ES2210820T3 - 2-amino-6-metil-7-acetil-tetralina y composiciones farmaceuticas para la prevencion y tratamiento terapeutico de patologias inflamatorias y/o autoinmunes. - Google Patents
2-amino-6-metil-7-acetil-tetralina y composiciones farmaceuticas para la prevencion y tratamiento terapeutico de patologias inflamatorias y/o autoinmunes.Info
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Abstract
Una 2-aminotetralina que tiene la **fórmula (I)** o sus sales farmacológicamente aceptables que tienen la **fórmula (II)** en las que: R es metilo: R1 es acetilo; R2 es hidrógeno; y X- es el anión monovalente de un ácido farmacológicamente aceptable.
Description
2-amino-6-metil-7-acetil-tetralina
y composiciones farmacéuticas para la prevención y tratamiento
terapéutico de patologías inflamatorias y/o autoinmunes.
La invención descrita en la presente invención
trata de derivados de 2-aminotetralinas y sus sales
farmacológicamente aceptables, un procedimiento para su preparación,
composiciones farmacéuticas adecuadas para el tratamiento
profiláctico y terapéutico del shock séptico, y para el tratamiento
de patologías inflamatorias y/o autoinmunes que se definirán mejor a
continuación en la presente memoria, en la que el papel
etiopatogénico de las citocinas inflamatorias está bien
establecido.
Las 2-aminotetralinas sustituidas
en posición 6 y 7, que son activas en el tratamiento del shock
séptico son bien, conocidas.
El documento
EP-A-0730861, que se incorpora en la
presente memoria por referencia, describe un tipo de tales
2-aminotetralinas 6,7 sustituidas y particularmente
el compuesto
(R,S)-2-amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
(en lo que sigue denominado ST 626).
Las patologías inflamatorias y/o autoinmunes que
se van a tratar con las composiciones según la invención descrita en
la presente memoria son, por ejemplo, artritis reumatoide,
pancreatitis, enfermedad intestinal inflamatoria, lupus eritematoso
sistémico, glomerulonefritis y encefalomielitis.
En lo que sigue solo se harán referencias al
shock séptico, entendiéndose que las otras patologías debidas a las
citocinas inflamatorias también pueden tratarse de forma eficaz
según la invención.
El shock séptico es un síndrome clínico
extremadamente grave que puede establecerse como resultado de
infecciones, principalmente causadas por bacterias gramnegativas o
grampositivas, protozoos o virus, y que se caracteriza por
leucocitosis, fiebre, taquicardia, hipotensión e insuficiencia
renal, respiratoria, cardíaca y hepática.
Sin embargo, debe destacarse que la gravedad del
shock séptico es independiente del tipo de microorganismo
responsable del síndrome (Parrillo J.E., Pathogenetic mechanisms of
septic shock. New Engl. J. Med., 328: 1471-1477,
1993) pero está relacionada con la amplitud de la respuesta
inflamatoria de cada individuo al antígeno responsable de la
agresión tóxica.
A pesar de la mejora significativa en la terapia
con antibióticos y en los protocolos de intervención en las unidades
de cuidados intensivos, durante los últimos años, el shock sigue
siendo una de las principales causas de morbilidad y mortalidad de
pacientes hospitalizados. Se estima que en EE.UU. es responsable de
aproximadamente 100.000 muertes/año (Glauser M.P., Zanetti G.,
Baumgartner J.D., Cohen J., Septic shock: pathogenesis. Lancet,
338: 732-736, 1991).
El rasgo más decisivo y característico del shock
séptico es la reacción del organismo a los productos derivados de la
lisis o del metabolismo microbiano.
La primera de estas sustancias en identificarse y
la más usada en la investigación experimental es el lipopolisacárido
(LPS); un constituyente de la pared de las bacterias gramnegativas,
compuesto químicamente por una porción polisacárida, que varía en
función de la especie bacteriana, y una porción lipídica (lípido A),
que es constante, y se encuentra en la sangre de sujetos
septicémicos en forma de micelas. Cuando se administra a animales,
el LPS es capaz de reproducir todos los síntomas cardiocirculatorios
y neurológicos típicos del shock (Olson. N.C., Salzer W.L., McCall
C.E., Biochemical, physiological and clinical aspects of
endotoxaemia. Molec. Aspects. Med., 10: 511-629,
1988). Por tanto, se puede identificar como el principal movimiento
en la cadena de acontecimientos que conduce al desencadenamiento de
los síntomas clínicos a través de la activación de las rutas
intrínsecas y extrínsecas de la cascada de la coagulación y la
secreción de citocinas de origen principalmente
macrófago-monocítico, tales como, por ejemplo, TNF,
IL-1 y IFN-\gamma (Bone R. C., A
critical evaluation of new agents for the treatment of sepsis. J.
Am. Med. Ass., 266: 1686-1691, 1991).
La importancia cada vez mayor este síndrome ha
llevado a asumir en los últimos años su gravedad y los medios
terapéuticos inadecuados disponibles en la actualidad hacen que el
rápido descubrimiento de agentes terapéuticos capaces de combatir
con eficacia la progresión de la enfermedad sea un objetivo
altamente deseable.
Actualmente se ha descubierto que una nueva
2-aminotetralina sustituida en las posiciones 6,7
exhibe una potente actividad en la prevención y tratamiento
terapéutico de las enfermedades mencionadas en lo que antecede.
Los derivados de 2-aminotetralina
según la invención pueden producirse como bases libres con la
fórmula general (I):
y como sales farmacológicamente aceptables con la
fórmula general
(II):
en las
que:
R es metilo, R_{1} es acetilo y X^{-} es el
anión monovalente de un ácido farmacológicamente aceptable.
Lo que se quiere significar con sales
farmacológicamente aceptables de compuestos de fórmula (II) es
cualquiera de sus sales con un ácido que no da lugar a tóxicos no
deseados o a efectos secundarios. Tales ácidos son bien conocidos
para los farmacólogos y expertos en farmacia y tecnología
farmacéutica.
Ejemplos de tales sales, aunque no exclusivamente
estos, son cloruro, bromuro, orotato, ácido aspartato, ácido
citratro, fosfato, fumarato y ácido fumarato, lactato, maleato y
ácido maleato, ácido oxalato, ácido sulfato, glucosa fosfato,
tartrato y ácido tartrato.
Las sales aprobadas por la FDA se recogen en la
lista del Int. J. of Pharm. 33 (1986), 201-217, que
se incorpora en la presente memoria por referencia.
El ejemplo preferido de compuestos específicos en
cuanto a la invención descrita en la presente es:
Clorhidrato de (R,
S)-7-acetil-2-amino-6-metiltetralina
(ST 1274)
El procedimiento para preparar el compuesto según
la invención descrito en la presente como base libre o como sales
farmacológicamente aceptables se describe en los siguientes esquemas
de la reacción:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Esquema de reacción
1
\newpage
Esquema de reacción
2
En cuanto a los esquemas de reacción anteriores,
los siguientes ejemplos, en los que X=Cl^{-}, ilustran la
invención sin limitarla exclusivamente a los mismos.
Se pretende que los ejemplos 1-6
sean ejemplos de referencia, fuera del alcance de la presente
invención.
(Esquema
1)
Se suspendió ácido L-aspártico
(100 g; 0,75 moles) en ácido trifluoroacético (300 ml), la
suspensión resultante se dejó en agitación y se enfrió hasta -20ºC
en un baño de hielo/sal. Lentamente se añadió anhídrido
trifluoroacético (300 ml; 2,16 moles) en agitación. Al final de la
adición la mezcla resultante se dejó en reflujo prudentemente a
45ºC durante la noche.
Al finalizar la reacción la solución se llevó a
deshidratación en un evaporador y el residuo sólido se lavó tres
veces con hexano en agitación, eliminando cada vez el hexano por
decantación; el residuo se llevó de nuevo hasta su completa
deshidratación. Por último, el residuo se trituró en agitación con
hexano-éter de etilo, la mezcla resultante se filtró y el residuo se
secó al vacío. Se obtuvieron 150 g de compuesto 1a (rendimiento
95%).
PM: 140-142ºC
[\alpha]_{D}= -40,7 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H (DMSOd_{6}), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.): 2,85-3,3 (2H, m,
CH_{2}); 4,95-5,1 (1H, m, CHNH);
9,6-9,8 (1H, bd, CHNHCOCF_{3}).
