli(etilenglicol).

17. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la fase externa es una fase no acuosa, que contiene un emulsionante y/o un coloide protector.

18. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17, caracterizado porque la fase externa contiene Span, Tween o Brij.

19. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque la composición que contiene la sustancia activa contiene además quitosana.

20. Micropartículas, obtenibles por medio de un procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 19.

21. Micropartículas de acuerdo con la reivindicación 20, caracterizadas porque de acuerdo con el perfil de liberación in vitro de las micropartículas

a): en el transcurso de 24 horas a partir del comienzo de la liberación se pone en libertad menos de un 25% de la cantidad total de sustancia activa;

b): en el transcurso de 900 horas a partir del comienzo de la liberación se pone en libertad por lo menos un 80% de la cantidad total de sustancia activa; y

c): la liberación en el período de tiempo comprendido entre 24 horas y 900 horas después del comienzo de la liberación se efectúa en lo esencial de acuerdo con una cinética de orden cero.

22. Micropartículas de acuerdo con la reivindicación 21, caracterizadas porque de acuerdo con el perfil de liberación in vitro de las micropartículas, en el transcurso de 24 horas a partir del comienzo de la liberación se pone en libertad menos de un 20% de la cantidad total de sustancia activa.

23. Micropartículas de acuerdo con la reivindicación 21 ó 22, caracterizadas porque de acuerdo con el perfil de liberación in vitro de las micropartículas, en el transcurso de 900 horas a partir del comienzo de la liberación se pone en libertad por lo menos un 90% de la cantidad total de sustancia activa.

24. Micropartículas de acuerdo con una de las reivindicaciones 21 a 23, caracterizadas porque en el período de tiempo comprendido entre 48 horas y 900 horas después del comienzo de la liberación, se pone en libertad diariamente de 1,75% a 2,5% de la cantidad total de sustancia activa.

25. Micropartículas de acuerdo con una de las reivindicaciones 20 a 24, caracterizadas porque como sustancia activa con actividad fisiológica se contiene un péptido o una proteína.

26. Medicamento que contiene micropartículas de acuerdo con una de las reivindicaciones 20 a 25.

27. Medicamento de acuerdo con la reivindicación 26, caracterizado porque está ajustado para la administración por vía parenteral.