ES2230346T3 - Procedimiento para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad. - Google Patents

Abstract

Procedimiento para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, caracterizado porque se eligen compuestos que poseen la capacidad de inhibir la actividad de al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos.

Description

Procedimiento para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad.

La presente invención se refiere a un procedimiento para encontrar compuestos, que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad. Además, la invención se refiere a la utilización de compuestos que poseen la capacidad de inhibir en mamíferos la lipogénesis de nuevo y los cuales están esencialmente libres de efectos dirigidos al sistema nervioso central (= SNC), para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad.

La obesidad es hoy en día, en particular en los países industrializados desarrollados, un problema crecientemente serio para la salud de la población, obesidad que es provocada, en su mayor parte, por una alimentación desequilibrada y demasiado rica en grasas. Con el aumento de personas con sobrepeso en la proporción porcentual de la población, aumentan también las secuelas de la obesidad que abarcan desde una insatisfacción personal hasta enfermedades circulatorias del corazón o, también, determinadas formas de diabetes. Por lo tanto, existen ya algunos enfoques terapéuticos que están dirigidos a un tratamiento o a una profilaxia de la obesidad. Como ejemplo, se pueden mencionar compuestos inhibidores de lipasa que reducen la separación de grasas en el tracto intestinal y, de este modo, disminuyen el rendimiento energético a partir de los alimentos ingeridos. Las grasas de los alimentos son expulsadas, en este enfoque terapéutico, por lo tanto, al menos en parte, de nuevo sin descomponer. Sin embargo, son deseables otros nuevos enfoques terapéuticos para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad que puedan completar las formas de terapia antes conocidas.

Se ha encontrado ahora, sorprendentemente, que compuestos, que pueden inhibir la lipogénesis de nuevo en mamíferos, en particular en seres humanos, son adecuados de manera ventajosa para el tratamiento y/o la profilaxia eficaz de la obesidad. En este caso, se alcanzan resultados particularmente buenos cuando los compuestos antes mencionados son administrados a lo largo de amplios períodos de tiempo, por ejemplo a lo largo de períodos de tiempo de varias semanas.

Es objeto de la invención un procedimiento para encontrar compuestos que sean adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, en el que se eligen aquellos compuestos que poseen la capacidad de inhibir la lipogénesis de nuevo en mamíferos, en particular en seres humanos. Además, es objeto de la invención la utilización de compuestos que poseen la capacidad de inhibir la lipogénesis de nuevo en mamíferos y que, en particular, están esencialmente libres de efectos dirigidos al SNC tales como efectos anticonvulsivos, para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad.

Por lipogénesis de nuevo (en lo que sigue abreviado DNL) se entiende la constitución de ácidos grasos propios del cuerpo a partir de hidratos de carbono en el organismo de mamíferos. Esta reacción de constitución tiene lugar en el citosol de las células corporales, que se basa en el denominado ciclo del ácido cítrico o ciclo de Krebs-Martius. En una reacción bioquímica propia del cuerpo, a partir de los eslabones piruvato, que procede de hidratos de carbono, e hidrógeno-carbonato, a través de distintas etapas intermedias

- entre ellas maleato, fumarato y \alpha-cetoglutarato -
se constituye en última instancia citrato. Si el citrato se constituye en exceso, éste puede ser transformado, a través de la etapa intermedia acetil-coenzima A, en ácidos grasos libres (= metabolitos lipídicos), que forman grasas y luego pueden ser incorporados en células grasas (= adipocitos). Una incorporación excesiva de grasas formadas a partir de ácidos grasos en las células corporales puede conducir, de manera muy general, a la obesidad. En el ciclo del ácido cítrico participan distintas enzimas. La conversión de sustancias del ciclo del citrato depende esencialmente de la cantidad del hidrógeno-carbonato que se encuentre a disposición. La cantidad del hidrógeno-carbonato que se encuentra a disposición depende en este caso de nuevo de la velocidad con la que se pueda formar a partir de dióxido de carbono. Esta reacción de equilibrio que proporciona hidrógeno-carbonato es catalizada por las denominadas carboanhidrasas. De las carboanhidrasas y de sus enzimas, hasta ahora conocidas, participan en la catálisis de reacciones en los mamíferos predominantemente la carboanhidrasa-isozima de los subtipos II (= CA II), así como V (= CA V), que ponen a disposición hidrógeno-carbonato para el ciclo del ácido cítrico. En particular, las carboanhidrasas del subtipo V juegan un papel, ya que éstas se presentan en las mitocondrias. También el ciclo del ácido cítrico tiene lugar en las mitocondrias.