Se suspendió anhídrido S-(-)trifluoroacetil
aspártico (150 g; 0,712 moles) en 2-fluoroanisol
(300 ml; 2,67 moles), la mezcla resultante se agitó enérgicamente y
después se añadió cloruro de aluminio anhidro (240 g; 1,57 moles)
lentamente en pequeñas porciones. Cuando se completó la adición, la
mezcla se dejó en agitación enérgica a 40-45ºC
durante 24 horas.
Se añadió CH_{2}Cl y otros 60 g de AlCl_{3}y
la mezcla de reacción se dejó en agitación durante otras 48
horas.
A continuación se trató el residuo sólido con un
litro de CH_{2}Cl_{2}moliéndolo en agitación. Se separó el
cloruro de metileno que contiene el exceso de fluoroanisol. El
residuo sólido se filtró y se añadió poco a poco a 2 litros de HCl
6M guardados en agitación enérgica. Tras la finalización de la
adición, la mezcla se dejó en agitación durante 30 minutos. Después
la fase ácida se extrajo repetidamente con éter de etilo. Las fases
de éter combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato
sódico anhidro y después se llevó hasta deshidratación. Se obtuvo un
residuo sólido que se cristalizó en 1:1 de AcOEt/Hexano. Se
obtuvieron 188 g de compuesto 3a (rendimiento 78%).
PM: 113-115ºC
[\alpha]_{D}= +27,5 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H (CD_{3}OD), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.): 3,6 (2H, m, CH_{2}NH); 3,96 (3H,
S,PhOCH_{3}); 4,88-5,01 (1H, m,
CH_{2}CHNH); 7,18-7,22 (1H, t, Ar);
7,7-7,8 (1H, dd, Ar); 7,82-7,9 (1H,
bd, Ar).
Se disolvió el compuesto 3a (100 g; 0,297 moles)
en ácido trifluoroacético (500 ml). La solución resultante se enfrió
hasta 0ºC y lentamente se añadió trietilsilano (300 ml; 1,89 moles).
Cuando se completó la adición, la mezcla se llevó lentamente hasta
su punto de ebullición y se guardó a temperatura de ebullición
durante 4 horas.
A continuación la mezcla se llevó a la
deshidratación completa en un evaporador; el residuo se lavó dos
veces con éter de etilo, cada una de las veces se llevó la mezcla a
deshidratación para eliminar completamente el ácido
trifluoroacético. El residuo oleoso obtenido de esta manera se
enfrió hasta -20ºC en un baño de hielo/sal y después se trató en
agitación con una solución de NaHCO_{3} saturado cuyo pH se había
ajustado a 10 con NaOH 4N.
La fase alcalina final se acidificó con
precaución hasta un pH de 3 con HCl 6N, a 0ºC. Se obtuvo un
precipitado que se extrajo repetidamente con CH_{2}Cl_{2}. Los
extractos orgánicos combinados se lavaron en una pequeña cantidad de
agua, se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se llevó hasta la
deshidratación. El residuo oleoso se disolvió en una pequeña
cantidad de acetato de etilo y se precipitó con hexano en agitación.
La mezcla se guardó en agitación durante la noche, se filtró y el
residuo se secó. Se obtuvieron 72 g de compuesto 4a (rendimiento
75%).
PM: 113-115ºC
[\alpha]_{D}= +11,3 (c= 1% alcohol
metílico) análisis: conforme a los estándar.
RMN-^{1}H (CDCl_{3}), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
2,0-2,18 (1H, m, CHHCHNH);
2,22-2,36 (1H, m, CHHCHNH);
2,6-2,7 (2H, t,
PhCH_{2}CH_{2}); 3,84 (3H, S, PhOCH_{3});
4,6-4,7 (1H, m,
CH_{2}CHNH); 6,78 (1H, bd, CHNHCOCF_{3});
6,8-6,92 (2H, m, Ar).
El compuesto 4a (70 g; 0,217 moles) se disolvió
en cloruro de metileno anhidro (1400 ml). La mezcla resultante se
enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo y después se añadió lentamente
pentacloruro de fósforo (70 g; 0,036 moles). Al final de la
adición, la mezcla se guardó en agitación a 0ºC durante alrededor de
2 horas y después se enfrió hasta -20ºC. A la mezcla se añadió poco
a poco cloruro de aluminio (56 g; 0,42 moles).
Tras la adición, la mezcla se guardó durante 2
horas a temperatura ambiente y después se calentó con precaución
hasta el punto de ebullición y se guardó a temperatura de ebullición
durante alrededor de 6 horas.
A continuación la mezcla se enfrió hasta 0ºC y se
añadió hielo picado (alrededor de 300 ml) poco a poco en agitación
para destruir el exceso de reactivos. La mezcla se extrajo tres
veces con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se
secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se llevaron a deshidratación. Se
obtuvo un sólido amarillento, que se disolvió en un volumen pequeño
de acetato de etilo y después se precipitó con hexano. Se obtuvieron
40 g de compuesto 5a (rendimiento 60%).
PM: 184-185ºC
[\alpha]_{D}= -55,4 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H (CDCl_{3}), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,83-2,2 (1H, m, CHHCHNH);
2,8-2,88 (1H, m, CHHCHNH);
2,9-3,0 (1H, m,
CHHH_{2}); 3,15-2,26 (1H, m,
CHHCH_{2});
3,92 (3H, S, PhOCH_{3});
4,53-4,62 (1H, m,
CH_{2}CHNHCOCF_{3});
6,88 (1H, d, Ar); 7,57 (1H, d, Ar); 7,43 (1H, bs,
CHNHCOCF_{3}).
El compuesto 5a (40 g; 0,131 moles) se suspendió
en trifluoruro de eterato (340 ml) a 0ºC. Se añadió trietilsilano
(90 ml; 0,567 moles) a la suspensión a 0ºC y la suspensión se dejó
en agitación durante 4 horas a temperatura ambiente. Al final de la
reacción se añadió una solución saturada de NaHCO_{3}(pH
8-9) a la mezcla de reacción y se extrajo la fase
acuosa cuatro veces con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas
combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4},se
filtraron y se llevaron a deshidratación.
El compuesto bruto obtenido de esta manera se
recristalizó en éter de isopropilo. Se obtuvieron 30 g de compuesto
6a (rendimiento 78%).
PM: 45-47ºC
[\alpha]_{D}= -80 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H (CDCl_{3}), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,78-1,9 (1H, m,
CHHCHNNH); 2,0-2,15 (1H, m,
CHHCHNH);
2,6-2,72 (1H, dd,
PhCHHCHNH);
2,73-2,9 (2H, m,
PhCHHCHNH, PhCHHCH_{2});
3,03-3,15 (1H, dd,
PhCHHCH_{2}); 4,2-4,35 (1H,
m,CHNH);
6,38 (1H, bd, CHNHCOCF_{3}); 6,6 (1H, d,
Ar); 6,8 (1H, d, Ar).
El compuesto 6a (30 g; 0,13 moles) se disolvió en
metanol (225 ml) y agua (225 ml) con KCO_{3} (5540g; 0,391
moles).
La solución resultante se dejó a reflujo en
agitación durante 3 horas.
El metanol se eliminó al vacío y se añadieron
otros 100 ml de agua a la solución.
La fase acuosa se extrajo repetidamente con
CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se llevaron a
deshidratación. El sólido oleoso obtenido de esta manera se disolvió
en éter de etilo se acidificó con HCl (solución al 15% en etanol) y
el precipitado sólido se filtró y se disolvió de nuevo en metanol,
se decoloró con carbón activado, se filtró, se concentró al vacío y
finalmente se cristalizó con n-propanol.
La cristalización se repitió dos veces, dando
12,6 g de compuesto 7 (rendimiento 53%).
PM: 263-265ºC
[\alpha]_{D}= -52,5 (c= 1%
H_{2}O)
RMN-^{1}H (CDCl_{3}), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,6-1,8 (1H, m, CHHCHN);
2,0-2,15 (1H, m, CHHCHN+);
2,6-2,75 (3H, PhCHHCHN+,
PhCH_{2}CH_{2});
2,95-3,05 (1H, DD,
PhCHHCHN+); 3,45-3,55 (1H, m,
CHN+);
6,7-6,7 (2H, m, Ar).
