EA019974B1

EA019974B1 - 8-ЗАМЕЩЕННЫЕ ПИРИДО[2,3-b]ПИРАЗИНЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

Info

Publication number: EA019974B1
Application number: EA201070667A
Authority: EA
Inventors: Кэролайн Джой Спрингер; Дэн Никулеску-Дувас; Йон Никулеску-Дувас; Ричард Мараис; Бартоломеус Маринус Йозефус Мария Сейкербейк; Альфонсо Замбон; Арнауд Нурри; Дельфин Менард
Original assignee: Кансер Рисерч Текнолоджи Лимитед; Инститьют Оф Кансер Рисерч: Ройял Кансер Хоспитал (Зе)
Priority date: 2007-12-19
Filing date: 2008-12-19
Publication date: 2014-07-30
Also published as: JP5511680B2; KR101665143B1; US8912191B2; UA105763C2; CN101945869A; US20140121212A1; US20120238568A1; IL206330A; US9155737B2; CN101945869B; CA2709257C; US9540372B2; JP2011506591A; MX2010006739A; DK2229391T3; US8546387B2; US20160002230A1; HK1148521A1; EA201070667A1; US20100298320A1

Abstract

Настоящее изобретение относится в целом к области терапевтических соединений для лечения пролиферативных нарушений, рака и т.д. и, в частности, к некоторым 8-замещенным пиридо[2,3-b]пиразинам, охарактеризованным в настоящем описании, которые, в числе прочего, подавляют активность RAF (например, B-RAF). Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и к применению указанных соединений и композиций как in vitro, так и in vivo, для подавления активности RAF (например, BRAF), подавления активности рецепторных тирозинкиназ (РТК), подавления пролиферации клеток и лечения заболеваний и нарушений, облегчаемых путем подавления RAF, РТК и т.д., пролиферативных нарушений, таких как рак (например, колоректальный рак, меланома) и т.д.

Description

Настоящее изобретение в целом относится к области терапевтических соединений для лечения пролиферативных нарушений, рака и т.д. и, в частности, к некоторым 8-замещенным пиридо[2,3Ь]пиразинам, охарактеризованным в настоящем описании, которые, в числе прочего, подавляют активность КАР (например, В-КАР). Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и к применению указанных соединений и композиций как ίη νίΐτο, так и ίη νίνο, для подавления активности КАР (например, В-КАР), подавления активности рецепторной тирозинкиназы (РТК), подавления пролиферации клеток и лечения заболеваний и нарушений, облегчаемых путем подавления КАР, РТК и т.д., пролиферативных нарушений, таких как рак (например, колоректальный рак, меланома) и т.д.

Уровень техники

В настоящем изобретении упоминается ряд патентов и публикаций с целью более полно описать и раскрыть настоящее изобретение и уровень техники, к которому относится настоящее изобретение. Содержание каждого из упоминаемых документов полностью включено в настоящее описание посредством ссылки в той же степени, как если бы в случае каждого конкретного документа было указано, что его содержание включено в настоящее описание посредством ссылки.

В настоящем описании, включая приведенную далее формулу изобретения, если из контекста не следует иное, слово включать и его варианты, такие как включает и включающий, следует понимать как подразумевающее включение указанного целого числа или стадии или группы целых чисел или стадий, но не исключение любого другого целого числа или стадии или группы целых чисел или стадий.

Необходимо отметить, что в настоящем описании и пунктах прилагаемой формулы изобретения формы единственного числа включают множественное число, если из контекста явным образом не следует иное. Так, например, указание на фармацевтический носитель включает смеси двух или нескольких указанных носителей и т.п.

В настоящем описании диапазоны часто выражают в виде от примерно одной конкретной величины и/или до примерно другой конкретной величины. Если указан подобный диапазон, другой вариант реализации включает значения от указанной одной конкретной величины и/или до другой конкретной величины. Аналогичным образом, если величины представлены как приблизительные путем использования предшествующего термина примерно, следует понимать, что конкретная величина образует другой вариант реализации.

Настоящее описание содержит информацию, которая может быть полезна для понимания настоящего изобретения. При этом не предполагается, что любая приведенная в настоящем описании информация характеризует уровень техники или относится к заявленному изобретению или что любая конкретно или неявным образом упоминаемая публикация представляет собой уровень техники.

КАР, пролиферативные нарушения и рак.

Мутации в генах, прямо или опосредованно контролирующих рост и дифференцировку клеток, в общем случае считают основной причиной рака. Злокачественные опухоли развиваются через ряд постепенных прогрессирующих изменений, которые приводят к утрате характеристик контроля роста раковых клеток, т.е. постоянной нерегулируемой пролиферации, способности к внедрению в окружающие ткани и способности к образованию метастаз в различных органах. Тщательно контролируемые исследования ίη νίΐτο помогли определить факторы, характеризующие рост нормальных и опухолевых клеток, и привели к идентификации конкретных белков, контролирующих рост и дифференцировку клеток.

КАР представляет собой ключевую расположенную ниже по каскаду мишень для ГТФазы так и опосредует активацию каскада МАП-киназы, состоящего из гаГ-МЕК-ЕКК. Активированная ЕКК представляет собой киназу, последовательно воздействующую на ряд белков, отвечающих, среди прочего, за опосредование роста, выживания и транскрипционных функций данного пути. Указанные белки включают транскрипционные факторы ЕЬК1, С-ШЫ, семейство Εΐκ (включая Εΐκ 1, 2 и 7) и семейство РО8. Путь сигнальной трансдукции гак-гаГ-МЕК-ЕКК активируется в ответ на многие клеточные стимулы, включая такие факторы роста, как ЭФР (ЕСР), ТРФ (РОСР), ФРК (КСР) и т.д. Поскольку указанный путь представляет собой основную мишень, на которую воздействуют факторы роста, было обнаружено, что повышающая регуляция гаГ-МЕК-ЕКК имеет место во многих опухолях, зависимых от факторов роста. Наблюдаемая примерно в 20% всех опухолей активирующая мутация в одном из белков гак указывает на то, что данный путь вносит более широкий вклад в онкогенез. Появляется все больше доказательств того, что активирующие мутации в других компонентах указанного пути также имеют место в опухолях у людей. Указанное справедливо и для КАР.

Семейство онкогенов КАР включает три высококонсервативных гена, обозначаемых А-КАР, В-КАР и С-КАР (также называемый КаГ-1). Гены КАР кодируют протеинкиназы, которые, как полагают, играют важную регуляторную роль в процессах сигнальной трансдукции, регулирующих пролиферацию клеток. Гены КАР кодируют высококонсервативные серин-треонин-специфичные протеинкиназы, которые при

- 1 019974 влекаются к плазматической мембране с последующим непосредственным связыванием с малыми гуанин-нуклеотидсвязывающими белками так, и указанное событие является инициирующим в активации КАР. Белки КАР являются частью пути сигнальной трансдукции, который, как полагают, состоит из рецепторных тирозинкиназ, р21 Как, протеинкиназ КАР, киназ МЕК1 (активатор ЕКК или МАПКК) и киназ ЕКК (МАПК), которые в конечном итоге фосфорилируют некоторые клеточные субстраты, включая транскрипционные факторы. Передача сигналов по указанному пути может опосредовать дифференцировку, пролиферацию или онкогенную трансформацию в различном клеточном окружении. Так, полагают, что киназы КАР играют фундаментальную роль в нормальном клеточном пути сигнальной трансдукции, объединяя множество факторов роста для их совокупного действия - пролиферации клеток. Поскольку белки КАР являются непосредственными расположенными ниже по каскаду эффекторами функции белка гак, полагают, что терапия, направленная против киназ КАР, будет полезна при лечении гакзависимых опухолей.

Киназы КАР регулируются и экспрессируются дифференцированно; С-КАР охарактеризована наиболее подробно и экспрессируется во всех органах и во всех исследованных клеточных линиях. А-КАР и В-КАР также, по-видимому, присутствуют повсеместно, но наиболее высоко экспрессируются в урогенитальных и мозговых тканях соответственно. Поскольку В-КАР высоко экспрессируется в тканях нервной системы, полагали, что она ограничивается указанными тканями, но впоследствии было обнаружено, что она экспрессируется более широко. Хотя все белки КАР могут связываться с активным Как, В-гаГ наиболее сильно активируется онкогенным Как и может быть основной мишенью онкогенного Как в трансформированных клетках.

Последние данные показали, что мутационная активация В-КАР обнаружена в ряде различных опухолей, включая более 65% злокачественных меланом, более 10% случаев колоректального рака (Оау1ск. Н., е1 а1., 2002, Ыа!иге, Уо1. 417, рр. 949-954; Ка_)адора1ап, Н., е1 а1., 2002, Ыа!иге. Уо1. 418, р. 934), рака яичников (Бшдет, С., е1 а1., 2003, 1. Νη11. Сапсег !пк1. Уо1. 95, рр. 484-486) и папиллярного рака щитовидной железы (Вгоке, М., е1 а1., 2002, Сапсег Кек. Уо1. 62, рр. 6997-7000; Собеп, Υ., е1 а1., 2003, 1пуек1. Орб1ба1шо1. У1к. 8с1. Уо1. 44, рр. 2876-2878). Ряд различных мутаций В-КАР идентифицированы в различных опухолях, при этом наиболее часто встречается мутация У600Е в так называемой активационной петле киназного домена (Пау1ек, Н., е1 а1., 2002, №!ите, Уо1. 417, рр. 949-954).

Другие мутации В-КАР, которые, как обнаружено, связаны с раковыми заболеваниями у человека, необязательно могут активировать В-КАР непосредственно, но обеспечивают повышающую регуляцию активности пути гак-гаГ-МЕК-ЕКК по механизмам, которые еще не полностью понятны, но могут включать перекрестное влияние с другими изоформами КАР, такими как А-КАР (^ап, Р., е1 а1., 2004, Се11, Уо1. 116, рр. 855-867). В таких случаях подавление активности КАР также является целью, обеспечивающей положительный эффект при лечении рака.

Помимо связи между В-КАР и некоторыми видами рака, имеется значительное количество данных, указывающих на то, что более широкое подавление активности КАР может обеспечивать преимущество в качестве противоопухолевой терапии. Блокирование пути на уровне В-КАР могло бы быть эффективным для противодействия повышающей регуляции указанного пути, вызванной онкогенными мутациями гак, а также в случае опухолей, отвечающих на активацию фактора роста по указанному пути. Результаты генетических исследований на ЭтокорбЛа и С. е1едапк показывают, что гомологи КАР важны для гакзависимого воздействия на дифференцировку (Эюккоп, В., е1 а1., 1993, №Ш1ге. Уо1. 360, рр. 600-603). Введение конститутивно активной МЕК в клетки ΝΙΗ3Τ3 может оказывать трансформирующее действие, в то время как экспрессия доминантных негативных белков МЕК может подавлять онкогенность гактрансформированных клеточных линий (Мапкоиг, 8Т., е1 а1., 1994, 8аепсе, Уо1. 265, рр. 966-970; Со^е1у, 8., е1 а1., 1994, Се11, Уо1. 77, рр. 841-852). Также было обнаружено, что экспрессия доминантного негативного белка гаГ подавляет гак-зависимую передачу сигналов, так же, как это делает подавление экспрессии гаГ при помощи антисмыслового олигонуклеотидного конструкта (Косб, е1 а1., 1991, №-11иге. Уо1. 349, рр. 426-428; Вгибег, Τ.Τ., е1 а1., 1992, Сепек апб Эеуе1оршеп1. Уо1. 6, рр. 545-556).

Эти и другие данные позволяют предположить, что подавление активности КАР (например, В-КАР) могло бы обеспечивать преимущество при лечении рака, и что подавление активности КАР (например, В-КАР) обеспечивало бы особенное преимущество при тех видах рака, которые содержат конститутивно активированную мутацию В-гаГ.

Путь гаГ-МЕК-ЕКК оказывает воздействие вниз по каскаду с привлечением многих рецепторов и раздражителей, что указывает на широкий спектр влияния на регуляцию клеточных функций. По указанной причине ингибиторы КАР могут найти применение при других болезненных состояниях, связанных с повышающей регуляцией передачи сигналов по указанному пути. Путь гаГ-МЕК-ЕКК также является важным компонентом нормального ответа нетрансформированных клеток на действие фактора роста. Поэтому ингибиторы КАР могут быть полезны при заболеваниях, при которых имеет место ненадлежащая или избыточная пролиферация нормальных тканей. Указанные заболевания включают, но не ограничиваются ими, гломерулонефрит и псориаз. Путь передачи сигналов в клетках, частью которого является КАР, также связывают с воспалительными нарушениями, характеризующимися пролиферацией Тклеток (активацией и ростом Т-клеток), такими как отторжение ткани трансплантата, эндотоксический

- 2 019974 шок и гломерулонефрит.

Было показано, что ВАР (например, В-ВАР) является подходящей терапевтической мишенью при гиперпролиферативных расстройствах, таких как рак. Активированные варианты ВАР (например, ВВАР) способны трансформировать клетки млекопитающих, обеспечивая возможность приобретения ими характеристик раковых клеток, при этом рост указанных клеток становится зависимым от мутантного белка ВАР (например, В-ВАР). Подавление активности ВАР (например, В-ВАР) в линии клеток рака человека, экспрессирующих мутантные формы ВАР (например, В-ВАР), блокирует их рост и в конечном итоге вызывает их гибель.

Ангиогенез.

Хронические пролиферативные заболевания часто сопровождаются сильным ангиогенезом, который может вносить вклад, или поддерживать воспалительное и/или пролиферативное состояние, или приводить к разрушению тканей за счет инвазивной пролиферации кровеносных сосудов (Ро1ктап, 1997, ЕХ8, Уо1. 79, рр. 1-81; Ро1ктап, 1995, №Шгс Мебкше. Уо1. 1, рр. 27-31; Ро1ктап апб 8Ыпд, 1992, 1. Вю1. Скет., Уо1. 267, р. 10931).

Ангиогенез в общем случае используют для описания развития новых или замещающих кровеносных сосудов или неоваскуляризации. Это необходимый и физиологически нормальный процесс, благодаря которому формируется сосудистая сеть у эмбриона. В целом, ангиогенез не наблюдается в большинстве нормальных тканей у взрослых, за исключением мест протекания овуляции, менструации и заживления ран. Однако многие заболевания характеризуются персистирующим и нерегулируемым ангиогенезом. Например, при артрите новые капиллярные кровеносные сосуды внедряются в сустав и разрушают хрящ (СокП1е-№1511 апб 8со11. 1992, Апп. Вйит. Όίκ., Уо1. 51, р. 919). При диабете (и при многих различных болезнях глаз) новые сосуды внедряются в пятно или сетчатку или другие структуры глаза и могут привести к слепоте (Вгоокк е! а1., 1994, Се11, Уо1. 79, р. 1157). С ангиогенезом связывают процесс атеросклероза (Как1оп е! а1., 1992, Сап. 1. Сагбю1. Уо1. 8, р. 60). Обнаружено, что рост опухоли и метастазирование зависят от ангиогенеза (Ро1ктап, 1992, Сапсег Вю1., Уо1. 3, р. 65; Эепекатр. 1993, Вг. 1. Ваб. Уо1. 66, р. 181; Р1б1егапб ЕШк, 1994, Се11, Уо1. 79, р. 185).

Выявление вовлеченности ангиогенеза в основные заболевания сопровождалось исследованиями, направленными на идентификацию и разработку ингибиторов ангиогенеза. Указанные ингибиторы в общем случае классифицируют по отклику на отдельные мишени в каскаде ангиогенеза, такому как активация эндотелиальных клеток ангиогенным сигналом; синтез и высвобождение деструктивных ферментов; миграция эндотелиальных клеток; пролиферация эндотелиальных клеток; и образование капиллярных трубок. Следовательно, ангиогенез протекает на многих стадиях, и предпринимаются попытки обнаружения и разработки соединений, которые блокируют ангиогенез на указанных различных стадиях.

В ряде публикаций сообщается, что ингибиторы ангиогенеза, действующие по различным механизмам, оказывают положительный эффект при таких заболеваниях, как рак и метастазирование (О'ВеШу е! а1., 1994, Се11, Уо1. 79, р. 315; 1пдЬег е! а1., 1990, Ыа!иге, Уо1. 348, р. 555), заболевания глаз (Рпеб1апбег е! а1., 1995, 8с1епсе, Уо1. 270, р. 1500), артрит (Реасоск е! а1., 1992, 1. Ехр. Меб., Уо1. 175, р. 1135; Реасоск е! а1., 1995, Се11. 1ттип., Уо1. 160, р. 178) и гемангиома (ТагаЬо1е!й е! а1., 1995, 1. N311. Сапсег 1пк!., Уо1. 87, р. 293).

РТК.

Рецепторные тирозинкиназы (РТК) играют важную роль в передаче биохимических сигналов через плазматическую мембрану клеток. Указанные трансмембранные молекулы характеристически состоят из внеклеточного лиганд-связывающего домена, соединенного через сегмент в плазматической мембране с внутриклеточным доменом тирозинкиназы. Связывание лиганда с рецептором приводит к стимуляции связанной с рецептором активности тирозинкиназы, что ведет к фосфорилированию остатков тирозина как в рецепторе, так и в других внутриклеточных белках, приводя ко множеству клеточных ответов. В настоящее время идентифицировано по меньшей мере девятнадцать отдельных подсемейств РТК, определяемых гомологией аминокислотных последовательностей.

ФРФ-Р.

Сигнальные полипептиды из семейства фактора роста фибробластов (ФРФ) регулируют широкий спектр физиологических функций, включая митогенез, заживление ран, дифференцировку клеток и ангиогенез, и развитие. Как нормальный, так и злокачественный рост клеток, а также пролиферация подвержены воздействию изменений локальной концентрации указанных внеклеточных сигнальных молекул, выступающих в качестве аутокринных и паракринных факторов. Аутокринная передача сигналов ФРФ может вносить особый вклад в прогрессирование зависимых от стероидных гормонов видов рака и состояние независимости от гормонов (Ро^егк е! а1., 2000, Епбосг. Ве1а!. Сапсег. Уо1. 7, рр. 165-197).

ФРФ и их рецепторы экспрессируются в повышенных количествах в некоторых тканях и клеточных линиях, и полагают, что сверхэкспрессия вносит вклад в злокачественный фенотип. Кроме того, ряд онкогенов являются гомологами генов, кодирующих рецепторы факторов роста, и существует потенциал для аберрантной активации зависимой от ФРФ передачи сигналов при раке поджелудочной железы у людей (О/а\та е! а1., 2001, Тега1ос.|. С.’агсшос|. Ми1адеп., Уо1. 21, рр. 27-44).

Двумя прототипными членами семейства являются кислотный фактор роста фибробластов (кФРФ

- 3 019974 или ФРФ1) и основный фактор роста фибробластов (оФРФ или ФРФ2), и к настоящему моменту идентифицировано по меньшей мере двадцать отдельных членов семейства ФРФ. Клеточный ответ на ФРФ передается через четыре типа высокоаффинных трансмембранных тирозинкиназных рецепторов фактора роста фибробластов, пронумерованных от 1 до 4 (от ФРФ-Р1 до ФРФ-Р4). При связывании лиганда рецептор димеризуется и ауто- или транс-фосфорилирует конкретные цитоплазматические остатки тирозина для переноса внутриклеточного сигнала, который в конечном итоге достигает эффекторов транскрипционного фактора в ядре.

Разрушение пути ФРФ-Р1 должно влиять на пролиферацию опухолевых клеток, поскольку указанная киназа активируется во многих типах опухолей в дополнение к пролиферации эндотелиальных клеток. В сверхэкспрессии и активации ФРФ-Р1 в связанной с опухолью сосудистой сети, как полагают, и заключается роль указанных молекул в опухолевом ангиогенезе.

ФРФ-Р2 является высокоаффинным к кислотному и/или основному факторам роста фибробластов, а также к лигандам фактора роста кератиноцитов. ФРФ-Р2 также передает мощное остеогенное действие ФРФ в процессе роста и дифференцировки остеобластов. Было показано, что мутации в ФРФ-Р2, приводящие к комплексным функциональным изменениям, индуцируют патологическое окостенение черепных швов (краниосиностоз), что подразумевает главную роль передачи сигналов ФРФ-Р во внутримембранном формировании кости. Например, большинство случаев синдрома Апера (АР), характеризующегося преждевременным окостенением черепных швов, связано с точечными мутациями, приводящими к появлению новой функции белкового продукта гена (даш-оГ-Гипсйоп), в ФРФ-Р2 (Ъетоптег е! а1., 2001, 1. Вопе Мшег. Век., Уо1. 16, рр. 832-845).

Некоторые серьезные отклонения в развитии скелета человека, включая синдромы Апера, Крузона, Джексона-Вейсса, сийк §уга!а Биара-Стивенсона и синдром Пфейфера, связаны с мутациями в ФРФ-Р2. Большинство, если не все, случаи синдрома Пфейффера (Р8) также вызваны бе ηονο мутацией в гене ФРФ-Р2 (Меуегк е! а1., 1996, Ат. 1. Нит. Оепе!. Уо1. 58, рр. 491-498; Р1отр е! а1., 1998, Ат. 1. Меб. Оепе!. Уо1. 75, 245-251), при этом недавно было показано, что мутации в ФРФ-Р2 приводят к нарушению одного из основных принципов управления специфичностью лигандов. В частности, две мутантных сплайсированных формы рецептора фактора роста фибробластов, ФРФ-Р2с и ФРФ-Р2Б, обладают приобретенной способностью связываться с нетипичными лигандами ФРФ и активироваться ими. Потеря лигандной специфичности приводит к аберрантной передаче сигналов, что позволяет предположить, что тяжелые фенотипы указанных болезненных синдромов являются результатом эктопической лигандзависимой активации ФРФ-Р2 (Уи е! а1., 2000, Ргос. №111. Асаб. 8ск И.8.А., Уо1. 97, рр. 14536-14541).

Активирующие мутации рецепторной тирозинкиназы ФРФ-Р3, такие как хромосомные транслокации или точечные мутации, приводят к появлению конститутивно активных рецепторов ФРФ-Р3 с нарушенной регуляцией, которые связывают с развитием множественной миеломы и карцином мочевого пузыря и шейки матки (Ро\\ег5, О., е! а1., 2000, Епбосг. Ве1. Сапсег. Уо1. 7, р. 165). Соответственно, подавление ФРФ-Р3 могло бы быть полезным при лечении множественной миеломы, карцином мочевого пузыря и шейки матки.

СЭФР-Р.

Сосудистый эндотелиальный фактор роста (СЭФР), представляющий собой полипептид, является митогенным для эндотелиальных клеток ш уйго и стимулирует ангиогенные ответы ш νί\Ό. СЭФР также связывают с ненадлежащим ангиогенезом (Ршебо, Н.М., е! а1., 2000, Тйе Опсо1ощк1, Уо1. 5 (90001), рр. 12). СЭФР-Р представляют собой белковые тирозинкиназы (БТК). БТК катализируют фосфорилирование конкретных тирозильных остатков в белках, участвующих в регуляции роста клеток и дифференцировки. (\νί11<κ, А.Б., 1990, Ргодгекк ш Сго^!й Бас!ог Векеагсй, Уо1. 2, рр. 97-111; СоигЩе1бде, 8.А., 1993, Эеу. 8ирр1, рр. 57-64; Соорег, ТА., 1994, 8етт. Се11. Вю1. Уо1. 5(6), рр. 377-387; Раи1коп, В.Б., 1995, 8етт. 1ттипо1., Уо1. 7(4), рр. 267-277; Сйап, А.С., 1996, Сигг. Орт. 1ттипо1., Уо1. 8(3), рр. 394-401).

Были идентифицированы три рецептора БТК для СЭФР: СЭФР-Р1 (Б1!-1), СЭФР-Р2 (Б1к-1 или ΚΌΚ) и СЭФР-Р3 (Б1!-4). Указанные рецепторы участвуют в ангиогенезе и принимают участие в сигнальной трансдукции (Мик!опеп, Т., е! а1., 1995, 1. Се11. Вю1. Уо1. 129, рр. 895-898).

Особый интерес представляет СЭФР-Р2, который представляет собой трансмембранный рецептор БТК, экспрессируемый преимущественно в эндотелиальных клетках. Активация СЭФР-Р2 под действием СЭФР является критической стадией в пути сигнальной трансдукции, инициирующем опухолевый ангиогенез. Экспрессия СЭФР может быть конститутивной особенностью опухолевых клеток, а также может подвергаться повышающей регуляции в ответ на некоторые стимулы. Одним из подобных стимулов является гипоксия, при которой имеет место повышающая регуляция экспрессии СЭФР как в опухоли, так и в связанных с ней тканях организма-хозяина. Лиганд СЭФР активирует СЭФР-Р2 путем связывания с внеклеточным центром связывания СЭФР. Это приводит к димеризации рецептора СЭФР-Р и аутофосфорилированию остатков тирозина во внутриклеточном домене киназы СЭФР-Р2. Домен киназы обеспечивает перенос фосфата от АТФ к остаткам тирозина, тем самым обеспечивая центры связывания для сигнальных белков, расположенных в каскаде ниже СЭФР-Р2, что приводит в конечном итоге к инициированию ангиогенеза (МсМайоп, О., 2000, Тйе Опсо1ощк1. Уо1. 5(90001), рр. 3-10).

Подавление в центре связывания киназного домена СЭФР-Р2 блокировало бы фосфорилирование

- 4 019974 остатков тирозина и обеспечивало нарушение инициирования ангиогенеза.

ΤΙΕ.

Ангиопоэтин 1 (Апд1), лиганд эндотелий-специфической рецепторной тирозинкиназы ΤΓΕ-2, представляет собой новый ангиогенный фактор (Оа\зк е! а1., 1996, Се11., Уо1. 87, рр. 1161-1169; Райапеп е! а1., 1992, Мо1. Сс11. Вю1., Уо1. 12, рр. 1698-1707; патенты США №№ 5521073; 5879672; 5877020; и 6030831). Аббревиатура ΤΙΕ означает тирозинкиназа, содержащая домены, гомологичные 1д и ЭФР. ΤΙΕ применяют для идентификации класса рецепторных тирозинкиназ, которые экспрессируются исключительно в клетках сосудистого эндотелия и ранних кроветворных клетках. Обычно рецепторные киназы ΤΙΕ характеризуются присутствием ЭФР-подобного домена и иммуноглобулин-подобного домена, который состоит из внеклеточных доменов, стабилизированных межцепочечными дисульфидными связями (Раг1апеп е! а1., 1999, Сигг. Шркк Мкгойюк 1ттипо1., Уо1. 237, рр. 159-172). В отличие от СЭФР, который действует на ранних стадиях развития сосудов, Апд1 и его рецептор ΤΙΕ-2 действуют на поздних стадиях развития сосудов, т.е. в ходе сосудистого ремоделирования (ремоделирование относится к образованию просвета сосудов) и созревания (Уапсорои1ок е! а1., 1998, Се11., Уо1. 93, рр. 661-664; Ре!егк, К.О., 1998, Спс. Кек., Уо1. 83(3), рр. 342-343; 8ип е! а1., 1996, Се11., Уо1. 87, рр. 1171-1180).

Следовательно, подавление ΤΙΕ-2 предположительно могло бы подходить для нарушения ремоделирования и созревания новой сосудистой сети, инициируемых ангиогенезом, тем самым нарушая процесс ангиогенеза.

Εрй.

Самое большое подсемейство рецепторных тирозинкиназ (РТК), семейство БрН. и их лиганды (эфрины) играют важную роль в физиологических и патологических сосудистых процессах. Как Бр11 (рецепторы), так и эфрины (лиганды) подразделяются на две группы - подсемейства А и В (ЕрН Ыотепс1а!иге Соттй!ее, 1997). Связывание эфриновых лигандов с рецепторами Бр11 зависит от взаимодействий клетка-клетка. Недавно было показано, что взаимодействия эфринов и Бр11 осуществляются посредством двунаправленной передачи сигналов. Эфрины, связываясь с рецепторами Брк инициируют фосфорилирование конкретных остатков тирозина в цитоплазматическом домене рецепторов Бр11. В ответ на связывание с рецептором Бр11 эфриновый лиганд также подвергается фосфорилированию тирозина, так называемой обратной передаче сигнала (Но11апб, 8.1, е! а1., 1996, Ыа!иге, Уо1. 383, рр. 722-725; Вгискпег е! а1., 1997, 8с1епсе. Уо1. 275, рр. 1640-1643).