Son imaginables diferentes posibilidades para inhibir la DNL en células de mamíferos, las cuales están todas ellas dirigidas a disminuir la conversión de sustancias que resultan en el ciclo del ácido cítrico. Con ello, se puede reducir la concentración de citrato producido en exceso que se encuentra a disposición para la construcción de ácidos grasos. De manera correspondiente a la presente invención, la DNL se puede inhibir preferiblemente inhibiendo las carboanhidrasas que catalizan el hidrógeno-carbonato para las reacciones que proporcionan el ciclo del ácido cítrico. Preferiblemente, para la finalidad de acuerdo con la invención se pueden inhibir las carboanhidrasas de los subtipos II y/o V, preferiblemente la CA V.

Compuestos que pueden inhibir de manera inespecífica carboanhidrasas (= inhibidores de CA inespecíficos o clásicos) son en sí conocidos y se emplean desde hace tiempo en diferentes sectores terapéuticos, principalmente como diuréticos o en oftalmología. Una panorámica sobre sectores de aplicación de inhibidores de CA clásicos de este tipo se encuentra, por ejemplo, en C. T. Supuran, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 10(5) (2000) 575 - 600. Por "inhibidores de CA específicos" deben entenderse, por el contrario, compuestos que inhiban ampliamente sólo un subtipo de CA (por ejemplo CA V) o un grupo definido de subtipos de CA. La utilización de inhibidores de CA clásicos para el tratamiento y/o la profilaxia preestablecida de la obesidad no es hasta ahora conocida.

En general, se admite que la mayoría predominante de casos conocidos de obesidad se ha de atribuir a la porción comparativamente incrementada de grasas extrañas del cuerpo en los alimentos ingeridos. En los países muy desarrollados, tales como EE.UU., las personas obesas ingieren hasta el 30% de su alimentación en forma de grasas. Según los conocimientos actuales, las incorporaciones de grasa que conducen a la obesidad proceden, según ello, predominantemente de grasas de los alimentos ingeridos de manera excesiva que no se ven afectadas por una inhibición de la DNL dirigida al metabolismo de los hidratos de carbono.

A pesar de que mediante una inhibición de la DNL se consigue una incorporación reducida de ácidos grasos en adipocitos, una inhibición de la DNL, debido a su escasa cooperación para la incorporación de ácidos grasos en células corporales, fue considerada hasta ahora como punto de partida inadecuado para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad en seres humanos. Una recopilación de las opiniones expresadas en este sentido en el mundo científico se encuentra, por ejemplo, en M. K. Hellerstein, European Journal of Clinical Nutrition 53 (1) (1999) 53-65. A este punto de vista predominante en el mundo científico se le ponía también en el camino hasta ahora la búsqueda preestablecida de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad que se basan en el principio de la inhibición de la DNL, o de su desarrollo.

En el marco de la presente invención se ha encontrado ahora, sorprendentemente, que compuestos que poseen la capacidad de inhibir la DNL en mamíferos, en particular en seres humanos, pueden ser empleados eficazmente para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, en particular cuando estos compuestos son administrados a los pacientes afectados a lo largo de prolongados períodos de tiempo de, por ejemplo, más de seis semanas. Según esto, se pueden alcanzar, a lo largo de prolongados períodos de tiempo, reducciones significativas del peso corporal en personas obesas mediante la inhibición de la DNL, a pesar de que la DNL aporte una cooperación relativamente escasa a la grasa corporal incorporada en los adipocitos. Mediante una inhibición de la DNL a lo largo de prolongados períodos de tiempo, este en sí escaso efecto puede por lo tanto acumularse de modo que en conjunto aporte una cooperación significativa para la reducción del peso corporal.