Una solución de clorhidrato de
S(-)-2-amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
7a (3 g; 0,13 moles) en 20 ml de ácido bromhídrico (solución acuosa
al 47%) se dejó a temperatura de reflujo durante la noche. Al final
del reflujo, la solución se concentró y se levó a deshidratación al
vacío. El residuo obtenido de esta manera se lavó repetidamente en
agitación con acetona y se filtró, se disolvió de nuevo en una
mezcla 1:1 de agua/metanol y se eluyó a través de una columna con 60
ml de una resina Amberlyst A 21, activada en forma básica.
El eluato se acidificó con ácido clorhídrico 2N y
después se concentró hasta la deshidratación al vacío; el residuo
obtenido de esta manera se lavó con acetona, se filtró y de nuevo se
disolvió en agua/metanol a una proporción de 1:1 y se eluyó a través
de una columna con 60 ml de una resina Amberlyst A 21 activada en
forma ácida.
El eluato se decoloró con carbón activado, se
filtró a través de celite y se concentró en un pequeño volumen. A
esto se añadió acetona, obteniéndose un precipitado que se filtró y
secó en la estufa al vacío.
Se obtuvieron 2,2 g de compuesto 8a (rendimiento
78%).
PM: 259-261ºC
[\alpha]_{D}= -55,4 (c= 1%
H_{2}O)
RMN-^{1}H (D_{2}O), Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,6-1,8 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN); 2,0-2,1 (1H, m,
CCH_{2}CHHCHN+);
2,5-2,7 (3H, m,
PhCH_{2}C_{2}); (PhCHHN+);
2,85-3,0 (1H, m, PhCHHN+);
3,4-3,55 (1H, m, CHN+);
6,55-6,8 (2H, 2d, Ar);
(Esquema
1)
La preparación es básicamente similar a la usada
para el compuesto S(-)-trifluoroacetil aspártico 1a
usando ácido D(-) aspártico como producto de partida (rendimiento
86%).
PM: 142-144ºC
[\alpha]_{D}= +40,0 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 1a.
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(+)-4-(3-fluoro-4-metoxifenil)-4-oxo-2-(N-trifluoroacetil)
aminobutanoico 3a, usando anhídrido 1b como material de partida
(rendimiento 57%).
PM: 86-88ºC
[\alpha]_{D}= -28,0 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 3a.
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(+)-4-(3-fluoro-4-metoxifenil)-2-(N-trifluoroacetil)aminobutanoico
4a usando ácido 3b como material de partida (rendimiento 65%).
PM: 110-112ºC
[\alpha]_{D}= -11,2 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 4a.
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(-)-2-(N-trifluoroacetil)amino-6-fluoro-7-metoxi-1-tetralon
5a usando anhídrido 4b como material de partida (rendimiento
84%).
PM: 185-186ºC
[\alpha]_{D}= +66,0 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 5a.
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(-)-2-(N-trifluoroacetil)amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
6a usando tetralona 5b como material de partida (rendimiento
47%).
PM: 145-147ºC
[\alpha]_{D}= +92,0 (c= 1% alcohol
metílico)
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 6a.
La preparación es básicamente similar a la usada
para el clorhidrato de
S(-)-2-amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
7a usando tetralina 6b como material de partida (rendimiento
64%).
PM: 260-262ºC
[\alpha]_{D}= +48,5 (c= 1%
H_{2}O)
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 7a.
La preparación es básicamente similar a la usada
para el clorhidrato de
S(-)-2-amino-5-fluoro-77-hidroxitetralina
(ST1237) 8a usando clorhidrato de tetralina 7b como material de
partida (rendimiento 78%).
PM: 260-262ºC
[\alpha]_{D}= +55,0 (c= 1%
H_{2}O)
RMN-^{1}H (D_{2}O): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,6-1,8 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN+); 2,0-2,1 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN+);
2,5-2,7 (3H, m,
PhCH_{2}CH_{2})PhCHHCHN+);
2,85-3,0 (1H, m,
PhCHHCHN); 3,4-3,55 (1H, m, CHN+);
6,55-6,8 (2H, 2d, Ar);
(Esquema
1)
La preparación es básicamente similar a la usada
para el anhídrido
S(-)-trifluoroacetil-aspártico 1a
usando ácido D,L-aspártico como producto de partida
(rendimiento 96%).
PM: 133-134ºC
RMN-^{1}H: de acuerdo con y
coincidiendo con la obtenida con el producto 1a.
Se salificaron 20 g (0.154 moles) de
2,3-difluorrofenol agitando el producto a
temperatura ambiente en una solución de 6,24 g de NaOH en 69 ml de
agua para disolverlo por completo.
A la solución enfriada hasta alrededor de 10ºC,
lentamente se añadieron 14,4 ml de sulfato de dimetilo; a
continuación la solución se calentó hasta la temperatura de reflujo
y se dejó en reflujo durante 24 horas.
La mezcla de reacción se llevó a la temperatura
ambiente y se extrajo con cloruro de metileno; la fase orgánica se
lavó con agua, ácido N sulfúrico y de nuevo con agua hasta obtener
un pH neutro.
La solución se deshidrató con sulfato sódico
anhidro y el solvente se eliminó el vacío para dar 21 g de compuesto
a' en forma de un aceite rojizo, que se analizó mediante RMN y se
usó como tal (rendimiento 94% del material bruto).
RMN-^{1}H (D_{2}O): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.): 3,9 (3H, S, PhOCH_{3});
6,6-7,2 (3H, m, aromáticos)
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(+)-4-(3-fluoro-4-metoxifenil)-4-oxo-2(N-trifluoroacetil)aminobutanoico
3a usando anhídrido 1c y 2,3-difluoroanisol como
productos de partida y 2 y 72 horas como el tiempo de reacción en
vez de 48 horas (rendimiento 23%).
RMN-^{1}H (D_{2}O): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.): 3,9 (3H, S, PhOCH_{3});
6,6-7,2 (3H, m, aromáticos)
La preparación es similar a la usada para el
ácido
S(+)-4-(3-fluoro-4-metoxifenil)-4-oxo-2-(N-trifluoroacetil)aminobutanoico
4a usando ácido 3c como producto de partida rendimiento 76%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
2,0-2,2 (1H, m, CHHCHN+);
2,2-2,4 (1H, m, CHHCHCN);
2,6-2,8 (2H, t,
PhCH_{2}CH_{2}); 3,86 (3H, S, PhOCH_{3});
4,6-4,72 (1H, bq,
CH_{2}CHNH); 6,6-6,7 (1h, bt, Ar);
6,75-6,88 (2H, m, Ar,
CHNHCOCF_{3}).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el compuesto
S(-)-(N-trifluoroacetil)amino-6-fluoro-7-metoxi-1-tetralona
5a usando ácido 4c como producto de partida y 3 horas a reflujo tras
la adición de cloruro de aluminio en vez de 6 horas como tiempo de
reacción (rendimiento 26%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,85-2,0 (1H, m, CHHCHN +)
2,84-3,07 (2H, m, CHHNH,
PhCHHCH_{2});
3,13-3,24 (1H, m,
PhCHHCH_{2}); 3,93 (1H, S, PhOCH_{3});
4,55-4,65 (1H,m, CH_{2}CHNH);
7,38-7,42 (1H, dd, Ar);
7,43- (1H, bs, CHNHCOCF_{3}).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el compuesto
S(-)-(N-trifluoroacetil)amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
6a (ejemplo 1) usando la tetralona 5 como producto de partida y 7
días en vez de cuatro como tiempo de reacción (rendimiento 46%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,75-1,9 (1H, m, CHHCHN +)
2,04-2,16 (2H, m, CHHCHNH);
2,6-2,9 (3H, m,
PhCH_{2}CHNH, PhCHHCH_{2});
3,05-3,15 (1H, dd,
PhCHHCH_{2}); 3,84 (3H, s, PhOCH_{3});
4,2-4,3 (1H, m,
CHNHCOCF_{3}); 6,22 (1H, bs, CHNHCOCF_{3});
6,9-6,94 (1H, bd, Ar).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el clorhidrato de
S(-)-2-amino-6-fluoro-7-metoxittetralina
7a usando la tetralina 6c como producto de partida e isopropanol
como disolvente de cristalización (rendimiento 62%).