ΡΤΚ Бр11 и их эфриновые лиганды играют важную роль в эмбриональном развитии сосудов. Разрушение конкретных рецепторов Бр11 и лигандов (включая эфрин-В2) приводит к нарушениям ремоделирования сосудов, формирования сосудистой структуры и разрастанию сосудов, приводя к гибели эмбриона (№апд, Н.и., е! а1., 1998, Се11., Уо1. 93, рр. 741-753; Абатк, К.Н., е! а1., 1999, Оепек 1)е\. Уо1. 13, рр. 295306; Оа1е апб УапсороЫок, 1999, Оепек Эсу, Уо1. 13, рр. 1055-1066; Не1Ьйпд, Р.М., е! а1., 2000, Оеуе1ортеп!, Уо1. 127, рр. 269-278). Координированная экспрессия системы БрН/эфрин определяет фенотип эмбриональных сосудистых структур: эфрин-В2 присутствует в артериальных эндотелиальных клетках (ЭК), тогда как Вр11В4 присутствует в венозных ЭК (Оа1е апб Уапсорои1ок, 1999, Оепек Эсу, Уо1. 13, рр. 1055-1066; δΐιίιτ, Ό., е! а1., 2001, Эеу Вю1., Уо1. 230, рр. 139-150). Недавно было показано, что конкретные ШрИ и эфрины вовлечены в процессы роста опухолей и ангиогенеза.

Было обнаружено, что РрИ и эфрины сверхэкспрессируются во многих опухолях у людей. В частности, идентифицирована роль йрИВЗ в мелкоклеточной карциноме легких ^апд, Х.Х., е! а1., 1999, Сйп Сапсег Кек. Уо1. 5, рр. 455-460), нейробластомах у людей (Гайд, Х.Х., е! а1., 1999, Сйп Сапсег Кек, Уо1. 5, рр. 1491-1496) и колоректальном раке (Бш, ^., е! а1., 2004, Вгй. 1. Сапс. Уо1. 90, рр. 1620-1626), а также обнаружено, что более высокие уровни экспрессии Εрй и эфринов, включая ΕрйВ2, коррелируют с большей скоростью развития и метастазирования опухолей (Ыакато!о, М. апб Ве^детаии, Α.Ό., 2002, Мкгокс. Кек. Τесй. Уо1. 59, рр. 58-67).

Следовательно, полагают, что подавление ΕрйВ2 способно обеспечивать нарушение ангиогенеза, в частности, в некоторых опухолях, в которых наблюдается сверхэкспрессия.

Авторами настоящего изобретения были обнаружены соединения, которые, например, подавляют активность КАР (например, В-КАР) и/или подходят для лечения, например, пролиферативных нарушений, рака и т.д.

Краткое описание изобретения

Один из аспектов настоящего изобретения относится к некоторым 8-замещенным пиридо[2,3й]пиразинам (обозначенным в настоящем описании как соединения РЭР8), приведенным в настоящем описании.

Другой аспект настоящего изобретения относится к композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей соединение РЭР8 согласно настоящему описанию и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения композиции (например, фармацевтической композиции), включающему стадию смешивания соединения РЭР8 согласно настоящему описанию и фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу подавления активности КАР (напри

- 5 019974 мер, В-КАР) в клетке, ίη νίίτο или ίη νίνο, включающему приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу подавления активности рецепторной тирозинкиназы (РТК), такой как ФРФ-Р, Т1е, СЭФР-Р и/или активности Ερίι. например ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, Т1е2, СЭФР-Р2 и/или активности Ер11В2 в клетке, ίη νίίτο или ίη νίνο, включающему приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу регулирования (например, подавления) клеточной пролиферации (например, пролиферации клетки), подавления развития клеточного цикла, стимулирования апоптоза или сочетанию одного или нескольких указанных способов, ίη νίίτο или ίη νίνο, включающему приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, включающему введение субъекту, нуждающемуся в указанном лечении, терапевтически эффективного количества соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию предпочтительно в виде фармацевтической композиции.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию для применения в способе лечения человека или животного при помощи терапии.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию для применения в способе лечения человека или животного, причем указанное соединение применяют в сочетании с другими фармацевтически активными веществами.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию для получения лекарственного средства для применения при лечении.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения (например, рака), характеризующегося повышающей регуляцией и/или активацией КАР (например, В-КАР) и/или облегчаемого путем подавления КАР (например, В-КАР).

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения (например, рака), характеризующегося повышающей регуляцией и/или активацией рецепторной тирозинкиназы (РТК) и/или облегчаемого путем подавления рецепторной тирозинкиназы (РТК). Примеры РТК включают ФРФ-Р, Т1е, СЭФР-Р и/или Ерй, например ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, Т1е2, СЭФР-Р2 и/или Ер11В2.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения, характеризующегося ненадлежащим, избыточным и/или нежелательным ангиогенезом.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение пролиферативного нарушения.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение рака.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение меланомы.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лечение представляет собой лечение колоректального рака.

Другой аспект настоящего изобретения относится к набору, содержащему (а) соединение ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию, предпочтительно представленное в виде фармацевтической композиции и в подходящем контейнере и/или подходящей упаковке; и (б) инструкции по применению, например письменные инструкции по введению указанного соединения.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению ΡΌΡ8, которое может быть получено при помощи способа синтеза согласно настоящему описанию или способа, включающего способ синтеза согласно настоящему описанию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению ΡΌΡ8, полученному по способу синтеза согласно настоящему описанию или способу, включающему способ синтеза согласно настоящему описанию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к новым промежуточным соединениям согласно настоящему описанию, подходящим для применения в способах синтеза согласно настоящему описанию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению указанных новых промежуточных соединений согласно настоящему описанию в способах синтеза согласно настоящему описанию.

Для специалиста в данной области техники очевидно, что признаки и предпочтительные варианты реализации одного из аспектов настоящего изобретения будут также относиться к другим аспектам настоящего изобретения.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет собой график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 1 ίη νίνο (АА-018) (не стандартизовано) (5 мг/кг/сутки) (внутрибрюшинно);

фиг. 2 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 2 ίη νίνο (АА-018) (не стандартизовано) (10 мг/кг/сутки) (внутрибрюшинно);

- 6 019974 фиг. 3 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 3 ίη νίνο (АА-019) ((не стандартизовано) (5 мг/кг/сутки) (внутрибрюшинно);

фиг. 4 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 4 ίη νίνο (АА-019) (не стандартизовано) (10 мг/кг/сутки) (внутрибрюшинно);

фиг. 5 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 5 ίη νίνο (АА-019) (не стандартизовано) (15 мг/кг/сутки) (перорально);

фиг. 6 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 6 ίη νίνο (АА-019) (стандартизовано) (10/5 мг/кг/сутки) (внутрибрюшинно);

фиг. 7 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 7 ίη νίνο (АА-019) (стандартизовано) (15 мг/кг/сутки) (перорально);

фиг. 8 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 8 ίη νίνο (АА-062) (стандартизовано) (50 мг/кг/сутки) (перорально);

фиг. 9 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 9 ίη νίνο (АА-067) (стандартизовано) (10 мг/кг/сутки) (перорально);

фиг. 10 - график относительного объема опухоли как функции количества дней с момента инокуляции для исследования 10 ίη νίνο (АА-017) (стандартизовано) (20 мг/кг/сутки) (перорально).

Подробное описание изобретения

Соединения.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к соединениям, выбранным из соединений следующей формулы и фармацевтически приемлемых солей указанных соединений (для простоты в совокупности обозначенных в настоящем описании как 8-замещенные пиридо[2,3-Ь]пиразины и соединения ΡΌΡ8):

^м-ί—ΰ

где -К⁰¹ независимо представляет собой -Н, -К¹, -К^1Х, -ОН, -ΝΗ2, -ΝΗΚ¹, -ΝΚ.'2 или -ΝΚ.^Ι<ΛΚ.^Ι<|5; где каждый -К¹ независимо представляет собой С1_-6алкил;

каждый -К^1Х независимо представляет собой С1_-4алкил, замещенный одной или несколькими группами, выбранными из -Р, -С1, -Вг и -I; и

-ИК^каК^кв, если присутствует, независимо представляет собой пиперидино, пиперазино, морфолино и возможно замещен одной или несколькими группами, выбранными из С1_-4алкила;

-К.¹'·’² независимо представляет собой -Н, -К², -К^2Х, -ОН, -ΝΗ2, -ΝΗΚ², -ΝΚ²2 или -ΝΚ^Κ°Η^ΚΒ; где каждый -К² независимо представляет собой С1-6алкил;

каждый -К^2Х независимо представляет собой С1_-4алкил, замещенный одной или несколькими группами, выбранными из -Р, -С1, -Вг и -I; и

-ΝΚ^κ°Κ^№, если присутствует, независимо представляет собой пиперидино, пиперазино или морфолино и возможно замещен одной или несколькими группами, выбранными из С1-4алкила;

-Х- независимо представляет собой -О-;

-М- независимо выбран из

где каждый η независимо равен 0 или 1;

каждый Κ^ΡΗ1 независимо представляет собой -Р или -8К³; каждый -К³ независимо представляет собой С1_-4алкил; -Ь- независимо выбран из

где каждый -К²¹ независимо представляет собой -Н;

-1 независимо представляет собой фенил, пиразолил или пиридил и возможно замещен одним или более заместителями, выбранными из -Р, -С1, -Вг, -I, -К⁴, -ОН, -ОК⁴, -СР3, -ОСР3 и -Рй, где каждый -К⁴независимо представляет собой С1-4алкил; и каждый -Рй обозначает фенил, возможно замещенный одним или более заместителями, выбранными из -Р, -С1, -Вг, -I, -К⁵, -ОН, -ОК⁵, -СР3 и -ОСР3, где каждый -К⁵независимо представляет собой С!-4 алкил.

- 7 019974

Согласно одному из вариантов реализации указанное соединение выбрано из соединений следующей формулы и фармацевтически приемлемых солей указанных соединений:

где -К⁰¹ независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ΝΜο₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино;

-К.¹'·’² независимо представляет собой -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ΝΜο₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино или

-К⁰¹ независимо представляет собой -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ΝΜο₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино;

-К.¹'·’² независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ΝΜο₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино;

-Х- независимо представляет собой -О-.

Согласно одному из вариантов реализации

-К⁰¹ независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ИМе₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино и

-К.¹'·’² независимо представляет собой -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ΝΜο₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино; или

-К⁰¹ независимо представляет собой -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ΝΜο₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино и

-К.¹'·’² независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, -ИМе₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино.

Согласно одному из вариантов реализации

-К⁰¹ представляет собой -ОН и

-К.¹'·’² независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино, или

-К.¹'·’¹ независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино и

-К.¹'·’² представляет собой -ОН.

Согласно одному из вариантов реализации

-К⁰¹ представляет собой -Ме или -ΝΗ₂ и

-К°² представляет собой -ОН; или

-К⁰¹ представляет собой -ОН и

-К/·’² представляет собой -Ме или -ΝΗ₂.

Согласно одному из вариантов реализации -К⁰¹ представляет собой -ОН и -К°² представляет собой -Н.

Согласно одному из вариантов реализации -К⁰¹ представляет собой -Н и -К°² представляет собой -ОН.

Согласно одному из вариантов реализации -К⁰¹ представляет собой -ОН и -К°² представляет собой -ОН.

Согласно одному из вариантов реализации

-К⁰¹ независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино и

-К.¹'·’² независимо представляет собой -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино; или

-К.¹'·’¹ независимо представляет собой -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино и

-К.¹'·’² независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΜο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино.

Согласно одному из вариантов реализации

-М- независимо представляет собой

и каждый -К^РН1 независимо представляет собой -Р или -8К³; где каждый -К³ независимо представ- 8 019974 ляет собой С_1-4алкил.

Согласно одному из вариантов реализации -М- независимо представляет собой

и каждый -К^рн1 независимо представляет собой -Р или -8К³; где каждый -К³ независимо представляет собой С_1-4алкил.

Согласно одному из вариантов реализации -Ь- независимо представляет собой α^ν1 еГ

где каждый -Κ^Ν1 независимо представляет собой -Н.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой фенил и является воз можно замещенным.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой пиразолил и является возможно замещенным.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой 1Н-пиразол-5-ил и является возможно замещенным.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой пиридил и является возможно замещенным.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой пирид-3-ил и является возможно замещенным.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой

- 9 019974 где -Κ^ργ1 независимо представляет собой фенил или пиридил и может содержать один или несколько заместителей, выбранных из -Е, -С1, -Вг, -I, -Я⁵, -ОН, -ОЯ⁵, -СЕ₃ и -ОСЕ₃; и

-Κ.^ργ2 независимо представляет собой -Я⁴.

где -Κ.^ργι независимо представляет собой фенил и может содержать один или несколько заместителей, выбранных из -Е, -С1, -Вг, -I, -Я⁵, -ОН, -ОЯ⁵, -СЕ₃ и -ОСЕ₃; и

-Κ.^ργ2 независимо представляет собой -Я⁴.

Согласно одному из вариантов реализации -Κ.^ργι независимо представляет собой фенил и может со держать один или несколько заместителей, выбранных из -Е, -С1, -Вг, -I, -Я⁵, -ОН и -ОЯ⁵, где -Я⁵ представляет собой -Ме.

Согласно одному из вариантов реализации -Κ.^ργι независимо представляет собой фенил и может содержать один или несколько заместителей, выбранных из -Я⁵, где -Я⁵ представляет собой -Ме.

Согласно одному из вариантов реализации -К.¹¹'² независимо представляет собой -!Ви.

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо выбран из

Согласно одному из вариантов реализации -1 независимо представляет собой где т независимо равно 0, 1 или 2;

каждый -Я^РН2 независимо представляет собой -Е, -С1, -Вг, -I, -Я⁴, -ОН, -ОЯ⁴, -СЕ3 или -ОСЕ3, где каждый -Я⁴ независимо представляет собой С1-4алкил.

Согласно одному из вариантов реализации -Я^РН2, если он присутствует, независимо представляет собой -Е, -С1, -1Ви. -СЕ₃ или -ОСЕ₃.

Комбинации.

Каждая и любая совместимая комбинация приведенных выше вариантов реализации находится в рамках настоящего изобретения, как если бы указанная комбинация была приведена отдельно и подробно охарактеризована.

Примеры конкретных вариантов реализации

Согласно одному из вариантов реализации соединения выбраны из соединений следующих формул и фармацевтически приемлемых солей указанных соединений:

- 10 019974

Соед.	Структура
АА-001	\ \|] н о ιΓ Ν^Ν Н
АА-002	о.О'-нХ'Л'Х (Υ1 Н
АА-003	н
АА-004	^ναΑο
АА-005
АА-006	? н й“'υΖν^^ А л =Х=н> у/
АА-007	хиУ άϊ ' Η
АА-008	СГХ^рр— Υ Υ Υ г к ά Ή^^Ν'''^)
АА-009	Υ Υ Υ Υ Α’ό
АА-010	ΟχχΧϊτ ΤιΓτ κ^Νάϊ Й Ν Ν Α Η

- 11 019974

АА-011	г? А ό N	3 _хКк ''КГ Η	Η Η ,_ν_ Α '0	γΛ Ν'^Ν 5
АА-012	Д	Ί 0	Ύ/σ	С^рз
	А	,Кк 1 4

	ТГ	Η
	г?		Η Η
	А		Χτ	ΟΓ,
АА-013		0	0	Ο	С1
	л	,Ν.
	Ή	''Ά Η	Α
			Η Η Άφ
	А	II 3		СЕ₃
АА-014			^υ г
	[А	,Ν. ' Α
	X X
		Η
	А		Η Η
	А		ΑΥ	06
АА-015	<У	3	0 Д Ε	υ
	Д	Λ	^νη₂
	и	чД
		Η
АА-016	О>	3	и ίχ/Υ Υ >'^{Ν 0} Α.	Υ
	д	.Ν.		Л
		'ιΆ Η	'0
		^Χ5			γ
АА-017	γ	ά	νχ
	А	.Ν. ^χ Α	4
	ч. Д	''КГ Η	/

АА-018	1	ά	γχ	Υ
	Д	,Ν. ^Χ Α	>
		'''ΓΨ Η	ο
АА-019	ο^	ά	УЗ ⁰ Λ	Υ
	А	,Ν. ^Χ Α	ν
	ч. Д	''ГТ Η

			Η Η
		Χτ	^χ Υ Φ	ΥΎ	СЕ₃
		Μ	0		С1
	ό	3
		Η	-Ό

- 12 019974

- 13 019974

АА-031	Л	1 Ν Ν—	<πΛ ν-^ν 5
ό N	Н \ X N	Η -ο	Η $
					СЕ	3
		Д⁴	\|1		д⁴·	ΪΙ
АА-032	(Г	Н ν^Ν-	II	ΤΓΥ Η Ε ,0	Д 1 Ε	[]
		Ν
АА-033	р	Ί 3	и Η_/Υ Υ Υ ο Ρ	X
	ίίΊ	Η /IX.	-.ο	V
	N	\ Ν
АА-034	р	Ί 3	Я Η^Υ γ \^{Ν 0} Г-Х	X
	А	Η _χΐΑ	-.0
	ЧУ N	\ X Ν
АА-035	р Υ	Ί 3	,κγγΠΓ Υ γ ⁰ Α	X
	А	Η /^ΝΎί	-.0	к	9
	А N	4. χΧ Ν
АА-036	Д Ц,	χ 3	,ΙΙΛ/Υ Υ Υ ⁰ /X	X
	(ΪΊ	Η /Ν..	-0	4	9
	N	\ -ίΥ Ν		/
	д	Ί	Η χΝ	Η χζΑ	ΧΥ	.СР₃
АА-037	А	υ я	->0	0		'С1
	γ Ч N	\ Д Ν
	Д Д	Ί	Η χΝ	Η 4χΧ^ΝΧ	ΧΥ	,СЕ₃
АА-038	Ό А	υ¹ Η	-.0	ο X г	υ
	N	X. Д Ν
	Д	Ί	Η χΝ	Η ύ^ν\	ΧΥ	С^з
АА-039	ΐίι	Ύ Η /^Ν'χ₄₅;	-.0	ο X Г	υ
	N	\ Д' Ν
	XV	Η „IX	Й-	Α \τ^Ν	X
АА-040		χΧ		⁰ Α
	м	Η γ..	_χ0	$	9
	\ X N	. Д Ν		/

- 14 019974

АА-041	и N	ό н /Ν. \ Ά N	Η Η ,_ν-	лЛ \τ^Ν 5
	0	С
			Η		Η		СГ₃
						Υγ
		ΑΥ		0		ΑΑ	С1
АА-042		Η
	(А
	ч	•к XX
	N	Ν
			Η		Η		0=3
		ΥΥ				Υγ
		ΑΥ		0		ΙΑ
АА-043		Η
		„К	-Ο
	ιό
	ч О	-к. Λ
	N	Ν
		Ρ 1	Λ		Η '^ΝΧ		,СР₃
		ΥΥ		Υγ
		υ		0		υ
АА-044
		,Κ	.ΝΗ.
	Л	Α 4γ

	N	^чгг	^χ0
		Η
		>	χΝ-
АА-045		ό	Щ	0=3 С1
		,ίί	^0
	Л
	ч ·<	к χχ
	N	Ν
			Η		Η		,СР₃
АА-046	_п;	ό	ΤΑ
		Η
	ιΓί
		к
	N	Ν
		Ε I	Η		Η		С^з
		Α	Λ		' >	Υγ
	/I	Μ		0		ΑΑ
АА-047	ιό	Ν	^0
	ч Х>	4. Ά
	N	Ν
		Ε
		Ατ	Ν		^<Ν\		СЕ₃
				γγ
		Μ		0		ΑΑ
АА-048	ίΐΊ	Η _χΝ.	ί·⁰				С1
	ч	Α
	N	Ν
		Ρ	Η Χ-Νχ		%
		όί		Υγ
		-χΑ		0		ΑΑ
АА-049
		,ί<	-η
	м
	к А	к Α
	N	Ν
			Η		и		СЕ_Э
		Аг			γγ
				0		ΑΑ
АА-050	А	Α
	Ч А	-4 Д
	N	Ν	Α
		Η

- 15 019974

АА-051	2 I Н	^0 Ч)	α	4ι
и N	Н
		А л	н н /А^А
		Γίί	Α
		м	о /	Μ
АА-052	0	А
	X	>0
	А	Г Ί
		к Ζ
	гГ	N	А
		Н
		Р			к
		Л	н н ,_ν_	ζτ V^м
		дХ	0
АА-053			А\
	ΙίΊ	А
	к X N	к X N	/ 0 /
		Р	н н		Д
		Аг	Α
	о·'	м	⁰ А	Μ
АА-054		.Ν.
	А	г А
	к -У N	\ Α- Ν	АА А
		Р	н н
		Γϊί		Α
		кА	0 Ζ	Μ
АА-055		-А
	А	1^х А
		ν А
	N	N	Ν
			Η
		Р 1	Η Η		,СЕ_Э
		Аг	Α
		м	ο X	Μ
	0		Ε
АА-056	А	А
	к о N	У А N	/ 0 /
		Е			к
		л	Η Η Α	Α >
АА-057	X	аХ	⁰ <
	ίΐΊ	.Ν. г А”	-ΝΗ₂ <γ	Л
	ч X		, /
	N		'0
		Н
		Е			к
		А	Η Η Α	Α Ν ^Ν
		аХ	0
АА-058		н /ГА,	χ^χ
	ΙΪΊ	X у
	Ч -О	х А
	N	N	Вг
		Е			к
		Л	Η Η	Α Αν
АА-059	X	аХ	⁰ гА
	ίίΊ	.к Чу	Д А	Л
	ч X		, /
	N	''ЬТ	'0
		н

- 16 019974

- 17 019974

АА-069	Я А	Η Η χΝ-,Ν. Α	/кАк Ν
N	N Н
	I	5	Η Η '^ΝΑ	Ρ γυ^ν
АА-070
	ίΐΊ	,ГК -α Ί		л
	N	\ Я- N	г
АА-071	) ίίΊ	ά ^/Νί	νΑ °ό
	N	\ А N	υί
		Е	Η Η	А”
		ΓΐΤ
АА-072	<Я А	Н	о Я Ε ^0
	\ 'х' N	^ЧА Η	Α
АА-073	ίΐΊ	ά	-νΑ Я
	N	ч. я Ν	γΎ Да
АА-074	ίίΊ	Ε 6 Η ^.Ьк	анЯ Υ Α /6
	•1 х> кг	Η	Α

АА-075	ιΓί	Ρ Г Α	^\|А+1— Η Η	ΛίΓ V^м
	N	^ЧГГ Η	*° υ
		П
АА-076	ό	Μ· Η у.	ΐ<Ή—< II Η Η \.^Ν χθ Ν
	<ί А N	к Α Ν	к	2
АА-077	Я а (А	Ί υ	оД γ Α'^ν ⁰ Д.
	ό	,Ν. Γ Α	ΑΎ Α	Υ
	N	Η	/ ''Ό

- 18 019974

- 19 019974

АА-088	X	'УчА 0
	Лх
	Ή'''’’’⁴'!'! Н	'0
АА-089	оХ	Ύ<Α
	I н А	.° У
	N N
АА-090	О-	оД А ⁰ А
	Ах,	9
		-О ³°г
	Н
АА-091	У	⁰ А
	Лу	>° и
	ЧА/ н

АА-092	ХтМЧ о А о Д ιίΎ^ΒΥ° V АЛ ^з°’ н
АА-093	Ч Д. X Ν<· А N N А Н
АА-094	АА Χ,Ν Χ^-Ν
АА-095	Р _н / ДА А N N А
АА-096	АХ А N N А

- 20 019974

АА-097	I Н Н 7 СЛ н
АА-098	₀А о а СЛ ^/О н
АА-099	Ауйуук О Ν-Ν СЛ о н
ААД 00	ί н н П Дгсг (Ζ1 -х н

По существу, очищенные формы.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к соединениям ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию, по существу, в очищенной форме и/или в форме, по существу, не содержащей примесей.

Согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма составляет по меньшей мере 50 мас.%, например по меньшей мере 60 мас.%, например по меньшей мере 70 мас.%, например по меньшей мере 80 мас.%, например по меньшей мере 90 мас.%, например по меньшей мере 95 мас.%, например по меньшей мере 97 мас.%, например по меньшей мере 98 мас.%, например по меньшей мере 99 мас.%.

Если не указано иное, по существу, очищенная форма относится к соединению в любой стереоизомерной или энантиомерной форме. Например, согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма относится к смеси стереоизомеров, т.е. очищенной по отношению к другим соединениям. Согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма относится к одному стереоизомеру, например оптически чистому стереоизомеру. Согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма относится к смеси энантиомеров. Согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма относится к эквимолярной смеси энантиомеров (т.е. рацемической смеси, рацемату). Согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма относится к одному энантиомеру, например оптически чистому энантиомеру.

Согласно одному из вариантов реализации примеси присутствуют в количестве не более 50 мас.%, например не более 40 мас.%, например не более 30 мас.%, например не более 20 мас.%, например не более 10 мас.%, например не более 5 мас.%, например не более 3 мас.%, например не более 2 мас.%, например не более 1 мас.%.

Если не указано иное, примеси относится к другим соединениям, т.е. к соединениям, отличным от стереоизомеров или энантиомеров. Согласно одному из вариантов реализации примеси относится к другим соединениям и другим стереоизомерам. Согласно одному из вариантов реализации примеси относится к другим соединениям и другому энантиомеру.

Согласно одному из вариантов реализации, по существу, очищенная форма является по меньшей мере на 60% оптически чистой (т.е. 60% соединения в молярном соотношении представляет собой целевой стереоизомер или энантиомер, а 40% представляет собой нецелевой стереоизомер или энантиомер), например по меньшей мере на 70% оптически чистой, например по меньшей мере на 80% оптически чистой, например по меньшей мере на 90% оптически чистой, например по меньшей мере на 95% оптически чистой, например по меньшей мере на 97% оптически чистой, например по меньшей мере на 98% оптически чистой, например по меньшей мере на 99% оптически чистой.

Изомеры.

Некоторые соединения могут существовать в виде одной или нескольких конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, атропоизомерных, стереоизомерных, таутомерных, конформационных или аномерных форм, включая, но не ограничиваясь ими, цис- и трансформы; Е- и Ζ-формы; с-, ΐ- и г-формы; эндо- и экзоформы; К-, 8- и мезоформы; И- и Ь-формы; й- и 1

- 21 019974 формы; (+)- и (-)-формы; кето-, енол- и енолятформы; син- и антиформы; синклинальные и антиклинальные формы; α- и β-формы; аксиальные и экваториальные формы; формы ванна, кресла, твист, конверт и полукресло и комбинации указанных форм, здесь и далее обобщенно упоминаемых как изомеры (или изомерные формы).

Следует отметить, что за исключением обсуждаемых ниже таутомерных форм из термина изомеры согласно настоящему описанию специально исключены структурные изомеры (или изомеры строения) (т.е. изомеры, которые отличаются соединениями между атомами, а не только расположением атомов в пространстве). Например, указание метоксигруппы, -ОСН₃, не следует рассматривать как указание ее структурного изомера, гидроксиметильной группы -СН₂ОН. Аналогично, указание ортохлорфенила не следует рассматривать как указание его структурного изомера, метахлорфенила. Однако указание класса структур вполне может включать структурно изомерные формы, попадающие в указанный класс (например, С_1-7алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и параметоксифенил).

Вышеуказанное исключение не относится к таутомерным формам, например кето-, енол- и енолятформам, таким как, например, следующие таутомерные пары: кето/енол (показана ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол, Ν-нитрозо/гидроксиазо и нитро/ацинитро.

V .0	X	,он	н*	X	.О’
с-с	,с=с.	__	с=с
Ϊ ⁴		X	н⁺	/	X
кето	енол		енолят

Следует отметить, что в термин изомер специально включены соединения с одним или несколькими изотопными замещениями. Например, Н может находиться в любой изотопной форме, включая ¹Н, Н (Ό) и Н (Т); С может находиться в любой изотопной форме, включая С, С и С; О может находиться в любой изотопной форме, включая ¹⁶О и ¹⁸О; и т.п.

Если не указано иное, указание конкретного соединения включает все такие изомерные формы, включая смеси (например, рацемические смеси) указанных форм. Способы получения (например, асимметрический синтез) и разделения (например, дробная кристаллизация и хроматографические методы) указанных изомерных форм либо известны в данной области техники, либо легко могут быть получены путем адаптирования способов, приведенных в настоящем описании, или известных способов, известным образом.

Соли.

Может быть удобно или желательно получать, очищать и/или обрабатывать соответствующую соль соединения, например фармацевтически приемлемую соль. Примеры фармацевтически приемлемых солей обсуждаются в Вегде е1 а1., 1977, РйаттасеиИсаПу Ассер1аЬ1е 8а11§. 1. Рйатт. 8οΐ., Уо1. 66, рр. 1-19.