En el ejemplo del compuesto Topiramat se puede demostrar que el procedimiento de acuerdo con la invención es realmente adecuado para encontrar de forma establecida compuestos adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad. Topiramat es un anti-epiléptico conocido a partir del documento EP 0 138 441 A2. De Topiramat se conoce, además, que presenta un espectro de acción farmacológica multifactorial. Así, Topiramat puede bloquear los canales del sodio dependientes de la tensión y, por consiguiente, estabilizar el potencial de membrana de las células, activa los receptores de GABA y refuerza con ello la inhibición inducida por GABA, actúa como inhibidor de carboanhidrasa y, por último, es capaz de inhibir los receptores de Kainat/AMPA, un subtipo de los receptores de glutamato, con lo cual queda inhibida la aparición de corrientes inducidas por AMPA. Topiramat presenta, por consiguiente, acusados efectos sobre el SNC. No se conoce si las propiedades anti-epilépticas de Topiramat se han de atribuir a los factores farmacológicamente relevantes antes mencionados.

A partir del documento WO 98/00130 es conocido que Topiramat posee también propiedades farmacológicas que le permiten parecer adecuado para el tratamiento de la obesidad. Estas propiedades habían sido descubiertas por casualidad como efectos concomitantes en estudios a largo plazo en pacientes de epilepsia. Hasta ahora, no se conoce a qué propiedades farmacológicas de Topiramat se ha de atribuir la pérdida de peso observada en pacientes de epilepsia. Topiramat cae dentro del alcance de un grupo de compuestos de una fórmula general I con actividad anticonvulsiva, indicado en el documento WO 98/00130 como adecuado para el tratamiento de la obesidad.

Según el procedimiento de acuerdo con la invención se pudo demostrar entonces que Topiramat es un potente inhibidor de CA, en particular un potente inhibidor de carboanhidrasas de los subtipos II y V que se presentan en mamíferos, y que Topiramat es capaz de inhibir de manera eficaz la DNL en células de mamíferos. Por consiguiente, con ayuda del procedimiento de acuerdo con la invención se pudo confirmar por primera vez que los efectos concomitantes farmacológicos de Topiramat, hasta ahora incomprensibles y que conducen a la pérdida de peso en pacientes de epilepsia, se basan esencialmente en su capacidad de inhibir de manera eficaz la DNL en mamíferos. Por consiguiente, es de esperar que con ayuda del procedimiento de acuerdo con la invención se puedan encontrar en el futuro compuestos que sean adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad. Con el procedimiento de acuerdo con la invención se abre entonces por primera vez la posibilidad de encontrar, de forma relativamente rápida y sencilla, compuestos con una potencia farmacológica que actúan según el principio de la inhibición de DNL. Gracias a la presente invención se pueden elegir ahora, sin laboriosos y costosos ensayos in vivo, tales como ensayos de alimentación en animales de ensayo, compuestos que actúan según el principio antes mencionado y que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, al menos en un primer procedimiento de elección orientativo.

Estos resultados sorprenden, ya que en investigaciones previas de las propiedades farmacológicas de Topiramat su actividad inhibidora de CA se indicó siempre como discreta o incluso como muy escasa y terapéuticamente de poca importancia (véase, por ejemplo, B. E. Maryanoff et al., Journal of Medicinal Chemistry 30 (1987) 880 -887; B. E. Maryanoff et al., Journal of Medicinal Chemistry 41 (1998) 1315 -1343; S. J. Dodgson et al., Epilepsia 41 (1) (2000) pág. 35- pág. 39). En las investigaciones previas antes mencionadas, para la determinación de la actividad inhibidora de CA de Topiramat se utilizaron en cada caso soluciones de ensayo que contenían CA de diferentes mamíferos, las cuales contenían todavía distintos componentes corporales tales como sangre o tejidos de órganos.