P.M.: se descompone a 210ºC
RMN-^{1}H (D_{2}O): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,6-1,8 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN+) 2,0-2,2 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN+, 2,5-2,9 (3H, m,
PhCHHCHN+, PhCH_{2}CH_{2});
2,9-3,1 (1H, m, PhCHCHN+);
3,4-3,6 (1H, m, CHN+);
6,5-6,6 (1H, d, Ar).
(Esquema
1)
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(+)-4-(3-fluoro-4-metoxifenil)-4-oxo-2-(N-trifluoroacetil)aminobutanoico
3a usando fluorotolueno como producto de partida y 72 horas en vez
de 48 horas como tiempo de reacción (rendimiento 36%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.): 2,15 (3H, d, PhCH_{3});
3,35-3,42 (1H, dd,
CHHCHNH); 3,5-3,6 (1H, dd,
CHHCHNH),
4,68-4,76 (1H, m,
CH_{2}CHNH); 6,85-6,95 (1H, t, Ar);
7,55-7,65 (2H, m, Ar);
8,0-8,1 (1H, bd, CHNHCOCF_{3}).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
S(+)-4-(3-fluoro-4-metoxifenil)-2-(N-trifluoroacetil)aminobutanoico
4a usando ácido 3d como producto de partida y (rendimiento 52%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.): 2,15 (3H, d, PhCH_{3});
2,0-2,4 (2H, dd,
CH_{2}CHNH); 2,5-2,7 (2H, t,
PhCH_{2}CH_{2}),
4,5-4,7 (1H, bq,
CH_{2}CHNH); 6,6-6,7 (1H, m, Ar);
6,75-6,95 (2H, m, Ar); 7,35-7,5 (1H,
bd, CHNHCOCF_{3}).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el compuesto
S(-)-2-(N-trifluoroacetil)amino-6-fluoro-7-metoxi-1-tetralona
5a usando el ácido 4d como producto de partida y 1 hora a reflujo en
vez de 2 horas a temperatura ambiente, y, tras la adición de cloruro
de aluminio, 6 horas a reflujo como tiempo de reacción (rendimiento
80%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,83-2,0 (1H, d, CHHCHNH);
2,3 (3H, d, PhCH_{3})
2,8-2,9 (1H, m, CHHCHNH);
2,92-3,03 (1H, m, CHHCH_{2});
3,13-3,25 (1H, m,
CHHCH_{2}); 4,53-4,62 (1H,
m,CH_{2}CHHCOF_{3});
7,2 (1H, d, Ar); 7,6 (1H, d, Ar); 7,45 (1H, bs,
CHNHCOCF_{3}).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el compuesto
S(-)-2-(N-tri-fluoroacetil)amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
6a usando la tetralona 5d como producto de partida (rendimiento
60%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,75-1,9 (1H, m, CHHCHNH);
2,0-2,15 (1H, m, CHHCHNH);
2,2 (3H,s, PhCH_{3});
2,6-2,7 (1H, dd, PhCHHCHNH);
2,7-2,9 (2H, m, PhCHHCHNH,
PhCHHCH_{2});
3,03-3,15 (1H, dd,
PhCHHCH_{2}) 4,25-4,35 (1H, m,
CHNH);
6,2 (1H, b, s, NHCOCF_{3}); 6,7 (1H, d,
Ar); 6,9 (1H, d, Ar).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el clorhidrato
S(-)-2-amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
7a usando la tetralina 6d como producto de partida (rendimiento
67%).
P.M.: se descompone a 230ºC
RMN-^{1}H (CD_{3}OD): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,7-1,9 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN+); 2,15-2,12 (1H, m,
CH_{2}CHHCHN+);
2,19 (3H, S, PhCH_{3});
2,7-2,9 (3H, m, PhCHNH+,
PhCH_{2}CH_{2});
3,05-3,6 (1H, m,
PhCHHCHN+); 3,45-3,6 (1H, m,
CHNH_{3});
6,75-6,8 (1H, d, Ar);
6,95-7,0 (1H, d, Ar).
(Esquema
2)
Se disolvieron 9,4 g (0,061 moles) de
3-fluoro-p-anisaldehído
y 10 g (0,068 moles) de dimetil succinato en 15 ml de metanol
anhidro. La solución obtenida de este modo se añadió gota a gota a
temperatura ambiente a una solución preparada previamente de 1,66 g
(0,073 moles) de metóxido sódico. La mezcla de reacción se sometió a
reflujo durante 3 horas en una atmósfera de nitrógeno, después se
enfrió y concentró a la mitad del volumen en condiciones de
vacío.
La solución obtenida de este modo se acidificó
con HCl 2N, enfriándola en un baño de hielo y después se diluyó con
agua hasta que se produjo la precipitación del producto. El
precipitado se filtró y se disolvió en una solución saturada de
hidrógeno carbonato sódico. La solución acuosa se agitó
repetidamente con éter de etilo y se volvió a acidificar con HCl 2N
y se enfrió en un baño de hielo.
El producto se extrajo repetidamente de la
solución acuosa, con sulfato sódico anhidro, y se eliminó el
disolvente al vacío, obteniéndose un producto sólido que se
cristalizó con una mezcla de acetato de
etilo/n-hexano, y se llevó a deshidratación para dar
5,5 g de ácido 1a (rendimiento 33%).
P.M.: 141-144ºC
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.): 3,55 (2H, s, CH_{2}COOH);
3,83 (3H, s, COOCH_{3}); 3,9 (3H, s,
PhOCH_{3}); 6,95-7,2 (3H, m, Ar);
7,8 (1H,s, CH=C).
Se disolvieron 2 g (0,0075 moles) de ácido
4-(6-metoxi-7-fluorofenil)-3-carbometoxi-3-butanoico
en 80 ml de acetato de etilo y después se hidrogenaron en un
aparato de Parr con 200 mg de paladio en carbón a una presión de
hidrógeno de 37,4 kPa durante 1,5 horas. La solución se filtró a
través de celite y el catalizador y el disolvente se eliminaron al
vacío para dar 1,9 g de aceite que cristalizó de forma espontánea
(rendimiento 93%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.):
2,3-2,45 (1H, m,
CHCOOCH_{3}); 2,5-2,75 (2H, m,
CH_{2}COOH);
2,8-3,1 (2H, m,
PhCH_{2}); 3,6 (3H, s, COOCH_{3}; 3,8 (3H, s,
PhOCH_{3});
6,75-6,9 (3H, m, Ar)
Se disolvieron 5,6 g (0,021 moles) de ácido (R,
S)-4-(6-metoxi-7-fluorofenil)-3-carbometoxi-butanoico
2a en 100 ml de cloruro de metileno anhidro; se añadieron 5 g
(0,024 moles) de pentacloruro de fósforo y la temperatura se mantuvo
a 0ºC durante 45 minutos. La temperatura se llevó a -10ºC y a la
solución se añadieron 3,6 g (0,027 moles) de cloruro de aluminio; se
dejó aumentar la temperatura hasta 20ºC en 40 minutos y después se
calentó la solución hasta la temperatura de reflujo durante 1
hora.
El disolvente se evaporó al vacío; se añadieron
100 ml de agua fría a la suspensión, que se extrajo 3 veces con 150
ml de acetato de etilo; la solución orgánica se deshidrató sobre
sulfato sódico anhidro y se eliminó el disolvente al vacío para dar
4,3 g de producto sólido (rendimiento 81%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.):
2,3-2,45 (1H, m,
CHCOOCH_{3}); 2,5-2,75 (2H, m,
CH_{2}COOH);
2,8-3,1 (2H, m,
PhCH_{2}); 3,6 (3H, s, COOCH_{3}; 3,8 (3H, s,
PhOCH_{3});
6,75-6,9 (3H, m, Ar)
Se disolvieron 6 g (0,024 moles) de éster de
metilo de ácido (R,
S)-6-metoxi-7-fluoro-4-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
3a en 100 ml de una mezcla compuesta por metanol anhidro y 50 ml
de ácido acético glacial; la solución se introdujo en un aparato de
Parr con 800 mg de paladio sobre carbón a una presión de hidrógeno
de 340 kPa durante 4 horas.