Например, если соединение обладает анионной природой или содержит функциональную группу, которая может образовывать анион (например, -СООН может существовать в виде -СОО^-), соль может быть образована подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как №' и К⁺, щелочно-земельные катионы, такие как Са²⁺ и Мд²⁺, и другие катионы, такие как А1⁺³. Примеры подходящих органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (т.е. ΝΗ4⁺) и замещенные ионы аммония (например, ΝΗΥ', СН2К₂', ΝΗΒ₃', ΝΒ.β). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером обычного четвертичного аммониевого иона является Ν(ί.Ή₃).β.

Если соединение имеет катионную природу или содержит функциональную группу, которая может образовывать катион (например, -ΝΗ₂ может существовать в виде -ΝΗ₃ ⁺), соль может быть образована подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих неорганических кислот: соляной, бромисто-водородной, йодисто-водородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой.

Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих органических кислот: 2-ацетоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспарагиновой, бензойной, камфорсульфоновой, коричной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфоновой, этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутамовой, гликолевой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изэтионовой, молочной, лактобионовой, лауриловой, малеиновой, яблочной, метансульфоновой, муциновой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфоновой, пропионовой, пировиноградной, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, виннокаменной, толуолсульфоновой и валериановой. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.

- 22 019974

Если не указано иное, указание конкретного соединения также включает солевые формы указанного соединения.

Химически защищенные формы.

Может быть удобно или желательно получать, очищать и/или обрабатывать соединение в химически защищенной форме. Термин химически защищенная форма, используемый в настоящем описании в общеупотребительном в области химии смысле, относится к соединению, в котором одна или несколько реакционноспособных функциональных групп защищены от нежелательных химических реакций в определенных условиях (например, рН, температура, излучение, растворитель и т.п.). На практике используют широкоизвестные химические способы для того, чтобы обратимо сделать нереакционноспособной функциональную группу, которая иначе была бы реакционноспособной в определенных условиях. В химически защищенной форме одна или несколько реакционноспособных функциональных групп находится в форме защищенной или защитной группы (также известной как маскируемая или маскирующая группа или блокированная или блокирующая группа). Благодаря защите реакционноспособной функциональной группы можно осуществлять реакции, в которых участвуют другие незащищенные реакционноспособные функциональные группы, не воздействуя при этом на защищенную группу; защитные группы можно удалить обычно на последующей стадии, по существу, не затрагивая остальную часть молекулы. См., например, РгоЮебуе Сгоирк ίη Огдаше §уп1йе818 (Т. Сгееп апб Р. ХУиК 3гб Εάίΐίοη; ιοίιη У11еу апб 8опк, 1999).

Широкий спектр подобных способов защиты, блокирования или маскировки широко используется и хорошо известен в органическом синтезе. Например, соединение, содержащее две неэквивалентные реакционноспособные функциональные группы, каждая из которых может вступать в реакцию при определенных условиях, можно превратить в производное, чтобы сделать одну из функциональных групп защищенной и вследствие этого нереакционноспособной в определенных условиях; защищенное таким образом соединение можно использовать в качестве реагента, содержащего фактически только одну реакционноспособную функциональную группу. После завершения целевой реакции (с участием другой функциональной группы) с защищенной группы можно снять защиту, чтобы вернуть ей ее изначальные функциональные свойства.

Например, гидроксильную группу можно защитить в виде простого эфира (-ОК) или сложного эфира (-ОС(=О)К), например в виде трет-бутилового простого эфира; бензилового, бензгидрилового (дифенилметилового) или тритилового (трифенилметилового) простого эфира; триметилсилилового или третбутилдиметилсилилового простого эфира; или ацетилового сложного эфира (-ОС(=О)СН₃, -ОАс).

Например, альдегидную или кетонную группу можно защитить в виде ацеталя (К-СН(ОК)₂) или кеталя (К₂С(ОК)₂) соответственно, в которых карбонильная группа (>С=О) превращена в диэфирную (>С(ОК)₂), путем взаимодействия, например, с первичным спиртом. Альдегидную или кетонную группу легко регенерировать путем гидролиза с использованием большого избытка воды в присутствии кислоты.

Например, аминную группу можно защитить, например, в виде амида (-ЛКСО-К) или уретана (-ЛЕСО-ОК), например в виде метиламида (-ЛНСО-СН₃); бензилоксиамида (-ХНСО-ОСН₂С₆Н₅. -ΝΗСЬх); т-бутоксиамида (-ЛНСО-ОС(СН₃)₃, -ΝΗ-Вое); 2-бифенил-2-пропоксиамида (-ЛНСООС(СН₃)₂С₆Н₄С₆Н₅, -ЛН-Врое), 9-флуоренилметоксиамида (-ЛН-Етое), 6-нитровератрилоксиамида (-ЛН-Луое), 2-триметилсилилэтилоксиамида (-ЛН-Теое), 2,2,2-трихлорэтилоксиамида (-ЛН-Тгое), аллилоксиамида (-ЛН-А11ое), 2-(-фенилсульфонил)этилоксиамида (-ЛН-Ркее); или в подходящих случаях (например, циклические амины) в виде радикала нитроксида (>Л-О·).

Например, карбоксильную группу можно защитить в виде сложного эфира, например в виде С_1-7алкилового сложного эфира (например, метилового сложного эфира, трет-бутилового сложного эфира); С_1-7галоалкилового сложного эфира (например, С_1-7тригалоалкилового сложного эфира); три-С_1-7алкилсилил-С_1-7алкилового сложного эфира или С_5-20арил-С_1-7алкилового сложного эфира (например, бензилового сложного эфира, нитробензилового сложного эфира); или в виде амида, например в виде метиламида.

Например, тиольную группу можно защитить в виде тиоэфира (-8К), например в виде бензилового тиоэфира; в виде ацетамидометилового тиоэфира (-8-СН₂ЛНС(=О)СН₃).

Пролекарства.

Может быть удобно или желательно получать, очищать и/или обрабатывать соединение в виде пролекарства. Термин пролекарство в настоящем описании относится к соединению, которое, метаболизируясь (например, ш У1уо), превращается в целевое активное соединение. Обычно пролекарство неактивно или менее активно, чем целевое активное соединение, но может обеспечивать преимущества с точки зрения переработки, введения или метаболических свойств.

Например, некоторые пролекарства представляют собой сложные эфиры активного соединения (например, физиологически приемлемые метаболически неустойчивые сложные эфиры). В процессе метаболизма сложноэфирная группа (-С(=О)ОК) отщепляется с образованием активного лекарственного средства. Подобные сложные эфиры можно получить этерификацией, например, любой из групп карбоновой кислоты (-С(=О)ОН) в исходном соединении, при помощи, если необходимо, предварительной защиты любых других реакционноспособных групп, присутствующих в исходном соединении, с последующим снятием защиты, если необходимо.

- 23 019974

Также некоторые пролекарства активируются ферментативно с образованием активного соединения или соединения, которое, подвергаясь дальнейшим химическим реакциям, приводит к образованию активного соединения (например, как в ЛОЕГТ, СЭЕЙТ, ЫОЕГТ и т.д.). Например, пролекарство может представлять собой производное сахара или другой гликозидный конъюгат или может представлять собой сложноэфирное производное аминокислоты.

Химический синтез.

В настоящем описании приведены некоторые способы химического синтеза соединений ΡΌΡ8 согласно настоящему изобретению. Указанные и/или другие широкоизвестные способы можно модифицировать и/или адаптировать известными путями для облегчения синтеза дополнительных соединений в рамках настоящего изобретения.

Композиции.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей соединение ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей соединение ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

Применения.

Соединения согласно настоящему описанию подходят для применения, например, при лечении заболеваний и нарушений, которые облегчаются путем подавления КАР (например, В-КАР), например, таких как пролиферативные нарушения, рак и т.д.

Применение способов подавления КАР (например, В-КАР).

Один из аспектов настоящего изобретения относится к способу подавления функции КАР (например, В-КАР), ίη νίίτο или ίη νίνο, включающему приведение КАР (например, В-КАР) в контакт с эффективным количеством соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к способу подавления функции КАР (например, В-КАР) в клетке, ίη νίίτο или ίη νίνο, включающему приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию.

Согласно одному из вариантов реализации указанный способ осуществляют ίη νίίτο.

Согласно одному из вариантов реализации указанный способ осуществляют ίη νίνο.

Средний специалист в данной области техники способен без труда определить, является ли и/или в какой степени рассматриваемое соединение ингибитором функции КАР (например, В-КАР). Подходящие тесты для определения подавления функции КАР (например, В-КАР) приведены в настоящем описании и/или известны в данной области техники.

Исследования В-КАР.

Активность киназы В-гаГ измеряли при помощи 4-уровневого каскадного ферментного теста, подобного тому, который описан Мата15 К., еί а1., 1997, 1. Бю1. СЬет, νοί. 272, рр. 4378-4383. В-КаГ, содержащая мутацию ν600Ε (Оау1е5, Н., еί а1., 2002, ИаШге, νοί. 417, рр. 949-954) и Ν-концевую метку МЭКС8Н6, экспрессировали в клетках 8Р9 насекомых. Растворимые в поверхностно-активном веществе экстракты указанных клеток разбавляли 1:100 смесью для анализа, содержащей С8Т-МЕК-Н6 (6,5 мкг/мл) и С8Т-ЕКК-Н6 (100 мкг/мл) в буферном растворе, содержащем 800 мкМ АТФ и соответствующие концентрации ингибитора или разбавителя в качестве контроля. Полученную смесь инкубировали до 10 мин при 30°С для активации ЕКК зависимым от В-КаГ образом в каскаде. Затем реакцию останавливали добавлением 20 мМ ЭДТА. Затем определяли степень активации С8Т-ЕКК путем добавления части указанной погашенной реакционной смеси к дополнительной реакционной смеси, содержащей МСБ и 100 мкМ АТФ/γ [³²Р]АТФ. После 12-минутного инкубирования при 30°С определяли включение [³²Р] в субстрат МСБ, как меру активности В-гаГ, путем осаждения фосфорной кислотой и выделения путем фильтрования через фосфоцеллюлозную бумагу р81. % подавления активности киназы В-гаГ вычисляли и наносили на график для определения концентрации исследуемого соединения, необходимой для подавления 50% активности киназы В-гаГ (1С₅₀).

Как вариант, активность киназы В-гаГ измеряли при помощи другого 4-уровневого каскадного ферментного теста. В-КаГ, содержащая мутацию ν600Ε (Оау1е5, Н., еί а1., 2002, ИаШге, νοί. 417, рр. 949-954) и Ν-концевую метку МПКС8Н6, экспрессировали в клетках 8Р9 насекомых. Растворимые в поверхностно-активном веществе экстракты указанных клеток разбавляли 1:250 смесью для анализа, содержащей С8Т-МЕК-Н6 (25 мкг/мл), С8Т-ЕКК-Н6 (281,25 мкг/мл) и МСБ в буферном растворе, содержащем соответствующие концентрации ингибитора или разбавителя в качестве контроля. Добавляли 0,03 мкл (100 мкМ) АТФ и инкубировали полученную смесь до 10 мин при 30°С для активации ЕКК зависимым от ВКаГ образом в каскаде. Затем определяли степень активации С8Т-ЕКК путем добавления 0,033 мкл (100 мкМ) НОТ ³²Ра. После 10-минутного инкубирования при 30°С реакцию останавливали путем выделения части реакционной смеси на фосфоцеллюлозной бумаге р81 и погружения указанной бумаги в 0,4% ортофосфорную кислоту. Включение [³²Р] в субстрат МСБ, как меру активности В-гаГ, определяли при по

- 24 019974 мощи счетчика Раскагб Сегпекоу соип!ег. % подавления активности киназы В-гаГ вычисляли и наносили на график для определения концентрации исследуемого соединения, необходимой для подавления 50% активности киназы В-гаГ (1С₅₀).

Исследование С-ВАР.

С-гаГ (человека) разбавляли в 10х с получением рабочего раствора в 50 мМ Трис рН 7,5, 0,1 мМ ЭГТА, 0,1 мМ ванадата натрия, 0,1% β-меркаптоэтанола, 1 мг/мл БСА. Одна единица равнялась включению 1 нмоль фосфата в минуту в миелиновый основной белок за минуту. В конечном реакционном объеме 25 мкл инкубировали с-гаГ (5-10 мЕд) с 25 мМ Трис рН 7,5, 0,02 мМ ЭГТА, 0,66 мг/мл миелинового основного белка, 10 мМ ацетата магния, [у-³³Р-АТФ] (специфическая активность прибл. 500 распадов в мин/пмоль, концентрация по необходимости) и соответствующими концентрациями ингибитора или разбавителя в качестве контроля. Реакцию инициировали добавлением Мд²+[у-³³Р-АТФ]. После инкубирования в течение 40 мин при комнатной температуре реакцию останавливали добавлением 5 мкл 3% раствора фосфорной кислоты. 10 мкл реакционной смеси наносили на фильтровальную подложку Р30 и промывали 3 раза по 5 мин в 75 мМ фосфорной кислоте и один раз в метаноле с последующим высушиванием и подсчетом для определения активности С-гаГ. % подавления активности киназы С-гаГ вычисляли и наносили на график для определения концентрации исследуемого соединения, необходимой для подавления 50% активности киназы С-гаГ (1С₅₀).

Селективность.

Согласно одному из вариантов реализации соединение РИР8 селективно подавляет одну ВАР (например, В-ВАР) по сравнению с другой ВАР (например, А-ВАР и/или С-ВАР).

Например, согласно одному из вариантов реализации отношение величины 1С₅₀ для В-ВАР к величине 1С₅₀ для другой ВАР (например, А-ВАР и/или С-ВАР) составляет по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 100, наиболее предпочтительно по меньшей мере 1000.

Применение в способах подавления пролиферации клеток и т.д.

Соединения РИР8 согласно настоящему описанию, например, (а) регулируют (например, подавляют) пролиферацию клеток; (б) подавляют развитие клеточного цикла; (в) стимулируют апоптоз или (г) обеспечивают комбинацию одного или нескольких из указанных действий.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к способу регулирования (например, подавления) пролиферации клеток (например, пролиферации клетки), подавления развития клеточного цикла, стимуляции апоптоза или сочетанию одного или нескольких из указанных действий ш У1!го или ш у|уо, включающему приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством соединения РИР8 согласно настоящему описанию.

Согласно одному из вариантов реализации указанный способ представляет собой способ регулирования (например, подавления) пролиферации клеток (например, пролиферации клетки) ш νίΙΐΌ или ш νίνΌ, включающий приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством соединения РИР8 согласно настоящему описанию.

Согласно одному из вариантов реализации указанный способ осуществляют ш νίΙΐΌ.

Согласно одному из вариантов реализации указанный способ осуществляют ш у|уо.

Согласно одному из вариантов реализации соединение РИР8 представлено в виде фармацевтически приемлемой композиции.

Можно воздействовать на любой тип клеток, включая, но не ограничиваясь ими, клетки легкого, желудочно-кишечного тракта (включая, например, кишечник, толстую кишку), груди (молочной железы), яичника, простаты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, мозга и кожи.

Средний специалист в данной области техники легко сможет определить, является или нет исследуемое соединение регулятором (например, ингибитором) пролиферации клеток и т.д. Например, тесты, которые легко можно использовать для оценки активности, которой обладает конкретное соединение, приведены в настоящем описании.

Например, образец клеток (например, из опухоли) можно вырастить ш νίΙΐΌ, привести указанное соединение в контакт с указанными клетками и наблюдать действие указанного соединения на указанные клетки. В качестве примера действия можно определять морфологический статус клеток (например, живые или мертвые и т.д.). Если обнаружено, что соединение оказывает влияние на клетки, это можно использовать как прогностический или диагностический маркер эффективности соединения в способах лечения пациента, являющегося носителем клеток того же клеточного типа.

Применение в терапевтических способах.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению РИР8 согласно настоящему описанию для применения в способе лечения человека или животного с помощью терапии.

Применение для получения лекарственных средств.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения РИР8 согласно настоящему описанию для получения лекарственного средства для применения при лечении.

Согласно одному из вариантов реализации указанное лекарственное средство содержит соединение РИР8.

- 25 019974

Способы лечения.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, включающему введение пациенту, нуждающемуся в указанном лечении, терапевтически эффективного количества соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию предпочтительно в виде фармацевтической композиции.

Состояния, подвергаемые лечению - состояния, облегчаемые подавлением КАР.

Согласно одному из вариантов реализации (например, применения в способах терапии, применения для получения лекарственных средств, способов лечения) лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения, характеризующегося повышающей регуляцией и/или активацией КАР (например, ВКАР) и/или облегчаемого подавлением КАР (например, В-КАР).

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение рака, характеризующегося повышающей регуляцией и/или активацией КАР (например, В-КАР) и/или облегчаемого подавлением КАР (например, В-КАР).

Состояния, подвергаемые лечению - состояния, облегчаемые подавлением РТК.

Согласно одному из вариантов реализации (например, применения в способах терапии, применения для получения лекарственных средств, способов лечения) лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения, характеризующегося повышающей регуляцией и/или активацией рецепторной тирозинкиназы (РТК) и/или облегчаемого подавлением рецепторной тирозинкиназы (РТК). Примеры РТК включают ФРФ-Р, Т1е, СЭФР-Р и/или Ерб, например ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, Т1е2, СЭФР-Р2 и/или ЕрбВ2.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение рака, характеризующегося повышающей регуляцией и/или активацией рецепторной тирозинкиназы (РТК), и/или облегчаемого подавлением рецепторной тирозинкиназы (РТК).

Состояния, подвергаемые лечению - состояния, характеризующиеся ангиогенезом.

Согласно одному из вариантов реализации (например, применения в способах терапии, применения для получения лекарственных средств, способов лечения) лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения, характеризующегося несоответствующим, избыточным и/или нежелательным ангиогенезом (в качестве противоангиогенных средств). Примеры подобных заболеваний обсуждаются в настоящем описании.

Состояния, подвергаемые лечению - пролиферативные нарушения и рак.

Соединения ΡΌΡ8 подходят для применения при лечении пролиферативных нарушений (в качестве противопролиферативных средств), рака (в качестве противораковых средств) и т.д.

Согласно одному из вариантов реализации (например, применения в способах терапии, применения для получения лекарственных средств, способов лечения) лечение представляет собой лечение пролиферативного нарушения.

Термин пролиферативное нарушение в настоящем описании относится к нежелательной или неконтролируемой пролиферации избыточных или патологических клеток, которая является нежелательной, такой как неопластический или гиперпластический рост.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение пролиферативного нарушения, характеризующегося доброкачественной, предраковой или злокачественной клеточной пролиферацией, включая, но не ограничиваясь ими, неоплазмы, гиперплазии и опухоли (например, гистоцитома, глиома, астроцитома, остеома), рак (см. ниже), псориаз, заболевания костей, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей), легочный фиброз, атеросклероз, пролиферацию клеток гладкой мускулатуры в кровеносных сосудах, такую как стеноз или рестеноз после ангиопластики.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение рака.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение: рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, рака органов желудочно-кишечного тракта, рака желудка, рака кишечника, рака толстой кишки, рака прямой кишки, колоректального рака, рака щитовидной железы, рака груди, рака яичника, рака эндометрия, рака простаты, рака яичка, рака печени, рака почки, почечноклеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы, рака мозга, глиомы, саркомы, остеосаркомы, рака кости, рака кожи, сквамозного рака, саркомы Капоши, меланомы, злокачественной меланомы, лимфомы или лейкемии.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение карциномы, например карциномы мочевого пузыря, груди, толстой кишки (например, колоректальных карцином, таких как аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), почки, эпидермиса, печени, легкого (например, аденокарцинома, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточные карциномы легкого), пищевода, желчного пузыря, яичника, поджелудочной железы (например, карцинома экзокринной поджелудочной железы), желудка, шейки матки, щитовидной железы, простаты, кожи (например, сквамозноклеточная карцинома);

опухоли кроветворной ткани лимфоидного происхождения, например лейкемии, острой лимфоцитарной лейкемии, В-клеточной лимфомы, Т-клеточной лимфомы, лимфомы Ходжкина, нехожкиндской лимфомы, лейкоза ворсистых клеток или лимфомы Буркетта;

опухоли кроветворной ткани миелоидного происхождения, например острой и хронической миело

- 26 019974 генных лейкемий, миелопластического синдрома или промиелоцитарной лейкемии;

опухоли мезенхимного происхождения, например фибросаркомы или рабдомиосаркомы;

опухоли центральной или периферической нервной системы, например астроцитомы, нейробластомы, глиомы или шванномы;

меланомы; семиномы; тератокарциномы; остеосаркомы; пигментной ксеродермы; кератоакантомы; фолликулярного рака щитовидной железы или саркомы Капоши.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение видов рака, характеризующихся солидными опухолями.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение меланомы или злокачественной меланомы.

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение колоректального рака.

Противораковое действие может возникать по одному или нескольким механизмам, включая, но не ограничиваясь ими, регулирование пролиферации клеток, подавление развития клеточного цикла, подавление ангиогенеза (образования новых кровеносных сосудов), подавление метастазирования (распространения опухоли из места ее образования), подавление инвазии (распространения опухолевых клеток в соседние нормальные структуры) или стимуляции апоптоза (программируемой гибели клеток). Соединения РЭР8 согласно настоящему изобретению можно применять для лечения указанных в настоящем описании видов рака вне зависимости от обсуждаемых в настоящем описании механизмов.

Состояния, подвергаемые лечению - пролиферативные нарушения и рак, связанные с ВАР.

Виды рака, например, с активирующими мутациями гак, гаГ и РЭФР или со сверхэкспрессией гак, гаГ и РЭФР, включая любые изоформы указанных белков, могут быть особенно чувствительны к ингибиторам активности ВАР (например, В-ВАР). Пациенты с активирующими мутациями ВАР (например, ВВАР) могут также получать особую пользу от лечения ингибиторами активности ВАР (например, ВВАР). Виды рака с другими отклонениями, приводящими к повышающему регулированию сигнального пути гаГ-МЕК-ЕВК, могут также быть особенно чувствительны к лечению ингибиторами активности ВАР (например, В-ВАР). Примеры подобных отклонений включают конститутивную активацию рецептора фактора роста, сверхэкспрессию одного или нескольких рецепторов факторов роста и сверхэкспрессию одного или нескольких факторов роста.

Согласно одному из вариантов реализации (например, применения в способах терапии, применения для получения лекарственных средств, способов лечения) лечение представляет собой лечение пролиферативного нарушения, указанного выше, например рака, характеризующегося:

(а) активирующими мутациями гак или гаГ;

(б) повышающей регуляцией гак или гаГ;

(в) повышающей регуляцией сигнального пути гаГ-МЕК-ЕВК;

(г) повышающей регуляцией рецепторов факторов роста, таких как ЕВВВ2 и РЭФР.

Согласно одному из вариантов реализации пролиферативное нарушение характеризуется присутствием клеток со сверхэкспрессией ВАР (например, В-ВАР) или экспрессией или сверхэкспресией мутантной гаГ (например, В-ВАР). Согласно одному из вариантов реализации пролиферативное заболевание характеризуется присутствием клеток со сверхэкспрессией гаГ (например, В-ВАР). Согласно одному из вариантов реализации пролиферативное нарушение характеризуется присутствием клеток с экспрессией или сверхэкспрессией мутантной ВАР (например, В-ВАР). Согласно одному из вариантов реализации пролиферативное нарушение характеризуется присутствием клеток со сверхэкспрессией ВАР (например, В-ВАР) или сверхэспрессией мутантной ВАР (например, В-ВАР) по сравнению с соответствующими нормальными клетками. Согласно одному из вариантов реализации сверхэкспрессия характеризуется коэффициентом 1,5, 2, 3, 5, 10 или 20.

Согласно одному из вариантов реализации (например, применения в способах терапии, применения для получения лекарственных средств, способов лечения), лечение представляет собой лечение заболевания или нарушения, связанного с мутированными формами ВАР (например, В-ВАР), такими как, например, мутации, описанные в Vаη, Р., е! а1., 2004, Се11, Уо1. 116, рр. 855-867 и §!га!!оп е! а1., 2003, опубликованной международной заявке на патент № νθ 03/056036.

Состояния, подвергаемые лечению - воспаление и т.д.

Соединения РЭР8 подходят для применения для лечения нарушений, связанных с воспалением (в качестве противовоспалительных средств) и т.д.

Функционирование воспалительных клеток контролируется многими факторами, действие которых опосредуется различными путями сигнальной трансдукции. Хотя некоторые ключевые воспалительные функции опосредуются киназой р38 Мар (например, высвобождение ФНО), другие функции опосредуются другими путями. Путь гаГ-МЕК-ЕВК, в частности, является важным активирующим и пролиферативным сигналом во многих воспалительных клетках. В- и Т-лимфоциты, в частности, требуют активации пути гаГ-МЕК-ЕВК для клональной экспансии и выработки популяций эффекторов (см., например, Сап!ге11, О.А., 2003, 1ттипо1 Веν.. Уо1. 192, рр. 122-130; Оепо!, Е. апб Сап!ге11, О.А., 2000, Сигг. Орт. 1ттипо1., Уо1. 12(3), рр. 289-294).

- 27 019974

Согласно одному из вариантов реализации лечение представляет собой лечение воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, остеоартрит, ревматоидный спондилит, подагрический артрит, травматический артрит, краснушный артрит, псориатический артрит, и другие артритические состояния; болезнь Альцгеймера, синдром токсического шока, воспалительная реакция, вызванная эндотоксином или воспалительное заболевание кишечника; туберкулез; атеросклероз; мышечная дегенерация; синдром Рейтера; подагра; острый синовит; сепсис; септический шок; эндотоксический шок; грамотрицательный сепсис; респираторный дистресс-синдром у взрослых; церебральная малярия; хроническое воспалительное заболевание легких; силикоз; легочный саркоидоз; болезни резорбции кости; реперфузионное повреждение; реакция трансплантат-против-хозяина; отторжения аллотрансплантатов; лихорадки и миалгии, вызванные инфекциями, такими как грипп, кахексия, особенно кахексия, вторичная по отношению к инфекции или злокачественности, кахексия, вторичная к синдрому приобретенного иммунодефицита (СПИД); СПИД; САК (СПИД-ассоциированный комплекс); образование келоидов; образование рубцовой ткани; болезнь Крона; язвенный колит; лихорадка; хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ); острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС); астма; легочный фиброз; бактериальная пневмония.

Согласно одному предпочтительному варианту реализации лечение представляет собой лечение артритических состояний, включая ревматоидный артрит и ревматоидный спондилит; воспалительного заболевания кишечника, включая болезнь Крона и язвенный колит и хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).

Согласно одному предпочтительному варианту реализации лечение представляет собой лечение воспалительного нарушения, характеризующегося пролиферацией Т-клеток (активацией и ростом Тклеток), например отторжение ткани трансплантата, эндотоксический шок и гломерулонефрит.

Скрининг.

Перед лечением пациент может проходить скрининг для определения, является ли заболевание или нарушение, которым страдает или может страдать указанный пациент, одним из заболеваний, чувствительных к лечению соединением, подавляющим активность КАР (например, В-КАР) или обладающим активностью против РТК (например, ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, СЭФР-Р2, Τ^2, Нр11В2).

Например, биологический образец, взятый у пациента, можно анализировать для определения, является ли заболевание или нарушение, такое как рак, которым страдает или может страдать указанный пациент, одним из заболеваний, характеризующихся повышенной экспрессией или активацией КАР (например, В-КАР), или РТК (например, ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, СЭФР-Р2, Τ^2, £131^2), или же является результатом активирующей мутации. Следовательно, пациента можно подвергнуть диагностическому исследованию для определения маркерной характеристики сверхэкспрессии или активации КАР (например, В-КАР), или РТК (например, ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, СЭФР-Р2, Τκ2, £131^2)- или мутации указанных белков.

В настоящем описании термин маркер включает генетические маркеры (включая, например, измерение состава ДНК для идентификации мутаций гаГ, гак, МЬК, ΕΒΚ или фактора роста, такого как ΕКВВ2 или РЭФР) и маркеры, характерные для повышающей регуляции гаГ, гак, МΕΚ, ΕΒΚ, рецепторов фактора роста, таких как ΕКВВ2 или РЭФР, включая активность фермента, уровни фермента, состояние фермента (например, фосфорилированный или нет) и уровни мРНК вышеуказанных белков. Способы идентификации и анализа мутаций широко известны. См., например, АпЦсапсег КекеагсИ, 1999, Уо1. 19(4А), рр. 2481-2483; С1т. СНет., 2002, Уо1. 48, р. 428; Сапсег КекеагсИ, 2003, Уо1. 63(14), рр. 3955-3957.

