EA032779B1 - Фармацевтические композиции и соли 1,2,4-оксадиазолбензойной кислоты - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к кристаллической форме соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина. Также изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые включают эффективное количество кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина. Кроме того, в настоящем изобретении представлены способы лечения или предупреждения глазного заболевания, связанного с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном, включающие введение таких фармацевтических композиций или фармацевтически приемлемых солей пациенту с заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном.

Description

Настоящая заявка заявляет приоритет согласно предварительной заявке на патент США, серийный № 61/949052, поданной 6 марта 2014 г., и предварительной заявке на патент США, серийный № 62/009111, поданной 6 июня 2014 г., каждая из которых включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте и для всех целей.

1. Область, к которой относится изобретение

В настоящей заявке представлены фармацевтические композиции, которые включают 1,2,4оксадиазолбензойную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль. Кроме того, в настоящей заявке представлены некоторые фармацевтические композиции 1,2,4-оксадиазолбензойной кислоты и способы получения таких композиций. Кроме того, в настоящей заявке представлены некоторые фармацевтически приемлемые соли 1,2,4-оксадиазолбензойной кислоты и способы получения таких солей. Кроме того, в настоящей заявке представлены некоторые фармацевтические композиции, включающие соль 1,2,4-оксадиазолбензойной кислоты, и способы получения таких композиций. Кроме того, в настоящей заявке представлены способы лечения или профилактики болезни глаз, связанной с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном, включающие введение таких фармацевтических композиций или фармацевтически приемлемых солей пациенту с болезнью глаз, связанной с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном. Кроме того, в настоящей заявке представлены способы лечения или профилактики в пренатальный период болезни глаз, связанной с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном, включающие введение таких фармацевтических композиций 1,2,4оксадиазолбензойной кислоты или фармацевтических композиций фармацевтически приемлемой соли 1,2,4-оксадиазолбензойной кислоты пациенту с болезнью глаз, связанной с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном. Кроме того, в настоящей заявке представлены способы лечения или профилактики в постнатальный период болезни глаз, связанной с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном, включающие введение таких фармацевтических композиций 1,2,4-оксадиазолбензойной кислоты или фармацевтических композиций фармацевтически приемлемой соли 1,2,4оксадиазолбензойной кислоты пациенту с болезнью глаз, связанной с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном.

2. Предпосылки создания изобретения

Патент США № 6992096 описывает 1,2,4-оксадиазольные соединения, которые являются полезными для лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при заболеваниях, облегчаемых путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, раскрытие которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. Одно из таких соединений представляет собой 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту, имеющую международное непатентованное название аталурен, или ее фармацевтически приемлемую соль, указанную в настоящей заявке как соединение 1. Конкретные физические свойства соединения 1 могут влиять на обработку, изготовление и фармацевтическую приемлемость офтальмологической лекарственной формы. Размер частиц, растворимость и реологические свойства также могут влиять на эффективность изготовления офтальмологической лекарственной формы 3-[5-(2-фторфенил)[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты (см. Prescott et al., Pharm. Tech. 2000, October, 60-85). Некоторые композиции офтальмологической лекарственной формы 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, известные в данной области, могут оставлять раздражение на глазах. Следовательно, существует потребность в новых фармацевтических композициях, включающих 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту, имеющих улучшенные физические и фармацевтические свойства. Помимо этого существует потребность в новых фармацевтических композициях, включающих формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, которые имеют улучшенные физические и фармацевтические свойства.

3. Сущность раскрытия

В настоящей заявке представлена кристаллическая форма соли 3-[5-(2-фторфенил)[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина, которая имеет порошковую рентгеновскую дифрактограмму, по существу, как показано на фиг. 12.

В одном аспекте изобретение относится к способу лечения, предупреждения или оказания помощи при глазном заболевании, которое связано с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном у пациента, имеющего указанное глазное заболевание, включающий введение эффективного количества кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина указанному пациенту.

В одном из вариантов способа глазное заболевание выбрано из группы, состоящей из аниридии, хороидеремии, колобома-ренального синдрома, врожденного амавроза Лебера, пигментной дегенерации сетчатки, синдрома Барде-Бидля, глаукомы, фовеальной гипоплазии, катаракт, синдрома Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальной дегенерации, врожденного помутнения хрусталика, повышенного внутриглазного давления, экссудативной васкулярной ретинопатии, глаукомы, гипоплазии радужной оболочки, кератопатии (дегенерация роговицы), гипоплазии зрительного нерва, отслоения сетчатки, вторичного косоглазия и сосудистой оболочки хрусталика.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей эффективное количе

- 1 032779 ство кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и Lлизина.

В другом варианте изобретение относится к способу лечения предупреждения или оказания помощи при глазном заболевании, которое связано с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном у пациента, включающему введение фармацевтической композиции, включающей эффективное количество кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и Lлизина указанному пациенту.

В одном из вариантов указанное глазное заболевание выбрано из группы состоящей из аниридии, хороидеремии, колобома-ренального синдрома, врожденного амавроза Лебера, пигментной дегенерации сетчатки, синдрома Барде-Бидля, глаукомы, фовеальной гипоплазии, катаракт, синдрома Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальной дегенерации, врожденного помутнения хрусталика, повышенного внутриглазного давления, экссудативной васкулярной ретинопатии, глаукомы, гипоплазии радужной оболочки, кератопатии (дегенерация роговицы), гипоплазии зрительного нерва, отслоения сетчатки, вторичного косоглазия и сосудистой оболочки хрусталика.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ включает пренатальное или постнатальное введение, где пренатальное введение представляет собой пероральное или парентеральное введение, и постнатальное введение представляет собой глазное введение. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина вводят через глаза в одну или несколько областей глаза. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, которая включает эффективное количество кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и Lлизина и один или несколько дополнительных фармацевтически приемлемых эксципиентов, вводят через глаза в одну или несколько областей глаза.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одна или несколько областей глаза выбраны из группы, включающей заднюю камеру глазного яблока, границу между зрительной и слепой частями сетчатки, цилиарную мышцу, ресничную зонулу, шлеммов канал, зрачок, переднюю камеру глаза, роговую оболочку, радужную оболочку, кору хрусталика, ядро хрусталика, ресничный отросток, конъюнктиву, нижнюю косую мышцу глаза, нижнюю прямую мышцу глаза, среднюю прямую мышцу глаза, сетчаточные артерии и вены, диск зрительного нерва, твердую мозговую оболочку, центральную артерию сетчатки, центральную вену сетчатки, зрительный нерв, вортикозную вену, влагалище глазного яблока, желтое пятно, центральную ямку сетчатки глаза, белочную оболочку глаза, сосудистую оболочку глаза, верхнюю прямую мышцу глаза и сетчатую оболочку глаза. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения область глаза представляет собой роговую оболочку. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения область глаза представляет собой центральную ямку сетчатки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения область глаза представляет собой сосудистую оболочку. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения область глаза представляет собой сетчатую оболочку. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения млекопитающее представляет собой человека.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения существует риск того, что у субъекта имеется, подозревается или диагностировано одно или несколько из следующих заболеваний: аниридия, хороидеремия, колобома-ренальный синдром, врожденный амавроз Лебера, пигментная дегенерация сетчатки, синдром Барде-Бидля, глаукома, фовеальная гипоплазия, катаракты, синдром Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальная дегенерация, врожденное помутнение хрусталика, повышенное внутриглазное давление, экссудативная васкулярная ретинопатия, глаукома, гипоплазия радужной оболочки, кератопатия (дегенерация роговицы), гипоплазия зрительного нерва, отслоение сетчатки, вторичное косоглазие и сосудистая оболочка хрусталика.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическую форму соли 3-[5(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина вводят в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительное терапевтическое средство вводят перед введением кристаллической форма соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина, после введения кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и Lлизина, одновременно с введением кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол3-ил]бензойной кислоты и L-лизина или путем комбинации таких путей введения.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, которая включает кристаллическую форму соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина и один или несколько дополнительных фармацевтически приемлемых эксципиентов, вводят в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительное терапевтическое средство вводят перед введением фармацевтической композиции, после введения фармацевтической композиции, одновременно с введением фармацевтической композиции или путем комбинации таких путей введения.

- 2 032779

Кроме того, в настоящей заявке представлены способы для лечения, профилактики или оказании помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающие введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенсопосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции, включающей кристаллическую форму соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина

4.

4. Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет Рамановские спектры магниевой соли 1 соединения 1 в виде аморфной формы по сравнению с образованием кристаллической магниевой соли 2.

Фиг. 2 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму магниевой соли 1 соединения 1 в виде аморфной формы по сравнению с образованием кристаллической магниевой соли 2.

Фиг. 3 представляет Рамановские спектры калиевой соли 1 соединения 1.

Фиг. 4 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму калиевой соли 1 соединения 1.

Фиг. 5 представляет Рамановские спектры натриевой соли 1 соединения 1.

Фиг. 6 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму натриевой соли 1 соединения 1.

Фиг. 7 представляет Рамановские спектры трометаминовой соли 1 соединения 1.

Фиг. 8 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму трометаминовой соли 1 соединения 1.

Фиг. 9 представляет 'Н-ЯМР-спектр трометаминовой соли 1 соединения 1.

Фиг. 10 представляет наложение порошковых рентгеновских дифрактограмм трометаминовых солей 1, 4 и 5 соединения 1 в том виде, как они получены, включая избыток твердой фазы, оставшийся от испытания водорастоворимости.

Фиг. 11 представляет Рамановские спектры L-лизиновой соли 1 соединения 1.

Фиг. 12 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму L-лизиновой соли 1 соединения 1.

Фиг. 13 представляет Рамановские спектры L-аргининовой соли соединения 1.

Фиг. 14 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму L-аргининовой соли соединения 1.

Фиг. 15 представляет Рамановские спектры L-гистидиновой соли 1 соединения 1.

Фиг. 16 представляет порошковую рентгеновскую дифрактограмму L-гистидиновой соли 1 соединения 1, наложенную на форму А соединения 1 и L-гистидин, показывающую пики соединения 1 и перекрывающиеся пики L-гистидиновой соли 1 с L-гистидином.

Фиг. 17 представляет данные анализа динамической сорбции паров (ДСП) калиевой соли 1 соединения 1, демонстрирующие обратимое выделение воды (левая стрелка) и небольшое необратимое поглощение воды (правая стрелка) с гистерезисом.

Фиг. 18 представляет данные ДСП натриевой соли 1 соединения 1, которые демонстрируют постепенное необратимое поглощение воды.

Фиг. 19 представляет данные ДСП трометановой соли 1 соединения 1, которые демонстрируют значительное обратимое поглощение воды с гистерезисом, приводящее к меньшей массе, чем было изначально.

Фиг. 20 представляет данные ДСП L-лизиновой соли 1 соединения 1, которые демонстрируют небольшое обратимое поглощение воды.

Фиг. 21 представляет данные ДСП магниевой соли 2 соединения 1, которые демонстрируют большое выделение воды (левая стрелка) с гистерезисом (правая стрелка).

Фиг. 22 представляет наложенные Рамановские спектры с Фурье-преобразованием калиевой соли 1 соединения 1 (нижний) в том виде, как она была получена, после ДСП (средний) и остатка от определения растворимости в воде (верхний).

Фиг. 23 представляет наложенные Рамановские спектры с Фурье-преобразованием натриевой соли соединения 1 (нижний) в том виде, как она была получена, после ДСП (средний) и остатка от определения растворимости в воде (верхний).

Фиг. 24 представляет наложенные Рамановские спектры с Фурье-преобразованием трометановой соли 1 соединения 1 (нижний) в том виде, как она была получена, после ДСП (средний) и остатка от определения растворимости в воде (верхний). В спектрах не наблюдали различий.

Фиг. 25 представляет наложенные Рамановские спектры с Фурье-преобразованием L-лизиновой соли 1 соединения 1 (нижний) в том виде, как она была получена, после ДСП (средний) и остатка от определения растворимости в воде (верхний).

Фиг. 26 представляет наложенные Рамановские спектры с Фурье-преобразованием магниевой соли соединения 1 (нижний) в том виде, как она была получена, после ДСП (верхний) и остатка от определения растворимости в воде (средний).

Фиг. 27 представляет наложенные порошковые рентгеновские дифрактограммы калиевой соли 1 соединения 1 в том виде, как она была получена (высокие пики справа), и после определения раствори

- 3 032779 мости в воде (низкие пики справа).

Фиг. 28 представляет наложенные порошковые рентгеновские дифрактограммы натриевой соли 1 соединения 1 в том виде, как она была получена, и после определения растворимости в воде.

Фиг. 29 представляет наложенные порошковые рентгеновские дифрактограммы трометановой соли 1 соединения 1 в том виде, как она была получена, и после определения растворимости в воде.

Фиг. 30 представляет наложенные порошковые рентгеновские дифрактограммы L-лизиновой соли 1 соединения 1 в том виде, как она была получена, и после определения растворимости в воде.

Фиг. 31 представляет наложенные порошковые рентгеновские дифрактограммы магниевой соли 2 соединения 1 в том виде, как она была получена (высокие пики), и после определения растворимости в воде (низкие пики).

Фиг. 32 графически представляет профили растворимости микронизированного и немикронизированного соединения 1 в 0,1 N растворе HCl и 0,5%-ном растворе лаурилсульфата натрия.

Фиг. 33 графически представляет профили растворимости микронизированного соединения 1 в фосфатно-солевом буферном растворе при pH 7,4.

Фиг. 34 представляет изображения в поляризованном свете микронизированных образцов соединения 1.

Фиг. 35 представляет изображения в поляризованном свете немикронизированных образцов соединения 1.

Фиг. 36A-D показывает эффекты обработки соединением 1 у РАХ6 мутантных мышей. Фиг. 36A показывает эффект системной обработки соединением 1 у мышей с РАХ6 фенотипом. Стрелка-указатель указывает хрусталиковый стебелек; стрелка указывает роговую оболочку; и звездочка указывает ресничный край. WT - немутантный тип; Mt - мутант; L - хрусталик; R - сетчатая оболочка глаза; Р - постнатальный день. Фиг. 36B представляет гистологическое сравнение композиции 1% суспензии соединения 1, вводимой местно в виде глазных капель РАХ6 мутантным мышам. Фиг. 36C представляет данные измерений белка РАХ6 в сетчатой оболочке глаза и роговичном эпителии, полученные у РАХ6 дикого типа (WT) и РАХ6 мутантных (SEY и NEU) мышей. Черные полосы представляют мышей дикого типа; белые полосы представляют необработанных мышей; и расположенные в шахматном порядке полосы представляют мышей после введения композиции в виде суспензии. * Р<0,001 (n=6). Фиг. 36D представляет диаграммы типа ящик с усами, сравнивающие максимальный порог разрешающей способности вводимого местно соединения 1 в воде и композиции в виде суспензии. Получали диаграммы типа ящик с усами, демонстрирующие 5 и 95% квантилей (усы), 25 и 75% квартилей (ящик) и медиану, обозначенную горизонтальной линией.

Фиг. 37А-В представляют сетчаточную и роговичную гистологию у nmPAX6 (нонсенс-мутация PAX6) мутантных мышей. Фиг. 37А представляет результаты на постнатальный день 60 местной (ТОР) обработки композицией в виде суспензии глаз PAX6 мутантных мышей. Контрольный (CON) роговичный эпителий необработанного РАХ6 мутанта остается тонким на постнатальный день 60. Р означает постнатальный день. Фиг. 37В представляет изображение секций сетчатки от дикого типа системно обрабатываемых РАХ6 мутантных мышей и необработанных мышей, демонстрирующее, что внутренние сегменты фоторецепторов (IS) и внешние сегменты (OS) более короткие у обработанных мышей (n=6). Внешние ядерные слои сетчатки (ONL) расположены более плотно у обработанных мышей по сравнению с таким слоями у мышей дикого типа. Все слои сетчатки у необработанных мышей тоньше нормы. INL относится к внутреннему ядерному слою сетчатки; IPL относится к внутреннему сетчатому слою; GCL - слой ганглиозных клеток.

5. Подробное описание изобретения

5.1. Определения.

В контексте настоящего изобретения термин преждевременная терминация трансляции относится к результату мутации, которая изменяет кодон, соответствующий аминокислоте, на стоп-кодон.

В контексте настоящего изобретения термин нонсенс-опосредованный распад мРНК относится к любому механизму, который опосредует распад мРНК, содержащих кодон, обусловливающий преждевременную терминацию трансляции. В одном варианте осуществления настоящего изобретения нонсенсопосредованный распад мРНК является следствием нонсенс-мутации ДНК.

В контексте настоящего изобретения термин кодон преждевременной терминации или преждевременный стоп-кодон относится к появлению стоп-кодона там, где должен быть кодон, соответствующий аминокислоте.

В контексте настоящего изобретения термин нонсенс-мутация относится к точечной мутации, заменяющей кодон, соответствующий аминокислоте, на стоп-кодон. В одном варианте осуществления настоящего изобретения нонсенс-мутация представляет собой мутацию, которая возникает в ДНК и затем транскрибируется в мРНК.

В контексте настоящего изобретения термин нонсенс-супрессия относится к ингибированию или супрессии преждевременной терминации трансляции и/или нонсенс-опосредованного распада мРНК. В одном варианте осуществления настоящего изобретения распад мРНК является следствием нонсенсмутации ДНК.

- 4 032779

В контексте настоящего изобретения термин модуляция преждевременной терминации трансляции и/или нонсенс-опосредованного распада мРНК относится к повышению уровня экспрессии гена в присутствии агента нонсенс-супрессии. Например, если желательно увеличить продукцию дефектного белка, кодируемого геном с преждевременным стоп-кодоном, то есть разрешить считывание преждевременного стоп-кодона гена заболевания таким образом, чтобы произошла трансляция мРНК, тогда модуляция преждевременной терминации трансляции и/или нонсенс-опосредованного распада мРНК требует использования агента нонсенс-супрессии.

В контексте настоящего изобретения термины неблагоприятный эффект(ы) и побочный эффект(ы) включают, но не ограничиваются этим, тошноту, рвоту, диарею, головную боль, головокружение, боль в глазах, отек глаз, жжение глаз.

В контексте настоящего изобретения термины активное вещество, лекарственное средство и лекарственное вещество относится к 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоте или ее фармацевтически приемлемой соли, представленным в настоящей заявке (обобщенно указанные в настоящей заявке как соединение 1).

В контексте настоящего изобретения термин доза(дозы) означает количество активного вещества, вводимое за один раз.

В контексте настоящего изобретения термин единичная лекарственная форма(формы) включает твердые лекарственные формы, такие как таблетки, каплеты, капсулы, пастилки для рассасывания, дисперсии, порошки, гранулы или гели и подобные, или жидкие лекарственные формы, такие как растворимые суспензии, эмульсии или эликсиры и подобные, и твердые формы, которые могут быть восстановлены для обеспечения таких жидких лекарственных форм, где такая единичная лекарственная форма(формы) является подходящей для местного (например, глазного), перорального или парентерального введения пациенту.

В контексте настоящего изобретения термины режим дозирования и дозировка(дозировки) означают количество активного вещества, вводимое в единицу времени, и продолжительность введения.

В контексте настоящего изобретения термины субъект и пациент используются взаимозаменяемо по отношению к животному или любому живому организму, обладающему чувствительностью и способностью к осознанным движениям и которому требуется кислород и органическая пища для поддержания существования.

Неограничивающие примеры включают представителей таких видов, как человеческий, приматы, лошадиный, свиной, бычий, заячий, крысиный, мышиный, собачий и кошачий. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения субъект представляет собой млекопитающее или теплокровное позвоночное животное. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения субъект представляет собой отличное от человека животное. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения субъект представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения субъектом является плод, эмбрион, младенец, ребенок, подросток или взрослый человек. В одном варианте осуществления настоящего изобретения генетический предварительный скрининг показал, что субъект обладает нонсенс-мутацией. В другом варианте осуществления настоящего изобретения генетический предварительный скрининг определил, какой преждевременный стоп-кодон имеется у пациента (то есть UAA, UGA или UAG).

Как используется в настоящей заявке, термин эффективное количество в контексте функционального белка с прочитанным терминатором относится к количеству функционального белка (белков) с прочитанным терминатором, которое имеет профилактическую и/или терапевтическую пользу для субъекта. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эффективное количество функционального белка с прочитанным терминатором представляет собой количество белка, которое обладает одним, двумя или несколькими из следующих эффектов: (1) предотвращает возникновение, развитие и/или прогрессирование глазного заболевания, связанного с нонсенс-мутацией (мутациями), (2) предотвращает возникновение, развитие и/или прогрессирование одного или нескольких симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), (3) уменьшает продолжительность и/или тяжесть глазного заболевания, связанного с нонсенс-мутацией (мутациями), (4) уменьшает количество симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), (5) снижает длительность одного или нескольких симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), (6) уменьшает тяжесть одного или нескольких симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), и (7) улучшает качество жизни субъекта. В особом варианте осуществления настоящего изобретения эффективное количество функционального белка с прочитанным терминатором предотвращает слепоту или потерю зрения.

Как используется в настоящей заявке, термин эффективное количество в контексте введения соединения, описанного в настоящей заявке, относится к количеству соединения, которое имеет профилактическую и/или терапевтическую пользу для субъекта. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эффективное количество соединения, описанного в настоящей заявке, представляет собой количество соединения, которое обладает одним, двумя или несколькими из следующих эффектов: (1)

- 5 032779 предотвращает возникновение, развитие и/или прогрессирование глазного заболевания, связанного с нонсенс-мутацией (мутациями), (2) предотвращает возникновение, развитие и/или прогрессирование одного или нескольких симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), (3) уменьшает длительность и/или тяжесть глазного заболевания, связанного с нонсенсмутацией (мутациями), (4) уменьшает количество симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), (5) уменьшает длительность одного или нескольких симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией (мутациями), (6) уменьшает тяжесть одного или нескольких симптомов, связанных с глазным заболеванием, связанным с нонсенсмутацией (мутациями), и/или (7) улучшает качество жизни субъекта. В особом варианте осуществления настоящего изобретения эффективное количество соединения, описанного в настоящей заявке, предотвращает слепоту или потерю зрения. Примеры эффективных количеств соединений, описанных в настоящей заявке, представлены в разделе 5.4 ниже.