El catalizador se filtró a través de celite y el
disolvente se eliminó al vacío, obteniéndose 5,5 g de producto
sólido (rendimiento 98%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,75-1,9 (1H, m,
CHHCHCOOCH_{3});
2,1-2,22 (1H, m,
CHHCHCOOCH_{3});
2,6-2,8 (3H, m,
PhCH_{2}CHCOOCH_{3}, CHCOOCH_{3});
2,9 (2H, d, PhCH_{2}CH_{2}); 3,7 (3H,
s, COOCH_{3}); 3,83 (3H, s, PhOCH_{3});
6,62 (1H, d, Ar); 6,78 (1H, d, Ar).
Se suspendieron 5,2 g (0,022 moles) de ácido
(R,S)-6-metoxi-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
4a en una solución compuesta por 2,2 g de carbonato potásico en 50
ml de solución acuosa de metanol al 50%; la solución resultante se
sometió a reflujo durante 1 hora.
El metanol se eliminó al vacío y la solución se
diluyó con 150 ml de agua y se lavó con éter de etilo; la solución
acuosa se acidificó con HCl 12N.
El precipitado obtenido de este modo se filtró y
ser secó para dar 4,8 g de producto (rendimiento 97%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,8-1,95 (1H, m,
CHHCHCOOCH_{3});
2,1-2,25 (1H, m,
CHHCHCOOCH_{3});
2,65-2,85 (3H, m,
PhCH_{2}CHCOOCH_{3}, CHCOOCH_{3});
2,95 (2H, d, PhCH_{2}CH_{2}); 3,82
(3H, s, PhOCH_{3});
6,6 (1H, d, Ar); 6,8 (1H, d, Ar).
Se disolvieron 4,11 g (0,018 moles) de ácido
(R,S)-6-metoxi-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
5a en 9 ml de cloruro de tionilo en atmósfera de nitrógeno y la
solución se calentó hasta 60ºC durante 4 horas; después se añadió
tolueno y la solución se extrajo repetidamente en condiciones de
vacío.
Se obtuvo un aceite verde que se disolvió en 12
ml de acetona anhidra y se añadió gota a gota a una solución de
azida sódica 1,75 g (0,024 moles) en 12 ml de agua, enfriándose la
mezcla de reacción hasta 0ºC.
La mezcla se dejó reaccionar en agitación durante
30 minutos, dejando aumentar la temperatura hasta 20ºC. La mezcla se
enfrió de nuevo hasta 0-5ºC y se añadieron 150 ml de
agua.
El precipitado obtenido de este modo se llevó a
la deshidratación al vacío y se obtuvieron 3,9 g de azida ácida.
El producto obtenido de este modo se disolvió en
12 ml de tolueno y se calentó durante 30 minutos hasta 100ºC; el
disolvente se eliminó, obteniéndose un aceite denso al que se
añadieron 10 ml de alcohol bencílico anhidro, tras lo cual se
calentó nuevamente la solución a 100ºC durante 6 horas.
La solución se enfrió hasta 5ºC durante la noche;
a continuación el precipitado obtenido de este modo se filtró y se
llevó a la deshidratación, obteniéndose 4,7 g de derivado
carbobenzoxi.
El producto se introdujo en 350 ml de etanol
anhidro y se disolvió calentándolo ligeramente, y se acidificó con
alrededor de 2 ml de HCl concentrado; se añadieron 500 mg de paladio
sobre carbón y la mezcla obtenida de este modo se introdujo en un
aparato de Parr y se hidrogenó durante 5 horas a una presión de
hidrógeno de 50 p.s.i.
El catalizador se filtró sobre celite y se lavó
repetidamente con etanol caliente; el disolvente se eliminó al vacío
y el sólido obtenido de este modo se cristalizó con una mezcla de
etanol/éter de etilo (rendimiento 58%).
P.M.: se descompone a 230ºC
RMN-^{1}H (DMSOD_{6}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,6-1,8 (1H, m, CHHCHN);
2,0-2,2 (1H, m, CHHCHN+);
2,6-3,0 (4H, m,
PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CHN+); 3,8 (3H, s,
OCH_{3});
6,8-7,0 (2H, 2d, Ar).
(Esquema
2)
Se suspendieron 0,6 g (0,0026 moles) de
clorhidrato de
(R,S)-2-amino-6-metoxi-7-fluorotetralina
6a en 8 ml de una solución al 47% de ácido bromhídrico en agua y
después se calentaron hasta 130ºC durante la noche.
El agua se eliminó mediante evaporación al vacío;
el sólido oscuro obtenido de este modo, disuelto en una solución
acuosa al 50% de metanol, se eluyó a través de una columna de 20 ml
de resina A-21 activada en una forma básica.
La solución eluida se acidificó hasta un pH de 2
con ácido clorhídrico 3N, se concentró al vacío y se eluyó a través
de una columna de 20 ml de resina A-21 activada en
forma de clorhidrato.
El disolvente se eliminó completamente en
condiciones de vacío.
El sólido obtenido de este modo se trató con
acetona, se filtró y se cristalizó en metanol mediante la adición
de éter de etilo; se obtuvieron 350 mg de producto (rendimiento
62%).
P.M.: se descompone a alrededor de 200ºC.
RMN-^{1}H (CD_{3}OD): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,7-1,9 (1H, m, CHHCHN+);
2,1-2,3 (1H, m, CHHCHN+);
2,7-3,1 (4H, m,
PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CHN+);
3,4-3,6 (1H, m, CHN+);
6,6-6,85 (2H, 2d, Ar).
(Esquema
2)
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
4-(6-metoxi-7-fluorofenil)-3-carbometoxi-3-butanoico
1a usando p-tolualdehído como producto de partida, 3
horas como el tiempo de reacción a reflujo y una mezcla de
ciclohexano/acetato de etilo como disolvente de cristalización
(rendimiento 27%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.): 2,35 (3H, s, PhCH_{3}); 3,58
(2H, s, CH_{2}COOH); 3,83 (3H, s, COOHCH_{3});
7,15-7,3 (4H, m, Ar); 7,87 (1H, s, CH=C).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
4-(6-metoxi-7-fluorofenil)-3-carbometoxi-3-butanoico
2a ácido 1b como producto de partida y 2,5 horas como el tiempo de
hidrogenación (rendimiento 94%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.): 2,23 (1H, s, PhCH_{3});
2,2-2,45 (1H, m,CHCOOCH_{3});
2,55-2,75 (2H, m, CH_{2}COOH);
2,9-3,1 (2H, m, PhCH_{2}); 3,62 (3H,s,
COOCH_{3}); 6,9-7,1 (4H, m, Ar).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el éster de metilo del ácido
(R,S)-6-metoxi-7-fluoro-4-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
3a, usando ácido 2b como producto de partida (rendimiento 94%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.): 2,35 (3H, s, PhCH_{3});
2,7-2,9 (2H, m,PhCH_{2}); 3,1-3,2
(3H, m, PhCOCH_{2}, CHCOOCH_{3}); 3,7 (3H, s,
COOCH_{3}); 7,1-7,35 (2H, m, Ar); 7,8 (1H,
s, Ar).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el éster de metilo del ácido
(R,S)-6-metoxi-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
4a, usando éster de metilo 3b como producto de partida (rendimiento
94%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
200 MHz, \delta (p.p.m.):
1,7-1,95 (1H, m,
CHHCHCOCCl3); 2,1-2,3 (1H, m,
CHHCHCOOCH_{3}); 2,3 (3H, s,PhCH_{3});
2,6-2,85 (3H, m, PhCH_{2}CH
COOCH_{3}, CHCOOCH3);
2,9-3,0 (2H, d,
PhCH_{2}CH_{2});
3,72 (3H, s, COOCH_{3});
6,85-7,1 (3H, m, Ar).
Se disolvieron 3,8 g (0,0186 moles) de éster de
metilo del ácido
(R,S)-6-metil-1,2,3,4-2-tetrahidro-2-naftoico
4b en 30 ml de cloruro de metileno; a la solución enfriada hasta 5ºC
se añadieron 5,2 g de cloruro de aluminio en una atmósfera de
nitrógeno y se añadieron gota a gota 1,6 ml de cloruro de acetilo a
la misma temperatura y en agitación.