Термин маркер дополнительно включает генетические маркеры, включая, например, измерение состава ДНК для идентификации мутаций РТК, например ФРФ-Р1, ФРФ-Р2, ФРФ-Р3, СЭФР-Р2, Пе2 и ΕрНВ2. Термин маркер также включает маркеры, характерные для повышающей регуляции РТК, включая активность фермента, уровни фермента, состояние фермента (например, фосфорилированный или нет) и уровни мРНК вышеуказанных белков.

Повышающая регуляция включает повышенную экспрессию или сверхэкспрессию, включая амплификацию гена (т.е. многочисленные копии гена), повышенную экспрессию вследствие транскрипционного эффекта, гиперактивность и активацию, включая активацию вследствие мутаций.

Другие опухоли, повышающая регуляция которых протекает через сигнальный путь ^аГ-МΕΚ-ΕКΚ, также могут быть особенно чувствительны к ингибиторам активности КАР (например, В-КАР). Существует ряд тестов, которые могут идентифицировать опухоли, проявляющие повышающую регуляцию в пути ^аГ-МΕΚ-ΕКΚ, включая имеющийся в продаже тест МΕΚ1/2 (МАПК киназа) от СНеткоп Шкта^^1. Повышающая регуляция может быть обусловлена сверхэкспрессией или активацией рецепторов факторов роста, таких как НКВВ2 и РЭФР, или мутантных белков гак или гаГ.

Обычные способы скрининга на сверхэкспрессию, повышающую регуляцию или мутации, включают, но не ограничиваются ими, стандартные способы, такие как полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) или гибридизация т-кйи.

При скрининге с использованием ОТ-ПЦР оценивают уровень мРНК вышеуказанных белков в опухоли путем создания кДНК копии указанной мРНК с последующей амплификацией указанной кДНК посредством ПЦР. Способы амплификации ПЦР, выбор праймеров и условия амплификации хорошо

- 28 019974 известны специалистам в данной области техники. Манипуляции с нуклеиновой кислотой и ПЦР проводят при помощи стандартных способов, описанных, например, в АикиЬе^ Р.М. еί а1., ейк., СиггегИ Ρτοίοοοίκ ίη Мοίесиίа^ Вюкду, 2004 (ίοΐιη \УПеу & δοηκ 1пс.); Ιηηίκ, М.А. еί а1., ейк., ΡΟΗ ΡΓοίοοο15: А Сшйе ίο Ме11юйк амй Арр^а^^. 1990 (Асайетю Ггекк). Методики проведения реакций и манипуляций, в которых участвует нуклеиновая кислота, также описаны в ЗатЬгсюк еί а1., Мοίесиίа^ Скитд: А ^аЬο^аίο^у Маша1, 3гй ейПюг1. 2001 (Сс1й 8ргшд На^г ^аЬο^аίο^у Ггекк). Как вариант, можно применять имеющийся в продаже набор для ОТ-ПЦР (например, ^сЬе Мοίесиίа^ Вюсйетка1к) или методологию, описанную в патентах США №№ 4666828; 4683202; 4801531; 5192659, 5272057, 5882864 и 6218529.

Примером методики гибридизации ίη-κίΐιι может являться флуоресцентная гибридизация ίη κίΐιι (Р18Н) (см., например, Лηде^е^, 1987, Ме111. Еηζутοί., νο1. 152, р. 649). В целом, гибридизация ίη κίΐιι включает следующие основные стадии: (1) фиксация анализируемой ткани; (2) прегибридизационная обработка образца для увеличения доступности целевой нуклеиновой кислоты и уменьшения неспецифического связывания; (3) гибридизация смеси нуклеиновых кислот с получением нуклеиновой кислоты в биологической структуре или ткани; (4) постгибридизационные промывки для удаления фрагментов нуклеиновых кислот, не связанных при гибридизации, и (5) детектирование гибридизованных фрагментов. Зонды, применяемые в подобных целях, обычно помечают, например, радиоизотопами или флуоресцентными репортерами. Предпочтительные зонды являются достаточно длинными, например примерно от 50, 100 или 200 нуклеотидов примерно до 1000 или более нуклеотидов, чтобы обеспечить специфическую гибридизацию с целевой нуклеиновой кислотой(ами) в жестких условиях. Стандартные способы выполнения Р18Н описаны, например, в АикиЬе1, Р.М. еί а1., ейк., СиггегИ Ρτοίο^1κ ίη Мοίесиίа^ Вюкду. 2004 (ίοΐιη \УПеу & δοηκ 1пс.); ВагИей, ίοΐιη М.8., ΗιιοϊΌ^ι^ Ιη 8ίΙιι НуЬ^^й^ζаί^οη: Тес11шса1 Оуегу1е\\·, в Мοίесиίа^ ^^адηοк^к οГ Сапсег. Ме11юйк апй Ρτοίο^Κ 2пй ей. (8епек: Мейюйк ίη Мοίесиίа^ Мейюте). МагсЬ 2004, рр. 77-88 (18ВИ: 1-59259-760-2).

Как вариант, белковые продукты, экспрессированные мРНК, можно исследовать путем иммунохимического анализа срезов опухолей, твердофазного иммуноанализа на микротитрационных планшетах, вестерн-блоттинга, 2-мерного электрофореза на δΌδ-полиакриламидном геле, ЕЫ8А и другими способами, известными в данной области техники, для детектирования конкретных белков. Способы детектирования могут включать применение сайт-специфических антител, таких как фосфо-гаГ, фосфо-ЕКК, фосфо-МЕК или фосфотирозин. Кроме биопсий опухолей можно использовать другие образцы, включающие плевральную жидкость, перитонеальную жидкость, биопсии стула, мокроту, кровь (выделение и обогащение распространяющихся опухолевых клеток).

Кроме того, мутантные формы гаГ, РЭФР или гак можно идентифицировать прямым секвенированием, например, биопсий опухолей, с использованием ПЦР и способов секвенирования продуктов ПЦР непосредственно, например, при помощи способов согласно настоящему описанию. Можно применять указанные и другие широкоизвестные методики детектирования сверхэкспрессии, активации или мутаций.

Также можно измерить отклоняющиеся от нормы уровни белков, таких как гаГ, гак и РЭФР, при помощи обычных ферментных тестов, например тестов на гаГ согласно настоящему описанию.

Альтернативные способы измерения сверхэкспрессии или активации киназ ФРФ-Р, Т1е, СЭФР-Р или Ер1, в частности СЭФР-Р, включая изоформы указанного белка, включают измерение плотности микрососудов. Указанную плотность можно измерить, например, с использованием способов, описанных Огге апй Ρο^γκ, 1999, Ιηί. ί. Самсеи νο1. 84(2), рр. 101-108. Способы исследования также включают применение маркеров; например, в случае СЭФР-Р маркеры включают СЭ31, СЭ34 и СЭ105 (Мп·^ еί а1., 2004, 1. С1т. Ρηΐ1ιο1. νο1. 57(6), рр. 591-597).

Лечение.

Термин лечение в настоящем описании в контексте лечения заболевания или нарушения относится в целом к лечению и терапии как человека, так и животного (например, в ветеринарии), при котором достигается некий желаемый терапевтический эффект, например, подавление развития заболевания или нарушения, и включает уменьшение скорости развития, остановку развития, облегчение симптомов заболевания или нарушения, облегчение заболевания или нарушения и излечение заболевания или нарушения. Также указанный термин включает лечение как профилактическую меру (т.е. профилактику). Например, применение у пациента, у которого еще не развилось заболевание или нарушение, но имеется риск развития заболевания или нарушения, включено в термин лечение.

Например, лечение включает профилактику рака, уменьшение заболеваемости раком, облегчение симптомов рака и т.д.

Термин терапевтически эффективное количество в настоящем описании относится к такому количеству соединения или вещества, композиции или дозированной формы, содержащей соединение, которое эффективно для получения некоторого желаемого терапевтического эффекта, соразмерного с разумным соотношением риск/польза, при введении в соответствии с выбранной схемой лечения.

Комбинированная терапия.

Термин лечение включает комбинированные виды лечения и терапии, при которых комбинируют два или несколько видов лечения или терапии, например, последовательно или одновременно. Например,

- 29 019974 соединения согласно настоящему описанию можно также применять в комбинированной терапии, например, совместно с другими агентами, например цитотоксическими агентами, противораковыми агентами и т.д. Примеры лечения и терапии включают, но не ограничиваются ими, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например, лекарственные средства, антитела (например, как в случае иммунотерапии), пролекарства (например, как в случае фотодинамической терапии, СЭЕРТ, АЭЕРТ и т.д.); хирургию; радиационную терапию; фотодинамическую терапию; генотерапию; и контролируемые режимы питания.

Например, может быть выгодно комбинировать лечение соединением согласно настоящему описанию с одним или несколькими другими (например, 1, 2, 3 или 4) агентами или видами терапии, регулирующими рост клеток или выживаемость или дифференцировку посредством другого механизма, тем самым обеспечивая лечение некоторых других характерных признаков развития рака.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к соединению согласно настоящему описанию в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами, как описано ниже.

Примеры дополнительных терапевтических агентов, которые можно вводить вместе (или одновременно, или в различные периоды времени) с соединениями согласно настоящему описанию, включают:

(а) ингибиторы топоизомеразы I;

(б) антиметаболиты;

(в) агенты, действующие на тубулин;

(г) ингибиторы связывания ДНК и ингибиторы топоизомеразы II;

(д) алкилирующие агенты;

(е) моноклональные антитела;

(ж) антигормоны;

(з) ингибиторы сигнальной трансдукции;

(и) ингибиторы протеасомы;

(к) метилтрансферазы ДНК;

(л) цитокины и ретиноиды.

Конкретная комбинация остается на усмотрение лечащего врача, выбирающего дозировки на основании своих общих знаний и схем дозирования, известных квалифицированному практикующему специалисту.

Агенты (т.е. соединения согласно настоящему описанию плюс один или несколько других агентов) можно вводить одновременно или последовательно, при этом возможно введение по индивидуально изменяемым схемам дозирования и посредством различных путей. Например, при последовательном введении агенты можно вводить через короткие интервалы времени (например, в течение 5-10 мин) или через более длительные интервалы (например, через 1, 2, 3, 4 или более часов один после другого, или даже через более длительные периоды времени, если это необходимо), соразмеряя точную схему дозирования со свойствами терапевтического агента(ов).

Агенты (т.е. соединение согласно настоящему описанию плюс один или несколько других агентов) можно вместе включить в состав единой дозированной формы или как вариант отдельные агенты можно приготовить в виде отдельных составов и представить вместе в виде набора, возможно, вместе с инструкциями по применению указанных агентов.

Другие применения.

Соединения РЭР8 согласно настоящему описанию можно также применять в качестве добавок к культуре клеток для подавления функции КАР (например, В-КАР), например для подавления пролиферации клеток и т.д.

Соединения РЭР8 согласно настоящему описанию можно также применять как часть исследования ίη νίίΓΟ, например, для определения, получит ли рассматриваемый организм-хозяин пользу от лечения рассматриваемым соединением.

Соединения РЭР8 согласно настоящему описанию можно также применять в качестве стандарта, например, в исследовании для идентификации других соединений, других ингибиторов функции КАР (например, В-КАР), других антипролиферативных агентов, других противораковых агентов и т.д.

Наборы.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к набору, содержащему (а) соединение РЭР8 согласно настоящему описанию или композицию, содержащую соединение РЭР8 согласно настоящему описанию, например предпочтительно представленные в подходящем контейнере и/или в подходящей упаковке; и (б) инструкции по применению, например письменные инструкции по введению соединения или композиции.

Письменные инструкции могут также включать список показаний, при которых активный ингредиент является подходящим для лечения.

Пути введения.

Соединение РЭР8 или фармацевтическую композицию, содержащую соединение РЭР8, можно вводить субъекту с помощью любого традиционного пути введения, системно/периферически или местно (например, в месте желаемого действия).

- 30 019974

Пути введения включают, но не ограничиваются ими, пероральный (например, путем приема внутрь); трансбуккальный; сублингвальный; чрескожный (включая, например, при помощи пластыря, повязки и т.д.); чресслизистый (включая, например, при помощи наклейки, пластыря и т.д.); интраназальный (например, при помощи назального спрея); глазной (например, при помощи глазных капель); легочный (например, путем ингаляционной или инсуффляционной терапии с использованием, например, аэрозоля, например, через рот или нос); ректальный (например, при помощи суппозитория или клизмы); вагинальный (например, при помощи пессария); парентеральный, например, путем инъекции, включая подкожную, внутрикожную, внутримышечную, внутривенную, внутриартериальную, внутрисердечную, интратекальную, интраспинальную, внутрикапсульную, субкапсульную, внутриглазничную, внутрибрюшинную, внутритрахеальную, подкожную, внутрисуставную, субарахноидальную и надчревную; путем имплантации депо или резервуара, например подкожно или внутримышечно.

Субъект/пациент.

Субъект/пациент может представлять собой хордовое, позвоночное, млекопитающее, плацентарное млекопитающее, сумчатое (например, кенгуру, вомбат), грызуна (например, морскую свинку, хомяка, крысу, мышь), представителя мышиных (например, мышь), зайцеобразных (например, кролик), птичьих (например, птицу), псовых (например, собаку), кошачьих (например, кошку), лошадиных (например, лошадь), свиных (например, свинья), овечьих (например, овца), бычьих (например, корова), примата, обезьяноподобное (например, обезьяну или человекообразную обезьяну), обезьяну (например, мартышку, бабуина), человекообразную обезьяну (например, гориллу, шимпанзе, орангутанга, гиббона) или человека.

Кроме того, субъект/пациент может находиться в любой из форм своего развития, например в виде плода.

Согласно предпочтительному варианту реализации субъект/пациент представляет собой человека.

Составы.

Хотя соединение ΡΌΡ8 возможно вводить отдельно, предпочтительно представить его в виде фармацевтического состава (например, композиции, препарата, лекарственного средства), содержащего по меньшей мере одно соединение ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию совместно с одним или несколькими другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, фармацевтически приемлемые носители, разбавители, наполнители, адъюванты, наполнители, буферные средства, консерванты, антиокислители, смазывающие вещества, стабилизаторы, солюбилизаторы, поверхностно-активные вещества (например, смачивающие агенты), маскирующие агенты, красители, ароматизаторы и подсластители. Составы могут дополнительно содержать другие активные агенты, например другие терапевтические или профилактические агенты.

Так, согласно настоящему изобретению также предложены фармацевтические композиции, как определено выше, и способы получения фармацевтической композиции, включающие смешивание по меньшей мере одного соединения ΡΌΡ8 согласно настоящему описанию с одним или несколькими другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, например носителями, разбавителями, формообразующими и т.д. Если состав приготовлен в виде отдельных единиц (например, таблеток и т.д.), каждая единица содержит заранее заданное количество (дозировку) соединения.

Термин фармацевтически приемлемый в настоящем описании относится к соединениям, ингредиентам, материалам, композициям, дозированным формам и т.д., которые с точки зрения обоснованного медицинского суждения подходят для применения в контакте с тканями рассматриваемого субъекта (например, человека), не вызывая чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, и соразмерны с разумным соотношением риск/польза. Каждый носитель, разбавитель, наполнитель и т.д. должен также быть приемлемым с точки зрения совместимости с другими ингредиентами состава.

Подходящие носители, разбавители, наполнители и т.д. можно найти в стандартных фармацевтических пособиях, например Кешшдоп'к Ρба^тасеиΐ^са1 8аепсек, 18111 ебШоп, Маск ΡηΝ^Μ^ Сотрапу, ЕакЮп, Ρа., 1990; и НапбЬоок о£ Ρба^тасеиΐ^са1 Ехар1еп1к, 5111 ебШоп, 2005.

Составы можно приготовить любыми способами, широко известными в области фармацевтики. Указанные способы включают стадию объединения соединения с носителем, представляющим собой один или несколько вспомогательных ингредиентов. В целом, составы готовят путем равномерного и тщательного объединения соединения с носителями (например, жидкими носителями, тонкоизмельченным твердым носителем и т.д.) и затем, если необходимо, придания продукту формы.

Состав можно приготовить с обеспечением быстрого или медленного высвобождения; немедленного, отложенного, замедленного или отсроченного высвобождения или комбинации указанных типов высвобождения.

Составы могут подходящим образом иметь форму жидкостей, растворов (например, водных, неводных), суспензий (например, водных, неводных), эмульсий (например, масло-в-воде, вода-в-масле), эликсиров, сиропов, электуариев, полосканий, капель, таблеток (включая, например, таблетки, покрытые оболочкой), гранул, порошков, леденцов, пастилок, капсул (включая, например, твердые и мягкие жела

- 31 019974 тиновые капсулы), саше, пилюль, ампул, болюсов, суппозиториев, пессариев, тинктур, гелей, паст, мазей, кремов, лосьонов, масел, пен, спреев или аэрозолей.

Составы можно подходящим образом изготовить в виде пластыря, клейкого пластыря, бинта, повязки и т.п., пропитанных одним или несколькими соединениями и, возможно, одним или несколькими другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, включая, например, усилители проникновения, просачивания и поглощения. Составы можно также подходящим образом изготовить в виде депо или резервуара.

Соединение можно растворить, суспендировать или смешать с одним или несколькими другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами. Соединение может быть представлено в липосоме или другой микрочастице, разработанной таким образом, чтобы обеспечить направленное воздействие соединения, например, на компоненты крови или один или несколько органов.

Составы, подходящие для перорального введения (например, путем приема внутрь), включают жидкости, растворы (например, водные, неводные), суспензии (например, водные, неводные), эмульсии (например, масло-в-воде, вода-в-масле), эликсиры, сиропы, электуарии, таблетки, гранулы, порошки, капсулы, саше, пилюли, ампулы, болюсы.

Составы, подходящие для трансбуккального введения, включают полоскания, леденцы, пастилки, а также пластыри, клейкие пластыри, депо и резервуары. Леденцы обычно содержат соединение в ароматизированной основе, обычно сахарозе и гуммиарабике или трагаканте. Пастилки обычно содержат соединение в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и гуммиарабик. Полоскания обычно содержат соединение в подходящем жидком носителе.

Составы, подходящие для сублингвального введения, включают таблетки, леденцы, пастилки, капсулы и пилюли.

Составы, подходящие для перорального чресслизистого введения, включают жидкости, растворы (например, водные, неводные), суспензии (например, водные, неводные), эмульсии (например, масло-вводе, вода-в-масле), полоскания, леденцы, пастилки, а также пластыри, клейкие пластыри, депо и резервуары.

Составы, подходящие для неперорального чресслизистого введения, включают жидкости, растворы (например, водные, неводные), суспензии (например, водные, неводные), эмульсии (например, масло-вводе, вода-в-масле), суппозитории, пессарии, гели, пасты, мази, кремы, лосьоны, масла, а также пластыри, клейкие пластыри, депо и резервуары.

Составы, подходящие для чрескожного введения, включают гели, пасты, мази, кремы, лосьоны и масла, а также пластыри, клейкие пластыри, бинты, повязки, депо и резервуары.

Таблетки можно изготовить обычными средствами, например прессованием или отливкой, возможно, с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки можно изготовить прессованием в подходящем устройстве соединения в свободно текучей форме, такой как порошок или гранулы, возможно, в смеси с одним или несколькими связующими веществами (например, повидоном, желатином, гуммиарабиком, сорбитом, трагакантом, гидроксипропилметилцеллюлозой); наполнителями или разбавителями (например, лактозой, микрокристаллической целлюлозой, гидрофосфатом кальция); смазывающими веществами (например, стеаратом магния, тальком, диоксидом кремния); дезинтегрантами (например, натрия крахмала гликолятом, сшитым повидоном, сшитой натрийкарбоксиметилцеллюлозой); поверхностно-активными, или диспергирующими, или смачивающими веществами (например, лаурилсульфатом натрия); консервантами (например, метил-п-гидроксибензоатом, пропил-пгидроксибензоатом, сорбиновой кислотой); вкусоароматическими добавками; усилителями вкуса и запаха и подсластителями. Литые таблетки можно изготовить путем литья в подходящем устройстве смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть покрыты оболочкой или иметь насечки и могут быть приготовлены таким образом, чтобы обеспечивать замедленное или контролируемое высвобождение содержащегося в указанных таблетках соединения, с использованием, например, гидроксипропилцеллюлозы в различных соотношениях для получения желаемого профиля высвобождения. Таблетки могут иметь оболочку, например, для воздействия на высвобождение, например энтеросолюбильное покрытие, для обеспечения высвобождения в отделах желудочно-кишечного тракта, отличных от желудка.

Мази обычно готовят из соединения и парафиновой или водорастворимой мазевой основы.

Кремы обычно готовят из соединения и кремовой основы типа масло-в-воде. При желании, водная фаза крема может содержать, например, по меньшей мере 30 мас.% многоосновного спирта, т.е. спирта, содержащего две или более гидроксильных группы, такого как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль, и смеси указанных спиртов. Составы для наружного применения могут при желании содержать соединение, улучшающее всасывание или проникновение соединения через кожу или другие пораженные области. Примеры указанных усилителей проникновения через кожу включают диметилсульфоксид и родственные аналоги.

Эмульсии обычно готовят из соединения и масляной фазы, которая может содержать только эмульгатор (иначе известный как эмульгент) или может содержать смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или с жиром и маслом вместе. Предпочтительно гидрофильный эмульгатор входит в

- 32 019974 состав вместе с липофильным эмульгатором, действующим как стабилизатор. Также предпочтительно включать вместе жир и масло. Вместе эмульгатор(ы) со стабилизатором(ами) или без него(них) образуют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и/или жиром образуют так называемую эмульгирующую мазевую основу, которая образует масляную дисперсную фазу кремовых составов.

Подходящие эмульгаторы и стабилизаторы эмульсий включают Твин 60, Спан 80 цетостеариловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия. Выбор подходящих масел или жиров для состава основан на получении желаемых косметических свойств, поскольку растворимость соединения в большинстве масел, которые можно применять в фармацевтических эмульсионных составах, может быть очень низкой. Поэтому крем предпочтительно должен быть нежирным, не образующим пятен и легко смываемым продуктом с подходящей консистенцией, чтобы избежать протекания из тюбиков или контейнеров. Можно применять линейные или разветвленные моно- и диалкиловые сложные эфиры, такие как диизоадипинат, изоцетилстеарат, сложный эфир пропиленгликоля и кокосовых жирных кислот, изопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2-этилгексилпальмитат или смесь разветвленных сложных эфиров, известную как Сгобато1 САР, при этом три последних сложных эфира являются предпочтительными. Их можно применять отдельно или в комбинации, в зависимости от требуемых свойств. Как вариант, можно применять липиды с высокой температурой плавления, такие как белый вазелин, и/или жидкий парафин, или другие минеральные масла.

Составы, подходящие для интраназального введения, в которых носитель представляет собой жидкость, включают, например, назальный спрей, капли в нос или для аэрозольного введения при помощи небулайзера, включая водные или масляные растворы соединения.

Составы, подходящие для интраназального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают, например, составы, представленные в виде крупнодисперсного порошка с размером частиц, например, в диапазоне примерно от 20 примерно до 500 мкм, которые вводят тем же образом, как нюхают табак, т.е. при помощи быстрой ингаляции через носовой ход из контейнера с порошком, располагаемого близко к носу.

Составы для легочного введения (например, при помощи ингаляционной или инсуффляционной терапии) включают составы, представленные в виде аэрозольного спрея в упаковке под давлением с использованием подходящего пропеллента, такого как дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другие подходящие газы.

Составы, подходящие для глазного введения, включают глазные капли, в которых соединение растворено или суспендировано в подходящем носителе, особенно водный раствор соединения.

Составы, подходящие для ректального введения, могут быть представлены в виде суппозитория с подходящей основой, содержащей, например, натуральные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы, например кокосовое масло или салицилат, или в виде раствора или суспензии для лечения при помощи клизмы.

Составы, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спреев, содержащих, помимо соединения, носители, известные в данной области техники в качестве подходящих.

Составы, подходящие для парентерального введения (например, путем инъекции), включают водные или неводные изотонические, апирогенные, стерильные жидкости (например, растворы, суспензии), в которых соединение растворено, суспендировано или представлено иным образом (например, в липосоме или другой микрочастице). Такие жидкости могут дополнительно содержать другие фармацевтически приемлемые ингредиенты, такие как антиоксиданты, буферные вещества, консерванты, стабилизаторы, бактериостатические агенты, суспендирующие агенты, загустители и растворенные вещества, делающие состав изотоническим по отношению к крови (или другой соответствующей физиологической жидкости) предполагаемого реципиента. Примеры наполнителей включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.п. Примеры подходящих изотонических носителей для применения в подобных составах включают хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера или раствор Рингера с лактатом для инъекций. Обычно концентрация соединения в жидкости составляет примерно от 1 нг/мл примерно до 10 мкг/мл, например примерно от 10 нг/мл примерно до 1 мкг/мл. Составы могут быть представлены в однодозовых или многодозовых запечатанных контейнерах, например ампулах и флаконах, и могут храниться в высушенном замораживанием (лиофилизированном) состоянии, требуя только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Растворы и суспензии для инъекций для немедленного применения можно приготовить из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Дозировка.

Для специалиста в данной области техники очевидно, что соответствующие дозировки соединений РИР8 и композиций, содержащих соединения РИР8, могут изменяться от пациента к пациенту. Определение оптимальной дозировки будет в общем случае связано с нахождением оптимального соотношения терапевтической пользы по отношению к любому риску или нежелательным побочным эффектам. Выбранный уровень дозировки будет зависеть от множества факторов, включая, но не ограничиваясь ими, активность конкретного соединения РИР8, путь введения, время введения, скорость выведения соедине

- 33 019974 ния ΡΌΡ8, продолжительность лечения, другие лекарственные средства, соединения и/или материалы, применяемые в комбинации, тяжесть заболевания или нарушения, и вид, пол, возраст, массу, состояние, общее состояние здоровья и предшествующую историю болезни пациента. Количество соединения ΡΌΡ8 и путь введения в конечном итоге будет находиться в компетенции терапевта, ветеринара или лечащего врача, хотя в общем случае дозировку выбирают таким образом, чтобы получить локальные концентрации в месте действия, обеспечивающие желаемый эффект, не вызывая при этом существенных вредных или разрушительных побочных эффектов.

Введение можно осуществлять в виде одной дозы, непрерывно или периодически (например, отдельными дозами через подходящие интервалы) на протяжении курса лечения. Способы определения наиболее эффективных средств и дозировки введения хорошо известны специалистам в данной области техники и могут изменяться в зависимости от состава, применяемого для терапии, цели терапии, целевых клеток, на которые направлено лечение, и субъекта, подвергаемого лечению. Можно осуществлять однократное или многократные введения при уровне и режимах дозирования, определяемых лечащим терапевтом, ветеринаром или клиницистом.

В общем случае, подходящая доза соединения ΡΌΡ8 находится в диапазоне примерно от 10 мкг примерно до 250 мг (более обычно примерно от 100 мкг примерно до 25 мг) на 1 кг массы тела субъекта в сутки. Если соединение представляет собой соль, сложный эфир, амид, пролекарство и т.п., вводимое количество вычисляют на основании исходного соединения с пропорциональным увеличением фактически применяемой массы.

Примеры

Следующие примеры приведены только для иллюстрации настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения, охарактеризованного в настоящем описании.

Химический синтез

В настоящем описании приведены некоторые способы химического синтеза соединений согласно настоящему изобретению. Эти и/или другие широкоизвестные способы можно модифицировать и/или адаптировать известным образом для облегчения синтеза дополнительных соединений в рамках настоящего изобретения.

Описания основных лабораторных способов и методик, подходящих для получения соединений согласно настоящему описанию, приведены в ΥοςοΓδ ΤοχΛοοΚ οί ΡΓαο(ίοα1 Огдашс Сйеш181гу, 51й Εάίΐίοη, 1989 (Εάίΐοτκ: Ригищк, В.8., ΗαηηαίοΓά, А.Е, 8шйй, Ρ.ν.Ο., Та1сйе11, А.К.) (опубликована ^οηдтаηη, ϋΚ).

Способы синтеза пиридиновых соединений, в частности, описаны в Ие^тоС-УсКс СйетМгу. 3гй Εάίΐίοη, 1998, ίονι^, ί.Λ, М1118, К. αηά διηίΐΐι, О.Р. (опубликована СПартаи & Ηα11, υΚ).