Как используется в настоящей заявке, термин функциональный в контексте функционального белка с прочитанным терминатором относится к белку, который имеет достаточное количество функций соответствующего белка дикого типа для благоприятного эффекта в клетке или в организме субъекта, который не продуцирует или продуцирует недостаточные количества белка дикого типа в результате мутации (например, нонсенс-мутации) в нуклеиновокислотной последовательности (например, гене), кодирующей этот белок. В специальном варианте осуществления функциональный белок (белки) с прочитанным терминатором имеет одну, две, три или более функций полноразмерного белка (белков) дикого типа. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения продуцируемый функциональный белок (белки) с прочитанным терминатором представляет собой функциональный белок (белки) не дикого типа. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения продуцируемый функциональный белок (белки) с прочитанным терминатором представляет собой функциональный белок (белки) дикого типа. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения продуцируемый функциональный белок недикого типа является полноразмерным. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения продуцируемый функциональный белок дикого типа является полноразмерным. В других вариантах осуществления функциональный белок (белки) недикого типа не является полноразмерным. В других вариантах осуществления продуцируемый функциональный белок (белки) дикого типа не является полноразмерным.

В контексте настоящего изобретения термин глазное заболевание или глазное состояние, связанное с нонсенс-мутацией в гене(генах) относится к заболеванию или состоянию, возникающему непосредственно или опосредованно в результате нонсенс-мутации (мутаций) в гене (генах), где нонсенсмутация(мутации) предотвращает продукцию белка дикого типа в пораженной клетке. Глазные состояния, связанные с нонсенс-мутацией, охватывают заболевания, в которых один ген содержит одну, две, три или более нонсенс-мутаций, а также глазные заболевания, в которых два, три или более (множество) генов содержат одну, две, три или более нонсенс-мутаций.

Как используется в настоящей заявке, термин в комбинации в контексте введения терапий относится к применению более чем одной терапии. Использование термина в комбинации не ограничивает порядок, в котором терапии вводят субъекту, имеющему заболевание. Первую терапию можно вводить до (например, за 1, 5, 15, 30, 45 мин, 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72, 96 ч, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 или 12 недель до введения), одновременно с введением или после (например, через 1, 5, 15, 30, 45 мин, 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72, 96 ч, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 или 12 недель после введения) второй терапии субъекту, который имел, имеет или подвержен заболеванию. Терапии вводят субъекту последовательно и с такими временными интервалами, чтобы офтальмологическая лекарственная форма (формы), описанная в настоящей заявке, могла действовать вместе с другой терапией для обеспечения большей пользы, чем при введении этих терапий отдельно. В некоторых других вариантах осуществления другая терапия может включать совместно вводимую пероральную или парентеральную лекарственную форму.

В контексте настоящего изобретения термины оказывать помощь, оказывающий помощь и оказание помощи относятся к благоприятным эффектам для пациента от введения фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, включающей 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойную кислоту или ее соль, представленную в настоящей заявке, которые не приводят к лечению или профилактике заболевания.

В контексте настоящего изобретения термины предотвратить, предотвращающий и предотвращение относятся к предотвращению начала развития, рецидива, распространения или ухудшения заболевания или его симптома у пациента в результате введения фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, включающей кристаллическую форму соли 3-[5-(2-фторфенил)- [1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина, пациенту с таким заболеванием. Поскольку заболевания, связанные с нонсенс-мутацией, имеют генетическую основу, пациента можно обследовать на присутствие нонсенс-мутации. Если обследование показало, что пациент имеет нонсенс-мутацию, пациенту можно вводить эффективное количество фармацевтической композиции, включающей эффективное количество кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина для предотвращения начала развития, рецидива, распространения или ухудшения заболева

- 6 032779 ния или его симптома.

В контексте настоящего изобретения термины лечить, лечащий и лечение относятся к устранению или облегчению заболевания или симптомов, связанных с заболеванием. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения такие термины относятся к минимизации распространения или ухудшения заболевания у пациента в результате введения фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, включающей кристаллическую форму соли 3-[5-(2-фторфенил)- [1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и L-лизина, представленную в настоящей заявке, пациенту с таким заболеванием. Если было определено, что пациент имеет заболевание, связанное с нонсенсмутацией, пациенту можно вводить эффективное количество фармацевтической композиции, включающей эффективное количество кристаллической формы соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты и L-лизина, представленной в настоящей заявке, для устранения, облегчения, минимизации распространения или ухудшения заболевания или его симптома.

В контексте настоящего изобретения термин около или приблизительно означает приемлемую ошибку для конкретного значения, определяемого средним специалистом в данной области, которая частью зависит от того, как значение измеряется или определяется. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения термин около или приблизительно означает стандартные отклонения в пределах 1, 2, 3 или 4. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения термин около или приблизительно означает в пределах 50, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,05% от данного значения или диапазона.

5.2. Соединение.

Соединение для использования в получении фармацевтических композиций, представленных в настоящей заявке, представляет собой кристаллическую форму соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол3-ил]бензойной кислоты (I) он и лизина (I).

Соединение формулы (I) можно получить в соответствии со способами, описанными в патентах США №№ 6992096, 7678922 и 8367841, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. Альтернативно, солевую форму соединения формулы (I) также можно получить в соответствии с указаниями, содержащимися в настоящей заявке. Соединение формулы (I) и соли, представленные в настоящей заявке, обобщенно указаны как Соединение 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение 1, используемое в фармацевтических композициях, процессах и способах, представленных в настоящей заявке, представляет собой свободную кислоту. В одном варианте осуществления настоящего изобретения свободная кислота представляет собой твердое вещество. В другом варианте осуществления настоящего изобретения твердая свободная кислота является аморфной. Еще в одном варианте осуществления твердая свободная кислота представляет собой кристаллическую форму, описанную в патентах США №№ 7863456, 8394966 и 8748625, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. Еще в одном варианте осуществления твердая свободная кислота представляет собой кристаллическую форму А. Еще в одном варианте осуществления твердая свободная кислота представляет собой кристаллическую форму В. Эти твердые формы соединения формулы (I) также можно получить в соответствии со способами, описанными в патентах США №№ 7863456, 8394966 и 8748625, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. Альтернативно, твердые формы соединения формулы (I) также можно получить в соответствии с другими способами, которые будут очевидны специалистам в данной области на основании указаний, содержащихся в настоящей заявке.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения свободная кислота соединения формулы (I) представляет собой фармацевтически приемлемый сольват. В одном варианте осуществления настоящего изобретения свободная кислота представляет собой гидрат. В другом варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой фармацевтически приемлемую безводную форму. В другом варианте осуществления настоящего изобретения свободная кислота соединения формулы (I) представляет собой фармацевтически приемлемую форму ко-кристалла, такую как хелат, клатрат или комплекс с DEAE-C (диэтиламиноэтилцеллюлозой), DEAE-D (диэтиламиноэтилдекстраном) или циклодекстрином. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения циклодекстрин выбран из α-циклодекстрина, β-циклодекстрина, γ-циклодекстрина, гидроксипропил-βциклодекстрина, гидроксипропил^-циклодекстрина, диметил-в-циклодекстрина и диметил-γциклодекстрина.

Еще в одном варианте осуществления соединение 1, используемое в фармацевтических композици

- 7 032779 ях, процессах и способах, представленных в настоящей заявке, представляет собой фармацевтически приемлемую свободную кислоту соединения формулы (I). В другом варианте осуществления настоящего изобретения соединение 1, используемое в фармацевтических композициях, процессах и способах, представленных в настоящей заявке, представляет собой фармацевтически приемлемую соль соединения формулы (I). В другом варианте осуществления настоящего изобретения соединение 1, используемое в фармацевтических композициях, процессах и способах, представленных в настоящей заявке, представляет собой фармацевтически приемлемую безводную свободную кислоту или соль соединения формулы (I).

5.3. Солевые формы и их получение.

В настоящей заявке представлены солевые формы соединения 1, включающие соль, выбранную из L-лизина, Также в настоящей заявке представлены способы выпаривания для получения in situ солевых форм соединения 1, включающие следующие стадии: (1) смешивание раствора соли и раствора соединения 1; (2) выпаривание смешанного раствора под потоком газа с определенной скоростью потока при определенной температуре с получением солевой формы и (3) сбор солевой формы.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель, используемый для получения раствора соли, выбран из ацетона, этанола, THF, метанола, воды, дихлорметана или их смесей. В одном варианте осуществления настоящего изобретения соль выбрана из L-аргининовой, Lгистидиновой, L-лизиновой, магниевой, калиевой, натриевой или трометаминовой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соль выбрана из L-лизиновой, натриевой или трометаминовой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения может быть определено, что соединение 1 в форме свободной кислоты вызывает раздражение. Когда оно является конъюгированным с катионным модификатором, выбранным из L-аргинина, L-гистидина, L-лизина, магния, калия, натрия или трометамина; или с комплексообразующим агентом, выбранным из DEAE-С, DEAE-D или циклодекстрина, полученная ион-нейтральная форма 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты имеет повышенную проницаемость в глазные оболочки и обеспечивает низкую раздражительность глазной поверхности. Конъюгированная или связанная в виде комплекса карбоновая кислота соединения 1 не может связываться с ионными участками на поверхности глаза, и, таким образом, раздражимость уменьшается и проницаемость увеличивается. Другие варианты осуществления включают циклодекстрин, выбранный из α-циклодекстрина, β-циклодекстрина, γ-циклодекстрина, гидроксипропил-в-циклодекстрина, гидроксипропил^-циклодекстрина, диметил-в-циклодекстрина и диметил^-циклодекстрина. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения катионный модификатор присутствует в количестве в пределах от около 0,01 до около 5,0% мас./об., от около 0,5 до около 5,0% мас./об., от около 0,1 до около 5,0% мас./об., от около 0,01 до около 2,0% мас./об., от около 0,5 до около 2,0% мас./об. или от около 0,1 до около 2,0% мас./об. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения комплексообразующий агент присутствует в количестве в пределах от около 0,01 до около 10,0% мас./об., от около 0,5 до около 10,0% мас./об., от около 0,1 до около 10,0% мас./об., от около 0,01 до около 2,0% мас./об., от около 0,5 до около 2,0% мас./об. или от около 0,1 до около 2,0% мас./об.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель, используемый для получения раствора соединения 1, выбран из ацетона, этанола, THF, метанола, воды, дихлорметана или их смесей. В одном варианте осуществления настоящего изобретения газ представляет собой азот. В одном варианте осуществления настоящего изобретения скорость потока газа, используемого для выпаривания, составляет около 0,4 л/мин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения конкретная температура составляет около 25°C. В одном варианте осуществления настоящего изобретения объем каждого смешанного раствора составляет около 200 мкл. В одном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация солевого раствора находится в диапазоне от около 0,005 до около 0,250 моль/л; или, более конкретно, около 0,008, около 0,028, около 0,050 или около 0,230 моль/л.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация солевого раствора для использования с соединением 1 находится в диапазоне от около 0,0025 до около 0,075 моль/л или, более конкретно, около 0,004, около 0,011 или около 0,050 моль/л. В одном варианте осуществления настоящего изобретения стехиометрическое соотношение соединение 1:соль составляет около 1:1, около 1:1,15, около 1:1,25, около 1:1,5, около 1:1,66, около 1:2, около 1:2,5, около 1:3, около 1:4 или около 1:5.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения массовое отношение между солью и соединением 1 составляет около 1,25, около 1,5, около 1,66, около 2, около 2,5, около 3, около 4 или около

5. В одном варианте осуществления настоящего изобретения общая масса соли и соединения 1 в 200 мкл смешанного раствора составляет около 0,001, около 0,0015, около 0,002, около 0,0025, около 0,003, около 0,004, около 0,005, около 0,006, около 0,007, около 0,008, около 0,009, около 0,01, около 0,015, около 0,02, около 0,025, около 0,03, около 0,04, около 0,05, около 0,06, около 0,07, около 0,08, около 0,09, около 0,1, около 0,15 мг, около 0,2, около 0,25, около 0,3, около 0,4, около 0,5, около 0,6, около 0,7, около 0,8 мг, около 0,9 или около 1,0 мг.

В настоящем изобретении обеспечивается солевая форма, включающая 3-[5-(2-фторфенил)- 8 032779 [1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту и соль, выбранную из группы, состоящей из соли магния, соли калия, соли натрия, соли трометамина, соли L-лизина, соли L-аргинина, соли N-метилглюкамина и соли L-гистидина. В настоящем изобретении обеспечивается солевая форма, включающая 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4] оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту и соль, выбранную из группы, состоящей из трометаминовой соли и L-лизиновой соли.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются способы суспендирования для получения солевых форм соединения 1, включающие следующие стадии: (1) смешивание соли и соединения 1 в растворителе; (2) выпаривание смеси под потоком газа с определенной скоростью потока при определенной температуре в течение определенного периода времени с получением солевой формы и (3) сбор солевой формы. В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель, используемый для получения смеси, выбран из этилацетата, 2-пропанола, трет-бутил метилового эфира, толуола или их смесей. В одном варианте осуществления настоящего изобретения газ представляет собой азот. В одном варианте осуществления настоящего изобретения скорость потока газа составляет около 0,4 л/мин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения конкретная температура составляет около 25°C. В одном варианте осуществления настоящего изобретения период времени составляет около 2 дней.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются способы осаждения для получения солевых форм соединения 1, включающие следующие стадии: (1) добавление раствора соли в раствор соединения 1; (2) выпаривание смеси под потоком газа с определенной скоростью потока при определенной температуре в течение определенного периода времени с получением солевой формы и (3) сбор соли. В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель, используемый для получения раствора соли, представляет собой воду. В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель, используемый для получения раствора соединения 1, представляет собой THF. В одном варианте осуществления настоящего изобретения газ представляет собой азот. В одном варианте осуществления настоящего изобретения скорость потока газа составляет около 80 мл/мин. В одном варианте осуществления настоящего изобретения конкретная температура составляет около 25°C. В одном варианте осуществления настоящего изобретения период времени составляет около 2 дней.

5.3.1. Магниевая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается магниевая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения магниевая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения магниевая соль является аморфной. В другом варианте осуществления настоящего изобретения магниевая соль является кристаллической.

В некоторых вариантах осуществления магниевая соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления магниевую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь МеОН и CH₂Cl₂ (такую как примерно 1:3 об./об.). В одном варианте осуществления настоящего изобретения магниевая соль, полученная из смеси МеОН и CH₂Cl₂, является аморфной.

В некоторых вариантах осуществления магниевую соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами осаждения. В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель раствора солеобразующего вещества представляет собой воду. В одном варианте осуществления настоящего изобретения растворитель раствора соединения 1 представляет собой THF. В одном варианте осуществления настоящего изобретения магниевая соль, полученная из смеси THF и воды, является кристаллической.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения магниевая соль представляет собой 4 М водный сольват.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стехиометрическое соотношение соли магния для соединение 1:магний составляет около 1:0,5.

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например магниевая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления магниевая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 2.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается магниевая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 1.

5.3.2. Калиевая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается калиевая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения калиевая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения калиевая соль является кристаллической.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения калиевую соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления на

- 9 032779 стоящего изобретения, калиевую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь THF и воды (такую как примерно 5:1 об./об.).

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например калиевая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления настоящего изобретения калиевая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 4.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается калиевая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 3.

5.3.3. Натриевая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается натриевая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения натриевая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения натриевая соль является кристаллической.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения натриевую соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения натриевую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь этанола и воды (такую как примерно 8:1 об./об.).

В одном варианте осуществления настоящего изобретения натриевая соль представляет собой 1,5 М водный сольват.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стехиометрическое соотношение соли натрия для соединение 1:натрий составляет около 1:1.

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например натриевая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления настоящего изобретения натриевая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 6.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается натриевая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 5.

5.3.4. Трометаминовая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается трометаминовая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения трометаминовая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения трометаминовая соль является кристаллической.

В некоторых вариантах осуществления трометаминовую соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения трометаминовую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь ацетона и метанола (такую как примерно 10:1 об./об.) или смесь воды и метанола (такую как примерно 1:1 об./об.).

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стехиометрическое соотношение трометаминовой соли для соединение 1:трометамин составляет около 1:0,5 в смеси 0,5:0,5 метанол:вода.

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например трометаминовая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления настоящего изобретения трометаминовая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 8.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается трометаминовая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 7.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается трометаминовая соль, имеющая спектр 'H ЯМР, по существу, такой, как показано на фиг. 9.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается трометаминовая соль, имеющая ДСП, по существу, такую, как показано на фиг. 19. В одном варианте осуществления настоящего изобретения данные анализа ДСП показывают общую потерю массы около 2%. В одном варианте осуществления настоящего изобретения данные анализа ДСП показывают общую потерю массы около 3%. В одном варианте осуществления настоящего изобретения данные анализа ДСП показывают общую потерю массы около 4%.

5.3.5. L-лизиновая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается L-лизиновая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения L-лизиновая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения L-лизиновая соль является кристаллической.

- 10 032779

В некоторых вариантах осуществления L-лизиновую соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения L-лизиновую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь THF и воды (такую как примерно 5:1 об./об.).

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стехиометрическое соотношение Lлизиновой соли для соединение FL-лизин составляет около 1:1.

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например L-лизиновая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Lлизиновая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 12.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается L-лизиновая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 11.

5.3.6. L-аргининовая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается L-аргининовая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения L-аргининовая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения L-аргининовая соль является кристаллической.

В некоторых вариантах осуществления L-аргининовую соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения L-аргининовую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь этанола и воды (такую как примерно 10:1 об./об.).

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например L-аргининовая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Lаргининовая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 14.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается L-аргининовая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 13.

5.3.7. L-гистидиновая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается L-гистидиновая соль соединения 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения L-гистидиновая соль соединения 1 представляет собой твердую форму соединения 1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения L-гистидиновая соль является кристаллической.

В некоторых вариантах осуществления L-гистидиновая соль, обеспечиваемую в настоящем изобретении, получают способами выпаривания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения L-гистидиновую соль получают из определенных систем растворителей, включающих смесь THF и воды (такую как примерно 5:1 об./об.).

В некоторых вариантах осуществления твердая форма, обеспечиваемая в настоящем изобретении, например L-гистидиновая соль, является, по существу, кристаллической, как показывает, например, порошковый рентгено-структурный анализ. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Lгистидиновая соль имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 16.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении обеспечивается L-гистидиновая соль, имеющая Рамановские спектры, по существу, такие, как показано на фиг. 15.

5.4. Фармацевтические композиции.

Фармацевтические композиции и единичные стандартные лекарственные формы, включающие эффективное количество соединения 1, можно использовать в способах, представленных в настоящей заявке. Отдельные лекарственные формы могут быть подходящими для перорального введения, накожного, мукозального (включая, без ограничения, офтальмологическое, сублингвальное, буккальное, ректальное, назальное или вагинальное) или парентерального введения (включая, без ограничения, подкожное, внутримышечное, интраартериальное, интраперитонеальное, интратекальное, интравентрикулярное, интрауретральное, интрастернальное, интракраниальное, интрасиновиальное, интравезикальное, интравитреальное, интраокулярное, интракорнеальное или внутривенное и любое подобное введение путем инъекции или инфузии). Предпочтительные фармацевтические композиции и единичные стандартные лекарственные формы являются подходящими для перорального введения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения пренатальное введение соединения 1 можно осуществить путем перорального введения или парентерального введения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения пренатальное введение соединения 1 можно осуществить пероральным путем с использованием лекарственной формы, такой как таблетка или капсула. В некоторых других вариантах осуществле

- 11 032779 ния пренатальное введение соединения 1 можно осуществить парентеральным путем, например, с использованием внутривенной лекарственной формы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение 1 можно вводить постнатально местным, пероральным или парентеральным путем. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение 1 можно вводить постнатально местным путем с использованием лекарственной формы, такой как офтальмологическая лекарственная форма для местного применения (например, гель для местного нанесения или раствор глазных капель).

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция включает от около 0,1 до около 99% мас./об., от около 5 до около 90% мас./об., от около 5 до около 50% мас./об., от около 10 до около 40% мас./об., от около 20 до около 30% мас./об., от около 0,1 до около 5% мас./об., от около 0,1 до около 2,5% мас./об., от около 0,1 до около 1% мас./об. или от около 0,25 до около 0,5% мас./об. соединения 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция включает около 0,01, около 0,02, около 0,025, около 0,05, около 0,1, около 0,15, около 0,2, около 0,25, около 0,5, около 1, около 2, около 5, около 10, около 15, около 20, около 25, около 30, около 35, около 40, около 50, около 60, около 70, около 80 или около 90 мас.% соединения 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция включает около 0,05, около 0,1, около 0,2, около 0,25, около 0,5 или около 1 мас.% соединения 1. В других вариантах осуществления фармацевтическая композиция включает около 0,05, около 0,1, около 0,2 или около 0,5 мас.% соединения 1.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция, обеспечиваемая в настоящей заявке, включает от около 1 до 5000 мг, от около 10 до около 2000 мг, от около 50 до около 1000 мг, от около 100 до около 1000 мг или от около 100 до около 500 мг соединения 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция, обеспечиваемая в настоящей заявке, включает около 125, около 200, около 250, около 325, около 400, около 500 или около 1000 мг соединения 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция, обеспечиваемая в настоящей заявке, включает около 120, около 130, около 195, около 205, около 245, около 255, около 320, около 330, около 395, около 405, около 495 мг, около 505, около 995 или около 1005 мг соединения 1.

В некоторых вариантах осуществления соединение 1 в фармацевтических композициях, обеспечиваемых в настоящем изобретении, представляет собой свободную кислоту 3-[5-(2-фторфенил)- [1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту или соль 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, представленную в настоящей заявке.

Фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть представлены в единичной стандартной лекарственной форме или в виде множественных структурно обособленных единиц, образующих дозированную лекарственную форму. Единичная стандартная лекарственная форма в контексте настоящего изобретения относится к физически дискретной единице, подходящей для введения человеку и животному субъекту, с использованием упаковки, известной в данной области техники. Каждая стандартная доза содержит предварительно определенное количество активного ингредиента (ингредиентов), достаточное для обеспечения желаемого терапевтического эффекта, в ассоциации с требуемыми фармацевтическими носителями или эксципиентами. Примеры единичной стандартной лекарственной формы включают ампулу, шприц и индивидуально упакованный пакет, саше, таблетку, капсулу или глазные капли. Например, 125 мг стандартная доза содержит около 125 мг активного ингредиента в содержащемся в упаковке пакете, саше, таблетке, капсуле или глазных каплях. Стандартную лекарственную форму можно вводить частями или в виде ее кратных единиц. Множественные структурно обособленные единицы, образующие дозированную лекарственную форму, представляют собой множество одинаковых стандартных лекарственных форм, упакованных в один контейнер, вводимых как отдельные стандартные лекарственные формы. Примеры множественных структурно обособленных единиц, образующих дозированную лекарственную форму, включают пакет или саше с гранулами или порошком, ампулу или флакон с таблетками или капсулами или флакон с жидким раствором, объем которого определяется в жидких унциях, пинтах или галлонах для введения через капельницу.

Фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, можно вводить в виде разовой или дробных доз в течение определенного периода времени. Должно быть понятно, что точная дозировка и длительность лечения могут варьировать в зависимости от возраста, массы тела и состояния пациента, подлежащего лечению, и могут быть определены эмпирически с использованием известных протоколов испытаний или путем экстраполяции из данных in vivo или in vitro испытаний или диагностических данных. Также должно быть понятно, что для любого конкретного субъекта конкретные схемы введения лекарственного средства следует регулировать через определенное время в соответствии с потребностями субъекта и профессиональным суждением специалиста, осуществляющего введение или контроль за введением препаратов.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию, обеспечиваемую в настоящем изобретении, вводят непосредственно в глаз пациента один, два или три раза в день.

5.4.1. Местные композиции и постнатальное введение.

- 12 032779

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включающие соединение 1, формулируют для постнатального местного введения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, формулируют в виде местных офтальмологических растворов (глазных капель), которые обычно представляют в виде стерильного изотонического раствора (то есть при pH в пределах от около 3 до около 8, от около 4 до около 8, или около 4,5, от около 7 до около 8, или около 7,4), необязательно также включающего консервант.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включают микронизированную форму соединения 1, имеющую повышенную проницаемость и растворимость и меньшее раздражение. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включают соединение 1 в форме наночастиц, имеющее повышенную проницаемость и растворимость и меньшее раздражение.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включают микронизированную форму соединения 1, где >90% частиц соединения 1 имеют диаметр (D₉₀ значение) около 10, около 9, около 8, около 7, около 6, около 5, около 4, около 3, около 2 или около 1 мкм. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включают соединение 1 в форме наночастиц, имеющее повышенную растворимость. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включают соединение 1 в форме наночастиц, где >90% частиц соединения 1 имеют диаметр (D₉₀ значение) около 0,3, около 0,25, около 0,2, около 0,15, около 0,1, около 0,09, около 0,08, около 0,07, около 0,06, около 0,05, около 0,04, около 0,03, около 0,02 или около 0,01 мкм.

Термин глазные капли, как он используется в настоящем изобретении, относится к фармацевтической жидкой композиции, которую вводят в форме капель на внешнюю поверхность глаза и которая имеет локальный эффект на внутренний и задний сегменты глаза, включая роговую оболочку, радужную оболочку, сосудистую оболочку глаза, сетчаточный пигментный эпителий, сетчатую оболочку глаза, желтое пятно, центральную ямку сетчатки глаза, зрительный нерв и стекловидное тело.

Для офтальмологических применений соединение 1 формулируют в виде растворов, суспензий или мазей, подходящих для глазного применения. Общее описание офтальмологических препаратов см. в Mitra (ed.), Ophthalmic Drug Delivery Systems, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y. (1993), а также Havener W.H., Ocular Pharmacology, C.V. Mosby Co., St. Louis (1983). Офтальмологические фармацевтические композиции могут быть адаптированы для местного введения в глаз в форме растворов, суспензий, мазей, кремов или в виде твердой вкладки. Что касается разовой дозы, можно использовать от 0,1 нг до 5000 мкг, от 1 нг до 500 мкг или от 10 нг до 100 мкг соединения 1 для нанесения на глазную поверхность.

Местная композиция может быть в любой форме, подходящей для местного введения, включая, но не ограничиваясь этим, офтальмологический раствор (например, глазные капли), офтальмологическую суспензию, офтальмологическую наносуспензию, офтальмологическую эмульсию, офтальмологическую наноэмульсию, офтальмологический гель или офтальмологическую мазь или маслянистый лосьон. Местное введение соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли также включает использование офтальмологических пластырей, содержащих соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль в подходящем содержащем лекарственное средство слое, которые накладывают на глаз, а также офтальмологических вкладок, которые представляют собой устройства, содержащие соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль, и которые помещают в нижний или верхний конъюнктивальный мешочек. Глазные капли можно получить путем растворения соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли и катионного модификатора в стерильном водном растворе, таком как физиологический солевой раствор, буферный раствор и подобные, или путем объединения порошковых композиций, подлежащих растворению перед применением. В глазные капли могут быть включены другие добавки, такие как изотонические агенты (например, хлорид натрия, борная кислота, маннит, сорбит, трегалоза, глицерин и подобные), буферные агенты (например, борная кислота, моногидрофосфат натрия, дигидрофосфат натрия и подобные), консерванты (например, бензалконий хлорид, бензетоний хлорид, динатрий этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), поликватерний-1 (PolyQuad), полигексаметилен бигуанид (РНМВ), хлорбутанол и подобные), сахаридные загустители (например, лактоза, маннит, мальтоза и подобные), гиалуроновая кислота или ее соли (например, гиалуронат натрия, гиалуронат калия и подобные), мукополисахариды (например, хондроитин сульфат и подобные), смачивающие полимеры (например, полиакрилат натрия, карбоксивиниловый полимер, сшитый полиакрилат и подобные).

Варианты осуществления офтальмологических композиций, описанных в настоящей заявке, включают изотонический офтальмологический раствор, имеющий тоничность, равную тоничности 0,9%-ного раствора хлорида натрия (290 мосм). Тоничность офтальмологического раствора можно регулировать с использованием способов, описанных в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, et al., 2006), известных специалистам в данной области.

Глазные мази можно получить путем смешивания соединение 1 или его фармацевтически приемлемой соли в основе. Неограничивающие примеры основы для глазной мази включают вазелин, селен 50, Plastibase, макрогол и подобные.

- 13 032779

Конкретные варианты осуществления офтальмологических композиций, описанных в настоящей заявке, необязательно содержат агенты повышения вязкости, такие как карбоксиметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, полиэтиленгликоль 300, полиэтиленгликоль 400, поливиниловый спирт, повидон и подобные.

Другие варианты осуществления офтальмологических композиций, описанных в настоящей заявке, необязательно содержат агенты повышения вязкости на основе натуральных продуктов, такие как вигум, альгинаты, ксантановая камедь, желатин, аравийская камедь, трагакант и подобные.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологические системы доставки, описанные в настоящей заявке, включают изотонический раствор соединения 1, содержащий несколько доз для глазного введения, для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенсопосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологическую систему доставки, включающую изотонический раствор для ежедневного глазного введения нескольких или одной дозы с увеличенным сроком годности, используют для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2-фторфенил)- [1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологическую систему доставки с использованием вязких растворов или термоотверждающегося геля используют для глазного введения нескольких или одной дозы для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологическую систему доставки с использованием липосомальной эмульсии для защиты соединения 1 от протеолиза используют для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенсопосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологическую систему доставки, включающую соединение 1, заключенное в альбуминовые микросферы, используют для медленного высвобождения соединения 1 для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологическую систему доставки, включающую соединение 1, заключенное в подходящие для инъекции PLA/PGA микросферы, используют для замедленного высвобождения соединения 1 в глазные ткани для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем

- 14 032779 модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения офтальмологическую систему доставки, включающую соединение 1 в медленно разрушающейся биоразлагаемой пленке, для медленного высвобождения соединения 1 местно или через имплантат используют для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающего введение пациенту с глазным заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества фармацевтической композиции соли 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

Офтальмологический раствор, суспензия или мазь, описанные в настоящей заявке, для постнатального лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, могут содержать нетоксичные вспомогательные вещества, такие как консервирующие компоненты, которые безвредны в применении, например бензалконий хлорид, динатрий EDTA, поликватерний-1, полигексаметилен бигуанид, метил- и пропилпарабен, бензилдодециний бромид, бензиловый спирт или фенилэтанол; буферные ингредиенты, такие как хлорид натрия, борат натрия, ацетат натрия, цитрат натрия, борная кислота, моногидрофосфат натрия, дигидрофосфат натрия или глюконатные буферы; и другие традиционно используемые ингредиенты, такие как сорбитанмонолаурат, триэтаноламин, полиоксиэтиленсорбитанмонопальмитилат, этилендиаминтетрауксусная кислота и подобные.

Офтальмологический раствор, суспензию или мазь, описанные в настоящей заявке, для постнатально лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при глазном заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, можно вводить так часто, как это необходимо для поддержания приемлемого уровня соединения 1 в глазу. Введение в глаз млекопитающему можно осуществлять примерно один, два или три раза в день.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение 1 можно объединять с деионизированной водой и регулировать растворимость, физиологический pH и изотоничность с использованием буферного агента. Примеры буферных агентов для поддержания или доведения pH включают, но не ограничиваются этим, ацетатные буферы, цитратные буферы, фосфатные буферы и боратные буферы. Примеры агентов для поддержания или регулирования тоничности включают, но не ограничиваются этим, хлорид натрия, борную кислоту, маннит, сорбит, трегалозу, глицерин и подобные. В одном или нескольких вариантах осуществления концентрация агента, регулирующего тоничность, может быть в диапазоне от около 0,01 до около 10,0% мас./об., от около 0,01 до около 5,0% мас./об., от около 0,01 до около 2,0% мас./об. или от около 0,01 до около 1,0% мас./об. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения концентрация агента, регулирующего тоничность, может быть в диапазоне от около 0,1 до около 5,0% мас./об., от около 0,1 до около 2,0% мас./об. или от около 0,1 до около 1,0% мас./об.

Некоторые композиции для офтальмологического применения необязательно могут быть поделены на аликвоты, распределенные либо в несколько отдельных стерильных одноразовых картриджей, каждый из которых является подходящим для введения стандартной дозы, либо один картридж для введения стандартной дозы. Такой отдельный одноразовый картридж может представлять собой, например, коническое или цилиндрического дозирующее устройство определенного объема с контейнером, имеющим боковые стенки, сжимающиеся в радиальном направлении к продольной оси для дозирования содержимого из контейнера на одном конце контейнера. Такие одноразовые контейнеры используются в настоящее время для введения стандартной дозы глазных капель от 0,3 до 0,4 мл, и они идеально подходят для доставки глазных капель.

Офтальмологические растворы также могут быть упакованы в многодозовый контейнер, например пластмассовый флакон с капельницей. В таких композициях необязательно добавлены консерванты для предотвращения микробного загрязнения после открытия контейнера. Подходящие консерванты включают, но не ограничиваются этим, следующие: бензалконий хлорид, динатрий EDTA, поликватерний-1, полигексаметилен бигуанид, хлорбутанол, метилпарабен, пропилпарабен, фенилэтиловый спирт, сорбиновую кислоту или другие вещества, известные специалистам в данной области, и все они предусматриваются для использования в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения консервант выбирают из бензалконий хлорида, динатрия EDTA, поликватерний-1 или полигексаметилен бигуанида. Содержащие консервант композиции могут включать от около 0,001 до около 1,0% мас./об., от около 0,05 до около 0,75% мас./об., от около 0,05 до около 0,5% мас./об., от около 0,05

- 15 032779 до около 0,25% мас./об. или от около 0,01 до около 0,25% мас./об. консерванта.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения можно добавить полимеры к офтальмологической композиции для повышения вязкости носителя, продлевая, таким образом, контактирование раствора с роговой оболочкой и повышая биодоступность. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения такие полимеры выбирают из производных целлюлозы (например, метилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы или карбоксиметилцеллюлозы), декстрана 70, желатина, полиолов, глицерина, полиэтиленгликоля 300, полиэтиленгликоля 400, полисорбата 80, пропиленгликоля, поливинилового спирта и повидона или их комбинаций.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения офтальмологические композиции, описанные в настоящей заявке, могут дополнительно включать стабилизатор/солюбилизатор, такой как циклодекстрин. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения циклодекстрин выбирают из α-циклодекстрина, β-циклодекстрина, γ-циклодекстрина, гидроксипропил-в-циклодекстрина, гидроксипропил-у-циклодекстрина, диметил-в-циклодекстрина и диметил-у-циклодекстрина.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение, раскрытое в настоящей заявке, такое как соединение 1, можно вводить в композиции офтальмологического раствора замедленного высвобождения. В специальном варианте осуществления композиция офтальмологического раствора замедленного высвобождения дополнительно включает вкладку, где вкладка обладает биоадгезивными свойствами для стабильной фиксации к участку в организме, являющемуся мишенью для терапевтического воздействия; или обладает ионообменными свойствами или проницаемостью для переноса терапевтического средства для высвобождения в течение определенного периода времени; или обладает свойствами биоразложения для неинвазивного удаления после доставки эффективной дозы терапевтического средства.

Можно использовать любой способ, известный специалистам для контактирования клетки, органа или ткани с соединением. Подходящие способы включают in vitro, ex vivo или in vivo способы. In vivo способы типично включают введение соединения 1 млекопитающему, предпочтительно человеку. Когда соединение 1 используют для лечения in vivo, его вводят субъекту в эффективных количествах (то есть в количествах, которые имеют желаемый терапевтический эффект). Доза и режим дозирования будут зависеть от степени офтальмологического состояния у субъекта и характеристик соединения 1, например терапевтического индекса для субъекта и клинической истории субъекта.

Эффективное количество соединения 1 можно определить в процессе предклинических испытаний и клинических испытаний способами, известными лечащим врачам и клиницистам. Эффективное количество соединения 1, которое является полезным в способах по настоящему изобретению, предпочтительно в фармацевтической композиции, можно вводить млекопитающему, нуждающемуся в этом, любым из различных хорошо известных способов введения фармацевтических соединений. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение 1 вводят системно. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение 1 вводят местно. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение 1 вводят накожно, перорально, назально, парентерально (внутривенно, внутримышечно, интраперитонеально или подкожно), местно, ректально, интракавернозно, внутрикожно, чрескожно, путем ингаляции, интраартериально, интрацеребрально, межкостно, интратекально, интравезикально, путем ионофореза, через глаза и т.п. Введение включает самостоятельное введение и введение, осуществляемое другим лицом.

Для офтальмологического применения осуществляют доставку соединения 1 в терапевтически эффективном количестве в определенные части глаза, такие как задняя камера глазного яблока, граница между зрительной и слепой частями сетчатки, цилиарная мышца, ресничная зонула, шлеммов канал, зрачок, передняя камера глаза, роговая оболочка, радужная оболочка, кора хрусталика, ядро хрусталика, ресничный отросток, конъюнктива, нижняя косая мышца глаза, нижняя прямая мышца глаза, средняя прямая мышца глаза, сетчаточные артерии и вены, диск зрительного нерва, твердая мозговая оболочка, центральная артерия сетчатки, центральная вена сетчатки, зрительный нерв, вортикозные вены, влагалище глазного яблока, желтое пятно, центральная ямка сетчатки глаза, белочная оболочка глаза, сосудистая оболочка глаза, верхняя прямая мышца глаза и сетчатая оболочка глаза.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения частота введения может сильно варьировать в зависимости от потребностей каждого субъекта и тяжести заболевания, подлежащего лечению, такое введение можно осуществлять от примерно одного раза в неделю до около десяти раз в день, например примерно от трех раз в неделю до примерно трех раз в день, или один раз или два раза в день.

5.4.2. Пероральные препараты и пренатальное введение.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, формулируют для пренатальной доставки через пероральное введение биологической или суррогатной матери. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении для перорального введения, представлены в твердых, полутвердых или жидких лекарственных формах для перорального введения. В контексте настоящего изобретения пероральное введение также включает буккальное, лингвальное и сублингвальное введения. Подходящие

- 16 032779 пероральные лекарственные формы включают, но не ограничиваются этим, таблетки, сублингвальные или буккальные пленки (то есть быстроразлагающиеся), жевательные таблетки, капсулы, пилюли, контурные безъячейковые упаковки, лепешки, пастилки для рассасывания, пастилки, крахмальные капсулы, пеллеты, пропитанную лекарственным средством жевательную резинку, нерасфасованные порошки, шипучие или нешипучие порошки или гранулы, пероральные аэрозоли, растворы, эмульсии, суспензии, облатки, вскрываемые капсулы, эликсиры и сиропы. В дополнение к активному ингредиенту фармацевтические композиции могут содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов, включая, но не ограничиваясь этим, связующие, наполнители, разбавители, разрыхлители, смачивающие агенты, поверхностно-активные вещества, смазывающие вещества, вещества, способствующие скольжению, pH-модификаторы, красители, ингибиторы подвижности красителя, подсластители, отдушки, эмульгаторы, суспендирующие и диспергирующие вещества, консерванты, растворители, не-водные жидкости, органические кислоты и источники диоксида углерода.

Связующие или гранулирующие вещества придают таблетке когезионную способность, обеспечивая целостность таблетки после прессования. Подходящие связующие или гранулирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, крахмалы, такие как кукурузный крахмал, картофельный крахмал и предварительно желатинизированный крахмал (например, крахмал 1500); желатин; сахара, такие как сахароза, глюкоза, декстроза, меласса и лактоза; природные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, альгиновая кислота, альгинаты, экстракт из ирландского мха, камедь панвар, камедь гхатти, клейкое вещество из шелухи семян подорожника, карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон (PVP), вигум, арабогалактан из древесины лиственницы, порошкообразный трагакант и гуаровая камедь; целлюлозы, такие как этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, карбоксиметилцеллюлоза (CMC), кальций карбоксиметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС), гидроксипропилцеллюлоза (НРС), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС); микрокристаллические целлюлозы, такие как AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103, AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (FMC Corp., Marcus Hook, PA) и их смеси. Подходящие наполнители включают, но не ограничиваются этим, тальк, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, декстраты, каолин, маннит, кремневую кислоту, сорбит, крахмал, предварительно желатинизированный крахмал и их смеси.

Подходящие разбавители включают, но не ограничиваются этим, дикальций фосфат, сульфат кальция, лактозу, сорбит, сахарозу, инозит, целлюлозу, каолин, маннит, хлорид натрия, сухой крахмал и порошкообразный сахар. Некоторые разбавители, такие как маннит, лактоза, сорбит, сахароза и инозит, когда они присутствуют в достаточном количестве, могут придавать свойства некоторым прессованным таблеткам, которые обеспечивают возможность разложения в полости рта при жевании. Такие прессованные таблетки можно использовать как жевательные таблетки.

Подходящие разрыхлители включают, но не ограничиваются этим, агар, бентонит, целлюлозы, такие как метилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза, продукты переработки древесины, природная губка, катионообменные смолы, альгиновую кислоту, камеди, такие как гуаровая камедь и вигум HV, цитрусовую пульпу, поперечно сшитые целлюлозы, такие как кроскармеллоза, поперечно сшитые полимеры, такие как кросповидон, поперечно сшитые крахмалы, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, такую как натрий крахмал гликолят, полакрилин калия, крахмалы, такие как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, тапиоковый крахмал и предварительно желатинизированный крахмал, глины, альгины и их смеси. Фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут содержать от около 0,5 до около 15 мас.% или от около 1 до около 5 мас.% разрыхлителя.

Подходящие смазывающие вещества включают, но не ограничиваются этим, стеарат кальция; стеарат магния; минеральное масло; светлое минеральное масло; глицерин; сорбит; маннит; гликоли, такие как глицеринбегенат и полиэтиленгликоль (ПЭГ); стеариновую кислоту; лаурилсульфат натрия; тальк; гидрированное растительное масло, включая арахисовое масло, масло семян хлопчатника, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; стеарат цинка; этилолеат; этиллаурат; агар; крахмал; ликоподий; диоксид кремния или силикагели, такие как AEROSIL® 200 (W.R. Grace Co., Baltimore, MD) и CAB-O-SIL® (Cabot Co. of Boston, MA); и их смеси. Фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут содержать около 0,1 до около 5 мас.% смазывающего вещества.

Подходящие вещества, способствующие скольжению, включают, но не ограничиваются этим, коллоидный диоксид кремния, CAB-O-SIL® (Cabot Co. of Boston, MA) и безасбестовый тальк. Подходящие красители включают, но не ограничиваются этим, любой из одобренных сертифицированных водорастворимых FD&C красителей и нерастворимых в воде FD&C красителей, суспендированных на гидрате алюминия, и красящих лаков, и их смесей. Красящий лак представляет собой комбинацию, получаемую путем адсорбции водорастворимого красителя на гидратированном оксиде тяжелого металла, образующую нерастворимую форму красителя. Подходящие отдушки включают, но не ограничиваются этим, природные отдушки, экстрагированные из растений, таких как фрукты, и синтетические смеси соединений, которые дают приятное вкусовые ощущения, таких как перечная мята и метилсалицилат.

- 17 032779

Подходящие подсластители включают, но не ограничиваются этим, сахарозу, лактозу, маннит, сиропы, глицерин и искусственные подсластители, такие как сахарин и аспартам. Подходящие эмульгаторы включают, но не ограничиваются этим, желатин, аравийскую камедь, трагакант, бентонит и поверхностно-активные вещества, такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат (TWEEN® 20), полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат 80 (TWEEN® 80) и триэтаноламинолеат. Подходящие суспендирующие и диспергирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, натрий карбоксиметилцеллюлозу, пектин, трагакант, вигум, аравийскую камедь, натрий карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и поливинилпирролидон. Подходящие консерванты включают, но не ограничиваются этим, глицерин, метил- и пропилпарабен, бензойную кислоту, бензоат натрия и спирт. Подходящие смачивающие агенты включают, но не ограничиваются этим, пропиленгликоль моностеарат, сорбитанмоноолеат, диэтиленгликоль монолаурат и полиоксиэтиленлауриловый эфир. Подходящие растворители включают, но не ограничиваются этим, глицерин, сорбит, этиловый спирт и сироп. Подходящие неводные жидкости, используемые в эмульсиях, включают, но не ограничиваются этим, минеральное масло и масло семян хлопчатника. Подходящие органические кислоты включают, но не ограничиваются этим, лимонную и винную кислоты. Подходящие источники диоксида углерода включают, но не ограничиваются этим, бикарбонат натрия и карбонат натрия.