La mezcla de reacción se dejó reaccionar a
temperatura ambiente durante 1,5 horas, tras lo cual se enfrió la
mezcla mediante la adición de 100 ml de agua fría lentamente y en
agitación. La solución se extrajo repetidamente con 100 ml (volumen
total) de cloruro de metileno y se lavó repetidamente con agua
fría.
La fase orgánica se anhidrificó con sulfato
sódico anhidro y el disolvente se eliminó al vacío, obteniéndose un
sólido oscuro que se secó y proporcionó 3,8 g de producto bruto.,
que se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice
(50 ml), usando n-hexano/acetato de etilo 8:2 como
disolvente.
El disolvente se eliminó al vacío, obteniéndose
1,8 g de producto (rendimiento 40%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,78-2,0 (1H, m,
CHHCHCOCCH_{3});
2,1-2,3 (1H, m,
CHHCHCOOCH_{3}); 2,45 (3H, s, COCH_{3});
2,55 (3H, s, PhCH_{3});
2,65-2,85 (3H, m,
PhCH_{2}CHCOOCH_{3},CHCOOCH_{3});
2,95 (2H, d, PhCH_{2}CH_{2}); 6,95
(1H, m, Ar); 7,45 (1H, s, Ar).
La preparación es básicamente similar a la usada
para el ácido
(R,S)-6-metoxi-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
5, usando éster de metilo 8 como producto de partida, 1,5 horas a
temperatura de reflujo como tiempo de reacción y
n-hexano/acetato de etilo como la mezcla de
cristalización (rendimiento 82%).
RMN-^{1}H (CDCl_{3}): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
2,78-2,92 (1H, m,
CHHCHCOOH); 2,1-2,25 (1H, m,
CHHCHCOOH);
2,4 (3H, s, COCH_{3}); 2,5 (3H, s,
PhCH_{3});
2,7-2,9 (3H, m,
PhCH_{2}CHCOOH, CHCOOH);
2,9-3,0 (2H, d,
PhCH_{2}CH_{2}); 6,9 (1H, s, Ar); 7,4 (1H, s, Ar).
Se suspendieron 6,5 g (0,028 moles) de ácido
(R,S)-6-metil-7-acetil-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoico
(ST 1274) 9 en 40 ml de acetona anhidra; a la suspensión se
añadieron lentamente y gota a gota 4,3 ml (0,0307 moles) de
trietilamina. La temperatura de la solución se llevó hasta -5ºC y
lentamente se añadieron 2,95 ml (0,0307 moles) de cloroformiato de
etilo disueltos en 4 ml de acetona.
A la solución se añadieron gota a gota 3,65 g
(0,056 moles) de azida sódica disueltos en 80 ml de agua manteniendo
la temperatura a 0ºC; la mezcla obtenida de este modo se dejó en
agitación a 0ºC durante 1 hora, obteniendo un precipitado. Tras la
adición se otros 80 ml de agua fría, la solución se extrajo con 100
ml de tolueno y la solución orgánica se deshidrató con sulfato
sódico anhidro.
La solución se añadió a 30 ml de tolueno
calentado hasta 100ºC y se mantuvo a 100ºC durante otra 1,5
horas.
El disolvente se eliminó por evaporación al
vacío, obteniéndose 4,9 g de un aceite denso ligeramente coloreado
que se suspendió en 50 ml de HCl 8N y se calentó hasta 100ºC en
agitación durante 1,5 horas.
El disolvente se eliminó por evaporación al
vacío; después se añadieron 100 ml de agua y la suspensión se llevó
a un pH de 10 en agitación con carbonato sódico 4N enfriando en un
baño de hielo.
La solución acuosa se dividió en cantidades más
pequeñas y se extrajo con 120 ml de éter de etilo. La fase orgánica
se deshidrató con sulfato sódico anhidro y se burbujeó ácido
clorhídrico gaseoso en la solución de éter obtenida de este
modo.
El precipitado obtenido de ese modo se filtró al
vacío y se secó al aire para dar 2,3 g de un sólido ligeramente
coloreado que se cristalizó con una mezcla de acetato de
etilo/metanol.
El sólido se llevó hasta la deshidratación en la
estufa, para dar 2 g de un producto cristalino incoloro (rendimiento
30%).
P.M.: 195-197ºC con
descomposición.
RMN-^{1}H (CD_{3}OD): Varian
300 MHz, \delta (p.p.m.):
1,75-1,85 (1H, m,
CHHCHN+); 2,15-2,3 (1H, m,
CHHCHN+);
2,42 (3H, s, CH_{3}CO); 2,53 (3H, s,
CH_{3}Ph);
2,8-3,0 (4H, m,
PhCH_{2}CHN+), PhCH_{2}CH_{2});
3,5-3,65 (1H, m, CHN+);
7,05 (1H, s, Ar); 7,6 (1H, s, Ar).
El enfoque metodológico más usado con el
propósito de valorar el posible efecto protector de una sustancia en
el shock séptico, en investigaciones preclínicas, es el uso de
modelos experimentales de intoxicación con una sustancia tóxica (exo
o endotoxina) inyectada directamente al animal de laboratorio o
liberada en cantidades masivas por las células infectivas con las
que se inocula al animal.
La descripción de las siguientes pruebas
farmacológicas muestra los resultados obtenidos con el compuesto
según la invención, en comparación con los compuestos de referencia
clorhidrato de
(R,S)-2-amino-6-fluoro-7-metoxitetralina
(ST 626) y los de los ejemplos 1-6.
Como se ha mencionado antes, el compuesto ST6262
ya es un compuesto conocido, que tiene una estructura similar a los
compuestos de la invención y tiene una actividad farmacológica
similar.
Estos resultados demuestran la eficacia
preventiva y terapéutica del compuesto de la invención y también
proporcionan indicaciones acerca de los posibles mecanismos de
acción responsables del perfil farmacológico favorable del compuesto
de referencia ST121, es decir una disminución drástica de los
niveles de citocinas inflamatorias (TNF,
IL-1\beta, Il-6 e
IFN-\gamma) en la sangre.
Se usaron ratones macho BALB/C (C. River) de
alrededor de 6 semanas de edad (10 animales por grupo
experimental).
Los animales, alojados en jaulas a 22 \pm 2ºC y
con una humedad relativa de 50 \pm 15% con 12 horas de luz (7 de
la mañana a 7 de la tarde) y 12 horas de oscuridad (de 7 de la tarde
a 7 de la mañana), tenían acceso libre a alimento y agua.
Las sustancias usadas fueron: LPS (Escherichia
coli serotipo 026:B6), lote 73570 (Difco), LPS (Salmonella
typhosa), lote 81H4018 (Sigma), SEB (Staphylococcus
aureus), lote 144H4024 (Sigma) y
D-galactosamina, lote 031EE002485 (Merck).
Los compuestos probados fueron ST 1238, ST 1274 y
ST 1275.
El pH de la solución del compuesto se corrigió,
cuando fue necesario, con NaOH 0,1N (manteniendo la solución fría y
en agitación) para obtener valores no inferiores a un pH de 5,5.
Los animales se trataron por vía intraperitoneal
(i.p.) con LPS de S. Typhosa . Antes de su uso, primero de
disolvió la endotoxina en suero salino estéril y después se inyectó
en un volumen de 200 \mul, a la dosis de 27,0 mg/kg,
correspondiente a la DL_{80}.
Los compuestos probados se administraron por vía
intravenosa (i.v.) en un volumen de 200 \mul de suero salino
estéril a la dosis aproximadamente correspondiente a 1/10 de la
DL_{50.}, 30 minutos antes y luego 5 minutos después de la
estimulación endotóxica (LPS).
Los animales se sensibilizaron con
D-galactosamina (1000 mg/kg, i.p.) y, al mismo
tiempo, se trataron con LPS de E. Coli (0,30 mg/kg, i.p.) en
un volumen total de 200 \mul.
La dosis de LPS usada correspondía
aproximadamente a 1/10 de la DL_{50} en los animales
sensibilizados con D-galactosamina.
Los compuestos probados se administraron por vía
intravenosa (i.v.) en un volumen de 200 \mul de suero salino
estéril a la dosis aproximadamente correspondiente a 1/10 de la
DL_{50.}, 30 minutos antes y luego 5 minutos después de la
estimulación con LPS.