Многие соединения согласно настоящему изобретению можно получить через ключевое промежуточное соединение (2), в ароматическое кольцо которого легко можно вводить заместители. Указанное промежуточное соединение можно получить из имеющегося в продаже исходного вещества 4-хлор-3нитропиридин-2-амина (1) и замещенных аминофенолов. Соединения 2 затем селективно защищают по аминогруппе, например, при помощи карбамата Вοс или трифторацетамида с получением промежуточных соединений (3). Промежуточные соединения (3) также можно получить непосредственно из 4-хлор3-нитропиридин-2-амина (1) и N-Вοс-защищенных аминофенолов. Нитрогруппу защищенного промежуточного соединения (3) можно восстановить до аминогруппы при помощи Ρά/С и формиата аммония или водорода до другого ключевого промежуточного диаминосоединения (4). Пример указанного способа проиллюстрирован на следующей схеме 1. На схемах 1-9 и 11 ниже -К^и-5 означает или -(К™¹)^ или конденсированное бензольное кольцо (с образованием группы нафталина), содержащее -(К™¹)

- 34 019974

Отметим, что соединения с замещенными или незамещенными фенильными группами были синтезированы и описаны в настоящем описании. Следующие схемы проиллюстрированы с использованием незамещенного фенила или конкретным образом замещенного фенила, но следует понимать, что указанные способы также подходят для получения соединений с замещенными (или замещенными различным образом) фенильными кольцами.

Пиридопиразиноны можно получить из промежуточного соединения 4 путем взаимодействия с этиоглиоксалятом, этилпируватом или подобными α-кетосложными эфирами. Оба изомера 5 и 6 можно получить при взаимодействии 4 с этилглиоксилатом. Аналогично, два изомера (7 и 8) можно получить при взаимодействии 4 с этилпируватом (К = -Ме), этилтрифторпируватом (К = -СЕ₃), этил-3-бром-2оксопропаноатом (К = -СН₂Вг) или другими возможно замещенными алкил-2-оксосложными эфирами. Аминопиридопиразиноны 9 и 10 можно получить из промежуточного соединения 4 при взаимодействии с этил-2-этокси-2-иминоацетатом. На соотношение двух изомеров можно влиять путем выбора растворителей, чтобы преимущественно образовывался один из изомеров (схема 2).

Схема 2

Снятие защитных групп (3Г) при помощи ТФУК или тетрабутиламмонийфторида (для защитных групп Вое) или аммиака (для трифторацетамида) приводит к получению общих промежуточных соединений 11-16 (схема 3).

- 35 019974

Схема 3

Пиридопиразины 18 можно получить из промежуточного соединения 4 при взаимодействии с глиоксалем или 1,4-диоксан-2,3-диолом с последующим снятием защиты (схема 4).

Схема 4

Пиридопиразиндионы 20 можно получить из промежуточного соединения 4 при взаимодействии с диэтилоксалатом или оксалилхлоридом с последующим снятием защиты (схема 5).

Схема 5

Аминопиридопиразины 25 и 26 можно получить из промежуточных соединений 5 и 6. Карбонильную группу пиразинона можно превратить в хлорпиразиновые промежуточные соединения 21 или 22 при помощи РОС1₃ или ЛС8/РРй₃, затем в аминопиразины 23 или 24 с использованием аммиака или первичного или вторичного амина. Снятие защиты обеспечивает получение общих промежуточных соединений 25 или 26 (схема 6).

- 36 019974

Схема 6

Указанные общие промежуточные соединения (11-16, 18, 20, 25, 26) можно затем использовать для получения ряда соединений с различными линкерными группами Ь и различными концевыми группами А. Например, ключевое промежуточное соединение 11 может взаимодействовать с активированными карбоновыми кислотами или хлорангидридами с образованием амидов (ΝΗίΌ). или с изоцианатами или активированными карбаматами с образованием мочевин (NНСОNН). Изоцианаты также можно получить ίη 8Йи при взаимодействии карбоновой кислоты, например, с ДФФА (дифенилфосфорилазид) и перегруппировке Курциуса соответствующего азида при нагревании. Ключевое промежуточное соединение 11 также может взаимодействовать с изотиоцианатами с образованием тиомочевин (NНС8NН) и сульфонилхлоридами с образованием сульфонамидов (8О^Н). Примеры указанных способов проиллюстрированы на следующей схеме (схема 7).

- 37 019974

Как вариант, положение, по которому расположена аминогруппа в общем промежуточном соединении 11, можно активировать, например, путем взаимодействия с фенилхлорформиатом. Полученный таким образом активированный карбамат можно затем подвергнуть взаимодействию с ароматическими аминами с образованием соответствующих мочевин, как проиллюстрировано на схеме 8.

Схема 8

Альтернативной стратегией является проведение реакций, описанных на схемах 7 и 8 (образование мочевины или амида), с нитро-аминопромежуточным соединением 2 перед циклизацией. Аналогично, аминофенолы могут взаимодействовать с изоцианатами, образуя промежуточное соединение 30, которое затем подвергают сочетанию с 1 с образованием 28. Пример подобного подхода приведен для мочевинного линкера на схеме 9. Подобные способы можно использовать для соединений с другими линкерами. Схема 9

- 38 019974

Соединения с обратным амидным линкером можно получить при взаимодействии исходного вещества 1 с гидроксилбензойнымии кислотами. Например, соединение 1 может взаимодействовать с метил3-гидроксибензоатом, образуя промежуточное соединение 31. Указанное промежуточное соединение можно восстановить до промежуточного диаминосоединения 32 и циклизовать с получением одной из структур, описанных на схемах 2, 4-6, а затем провести реакцию с арильным или гетероарильным амином с получением конечного продукта. В качестве примера показано получение пиридопиразинона 34 через промежуточный сложный эфир 33. Как вариант, промежуточное соединение 31 может взаимодействовать с ариламином с образованием 35, которое восстанавливают до диамина 36 и подвергают циклизации с получением того же продукта 34 (схема 10).

Соединения, содержащие другие линкеры между шарнирно-связанной бициклической системой и средним кольцом, можно получить при взаимодействии исходного вещества 1, например, с меркаптоанилинами, аминоанилинами или меркаптобензойными сложными эфирами, как показано на схеме 11. Полученные указанным способом промежуточные соединения можно затем превратить в ингибиторы, содержащие те же структуры, которые описаны для соединений с О-линкером, используя способы, подобные показанным на схемах 1-10.

- 39 019974

Схема 11 νο₂

Ν ΝΗ.

ΝΟ.

Ν ΝΗ.

'Ν ΝΗ,

Химический синтез.

Все исходные вещества, реактивы и растворители для проведения реакций имели чистоту ч.д.а. (геадеп! дгабе) и использовались в таком виде, как были куплены. Хроматографические растворители имели чистоту, подходящую для ВЭЖХ (НРЬС дгабе), и использовались без дополнительной очистки. Реакции контролировали при помощи тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием тонкослойных силикагелевых пластин Мегек кШеа де1 60 Р-254. Колоночную флэш-хроматографию проводили на силикагеле Мегек кШеа де1 60 (0,015-0,040 мм) или на одноразовых силикагелевых колонках 1ко1н1е Е1акН 8ί и 8ί II. Препаративную ТСХ проводили или на пластинах для ТСХ с заранее нанесенным покрытием Маекегеу-Ладе1 [809 023] 81Ь С-25 ИУ₂₅₄, или на препаративных пластинах для ТСХ с заранее нанесенным покрытием АпаНеек [2015], 2000 мкм с ИУ₂₅₄. Анализы ЖХ-МС проводили на ВЭЖХ-системе М1егота88 ЬСТ/Уа1ег’8 АШапее 2795 с колонкой 0|8еоуегу 5 мкм, С18, 50x4,6 мм внутр. диам. от 8ире1ео при температуре 22°С с использованием следующих систем растворителей: растворитель А: метанол; растворитель В: 0,1% муравьиная кислота в воде, расход 1 мл/мин. Исходный градиент 10% А/90% В от 0-0,5 мин, затем от 10% А/90% В до 90% А/10% В от 0,5 до 6,5 мин и продолжая при 90% А/10% В до 10 мин. С 10-10,5 мин градиент меняли на обратный до 10% А/90% В и оставляли указанные концентрации неизменными до истечения 12 мин. УФ-детектирование осуществляли при длине волны 254 нм, а ионизация представляла собой ионизацию электрораспылением в режиме регистрации положительных или отрицательных ионов. Молекулярную массу сканировали в диапазоне 50-1000. Образцы подавали в виде 1 мг/мл раствора в ДМСО или метаноле с инъецируемым объемом 3 мкл при частичном заполнении петли. Спектры ЯМР регистрировали в ДМСО-б₆ на спектрометре Вгикег Абмапее 500 МГц.

(I) Сочетание 2-амино-3-нитро-4-хлорпиридина с фенолятами.

Синтез 1 трет-бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)фенилкарбамат

Ν ΝΗ,

Способ А1. трет-Бутил-4-гидроксифенилкарбамат (3,63 г, 17,4 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (150 мл). Добавляли трет-бутоксид калия (2,62 г, 23,4 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли 4-хлор-3-нитропиридин-2-амин (3,0 г, 17,3 ммоль) в виде твердого вещества за один прием, после чего нагревали реакционную смесь при 85°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом (800 мл) и промывали водой (1x800 мл) и раствором соли (2x800 мл). Органический слой высушивали над сульфатом магния и выпаривали. Неочищенный продукт подвергали хроматографированию на силикагеле (элюент этилацетат:циклогексан 1:2), получая 4,0 г (выход 63%) трет-бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)фенилкарбамата.

Ή-ЯМР (СБС1₃), δ (м.д.), I (Гц): Ή-ЯМР, δ (м.д.), I (Гц): 1,54 (9Н), 6,04 (д, 1Н, 1=7,4 Гц), 6,15 (уш, 2Н), 7,06 (д, 2Н, 1=8,3 Гц), 7,44 (д, 2Н, 1=8,3 Гц), 7,96 (д, 1Н, 1=7,4 Гц). ЖХ-МС (т/ζ): 347 (М+Н, 100).

Синтез 2 трет-бутил-4-(2-амино-3 -нитропиридин-4-илокси)нафталин-1 -илкарбамат

- 40 019974

Применяли способ А1 с трет-бутил-4-гидроксинафталин-1-илкарбаматом (3,9 г, 15 ммоль), получая трет-бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)нафталин-1-илкарбамат (5,4 г, выход 90%) после пере кристаллизации из дихлорметана.

Ή-ЯМР (СПС1₃), δ (м.д.), I (Гц): 1,58 (с, 9Н), 5,92 (д, 1Н, 1=5,8 Гц), 6,21 (с, 1Н), 7,25 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 7,56 (т, 1Н, 1=8,1 Гц), 7,62 (т, 1Н, 1=8,3 Гц), 7,88 (д, 1Н, 1=5,8 Гц), 7,93 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н, 1=8,5 Гц), 8,00 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), ЖХ-МС: т/ζ 397 (М+Н, 100).

Синтез 3 4-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-3-нитропиридин-2-амин

Способ А2. К сухому ДМСО (5,5 мл) добавляли гидрид натрия (148 мг) и перемешивали полученную смесь при КТ в течение 20 мин в атмосфере Аг. К полученной смеси добавляли 4-амино-3(метилтио)фенол (573 мг, 3,7 ммоль) и перемешивали полученную смесь еще в течение 10 мин. Затем добавляли 4-хлор-3-нитропиридин-2-амин (3,7 ммоль) и нагревали полученную смесь при 100°С и перемешивании в течение 3 ч. После охлаждения добавляли воду и трижды экстрагировали полученную смесь Ε!ΟΑс. Объединенные органические слои промывали сначала насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, затем водой, высушивали над Мд§О₄ и выпаривали, получая целевое соединение (657 мг, 61%) после очистки при помощи хроматографии на силикагеле (ЬЮАс-ДХМ, 1:1) в виде краснокоричневого твердого вещества (К_Г 0,56, Ε!ОΑс-ДХМ 1:1).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,36 (с, 3Н, СН₃); 5,18 (с, 2Н, ИН₂,_РЬ), 5,92 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,8 Гц), 6,75 (дд, 1Н, Н_РН 1=8,6 Гц и 1=2,1 Гц), 6,81 (дд, 1Н, Н_РН 1=8,7 и 1=2,6 Гц), 6,98 (д, 1Н, Н_РН 1=2,6 Гц), 7,07 (уш, 2Н, ИН₂,_Ру), 7,95 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,7 Гц), ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,6, 99,8, 114,7, 119,7,

120,7, 121,4, 121,5, 143,2, 145,1, 152,8, 153,6, 159,9. ЖХ-МС (т/ζ): 293 (М+Н, 100), ву = 5,87 мин.

Способ С4. Суспензию порошка железа (220 мг, 4 ммоль) и ИН₄С1 (310 мг, 5,8 ммоль) в смеси ΕΏΠΈΉ (4 мл/1,2 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 10 мин. Добавляли 3-(метилтио)4-нитрофенол (185 мг, 1 ммоль) и перемешивали полученную смесь в течение 5 ч. После охлаждения до КТ отфильтровывали темную взвесь через целит и промывали МеОН. После удаления растворителя добавляли Ε!ОΑс и фильтровали полученную смесь еще раз. Фильтрат промывали последовательно водой и раствором соли, а затем высушивали над Мд§О₄. Удалением растворителя в вакууме получали целевое соединение в виде серо-зеленого порошка (80 мг, выход 53%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,29 (с, 3Н, Н_Ме), 4,48 (уш, 2Н, ΝΉ₂), 6,44 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,5 Гц), 6,54 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,5 Гц), 6,61 (с, 1Н, Н_аром), 8,58 (уш, 1Н, ОН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,9, 114,7, 115,4, 116,5, 120,1, 139,5, 148,7. ГХ-МС (т/ζ): 155,09.

К раствору 3-фтор-4-нитрофенола (2 г, 12,7 ммоль) в сухом ДМФА (67 мл) добавляли порциями 2

- 41 019974 экв. тиометоксида натрия (1,78 г, 25,5 ммоль), после чего добавляли 3 экв. карбоната калия (5,27 г, 38,2 ммоль). Полученную смесь перемешивали при КТ в течение 23 ч, а затем добавляли воду (100 мл). Полученную смесь экстрагировали ЕЮАс, объединенные органические слои промывали последовательно водой (60 мл) и раствором соли (60 мл), а затем высушивали над Мд§О₄. Растворитель выпаривали в вакууме, получая целевое соединение (2,12 г, 90%) в виде желтого порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,44 (с, 3Н, Нме), 6,72 (д, 1Н, Н_аром, 1=9,0 Гц), 6,79 (с, 1Н, Н_аром), 8,19 (д, 1Н, Н_аром, 1=9,1 Гц), 11,20 (уш, 1Н, ОН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,2, 111,3, 112,0,

128,7, 136,7, 142,0, 162,9.

Синтез 6 4-(4-амино-3-фторфенокси)-3-нитропиридин-2-амин

Р

Применяли способ А2 с 4-амино-3-фторфенолом (1,00 г, 7,9 ммоль), получая 1,8 г (выход 86%) 4-(4амино-3-фторфенокси)-3-нитропиридин-2-амина в виде темного твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,17 (уш, 2Н), 5,94 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 6,75-6,84 (м, 2Н), 6,97 (д, 1Н, 1=11,7 Гц) 7,09 (уш, 1Н), 7,96 (д, 1Н, 1=5,7 Гц). ЖХ-МС (т/ζ): 235 (М+Н, 100).

Синтез 7 4-(4-№(трет-бутоксикарбонил)амино-3-фторфенокси)-3-нитро-2-аминопиридин

Применяли способ А1 с 4-№Вос-амино-3-фторфенолом (1,2 г, 5,4 ммоль), получая целевое соединение в виде стекловидного желтого твердого вещества (1,9 г, 96%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 6,08 (д, 1Н, 1=5,5, Н_Ру), 7,01 (м, 1Н, Н ), 7,18 (уш с, 2Н, ΝΗ), 7,22 (м, 1Н, Н_аром), 7,67 (м, 1Н, Н_аром), 8,04 (д, 1Н, 1=5,5, НРу), 9,03 (с, 1Н, ΝΗ^); ¹³СЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,0, 79,5, 100,7, 108,8 (д, 1ЕС=23,1), 116,2 (д, 1ЕС=3,1), 121,7, 124,3 (д, 1ес=12,2), 125,4, 149,4 (д, 1ЕС=10,1), 153,0, 153,3, 153,9, 154,1 (д, 1ЕС=249), 158,6; ¹⁹Е-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.): -120,7; ЖХ-МС (т/ζ): 365,0 (М+Н, 100).

Синтез 8 трет-бутил-2-фтор-4-гидроксифенилкарбамат

Способ В. 4-Амино-3-фторфенол (10,61 г, 83,5 ммоль) добавляли к расплавленной смеси Вос₂О (18,29 г, 83,8 ммоль) и [пС1₃ (188 мг, 0,85 ммоль) при 35°С. Полученную черную смесь перемешивали при 35°С в течение 2 ч, за указанное время смесь превращалась в густое черное масло. Затем смесь разбавляли ЕЮАс (200 мл) и Н₂О (200 мл) и продолжали перемешивание в течение 10 мин. Разделяли слои, промывали органический слой Н₂О (3x200 мл), высушивали (Мд§О₄), фильтровали и упаривали досуха. Полученное черное масло растворяли в СН₂С1₂ (50 мл) и пропускали через колонку с силикагелем. Элюирование 5^7% ЕЮАс в СН₂С1₂ давало целевое соединение в виде светло-желтого кристаллического твердого вещества. Выход: 16,7 г (90%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 6,08 (д, 1Н, 1=5,5, Н_Ру), 7,01 (м, 1Н, Н ), 7,18 (уш с, 2Н, ЫН), 7,22 (м, 1Н, Н_аром), 7,67 (м, 1Н, Н_аром), 8,04 (д, 1Н, 1=5,5, НРу), 9,03 (с, 1Н, \Н.·); ¹³СЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,0, 78,6, 102,7 (д, 1_ЕС=22,2), 110,8 (д, 1_ЕС=2,7), 117,1 (д, 1_ЕС=12,6), 127,2,

153,7, 155,5 (д, 1_ЕС=11,3), 156,1 (д, 1_ЕС=246); ¹⁹Е-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.): -121,6;ЖХ-МС (т/ζ): 172,0 (М+Н, 100).

Синтез 9 трет-бутил-4-гидрокси-3-фторфенилкарбамат

- 42 019974

Применяли способ В с 4-амино-2-фторфенолом (1,6 г, 12,7 ммоль), получая целевое соединение (1,26 г, 44%) через 1 ч, и очищали при помощи Вю1аде (ЕЮАс-ДХМ: 1-1), получая бледно-розовый порошок (К_£ 0,86, ЕЮАс-ДХМ, 1-1).

'Н-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), 1 (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви); 6,82 (т, 1Н, Наром, 1=9,2 Гц), 6,99 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,29 (д, 1Н, Наром, 1=13,5 Гц), 9,18 (с, 1Н, ОН), 9,36 (с, 1Н, NΗ_Κар_ба_Μат). ¹³С-ЯМР (ДМСОХ), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,9, 79,9, 107,9, 115,4, 118,5, 132,6, 140,3, 150,4, 152,3.¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б₆): -134,62.

Синтез 10 трет-бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамат

Применяли способ А1 с трет-бутил-4-гидрокси-3-фторфенилкарбаматом (1,26 г, 5,5 ммоль), получая через 1 ч перемешивания целевое соединение (1,99 г, 99%) в виде желтого порошка.

'Н-ЯМР (ДМСО-άβ), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,52 (с, 9Н, трет-Ви); 5,98 (д, 1Н, Нру 1=5,7 Гц), 7,21 (с, 2Н, ΝΗ₂), 7,32 (м, 2Н, Наром), 7,63 (м, 1Н, Наром), 8,02 (д, 1Н, Нру 1=5,4 Гц), 9,74 (с, 1Н, ΝΗ^^). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,0, 79,7, 99,0, 106,3, 114,6, 121,0, 123,5, 133,7, 139,0, 152,6, 153,2, 153,7, 154,0, 158,7.¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б6): -128,76. ЖХ-МС (т/ζ): 365 (М+Н, 100), ву = 2,58 мин.

Синтез 11 4-(3-Ы-(трет-бутоксикарбонил)аминофенокси)-3-нитро-2-аминопиридин

Применяли способ А1 с 3-Ы-Вос-аминофенолом (1,2 г, 5,4 ммоль), получая целевое соединение в виде стекловидного желтого твердого вещества (1,7 г, 90%).

'Н-ЯМР (ДМСО), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,46 (с, 9Н, (СН₃)₃С), 5,36 (с, 2Н, ΝΗ₂), 6,00 (д, 1Н, Н_Руг, 1=5,7), 6,77 (д, 1Н, Н_аром, 1=6,9), 7,32-7,36 (м, 2Н, Н_аром), 8,01 (д, 1Н, Н_Руг), 9,56 (с, 1Н, ΝΗ); ЖХ-МС (т/ζ): 346,1 (М+Н, 100), ву = 7,10 мин.

Синтез 12 метиловый эфир 3-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)бензойной кислоты

Применяли способ А1 с метиловым эфиром 3-гидроксибензойной кислоты (800 мг, 4,7 ммоль), получая целевое соединение (760 мг, выход 53%).

'Н-ЯМР (ДМСО), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,86 (с, 3Н, Ме), 6,04 (д, 1Н, Н_Руг, 1=6,0 Гц), 7,23 (с, 2Н, ΝΗ₂), 7,52 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,0 Гц), 7,63-7,66 (м, 1Н, Наром), 7,88 (д, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 8,04 (д, 1Н, II.,.); ЖХ-МС (т/ζ): 290 (М+Н, 100).

Синтез 13 трет-бутил-4-(2-амино-3 -нитропиридин-4-илтио)фенилкарбамат

Способ А3. Сухой ДМСО (15 мл) добавляли к ΝαΗ (1,24 г в виде 60% дисперсии в минеральном масле, 25,7 ммоль) в круглодонной колбе в атмосфере Аг. Через 5 мин добавляли твердый трет-бутил 4меркаптофенилкарбамат (6,98 г, 31,0 ммоль) тремя порциями, что приводило к образованию желтого раствора с выделением газа. Через 15 мин перемешивания при КТ добавляли за один прием 4-хлор-3нитропиридин-2-амин (5,38 г, 31,0 ммоль). Полученный желто-коричневый раствор перемешивали в течение 30 мин и добавляли последовательно ЕЮАс (150 мл) и Н₂О (400 мл). Экстрагировали водный слой ЕЮАс (3x100 мл), промывали объединенные органические слои один раз насыщенным раствором №1НСО₃ (150 мл), высушивали (Мд§О₄), фильтровали и упаривали досуха, получая целевое соединение в

- 43 019974 виде ярко-желтого твердого вещества. Выход: 11,2 г (количественный).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,49 (с, 9Н, трет-Ви), 5,83 (д, 1=5,4, 1Н, Н_Ру), 7,47 (д, 1=8,7, 2Н, Наром), 7,64 (д, 4=8,7, 2Н, Наром), 7,87-7,89 (м, 3Н), 9,69 (с, 1Н, ΝΗβοο); ¹³С-ЯМР (ДМСОЛ), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,6, 110,3, 119,4, 121,5, 124,8, 136,4, 141,4, 152,3, 152,5, 153,6, 156,2; ЖХ-МС: 364,0 (М+Н, 100); МСВР: т/ζ вычисл. для С1₆НХ₄О₄§ [М+Н⁺]: 363,11215; найдено: 363,11261.

Синтез 14 трет-бутил-4-меркаптофенилкарбамат

Применяли способ В с 4-аминобензотиолом (8,08 г, 64,5 ммоль), получая целевое соединение. Выход: 14,5 г (100%).

Ή-ЯМР (ДМСО-άβ), δ (м.д.), I (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 5,08 (с, 1Н, 8Н), 7,17 (д, 1=8,7, 2Н, Н_аром), 7,34 (д, 1=8,7, 2Н, Н_аром), 9,27 (с, 1Н, ΝΗ_Βοο); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 28,1, 79,0, 118,9, 123,4, 129,6, 130,7, 137,2, 140,0, 152,7.

(II) Защита амина группой Вос.

Синтез 15 4-(4-№(трет-бутоксикарбонил)амино-3-тиометилфенокси)-3-нитро-2-аминопиридин

Применяли способ В с 4-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-3-нитропиридин-2-амином (2 г, 6,8 ммоль). После очистки при помощи хроматографии на силикагеле (ЕЮАс-ДХМ 1-1, затем ЕЮАс-МеОН: 95-5) получали целевое соединение (2,42 г, 90%) в виде порошка (В_£ 0,33, ЕЮАс-МеОН, 95:5).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 2,81 (с, 3Н, СН₃); 6,07 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,6 Гц), 7,19 (м, 1Н, Н_аром), 7,35 (м, 1Н, Н_аром), 7,53 (д, 1Н, Н_аром, 1=2,8 Гц), 7,55 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,7 Гц), 8,01 (м, 1Н, Наром), 8,05 (д, 1Н, Нру, 4=5,6 Гц), 9,32 (с, 1Н, Ν^· ¹³С-ЯМР (ДДОСОО, δ (м.д.), 4 (Гц): 14,8, 27,9, 78,8, 103,6, 115,9, 117,3, 121,7, 124,6, 127,5, 132,1, 137,1, 146,0, 148,5, 151,7, 153,4. ЖХ-МС (т/ζ): 393 (М+Н, 100), ву= 7,64 мин.

(III) Восстановление нитрогруппы в ходе получения общих промежуточных соединений (согласно схеме 1).

Синтез 16 трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)фенилкарбамат

Способ С1. 1,56 г (4,5 ммоль) трет-бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)фенилкарбамата растворяли в 300 мл смеси 1:1 этанол:этилацетат. Полученный раствор смешивали с Н₂, пропущенным через картридж, содержащий Рб/С, в аппарате Н-сиЬе, затем выпаривали, получая 1,26 г (выход 88%) трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)фенилкарбамата в виде белого пенообразного твердого ве щества.

Ή-ЯМР (СПС1₃), δ (м.д.), 4 (Гц): 1,54 (9Н, с), 2,90 (4Н, уш), 6,60 (1Н, уш), 6,17 (д, 1Н, 4=5,7 Гц), 7,01 (2Н, д, 4=8,9 Гц), 7,38 (д, 2Н, 4=8,9 Гц), 7,52 (д, 1Н, 4=5,8 Гц). ЖХ-МС (т/ζ): 317 (М+Н, 100).

Синтез 17 трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)нафталин-1 -илкарбамат

Применяли способ С1 с трет-бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)нафталин-1илкарбаматом (3,0 г, 7,6 ммоль) со смесью растворителей МеОН:ТГФ 1:1, получая целевое соединение с количественным выходом (2,4 г).

- 44 019974 ¹Н-ЯМР (СБС1₃), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,56 (с, 9Н), 6,03 (д, 1Н, 1=6,0 Гц), 7,04 (с, 1Н), 7,07 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,33 (д, 1Н, 1=6,0 Гц), 7,50 (т, 1Н, 1=7,4 Гц), 7,57 (т, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,77 (уш, 1Н), 7,95 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,98 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), ЖХ-МС (т/ζ): 367 (М+Н, 100).

Синтез 18 4-(4-Ы-(трет-бутоксикарбонил)амино-3 -фторфенокси)-2,3-диаминопиридин

Способ С2. РЛ/С (1,09 г) добавляли к желтому раствору 4-(4-Ы-(трет-бутоксикарбонил)амино-3фторфенокси)-3-нитро-2-аминопиридина (6,20 г, 17,0 ммоль) в ЕЮАс/ЕЮН (90/150 мл), перемешивали полученную черную смесь в атмосфере водорода в течение 5 ч и фильтровали через целит. Темнокоричневый фильтрат упаривали досуха, растворяли в СН₂С1₂ (20 мл) и пропускали через силикагелевую колонку. Продукт элюировали ЕЮАс, собирали фракции, содержащие целевое соединение, и упаривали досуха. Полученное оранжевое масло растворяли в СН₂С1₂ и добавляли равное количество гексана. Полученный раствор упаривали досуха, получая оранжевую пену. Выход: 4,30 г (76%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), 1 (Гц): δ=8,82 (уш с, 1Н, ΝΗροο), 7,47 (т, 1=8,5 Гц, 1Н, Наром), 7,28 (д, 1Н, 1=5,5 Гц, НРу), 6,87 (м, 1Н, Наром), 6,76 (м, 1Н, Наром), 6,09 (д, 1Н, 1=5,5 Гц, НРу), 5,61 (с, 2Н, ΝΗ2), 4,47 (с, 2Н, ΝΗ2), 1,45 м.д. (с, 9Н, трет-Ви); ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-Л6): δ = -120,7 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 335,3 (М+Н, 100), ву = 2,69 мин.