Должно быть понятно, что многие носители и эксципиенты могут выполнять несколько функций даже в одной и той же композиции.

Фармацевтические композиции для перорального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть представлены в виде прессованных таблеток, измельчаемых в порошок таблеток, жевательных пастилок для рассасывания, быстрорастворимых таблеток, множества прессованных таблеток или таблеток с энтеросолюбильным покрытием, таблеток с сахарным покрытием или с пленочным покрытием. Таблетки с энтеросолюбильным покрытием представляют собой прессованные таблетки, покрытые веществами, которые препятствуют действию желудочной кислоты, но растворяются или разлагаются в кишечнике, таким образом, защищая активный ингредиент от кислотной среды желудка. Энтеросолюбильные покрытия включают, но не ограничиваются этим, жирные кислоты, жиры, фенилсалицилат, воски, шеллак, аммиачный шеллак и фталаты ацетилцеллюлозы. Таблетки с сахарным покрытием представляют собой прессованные таблетки, окруженные сахарным покрытием, которое может быть полезным для маскировки неприятных вкусов или запахов и для защиты таблеток от окисления. Таблетки с пленочным покрытием представляют собой прессованные таблетки, которые покрыты тонким слоем или пленкой водорастворимого вещества. Пленочные покрытия включают, но не ограничиваются этим, гидроксиэтилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль 4000 и фталат ацетилцеллюлозы. Пленочное покрытие придает такие же общие характеристики, как и сахарное покрытие. Многокомпонентные прессованные таблетки представляют собой прессованные таблетки, полученные в результате более чем одного цикла прессования, включая многослойные таблетки и таблетки, полученные с использованием пресса для нанесения покрытий, или таблетки, имеющие покрытие, нанесенное сухим способом.

Лекарственные формы в виде таблеток можно получить из активного ингредиента в порошкообразной, кристаллической или зернистой форме, отдельно или в комбинации с одним или несколькими носителями или эксципиентами, описанными в настоящей заявке, включая связующие, разрыхлители, полимеры для контролируемого высвобождения, смазывающие вещества, разбавители и/или красители. Отдушки и подсластители особенно полезны для получения жевательных таблеток и пастилок для рассасывания.

Фармацевтические композиции для перорального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть представлены в виде мягких или твердых капсул, которые можно получить из желатина, метилцеллюлозы, крахмала или альгината кальция. Твердая желатиновая капсула, также известная как капсула с сухим наполнением (DFC), состоит из двух секций, где одна обтекает другую, таким образом, полностью огораживая активный ингредиент. Мягкая эластичная капсула (SEC) представляет собой мягкую сферическую оболочку, такую как желатиновая оболочка, которая пластифицирована путем добавления глицерина, сорбита или подобного полиола. Мягкие желатиновые оболочки могут содержать консервант для предотвращения роста микроорганизмов. Подходящие консерванты представляют собой такие, которые описаны в настоящей заявке, включая метил- и пропилпарабены и сорбиновую кислоту. Жидкие, полутвердые и твердые лекарственные формы, представленные в настоящей заявке, могут быть инкапсулированными в капсуле. Подходящие жидкие и полутвердые лекарственные формы включают растворы и суспензии в пропиленкарбонате, растительных маслах или триглицеридах. Капсулы также могут иметь покрытие, как известно специалистам в данной области, для модификации или замедления растворения активного ингредиента.

Фармацевтические композиции для перорального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть представлены в жидких и полутвердых лекарственных формах, включая эмульсии, растворы, суспензии, эликсиры и сиропы. Эмульсия представляет собой двухфазную систему, в которой одна жидкость диспергирована в виде небольших капель в другой жидкости, которая может представ

- 18 032779 лять собой систему масло-в-воде или вода-в-масле. Эмульсии могут включать фармацевтически приемлемую неводную жидкость или растворитель, эмульгатор и консервант. Суспензии включают фармацевтически приемлемое суспендирующее вещество и консервант. Водные спиртовые растворы могут включать фармацевтически приемлемый ацеталь, такой как ди(низший алкил)ацеталь низшего алкилальдегида, например ацетальдегиддиэтилацеталь; и смешиваемый с водой растворитель, содержащий одну или несколько гидроксильных групп, такой как пропиленгликоль и этанол. Эликсиры представляют собой прозрачные подслащенные и водно-спиртовые растворы. Сиропы представляют собой концентрированные водные растворы сахара, например сахарозы, и также могут содержать консервант. Для жидкой лекарственной формы, например, раствор в полиэтиленгликоле можно разбавить достаточным количеством фармацевтически приемлемого жидкого носителя, например воды, для удобного отмеривания для введения.

Другие полезные жидкие и полутвердые лекарственные формы включают, но не ограничиваются этим, лекарственные формы, содержащие активный ингредиент (ингредиенты), представленные в настоящей заявке, и диалкилированный моно- или полиалкиленгликоль, включая 1,2-диметоксиметан, диглим, триглим, тетраглим, полиэтиленгликоль-350-диметиловый эфир, полиэтиленгликоль-550диметиловый эфир, полиэтиленгликоль-750-диметиловый эфир, где 350, 550 и 750 относятся к приблизительной средней молекулярной массе полиэтиленгликоля. Эти композиции могут дополнительно включать один или несколько антиоксидантов, таких как бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), бутилированный гидроксианизол (ВНА), пропилгаллат, витамин Е, гидрохинон, гидроксикумарины, этаноламин, лецитин, цефалин, аскорбиновую кислоту, яблочную кислоту, сорбит, фосфорную кислоту, бисульфит, метабисульфит натрия, тиодипропионовую кислоту и ее сложные эфиры и дитиокарбаматы.

Фармацевтические композиции для перорального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, также могут быть представлены в виде липосом, мицелл, микросфер или наносистем.

Фармацевтические композиции для перорального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть представлены в виде нешипучих или шипучих гранул и порошков для реструктурирования в жидкую лекарственную форму. Фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, используемые в нешипучих гранулах или порошках, могут включать разбавители, подсластители и смачивающие агенты. Фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, используемые в шипучих гранулах или порошках, могут включать органические кислоты и источник диоксида углерода.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде твердой пероральной лекарственной формы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде жидкой пероральной лекарственной формы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения стандартная лекарственная форма представлена в виде суспензии в фармацевтически приемлемом растворителе, который включает, но не ограничивается этим, воду, молоко, газированный напиток, сок, яблочное пюре, детское питание или смесь для детского питания.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, которые включают фармацевтически приемлемую соль 3-[5-(2-фторфенил)[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и один или несколько дополнительных фармацевтически приемлемых эксципиентов. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул. В другом варианте осуществления настоящего изобретения один или несколько эксципиентов выбирают из группы, состоящей из полидекстрозы, маннита, полоксамера, полиэтиленгликоля, гидроксиэтилцеллюлозы, кросповидона, искусственной ванильной отдушки и стеарата магния.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 25 мас.% фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты; около 1 мас.% коллоидного диоксида кремния и один или несколько дополнительных фармацевтически приемлемых эксципиентов. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул. В другом варианте осуществления настоящего изобретения один или несколько эксципиентов выбирают из группы, состоящей из полидекстрозы, маннита, полоксамера, полиэтиленгликоля, гидроксиэтилцеллюлозы, кросповидона, искусственной ванильной отдушки и стеарата магния.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 25 мас.% фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, около 25,65 мас.% полидекстрозы, около 26,4 мас.% маннита, около 3,7 мас.% полоксамера, около 10 мас.% полиэтиленгликоля, около 1,5 мас.% гидроксиэтилцеллюлозы, около 5 мас.% кросповидона, около 0,75 мас.% искусственной ванильной отдушки, около 1 мас.% коллоидного диоксида кремния и около 1 мас.% стеарата магния. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 130 мг фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, около 133,38 мг полидекстрозы, около 137,28 мг маннита, около 19,24 мг полок

- 19 032779 самера, около 52 мг полиэтиленгликоля, около 7,8 мг гидроксиэтилцеллюлозы, около 26 мг кросповидона, около 3,9 мг искусственной ванильной отдушки, около 5,2 мг коллоидного диоксида кремния и около 5,2 мг стеарата магния. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 205 мг фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, около 210,33 мг полидекстрозы, около 216,48 мг маннита, около 30,34 мг полоксамера, около 82 мг полиэтиленгликоля, около 12,3 мг гидроксиэтилцеллюлозы, около 41 мг кросповидона, около 6,15 мг искусственной ванильной отдушки, около 8,2 мг коллоидного диоксида кремния и около 8,2 мг стеарата магния. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 330 мг фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, около 338,58 мг полидекстрозы, около 348,48 мг маннита, около 48,84 мг полоксамера, около 132 мг полиэтиленгликоля, около 19,8 мг гидроксиэтилцеллюлозы, около 6 6 мг кросповидона, около 9,9 мг искусственной ванильной отдушки, около 13,2 мг коллоидного диоксида кремния и около 13,2 мг стеарата магния. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 405 мг фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, около 415,53 мг полидекстрозы, около 427,68 мг маннита, около 59,94 мг полоксамера, около 162 мг полиэтиленгликоля, около 24,3 мг гидроксиэтилцеллюлозы, около 81 мг кросповидона, около 12,15 мг искусственной ванильной отдушки, около 16,2 мг коллоидного диоксида кремния и около 16,2 мг стеарата магния. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются фармацевтические композиции, включающие около 505 мг фармацевтически приемлемой соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, около 518,13 мг полидекстрозы, около 4533,28 мг маннита, около 74,74 мг полоксамера, около 202 мг полиэтиленгликоля, около 30,3 мг гидроксиэтилцеллюлозы, около 101 мг кросповидона, около 15,15 мг искусственной ванильной отдушки, около 20,2 мг коллоидного диоксида кремния и около 20,2 мг стеарата магния. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию формулируют в виде гранул.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения стандартная лекарственная форма включает от около 35 до около 1400, от около 125 до около 1000, от около 250 до около 1000 или от около 500 до около 1000 мг соединения 1.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения стандартная лекарственная форма включает около 35, около 50, около 70, около 100, около 125, около 140, около 175, около 200, около 250, около 280, около 350, около 500, около 560, около 700, около 750, около 1000 или около 1400 мг соединения 1.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, формулируют в виде гранул. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, упаковывают в пакет. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, упаковывают в запаянный ламинированный алюминиевый пакет. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, упаковывают в безопасный для детей пакет. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, упаковывают в пакет, который включает слои из полиэтилентерефталата, полиэтилена, алюминиевой фольги, адгезивной и герметичной пленки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, упаковывают в флакон, включая, но не ограничиваясь этим, флаконы из полиэтилена высокой плотности (HDPE).

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, формулируют в виде гранул для реструктурирования. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, формулируют в виде гранул для реструктурирования в суспензию для перорального введения.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, реструктурируют перед введением при помощи фармацевтически приемлемого растворителя, который включает, но не ограничивается этим, воду, молоко, газированный напиток, сок, фруктовый сок, фруктовый пунш, яблочное пюре, детское питание или смесь для детского питания; или полутвердого текучего вещества, включая, но не ограничиваясь этим полутвердый

- 20 032779 молочный продукт, йогурт, пудинг, яблочное пюре, сою, фрукты и зерновые продукты.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем изобретении, реструктурируют перед введением при помощи воды. В одном варианте осуществления настоящего изобретения реструктурирование 250 мг стандартной дозы композиции соединения 1 осуществляют путем добавления около 10 мл воды непосредственно в флакон, содержащий соединение 1, для достижения концентрации около 25 мг/мл в общем объеме суспензии.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемая соль представляет собой магниевую соль, калиевую соль, натриевую соль, трометаминовую соль, Lлизиновую соль, L-аргининовую соль, N-метилглюкаминовую соль или L-гистидиновую соль.

5.4.3. Парентеральные композиции и введение.

Фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, включающие Соединение 1, можно вводить парентеральное путем инъекции, инфузии или имплантации для местного или системного введения. Парентеральное введение, в контексте настоящего изобретения, включает внутривенное, интраартериальное, интраперитонеальное, интратекальное, интравентрикулярное, интрауретральное, интрастернальное, интракраниальное, внутримышечное, интрасиновиальное, интравезикальное и подкожное введение.

Фармацевтические композиции для парентерального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть сформулированы в любые лекарственные формы, которые являются подходящими для парентерального введения, включая растворы, суспензии, эмульсии, мицеллы, липосомы, микросферы, наносистемы и твердые формы, подходящие для получения растворов или суспензий в жидкости перед инъекцией. Такие лекарственные формы можно получить в соответствии с традиционными способами, известными специалистам в области фармацевтики (см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, supra).

Фармацевтические композиции, предназначенные для парентерального введения, могут включать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и эксципиентов, включая, но не ограничиваясь этим, водные носители, смешиваемые с водой носители, неводные носители, противомикробные средства или средства, предохраняющие против роста микроорганизмов, стабилизаторы, агенты повышения растворимости, изотонические агенты, буферные агенты, антиоксиданты, местные анестетики, суспендирующие и диспергирующие вещества, смачивающие вещества или эмульгаторы, комплексообразующие агенты, секвестранты или хелатообразующие агенты, криопротектанты, лиопротектанты, загустители, pH-регулирующие вещества и инертные газы.

Подходящие водные носители включают, но не ограничиваются этим, воду, солевой раствор, физиологический солевой раствор или фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, изотонический раствор декстрозы для инъекций, стерильную воду для инъекций, декстрозу и раствор Рингера с лактатом для инъекций. Подходящие неводные носители включают, но не ограничиваются этим, нелетучие масла растительного происхождения, касторовое масло, кукурузное масло, масло семян хлопчатника, оливковое масло, арахисовое масло, масло мяты перечной, сафлоровое масло, кунжутное масло, соевое масло, гидрированные растительные масла, гидрированное соевое масло и имеющие среднюю длину цепи триглицериды кокосового масла и пальмовое масло. Подходящие смешиваемые с водой носители включают, но не ограничиваются этим, этанол, 1,3бутандиол, жидкий полиэтиленгликоль (например, полиэтиленгликоль 300 и полиэтиленгликоль 400), пропиленгликоль, глицерин, №метил-2-пирролидон, N.N-диметилацетамид и диметилсульфоксид.

Подходящие противомикробные агенты или консерванты включают, но не ограничиваются этим, фенолы, крезолы, бензиловый спирт, хлорбутанол, метил- и пропилгидроксибензоаты, бензалконийхлорид (например, бензетонийхлорид), динатрий EDTA, поликватерний-1, полигексаметиленбигуанид, метил- и пропилпарабены и сорбиновую кислоту. Подходящие изотонические агенты включают, но не ограничиваются этим, хлорид натрия, борную кислоту, маннит, сорбит, трегалозу, глицерин и декстрозу. Подходящие буферные агенты включают, но не ограничиваются этим, борат, фосфат и цитрат. Подходящие антиоксиданты представляют собой такие, которые описаны в настоящей заявке, включая бисульфит и метабисульфит натрия. Подходящие суспендирующие и диспергирующие агенты представляют собой такие, которые описаны в настоящей заявке, включая натрий карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и поливинилпирролидон. Подходящие эмульгаторы представляют собой такие, которые описаны в настоящей заявке, включая полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат 80 и триэтаноламинолеат. Подходящие секвестранты или хелатообразующие агенты включают, но не ограничиваются этим, EDTA. Подходящие pH-регулирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, гидроксид натрия, хлористоводородную кислоту, лимонную кислоту и молочную кислоту. Подходящие комплексообразующие агенты включают, но не ограничиваются этим, DEAE-C, DEAE-D или циклодекстрины, включая α-циклодекстрин, β-циклодекстрин, гидроксипропилβ-циклодекстрин, сульфобутилэфир-в-циклодекстрин и сульфобутилэфир 7-β-циклодекстрин (CAPTISOL®, CyDex, Lenexa, KS).

Когда фармацевтическую композицию, обеспечиваемую в настоящем изобретении, формулируют

- 21 032779 для многодозового введения, композиция для многодозового парентерального введения должна содержать противомикробное средство при бактериостатической или фунгистатической концентрации. Все композиции для парентерального введения должны быть стерильными, как это известно и практикуется в данной области.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для парентерального введения представлены в виде готовых к применению стерильных растворов. В другом варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции представлены в виде стерильных сухих растворимых продуктов, включая лиофилизированные порошки и таблетки для подкожных инъекций, подлежащие реструктурированию при помощи носителя перед применением. Еще в одном варианте осуществления фармацевтические композиции представлены в виде готовых к применению стерильных суспензий. Еще в одном варианте осуществления фармацевтические композиции представлены в виде стерильных сухих нерастворимых продуктов, подлежащих реструктурированию при помощи носителя перед применением. Еще в одном варианте осуществления фармацевтические композиции представлены в виде готовых к применению стерильных эмульсий.

Фармацевтические композиции для парентерального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть сформулированы в виде лекарственных форм немедленного или модифицированного высвобождения, включая формы отсроченного, замедленного, прерывистого, контролируемого, нацеленного и программируемого высвобождения.

Фармацевтические композиции для парентерального введения, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть сформулированы в виде суспензии, твердого вещества, полутвердого вещества или тиксотропной жидкости для введения в виде имплантируемого депо. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, диспергированы в твердой внутренней матрице, которая окружена внешней полимерной мембраной, которая нерастворима в жидкостях организма, но позволяет активному ингредиенту в фармацевтических композициях диффундировать через нее.

Подходящие внутренние матрицы включают, но не ограничиваются этим, полиметилметакрилат, полибутилметакрилат, пластифицированный или непластифицированный поливинилхлорид, пластифицированный найлон, пластифицированный полиэтилентерефталат, природный каучук, полиизопрен, полиизобутилен, полибутадиен, полиэтилен, этилен-винилацетатные сополимеры, силиконовые каучуки, полидиметилсилоксаны, силикон-карбонатные сополимеры, гидрофильные полимеры, такие как гидрогели сложных эфиров акриловой и метакриловой кислоты, коллаген, поперечно сшитый поливиниловый спирт и поперечно сшитый частично гидролизованный поливинилацетат.

Подходящие внешние полимерные мембраны включают, но не ограничиваются этим, полиэтилен, полипропилен, этилен/пропиленовые сополимеры, этилен/этилакрилатные сополимеры, этилен/винилацетатные сополимеры, силиконовые каучуки, полидиметилсилоксаны, неопреновый каучук, хлорированный полиэтилен, поливинилхлорид, сополимеры винилхлорида с винилацетатом, винилиденхлоридом, этиленом и пропиленом, ионосодержащие полиэтилентерефталат, бутилкаучук, эпихлоргидриновые каучуки, сополимер этилена/винилового спирта, терполимер этилена/винилацетата/винилового спирта и сополимер этилена/винилоксиэтанола.

5.4.4. Размер частиц.

В настоящем изобретении обеспечиваются формы соединения 1, имеющие средневзвешенный средний диаметр D(4,3) от около 2 до около 12 мм. Также в настоящем изобретении обеспечиваются формы соединения 1, имеющие определенные по величине поверхности средний диаметр D(3,2) от около 1 до около 3 мм. Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются формы соединения 1, имеющие D₉₀ размер частиц в диапазоне от около 5 до около 26 мм, имеющие D₉₀ размер частиц в диапазоне от около 1 до около 6 мм, имеющие D₉₀ размер частиц в диапазоне от около 0,1 до около 1,5 мм.

5.4.5. Наборы.

Фармацевтические композиции, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут быть представлены в виде готового продукта с использованием упаковочных материалов, хорошо известных специалистам в данной области. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают, но не ограничиваются этим, блистерные упаковки, флаконы, тюбики, ингаляторы, помповые дозирующие устройства, пакеты, флаконы, контейнеры, шприцы, капельницы и любой упаковочный материал, подходящий для данной композиции и предполагаемого способа введения и обработки.

В настоящем изобретении обеспечиваются наборы, которые при использовании медицинским работником могут упрощать введение подходящих количеств активного ингредиента субъекту. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения набор, обеспечиваемый в настоящем изобретении, включает контейнер и лекарственную форму фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения набор включает контейнер, включающий лекарственную форму фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, в контейнере, включающем одно или несколько других терапевтических средств, описанных в настоящей заявке.

- 22 032779

Наборы, представленные в настоящей заявке, могут дополнительно включать устройства, которые используют для введения активного ингредиента. Примеры таких устройств включают, но не ограничиваются этим, шприцы, безыгольчатые шприцы, капельницы, пластыри, пипетки для закапывания в глаз и ингаляторы.

Наборы, обеспечиваемые в настоящем изобретении, могут дополнительно включать фармацевтически приемлемые носители, которые можно использовать для введения активного ингредиента. Например, если активный ингредиент представлен в твердой форме, которую нужно реструктурировать для парентерального введения, набор может включать герметичный контейнер с подходящим носителем, в котором активный ингредиент можно растворить для образования не содержащего твердые частицы стерильного раствора, который является подходящим для парентерального введения, или можно реструктурировать в виде суспензии для перорального введения. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают, но не ограничиваются этим: водные носители, включая, но не ограничиваясь этим, воду для инъекций USP, раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, раствор декстрозы для инъекций, раствор декстрозы и хлорида натрия инъекций и содержащий лактат раствор Рингера для инъекций; смешиваемые с водой носители, включая, но не ограничиваясь этим, этиловый спирт, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль; и неводные носители, включая, но не ограничиваясь этим, кукурузное масло, масло семян хлопчатника, арахисовое масло, кунжутное масло, этилолеат, изопропилмиристат и бензилбензоат.

5.5. Способы применения.