En una primera forma de realización del procedimiento de acuerdo con la invención, se pueden encontrar compuestos adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, eligiéndose como adecuados aquellos compuestos que poseen la capacidad de inhibir la actividad de al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos. Por ejemplo, al menos un compuesto a investigar se puede poner en contacto con al menos una carboanhidrasa y, a continuación, se pueden identificar, de manera en sí conocida, aquellos compuestos que inhiban la actividad de al menos una carboanhidrasa. En esta forma de realización se prefiere la utilización de carboanhidrasas que se presentan en mamíferos tales como seres humanos o roedores, por ejemplo ratas, ratones o cobayas, en particular de las carboanhidrasas de los subtipos II y/o V. Se prefiere particularmente la utilización de carboanhidrasas que se presentan en seres humanos. Carboanhidrasas adecuadas pueden aislarse, por ejemplo, a partir de los mamíferos antes mencionados y, en caso deseado, purificarse, o pueden prepararse preferiblemente según procedimientos químicos o biotecnológicos en sí conocidos.

En una variante preferida de esta primera forma de realización, la variación de la actividad de las carboanhidrasas bajo la influencia de los compuestos a investigar se puede determinar en un ensayo de actividad enzimática in vitro, en sí conocido, en el que las carboanhidrasas se presentan como enzimas aisladas y, al menos, ampliamente liberadas de sustancias concomitantes. Preferiblemente, se utilizan carboanhidrasas preparadas según procedimientos químicos o biotecnológicos, ya que éstas se pueden emplear en forma particularmente pura. Ensayos de la actividad in vitro para la determinación de la actividad de carboanhidrasas son en sí conocidos. A los ensayos de actividad enzimática in vitro, que son adecuados en el marco de la presente invención para determinar variaciones de la actividad de carboanhidrasas pertenecen, por ejemplo, la medición de la variación del valor del pH bajo la influencia de carboanhidrasas (véase K. M. Wilbur, N. G. Andersen, Journal of Biological Chemistry 176 (1948) 147-154; G. Sanyal, T. H. Maren, Journal of Biological Chemistry 256 (1981) 608-612), el método de medición de la detección del flujo (véase R. G. Khalifah, Journal of Biological Chemistry 246 (1971) 2561-2573) o el método de acetato de 4-nitrofenil-esterasa (véase Y. Pocker, J. T. Stone, Journal of the American Chemical Society 87 (1965) 5497-5498). En el ensayo mencionado en último lugar se determina la velocidad de la hidrólisis de acetato de 4-nitrofenilo bajo la influencia de las carboanhidrasas a investigar, aprovechándose la propiedad de carboanhidrasas de actuar también como esterasas.

De acuerdo con la invención, a este respecto se adecua preferiblemente un procedimiento de ensayo para la determinación de las propiedades inhibidoras de CA de compuestos, el cual se describe por C. T. Supuran et al., European Journal of Medicinal Chemistry 33 (1998) 577-594 (véase, en particular, la página 592; citado en lo que sigue como "Supuran et al.") o por A. Scozzafava et al., Journal of Medicinal Chemistry 42 (1999) 3690-3700 (véase, en particular, la página 3697; citado en lo que sigue "Scozzafava et al."). A los métodos de ensayo antes mencionados y descritos por Supuran et al. y por Scozzafava et al. se hace con ello referencia expresa en el marco de la divulgación de la presente invención. Compuestos que en uno de los ensayos de actividad convencionales in vitro antes mencionados según Supuran et al. o según Scozzafava et al. presentan valores de concentración CI_{50} de al menos 10 \mumol/l o inferiores (= elevada eficacia) pueden elegirse como compuestos con actividad inhibidora de CA adecuados (= inhibidores de CA) en el sentido de la presente invención. Si se ha de determinar la actividad de subtipos de CA humanos, pueden ser mejor adecuados otros métodos que el método de la acetato de 4-nitrofenilo-esterasa. En particular, pueden ser adecuados métodos que permitan vigilar transcursos de reacciones también comparativamente rápidos.