Синтез 19 трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенилкарбамат

Применяли способ С4 с 4-(4-Ы-(трет-бутоксикарбонил)амино-3-тиометилфенокси)-3-нитро-2аминопиридином (12,5 г, 31,8 ммоль), получая целевое соединение (2,07 г, 18%) после очистки при помощи хроматографии на силикагеле (ЕЮАс, затем ЕЮАс-МеОН: 95-5) в виде порошка (К_£ 0,33, ЕЮАсМеОН, 95:5).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,44 (с, 9Н, трет- Ви); 2,39 (с, 3Н, СН₃); 5,56 (уш, 2Н, ΝΗ₂); 6,29 (д, 1Н, НРу 1=6,9 Гц), 6,87 (дд, 1Н, Н^ 1=8,6 Гц, 1=2,7 Гц), 7,06 (д, 1Н, Н^, 1=2,7 Гц), 7,31 (м, 2Н, НРу 1=6,8 Гц + Н_аром), 7,56 (уш, 2Н, ΝΗ^), 8,44 (с, 1Н, КН_кар_бамаг). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Д·,)· δ (м.д.), 1 (Гц): 14,8, 27,9, 78,8, 103,6, 115,9, 117,3, 121,7, 124,6, 127,5, 132,1, 137,1, 146,0, 148,5, 151,7, 153,4. ЖХ-МС (т/ζ): 362 (М+Н, 100), ву = 3,04 мин.

Синтез 20 4-(3-Ы-(трет-бутоксикарбонил)аминофенокси)-2,3-диаминопиридин

Применяли способ С2 с 4-(3-Ы-(трет-бутоксикарбонил)аминофенкси)-2-амино-3-нитропиридином (2,5 г, 7,2 ммоль), получая целевое соединение в виде коричневого стекловидного твердого вещества (2,17 г, 95%).

^!Н-ЯМР (ДМСО), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,45 (с, 9Н, (СН₃)₃С), 4,39 (с, 2Н, 5-ΝΗ₂), 5,36 (с, 2Н, 6-ΝΗ₂), 6,02 (д, 1Н, НРу 1=5,6), 6,58 (д, 1Н, Н_аром, 1=7,9), 7,19-7,21 (м, 2Н, Н_аром), 7,25 (д, 1Н, НРу), 9,41 (с, 1Н, ΝΗ); ЖХМС (т/ζ): 316,1 (М+Н, 100), ву = 4,03 мин.

Синтез 21 метиловый эфир 3-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)бензойной кислоты

- 45 019974

Применяли способ С2 с метиловым эфиром 3-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)бензойной кислоты (760 мг, 2,6 ммоль), получая целевое соединение (680 мг, 100%).

¹Н-ЯМР (ДМСО), δ (м.д.), I (Гц): 3,83 (с, 3Н, Ме), 4,54 (с, 2Н, ΝΗ₂), 5,68 (с, 2Н, ΝΗ₂), 6,12 (д, 1Н, Нр_уг, 1=6,0 Гц), 7,27-7,32 (м, 1Н, Наром), 7,43 (д, 1Н, Наром, 1=1,5 Гц), 7,52 (т, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 7,69 (д, 1Н, Н_Руг); ЖХ-МС (т/ζ): 260 (М+Н, 100).

Синтез 22 трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-3 -фторфенилкарбамат

Применяли способ С2 с трет-бутил 4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-3-фторенилкарбаматом (2,15 г, 5,9 ммоль), получая целевое соединение (1,75 г, 89%) в виде коричневого твердого вещества.

^!Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,52 (с, 9Н, трет-Ви), 4,51 (уш, 2Н, ΝΗ2), 5,59 (с, 2Н, ΝΗ2), 5,88 (д, 1Н, Нру,5, 1=4,8 Гц), 7,11 (т, 1Н, 1=8,8 Гц), 7,22-7,27 (м, 2Н, Наром), 7,56 (дд, 1Н, Наром, 1=12,2 Гц 1=1,6 Гц), 9,61 (с, 1Н, ΝΗ^^Υ ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 29,1, 80,6, 102,2, 107,6, 115,4, 119,2, 123,6, 136,6, 137,3, 138,2, 149,2, 150,9, 153,7, 155,1.¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б₆): -129,68. ЖХ-МС (т/ζ): 335 (М+Н, 100), ву = 2,00 мин.

Синтез 23 трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илтио)фенилкарбамат

Способ С3. трет-Бутил-4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илтио)фенилкарбамат (470 мг, 1,30 ммоль) растворяли в смеси ЕЮАс и ΕΐΟΗ (80 мл/40 мл) и добавляли никель Ренея (ложку). Полученную суспензию перемешивали в атмосфере Н₂ в течение 90 мин и фильтровали через пластину целита. Бесцветный фильтрат упаривали досуха, получая целевое соединение в виде бесцветного масла. Выход: 430 мг (количественный).

^!Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 4,78 (уш с, 2Н, ΝΗ2, 5,61 (уш с, 2Н, ΝΗ2), 6,22 (д, 1=5,3, 1Η, Ηγ, 7,19-7,22 (м, 3Н), 7,44 (д, 1=8,7, 2Η, Наром), 9,43 (с, 1Н, XII..); ¹³С-ЯМР (ДМСОб6), δ (м.д.), I (Гц): 28,1, 79,2, 115,3, 119,0, 122,8, 125,1, 128,8, 131,7, 134,9, 139,1, 148,4, 152,5; ЖХ-МС (т/ζ): 333,2 (М+Н, 100), ву = 3,06; МСВР (3,98 мин): т/ζ вычисл. для Οι₆Η₂₁Ν₄Ο₂8 [Μ+Η⁺]: 333,13797; найдено: 333,13812.

(IV) Циклизация в ходе получения общих промежуточных соединений.

1. Циклизация с образованием пиридопиразин-3-она и пиридопиразин-2-она.

Синтез 24 трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

трет-бутил-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

- 46 019974

Способ Ό1. трет-Бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)фенилкарбамат (0,86 г, 2,71 ммоль) растворяли в 15 мл сухого этанола; добавляли 0,8 мл (4 ммоль) 50% раствора этилглиоксалата в толуоле и перемешивали полученный раствор в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере аргона. Растворитель частично выпаривали, осаждали трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбамат (0,430 г, выход 45%) путем добавления ацетона (10 мл) и отфильтровывали.

трет-Бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (0,200 г, выход 21%) выделяли при помощи колоночной хроматографии на силикагеле, элюент дихлорметан:этилацетат 1:1 К_Г=0,3.

трет-Бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,49 (с, 9Н), 6,76 (д, 1Н, 1=5,4 Гц), 7,15 (д, 2Н, 1=9,0 Гц), 7,57 (д, 2Н, 1=9,0 Гц), 8,32 (д, 1Н, 1=5,0 Гц), 8,40 (с, 1Н), 9,44 (уш, 1Н), 12,54 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 367 (М+Н, 100).

трет-Бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

'Н-ЯМР (СБС1з), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,54 (с, 9Н), 6,55 (д, 1Н, 1=5,5 Гц), 6,67 (уш, 1Н), 7,14 (д, 2Н, 1=8,5 Гц), 7,49 (д, 2Н, 1=8,5 Гц), 8,36 (с, 1Н), 8,46 (д, 1Н, 1=5,5 Гц), 12,88 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 367 (М+Н, 100).

Синтез 25 трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат

Применяли способ Ό1 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)нафталин-1-илкарбаматом (3,1 г), получая целевые соединения трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбамат (1,45 г, выход 42%) и трет-бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат (0,24 г, выход 9%).

трет-Бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат:

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,51 (с, 9Н), 6,63 (д, 1Н, 5,6 Гц), 7,41 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 7,56 (м, 1Н), 7,62 (м, 1Н), 7,64 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 7,90 (д, 1Н, 7,7 Гц), 8,14 (д, 1Н, 7,7 Гц), 8,25 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 8,45 (с, 1Н), 9,39 (уш, 1Н), 12,86 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 405 (М+Н, 100).

трет-Бутил 4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат:

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,52 (с, 9Н), 6,38 (д, 1Н, 5,7 Гц), 6,64 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,37 (д, 1Н, 1=6,6 Гц), 7,51-7,64 (м, 2Н), 7,83 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 8,14 (д, 1Н, 6,6 Гц), 8,25 (с, 1Н), 8,27 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 9,38 (уш, 1Н), 13,00 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 405 (М+Н, 60), 349 (100).

Синтез 26 трет-бутил-2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

- 47 019974

трет-бутил-2-(метилтио)-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Η

Применяли способ Ό1 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенилкарбаматом (780 мг, 2,15 ммоль), получая трет-бутил-2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (134 мг, выход 15%) и трет-бутил-2-(метилтио)-4-(3-оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (427 мг, выход 50%).

трет-Бутил-2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви); 2,40 (с, 3Н, СН₃); 6,87 (д, 1Н, НРу 1=5,3 Гц), 7,01 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,6 Гц, 1=2,6 Гц), 7,18 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,37 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,36 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,3 Гц), 8,42 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,46 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 12,57 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 14,9, 27,9, 78,9, 110,1, 116,8, 118,0, 127,4, 132,6, 137,0, 151,3, 153,4. ЖХ-МС (т/ζ): 433 (М+Н+МеОН, 100), ву = 4,42 мин.

трет-Бутил-2-(метилтио)-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 1,45 (с, 9Н, трет-Ви); 2,40 (с, 3Н, СН₃); 6,59 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 6,98 (дд, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц, 1=2,6 Гц), 7,16 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,36 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,17 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,36 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 8,44 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 12,89 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 14,8, 27,9, 78,9, 106,2, 116,7, 117,8, 118,2, 127,5, 132,5, 137,2, 145,4, 150,9,

151,5, 152,0, 153,4, 156,3, 160,5. ЖХ-МС (т/ζ): 401 (М+Н, 100), ву = 4,65 мин.

Синтез 27 трет-бутил-2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат трет-бутил-2-фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Применяли способ Ό1 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенилкарбаматом (3,50 г, 10,5 ммоль), получая трет-бутил-2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбамат (2,71 г, 69%) и трет-бутил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбамат (0,96 г, 25%).

трет-Бутил-2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): δ=12,58 (уш с, 1Н, ХИЛА 9,03 (уш с, 1Н, ΝΗβΉ 8,41 (с, 1Н, Наром), 8,37 (д, 1=5,5 Гц, 1Н, НРу), 7,66 (ν!, 1=8,5 Гц, 1Н, Наром), 7,24 (д, 1Н, Наром), 7,06 (д, 1Н, Наром), 6,94 (д, 1=5,5 Гц, 1Н, Н_Ру), 1,47 м.д. (с, 9Н, трет-Ви); ¹³С ЯМР (126 МГц, ДМСО-б6): δ=155,8 (уш), 154,6, 154,5 (д, 1РС=248 Гц), 153,1, 151,8 (уш), 150,2 (д, ЭРС=10 Гц), 145,4, 144,3 (уш), 125,7, 124,0 (д, ЭРС=12 Гц), 119,9 (уш), 116,1 (д, 1РС=3 Гц), 110,7, 108,7 (д, ЭРС=23 Гц), 79,4, 28,0 м.д.; ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б6): δ =

- 48 019974

-119,9 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 373,4 (М+Н, 100), ву = 4,20 мин; МСВР (5,15 мин): т/ζ вычисл. для С1₈Н₁₈РЫ₄О₄ [М+Н⁺]: 373,13066; найдено: 373,13099.

трет-Бутил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): δ=12,90 (уш с, 1Н, ИНАг), 9,01 (уш с, 1Н, ИН_Вос), 8,38 (д, 1=5,5 Гц, 1Н, НРу), 8,17 (с, 1Н, Н^), 7,66 (ν!, 1=8,5 Гц, 1Н, Н^), 7,22 (д, 1Н, Н^), 7,01 (д, 1Н, Н^), 6,67 (д, 1=5,5 Гц, 1Н, Н_Ру), 1,47 м.д. (с, 9Н, трет-Ви); ¹³С ЯМР (126 МГц, ДМСО-б6): δ=160,2, 156,4, 154,6 (д, 1РС=249 Гц), 153,1, 152,2, 151,2, 150,5 (д, 1РС=10 Гц), 145,6, 125,8, 123,9 (д, 1РС=12 Гц), 118,5, 116,0 (д, 1РС=3 Гц), 108,5 (д, 1РС=23 Гц), 106,8, 79,4, 28,0 м.д.; ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б6): δ = -119,8 м.д.; ЖХМС (т/ζ): 373,1 (М+Н, 100), ву = 4,40 мин; МСВР (5,34 мин): т/ζ вычисл. для С_!8Н₁₇РИ₄О₄ [М+Н⁺]: 373,13066; найдено: 373,13071.

Синтез 28 трет-бутил-3 -фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Н трет-бутил-3 -фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Применяли способ Ό1 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбаматом (1 г, 2,99 ммоль), получая смесь двух изомеров (1,01 г, 90%) в соотношении 53/47. Неочищенный порошок очищали при помощи Вю!аде, получая трет-бутил-3-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбамат (185 мг, выход 17%) и трет-бутил-3-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (370 мг, выход 34%) в виде грязно-белых порошков.

трет-Бутил-3-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,55 (с, 9Н, трет-Ви); 6,56 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,7 Гц), 7,37 (м, 2Н, Н_аром), 7,67 (м, 1Н, Н_аром), 8,22 (с, 1Н, СН), 8,37 (д, 1Н, НРу, 1=5, Гц), 9,75 (с, 1Н, ИН), 12,95 (с, 1Н, ИН). ¹³СЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 28,9, 80,6, 106,0, 107,4, 115,6, 118,7, 124,6, 135,4, 139,8, 146,4, 152,3, 153,2, 153,7, 155,1, 157,5, 161,5. ¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б6): -128,42. ЖХ-МС (т/ζ): 373 (М+Н, 100), ву = 2,43 мин.

трет-Бутил-3 -фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,53 (с, 9Н, трет-Ви); 6,83 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,4 Гц), 7,32-7,41 (м, 2Н, Н_аром), 7,67 (м, 1Н, Н_аром), 8,37 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,4 Гц), 8,45 (с, 1Н, СН), 9,75 (с, 1Н, ИН), 12,65 (с, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 28,9, 80,6, 107,4, 110,0, 115,6, 124,6, 135,4, 139,8, 146,4, 152,3, 153,0, 153,9, 155,4, 157,5, 161,5. ¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б6): -128,12. ЖХ-МС (т/ζ): 373 (М+Н, 100), ву = 2,33 мин.

Синтез 29 трет-бутил-3 -(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Применяли способ Ό1 с 4-(3-И-(трет-бутоксикарбонил)аминофенокси-2,3-диаминопиридином (1,00

- 49 019974 г, 3,16 ммоль), получая трет-бутил-3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (274 мг, 24%) и трет-бутил-3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (445 мг, 1,26 ммоль, 40%).

трет-Бутил-3 -(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

^!Н-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 6,59 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 6,81-6,83 (м, 1Н, Наром), 7,36-7,39 (м, 3Н, Наром), 8,17 (с 1Н, Наром), 8,35 (д, 1Н, Ηρ^6, 1=5,6 Гц), 9,56 (с, 1Н, ΝΗ^), 12,89 (с, 1Н, ΝΗ„). ЖХ-МС (т/ζ): 299 (М+Н, 100).

трет-Бутил-3 -(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

^!Н-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), 1 (Гц):1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 6,84 (ддд, 1Н, Наром, 1=7,5 Гц , 1=2,4 Гц, 1=1,5 Гц), 6,86 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,4 Гц), 7,33-7,39 (м, 2Н, Н_аром), 7,42 (с, 1Н, Н_аром), 8,36 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,4 Гц), 8,41 (с 1Н, Н_аром), 9,57 (с, 1Н, ΝΗ^), 12,54 (с, 1Н, ΝΗ„). ЖХ-МС (т/ζ): 299 (М+Н, 100).

Синтез 30 метиловый эфир 3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)бензойной кислоты

метиловый эфир 3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)бензойной кислоты

Применяли способ Ό1 с метиловым эфиром 3-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)бензойной кислоты (1,00 г, 3,86 ммоль), получая метиловый эфир 3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)бензойной кислоты (402 мг, 35%) и метиловый эфир 3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин8-илокси)бензойной кислоты (750 мг, 2,52 ммоль, 65%).

Метиловый эфир 3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)бензойной кислоты:

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,85 (с, 3Н, ОМе), 6,68 (д, 1Н, И_Ру, 1=5,6 Гц), 7,53 (ддд, 1Н, Н_аром, 1=8,2 Гц, 1=2,5 Гц, 1=1,0 Гц), 7,65 (т, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 7,68 (дд, 1Н, Наром, 1=2,3 Гц, 1=1,6 Гц), 7,88 (ддд, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц, 1=2,5 Гц, 1=1,2 Гц), 8,17 (с 1Н, Наром), 8,39 (д, 1Н, Иру, 1=5,6 Гц), 12,93 (с, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 298 (М+Н, 100).

Метиловый эфир 3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)бензойной кислоты:

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,86 (с, 3Н, ОМе), 6,97 (д, 1Н, Н_Ру,₅, 1=5,3 Гц), 7,56 (ддд, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц, 1=2,5 Гц, 1=0,8 Гц), 7,66 (т, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 7,74 (дд, 1Н, Наром, 1=2,1 Гц, 1=1,8 Гц), 7,89 (д, 1Н, Н_аром, 1=7,8 Гц), 8,39 (д, 1Н, Н_Ру,₆, 1=5,3 Гц), 8,43 (с 1Н, Н_аром), 12,58 (с, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 298 (М+Н, 100).

Синтез 31 трет-бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илтио)фенилкарбамат

Применяли способ Ό1 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илтио)фенилкарбаматом (1,058 г, 3,18 ммоль), получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 640 мг (54%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,50 (с, 9Н, трет-Ви), 6,35 (д, 1=5,4, 1Η, Н_Ру), 7,52 (д, 1=8,7, 2Н, Наром), 7,67 (д, 1=8,7, 2Н, Наром), 8,19 (д, 1=5,4, 1Н, НРу), 8,20 (с, 1Н, Наром), 9,70 (с, 1Н, ΝΗ^ο), 12,84 (уш с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,1, 79,6, 114,6, 119,2, 119,5, 123,0, 136,7, 141,7, 143,3, 150,0, 150,9, 152,5, 152,6, 156,7; ЖХ-МС (т/ζ): 371,1 (М+Н, 100), ву=4,97 мин).

2. Циклизация с образованием пиридопиразин-2-метил-3-она и пиридопиразин-3-метил-2-она.

Синтез 32 трет-бутил-2-фтор-4-(3 -метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

- 50 019974

трет-бутил-2-фтор-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Е

Способ Ό2. трет-Бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенилкарбамат (300 мг, 0,9 ммоль) растворяли в сухом ΕΐΟΗ (5 мл) и добавляли за один прием этилпируват (1 мл, 9 ммоль). После перемешивания в течение 16 ч при КТ отфильтровывали полученный осадок и разделяли два изомера при помощи колоночной хроматографии (силикагель, ЕЮАс в качестве элюента).

трет-Бутил-2-фтор-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат: 200 мг (58%).

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,47 м.д. (с, 9Н, трет-Ви); 2,48 (с, 3Н, СН₃, 6,88 (д, 1Н, 1=5,5 Гц, Нр_у), 7,03 (д, 1Н, Н_аром), 7,22 (д, 1Н, Н^, 7,66 (νΐ, 4=8,5 Гц, 1Н, Н^, 8,32 (д, 1=5,3 Гц, Нр_у), 9,00 (уш с, 1Н, ИН_Вос),12,41 (уш с, 1Н, ИНАг); ¹³С-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,4, 106,8, 109,0, 116,0,

118,5, 123,9, 125,8,, 145,6, 150,5, 151,2, 152,2, 153,1, 156,4,160,3 м.д.; ¹⁹Е ЯМР (470 МГц, ДМСО-'₆): δ = -119,9 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 331,1. (М+Н-трет-Ви,100), ву = 4,36 мин.

трет-Бутил-2-фтор-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат: 130 мг (38%).

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,47 м.д. (с, 9Н, трет-Ви), 2,42 (с, 3Н, СН₃), 6,60 (д, 1Н, 1=5,5 Гц, Нру), 7,03 (д, 1Н, Наром), 7,22 (д, 1Н, Наром), 7,66 (νΐ, ³!рн=8,5 Гц, 1Н, Наром), 8,30 (д, 1=5,3 Гц, Нру), 9,00 (уш с, 1Н, ИНВос), 12,77 (уш с, 1Н, ИНаром). ¹³С-ЯМР (ДМСО-'6), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,4, 106,8, 109,0, 116,0,

118,5, 123,9, 125,8, 145,6, 150,5, 151,2, 152,2, 153,1, 156,4, 160.3. ¹⁹Е ЯМР (470 МГц, ДМСО-'..): δ = -119,9 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ 331,1 (М+Н-трет-Ви, 100), ву = 4,55 мин.

Синтез 33 трет-бутил-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио) фенилкарбамат

Н

Применяя способ Ό2 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенилкарбаматом (570 мг, 1,57 ммоль), получали смесь двух изомеров. После охлаждения неочищенный продукт отфильтровывали, промывали этанолом и высушивали. Получали целевое соединение (131 мг) в виде белого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц):1,45 (с, 9Н, трет-Ви); 2,39 (с, 3Н, СН₃); 2,43 (с, 3Н, СН₃); 6,52 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 6,97 (дд, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц, 1=2,6 Гц), 7,15 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,36 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,27 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 8,44 (с, 1Н, ΝΗ..). 12,75 (с, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 415 (М+Н, 100), ву = 4,78 мин.

Синтез 34 трет-бутил-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио) фенилкарбамат

- 51 019974

Применяли способ Ό2 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенилкарбаматом (570 мг, 1,57 ммоль), получая смесь двух изомеров. Неочищенный продукт очищали на силикагеле (элюент: чистый Ε!ОΑс), получая целевое соединение (206 мг) в виде бледно-желтого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц):1,45 (с, 9Н, трет-Ви); 2,43 (с, 3Н, СН₃); 2,48 (с, 3Н, СН₃); 6,83 (д, 1Н, НРу, 1=5,2 Гц), 6,98 (дд, 1Н, Н^, 1=8,6 Гц, 1=2,6 Гц), 7,15 (д, 1Н, Н^, 1=2,6 Гц), 7,35 (д, 1Н, Н^, 1=8,6 Гц), 8,31 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,2 Гц), 8,45 (с, 1Н, ΝΉ), 12,51 (уш, 1Н, ΝΉ). ЖХ-МС (т/ζ): 531 (М+Н+С₅Н₈О₃, 100), ву = 4,78 мин.

Синтез 3 5 трет-бутил-3 -(2-метил-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

трет-бутил-3 -(3 -метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Применяли способ Ό2 с 4-(3-И-(трет-бутоксикарбонил)аминофенокси)-2,3-диаминопиридином, получая смесь 2 изомеров. Полученную смесь хроматографировали (элюент: СН₂С1₂/Ε!ОΑс: от 1/0 до 0/1), получая первым трет-бутил-3-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат в виде желтого твердого вещества (194 мг, 0,527 ммоль, 11%), а затем трет-бутил-3-(3-метил-2оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат в виде желтого твердого вещества (841 мг, 2,28 ммоль, 48%).

трет-Бутил-3-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц):1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 2,43 (с, 3Н, Ме), 6,53 (д, 1Н, НРу 5, 1=5,6 Гц), 6,81-6,83 (м, 1Н, Н_аром), 7,36-7,37 (м, 3Н, Н_аром), 8,27 (д, 1Н, Н_Ру,₆, 1=5,6 Гц), 9,56 (с, 1Н, ИН_Вос), 12,75 (с, 1Н, КН_лактам). ЖХ-МС (т/ζ): 369 (М+Н, 100).

трет-Бутил-3 -(3 -метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат:

Ή-ЯМР (ДДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,46 (с, 9Н, трет-Ви), 2,48 (с, 3Н, Ме), 6,80-6,83 (м, 2Н, Н_аром), 7,32-7,37 (м, 2Н, Н_аром), 7,40 (с, 1Н, Н_аром), 8,31 (д, 1Н, НРу, 1=5,4 Гц), 9,55 (с, 1Н, ИНвос), 12,38 (с, 1Н, ИН_лактам). ЖХ-МС (т/ζ): 369 (М+Н, 100).

Синтез 36 трет-бутил-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1илкарбамат

трет-бутил-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат

- 52 019974

Применяли способ Ό2 с трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая смесь изомеров. Полученный остаток хроматографировали (элюент: СН₂С1₂/Е1ОАс: от 6/1 до 0/1 затем ЕЮАс/МеОН: 95/5), получая первым трет-бутил-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат в виде светло-желтого твердого вещества (401 мг, 0,958 ммоль, 35%), а затем трет-бутил-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат в виде желтого твердого вещества (607 мг, 1,45 ммоль, 53%).

трет-Бутил-4-(2-метил-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 -илкарбамат:

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,53 (с, 9Н, трет-Ви), 2,01 (с, 3Н, Ме), 6,32 (д, 1Н, Н^ 1=5,7 Гц), 7,38 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,2 Гц), 7,55-7,58 (м, 1Н, Наром), 7,62-7,67 (м, 2Н, Наром), 7,85 (д, 1Н, Нарон, 1=8,4 Гц), 8,17 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,20 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 9,35 (с, 1Н, NΗвос), 12,82 (с, 1Н, Ν^™). '³С-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б6): 20,50 (СН3), 28,05 (трет-Ви), 79,03 (трет-Ви), 105,56, 116,89, 117,37, 121,10, 121,13, 123,56, 126,26, 126,52, 126,79, 129,23, 132,08, 145,63, 146,03, 150,51, 153,98, 156,28, 159,14, 160,49. ЖХМС (т/ζ): 419 (М+Н, 100).

трет-Бутил-4-(3 -метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 -илкарбамат:

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,51 (с, 9Н, трет-Ви), 2,52 (с, 3Н, Ме), 6,58 (д, 1Н, Н_Ру,₅, 1=5,4 Гц), 7,37 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,53-7,64 (м, 2Н, Наром), 7,91 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 8,14 (д, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц), 8,22 (д, 1Н, НРу,6, 1=5,4 Гц), 9,32 (с, 1Н, ЯНвос), '2,66 (с, 1Н, NΗлакт_ам). '³С-ЯМР (δ, м.д., ДМСОб6): 20,93 (СН3), 28,05 (трет-Ви), 79,01 (трет-Ви), 108,55, 116,54, 118,89, 121,02, 121,48,123,38, 126,23, 126,53, 126,59, 129,24, 132,03, 143,82, 144,89, 145,87, 152,08, 153,97, 154,52, 164,03. ЖХ-МС (т/ζ): 419 (М+Н, 100).

3. Циклизация с образованием пиридопиразин-2,3-диона.

Синтез 37 8-(4-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дион

Способ Ό3. Раствор трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)фенилкарбамата (0,320 г, 1,0 ммоль) в диэтилоксалате (2 мл) облучали дважды по 10 мин в микроволновом реакторе (180°С, 150 Вт). Раствор охлаждали, отфильтровывали твердое вещество и промывали холодным этанолом. Получали 8(4-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дион (70 мг, выход 25%) в виде серого твердого ве щества.

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,36 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 6,67 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,88 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 7,82 (д, 2Н, 1=5,7 Гц), 11,76 (уш, 1Н), 12,28 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 271 (М+Н, 100).

Синтез 3 8 8-(4-амино-3 -фторфенокси)пиридо [2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дион

Е

Н трет-Бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенилкарбамат (1,03 г, 3,08 ммоль) растворяли в сухом Е1ОН (10 мл), добавляли диэтилоксалат (10 мл) и кипятили полученный раствор с обратным холодильником в течение 96 ч, охлаждали до КТ и фильтровали. Целевое соединение выделяли в виде белого твердого вещества. Выход: 820 мг (92%).

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,20 (уш с, 2Н, ЯН₂), 6,44 (д, 1=5,7, 1Н, Н^, 6,79 (м, 1Н, Н_аром), 6,85 (м, 1Н, Н_аром), 6,98 (м, 1Н, Н_аром), 7,91 (д, 1=5,7, 1Н, Н^), 11,81 (с, 1Н, ЫН), 12,34 (с, 1Н, ЫН); ¹³СЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 107,4, 108,4 (д, 1_РС=21,9), 113,0, 116,2 (д, 1_РС=3,0), 121,9 (уш), 123,0 (уш),

140,7, 143,2, 149,6 (д, 1_РС=10,1), 151,2, 153,8 (д, 1_РС=240), 154,8, 155,9; '⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): -123,5 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 289,1 (М+Н, 100).