Los animales se sensibilizaron con
D-galactosamina (1000-1500 mg/kg,
i.p.), y, al mismo tiempo, se trataron con la enterotoxina SEB (3
mg/kg, i.p.) en un volumen total de 200 \mul. La dosis de SEB
utilizada correspondiente a aproximadamente la DL_{80}se evaluó en
un experimento preliminar.
Los compuestos probados se administraron por vía
intravenosa (i.v.) en un volumen de 200 \mul de suero salino
estéril a la dosis aproximadamente correspondiente a 1/10 de la
DL_{50.}, 30 minutos antes y 5 minutos después, o 5 minutos y 30
minutos después, de la estimulación con SEB.
La supervivencia se valoró diariamente durante 10
días en todos los experimentos, tomando nota del día en que murió
cada animal.
La significación estadística del efecto protector
se evaluó usando un análisis exacto de Fisher de una cola.
En este modelo experimental de shock endotóxico
con LPS de S. Typhosa , los compuestos ST 1274 y ST 1275
redujeron de forma significativa la letalidad cuando se
administraron antes y después de la estimulación (p< 0,01 y
p<0,05, respectivamente) (Tabla 1).
Tab. 1 Efecto de la administración i.v. de ST
1274 y ST1275 sobre la letalidad inducida en ratones mediante
inyección de LPS de S. Typhosa.
Pauta antes/después del tratamiento de
estimulación (-30 y +5 minutos).
El compuesto ST 1238 reduce de forma
significativa la letalidad con ambos protocolos terapéuticos
temporales adoptados (p< 0,001 y p<0,01) (Tablas 2 y 3),
mientras que los compuestos ST 1274 y ST1275 dan lugar a aumentos
porcentuales de la supervivencia no significativos (20%) solo con el
protocolo de administración antes y después de la estimulación
Tab. 2. Efecto de la administración i.v. de ST
1238, ST 1274 y ST1275 sobre la letalidad inducida por la inyección
de LPS de E. coli en ratones sensibilizados con
D-galactosamina. Pauta antes/después del tratamiento
de estimulación (-30 y +5 minutos).
Tab. 3. Efecto de la administración i.v. de ST
1238 sobre la letalidad inducida por la inyección de LPS de E.
Coli en ratones sensibilizados con
D-galactosamina. Pauta antes/después del tratamiento
de estimulación (+5 y +30 minutos.
Con este modelo experimental todos los compuestos
reducen la letalidad en comparación con los controles (70%-90%)
cuando se administraban 30 minutos antes y 5 minutos después de la
estimulación (Tabla 4). El ST 1238 todavía mantiene un efecto
protector extremadamente significativo en la pauta de tratamiento
solo tras la estimulación (p< 0,001) (Tabla 5).
Tab.4. Efecto de la administración i.v. de ST
1238, ST 1274 y ST 1275 sobre la letalidad inducida por la inyección
de LPS de la enterotoxina SEB en ratones sensibilizados con
D-galactosamina. Pauta antes/después del tratamiento
de estimulación (-30 y +5 minutos).
Tab. 5. Efecto de la administración i.v. de ST
1238 sobre la letalidad inducida por la inyección de LPS de la
enterotoxina SEB en ratones sensibilizados con
D-galactosamina.
Pauta antes/después del tratamiento de
estimulación (+5 y +30 minutos).
Como modelo experimental se usaron cultivos de
sangre completa estimulados por LPS. Este modelo, aunque con ciertas
limitaciones, simula los aspectos fisiopatológicos de la
endotoxemia, un síndrome en el que las bacterias gramnegativas
liberan lipopolisacárido al torrente sanguíneo que, por tanto, entra
en contacto con las células del sistema inmunológico.
De hecho, recientemente se ha adoptado este
modelo para la evaluación de posibles inhibidores de la liberación
de TNF e IL-1 (GC Rice y col., Shock, 4:
254-266, 1994. AJH Gearing y col., Nature,
370: 555-557, 1994. K. Tschaikowsky, Biochim.
Biophys. Acta, 1222: 113-121, 1994. A Haziot
y col., J. Immunol., 152: 5868-5876, 1994).
Se utilizaron ratas Wistar macho (C. River) de
un peso aproximado de 175-200 g.
Los animales, alojados en jaulas a 22 \pm 2ºC y
con una humedad relativa de 50 \pm 15% con 12 horas de luz (7 de
la mañana a 7 de la tarde), tenían acceso libre a alimento y
agua.
El compuesto probado fue el ST 1238.
La endotoxina usada fue: LPS de Salmonella
typhosa, lote 81H4018 (Sigma).
Las muestras de sangre heparinizadas, 0,450
ml/viales, se tomaron de ratas Wistar sacrificadas mediante
decapitación.
A los viales con las muestras de sangre se
añadieron volúmenes de 0,025 ml (solución 20x) de los compuestos de
prueba (concentración final de 0,050 mM) disueltos en suero salino
estéril.
A las muestras incubadas durante 1 hora a 37ºC en
una atmósfera humidificada con CO_{2} al 5% se añadieron 0,025 ml
(sol 20x) de LPS de Salmonella typhosa (concentración final
de LPS igual a 1 \mug/ml).
Las muestras se incubaron en las mismas
condiciones durante 4 horas y después se centrifugaron durante n5
minutos a 10.000 rpm y el sobrenadante de guardó a -80ºC hasta el
análisis de TNF.
La actividad biológica de TNF se determinó en
medio RPMI con 1% de SBF.
Para el ensayo de TNF se realizaron diluciones
seriadas de las muestras (50 \mul) con TNF directamente en placas
de microtitulación de 96 pocillos Primaria; a los pocillos se añadió
actinomicina D-manitol (50 \mul) a una
concentración final de 4 \mug/ml, preparado en medio RPMI
complementado con 1% de SBF. Este inhibidor estimula la sensibilidad
de las células al TNF.
En cada pocillo se introdujeron 100 \mul de una
suspensión (estandarizada a 45 x 10^{5} células/ml) de L929
(fibrosarcoma murino sensible a la acción tóxica del TNF).
También se prepararon controles adecuados, es
decir el control de actinomicina-D (células +
actinomicina-D pero sin TNF) y el control celular
(células + medio de cultivo solo).
Tras la incubación posterior durante 18 horas a
37ºC con CO_{2} al 5%, las células se marcaron con una solución
recién preparada de 1 mg/ml de XTT (ácido sodio
3'-[1-[(fenilamino)-carbonil]-3,4-tetrazolio]-bis(4-met-oxi-6-nitro)benceno
sulfónico hidrato) y PMS (fenazina metosulfato) 125 \muM, según el
procedimiento descrito a continuación.
El XTT se disuelve (1 mg/ml) en medio RPMI a
60ºC.
La solución madre de PMS 100 mM (estable por
alrededor de 20 días a +4ºC en la oscuridad) se prepara disolviendo
el PMS en PBS, seguido por un breve periodo de ultrasonidos para
disolver el PMS por completo. La solución de PMS 100 mM se diluye a
continuación a 1:800 en XTT, obteniéndose una concentración final de
125 \muM en PMS y 1 mg/ml en XTT. La mezcla marcada debe filtrarse
antes de usar.
Las células se marcaron añadiendo 50
\mul/pocillo de la solución de marcaje XTT-PMS,
obteniéndose un volumen final de 250 \mul/pocillo con
concentraciones finales de 0,2 mg/ml en XTT y 25 \muM en PMS,
respectivamente. También se preparó un "blanco" en pocillos con
200 \mul de medio de cultivo + 50 \mul de solución
XTT-PMS.
Las placas de microtitulación se incuban durante
2-2,5 horas a 37ºC con CO_{2} al 5% (tiempo total
de incubación= alrededor de 20 horas).
Los valores de absorbancia de cada muestra se
midieron con un lector de placas de microtitulación a una longitud
de onda de lectura de 450 nm y a una longitud de onda de referencia
de 620 nm (el lector de placas de microtitulación se programó para
deducir el valor obtenido para el "blanco" del valor de la
muestra).
El título de TNF se calculó usando el siguiente
procedimiento.
Por definición, 1 unidad de actividad biológica
viene dada por el valor semimáximo (=50%) de la absorbancia de la
actinomicina-D.
Las diluciones de la muestra dan lugar a una
curva de los valores de la absorbancia cuya porción lineal se
describe con la ecuación y= ax + b.