En un ensayo de la actividad enzimática que trabaja según el método del acetato de 4-nitrofenilo-esterasa descrito por Scozzafava et al. (véase antes) (originalmente descrito por Y. Pocker y J. T. Stone, Biochemistry 6 (1967) 668-678) se detectó en el marco de la presente invención que Topiramat presenta un acusado efecto inhibidor sobre carboanhidrasa humana del subtipo II (CI_{50} = 5 nmol/l), obtenida según procedimientos biotecnológicos, y que este efecto inhibidor es claramente más intenso que el efecto inhibidor provocado en cada caso por los inhibidores de CA clásicos, acetazolamida o metazolamida, medidos como sustancias comparativas. La carboanhidrasa humana del subtipo II se obtuvo según el método indicado por Scozzafava et al.

En el mismo ensayo se detectó que Topiramat presenta también un acusado efecto inhibidor sobre carboanhidrasa del subtipo Va de ratones (= mCA Va) obtenida según procedimientos biotecnológicos (CI_{50} = 74 nmol/l). Apartándose de la prescripción de ensayo indicada por Scozzafava et al., en este caso la enzima mCA Va se empleó en una concentración de 120 nM. La mCA Va se obtuvo, de manera en sí conocida, según el método indicado por H. R. Heck et al., Journal of Biological Chemistry 269 (1994) 24742-24746. Para ello, se utilizó la cepa de bacterias de Escherichia coli BL 21 (DE3) que estaba provista de un vector de plásmido que utiliza la secuencia codificadora de mCA Va bajo el control del promotor T7 inducible por isopropil-\beta-D-tiogalactopiranósido (IPTG). El cultivo de bacterias se inoculó, a 37ºC y bajo agitación, en un medio líquido de Luria-Bertani que contenía ampicilina (100 \mug/ml), y su crecimiento se vigiló por espectrofotometría a 600 nm. Cuando el cultivo de bacterias había pasado a la fase de crecimiento exponencial, se añadió IPTG en una concentración final de 1 mmol/l. Después de un tiempo de incubación de 3 horas (a 37ºC y bajo agitación), el cultivo de bacterias se centrifugó a 7000 x g durante 15 min, y el material sobrenadante se desechó. El sedimento resultante se recogió en 0,1 vol de agua doblemente destilada, y se añadió lisozima (100 \mug/ml). La lisis de las células se efectuó bajo tratamiento con ultrasonidos. Para ello, se añadieron partes alícuotas de 10 ml de la suspensión de bacterias obtenida en un recipiente de vidrio abierto por arriba y cada una de estas muestras se trató 4 veces durante 3 min con ultrasonidos. Después de cada impulso de sonido se determinó la absorción de las muestras a 600 nm, para lo cual en cada caso 100 \mul de una muestra se diluyeron con 900 \mul de agua doblemente destilada. El punto final se alcanzaba cuando el valor de la absorción a 600 nm de una muestra se encontraba en aproximadamente 1/10 del valor de partida. Después de efectuada la lisis de células, se añadió tampón de unión CaCl_{2} (razón social Stratagene) y el lisado de células obtenido se añadió a una columna de resina de afinidad de calmodulina para la purificación. La purificación se basa en la elevada afinidad de los dominios de calmodulina unidos a la resina al péptido-tag de unión a calmodulina que está presente en el extremo N-terminal de la proteína mCA Va expresada. La purificación se efectuó de manera en sí conocida (véase el manual "Affinity LIC Cloning and Protein Purification Kit Manual" de la razón social Stratagene).