- 53 019974

4. Циклизация с образованием 2-аминопиридопиразин-3-она.

Синтез 3 9 трет-бутил-4-(2-амино-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 илкарбамат

трет-бутил-4-(3-амино-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат

Способ Ό4. К трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)нафталин-1-илкарбамату (1,16 г, 3,17 ммоль), растворенному в 15 мл безводного этанола в атмосфере аргона, добавляли этилкарбоэтоксиформимидата гидрохлорид (1,72 г, 9,51 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником при перемешивании в течение 48 ч. После охлаждения до КТ образовывался осадок. Указанный осадок собирали и промывали эфиром. Получали первый изомер в виде бледно-розового твердого вещества (275 мг, 21%). Растворитель выпаривали в вакууме и растворяли полученный остаток в ЕЮАс. Органические фазы промывали насыщенным раствором ЫаНСО₃, затем раствором соли, высушивали над Мд§О₄ и упаривали в вакууме. Полученный остаток хроматографировали (элюент: ЕЮАс/МеОН: от 1/0 до 9/1), получая второй изомер в виде бледно-желтого твердого вещества (463 мг, 35%).

трет-Бутил-4-(2-амино-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат:

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц):1,51 (с, 9Н, трет-Ви), 6,31 (д, 1Н, НРу,5, 1=5,6 Гц), 7,20 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,52-7,62 (м, 3Н, Наром), 7,89-7,91 (м, 2Н, Наром), 8,10 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 9,26 (с, 1Н, N11.+ 12,61 (с, 1Н, ЫНлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,06 (С(СН₃)), 78,91 (С(СН₃)), 106,62, 115,63, 119,47, 121,28, 121,58, 123,43, 126,26, 126,42, 126,48, 129,44, 131,17, 142,99, 143,57, 147,15, 151,74, 152,72, 154,07, 156,97. ЖХ-МС (т/ζ): 420 (М+Н, 100).

Второй изомер трет-бутил-4-(3 -амино-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин1-илкарбамат:

'11-51МР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,51 (с, 9Н, трет-Ви), 6,28 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,5 Гц), 7,30 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,2 Гц), 7,62-7,53 (м, 2Н, Н_аром), 7,95 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,4 Гц), 8,00 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,5 Гц), 8,04 (т, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,12 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,7 Гц), 9,29 (с, 1Н, N11..+ 12,41 (с, 1Н, ΝΗ^. ¹³С-ЯМР (ДМСОа₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 28,17 (трет-Ви), 79,06 (трет-Ви), 104,81, 114,12, 116,17, 119,24, 121,27, 121,77, 123,40, 126,52, 126,57, 129,39, 131,69, 144,40, 146,51, 146,90, 151,12, 151,13, 154,13, 154,89.

5. Превращение пиридопиразин-2-она и пиридопиразин-3-она в 2-аминопиридопиразин и 3 аминопиридопиразин.

Синтез 40 трет-бутил-4-(3-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенилкарбамат

Способ Ό5. Ν-хлорсукцинимид (91 мг, 681 мкмоль) добавляли к раствору трифенилфосфина (178 мг, 678 мкмоль) в сухом 1,4-диоксане (4 мл) в атмосфере Аг, получая белую суспензию. Через 30 мин добавляли за один прием трет-бутил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбамат (48 мг, 129 мкмоль) и кипятили полученную смесь с обратным холодильником в течение 1 ч. Полученную черную смесь охлаждали до КТ, добавляли ЕЦЫ (1 мл) и выпаривали все летучие компоненты. Полученный черный остаток растворяли в СН₂С1₂ (3 мл) и пропускали через колонку с силикагелем (пропитанным ЕьО). Элюирование эфиром давало целевое соединение в виде первой, быст

- 54 019974 ро выходящей полосы (К(=0,83 в ЕьО). которую упаривали досуха, получая белое твердое вещество. Выход: 34 мг (68%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-бб), δ (м.д.), I (Гц): 1,48 (с, 9Н, трет-Ви), 7,09-7,13 (м, 2Н), 7,32 (м, 1Н, Наром), 7,71 (м, 1Н, Наром), 8,98 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 9,06 (с, 1Н, ΝΗβοο), 9,12 (с, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,5, 108,8 (д, 1РС=23,1), 109,9, 116,2 (д, 1РС=3,1), 124,3 (д, 1РС=11,6), 125,8, 129,3, 145,3, 149,8, 150,2 (д, 1РС=10,3), 150,8, 153,1, 154,6 (д, 1РС=248), 156,1, 161,0; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.): -119,6; ЖХМС (т/ζ): 391,1 (М+Н, 100), ву = 4,40 мин.

Синтез 41 трет-бутил-4-(2-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенилкарбамат

Е

Применяли способ Ό5 с трет-бутил-2-фтор-4-(2-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом, получая целевой продукт в виде почти белых кристаллов. Выход: 250 мг (50%).

' Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,48 (с, 9Н, трет-Ви), 7,09-7,14 (м, 2Н, Наром), 7,34 (м, 1Н, Наром), 7,73 (м, 1Н, Наром), 8,97 (д, 1Н, 1=5,3, Нг,), 9,07 (с, 1Н, ΝΗβοο), 9,23 (с, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,5, 109,0 (д, 1РС=23,1), 110,0, 116,4 (д, 1РС=3,1), 124,5 (д, 1РС=11,6), 125,7, 129,8, 146,6, 149,0, 149,8 (д, 1РС=10,3), 150,7, 153,1, 154,6 (д, 1РС=248), 155,0, 160,1; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.): -119,6; ЖХ-МС (т/ζ): 391,1 (М+Н, 100), ву = 4,80 мин.

Синтез 42 трет-бутил-2-фтор-4-(2-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Способ Ό6. Морфолин (500 мкл, избыток) добавляли к трет-бутил-4-(2-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин8-илокси)-2-фторфенилкарбамату (68 мг, 174 мкмоль) в атмосфере аргона и перемешивали полученный желтый раствор при КТ в течение 45 мин. Затем добавляли Н₂О (10 мл) и отфильтровывали выпавшее в осадок желтое твердее вещество, получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 69 мг (90%).

' Н-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,47 (с, 9Н, трет-Ви), 3,69 (уш с, 8Н, К(СН₂СН₂)₂О), 6,96 (м, 2Н, Наром), 7,04 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 7,15 (м, 1Н, Наром), 7,59 (м, 1Н, Наром), 8,57 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 8,96 (с, 1Н, ΝΗβοο), 8,98 (с, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 44,5, 65,8, 79,3, 107,8 (д, 1_Рс=23,1),

111,5, 115,3 (д, 1_РС=3,1), 122,9 (д, 1_РС=11,6), 125,8, 128,8, 139,5, 147,8, 147,9, 151,1, 152,3 (д, 1_РС=10,3),

153,2, 154,8 (д, 1_РС=248), 157,6; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.): -120,3; ЖХ-МС (т/ζ): 442,2 (М+Н, 100) ву = 4,70 мин.

Синтез 43 трет-бутил-2-фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Применяли способ Ό6 с морфолином и трет-бутил-4-(3-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2фторфенилкарбаматом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 117 мг (89%).

'Н-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,48 (с, 9Н, трет-Ви), 3,77 (м, 4Н, Ы(СН₂СН₂)₂О), 3,84 (м, 4Н, Ы(СН₂СН₂)₂О), 6,72 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 7,00 (м, 2Н, Наром), 7,21 (м, 1Н, Наром), 7,63 (м, 1Н, Наром), 8,65 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 8,85 (с, 1Н, Наром), 9,00 (с, 1Н, ΝΗβοΥ ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 44,4, 65,9, 79,4, 106,4, 108,2 (д, 1РС=23,1), 115,7 (д, 1РС=3,1), 122,6, 123,3 (д, 1РС=11,6), 125,9, 136,4, 146,7, 151,4 (д, 1РС=10,3), 152,2, 153,2, 153,8, 153,9, 154,7 (д, 1РС=248), 160,0; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.): -120,0; ЖХМС (т/ζ): 442,2 (М+Н, 100), ву = 3,48 мин.

- 55 019974

Синтез 44 трет-бутил-2-фтор-4-(3-(метиламино)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Р

Применяли способ Ό6 с метиламином и трет-бутил-4-(3-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2фторфенилкарбаматом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 80 мг (90%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,47 (с, 9Н, трет-Ви), 2,95 (д, 1=4,7, 3Н, ЛНСН₃), 6,62 (д, 1=5,4, 1Н, НРу), 6,97 (м, 1Н, Н_аром), 7,18 (м, 1Н, Наром), 7,61 (м, 1Н, Наром), 8,03 (уш кв, 1=4,7, 1Н, ЛНСН3), 8,30 (с, 1Н, Наром), 8,55 (д, 1=5,4, 1Н, НРу), 8,97 (с, 1Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 27,1, 28,0, 79,4,

105,6, 108,3 (д, 1_РС=23,0), 115,8 (д, 1_РС=2,9), 122,3, 123,4 (д, 1_РС=11,9), 125,8 (уш), 139,7 (уш), 151,3 (д, 1_РС=10,0), 152,8, 153,2, 153,4, 154,7 (д, 1_РС=248), 155,3, 160,1; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -120,0; ЖХМС (т/ζ): 386,1 (М+Н, 100), ву = 3,13 мин.

Синтез 45 трет-бутил-2-фтор-4-(3 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Применяли способ Ό6 с Л-метилпиперазином и трет-бутил-4-(3-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)-2-фторфенилкарбаматом, получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 142 мг (92%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,47 (с, 9Н, трет-Ви), 2,24 (с, 3Н, СН₃), 2,46 (м, 4Н, Л(СН₂СН₂)₂ЛМе), 3,84 (м, 4Н, Л(СН₂СН₂)₂ЛМе), 6,68 (д, 1=5,3, 1Н, Н_Ру), 6,98 (м, 1Н, Н_аром), 7,19 (м, 1Н, Наром), 7,61 (м, 1Н, Наром), 8,62 (д, 1=5,3, 1Н, НРу), 8,84 (с, 1Н, Наром), 8,97 (с, 1Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 43,9, 45,6, 54,2, 79,4, 106,2, 108,2 (д, 1_РС=22,8), 115,7 (д, 1_РС=3,1), 122,4, 123,4 (д, 1_РС=11,9), 125,9, 136,4, 151,4 (д, 1_РС=10,0), 152,3, 153,2, 153,7, 154,7 (д, 1_РС=248), 160,1; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО б₆), δ (м.д.): -120,0; ЖХ-МС (т/ζ): 455,2 (М+Н, 100), ву = 2,43 мин.

Синтез 46 трет-бутил-4-(3-(диметиламино)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенилкарбамат

Применяли способ Ό6 с трет-бутил-4-(3-хлорпиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенилкарбаматом (270 мг, 0,67 ммоль) и диметиламином, получая продукт в виде желтого твердого вещества. Выход: 233 мг (91%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,47 (с, 9Н, трет-Ви), 2,95 (д, 1=4,7, 3Н, ЛНСН₃), 6,62 (д, 1=5,4, 1Н, НРу), 6,97 (м, 1Н, Наром), 7,18 (м, 1Н, Наром), 7,61 (м, 1Н, Наром), 8,03 (уш кв, 1=4,7, 1Н, ЛНСН3), 8,30 (с, 1Н, Н_аром), 8,55 (д, 1=5,4, 1Н, Н_Ру), 8,97 (с, 1Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 37,4, 79,4,

105,8, 108,2 (д, 1_РС=23,0), 115,7 (д, 1_РС=2,9), 122,0, 123,4 (д, 1_РС=11,9), 125,9 (уш), 136,1, 151,5 (д, 1_РС=10,0), 152,5, 153,2, 153,5, 154,7 (д, 1_РС=248), 160,1; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -120,0; ЖХ-МС (т/ζ): 400,1 (М+Н, 100), ву = 1,97 мин.

6. Циклизация с образованием других замещенных пиридопиразинонов.

Синтез 47 трет-бутил-4-(3-оксо-2-(трифторметил)-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси) нафталин-1-илкарбамат

- 56 019974

трет-бутил-4-(2-оксо-3-(трифторметил)-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1илкарбамат

Способ Ό7. К трет-бутил-4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)нафталин-1-илкарбамату (1,00 г, 2,73 ммоль), растворенному в 20 мл безводного этанола в атмосфере аргона, добавляли этилтрифторпируват (697 мг, 0,50 мл, 4,10 ммоль) при кипячении с обратным холодильником. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником при перемешивании в течение 3 ч. После охлаждения до КТ образовывался осадок, который отфильтровывали и промывали Εΐ₂Ο. Получали трет-бутил-4-(3-оксо-2-(трифторметил)3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-илкарбамат в виде белого твердого вещества (116 мг, 0,246 ммоль, 9%). Фильтрат упаривали в вакууме. Полученный остаток хроматографировали (элюент: С^СЦЕЮАс: от 4/1 до 0/1), получая второй изомер в виде бледно-желтого твердого вещества (540 мг, 1,14 ммоль, 42%).

Первый изомер трет-бутил-4-(3-оксо-2-(трифторметил)-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбамат:

^!Н-ЯМР (ДМСО-άβ), δ (м.д.), I (Гц): 1,52 (с, 9Н, трет-Ви), 6,37 (д, 1Н, НРу 1=5,7 Гц), 7,45 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,54-7,57 (м, 1Н, 17,62-7,65 (м, 1Н, 17,69 (д, 1Н, 11:р.. 1=8,2 Гц), 7,80 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 8,18 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,37 (д, 1Н, НРу, 1=5,7 Гц), 9,38 (с, 1Н, ΝΗ^), 13,55 (с, 1Н, ΝΗ„). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 28,04 (трет-Ви), 79,09 (трет-Ви), 105,71, 116,54, 117,35, 118,78, 120,84, 120,97, 123,62, 126,06, 126,58, 126,97, 129,09, 132,63, 143,17, 145,24, 146,71, 153,20, 153,90, 154,84, 162,26. ЖХ-МС (т/ζ): 473 (М+Н, 100).

Второй изомер трет-бутил-4-(2-оксо-3-(трифторметил)-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбамат:

'ίί-ЯМР ДМСО-сР). δ (м.д.), I (Гц): 1,53 (с, 9Н, трет-Ви), 6,76 (д, 1Н, Η^, 1=5,3 Гц), 7,43 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,2 Гц), 7,55-7,58 (м, 1Н, Наром), 7,63-7,69 (м, 2Н, Η^), 7,92 (д, 1Н, 11,.,.. 1=8,4 Гц), 8,17 (д, 1Η, ^ром, 1=8,6 Гц), 8,39 (д, 1Н, НРу, 1=5,3 Гц), 9,38 (с, 1Н, NΗвοс), 13,51 (с, 1Н, ΝΗ^· ¹³С-ЯМР (ДМСОб₆), δ (м.д.), I (Гц): 28,06 (трет-Ви), 79,08 (трет-Ви), 90,66 (СР₃), 110,72, 116,81, 118,62, 120,88, 120,97, 121,42, 123,17, 123,46, 125,47, 126,07, 126,68, 129,25, 132,38, 145,51, 146,71, 151,66, 153,97, 166,39. ЖХМС (т/ζ): 473 (М+Н, 100).

(V) Удаление защитной группы Вос.

Синтез 48 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

Способ Е1. трет-Бутил-2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (250 мг, 671 мкмоль) помещали в круглодонную колбу в атмосфере Аг. Добавляли ТБАФ (7 мл 1М раствора в ТГФ, 7 ммоль) и кипятили полученный раствор с обратным холодильником в течение 5 ч. Выпаривали летучие составляющие и разбавляли полученный маслянистый остаток Н2О (80 мл). Доводили величину рН до 7 (NаΗСΟ₃), после перемешивания в течение 1 ч при КТ отфильтровывали образовав

- 57 019974 шийся осадок и дважды обрабатывали толуолом (30 мл), получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 180 мг (98%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,19 м.д. (уш с, 2Н, ЫН₂), 6,79 (д, 1=5,4 Гц, 1Н, Н_Ру), 6,88-6,82 (м, 2Н, Наром), 7,06 (м, 1Н, Наром), 8,32 (д, 1=5,4 Гц, 1Н, НРу), 8,40 (с, 1Н, Наром), 12,49 (уш с, 1Н, Ν^). ¹³СЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 108, (д, 1ес=21 Гц), 109,3, 116,3 (д, 1ес=6 Гц), 117,1 (д, 1ес=3 Гц), 119,2 (уш), 134,7 (д, Э_ЕС=13 Гц), 142,6 (д, 1_ЕС=9 Гц), 144,0 (уш), 145,4, 150,1 (д, 1_ЕС=240 Гц), 153,2, 154,5, 155,6 (уш); ЖХ-МС (т/ζ): 273,1 (М+Н, 100), ву = 2,37 мин.

Синтез 49 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Г

н

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом, получая целевое соединение. Выход: 191 мг (93%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,21 м.д. (уш с, 2Н, Ν1₂); 6,52 (д, 1=4,8 Гц, 1Н, Н_Ру), 6,89-6,82 (м, 2Н, Наром), 7,05 (д, ³1ес=11,5 Гц, 1Н, Наром), 8,17 (с, 1Н, Наром), 8,32 (д, 1=4,8 Гц, 1Н, НРу), 12,86 (уш с, 1Н, ХН^.); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 105,5, 108,8 (д, ЭЕС=21 Гц), 116,4 (д, 1ЕС=6 Гц), 117,0 (д, 1ЕС=3 Гц), 118,0, 134,6 (д, 1ЕС= Гц), 142,6 (д, 1ЕС=9 Гц), 145,3, 150,8, 150,1 (д, ЭЕС=241 Гц), 152,1, 156,5, 161,7; ¹⁹Е ЯМР (470 МГц, ДМСО-66): δ = -131,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 273,1 (М+Н, 100), ву = 2,86 мин.

Синтез 50 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (170 мг, 0,4 ммоль), получая целевое соединение (81 мг, 63%) в виде бледнокоричневого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,36 (с, 3Н, СН₃); 5,19 (с, 2Н, ΝΉ>), 6,75 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,3 Гц), 6,79 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 6,90 (дд, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц, 1=2,5 Гц), 7,07 (д, 1Н, Наром, 1=2,5 Гц), 8,31 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,3 Гц), 8,39 (с, 1Н, ΝI или СН), 12,48 (с, 1Н, ΝΉ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,7,

108,9, 114,8, 119,8, 120,7, 121,8, 143,6, 145,0, 145,3, 154,4. ЖХ-МС (т/ζ): 301 (М+Н, 100), ву = 2,90 мин.

Синтез 51 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-(метилтио)-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (110 мг, 0,3 ммоль), получая целевое соединение (63 мг, 76%) в виде бледно желтого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,37 (с, 3Н, СН₃); 5,18 (с, 2Н, Ν^), 6,48 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,6 Гц), 6,79 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 6,87 (дд, 1Н, Нарон, 1=8,6 Гц, 1=2,6 Гц), 7,04 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 8,16 (с, 1Н, Ν4 или СН), 8,29 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,6 Гц), 12,82 (с, 1Н, ΝΉ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,6,

105,2, 114,8, 117,8, 119,7, 120,8, 121,5, 143,7, 144,9, 145,1, 150,5, 151,9, 156,4, 161,8. ЖХ-МС (т/ζ): 301 (М+Н, 100), ву=3,35 мин.

Синтез 52 8-(4-амино-3-фторфенокси)-3-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

- 58 019974

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-фтор-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом; выход: 96%.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,48 м.д. (с, 3Н, СН₃), 6,72 (д, 1Н, 1=5,3 Гц, Н_Ру), 6,84 (м, 2Н, Н_аром), 7,03 (м, 1Н, Н_аром), 8,27 (д, 1=5,3 Гц, 1Н, Н^), 12,32 (уш с, 1Н, XII·,.); ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,4, 106,8, 109,0, 116,0, 118,5, 123,9, 125,8, 145,6, 150,5, 151,2, 152,2, 153,1, 156,4,160,3; ¹⁹Е

ЯМР (470 МГц, ДМСО-б₆): δ = -131,3 м.д.; ЖХ-МС (2,79 мин): 287,1 (М+Н, 100).

Синтез 53 8-(4-амино-3-фторфенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-фтор-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом, получая целевое соединение с выходом 97%.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,43 м.д. (с, 3Н, СН₃, 5,18 (уш с, 2Н, ΝΗ₂), 6,46 (д, 1=4, Гц, 1Н, Нгу), 6,81 (м, 1Н, Н_аром), 7,02 (с, 1Н, Н_аром), 8,23 (д, 1=4, Гц, 1Н, Яру), 12,70 (уш с, 1Н, ΝΗατ); ¹⁹Е ЯМР (47 МГц, ДМСО-б₆): δ = -131,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 287,1 (М+Н, 100), ву = 3,20 мин.

Синтез 54 8-(4-амино-2-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-3-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (335 мг, 0,9 ммоль), получая целевое соединение (164 мг, 67%) в виде корич невого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 5,66 (уш, 2Н, ΝΗ₂); 6,57 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,4 Гц), 6,72 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,7 Гц и 1=2,0 Гц), 6,84 (дд, 1Н, Н^, 1=12,6 Гц и 1=2,5 Гц), 7,20 (т, 1Н, Н^, 1=8,8 Гц), 8,21 (с, 1Н, СН), 8,38 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,7 Гц). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 105,1, 106,0, 114,0, 118,7, 124,8, 133,0, 145,0, 146,4, 152,1, 153,2, 155,8, 157,5, 161,9. ¹⁹Е-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б6): -129,18. ЖХ-МС (т/ζ): 273 (М+Н, 100), ву=1,45 мин.

Синтез 55 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбаматом (226 мг, 0,638 ммоль), получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (132 мг, 0,519 ммоль, 81%).

Ή-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 5,37 (уш, 2Н, ΝΗ₂), 6,30 (ддд, 1Н, Н_аром, 1=7,9 Гц, 1=2,3 Гц, 1=0,7 Гц), 6,35 (т, 1Н, Н_аром, 1=2,2 Гц), 6,50 (ддд, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц, 1=2,0 Гц, 1=0,8 Гц), 6,58 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 7,11 (т, 1Н, Н_аром, 1=8,0 Гц), 8,16 (с, 1Н, Н_аром), 8,33 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 12,84 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 105,03, 106,21, 106,83, 111,13, 118,24, 130,33, 145,30, 150,75, 150,78, 151,89,

- 59 019974

154,70, 156,36, 160,82. ЖХ-МС (т/ζ): 255 (М+Н, 100).

Синтез 56 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (635 мг, 1,8 ммоль), получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (123 мг, 0,484 ммоль, 27%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 5,38 (уш, 2Н, ΝΗ₂), 6,37 (ддд, 1Н, Н_аром, 1=7,9 Гц, 1=2,3 Гц, 1=0,7 Гц), 6,35 (т, 1Н, Наром, 1=2,2 Гц), 6,50 (ддд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=2,0 Гц, 1=0,8 Гц), 6,85 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 7,11 (т, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 8,16 (с, 1Н, Наром), 8,35 (д, 1Н, НРу, 1=5,3 Гц), 8,40 (с, 1Н, Наром), 12,49 (с, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 255 (М+Н, 100).

Синтез 57 8-(3-аминофенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-3-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (190 мг, 0,5 ммоль), получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (120 мг, 0,447 ммоль, 90%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,42 (с, 3Н, Ме), 5,37 (уш, 2Н, ΝΗ₂), 6,31 (д, 1Н, Н_аром, 1=7,9 Гц), 6,36 (с, 1Н, Наром), 6,50 (д, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 6,53 (д,1Н, НРу 1=5,7 Гц), 7,12 (т, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 8,26 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,7 Гц), 12,77 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 20,49 (Ме), 105,26, 105,96, 107,06, 111,14, 117,72, 130,40, 145,96, 150,36, 150,84, 154,87, 156,61, 158,70, 160,10. ЖХ-МС (т/ζ): 269 (М+Н, 100).

Синтез 58 8-(4-аминофенилтио)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илтио)фенилкарбаматом (438 мг, 1,18 ммоль), получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 160 мг (50%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 5,68 (уш с, 2Н, ΝΗ₂), 6,39 (д, 1=5,3, 1Η, Ы_Ру), 6,71 (д, 1=8,3, 2Н, Наром), 7,22 (д, 1=8,3, 2Н, Н_аром), 8,17 (м, 2Н, НРу), 12,78 (уш с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 110,0, 114,5, 115,2, 123,0, 137,1, 143,2, 149,9, 150,7, 151,0, 154,1, 156,7; ЖХ-МС (т/ζ): 271,0 (М+Н, 100), ву = 3,46 мин.

Синтез 59 2-фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилин

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (100 мг, 0,23 ммоль), получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 69 мг (87%).

- 60 019974 ^!Н-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,76 (м, 4Н, И(СН2СН2)2О), 3,82 (м, 4Н, И(СН2СН2)2О), 5,16 (с, 2Н, ИН2), 6,52 (д, 1Н, 1=5,3, НРу), 6,80-6,88 (м, 2Н, Наром), 7,03 (м, 1Н, Наром), 8,55 (д, 1Н, 1=5,3, НРу), 8,82 (с, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 44,4, 65,9, 104,5, 108,7 (д, 1_РС=21,2), 116,4 (д, Э_РС=5,8), 117,0 (д, 1_РС=2,9), 122,3, 134,4 (д, 1_РС=12,9), 135,9, 143,2 (д, Э_РС=9,5), 150,2 (д, 1_РС=240), 151,9, 153,2, 153,9, 161,6; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.): -131,3; ЖХ-МС (т/ζ): 342,1 (М+Н, 100), ву = 2,03 мин.

Синтез 60 8-(4-амино-3-фторфенокси)-И-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3-амин

Г

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-фтор-4-(3-(метиламино)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбаматом (65 мг, 0,17 ммоль), получая 41 мг целевого соединения (85%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,95 (д, 1=4,6, 3Н, ИНСН3, 5,17 (с, 2Н, ИН2), 6,45 (д, 1=5,4, 1Н, НД 6,80-6,88 (м, 2Н, Наром), 7,02 (м, 1Н, Наром), 8,03 (уш кв, 1=4,6, 1Н, ИНСН3), 8,31 (с, 1Н, Наром), 8,48 (д, 1=5,4, 1Н, Нр,); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 27,1, 104,0, 108,7 (д, 1_РС=21,2), 116,4 (д, 1_РС=5,6), 117,0 (д, 1_РС=21,2), 121,9, 134,3 (д, 1_РС=12,9), 139,2 (уш), 143,2 (д, Э_РС=9,3), 150,2 (д, 1_РС=240), 152,7, 153,1,

155,3, 160,1; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.): -131,3; ЖХ-МС (т/ζ): 286,1 (М+Н, 100), ву=1,87 мин.

Синтез 61 2-фтор-4-(3 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилин

Р

Применяли способ Е1 с трет-бутил-2-фтор-4-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенилкарбаматом (125 мг, 0,28 ммоль), получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 76 мг (75%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,24 (с, 3Н, СН₃), 2,46 (м, 4Н, И(СН₂СН₂)₂ИМе), 3,84 (м, 4Н, И(СН₂СН₂)₂ИМе), 5,16 (с, 2Н, ИН₂), 6,49 (д, 1=5,3, 1Н, Н^), 6,80 (м, 1Н, Н_аром), 6,86 (м, 1Н, Н_аром), 7,02 (м, 1Н, Наром), 8,53 (д, 1=5,3, 1Н, ^), 8,83 (с, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 43,9, 45,7, 54,2,

104,4, 108,7 (д, 1_РС=21,1), 116,4 (д, Э_РС=5,8), 117,0 (д, 1_РС=2,8), 122,1, 134,4 (д, 1_РС=12,8), 136,0, 143,2 (д, 1_РС=9,4), 150,2 (д, 1_РС=240), 152,0, 153,5, 153,8, 161,6; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.): -131,3; ЖХ-МС (0,67 мин): т/ζ вычисл. для С_!8Н₂₀РИ₆О [М+Н⁺]: 355,1; найдено: 355,1.

Синтез 62 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)2-(метилтио)фенилкарбаматом (131 мг, 0,3 ммоль), получая целевое соединение (97 мг, 99%) в виде бледно-желтого порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСО-й6, δ (м.д.), 1 (Гц): 2,37 (с, 3Н, СН3); 2,42 (с, 3Н, СН3); 5,17 (уш, 2Н, ИН2), 6,43 (д, 1Н, Нгу 1=5,6 Гц), 6,79 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 6,86 (дд, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц, 1=2,6 Гц), 7,04 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 8,21 (д, 1Н, Нр,, 1=5,6 Гц), 12,69 (с, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,6, 20,3, 105,0, 114,8, 117,1, 119,7, 120,8, 121,6, 143,7, 144,8, 145,3, 150,4, 156,2, 158,4, 161,0. ЖХ-МС (т/ζ): 315 (М+Н, 100), ву = 3,68 мин.