В настоящем изобретении обеспечиваются способы лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при заболевании, облегчаемом путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенс-опосредованного распада мРНК, включающие введение пациенту с заболеванием, облегчаемым путем модуляции преждевременной терминации трансляции или нонсенсопосредованного распада мРНК, эффективного количества фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются способы для лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при заболевании, которое связано с нонсенс-мутацией, включающие введение пациенту с заболеванием, связанным с нонсенс-мутацией, эффективного количества фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются способы лечения заболевания, профилактики заболевания или оказания помощи при заболевании, которое связано с преждевременным стопкодоном, включающие введение пациенту с заболеванием, связанным с преждевременным стопкодоном, эффективного количества фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении обеспечиваются способы лечения, профилактики или оказания помощи при любом заболевании, которое связано с геном, демонстрирующим преждевременную терминацию трансляции и/или нонсенс-опосредованный распад мРНК. В одном варианте осуществления настоящего изобретения заболевание это происходит, частью, отсутствия экспрессии гена из-за преждевременного стоп-кодона. Примеры генов, которые могут демонстрировать преждевременную терминацию трансляции и/или нонсенс-опосредованный распад мРНК, и заболеваний, связанных с преждевременной терминацией трансляции и/или нонсенс-опосредованным распадом мРНК, можно найти в патентной заявке США № 60/390747, раскрытие которой включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении обеспечиваются способы пренатального лечения, профилактики или оказания помощи при заболевании, которое связано с нонсенсмутацией в гене эмбриона или плода, который имеет или предрасположен или подвержен заболеванию, связанному с нонсенс-мутацией в гене, такому как заболевания, описанные в настоящей заявке. В одном варианте осуществления настоящего изобретения беременной женщине вводят фармацевтическую композицию, представленную в настоящей заявке, при этом активный ингредиент проникает через плаценту беременной женщины в эмбрион или плод. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящей заявке, вводят перорально или парентерально беременной женщине.

Глазные заболевания или расстройства, связанные с преждевременной терминацией трансляции и/или нонсенс-опосредованным распадом мРНК или облегчаемые их супрессией, включают, но не ограничиваются этим, следующие: аниридия, хороидеремия, колобома-ренальный синдром, врожденный амавроз Лебера, пигментная дегенерация сетчатки, синдром Барде-Бидля или синдром Ушера.

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечиваются способы для продукции в организме субъекта (такого как человек), нуждающегося в этом, эффективного количества функционального белка (белков) с прочитанным терминатором, кодируемого нуклеиновокислотной последовательностью, вклю

- 23 032779 чающей нонсенс-мутацию, которые включают введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества соли 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке. В конкретном варианте осуществления нуклеиновокислотная последовательность представляет собой ген, связанный с глазным состоянием. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глазное состояние представляет собой аниридию, хороидеремию, колобома-ренальный синдром, врожденный амавроз Лебера, пигментную дегенерацию сетчатки, синдром Барде-Бидля, глаукому, фовеальную гипоплазию, катаракты, синдром Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальную дегенерацию, врожденное помутнение хрусталика, повышенное внутриглазное давление, экссудативную васкулярную ретинопатию, глаукому, гипоплазию радужной оболочки, кератопатию (дегенерация роговицы), гипоплазию зрительного нерва, отслоение сетчатки, вторичное косоглазие или сосудистую оболочку хрусталика. Еще в одном конкретном варианте осуществления глазное состояние представляет собой синдром Ушера типа 2А. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеиновокислотная последовательность представляет собой РАХ6 ген, REP1 ген, CHD7 ген, РАХ2 ген или BBS2 ген. Продукцию функционального белка (белков) прочитанным терминатором можно определить при помощи in vitro анализа и/или в животной модели. Например, соединения, которые подавляют преждевременную терминацию трансляции и/или нонсенс-опосредованный распад мРНК, можно определить с использованием методов, известных специалистам в данной области (см., например, публикацию США № 2005/0233327, опубликованную 20 октября 2005 г., озаглавленную Methods for Identifying Small Molecules that Modulate Premature Translation Termination and Nonsense Mediated mRNA Decay; патент США № 6458538, озаглавленный Methods of Assaying for Compounds that Inhibit Premature Translation Termination and Nonsense Mediated RNA Decay; публикацию США № 2003/0008317, опубликованную 9 января 2003 г., озаглавленную Methods of Assaying for Compounds that Inhibit Premature Translation Termination and Nonsense Mediated RNA Decay; и публикацию международной заявки № WO 2004/010106, озаглавленной Methods of Assaying for Compounds that Inhibit Premature Translation Termination and Nonsense Mediated RNA Decay, каждая из которых включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. В частности, клеточные и бесклеточные анализы можно использовать для идентификации соединения, которое подавляет преждевременную терминацию трансляции и/или нонсенс-опосредованный распад мРНК.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевания, которые можно лечить, осуществлять их профилактику или оказывать помощь способами, представленными в настоящей заявке, включают глазные состояния, связанные с нонсенс-мутацией в гене(генах), при этом такие способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, или эффективного количества соли 3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке. В конкретном варианте осуществления глазное состояние, связанное с нонсенс-мутацией в гене(генах), представляет собой аниридию, хороидеремию, колобома-ренальный синдром, врожденный амавроз Лебера, пигментную дегенерацию сетчатки, синдром Барде-Бидля, глаукому, фовеальную гипоплазию, катаракты, синдром Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальную дегенерацию, врожденное помутнение хрусталика, повышенное внутриглазное давление, экссудативную васкулярную ретинопатию, глаукому, гипоплазию радужной оболочки, кератопатию (дегенерация роговицы), гипоплазию зрительного нерва, отслоение сетчатки, вторичное косоглазие или сосудистую оболочку хрусталика. Еще в одном конкретном варианте осуществления глазное состояние, связанное с нонсенсмутацией в гене(генах), представляет собой синдром Ушера типа 2А.

В конкретном варианте осуществления глазное состояние, профилактику которого можно осуществлять и/или которое можно лечить в соответствии с этими способами, представляет собой глазное состояние, связанное с нонсенс-мутацией (мутациями). Примеры глазных состояний, профилактику которых можно осуществлять и/или которые можно лечить в соответствии с этими способами, включают аниридию, хороидеремию, колобома-ренальный синдром, врожденный амавроз Лебера, пигментную дегенерацию сетчатки, синдром Барде-Бидля, глаукому, фовеальную гипоплазию, катаракты, синдром Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальную дегенерацию, врожденное помутнение хрусталика, повышенное внутриглазное давление, экссудативную васкулярную ретинопатию, глаукому, гипоплазию радужной оболочки, кератопатию (дегенерацию роговицы), гипоплазию зрительного нерва, отслоение сетчатки, вторичное косоглазие и сосудистую оболочку хрусталика. В конкретном варианте осуществления синдром Ушера представляет собой синдром Ушера типа 2А.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевание, которое можно лечить, осуществлять его профилактику или оказывать помощь способами, описанными в настоящей заявке, представляет собой аниридию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию или активное вещество, описанные в настоящей заявке, используют в комбинации с другой терапией для лечения аниридии. В конкретном варианте осуществления терапия, используемая в дополнение к фармацевтической композиции или активному веществу, описанным в настоящей заявке, представляет собой миотическое средство, бета-блокатор, симпатомиметическое средст

- 24 032779 во, ингибитор карбоангидразы или аналог простагландина. В конкретном варианте осуществления лечение аниридии с использованием фармацевтической композиции или активного вещества, описанных в настоящей заявке, в результате дает один, два или более из следующих эффектов: (i) уменьшает или облегчает тяжесть аниридии; (ii) отсрочивает начало проявления аниридии; (iii) ингибирует прогрессирование аниридии; (iv) снижает необходимость в госпитализации субъекта; (v) уменьшает продолжительность срока госпитализации для субъекта; (vi) улучшает качество жизни субъекта; (vii) уменьшает количество симптомов, связанных с аниридией; (viii) уменьшает или облегчает тяжесть симптома (симптомов), связанного с аниридией; (ix) уменьшает длительность симптома, связанного с аниридией; (х) предотвращает рецидив симптома, связанного с аниридией; (xi) ингибирует развитие или начало проявления симптома аниридии и/или (xii) ингибирует прогрессирование симптома, связанного с аниридией. Симптомы аниридии включают альбинизм, эктопию хрусталика, спонтанную дислокацию хрусталика, юношескую роговичную дугу, кератоконус; катаракты, глаукому, нистагм, косоглазие, гипоплазию зрительного нерва, слепоту, помутнение роговицы, ухудшение зрения и отсутствие или частичное отсутствие радужной оболочки. Животная модель, полезная для определения эффективности средства для лечения аниридии, связанной с нонсенс-мутацией, описана в Hill R., et al., 1991, Mouse Small eye results from mutations in a paired-like homeobox-containing gene, Nature 354(6354):522-525 и Gregory-Evans C., et al., Postnata manipulation of Рахб dosage reverses congenital tissue malformation defects, J. Clin. Invest. Doi:10.1172/JCI70462, которые оба включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения аниридия представляет собой наследственную аниридию. В другом варианте осуществления настоящего изобретения аниридия представляет собой спорадическую аниридию.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения аниридия представляет собой симптом, связанный с WAGR (опухоль Вильмса-аниридия-аномалии половых органов-ретардация) синдромом или синдромом Джиллеспи.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевание, которое можно лечить, осуществлять его профилактику или оказывать помощь способами, описанными в настоящей заявке, представляет собой хороидеремию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию или активное вещество, описанные в настоящей заявке, используют в комбинации с другой терапией для лечения хороидеремии. В конкретном варианте осуществления лечение хороидеремии с использованием фармацевтической композиции или активного вещества, описанных в настоящей заявке, в результате дает один, два или более из следующих эффектов: (i) уменьшает или облегчает тяжесть хороидеремии; (ii) отсрочивает начало проявления хороидеремии; (iii) ингибирует прогрессирование хороидеремии; (iv) снижает необходимость в госпитализации субъекта; (v) уменьшает продолжительность срока госпитализации для субъекта; (vi) улучшает качество жизни субъекта; (vii) уменьшает количество симптомов, связанных с хороидеремией; (viii) уменьшает или облегчает тяжесть симптома (симптомов), связанного с хороидеремией; (ix) уменьшает длительность симптома, связанного с хороидеремией; (х) предотвращает рецидив симптома, связанного с хороидеремией; (xi) ингибирует развитие или начало проявления симптома хороидеремии и/или (xii) ингибирует прогрессирование симптома, связанного с хороидеремией. Симптомы хороидеремии включают ночную слепоту, потерю периферического зрения и потерю центрального зрения.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевание, которое можно лечить, осуществлять его профилактику или оказывать помощь способами, описанными в настоящей заявке, представляет собой колобома-ренальный синдром. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию или активное вещество, описанные в настоящей заявке, используют в комбинации с другой терапией для лечения колобома-ренального синдрома. В конкретном варианте осуществления лечение колобома-ренального синдрома с использованием фармацевтической композиции или активного вещества, описанных в настоящей заявке, в результате дает один, два или более из следующих эффектов: (i) уменьшает или облегчает тяжесть колобома-ренального синдрома; (ii) отсрочивает начало проявления колобома-ренального синдрома; (iii) ингибирует прогрессирование колобома-ренального синдрома; (iv) снижает необходимость в госпитализации субъекта; (v) уменьшает продолжительность срока госпитализации для субъекта; (vi) улучшает качество жизни субъекта; (vii) уменьшает количество симптомов, связанных с колобома-ренальным синдромом; (viii) уменьшает или облегчает тяжесть симптома(симптомов), связанного с колобома-ренальным синдромом; (ix) уменьшает длительность симптома, связанного с хороидеремией; (х) предотвращает рецидив симптома, связанного с колобома-ренальным синдромом; (xi) ингибирует развитие или начало проявления симптома хороидеремии и/или (xii) ингибирует прогрессирование симптома, связанного с колобома-ренальным синдромом. Симптомы, связанные с колобома-ренальным синдромом, включают дисплазию зрительного нерва, стафилому склеры, утончение сетчатки, миопию и разрывы зрительного нерва.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевание, которое можно лечить, осуществлять его профилактику или оказывать помощь способами, описанными в настоящей заявке, представляет собой пигментную дегенерацию сетчатки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию или активное вещество, описанные в настоящей

- 25 032779 заявке, используют в комбинации с другой терапией для лечения пигментной дегенерации сетчатки. В конкретном варианте осуществления лечение пигментной дегенерации сетчатки с использованием фармацевтической композиции или активного вещества, описанных в настоящей заявке, в результате дает один, два или более из следующих эффектов: (i) уменьшает или облегчает тяжесть пигментной дегенерации сетчатки; (ii) отсрочивает начало проявления пигментной дегенерации сетчатки; (iii) ингибирует прогрессирование пигментной дегенерации сетчатки; (iv) улучшает качество жизни субъекта; (v) уменьшает количество симптомов, связанных с пигментной дегенерацией сетчатки; (vi) уменьшает или облегчает тяжесть симптома (симптомов), связанного с пигментной дегенерацией сетчатки; (vii) уменьшает длительность симптома, связанного с пигментной дегенерацией сетчатки; (viii) предотвращает рецидив симптома, связанного с пигментной дегенерацией сетчатки; (ix) ингибирует развитие или начало проявления симптома пигментной дегенерации сетчатки и/или (х) ингибирует прогрессирование симптома, связанного с пигментной дегенерацией сетчатки. Симптомы, связанные с пигментной дегенерацией сетчатки, включают дистрофию палочек сетчатки, потерю ночного зрения, туннельное зрение и слепоту.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевание, которое можно лечить, осуществлять его профилактику или оказывать помощь способами, описанными в настоящей заявке, представляет собой синдром Барде-Бидля. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию или активное вещество, описанные в настоящей заявке, используют в комбинации с другой терапией для лечения синдрома Барде-Бидля. В конкретном варианте осуществления лечение синдрома Барде-Бидля с использованием фармацевтической композиции или активного вещества, описанных в настоящей заявке, в результате дает один, два или более из следующих эффектов: (i) уменьшает или облегчает тяжесть синдрома Барде-Бидля; (ii) отсрочивает начало проявления синдрома Барде-Бидля; (iii) ингибирует прогрессирование синдрома Барде-Бидля; (iv) улучшает качество жизни субъекта; (v) уменьшает количество симптомов, связанных с синдромом Барде-Бидля; (vi) уменьшает или облегчает тяжесть симптома (симптомов), связанного с пигментной дегенерацией сетчатки; (vii) уменьшает длительность симптома, связанного с синдромом Барде-Бидля; (viii) предотвращает рецидив симптома, связанного с синдромом Барде-Бидля; (ix) ингибирует развитие или начало проявления симптома синдрома Барде-Бидля и/или (х) ингибирует прогрессирование симптома, связанного с синдромом Барде-Бидля. Симптомы, связанные с синдромом Барде-Бидля, включают дистрофию палочек и колбочек сетчатки, ухудшение зрения и ночную слепоту.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения заболевание, которое можно лечить, осуществлять его профилактику или оказывать помощь способами, описанными в настоящей заявке, представляет собой синдром Ушера. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию или активное вещество, описанные в настоящей заявке, используют в комбинации с другой терапией для лечения синдрома Ушера. В конкретном варианте осуществления лечение синдрома Ушера с использованием фармацевтической композиции или активного вещества, описанных в настоящей заявке, в результате дает один, два или более из следующих эффектов: (i) уменьшает или облегчает тяжесть синдрома Ушера; (ii) отсрочивает начало проявления синдрома Ушера; (iii) ингибирует прогрессирование синдрома Ушера; (iv) улучшает качество жизни субъекта; (v) уменьшает количество симптомов, связанных с синдромом Ушера; (vi) уменьшает или облегчает тяжесть симптома (симптомов), связанного с синдромом Ушера; (vii) уменьшает длительность симптома, связанного с синдромом Ушера; (viii) предотвращает рецидив симптома, связанного с синдромом Ушера; (ix) ингибирует развитие или начало проявления симптома синдрома Ушера и/или (х) ингибирует прогрессирование симптома, связанного с синдромом Ушера. Симптомы, связанные с синдромом Ушера, включают ухудшение ночного зрения. В конкретном варианте осуществления синдром Ушера представляет собой синдром Ушера типа 2А.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способы, представленные в настоящей заявке, включают пренатальное системное введение фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке, или соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленной в настоящей заявке, в трех дозах в течение 24-часового периода в соответствии с формулой: 1X, 1X, 2Х, где X представляет собой конкретную начальную дозу (например, 4, 7, 10 или 20 мг/кг) активного вещества. В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию, представленную в настоящей заявке, или соль 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленную в настоящей заявке, непрерывно вводят три раза в течение 24-часового периода при дозах от около 2 до около 6 мг/кг (например, 4 мг/кг), от около 2 до около 6 мг/кг (например, 4 мг/кг) и от около 6 до около 10 мг/кг (например, 8 мг/кг) активного вещества в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет. Еще в одном конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию, представленную в настоящей заявке, или соль 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленную в настоящей заявке, непрерывно вводят три раза в течение 24-часового периода при дозах от около 5 до около 9 мг/кг (например, 7 мг/кг), от около 5 до около 9 мг/кг (например, 7 мг/кг) и от 12 до около 16 мг/кг (например, 14 мг/кг) активного вещества в течение нескольких недель, месяцев или лет. В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию, представленную в настоящей заявке, или соль 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представлен- 26 032779 ную в настоящей заявке, непрерывно вводят три раза в течение 24-часового периода при дозах от около 8 до около 12 мг/кг (например, 10 мг/кг), от около 8 до около 12 мг/кг (например, 10 мг/кг) и от около 18 до около 22 мг/кг (например, 20 мг/кг) активного вещества в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет. В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию, представленную в настоящей заявке, или соль 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты, представленную в настоящей заявке, непрерывно вводят три раза в течение 24-часового периода при дозах от около 18 до около 22 мг/кг (например, 20 мг/кг), от около 18 до около 22 мг/кг (например, 20 мг/кг) и от около 38 до около 42 мг/кг (например, 40 мг/кг) активного вещества в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет. Предпочтительно, чтобы в течение каждого 24-часового периода введения активное вещество вводили три раза приблизительно с 6- и 12-час интервалами (например, в ~7:00 ч утра после завтрака, ~1:00 ч дня после обеда и ~7:00 ч вечера после ужина). Непрерывную пренатальную терапию предпочтительно используют для лечения, профилактики или оказания помощи при глазном заболевании.

В конкретном варианте осуществления способы, представленные в настоящей заявке, включают поддержание концентрации соединения 1 в плазме больше чем около 0,1, около 0,5, около 2, около 5, около 10, около 20, около 25, около 40, около 50, около 100, около 150, около 200, около 250 или около 500 мг/мл у пациента в течение по меньшей мере около 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 6, 8, 12 или 24 ч или дольше. Уровни соединения 1 в плазме можно измерить, например, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

В другом варианте осуществления настоящего изобретения способы, представленные в настоящей заявке, включают поддержание концентрации в плазме соединения 1 от около 0,1 до около 500 мг/мл, от около 2 до около 40 мг/мл, от около 2 до около 20 мг/мл, от около 2 до около 10 мг/мл или от около 10 до около 20 мг/мл у пациента в течение по меньшей мере около 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 6, 8, 12 или 24 ч или дольше.

Должно быть понятно, что количество фармацевтической композиции или активного вещества, вводимое пациенту, нуждающемуся в этом, зависит от или может быть рассчитано на основании действительной массы тела конкретного пациента или средней массы тела популяции соответствующих пациентов (например, мужчин белой расы, женщин белой расы, мужчин афроамериканцев, женщин афроамериканок, мужчин желтой расы, женщин желтой расы, включая взрослых и детей).

Примеры

Следующие примеры представлены для иллюстрации, а не для ограничения. Следующие аббревиатуры используют в описаниях и примерах

Аббревиатура

2-РгОН

ACN

DCM

ДСП

ЕМА

EtOAc

EtOH

FaSSIF

FeSSIF

Фурье-Раман

HCl

ВЭЖХ

NaOH

SIF

TBME

ЯМР

RH/r.h.

ТГФ

PXRD

Значение

2-пропанол ацетонитрил дихлорметан

Динамическая сорбция паров элементный анализ этилацетат этанол

Имитация кишечного сока натощак

Имитация кишечного сока после еды

Рамановская спектроскопия с Фурьепреобразованием гидрохлорид

Высокоэффективная жидкостная хроматография гидроксид натрия

Имитация кишечного сока трет-бутил метиловоый эфир Ядерный магнитный резонанс Относительная влажность тетрагидрофуран

Порошковый рентгено-структурный анализ

6.1. Солеобразующие/ко-кристаллобразующие вещества.

На основании растворимости, pKa и химической структуры соединения 1, солеобразующие/кокристаллобразующие вещества, перечисленные ниже в табл. 1, были совместно выбраны для получения соли.

- 27 032779

Таблица 1

Солеобразующие/ко-кристаллобразующие вещества

Солеобразующие/кокристаллобразующие	Аббр.	Источник	Формула	Мол.масса (г/моль )
L-аргинин	ARG	Fluka	C6H14N4O2	174,2
гистидин	HIS	Fluka	c6h9n3o2	155,16
L-лизин	LYS	Fluka	c6h14n2o2	146, 19
метоксид магния	Мд	Fluka	C2H6MgO2	86, 38
гидроксид калия	К	Fluka	KOH	56, 11
трометамин	TRO	ABCR	NaOH	40

6.2. Общая характеризация выбранных солей/ко-кристаллов

Таблица 2

Характеризация выбранных солей/ко-кристаллов (термин соль # относится к образованию первой или второй соли указанного типа)

Соль #	Растворимость в воде11	Гигроскопич- ность21	Кристаллич- ность31	Образование гидрата	Примечания
Калия 1	57	+7,81 (гигроскопичная)	+	возможно (ЕМА, ДСП)	моно-соль
Натрия 1	22	+19,52 (очень гигроскопичная)	++	возможно (ЕМА, ДСП4))	моно-соль
Трометана 1	18	+3,59 (гигроскопичная)	+++	недоказательно	недоказа- тельно
L лизина 1	15	+1,15 (слегка гигроскопичная)	+++	не обнаружено	моно-соль
Магния 2	0,44	+13,10 (гигроскопичная)	++	Возможно (ЕМА, ДСП)	полусоль

¹⁾ - значения, представленные в мг/мл;

²⁾ - изменение массы в мас.% в диапазоне 0^85% r.h.;

³⁾ - кристалличность, определенная методом PXRD: +++ - высокая, ++ - хорошая, + - низкая;

⁴⁾ - явный признак некоторых гидратов.

6.3. Эксперименты с использованием выпаривания.

Исходные растворы свободной кислоты и каждого солеобразующего/ко-кристаллообразующего вещества получали в выбранных растворителях (см. табл. 3, где концентрация указана в моль/л, и термин N/A указывает, что этот конкретный исходный раствор не был получен). Исходные растворы каждого из L-аргинина, L-гистидина, L-лизина, гидроксида калия и гидроксида натрия, сольватированного в воде, также получали до концентрации 0,050 моль/л.

Кристаллизацию осуществляли путем выпаривания растворителей под потоком N₂ (~0,4 л/мин) при комнатной температуре. Полученные твердые вещества исследовали визкально и методом рамановской спектроскопии.