En una segunda forma de realización del procedimiento de acuerdo con la invención se pueden encontrar compuestos adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, eligiendo aquellos compuestos que poseen la capacidad de determinar una disminución de la cantidad de productos del metabolismo formados en el ciclo del ácido cítrico de células de mamíferos vivas aisladas o de metabolitos lipídicos del ciclo del ácido cítrico. Como productos del metabolismo del ciclo del ácido cítrico, cuya cantidad se reduce de manera medible con la influencia de los compuestos a investigar, se adecuan productos del metabolismo solubles en ácidos tales como citrato, maleato, fumarato y/o \alpha-cetoglutarato. Se prefiere citrato. Además, como productos del metabolismo se adecuan metabolitos lipídicos del ciclo del ácido cítrico tales como ácidos grasos libres. También en esta segunda forma de realización se determina en última instancia la capacidad de los compuestos a investigar de inhibir la actividad de al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos - pero el modelo de ensayo utilizado se dispone de manera distinta que en la forma de realización primeramente mencionada. El procedimiento de la segunda forma de realización se basa en el principio de determinar, de manera en sí conocida, la absorción de radiactividad a partir de sustratos del ciclo del ácido cítrico marcados con el isótopo ^{14}C en productos intermedios metabólicos o metabolitos del ciclo del ácido cítrico de células de mamíferos vivas y aisladas, y comparar los resultados hallados con los resultados que se consiguieron en condiciones por lo demás idénticas, pero bajo la influencia de compuestos de acción inhibidora de CA. Preferiblemente, en esta variante del procedimiento se utilizan células vivas y aisladas de roedores tales como ratas, ratones o cobayas, o de seres humanos. Se prefieren las células humanas. Si se utilizan células de roedores, entran en consideración adipocitos o hepatocitos. Se prefieren adipocitos de roedores. Si se utilizan células humanas, se pueden utilizar adipocitos o hepatocitos. Se prefieren hepatocitos humanos. Las células de mamíferos utilizadas en esta variante del procedimiento se pueden obtener según procedimientos de cultivo y/o clonación habituales. Se pueden utilizar células de mamíferos naturales o biotecnológicamente modificadas. Si se ha determinar la absorción de radiactividad en productos intermedios solubles en ácidos del ciclo del citrato, como sustrato marcado con ^{14}C se utiliza preferiblemente ^{14}C-hidrógenocarbonato (= NaH[^{14}C]O_{3}). Si se ha de determinar la absorción de radiactividad en metabolitos lipídicos del ciclo del citrato, como sustrato marcado con ^{14}C se utiliza preferiblemente [U-^{14}C]-glucosa.

Una variante preferida de esta segunda forma de realización para la determinación de la capacidad de compuestos de inhibir la DNL en mamíferos se indica en S. A. Hazen et al. in FASEB Journal 10 (4) (1996) 481-490 (citado en lo que sigue como "Hazen et al."). Al método de ensayo antes mencionado, descrito por Hazen et al., se hace con ello expresa referencia en el marco de divulgación de la presente invención. Compuestos que en un ensayo antes mencionado según Hazen et al. inhiben de manera significativa la incorporación de radiactividad a partir de sustancias marcadas con ^{14}C, que pueden servir como precursores en el ciclo del ácido cítrico, por ejemplo en la incorporación de ^{14}C-hidrógeno-carbonato en citrato, maleato, fumarato y/o \alpha-cetoglutarato, con un valor CI_{50} de al menos 10 \mumol/l o inferior (= mayor actividad) pueden elegirse como compuestos adecuados en el sentido de la presente invención.

En un modelo de ensayo correspondiente al modelo de ensayo descrito por Hazen et al. que se llevó a cabo en el marco de la presente invención, Topiramat mostró un efecto inhibidor acusado sobre la formación de productos del metabolismo solubles en ácidos del ciclo del ácido cítrico de adipocitos de rata de la línea de células 3T3-F442A obtenidos según procedimientos biotecnológicos. Este efecto inhibidor de Topiramat (CI_{50} = 348 nmol/l) era claramente más acusado que el efecto del inhibidor de CA clásico etoxzolamida medido como sustancia comparativa.