Tras introducir los valores de a y b (obtenidos
mediante análisis de regresión lineal realizado por el ordenador) y
después de sustituir el valor de absorbancia semimáximo
(correspondiente a 1 unidad biológica) del control de la
actinomicina-D para y, la ecuación se resuelve para
x, que representa el recíproco de las diluciones de la muestra.
El valor obtenido da el título de TNF en
U/ml.
Los datos se analizaron estadísticamente usando
el ensayo t de Student de dos colas.
Los resultados obtenidos (Tabla 6) muestran que
el compuesto ST 1238 reduce (39%) la producción de TNF por los
cultivos de sangre de ratas estimulados con LPS.
Tab. 6. Efecto de ST 1238 sobre la producción de
TNF inducida en cultivos de sangre de ratas (n=5) estimulados con
LPS de S. typhosa (1\mug/ml). Los compuestos se probaron a una
concentración de 50 \muM. Las condiciones experimentales son las
descritas en Materiales y Métodos.
Se usaron ratones macho BALB/C (C. River) de
aproximadamente de 6 semanas de edad (10 animales por grupo
experimental).
Los animales, alojados en jaulas a 22 \pm 2ºC y
con una humedad relativa de 50 \pm 15% con 12 horas de luz (7 de
la mañana a 7 de la tarde) y 12 horas de oscuridad (de 7 de la tarde
a 7 de la mañana), tenían acceso libre a alimento y agua.
El compuesto probado fue ST 1238.
Las sustancias usadas fueron: LPS (Escherichia
coli serotipo 026:B6), lote 73570 JB (Difco), SEB
(Staphylococcus aureus), lote 144H4024 (Sigma) y
D-galactosamina, lote 031EE002485 (Merck).
Las condiciones experimentales fueron exactamente
las mismas que ya se han descrito antes.
Las condiciones experimentales fueron exactamente
las mismas que ya se han descrito antes.
En ambos modelos experimentales se tomaron
muestras de sangre 90 minutos después de la estimulación (nivel
sérico de TNF máximo).
Los ratones se anestesiaron con éter y la
extracción de sangre se realizó mediante punción del seno
retroorbital.
Las muestras de sangre se incubaron a temperatura
ambiente durante 2 horas y el suero obtenido de este modo se
centrifugó durante 20 minutos a 3000 rpm y se guardó a -80ºC hasta
la realización del ensayo de TNF.
La actividad biológica del TNF se determinó en
medio RPMI con 1% de SBF.
Se añadieron 50 \mul/pocillo de diluciones
seriadas de las muestras con TNF directamente a las placas de
microtitulación Primaria.
Las condiciones experimentales usadas fueron las
mismas que ya se han descrito antes.
Los datos se analizaron estadísticamente usando
el ensayo t de Student de una cola.
Los resultados de este modelo experimental se
recogen en la Tabla 7. El compuesto ST 1238 reduce
significativamente los niveles de TNF inducidos por LPS de E.
coli con ambas pautas terapéuticas (antes/después y solo después
de la estimulación; p<0,008 y p<0.0001, respectivamente).
Tab. 7. Efecto de la administración i.v. de ST
1238, 18 mg/kg, sobre la producción de TNF por inyección de LPS de
E. coli en ratones sensibilizados con
D-galactosamina.
Pauta antes/después del tratamiento de
estimulación (-30 y +5 minutos) y pauta solo después de la
estimulación (+ 5 y +30 minutos).
Los resultados obtenidos (Tabla 8) con este
modelo experimental de producción de TNF inducida por LPS de
enterotoxina SEB en animales sensibilizados con
D-galactosamina muestran que el compuesto ST 1238
reduce de forma significativa la producción de TNF con ambas pautas,
antes/después de la estimulación (p<0,0001) y solo después de la
estimulación (p<0,0002).
Tab. 8 Efecto de la administración i.v. de ST
1238, 18 mg/kg, sobre la producción de TNF inducida por LPS de
enterotoxina SEB en ratones sensibilizados con
D-galactosamina.
Pauta antes/después del tratamiento de
estimulación (-30 y +5 minutos) y pauta solo después de la
estimulación (+5 y +30 minutos).
Se usaron ratones macho BALB/C (C. River) de
aproximadamente de 6 semanas de edad (10 animales por grupo
experimental).
Los animales, alojados en jaulas a 22 \pm 2ºC y
con una humedad relativa de 50 \pm 15% con 12 horas de luz (7 de
la mañana a 7 de la tarde) y 12 horas de oscuridad (de 7 de la tarde
a 7 de la mañana), tenían acceso libre a alimento y agua.
El compuesto probado fue ST 1238.
Las sustancias usadas fueron: LPS de SEB
(Staphylococcus aureus), lote 144H4024 (Sigma) y
D-galactosamina, lote 031EE002485 (Merck).
La letalidad se indujo con SEB de S.
aureus en ratones sensibilizados con
D-galactosamina.
Las condiciones experimentales fueron exactamente
como ya se han descrito antes.
Las muestras de sangre se tomaron 2 horas después
de la estimulación para la IL-6; 4 horas después de
la estimulación para la IL-1\beta y 6 horas
después de la estimulación para el IFN-g.
Los ratones se anestesiaron con éter y la
extracción de sangre se realizó mediante punción del seno
retroorbital. Las muestras de sangre se incubaron a temperatura
ambiente durante 2 horas y el suero obtenido de este modo se
centrifugó durante 20 minutos a 3000 rpm y se guardó a -80ºC hasta
la realización del ensayo.
Los ensayos biológicos se realizaron según los
procedimientos indicados en los respectivos kit de ensayos
utilizados:
-Inmunoensayo para IL-1\beta de
ratón (MLB00. R&D Systems)
-Kit de EIA para IL-6 de ratón
(8-6706, PerSeptive Diagnostics)
-Kit de EIA para IFN-\gamma
de ratón (8-6716, PerSeptive Diagnostics)
Los datos se analizaron estadísticamente usando
el ensayo t de Student de una cola.
El compuesto ST 1238 reduce de forma
significativa la producción de las citocinas inflamatorias ensayadas
(p<
0,001 para IL-1\beta; 0,0001 para IL-6; 0,01 para IFN-\gamma); los resultados obtenidos se recogen en la tabla 9.
0,001 para IL-1\beta; 0,0001 para IL-6; 0,01 para IFN-\gamma); los resultados obtenidos se recogen en la tabla 9.
Tab. 9. Efecto de la administración i.v. de ST
1238, 19 mg/kg, sobre los niveles séricos de
IL-1\beta, IL-6 e
IFN-\gamma en un modelo de intoxicación con LPS de
SEB de S. aureus en ratones sensibilizados con
D-galactosamina.
Pauta antes/después del tratamiento de
estimulación (-30 y +5 minutos).
Claims (6)
1. Una 2-aminotetralina que tiene
la fórmula (I)
o sus sales farmacológicamente aceptables que
tienen la fórmula
(II)
en las
que:
R es metilo:
R_{1} es acetilo;
R_{2} es hidrógeno;
y X^{-} es el anión monovalente de un ácido
farmacológicamente aceptable.
2. El compuesto según la reivindicación 1, en el
que el anión monovalente de un ácido farmacológicamente aceptable se
selecciona de entre cloruro, bromuro, orotato, ácido aspartato,
ácido citrato, ácido fosfato, fumarato y ácido fumarato, lactato,
maleato y ácido maleato, ácido oxalato, ácido sulfato, glucosa
fosfato, tartrato y ácido tartrato.
3. Uso del compuesto según la reivindicación 1 ó
2, para la preparación de un medicamento para la prevención y
tratamiento terapéutico de enfermedades inflamatorias y/o
autoinmunes inducidas por citocinas inflamatorias.
4. Uso según la reivindicación 3, en el que
dichas patologías se seleccionan de entre el grupo constituido por
artritis reumatoide, pancreatitis, enfermedad intestinal
inflamatoria, lupus eritematoso sistémico, glomerulonefritis y
encefalomielitis.
5. Uso según la reivindicación 3, en el que dicha
enfermedad es shock séptico.
6. Una composición farmacéutica administrable
por vía oral o por vía parenteral que contiene un compuesto de la
reivindicación 1 ó 2 como ingrediente activo y un vehículo y/o
diluyente farmacéuticamente aceptable.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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