Таблица 3

Форма	Ацетон	EtOH	ТГФ	МеОН	МеОН/СН2С12
Соед. 1 свободная кислота	0, 050	0, 004	0,050	N/A	0,011
метоксид магния	0, 050	0, 050	0,050	0, 050	N/A
трометамин	0, 050	0, 050	0,050	0, 050	N/A

6.4. Эксперимент с использованием суспендирования.

Вторую группу растворителей выбирали для экспериментов фазового равновесия (суспендирования). 0,05 мл растворителя добавляли к остаткам от экспериментов выпаривания. MTP's встряхивали при комнатной температуре на термомиксере для пробирок Эппендорфа в течение трех дней. Растворители удаляли под потоком N₂ (~0,4 л/мин; 2 дня) при комнатной температуре. Полученные твердые вещества исследовали визуально и методом рамановской спектроскопии.

6.5. Эксперименты кристаллизации.

Если не указано иное, все эксперименты, описанные в табл. 4, осуществляли в лабораторных условиях окружающей среды. Использовали растворители аналитической степени чистоты Fluka, Aldrich или ABCR. Все растворители (за исключением воды) сушили над молекулярными ситами с размером пор 3 или 4 А перед использованием.

- 28 032779

Методы испытаний

Метод	Проведенные аналитические испытания
1	Raman; Фурье-Раман; PXRD; 1Н-ЯМР (DMSO-d6)
2	Фурье-Раман; PXRD; ^-ЯМР (DMSO-d6)
3	Фурье-Раман; PXRD; ^-ЯМР (DMSO-d6) ; ДСП; Водорастворимость
4	Фурье-Раман; PXRD; ^-ЯМР (D2O/CD3CN)
5	Фурье-Раман; PXRD; 1Н-ЯМР (D2O) ; ДСП; Водорастворимость
6	Фурье-Раман; PXRD
7	Фурье-Раман

Таблица 4

Подробное описание экспериментов кристаллизации

Форма	Метод	Описание и результаты испытания
Соединение 1 (Форма А) Соединение 1 (Форма А) Магниевая соль 1	1 6	Соединение 1 (2 г) Результаты: Раман: соответствует свободной кислоте; Фурье-Раман: соответствует свободной кислоте; PXRD: соответствует Соединению 1 (Форма А); 1Н-ЯМР: соответствует свободной кислоте Соединение 1 (154,6 мг) растворяли в 1:3 (об/об) MeOH/DCM (16 мл); добавляли магния-метоксид (МдМо) (754 мкл, 0,7 моль/л); затем растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: Фурье-Раман: соответствует магниевая соли 1; PXRD: соответствует аморфной форме
Соединение 1 (Форма А) Калиевая соль 1	3	Соединение 1 (152,1 мг) растворяли в ТГФ (5 мл); добавляли водный раствор гидроксида калия (1,06 мл, 0,5 моль/л); затем растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: Фурье-Раман: соответствует калиевой соли 1; PXRD: частично кристаллическая форма; 1Н-ЯМР: соответствует Форме А, кислотный Н не обнаружен; ДСП: гигроскопичный образец, образование гидрата; Водорастворимость: 57,00 мг/мл, pH 9,2
Соединение 1 (Форма А) Калиевая соль 2	6	Калиевую соль 1 (28,5 мг) суспендировали в воде (0,2 мл) и обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем встряхивали при 25°С и центрифугировали при 500 об/мин в течение 20 часов; к полученной вязкой суспензии добавляли воду (0,05 мл); смесь встряхивали при 25°С и центрифугировали при 500 об/мин в течение 4 часов; затем фильтровали через 0,1 мм PVDF центрифужное фильтровальное устройство (25°С, 15000 об/мин, 5 мин) Результаты: Фурье-Раман: соответствует калиевой соли 1; PXRD: соответствует

- 29 032779

		образцу калиевой соли 1
Соединение 1 (Форма А) Натриевая соль 1	3	Соединение 1 (153,1 мг) растворяли в EtOH (40 мл); добавляли водный раствор гидроксида натрия (5,3 мл, 0,1 моль/л); затем растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: Фурье-Раман: соответствует натриевой соли 1; определение водорастворимости показывает спектр, соответствующий пост-ДСП натриевой соли 1, соответствует новой форме или смеси обеих форм; PXRD: кристаллический образец; 1Н-ЯМР: соответствует Форме А, кислотный Н не обнаружен; ДСП: гигроскопичный образец, образование гидрата; Водорастворимость: 22,22 мг/мл, pH 8,3
Соединение 1 (Форма А) Натриевая соль 2	6	Натриевую соль 1 (20,2 мг) суспендировали в воде (0,2 мл); смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем встряхивали при 25°С и центрифугировали при 500 об/мин в течение 1 дня; продукт фильтровали через 0,1 мкм PVDF центрифужное фильтровальное устройство (25°С, 15000 об/мин, 5 мин) Результаты: Фурье-Раман: показывает либо новую форму либо смесь форм; PXRD: кристаллический образец
Соединение 1 (Форма А) Трометаминовая соль 1	3	Соединение 1 (154,5 мг) растворяли в ацетоне (40 мл); добавляли трометамин (67,5 мг) и смесь растворяли в МеОН (4 мл); затем растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин)
		Результаты: Фурье-Раман: соответствует трометаминовой соли 4; водорастворимость спектр показывает примеси; пост-ДСП спектр показывает дополнительные примеси; PXRD: кристаллический образец; 1Н-ЯМР: соответствует Форме А и TRO с примесями; ДСП: гигроскопичный образец; Водорастворимость
Соединение 1 (Форма А) Трометаминовая соль 2	6	Трометаминовую соль 1 (20,3 мг) суспендировали в воде (0,2 мл); смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем встряхивали при 25°С и центрифугировали при 500 об/мин в течение 1 дня; продукт фильтровали через 0,1 мкм PVDF центрифужное фильтровальное устройство (25°С, 15000 об/мин, 5 мин) Результаты: Фурье-Раман: соответствует трометаминовой соли 1 с меньшими примесями; PXRD: соответствует трометаминовой соли 1 с другой ориентацией
Соединение 1 (Форма A) Lлизиновая соль 1	5	Соединение 1 (143,4 мг) растворяли в ТГФ (5 мл); добавляли L-лизин (LYS) (71,3 мг), растворенный в воде (1 мл); растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин)
Соединение 1 (Форма A) Lлизиноввя соль 2	6	L-лизиновую соль 1 (8,8 мг) суспендировали в воде (0,1 мл); смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем встряхивали при 25°С и центрифугировали при 500 об/мин в течение 1 дня; продукт фильтровали

- 30 032779

		через 0,1 мм PVDF центрифужное фильтровальное устройство (25°С, 15000 об/мин, 5 мин)
Соединение 1 (Форма А) Магниевая соль 2 Соединение 1 (Форма А) Магниевая соль 3 Соединение 1 (Форма А) Трометаминовая соль 3	3 6 7	Соединение 1 (150,7 мг) растворяли в ТГФ (5 мл); добавляли водный раствор гидроксида магния (32,1 мг, 0,7 моль/л); растворитель частично выпаривали под потоком азота (80 мл/мин); полученный осадок сушили в вакууме Результаты: Фурье-Раман: спектры соответствуют магниевой соли 1; PXRD: кристаллическая форма; 1Н-ЯМР: соответствует Соединению 1 Форме А, имеющей гигроскопичную гидратированную форму Магниевую соль 2 (33,1 мг) суспендировали в воде (0,1 мл); смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем встряхивали при 25°С и центрифугировали при 500 об/мин в течение 20 часов; полученный продукт представлял собой вязкую суспензию; добавляли воду (0,05 мл); и смесь встряхивали при 25°С, центрифугировали при 500 об/мин в течение 4 часов; затем фильтровали через 0,1 мкм PVDF центрифужное фильтровальное устройство (25°С, 15000 об/мин, 5 мин) Результаты: Фурье-Раман: спектры соответствует магниевой соли 2; PXRD: соответствует магниевой соли 2 Соединение 1 (150,6 мг) растворяли в ацетоне (30 мл); добавляли трометамин (62,7 мг), растворенный в воде (2 мл); растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: Фурье-Раман: соответствует не-стехиометрической смеси трометамина, Соединения 1 и трометаминовой соли Соединения 1
Соединение 1 (Форма А) Магниевая соль 4	6	Соединение 1 (148,1 мг) растворяли в ТГФ (5 мл); добавляли водный раствор гидроксида магния (31,1 мг), растворенного в воде (3 мл), с образованием белого осадка при перемешивании; растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: PXRD: кристаллическая Форма; подобная магниевой соли 2 с дополнительные отражениями; ФурьеРаман: спектры подобные магниевой соли 2 с дополнительные полосами
Соединение 1 (Форма А) Трометаминовая соль 4	6	Соединение 1 (151,6 мг) растворяли в ТГФ (5 мл); добавляли трометамин (63,0 мг), растворенный в МеОН (5 мл); растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: PXRD: подобно нестехиометрической смеси трометамина, Соединения 1 и трометаминовой соли Соединения 1 с отсутствием некоторых отражений; Фурье-Раман: соответствует не-стехиометрической смеси трометамина, Соединения 1 и трометаминовой соли Соединения 1
Соединение 1 (Форма А)	6	Соединение 1 (155,2 мг) растворяли в ацетоне (40 мл); добавляли трометамин

- 31 032779

Трометаминовая соль 5		(63,1 мг), растворенный в МеОН (5 мл); растворитель выпаривали под потоком азота (80 мл/мин) Результаты: PXRD: соответствует нестехиометрической смеси трометамина, Соединения 1 и трометаминовой соли Соединения 1; Фурье-Раман: соответствует не-стехиометрической смеси трометамина, Соединения 1 и трометаминовой соли Соединения 1
Соединение 1 (Форма A) Lаргининовая соль	4	Соединение 1 (149,1 мг) суспендировали в EtOH (20 мл); смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем добавляли L-аргинин (ARG) (93,5 мг), растворенный в воде (2 мл) с получением прозрачного раствора; растворитель выпаривали до половины объема под потоком азота (80 мл/мин); полученный твердый остаток отделяли от оставшегося растворителя Результаты: Фурье-Раман: соответствует L-аргининовой соли 1; PXRD: кристаллическая форма; 1Н-ЯМР: соответствует Соединению 1 и Lаргининовой соли
Соединение 1 (Форма A) Lгистидиновая соль 1 Соединение 1 (Форма A) Lгистидиновая соль 2 Соединение 1 (Форма A) Lгистидиновая соль 3	6 7 7	Соединение 1 (150,0 мг) суспендировали в EtOH (20 мл); смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем добавляли L-гистидин (HIS) (82,0 мг), растворенный в воде (4 мл) с получением суспензии; объем растворителя уменьшали под потоком азота (80 мл/мин); полученный продукт фильтровали через 0,45 мкм PVDF центрифужное фильтровальное устройство Результаты: Фурье-Раман: образец суспендировали в 2-РгОН (1 мл), смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; затем перемешивали в течение 5 дней; нагревали до 70°С в течение 1 часа и медленно охлаждали до комнатной температуры, полученный спектр соответствует L-гистидиновой соли 1; PXRD: кристаллическая форма, имеющая спектры, соответствующие смеси Соединения 1 и L-гистидина Соединение 1 (156,3 мг) растворяли в ТГФ (5 мл); добавляли L-гистидин (HIS) (86,7 мг), растворенный в воде (4 мл), с получением мутного раствора; смесь обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; перемешивали в течение 5 дней; затем фильтровали через 0,2 мкм PTFE центрифужное фильтровальное устройство Результаты: Фурье-Раман: спектры соответствует L-гистидину со следовыми количествами Соединения 1 Соединение 1 (155,4 мг) суспендировали в MeOH (1 мл); добавляли L-гистидин (86,7 мг), суспендированный в воде (2 мл), с получением мутного раствора; раствор обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; перемешивали в течение 5 дней; затем фильтровали через 0,2 мкм PTFE центрифужное фильтровальное устройство; суспензию нагревали до 70°С в течение 1 часа, затем медленно охлаждали до комнатной температуры;

- 32 032779

		Результаты: Фурье-Раман: спектры соответствует Соединению 1 и Lгистидину
Соединение 1 (Форма A) Lгистидиновая соль 4	7	Соединение 1 (151,6 мг) суспендировали в EtOH (4 мл); добавляли L-гистидин (81,3 мг), суспендированный в воде (2 мл), с получением мутного раствор; раствор обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; перемешивали в течение 5 дней; затем фильтровали через 0,2 мкм PTFE центрифужное фильтровальное устройство; суспензию нагревали до 70°С в течение 1 часа, затем медленно охлаждали до комнатной температуры; Результаты: Фурье-Раман: спектры соответствует Соединению 1 и Lгистидину
Соединение 1 (Форма A) Lгистидиновая соль 5	7	Соединение 1 (151,8 мг) суспендировали в MeCN (3 мл); добавляли L-гистидин (84,5 мг), суспендированный в воде (2 мл), с получением мутного раствора; раствор обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин; перемешивали в течение 5 дней; затем фильтровали через 0,2 мкм PTFE центрифужное фильтровальное устройство; суспензию нагревали до 70°С в течение 1 часа, затем медленно охлаждали до комнатной температуры; Результаты: Фурье-Раман: соответствует Соединению 1 и L-гистидину

6.6. Эксперимент в увеличенном масштабе.

6.6.1. Магниевая соль 1 и 2 (Mg).

В экспериментах в увеличенном масштабе были обнаружены кристаллическая и аморфная формы.

Магниевую соль 1 получали путем выпаривания из МеОН/CH2Cl2. Рамановский спектр показан на фиг. 1: PXRD показывает аморфную форму (см. фиг. 2).

Магниевую соль 2 получали путем осаждения из ТГФ/Н₂О. Рамановский спектр показывает полосы спектра, подобные аморфной форме магниевой соли 1 (см. фиг. 1). Порошковая рентгеновская дифрактограмма на фиг. 2 показывает кристаллическую форму. ¹Н-ЯМР-анализ подтвердил химическую целостность образца.

6.6.2. Калиевая соль 1 (K).

Калиевую соль 1 получали путем выпаривания из ТГФ/Н₂О. Рамановский спектр показан на фиг. 3. Порошковая рентгеновская дифрактограмма на фиг. 4 показывает частично кристаллический образец. ^!Н-ЯМР-анализ подтвердил химическую целостность образца.

6.6.3. Натриевая соль 1 (Na).

Натриевую соль 1 получали путем выпаривания из EtOH/H₂O. Воспроизведен рамановский спектр соли натрия 1 (см. фиг. 5). Порошковая рентгеновская дифрактограмма на фиг. 6 показывает кристаллическую соль. ^!Н-ЯМР-анализ подтвердил химическую целостность образца.

6.6.4. Трометаминовая соль 1 (TRO).

Трометаминовую соль 1 получали путем выпаривания из ацетона/МеОН. Рамановский спектр показан на фиг. 7. Порошковая рентгеновская дифрактограмма на фиг. 8 показывает кристаллическую форму. ^!Н-ЯМР-анализ подтвердил химическую целостность соединения 1 в форме свободной кислоты в присутствии трометамина, метанола и следов неизвестных примесей, например продуктов разложения (фиг. 9). При том, что образец содержит соединение 1 (Ή-ЯМР), трометамин не присутствовал в стехиометрическом 1:1 соотношении в присутствии дополнительных компонентов (соединение 1/0,5 TRO/0,5 MeOH/0,5 Н₂О). Результаты анализа ДСП показали 3%-ную общую потерю массы в испытываемом образце (фиг. 19), что указывает на потерю метанола или образование гидрата при высокой относительной влажности, таким образом, приводя к общей потере массы 4% (с потерей метанола) или 2% (с потерей метанола и заменой водой) соответственно.

Корреляция пиков для трометаминовой соли методами рамановской спектроскопии и Ή-ЯМР была неоднозначной, потенциальное взаимодействие с соединением 1 показало небольшие сдвиги полос/пиков по сравнению с чистым контролем. Контрольные рамановский и ^!Н-ЯМР-спектры трометамина и метанола показывают полосы/пики в том же диапазоне. Таким образом, наблюдаемые положения полос/пиков могут указывать на образование соли/ко-кристалла с трометамином или образование сольвата с метанолом. Отнесение смещенных полос/пиков к тем или другим видам было невозможно.

- 33 032779

Сдвиги полос наблюдали в рамановских спектрах. Некоторые характеристистические полосы трометамина появляются в том же волновом диапазоне; однако в соли или сольвате эти полосы смещены.

Подобным образом, в ¹Н-ЯМР-спектре наблюдали сдвиги пиков с характеристическими пиками трометамина, расположенными в том же диапазоне, что и метанол.

Фиг. 10 показывает порошковые рентгеновские дифрактограммы всех образцов, полученных из свободной кислоты и трометамина. Все образцы имеют множество отражениями, которые являются общими для них, одно или другое отсутствует в одном или нескольких образцах. Сильные колебания интенсивности отражений в одном и том же 20 положении наблюдаются между разными образцами. В случае, когда все образцы представляют собой одинаковое фаза-чистое вещество, это должно указывать на сильные эффекты предпочтительной ориентации. Более вероятно, что это происходит из-за двух или более форм в разном смешиваемом соотношении. Однако эффекты предпочтительной ориентации могут осложнять ситуацию.

6.6.5. L-лизиновая соль 1 (LYS).

L-лизиновую соль 1 продуктивно получали путем выпаривания из ТГФ/Н₂О. Рамановский спектр показан на фиг. 11. Порошковая рентгеновская дифрактограмма на фиг. 12 показывает кристаллическую соль. ¹Н-ЯМР-анализ подтвердил химическую целостность образца.

6.6.6. L-аргининовая соль (ARG).

L-аргининовую соль 1 продуктивно получали путем выпаривания из EtOH/H₂O. Рамановский спектр показан на фиг. 13. Порошковая рентгеновская дифрактограмма на фиг. 14 показывает кристаллическую соль. ¹Н-ЯМР-анализ подтвердил химическую целостность образца.

6.6.7. L-гистидиновая соль 1 (HIS).

L-гистидиновую соль 1 получали путем выпаривания из ТГФ/Н₂О. Рамановский спектр аналогичен контрольному спектру, полученному в Quick-Screen (см. фиг. 15). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, представленная на фиг. 16, показывает смесь формы А соединения 1 и L-гистидина.

6.7. Характеризация калиевой, натриевой, магниевой, L-лизиновой и трометаминовой солей.

6.7.1. Рамановская спектроскопия с Фурье-преобразованием, порошковый рентгено-структурный анализ и ¹Н-ЯМР.

Характеризацию калиевой, натриевой, магниевой, L-лизиновой и трометаминовой солей осуществляли при помощи Рамановской спектроскопии с Фурье-преобразованием, порошкового рентгеноструктурного анализа и ¹Н-ЯМР (см. раздел 6.10). Образование соли, кристалличность и химическая целостность были подтверждены. Фурье-Раман спектры солей сравнивали с измеренными после ДСП и определения водорастворимости в разделе 6,9. Также сравнивали порошковые рентгеновские дифрактограммы образцов в том виде, как они были получены и остатков после уравновешивания в воде.

6.7.2. Элементный анализ.

Как правило, элементный анализ выбранных образцов соответствует молекулярной формуле образцов. Для L-лизиновой соли 1 ЕМА подтвердил присутствие моносоли (стехиометрия 1:1, солеобразующее/ко-кристаллообразующее вещество:свободная кислота). В случае калиевой соли наблюдали дегидрат моносоли в анализе ЕМА. Это согласуется данными ДСП. Для натриевой соли 1 ЕМА показал образование гидрата 1,5 воды на моносоль. Это больше, чем предполагали на основании данных ДСП, которые показывали отсутствие воды в исходном веществе. Для магниевой соли 2 ЕМА показал, что был получен тетрагидрат полусоли (0,5:1, солеобразующее вещество:свободная кислота) вместо моносоли.

Для трометаминовой соли 1 точную стехиометрию нельзя было определить. Ясно, что образец содержит соединение 1 (¹Н-ЯМР), трометамин не присутствуют в стехиометрии 1:1, и другие компоненты возможно присутствуют: Соединение 1/0,5 TRO/0,5 MeOH/0,5 Н₂О. Результаты ДСП анализа с наблюдаемой общей потерей массы 3% согласуются с рассчитанным образцом.

Таблица 4

Элементный анализ калиевой соли 1

найдено	С	Н	N	О	F	К
	50,20	3,40	7, 81	22,41	5, 17	11, 0
рассчитано	50,42	3, 10	7, 84	22,39	5, 32	10, 94

Формула: C₁₅H₉FN₂O₂ K 2 Н₂О

Таблица 5

Элементный анализ соли натрия 1

	С	Н	N	О	F	К
найдено	54, 69	3,26	8,48	20, 83	5, 69	6, 60
рассчитано	54,14	3, 18	8,42	21, 64	5,71	6, 91

Формула: C₁₅H₉FN₂O₂ Na 1,5 Н₂О

- 34 032779

Таблица 6

Элементный анализ трометаминовой соли 1

	С	Н	N	0	F
найдено	58,15	4,82	9,46	21,40	5,16
рассчитано Ci5H9FN2O2 MeOH Н2О	57, 66	4,23	8,41	24,00	5,70
рассчитано Ci5H9FN2O2 C4HHNO3	56,29	4,97	10,37	23, 68	4, 69
рассчитано Ci5H9FN2O2 0,5 TRO 0,5 MeOH 0,5 Н2О	56, 91	4, 64	9,48	23, 82	5, 14

Соединение 1: Ci₅H₉FN₂O₂.

Трометамин: C₄HhNO₃.

Таблица 7

Элементный анализ L-лизиновой соли 1

	С	Н	N	0	F
найдено	57,28	4, 95	11, 9	19, 75	4, 62
рассчитано	58, 60	5, 39	13,02	18,58	4,41

Формула: соединение 1: C₁₅H₉FN₂O₂ L-лизин: C₆H₁₄N₂O₂

Таблица 8

Элементный анализ соли магния 2

	С	Н	N	0	F	Мд
найдено	48,18	4,03	7,25	29, 13	5, 04	3, 85
рассчитанная соль	49, 44	3, 60	7, 69	30, 73	5,21	3,33

Формула: C₁₅H₉FN₂O₂ 0,5 Mg 4 Н₂О.

6.8. ДСП.