En una variante particularmente preferida del procedimiento de acuerdo con la invención para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, se eligen compuestos que, en la primera forma de realización del procedimiento precedentemente mencionada, en particular en un ensayo de actividad enzimática in vitro antes mencionado, se eligieron como adecuados para la inhibición de al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos y que, adicionalmente, también fueron elegidos como adecuados en la segunda forma de realización del procedimiento antes mencionada, para determinar una reducción de la cantidad de productos del metabolismo formados en el ciclo del ácido cítrico de células de mamíferos vivas y aisladas. En la primera forma de realización del procedimiento se puede examinar de manera rápida y eficaz la capacidad de compuestos de inhibir carboanhidrasas que se presentan en mamíferos. La forma de realización del procedimiento proporciona, entre otros, puntos de partida para saber si los compuestos investigados poseen también la capacidad de introducirse en mitocondrias de células de mamíferos vivas en las que está localizada CA V. Para la elección de compuestos adecuados, la primera y la segunda formas de realización antes mencionadas se pueden llevar a cabo paralelamente o sucesivamente en una secuencia arbitraria.

De acuerdo con la invención, se adecuan compuestos que poseen la capacidad de inhibir la DNL en mamíferos, para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad. En este caso, se eligen aquellos compuestos que poseen la capacidad de inhibir al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos. Los compuestos elegidos deben ser, naturalmente, fisiológicamente compatibles y cumplir los requisitos generalmente establecidos a sustancias activas medicamentosas, concernientes, por ejemplo, a la seguridad y compatibilidad. Se prefiere la utilización de compuestos que son capaces de inhibir carboanhidrasas de los subtipos II y/o V que se presentan en mamíferos. Se prefieren particularmente compuestos que son capaces de inhibir específicamente CA II y/o CA V, en particular CA V.

Los compuestos previamente conocidos con un efecto inhibidor de CA, que en el caso de una administración prolongada tienen como consecuencia una reducción del peso corporal de los pacientes, por ejemplo Topiramat, presentan también acusados efectos dirigidos al SNC tales como efectos anticonvulsivos. Para compuestos que están previstos para la administración a lo largo de prolongados períodos de tiempo con el objetivo del tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, son a menudo indeseados efectos concomitantes dirigidos al SNC. Por lo tanto, compuestos que se eligieron según el procedimiento de acuerdo con la invención antes mencionado como adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, pueden investigarse adicionalmente en cuanto a efectos que estén dirigidos al SNC. Por ejemplo, los compuestos se pueden investigar en cuanto a propiedades anticonvulsivas eventualmente presentes. Para la investigación de compuestos en cuanto a propiedades anticonvulsivas se adecua, por ejemplo, el denominado "ensayo de electrochoque supramáximo" (= ensayo SES, ocasionalmente denominado también "ensayo de electrochoque máximo", ensayo MES) de acuerdo con G. Chen et al, Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 87 (1954) 334-339 (citado en lo que sigue como "Chen et al.") y J. E. P. Toman et al., Journal of Neurophysiology 9 (1946) 231 (citado en lo que sigue como "Toman et al."). Al método de ensayo antes mencionado, descrito por Chen et al. y por Toman et al. se hace con ello expresa referencia en el marco de la divulgación de la presente invención. Así, compuestos que debían ser administrados a lo largo de prolongados períodos de tiempo con el objetivo del tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad en pacientes, debían ser esencialmente ineficaces en el ensayo SES antes mencionado según Chen et al. y según Toman et al., y no deberían presentar preferiblemente, tampoco en elevadas dosificaciones de al menos 100 mg/kg p.o., ninguno de los efectos considerados como significativos según los criterios habituales para este ensayo (es decir "dosis protectora" DP_{50} según G. Chen et al. \geq 100 mg/kg p.o.; los valores de DP_{50} indicados por G. Chen et al. corresponden en este caso en esencia a la cantidad de dosis más habitual como "dosis eficaz mínima", MED). Compuestos que en el procedimiento para encontrar compuestos, antes mencionado, fueron elegidos como adecuados y que, adicionalmente, en el ensayo MES antes mencionado según Chen et al. son esencialmente ineficaces, son particularmente adecuados para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad. Los ensayos SES (o bien MES) antes mencionados son ensayos convencionales farmacológicos y pueden llevarse a cabo como métodos rutinarios en el caso de correspondientes ofertores de servicios (por ejemplo en la razón social "Panlabs").

Los compuestos encontrados adecuados según el procedimiento de acuerdo con la invención para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad pueden estar contenidos habitualmente como medicamentos con coadyuvantes farmacéuticos habituales en preparados galénicos tales como, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, supositorios o soluciones. Estos preparados galénicos pueden prepararse según métodos en sí conocidos utilizando sustancias de soporte sólidas o líquidas habituales tales como, por ejemplo, lactosa, almidón o talco o parafinas líquidas y/o utilizanndo coadyuvantes farmacéutico habituales, por ejemplo agentes disgregantes de tabletas, inductores de disolución o agentes conservantes. Preparados farmacéuticos adecuados de acuerdo con la invención son conocidos, por ejemplo, también por el documento EP 0 138 441 A2, así como por el documento WO 98/00130.

Claims (17)

1. Procedimiento para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, caracterizado porque se eligen compuestos que poseen la capacidad de inhibir la actividad de al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que al menos un compuesto se pone en contacto con al menos una carboanhidrasa y, a continuación, se identifican aquellos compuestos que inhiben la actividad de al menos una carboanhidrasa.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que se utilizan carboanhidrasas que se presentan en roedores o seres humanos.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que se utilizan carboanhidrasas que se presentan en seres humanos.

5. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que se utilizan carboanhidrasas de los subtipos II y/o V que se presentan en mamíferos, en particular en seres humanos.

6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que se utilizan carboanhidrasas del subtipo V que se presentan en mamíferos, en particular en seres humanos.

7. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que las carboanhidrasas se presentan como enzimas aisladas, obtenidas según procedimientos químicos o biotecnológicos, y en el que se determina la variación de la actividad de las carboanhidrasas bajo la influencia de los compuestos en un ensayo de actividad enzimática in vitro.

8. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que se eligen como adecuados aquellos compuestos que poseen la capacidad de determinar una disminución de la cantidad de productos del metabolismo formados en el ciclo del ácido cítrico de células de mamífero vivas y aisladas.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, en el que, bajo la influencia de los compuestos, se determina la disminución de la cantidad de citrato, maleato, fumarato, \alpha-cetoglutarato formados en el ciclo del ácido cítrico de las células, y/o la disminución de la formación de metabolitos lipídicos del ciclo del ácido cítrico.

10. Procedimiento según la reivindicación 8, en el que se utilizan células vivas aisladas de roedores o seres humanos.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que se utilizan adipocitos o hepatocitos.

12. Procedimiento para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, caracterizado porque se eligen compuestos que se identificaron como compuestos adecuados en un procedimiento según la reivindicación 7 y, adicionalmente, en un procedimiento según la reivindicación 8.

13. Procedimiento para encontrar compuestos que son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, en el que se eligen compuestos que fueron identificados como compuestos adecuados en un procedimiento según la reivindicación 1 y que, adicionalmente, fueron identificados como esencialmente ineficaces en un ensayo convencional para la determinación de propiedades anticonvulsivas.

14. Utilización de compuestos que poseen la capacidad de inhibir al menos una carboanhidrasa que se presenta en mamíferos, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad.

15. Utilización según la reivindicación 14 de compuestos que poseen la capacidad de inhibir carboanhidrasas de los subtipos II y/o V que se presentan en mamíferos.

16. Utilización según la reivindicación 14 de compuestos que están esencialmente exentos de propiedades anticonvulsivas.

17. Utilización de compuestos que se identificaron como adecuados por primera vez según un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxia de la obesidad.