ДСП-измерения (относительная влажность 50^0^95^50%) осуществляли на образцах калиевой соли 1, натриевой соли 1, трометаминовой соли 1, L-лизиновой соли и магниевой соли 2.

На фиг. 17 ДСП калиевой соли показывает потерю массы ~6 мас.% по мере того, как влажность снижалась до 0% относительной влажности (равновесие не достигалось), с последующим непрерывном поглощением воды от 0 до 35% относительной влажности с восстановлением исходной массы. Выделение воды ~5 мас.% может соответствовать потере одной стехиометрической воды. По мере дальнейшего увеличения влажности до 80% относительной влажности происходило медленное поглощение большего количества воды (изменение массы ~1,5 мас.%), и от 80 до 95% относительной влажности наблюдали быстрое поглощение воды примерно 3 мас.% (достижение равновесия). При снижении относительной влажности снова содержание воды снижалось и оставалось при несколько более высоком значении (~1 мас.%), чем исходная масса. Характер изменения около 0% относительной влажности сильно указывает на присутствие несольватированной или десольватированной формы гидрата.

На фиг. 18 анализ ДСП соли натрия показывает поглощение воды примерно ступенчатым образом, что говорит об образовании различных гидратов. При уменьшении влажности от 50 до 0% относительной влажности и снова увеличения до 50% относительной влажности образец показывает обратимую потерю массы и набор массы 2 мас.%. На одной стадии наблюдали поглощение воды приблизительно 10 мас.% (образование дегидрата) при относительной влажности от 50 до 62%. На второй стадия продолжалось поглощение воды (~6 мас.% соответствует образованию тригидрата) по мере увеличения влажности до 80% относительной влажности (равновесие не достигалось). Поглощение воды продолжалось до общего количества 20мас.% (соответствует образованию тетрагидрата) при 95% относительной влажности. При уменьшении относительной влажности до 50% содержание воды снижалось и оставалось при ~16 мас.% выше исходной массы (14 мас.% будет соответствовать тригидрату), но равновесие не достигалось в этом эксперименте. Рамановские спектры с Фурье-преобразованием получали до и после ДСП измерений. Спектры ясно показывают преобразование образца натриевой соли в новую форму.

Исследование соли методом Рамановской спектроскопии с Фурье-преобразованием после ДСП измерений подтвердило, что образец был преобразован в новую форму.

На фиг. 19 ДСП трометаминовой соли показывает отсутствие существенных изменений массы по мере уменьшения влажности до 0% относительной влажности и затем увеличения до 80% относительной влажности. При относительной влажности от 80 до 95% образец поглощает ~25 мас.% (достижение равновесия) обратимым образом. Ниже 70% относительной влажности наблюдали дальнейшую потерю массы до значения 3 мас.% ниже исходной массы.

На фиг. 20 ДСП L-лизиновой соли показывает почти обратимое поглощение и выделение воды. Поглощение воды происходило по мере увеличения влажности до 95%-ной относительной влажности (~2 мас.% изменение массы, достижение равновесия). При уменьшении относительной влажности снова содержание воды снижалось и возвращалось почти до исходной массы.

На фиг. 21 ДСП магниевой соли показывает почти обратимое поглощение и выделение воды. При

- 35 032779 уменьшении влажности от 50 до 0% относительной влажности и снова увеличения до 50% относительной влажности образец показывает обратимое изменение массы ~13 мас.% (равновесие не достигалось). При более высокой влажности никакого существенного изменения массы не было обнаружено. Наблюдаемое изменение массы согласуется с ЕМА результатами, соответствующими тетрагидрату полусоли Mgo,5/соединение 1/4 H₂O.

6.9. Определение водорастворимости.

Каждую соль суспендировали в воде и встряхивали в течение 24 ч при 25°C и 500 об./мин. Полученные суспензии фильтровали (0,1 мм фильтр). Полученные твердые остатки анализировали методом Рамановской спектроскопии с Фурье-преобразованием. Измеряли pH фильтрата, и определяли концентрацию свободной кислоты при помощи ВЭЖХ. Значения представлены в табл. 10. Растворимость магниевой соли 2 является поразительно низкой. Соль осаждали из растворов в стехиометрии 1:1 магний:свободная кислота. Результат ЕМА соответствует полусоли со стехиометрией 0,5:1, магний:свободная кислота.

Рамановские спектры с Фурье-преобразованием, полученные на образцах сразу после их приготовления и после определения водорастворимости, показаны на фиг. 22-26. В Фурье-Раман спектрах, измеренных на солях L-лизина и трометамина, никаких новых форм не наблюдали. Фурье-Раман спектры, измеренные на калиевой соли, показывают небольшие сдвиги полос, что говорит о поглощении воды. Небольшие сдвиги полос и следы гидроксида магния наблюдали в спектрах соли магния. Спектры, измеренные на натриевой соли, показывают разные формы.

Порошковые рентгеновские дифрактограммы, полученные на образцах сразу после их приготовления и после определения водорастворимости, показаны на фиг. 27-31. Порошковые рентгеновские дифрактограммы, измеренные на калиевой и магниевой соли, не показывают никаких новых форм. Порошковая рентгеновская дифрактограмма L-лизиновой соли показывает ту же форму, но после обработки в воде отражения более сильные и резкие, и дифрактограмма показывает другую ориентацию образца. Порошковые рентгеновские дифрактограммы соли натрия показывают отличающиеся формы, соответствующие Рамановским спектрам.

Таблица 9

Водорастворимость калиевой, натриевой, трометаминовой,

L-лизиновой и магниевой солей

Образец	Растворимость (мг/мл)	pH	Фурье-Раман	PXRD
Калиевая соль 1	57	9, 2	так же форма	небольшие сдвиги полос
Натриевая соль 1	22	8,3	отличающие- ся формы	отличающиеся формы
Трометаминовая соль 1	18	8,1	неясная ситуация	неясная ситуация
L-лизиновая соль 1	15	7,7	так же форма	так же форма
Магниевая соль 2	0,44	9, 1	так же форма	так же форма

6.10. Оборудование и типичные условия измерений

Стабилизированным диодный лазер с 785 нм возбуждением, NIR-усиленная термоэлектрическиохлаждаемая CCD камера в качестве детектора.

Измерения осуществляли с использованием 2Ох объектива с длинным фокусным расстоянием.

Диапазон измерений 2000-100 см¹.

Bruker RFS100.

разрешение.

Bruker D8; Излучение меди Ка,

LynxEye детектор, 0,025 2Θ, размер шага, время шага.

Подготовка образца: Образцы, как правило, измеряли без какои-либо специальной обработки, за исключениеи приложения небольшого давления для получения плоской поверхности. Типы образцов с монокристаллическим

а) стантартныи держатель для кремнием:

полиморфизма, глубина 0,1 мм, скрининга требуется меньше чем 20 мг образца; Ь) глубина мм диаметр полости для с.

мг. Все образцы, измеряемые на Bruker D8, поворачивали во время измерения.

1,0 мм глубина, мм диаметр полости для с. 80

- 36 032779

дсп ЯМР ЕМА Определение растворимости

Projekt Messtechnik SPS ll-100n анализатор сорбции водяных паров для нескольких образцов. Образец выдерживали при 50% относительной влажности для уравновешивания перед началом предварительно определенной программы влажности. Программа: относительная влажность 50% -у относительная влажность 0% -у относительная влажность 96% - относительная влажность 50%, Аотносительной влажности=5%/час Гигроскопичность классифицировали в соответствии с Европейской Фармакопеей: очень гигроскопичный: увеличение массы >15% гигроскопичный: увеличение массы меньше чем 15% и равно или больше чем 2% слегка гигроскопичный: увеличение массы меньше чем 2% и равно или больше чем 0,2% негигроскопичный: увеличение массы меньше чем 0,2% сильно гигроскопичный: поглощает количество воды, достаточное для образования жидкости 1Н-ЯМР спектры регистрировали при 300,13 мГц на устройстве Bruker DPX300. Элементный анализ F осуществляли при помощи фторид-чувствительного электрода после предварительного разложение по Вурцшмиту и адсорбции в водном растворе. Элементный анализ осуществляли для С, Н и N методом сухого сжигания с использованием либо Leco CHN 800 либо Leco CHNS 932 устройства. Элементный анализ 0 осуществляли методом пиролиза с использованием Leco RO-478 устройства. Элементный анализ К, Na и Мд осуществляли методом атомной абсорбционной спектрометрии. Суспензию перемешивали с использованием Thermomixer comfort с контролируемой температурой от Eppendorf при 500 об/мин (24 часа, 25°С). Фильтровали с использованием центрифужного фильтровального устройства UFC30WNB от Millipore (0,1мкм) и Centrifuge Hettich ЕВА 12 R (lOOOOg).

ВЭЖХ

Оборудование TSP HPLC (UV3000, AS3000, P4000, SCM1000 программа, версия 4.1) Колонка Waters, Xterra MS C18 4,6x100 мм, 5мкм (CC01) Подвижная фаза А дистиллированная H2O+0,1% TFA Подвижная фаза В ACN+0,1% TFA Контроль ~0,04 мг/мл Концентрация Время удерживания 5,8 мин Градиент 0,0 мин 55% А/45% В 10,0 мин 55% А/45% В Скорость потока 1,0 мл/мин Объем вводимой пробы 10 мкл Длина волны 241 нм

6.11. Сравнительное испытание равновесной растворимости микронизированного и немикронизированного соединения 1.

Цель.

Целью этого испытания была оценка растворимости микронизированного и немикронизированного соединения 1. Испытание растворимости осуществляли в двух репрезентативных средах: pH 1 (0,1 N раствор HCl с 0,5% лаурилсульфата натрия) и pH 7,4 (0,1 М фосфатно-солевой буферный раствор). В эксперименте также сравнивали начальную скорость растворения и равновесную растворимость микронизированного и немикронизированного соединения 1 в течение определенного периода времени.

Эксперимент.

Используемые в эксперименте вещества включали: 1) микронизированное соединение 1; 2) немикронизированное соединение 1; 3) уксусная кислота, ледяная; 4) триэтиламин; 5) ацетонитрил, чистота для ВЭЖХ; 6) 10 мл шприц и 7) 0,45 мкм PTFE фильтровальные шприцы.

- 37 032779

Среды, используемые для испытания растворимости, включали: 1) среда с pH 1,0, включающая 0,1 N раствор хлористоводородной кислоты (HCl) с 0,5% лаурилсульфата натрия (SLS); и 2) среда с pH 7,4, включающая 0,1 М фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).

Оборудование для испытания растворимости включало: 1) Waters 2795 Separations Module; 2) Axiovert 200 Microscope и 3) аналитические весы.

ВЭЖХ условия, используемые для испытания растворимости, представлены в табл. 11 и 12. Таблица 10

ВЭЖХ условия, используемые для испытания растворимости

Колонка	Sunfire С18 4,6x50 мм
Температура колонки	40°С
Подвижная фаза А	0,3% раствор уксусной кислоты с 0,1% триэтиламина; pH 4,5, доведенный при помощи 10% (об/об) NH4OH
Подвижная фаза В	Ацетонитрил
Скорость потока	1,5 мл/мин
Объем вводимой пробы	10 мкл
Детекция	УФ 254 нм
Время эксперимента	15 минут
Градиент	~3,22 мин

Таблица 11

ВЭЖХ градиент, используемый для испытания растворимости

Время (мин)	% Подвижная фаза А	% Подвижная фаза В
0	70	30
10	30	70
15	70	30

Процедура измерения растворимости включала следующие стадии:

1) отвешивание и смешивание приблизительно 100 мг микронизированного соединения 1 и 100 мл 0,1 N раствора HCl с 0,5% SLS в сосуде янтарного цвета 1; 2) отвешивание и смешивание приблизительно 100 мг микронизированного соединения 1 и 100 мл PBS в сосуде янтарного цвета 2; 3) отвешивание и смешивание приблизительно 100 мг немикронизированного соединения 1 и 100 мл 0,1 N раствора HCl с 0,5% SLS в сосуде янтарного цвета 3; 4) отвешивание и смешивание приблизительно 100 мг немикронизированного соединения 1 и 100 мл PBS в сосуде янтарного цвета 4; 5) смешивание всех образцов в их соответствующих сосудах янтарного цвета с использованием многофункционального вращающего устройства в течение 2 ч; 4) отбор проб в точках времени 5, 10, 30, 60, 90, 120 мин; 5) фильтрование образцов и 6) анализ фильтратов с использованием ВЭЖХ. Для каждой точки времени брали пробу 10 мл с использованием 10-мл шприца с присоединенным к игле фильтром и с использованием 0,45 мкм PTFE шприцевого фильтра. Первые 9 мл собранных образцов помещали обратно в исходный сосуд и затем оставшийся 1 мл переносили в ВЭЖХ сосуд для анализа.

Результаты испытания растворимости для микронизированного и немикронизированного соединения 1 представлены в табл. 13. Фиг. 32 и 33 графически представляют профили растворимости микронизированного и немикронизированного соединения 1 в 0,l N растворе HCl с 0,5% SLS и PBS соответст венно.

Таблица 12

Данные растворимости: время vs, концентрации для микронизированного и немикронизированного соединения 1

Время (Минуты)	Концентрация Соединения 1 в 0,lN HCl+0,5% SLS (мкг/мл)	Концентрация Соединения 1 в PBS (мкг/мл)
	Микронизи- рованное	Немикронизи- рованное	Микронизи- рованное	Немикронизи- рованное
5 10 30 60 90 120	6, 85 6,81 6, 83 7,04 6,88 7,18	6,24 6, 38 6, 87 6, 99 6, 97 7,04	189,13 191,45 197,59 199,95 200,29 203,08	141,89 152,59 176,92 185,18 194,06 196,54

Микронизированные и немикронизированные партии соединения 1 наблюдали и анализировали под микроскопом для оценки средней длины и средней ширины частиц. Как часть процесса, 5 разных образцов каждого типа соединения 1 анализировали под Axiovert 200 микроскопом с использованием программы, называемой IPLab 3.7, и осуществляли измерения размера частиц. Результаты анализа представлены в табл. 14. Фиг. 34 и 35 представляют изображения в поляризованном свете немикронизированного и микронизированного образцов соединения 1.

- 38 032779

Выводы.

Кинетическое явление наблюдали в обеих pH средах в ранних точках времени. В pH 1 среде была небольшая разница в кинетической растворимости для микронизированного и немикронизированного соединения 1; тогда как в pH 7,4 разница существенно увеличивалась.

В обеих средах растворимость соединения 1 достигала одинакового значения. В pH 1 среде равновесие достигалось приблизительно в точке времени 30 мин. В pH 7,4 среде равновесная растворимость достигалось приблизительно в точке времени 2 ч.

В pH 7,4 среде разница в кинетической растворимости была существенной, и это говорит о том, что малые частицы действительно имеют существенное влияние на повышение растворимости лекарственного средства, представляющего собой соединение 1.

6.12. Определение растворимости для твердых лекарственных форм соединения 1 в искусственном кишечном соке, полученных с немикронизированным соединением 1.

Цель.

Определение растворимости лекарственного препарата порошок во флаконе (PIB) соединения 1, полученного с немикронизированным соединением 1 в имитации кишечного сока натощак и после еды при комнатной температуре.

Краткое описание.

Препарат порошок во флаконе (фаза 1 PIB препарата), полученный с немикронизированным соединением 1, показал результаты растворимости, подобные композиции, полученной путем измельчения соединения 1 на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором. PIB препарат фазы 1, полученный с использованием немикронизированного соединения 1, имел растворимость в искусственном кишечном соке натощак (FaSSIF, pH 6,7) 62 мкг/мл и растворимость в искусственном кишечном соке после еды (FeSSIF pH 5,0) 11 мкг/мл при комнатной температуре.

Справочная информация.

Композиции фазы 1 и фазы 2b твердых лекарственных форм соединения 1 представлены в табл. 15. Обе эти композиции представляют собой твердые порошки, подлежащие реструктурированию в суспензию. Препарат в фазе 1 представляет собой простой PIB препарат в виде сухой смеси, полученной с немикронизированным соединением 1. Препарат в фазе 2b (соединение 1 в виде гранул) получали с использованием процесса вальцевания и с использованием соединения 1, измельченного на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором. Оба препарата показали быстрое in-vitro растворение в pH 7,4 фосфатном буфере.

- 39 032779

Таблица 14

Композиции фазы 1 и фазы 2b препарата соединения 1

Ингредиент	Роль ингредиента	% масс/масс
Фаза 1 (PIB сухая смесь)	Фаза 2Ь (гранулы)
Соединение 1	Активный фармацевтический ингредиент	28,70	25, 00
Полидекстроза	Наполнитель, способствует формированию структуры	52,40	25, 65
Полиэтиленгликоль 3350	Суспендирующий агент, агент регулирования вязкости	14,70	10, 00
Полоксамер 407	Поверхностноактивное вещество, смачивающее вещество	4,20	3, 70
Маннит	Подсластитель, улучшает вкусовые качества, способствует прессованию	-	26,40
Гидроксиэтилцеллюлоза	Суспендирующий агент	-	1,50
Искусственная ванильная отдушка	Отдушка	-	0, 75
Кросповидон	Разрыхлитель	-	5, 00
Коллоидный диоксид кремния	Вещество, способствующее скольжению	-	1, 00
Стеарат магния	Смазывающее вещество	-	1, 00

Используемые в эксперименте вещества включали:

1) немикронизированное соединение 1;

2) микронизированное соединение 1;

3) соединение 1;

4) искусственный кишечный сок (SIF), порошок, полученный от ePhares;

5) Litesse® Ultra (полидекстроза FCC) от Danisco, Inc.;

6) Lutrol micro F127 Poloxamer 407, полученный от BASF, Inc.;

7) полиэтиленгликоль 3350, полученный от Dow Chemical Co.;

8) ацетонитрил (ACN) Optima степени чистоты, полученный от Fisher Scientific, Inc.;

9) ледяная уксусная кислота, полученная от Fisher Scientific, Inc.;

10) а-Фосфорная кислота, 85% (мас./мас.), полученная от Fisher Scientific, Inc.;

11) хлорид натрия, полученный от Fisher Scientific, Inc.;

12) гидрохлорид (HCl) (1 М), полученный от Fisher Scientific, Inc.;

13) гидроксид натрия пеллеты (NaOH), полученный от Fisher Scientific, Inc.;

14) гидроксид натрия (NaOH) (1M), полученный от Fisher Scientific, Inc.;

15) дигидрофосфат натрия моногидрат, полученный от Fisher Scientific, Inc. и

16) вода, Optima степени чистоты, полученная от Fisher Scientific, Inc.

Способ получения PIB препарата фазы 1 в лабораторном масштабе включал следующие стадии: 1) объединение 2,7 г соединения 1, 4,9 г полидекстрозы, 0,4 г полоксамера 407 и 1,4 г ПЭГ 3350 в 100-мл флаконе (см. табл. 14); 2), перемешивание смеси при 100 об с использованием Turbula блендера-миксера; 3) просеивание через сито 10 меш и 4) перемешивание при дополнительных 100 об.

Способ получения фосфатного буфера с pH 6,5 для FaSSIF включал следующие стадии: 1) растворение 0,042 г NaOH пеллет, 0,395 г NaH₂PO₄-H₂O и 0,619 г NaCl в 0,090 л очищенной воды; 2) доведение pH до 6,5 либо при помощи 1 N NaOH либо 1 N HCl, и 3) разбавление раствора до 0,100 л очищенной водой. Конечное значение pH было определено как 6,51.

- 40 032779

Способ получения FaSSIF буфера включал следующие стадии: 1) добавление 0,112 г SIF порошка к приблизительно 25 мл фосфатного буфера с pH 6,5 в 50-мл сосуд; 2) перемешивание вплоть до растворения SIF порошка; 3) разбавление раствора до 0,050 л буфером и 4) уравновешивание раствора в течение 2 ч, пока он не станет слегка опалесцентным.

Способ получения ацетатного буфера с pH 5 для FeSSIF включал следующие стадии: 1) растворение 0,404 г NaOH (пеллеты), 0,865 г ледяной уксусной кислоты, 1,187 г NaCl в 0,090 л очищенной воды;

2) доведение pH до 5,0 либо при помощи 1 N NaOH либо 1 N HCl, и 3) разбавление раствора до 0,100 л очищенной водой. Конечное значение pH было определено как 5,04.

Способ получения FeSSIF буфера включал следующие стадии: 1) добавление 0,560 г SIF порошка к приблизительно 25 мл ацетатного буфера с pH 5 в 50-мл сосуд; 2) перемешивание вплоть до растворения SIF порошка; 3) разбавление раствора до объема 0,050 л буфером; и 4) перемешивание вплоть до растворения SIF порошка. FeSSIF представлял собой прозрачный раствор.

Способ подготовки образца для определения растворимости включал следующие стадии: 1) добавление 12,2 мг соединения 1 в виде лекарственного продукта PIB фазы I к 6,5 мл каждого буфера для испытания, наблюдая при этом суспензии под микроскопом; 2) осторожное вращение суспензий с использованием вращающего устройства Barnstead Thermolyne Labquake Shaker при комнатной температуре; 3) определение pH через 24 ч путем наблюдения под микроскопом; 4) центрифугирование образцов в течение 10 мин при 1000 об/мин; 5) фильтрование 5 мл образца супернатанта с использованием нейлонового фильтра 0,2 11m Whatmann диаметром 13 мм; 6) отбрасывание первых 4 мл фильтрата как ненужные отходы и анализ конечного объема 1 мл фильтрата методом ВЭЖХ-УФ. Образцы получали в трех повторах и впрыскивали в систему дважды.

Оборудование включало:

1) весы Mettler Toledo Excellence Plus XP205DR Balance;

2) устройство для определения pH Denver Instruments Model 215;

3) pH зонд Denver Instruments Model 300729.1;

4) ультразвуковая ванна Branson 3510;

5) цифровой смеситель с горячей пластиной Chemglass 03.15606;

6) блендер-миксер Turbula;

7) встряхивающее вращательное устройство Barnstead Thermolyne Labquake Shaker rotisserie Model 415110 и

8) ВЭЖХ-УФ устройство, включающее а) разделительный модуль Waters 2795; b) детектор на фотодиодной матрице Waters 2996 и с) программу Empower™ Software© 2002 Waters Corp.

Способ получения подвижных фаз включал следующие стадии: 1) получение буфера путем добавления фосфорной кислоты (85% мас./мас.) к 1000 мл воды optima степени чистоты до достижения pH 2,10; 2) получение элюента В путем добавления такого же количества фосфорной кислоты к 1000 мл ацетонитрила и 3) получение элюента А путем смешивания 50 мл элюента В с 950 мл буфера.

Способ и устройство для ВЭЖХ описаны в табл. 16 и 17.

Таблица 15

Протокол валидации для ВЭЖХ анализа и соответствующих веществ для соединения 1

Колонка температура колонки температура образца Скорость потока Объем вводимой пробы	Waters Symmetry С-18 150x4,6 мм хЗ,5 -мкм частицы 25°С нагреватель не нужен 1,0 мл/мин 10,0 мкл
УФ детекция	230 нм
Время осуществления эксперимента	30 минут
Типичное время удерживания Соединения 1	~10 минут

Таблица 16

ВЭЖХ метод накачки

Время (мин)	Элюент А %	Элюент В %	Водный %	Органический
0, 0	95, 00	5, 00	90,25	9, 75
4,0	55, 00	45, 00	52,25	47,75
20, 0	0, 00	100, 0	0, 00	100,00
24,0	0, 00	100, 0	0, 00	100,00
25, 0	95, 00	5, 00	5, 00	95, 00
30, 0	95, 00	5, 00	5, 00	95, 00

Способ получения раствора для получения стандартных кривых включал следующие стадии: 1) до

- 41 032779 бавление точно взвешенных 10 мг соединения 1 в 100-мл волюметрический сосуд; 2) добавление 50-мл ацетонитрила; 3) обработка ультразвуком в течение 5 мин для растворения; 4) разбавление до объема волюметрического сосуда с использованием ацетонитрила; 5) использование волюметрических пипеток для разбавления исходного раствора в 10-мл волюметрических колбах и 6) разбавление раствора до объема волюметрических колб ацетонитрилом.

Метод ввода проб описан в табл.15.

Результаты.

PIB препарат фазы 1 получали либо с использованием немикронизированного соединения 1, либо микронизированного соединения 1, измельченного на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором, в лабораторном масштабе в РТС Therapeutics с использованием смесителя с низким усилием сдвига. Препарат фазы 2b был изготовлен в Pharmaceutical Manufacturing and Research Services в Horsham, PA с использованием соединения 1, измельченного на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором. Анализ для определения размера частиц соединения 1 осуществляли с использованием Malvern Mastersizer S в Micron Technologies Dudley, UK and Exton, PA. Информация о размере частиц для этих образцов соединения 1 представлена в табл. 18. PIB препарат фазы 1, который был получен с использованием немикронизированного соединения 1, имел растворимость в искусственном кишечном соке натощак (FaSSIF) 62 мкг/мл при pH 6,7 и растворимость в искусственном кишечном соке после еды (FeSSIF) 11 мкг/мл при pH 5,0 при комнатной температуре (табл. 19). FaSSIF среда обеспечивала маргинальное повышение растворимости по сравнению с растворимостью в только фосфатном буфере pH 6,7 (54 мкг/мл). Однако растворимость в FeSSIF была намного выше по сравнению с соответствующим контролем, pH 5 ацетатным буфером (0,8 мкг/мл).

Таблица 17

Размер частиц соединения 1

Соединение 1	Описание	Размер частиц
D50	D90
Образец 1	немикронизированное Соединение 1	4,6 мкм	20,8 мкм
Образец 2	Соединение 1, измельченное на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором	2,0 мкм	6,7 мкм
Образец 3	Соединение 1, измельченное на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором	2,2 мкм	6,2 мкм

- 42 032779

Таблица 18

Растворимость соединения 1, содержащегося в препаратах PIB фазы 1 и препаратах фазы 2b в искусственном кишечном соке при комнатной температуре

Среда для испытания растворимости	Растворимость Соединения 1* (Среднее значение +RSD)
Фаза 1 PIB препарат* немикронизированное Соединение 1 (п=6) **	Фаза 1 PIB препарат* микронизированное Соединение 1 (п=3)	Фаза 2Ь препарат* микронизированное Соединение 1 (п=3)
	62,1 мкг/мл	80,7 мкг/мл	84,8 мкг/мл
FaSSIF pH 6,5	±1,2	±1,2	±3,2
	pH 6, 7	pH 6,6	pH 6, 7
Фосфатный буфер pH 6,5	54,0 мкг/мл ±0, 8 pH 6,6	70,7 мкг/мл ±0, 9 pH 6,6	77,6 мкг/мл ±1,2 pH 6,7
	11,1 мкг/мл	9,6 мкг/мл	10,4 мкг/мл
FeSSIF pH 5,0	±0, 1	±0, 1	±0, 6
	pH 5, 0	pH 5, 1	pH 5, 1
Ацетатный буфер pH 5,0	0,8 мкг/мл ±0, 0 pH 5,0	BLOQ*** (—0,4 мкг/мл) pH 5,1	BLOQ (~0,5 мкг/мл) pH 5, 1

* - образцы, полученные в трех повторах, уравновешивали при комнатной температуре с вращением в течение 24 ч, фильтровали с использованием 0,2 мкм нейлоновых фильтров и инжектировали с использованием ВЭЖХ метода AS0283.00 на разделительном модуле Waters 2795 и с детектором Waters 2996;

** - получали в трех повторах и инжектировали два раза;

*** - нижний предел количественного определения, 5 мкг/мл;

Ί - лекарственный продукт, полученный в лабораторном масштабе в смесителе с низким сдвиговым усилием с использованием измельчения соединения 1 на фрикционной коллоидной мельнице с воздушным сепаратором;

- полученный клинический лекарственный продукт.

Выводы и обсуждение.

Препараты фазы 1 и фазы 2b соединения 1, полученные с микронизированным соединением 1, не показывают никакой разницы в растворимости в искусственном кишечном соке при комнатной температуре. Препараты фазы 1 соединения 1, полученные с микронизированным соединением 1, показывают маргинальное повышение растворимости для препаратов фазы 1, полученных с микронизированным соединением 1, в искусственном кишечном соке при pH 6,5 при комнатной температуре. Эти данные рас творимости согласуются с ранее полученными данными растворимости для микронизированного соединения 1, которые показали растворимость 30-100 мкг/мл лекарственного средства, включающего соединение 1, при pH около 6,5.

6.13. Офтальмологические композиции.

Табл. 20 представляет офтальмологическую композицию в виде раствора, включающего соединение 1 в комбинации с трометамин, используемым в качестве катионного модификатора.

Таблица 20

Ингредиент	Концентрация
Соединение 1	0,2%
Трометамин НС1	1,0%
Маннит	2,0%
Борная кислота	1,0%
Динатрий эдетат	0,025%
Бензалконий хлорид	0, 01%
NaOH/HCl (для доведения pH)	pH 7,2
Вода (для разбавления до нужного объема)	по необходимости

Табл. 21 представляет офтальмологическую композицию в виде раствора, включающего соединение 1 в комбинации с гистидином, используемым в качестве катионного модификатора.

- 43 032ТТ9

Таблица 21

Ингредиент	Концентрация
Соединение 1	0, 1%
Гистидин НС1	0,5%
Сорбит	3, 0%
Динатрий эдетат	0,025%
Бензалконий хлорид	0, 01%
NaOH/HCl (для доведения pH)	pH 6,5
Вода (для разбавления до нужного объема)	по необходимости

Табл. 22 представляет офтальмологическую композицию в виде раствора, включающего соединение 1 в комбинации с лизином, используемым в качестве катионного модификатора.

Таблица 22

Ингредиент	Концентрация
Соединение 1	0, 05%
Лизин НС1	0,5%
Маннит	4,0%
Динатрий эдетат	0,025%
Бензалконий хлорид	0, 01%
NaOH/HCl (для доведения pH)	pH 7,5
Вода (для разбавления до нужного объема)	по необходимости

Табл. 23 представляет офтальмологическую композицию в виде раствора, включающего соединение 1 в комбинации с DEAE-декстраном, используемым в качестве катионного модификатора.

Таблица 23

Ингредиент	Концентрация
Соединение 1	0,5%
DEAE-декстран	0,5%
Трегалоза	2,0%
Борная кислота	1,0%
Динатрий эдетат	0,025%
Бензалконий хлорид	0, 01%
NaOH/HCl (для доведения pH)	pH 7,2
Вода (для разбавления до нужного объема)	по необходимости

Табл. 24 представляет офтальмологическую композицию в виде раствора, включающего соединение 1 в комбинации с гидроксипропил β-циклодекстрином, используемым в качестве катионного модификатора.

Таблица 24

Ингредиент	Концентрация
Гидроксипропил β-иклодекстрин	10%
Соединение 1	0,5%
Трометамин НС1	0,5%
Маннит	2,0%
Декстран	1,0%
Борная кислота	1,0%
Динатрий эдетат	0,025%
Бензалконий хлорид	0, 01%
NaOH/HCl (для доведения pH)	pH 7,2
Вода (для разбавления до нужного объема)	по необходимости

6.14. In vivo анализы.

Два испытания осуществляли для оценки концентраций соединения 1/метаболитов в различных тканях, включая глаза, после введения разовой дозы радиоактивно-меченого соединения 1 (¹⁴C-3-[5-(2фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойная кислота) крысам Sprague Dawley и Long Evans.

Крысы Sprague Dawley.

Как часть исследования методом количественной авторадиографии всего тела (QWBA), 4 самцам и 4 самкам крыс Sprague Dawley (альбиносы), приобретенным у Charles River, вводили через желудочный зонд разовую дозу 50 мг/кг ¹⁴C-3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты.

Животных размещали по отдельности, и сертифицированный корм для грызунов и воду обеспечивали без ограничения. Животным давали акклиматизироваться в течение 8 дней до введения дозы.

- 44 032779

Осуществляли контроль окружающей среды в помещении для животных для поддержания температуры 18-26°C, относительной влажности 50±20% и цикла 12 ч света/12 ч темноты. 12-часовой темный цикл прерывали для приспособления к процедурам испытания. Животные голодали в течение ночи 4 ч после введения дозы в день введения дозы. В день введения дозы животные имели массу тела 204-260 г и имели возраст приблизительно 9-11 недель. Одно животное/одного пола/в одну точку времени умерщвляли передозировкой галотана в момент времени 1, 4, 24 и 72 ч после введения дозы, и тела собирали для анализа методом авторадиографии всего тела (WBA). Концентрации ¹⁴C-3-[5-(2-фторфенил)[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты в глазу и смежных тканях показаны в следующей таблице.

Таблица 25

Концентрации радиоактивности в глазах и смежных тканях, определенные методом авторадиографии всего тела при определенных точках времени после разового перорального введения ¹⁴C-3 -[5-(2-фторфенил)-[ 1,2,4]оксадиазол-3 -ил] бензойной кислоты (50 мг/кг) крысам Sprague Dawley (в мкг/г дозах)

Пол	Матрица	1 ч	2 ч	3 ч	4 ч
Самцы	Глаз	3,39	2,59	NS	NS
	Внеорбитальная слезная железа	21,1	27,5	NS	NS
	Железа мигательной перепонки	21, 6	22,3	NS	NS
	Интраорбитальная слезная железа	21,8	26, 0	NS	NS
Самки		1,41	BLQ	NS	NS
	Внеорбитальная слезная железа	10,3	3, 89	NS	NS
	Железа мигательной перепонки	18,7	8,26	NS	NS
	Интраорбитальная слезная железа	10,2	4,72	NS	NS

BLQ - ниже уровня количественного определения (<0,768 мкг в пересчете на ¹⁴C-3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту); NS - не определяли (образец не отличим от фона).

Крысы Long Evans.

В исследовании методом количественной авторадиографии всего тела (QWBA) 8 самцам крысы Long Evans (частично пигментированные), приобретенным у Harlan, вводили через желудочный зонд разовую дозу 50 мг/кг ^-соединения 1.

Животных размещали по отдельности, и сертифицированный корм для грызунов и воду обеспечивали без ограничения. Животным давали акклиматизироваться в течение 3 дней до введения дозы. Осуществляли контроль окружающей среды в помещении для животных для поддержания температуры 1826°C, относительной влажности 50±20% и цикла 12 ч света/12 ч темноты. При необходимости 12часовой темный цикл прерывали для приспособления к процедурам испытания. Животные голодали в течение ночи 4 ч после введения дозы в день введения дозы. В день введения дозы животные имели массу тела 160-178 г и имели возраст приблизительно 7 недель. Одно животное/в одну точку времени умерщвляли через обескровливание (сердечная пункция) под анестезией изофлураном в точках времени 0,5, 1,2,4, 8, 24, 72 и 168 ч после введения дозы. Концентрации ^-соединения 1 в глазу и смежных тканях показаны в табл. 26.

- 45 032779

Таблица 26 Концентрации радиоактивности в глазах и смежных тканях, определенные методом авторадиографии всего тела при определенных точках времени после разового перорального введения ¹⁴C-3 -[5 -(2-фторфенил)- [ 1,2,4]оксадиазол-3 -ил] бензойной кислоты (50 мг/кг) . крысам Long Evans (в мкг/г дозах) .

Матрица	0,5 ч	1 ч	2 ч	4 ч	8 ч	24 ч	72 ч	168 4
Глаз	4,59	1,78	3, 62	2, 69	2,08	BLQ	ND	ND
Глаз (хрусталик)	BLQ	BLQ	BLQ	BLQ	BLQ	BLQ	ND	ND
Внеорбитальная слезная железа	28,0	7,59	22,4	10,2	8,09	BLQ	BLQ	ND
Железа мигательной перепонки	46, 8	16, 0	38,2	18,1	13, 0	1,59	ND	ND
Интраорбиталь- ная слезная железа	28,8	10,3	25, 2	11,7	10,3	BLQ	ND	ND
Сосудистая оболочка глазного яблока	20, 6	10,4	18,1	6, 09	11, 6	BLQ	ND	ND

BLQ - ниже уровня количественного определения (<0,457 мкг в расчете на ¹⁴C-3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойную кислоту); ND - не обнаружен (образец не отличим от фона).

6.15. Мышиная модель аниридии с нонсенс-мутацией.

Соединение 1 ингибировало прогрессирование заболевания и исправляло порок развития в роговой оболочке, хрусталике и сетчатой оболочке глаза в мышиной модели аниридии (полудоминантная малая глазная модель (PAX6^Sey+/-)), разработанной Gregory-Evans и др., которая содержит природную нонсенсмутацию в РАХ6 гене мыши.

Соединение 1 вводили подкожно PAX6 мутантым и дикого типа мышам в течение 10 дней (постнатальные дни 4-14) или вводили местно в виде офтальмологической композиции в виде суспензии (0,9% хлорида натрия, 1% Tween 80, 1% порошкообразного соединения 1, 1% карбоксиметилцеллюлозы) два раза в день в течение 46 дней (постнатальные дни 14-60). До обработки мутантные глаза показывали утолщение роговой оболочки, появление хрусталикового стебелька, в котором недоразвитый хрусталик был связан с роговой оболочкой, и утолщение сетчатки с аномальным образованием складок у ресничного края (фиг. 36A). В необработанной группе мутантных мышей наблюдали прогрессирование образования складок сетчатки и аномально маленькие хрусталики. Обработка подкожно вводимым соединением 1 корректировала образование складок сетчатки и увеличивала размер хрусталика на 70% (фиг. 36A и 37А и В).

Дополнительные успешные результаты были достигнуты после местного введения соединения 1 непосредственно в глаз в виде офтальмологической композиции в виде суспензии (0,9% хлорида натрия, 1% Tween 80, 1% порошкообразного соединения 1, 1% карбоксиметилцеллюлозы). Дефекты хрусталика и сетчатки, наблюдаемые в необработанных глазах, были исправлены у мутантных мышей, которых обрабатывали соединением 1, и эти мыши были очень похожи на мышей дикого типа (фиг. 36B). Гистологическое исследование роговой оболочки показало уменьшение утолщения роговицы. Сетчатая оболочка глаза показала повышенный ответ на световую стимуляцию. Обработка соединением 1 вызывала повышение уровня РАХ6 белка на 90% в белковых лизатах роговичного и сетчаточного эпителия по сравнению с мышами дикого типа (фиг. 36C) согласно данным твердофазного иммуно-ферментного анализа (ELISA). Мышиная модель, имеющая мутацию сайта сплайсинга в РАХ6 (PAX6^Sey-1Neu), не демонстрировала ответ на лечение соединением 1, показывая, что соединение 1 является специфическим к нонсенсмутациям.

Для определения эффектов на остроту зрения у мышей измеряли ответ оптокинетического отслеживания, который представляет собой поведенческий ответ, опосредуемый через цепь сетчатка-головной мозг. Необработанные мутантные мыши показали ограниченные ответы отслеживания. Мыши, обработанные соединением 1, показали существенное улучшение порога разрешающей способности, который был схожим с тем, как у мышей дикого типа (фиг. 36D).

Было показано, что соединение 1 подавляет нонсенс-кодон в РАХ6, обеспечивая возможность синтеза полноразмерного РАХ6 белка и приводя к исправлению врожденных пороков развития глаза, связанных с заболеванием. Это показывает, что соединение 1 имеет потенциал стать многообещающим лечением аниридии.

6.16. Диагноз аниридии.

Аниридию диагностирую путем клинического исследования, включающего исследование с исполь

- 46 032779 зованием щелевой лампы, офтальмоскопию, флуоресцентную ангиографию радужной оболочки, оптическую когерентную томографию и высокочастотную ультразвуковую биомикроскопию. Обзор диагностических процедур представлен в табл. 27.

Таблица 27

Диагностические процедуры, используемые для идентификации глазных аномалий аниридии

Диагностическая процедура	Идентифицированные глазные аномалии
	Частичное или полное отсутствие
	радужной оболочки
Исследование с	Полупрозрачность или аномальная
использованием щелевой	архитектура радужной оболочки
лампы	Аномалии зрачка
	Помутнение и васкуляризации роговицы
	Катаракты и глаукома
Офтальмоскопия (с	Отсутствие или уменьшение номальной
использованием щелевой	фовеальной архитектуры (часто)
лампы или бинокулярная	Аномалии зрительного нерва (менее
обратная	часто)
офтальмоскопия)	Другие проблемы с сетчаткой (редко)
Флуоресцентная ангиография радужной оболочки	Слабовыраженная гипоплазия радужной оболочки
Оптическая когерентая	Фовеальная гипоплазия (трудно
томография (ОСТ)	осуществлять в присутствии нистагма)
ОСТ переднего отрезка	Раскрывает подробную анатомию
глаза	структур переднего отрезка глаза
Высокочастотная ультразвуковая биомикроскопия	Помутнение роговицы или тяжелый отек роговицы у младенцев
Высокочастотное
ультразвуковое	Гипоплазия и/или отсутствие радужной
исследование переднего	оболочки
отрезка глаза

Анализ секвенирования осуществляли для идентификации вызывающей заболевание мутации. PAX6 кодирующую область анализировали для определения делеции/дупликации и для определения РАХ6 экзонных делеций или целого гена. Проведенные генетические испытания представлены в табл. 28.

Таблица 28

Г енетические испытания для определения аниридии на основании фенотипа и семейной истории

Фенотип	Ген	Испытание	Выявленные мутации	Определение частоты мутаций по фенотипу и метод испытания
Семейная история
Положительная	Отрицательная
Выделен- ная аниридия	РАХ6	Анализ кодирующей области последовательности	Изменения последователь- ности	55%	62,5%
		Анализ делеций	Экзонные делеции и делеции контрольных областей	22%	17%
WAGR Синдром	РАХб и сцепленные гены	Высокоразрешающий цитогенетический анализ	Цитогенетичес- кая делеция 11р13	57%	NA
РАХб и WT1	FISH	Субмикроскопи- ческая делеция	14%	NA
Анализ делеций	Делеции целых генов	Неизвестно	NA

Должно быть понятно, что, хотя конкретные варианты осуществления изобретения были описаны в иллюстративных целей, изобретение, описанное в настоящей заявке, не следует ограничивать объемом

- 47 032779 конкретных вариантов осуществления, раскрытых в настоящей заявке. Эти варианты осуществления предназначены в качестве иллюстрации некоторых аспектов изобретения. Любые эквивалентные варианты осуществления предполагаются как охватываемые объемом настоящего изобретения. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые показаны и описаны в настоящей заявке, будут очевидны специалистам в данной области на основании представленного выше описания, и эти модификации также предполагаются как охватываемые объемом настоящего изобретения.

Claims (6)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Кристаллическая форма соли 3-[5-(2-фторфенил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]бензойной кислоты и Lлизина, которая имеет порошковую рентгеновскую дифрактограмму, по существу, как показано на фиг. 12.
2. 2. Способ лечения, предупреждения или оказания помощи при глазном заболевании, которое связано с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном у пациента, имеющего указанное глазное заболевание, включающий введение эффективного количества кристаллической формы по п.1 указанному пациенту.
3. 3. Способ по п.2, где глазное заболевание выбрано из группы, состоящей из аниридии, хороидеремии, колобома-ренального синдрома, врожденного амавроза Лебера, пигментной дегенерации сетчатки, синдрома Барде-Бидля, глаукомы, фовеальной гипоплазии, катаракт, синдрома Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальной дегенерации, врожденного помутнения хрусталика, повышенного внутриглазного давления, экссудативной васкулярной ретинопатии, глаукомы, гипоплазии радужной оболочки, кератопатии (дегенерация роговицы), гипоплазии зрительного нерва, отслоения сетчатки, вторичного косоглазия и сосудистой оболочки хрусталика.
4. 4. Фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество кристаллической формы по п.1.
5. 5. Способ лечения, предупреждения или оказания помощи при глазном заболевании, которое связано с нонсенс-мутацией или преждевременным стоп-кодоном у пациента, имеющего указанное глазное заболевание, включающий введение фармацевтической композиции по п.4 указанному пациенту.
6. 6. Способ по п.5, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из аниридии, хороидеремии, колобома-ренального синдрома, врожденного амавроза Лебера, пигментной дегенерации сетчатки, синдрома Барде-Бидля, глаукомы, фовеальной гипоплазии, катаракт, синдрома Ушера, затруднения центрального слухового перерабатывания, хориоретинальной дегенерации, врожденного помутнения хрусталика, повышенного внутриглазного давления, экссудативной васкулярной ретинопатии, глаукомы, гипоплазии радужной оболочки, кератопатии (дегенерация роговицы), гипоплазии зрительного нерва, отслоения сетчатки, вторичного косоглазия и сосудистой оболочки хрусталика.