Синтез 63 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-3-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

- 61 019974

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)2-(метилтио)фенилкарбаматом (200 мг, 0,48 ммоль), получая целевое соединение (34 мг, 23%) в виде бледно-желтого порошка.

'11-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,36 (с, 3Н, СН₃); 2,37 (с, 3Н, СН₃); 5,19 (с, 2Н, ΝΗ₂), 5,96 (д, 1Н, Нру, 1=5,5 Гц), 6,75 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 6,88 (дд, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц, 1=2,6 Гц), 7,06 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 8,28 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,5 Гц), 12,33 (с, 1Н, ЫН). ЖХ-МС (т/ζ): 315 (М+Н, 100), ву=1,86 мин.

Синтез 64 8-(4-аминонафталин-1 -илокси)-2-метилпиридо [2,3-Ь]пиразин-3 (4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (309 мг, 0,971 ммоль, количественно).

'11-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,49 (с, 3Н, Ме), 5,86 (уш, 2Н, ЫН₂), 6,21 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,7 Гц), 6,72 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,14 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,40-7,46 (м, 2Н, Наром), 7,59 (д, 1Н, Наром, 1=7,8 Гц), 8,12 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,7 Гц), 8,17 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,2 Гц), 12,73 (с, 1Н, ЫН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,47 (Ме), 104,90, 106,34, 117,05, 118,71, 120,74, 123,08, 123,33, 124,41, 126,39, 126,56, 138,40, 143,32, 145,42, 150,38, 156,29, 158,53, 161,56. ЖХ-МС (т/ζ): 319 (М+Н, 100).

Синтез 65 8-(4-аминонафталин-1 -илокси)-3 -метилпиридо [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (354 мг, 1,11 ммоль, 66%).

'11-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,50 (с, 3Н, Ме), 5,85 (уш, 2Н, ЫН₂), 6,46 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,4 Гц), 6,72 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,17 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,41-7,46 (м, 2Н, Наром), 7,66 (д, 1Н, Наром, 1=7,4 Гц), 8,15-8,17 (м, 2Н, Н_аром), 12,55 (с, 1Н, ЫН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,93 (Ме), 106,20, 107,66, 118,38, 118,76, 121,00, 122,97, 123,33, 124,45, 126,32, 126,52, 138,28, 143,37, 143,57, 144,89, 153,31, 154,48, 163,78. ЖХ-МС (т/ζ): 319 (М+Н, 100).

Синтез 66 2-амино-8-(4-аминонафталин-1 -илокси)пиридо [2,3-Ь]пиразин-3 (4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(2-амино-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая целевое соединение в виде бледно-розового твердого вещества (207 мг, 0,648 ммоль, 75%).

Ίΐ-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,76 (уш, 2Н, ЯН₂), 6,14 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,6 Гц), 6,70 (д, 1Н, Н_а-

- 62 019974 ром, 1=8,1 Гц), 7,07 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц), 7,39-7,44 (м, 2Н, Н_аром), 7,62 (дд, 1Н, Н_аром, 1=7,5 Гц, 1=2,0 Гц), 7,80 (д, 1Н, Н_Ру,₆, 1=5,6 Гц), 8,14 (д, 1Н, Н_аром, 1=7,5 Гц), 12,50 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Л₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 105,15, 106,46, 118,43, 118,59, 120,93, 122,97, 123,42, 124,32, 126,15, 126,78, 139,07, 142,66, 142,84, 143,56, 151,49, 152,72, 158,57. ЖХ-МС (т/ζ): 320 (М+Н, 100).

Синтез 67 8-(4-амино-3 -фторфенокси)-ЫЛ-диметилпиридо [2,3-Ь]пиразин-3 -амин

Е

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(3-(диметиламино)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2фторфенилкарбаматом, получая неочищенный продукт (5% ТБАФ) в виде бежевого твердого вещества, которое применяли на последующих стадиях. Выход: 128 мг (78%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-дб), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,27 (с, 6Н, Ν(ϋΗ₃)2), 5,15 (с, 2Н, ΝΗ₂), 6,47 (д, 1=5,2, 1Н, НРу), 6,80-6,88 (м, 2Н, Н_аром), 7,01 (м, 1Н, Н_аром), 8,52 (д, 1=5,2, 1Н, НРу), 8,69 (с, 1Н, Н_аром); ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.): -131,3; ЖХ-МС (т/ζ): 300,1 (М+Н, 100), ву = 1,29 мин.

Синтез 68 3 -амино-8-(4-аминонафталин-1 -илокси)пиридо [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(3-амино-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая целевое соединение в виде бледно-розового твердого вещества (198 мг, 0,620 ммоль, 60%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,80 (уш, 2Н, ΝΗ2), 6,14 (д, 1Н, Наром, 1=5,5 Гц), 6,70 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,13 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,42-7,44 (м, 2Н, Наром), 7,68 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,93 (д, 1Н, НРу, 1=5,5 Гц), 8,15 (д, 1Н, Наром, 1=7,2 Гц), 12,28 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 103,72, 106,23, 113,28, 118,67, 121,16, 122,88, 123,32, 124,38, 126,16, 126,78, 138,63, 143,06, 144,24, 146,42, 150,93, 152,39, 154,68. ЖХ-МС (т/ζ): 320 (М+Н, 100).

Синтез 69 8-(4-аминонафталин-1 -илокси)-2-(трифторметил)пиридо [2,3-Ь]пиразин-3 (4Н)-он

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(3-оксо-2-(трифторметил)-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин8-илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (56 мг, 0,150 ммоль, 66%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 5,91 (уш, 2Н, ΝΗ2), 6,30 (д, 1Н, НРу, 1=5,7 Гц), 6,73 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,19 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,41-7,48 (м, 2Н, Наром), 7,59 (д, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц), 8,19 (д, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц), 8,32 (д, 1Н, НРу, 1=5,7 Гц), 13,46 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 105,28, 106,21, 116,39, 118,80, 120,63, 121,09, 123,14, 123,28, 124,50, 126,31, 126,55, 137,91, 142,76 (СР₃), 143,69, 146,74, 153,37, 154,68, 163,25. ЖХ-МС (т/ζ): 373 (М+Н, 100).

Синтез 69А 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-3-(трифторметил)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он

- 63 019974

Применяли способ Е1 с трет-бутил-4-(2-оксо-3-(трифторметил)-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин8-илокси)нафталин-1-илкарбаматом, получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества (222 мг, 0,596 ммоль, 53%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 5,89 (уш, 2Н, ИН₂), 6,57 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,2 Гц), 6,73 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц), 7,17 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц), 7,41-7,47 (м, 2Н, Н_аром), 7,67 (д, 1Н, Н_аром, 1=7,8 Гц), 8,17 (д, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 6,26 (д, 1Н, Наром, 1=5,2 Гц), 13,54 (с, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСОА), δ (м.д.), I (Гц): 118,80, 119,18, 121,09, 121,38, 123,12, 123,47, 124,58, 126,43, 126,49, 131,55, 138,40, 141,98, 143,55, 146,04, 153,36, 155,01. ЖХ-МС (т/ζ): 373 (М+Н, 100).

(У1) Мочевины из общих промежуточных соединений.

Синтез 70 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенил)мочевина (АА-042)

С1

Ν Ν'

Способ Р1 (удаление защитной группы Вос и сочетание с изоцианатом, проводимые в одном реакционном сосуде). трет-Бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат (0,240 г, 0,67 ммоль) растворяли в трифторуксусной кислоте (2 мл) и перемешивали полученный раствор при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 2 ч. Выпаривали растворитель в вакууме и раство ряли полученное темное масло в ТГФ (3 мл) и триэтиламине (1 мл). Добавляли за один прием 1-хлор-4изоцианато-2-(трифторметил)бензол (0,180 г, 0,80 ммоль) и перемешивали полученный раствор в течение ночи при 45 °С в атмосфере Аг. Затем раствор охлаждали, выпаривали и перекристаллизовывали полученный неочищенный продукт из дихлорметана и диэтилового эфира, получая целевое соединение (15 мг, выход 5%) в виде коричневого твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,82 (д, 1Н, 1=5,5 Гц), 7,24 (д, 2Н, 1=8,9 Гц), 7,62 (д, 1Н, 1=9,0 Гц), 7,66 (дд, 1Н, 1=9,0, 2,6 Гц), 7,71 (д, 2Н, 1=8,9 Гц), 8,12 (д, 1Н, 1=2,6 Гц), 8,34 (д, 1Н, 1=5,5 Гц), 8,41 (с, 1Н), 8,98 (уш, 1Н), 9,18 (уш, 1Н), 12,54 (уш, 1Н); ЖХ-МС (т/ζ): 476 (М+Н, 100).

Синтез 71 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенил)мочевина (АА-020)

С1

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбаматом и 4-хлор-3-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (выход 83%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,53 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 7,18 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 7,58-7,70 (м, 4Н), 8,13 (д, 1Н, 1,9 Гц), 8,19 (с, 1Н), 8,34 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 9,14 (уш, 1Н), 9,36 (уш, 1Н), 12,88 (уш, 1Н). ЖХМС (т/ζ): 476 (М+Н, 100).

Синтез 72 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-016)

- 64 019974

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбаматом и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (выход 55%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,25 (с, 3Н), 1,28 (с, 9Н), 6,35 (с, 1Н), 6,52 (д, 1Н, 1=5,4 Гц), 7,17 (д, 2Н, 1=9,0 Гц), 7,32-7,43 (система АВ, 4Н), 7,51 (д, 2Н, 1=9,0 Гц), 8,17 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н, 5,4 Гц), 8,34 (уш, 1Н), 9,12 (уш, 1Н), 12,87 (уш, 1Н); ЖХ-МС (т/ζ): 510 (М+Н, 100).

Синтез 73 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-040)

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбаматом и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (выход 64%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,27 (с, 3Н), 1,29 (с, 9Н), 5,41 (с, 1Н), 6,07 (д, 1Н, 5,8 Гц), 7,26 (д, 2Н, 8,8 Гц), 7,32-7,41 (система АВ, 4Н), 7,45 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 7,54 (д, 1Н, 5,8 Гц), 8,28 (с, 1Н), 8,30 (уш, 1Н), 9,0 (уш, 1Н), 10,12 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 510 (М+Н, 100).

Синтез 74 1-(4-хлор-3-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2,3-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-050)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дионом и 4-хлор-3трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (выход 38%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,62 (д, 1Н, 1=5,3 Гц), 7,41 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 7,52 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 8,26 (д, 1Н, 1=5,3 Гц), 9,03 (уш, 1Н), 9,41 (уш, 1Н), 12,39 (уш, 1Н), 12,98 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 492 (М+Н, 100).

Синтез 75 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-ил)мочевина (АА-012)

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин1-илкарбаматом и 2-фтор-5-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (выход 69%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,32 (д, 1Н, 1=4,8 Гц), 7,38-7,62 (м, 6Н), 7,88-7,94 (система АВ, 2Н), 8,06 (с, 1Н), 8,18 (д, 1Н, 1=8,0 Гц), 8,43 (д, 1Н, 1=4,8 Гц), 8,64 (уш, 1Н), 10,52 (уш, 1Н), 10,93 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 510 (М+Н, 100).

Синтез 76 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(4-( 1 -оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1-ил)мочевина (АА-037)

- 65 019974

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин1-илкарбаматом м 4-хлор-3-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (выход 87%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,23 (д, 1Н, 1=5,9 Гц), 7,23 (д, 1Н, 1=8,0 Гц), 7,53-7,59 (м, 3Н), 7,79 (д, 1Н, 8,0 Гц), 7,84 (д, 2Н, 8,5 Гц), 8,08 (с, 1Н), 8,21 (д, 1Н, 6,8 Гц), 8,33 (д, 1Н, 2,9 Гц), 8,38 (д, 1Н, 8,5 Гц), 11,46 (с, уш, 1Н), 12,39 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 526 (М+Н, 100).

Синтез 77 1-(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-ило кси) нафталин-1 -ил)мочевина (АА-033)

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин1-илкарбаматом и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (выход 40%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,4 (м, 2Н) 7,35-7,66 (м, 4Н), 7,87 (д, 1Н, 8,5 Гц), 7,97 (д, 1Н, 8,5 Гц), 8,12 (д, 1Н, 8,7 Гц), 8,23 (с, 1Н), 8,27 (д, 1Н, 5,7 Гц), 8,80 (уш, 1Н), 9,18 (уш, 1Н), 12,83 (уш, 1Н). ЖХМС (т/ζ): 560 (М+Н, 100).

Синтез 78 1-(4-хлор-3-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-013)

Применяли способ Р1 с трет-бутил-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин1-илкарбаматом и 4-хлор-3-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (выход 91%).

Ή-ЯМР (СО₃ОО), δ (м.д.), I (Гц): 6,72 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 7, 46 (д, 1Н, 1=7,4 Гц), 7,42-7,63 (м, 4Н), 7,82 (д, 1Н, 1=7,4 Гц), 7,91 (с, 1Н), 7,99 (д, 1Н, 1=3,0 Гц), 8,20 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 8,27 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 8,51 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 526 (М+Н, 100).

Синтез 79 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(2-(метилтио)-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь] пиразин-8 -илокси)фенил)мочевина (АА-023)

н

Применяя способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 4-хлор3-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (48 мг, 92%) в виде бледно-белого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,47 (с, 3Н, СН₃); 6,61 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 7,07 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц, 1=2,6 Гц), 7,26 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,62 (м, 2Н, Наром), 7,86 (д, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 8,11 (м, 1Н, Н_аром), 8,18 (с, 1Н, ΝΉ или СН), 8,21 (с, 1Н, ΝΉ или СН), 8,36 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 9,75 (с, 1Н, ΝΉ или СН), 12,89 (с, 1Н, ΝΉ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,6, 106,1, 116,4, 117,9, 118,2, 119,7, 121,6, 122,7, 123,4, 123,7, 124,2, 126,6, 131,9, 133,6, 139,2, 145,3, 150,0, 150,9, 152,0, 152,4, 156,4, 160,7.

- 66 019974

ЖХ-МС (т/ζ): 522 (М+Н, 100), ву=5,24 мин.

Синтез 80 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь] пиразин-8 -илокси)фенил)мочевина (АА-023)

Р

Способ Р2. Раствор 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она (21,4 мг, 78,6 мкмоль) в сухом ДМСО (1 мл) в атмосфере Аг обрабатывали 2-фтор-5-трифторфенилизоцианатом (11,5 мкл, 80 мкмоль) и перемешивали полученный бледно-желтый раствор при КТ. Через 3 ч раствор разбавляли Н₂О (20 мл) и отделяли фильтрованием полученный осадок. Промывка толуолом (3x20 мл) приводила к получению целевого соединения в виде бежевого порошка. Выход: 30 мг (81%).

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,94 м.д. (д, 1Н, 1=5,5 Гц, Н_Ру), 7,09 (м, 1Н, Н_аром), 7,32 (м, 1Н, Н_аром), 7,40 (м, 1Н, Наром), 7,50 (м, 1Н, Наром), 8,23 (т, 1=8,1 Гц, Наром), 8,37 (д, 1=5,5 Гц, Нру), 8,40 (с, 1Н, Наром), 8,63 (м, 1Н, Наром), 9,23 (с, 1Н, ΝΗ), 9,38 (с, 1Н, ΝΗ), 12,58 (уш с, 1Н, ИНАг); ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 108,5, 110,4, (д, 1РС=22 Гц), 116,1 (д, 1РС=21 Гц), 116,5 (м), 119,5 (уш), 121,9, 122,8, 124,6 (д, 1РС=11 Гц), 125,0, 125,4 (д, 1РС=30 Гц), 128,5, 144,4 (уш), 145,3, 148,7 (д, ЧРС=10 Гц), 151,4, 152,0, 152,3 (уш), 152,4 (д, 1РС=246 Гц), 153,5 (д, 1РС=248 Гц), 155,0, 155,4 (уш); ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-'..): δ= -60,7, -123,9, -125,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 478,1 (М+Н, 100), ву = 4,89 мин; МСВР (3,38 мин): т/ζ вычисл. для С21Н₁₃Г5И₅0з [М+Н⁺]: 478,09331; найдено: 478,09355.

Синтез 81 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-045)

Применяя способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 4-хлор3-трифторметилфенилизоцианатом, получали целевое соединение (15 мг, 29%) в виде бледно коричневого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,47 (с, 3Н, СН₃); 6,90 (д, 1Н, Н_ру, 1=5,3 Гц), 7,10 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц, 1=2,4 Гц), 7,29 (д, 1Н, Наром, 1=2,4 Гц), 7,63 (м, 2Н, Наром), 7,87 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,11 (м, 1Н, Н_аром), 8,22 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,36 (м, 1Н, Н_ру), 8,42 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 9,76 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 12,57 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,7, 110,0, 116,4, 118,0, 119,9, 122,2, 122,7, 123,4,

124,1, 126,7, 131,6, 131,9, 133,7, 138,8, 139,2, 149,8, 152,4. ЖХ-МС (т/ζ): 522 (М+Н, 100), ву=5,10 мин.

Синтез 82 1 -(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3 -(2-(метилтио)-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-024)

Применяя способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 2-фтор5-трифторметилфенилизоцианатом, получали целевое соединение (26 мг, 62%) в виде порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,48 (с, 3Н, СН₃), 6,61 (д, 1Н, Н_ру,₅, 1=5,6 Гц), 7,06 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,6 Гц, 1=2,3 Гц), 7,24 (д, 1Н, Наром, 1=2,3 Гц), 7,39 (м, 1Н, Наром), 7,49 (м, 1Н, Наром), 7,85 (д, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 8,18 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,36 (д, 1Н, Н_ру,₆, 1=5,6 Гц), 8,64 (м, 1Н, Н_аром), 8,68 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 9,53 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 12,90 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,3, 106,1, 115,9,

116,1, 116,7, 117,6, 118,2, 119,2, 122,7, 125,1, 125,4, 128,6, 132,2, 133,2, 145,4, 150,1, 150,9, 152,0, 152,4, 154,4, 156,3, 160,7. ЖХ-МС (т/ζ): 506 (М+Н, 100), ву=4,85 мин.

Синтез 83 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3- 67 019974

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 2фтор-5-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (37 мг, 73%) в виде порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,48 (с, 3Н, СН₃), 6,89 (д, 1Н, Ы_Ру,5, 1=5,3 Гц), 7,09 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц, 1=2,5 Гц), 7,26 (д, 1Н, Н_аром, 1=2,5 Гц), 7,39 (м, 1Н, Н_аром), 7,50 (м, 1Н, Н_аром), 7,85 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц), 8,36 (д, 1Н, Ы_Ру,₆, 1=5,2 Гц), 8,42 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,64 (м, 1Н, Н_аром), 8,69 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 9,54 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 12,60 (с, 1Н, ΝΗ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,4, 110,0, 115,9,

116,1, 116,7, 117,7, 119,1, 119,4, 122,7, 124,8, 125,1, 125,4, 128,5, 132,0, 133,3, 145,3, 149,9, 152,4, 154,5. ЖХ-МС (т/ζ): 506 (М+Н, 100), ву=5,00 мин.

Синтез 84 1 -(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(2-(метилтио)-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-017)

Применяя способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и третбутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Ы-пиразолом, получали целевое соединение (5 мг, 8%) в виде белого порошка после очистки на силикагеле (элюент: ДХМ/Е!ОАс:1/1, В(=0,57).

Ή-ЯМР (СБС1₃), δ (м.д.), I (Гц):1,31 (с, 9Н, трет-Ви), 2,23 (с, 3Н, СН₃), 2,31 (с, 3Н, 8СЫ₃), 6,30 (с, 1Н), 6,36 (с, 1Н), 6,49 (д, 1Н, Ы_Ру, 1=5,8 Гц), 7,02 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,9 Гц, 1=2,7 Гц), 7,19 (м, 4Н, Н_аром), 7,31 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,3 Гц), 7,81 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,16 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,9 Гц), 8,26 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,30 (д, 1Н, Ы_Ру, 1=5,8 Гц), 11,37 (с, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 556 (М+Н, 100).

Синтез 85 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-025)

н

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3трифторметил-4-хлорфенилизоцианатом, получая целевое соединение, выход: 88%.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,67 м.д. (д, 1Н, 1=5,5 Гц, Ы_Ру), 7,06 (д, 1Н, Н_аром), 7,30 (д, 1Н, Наром), 7,66 (м, 2Н, Наром), 8,12 (м, 2Н, Наром), 8,17 (с, 1Н, Наром), 8,38 (д, 1=5,5 Гц, НРу), 8,88 (с, 1Н, ΝΗ), 9,92 (с, 1Н, ΝΗ), 12,91 (уш с, 1Н, ΝΗΛι); ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б₆): δ = -61,5, -124,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 494.1 (М+Н, 100), ву = 5,24 мин; МСВР (6,17 мин): т/ζ вычисл. для С₂1Η1₃С1Р₄N5О₃ [М+Ы⁺]: 494,06376; найдено: 494,06335.

Синтез 86 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 2-фтор-5- 68 019974 триторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение, выход = 80%.

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,67 м.д. (д, 1Н, 1=5,5 Гц, Н^), 7,08 (м, 1Н, Н_аром), 7,34 (м, 1Н, Н_аром), 7,40 (м, 1Н, Наром), 7,51 (м, 1Н, Наром), 8,17 (с, 1Н, Наром), 8,23 (т, 1=8,1 Гц, Наром), 8,38 (д, 1=5,5 Гц, Н0, 8,64 (м, 1Н, Н_аром), 9,20 (с, 1Н, ЫН), 9,35 (с, 1Н, ЫН), 12,91 (уш с, 1Н, \НЛг); ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б₆): δ = -60,8, -124,0, 125,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 478,1 (М+Н, 100), ву = 5,04 мин; МСВР (3,38 мин): т/ζ вычисл. для С^Н^РзЫзОз [М+Н⁺]: 478,09331; найдено: 478,09355.

Синтез 87 1 -(4-хлор-3 -(трифторметил)фенил)-3 -(2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-048) р

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3трифторметил-4-хлорфенилизоцианатом, получая целевое соединение в виде бежевого порошка. Выход: 60 мг (79%).

'Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,93 м.д. (д, 1=5,5 Гц, 1Н, ^), 7,08 (м, 1Н, Наром), 7,30 (м, 1Н, Наром), 7,64 (м, 2Н, Наром), 8,12 (м, 2Н, Наром), 8,37 (д, 1=5,5 Гц, 1Н, ^), 8,41 (с, 1Н, Н_аром), 8,78 (с, 1Н, ЫН), 9,57 (с, 1Н, ЫН), 12,58 (уш с, 1Н, ХНАг); '³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 116,5, 108,6, 110,4 м.д. (д, 1РС=23 Гц), 154,9 (уш), 116,6 (д, 1РС=6 Гц), 121,7, 122,6, 123,0, 123,5, 123,8, 124,6 (д, 1РС=11 Гц), 125,3, 126,0, 126,8 (кв, 1РС=30 Гц), 128,5, 132,1, 139,1, 144,4 (уш), 145,3, 148,9 (д, 1РС=10 Гц), 152,2, 152,8 (д, 1РС=248 Гц); ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б6): δ = -61,5, -125,0 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 494,1 (М+Н, 100), ву = 4,89 мин; МСВР (3,38 мин): т/ζ вычисл. для С₂'Η'₃р5Х5О₃ [М+Н⁺]: 478,09331; найдено: 478,09355.

Синтез 88 1-(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь] пиразин-8 -илокси)фенил)мочевина (АА-018)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде почти белого твердого вещества. Выход: 35 мг (42%).

'Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 м.д. (с, 9Н, трет-Ви), 2,40 (с, 3Н, СН3), 6,39 (с, 1Н, ^), 6,66 (д, 1=5,6 Гц, 1Н, 11.), 7,41-7,29 (м, 5Н, Н_аром), 7,06 (м, 1Н, Н_аром), 8,21-8,17 (м, 2Н, Н_аром), 8,38 (д, 1=5,6 Гц, 1Н, Н0, 8,79 (с, 1Н, ЫН), 9,00 (с, 1Н, ЫН), 12,93 (уш с, 1Н, ХΗа_ром); '⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСОб₆): δ = -125,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 528.1 (М+Н, 100), ву=5,07 мин; МСВР (6,12 мин): т/ζ вычисл. для С₂₈Η₂₆РХ₇ХаО₃ [М+Ха⁺]: 514,09090; найдено: 514,09051.

Синтез 89 1-(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь] пиразин-8 -илокси)фенил)мочевина (АА-019)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение. Выход 50 мг (60%) твердого вещества кремового цвета.

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 м.д. (с, 9Н, трет-Ви, 6,40 (с, 1Н, НД 6,66 (д, 1=5,6 Гц, 1Н, НРу), 7,04 (м, 1Н, Наром), 7,29 (м, 1Н, Наром), 7,42 (м, 1Н, Наром), 7,55-7,53 (м, 4Н, Наром), 8,17-8,16 (м, 2Н, Н_аром), 8,37 (д, 1=5,6 Гц, 1Н, Н^), 8,83 (с, 1Н, ЫН), 8,98 (с, 1Н, ЫН), 12,90 (уш с, 1Н, \НАг); '³С-ЯМР

- 69 019974 (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 30,2, 32,0, 95,1, 106,5, 108,5 (д, 1_РС=22 Гц), 116,4 (д, 1_РС=3 Гц), 118,4, 121,8, 124,4, 124,9 (д, Э_РС=12 Гц), 127,4, 129,3, 136,9, 138,4, 145,5, 148,6 (д, Э_РС=10 Гц), 151,2, 151,3, 152,2, 152,3 (д, 1_РС=245 Гц), 153,3, 156,4, 160,5, 160,8, 171,2; ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б₆): δ= -125,2 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 514.2 (М+Н, 100), ву=4,93 мин; МСВР (5,95 мин): т/ζ вычисл. для С₂₇Н₂₅РЛ₇О₃ [М+Н⁺]: 514,19974; найдено: 514,19964.

Синтез 90 1-(2-фтор-4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-049)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)-3-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 2фтор-5-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение; выход 85%.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,49 м.д. (с, 3Н, СН₃) 6,89 (д, 1Н, 1=5,6 Гц, _РугН), 7,08 (м, 1Н, Н_аром), 7,32 (м, 1Н, Н_аром), 7,41 (м, 1Н, Наром), 7,53 (м, 1Н, Наром), 8,23 (т, 1Н, Наром), 8,33 (д, 1=5,6 Гц, 1Н, НРу), 8,64 (м, 1Н, Н_аром), 9,19 (с, 1Н, ЛН), 9,35 (с, 1Н, ЛН), 12,42 (уш с, 1Н, ЛН_аром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 28,0, 79,4, 106,8, 109,0, 116,0, 118,5, 123,9, 125,8, 145,6, 150,5, 151,2, 152,2, 153,1, 156,4, 160,3; ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б6): δ = -60,7, -124,0, -125,3 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 492,1 (М+Н,100), ву= 4,98 мин; МСВР (6,04 мин): т/ζ вычисл. для С₂₂Н1₄Р₅Л₅ЛаО₃ [М+Ла⁺]: 514,09090; найдено: 514,09051.

Синтез 91 1 -(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3 -(4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8илтио)фенил)мочевина (АА-027)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминофенилтио)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (36,7 мг, 136 мкмоль) и 2-фтор-5-трифторметилфенилизоцианатом (22,5 мкл, 136 мкмоль), получая целевое соединение. Выход: 53 мг (82%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 6,40 (д, 1=5,3, 1Н, НРу), 7,43 (м, 1Н, Наром), 7,52 (м, 1Н, Наром), 7,60 (д, 1=8,3, 2Н, Наром), 7,70 (д, 1=8,3, 2Н, Наром), 8,20-8,22 (м, 2Н, НРу), 8,62 (м, 1Н, Наром), 9,03 (д, ⁴1рн=2,6, 1Н, ЛН), 9,53 (с, 1Н, ЛН), 12,87 (уш с, 1Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 114,6, 116,2 (д, 1_РС=21,1), 116,8 (м), 119,6, 119,7, 122,8, 123,0, 125,1 (д, 1_РС=40), 125,4 (м), 128,4 (д, 1_РС=11,1), 136,9,

141,2, 143,4, 150,0, 151,0, 152,0, 152,4, 153,6 (д, 1_РС=21,1), 156,8; ЖХ-МС (т/ζ): 476,0 (М+Н, 100), ву = 5,42 мин; МСВР (6,53 мин): т/ζ вычисл. для С₂1Н1₄Р₄Л₅О₂8 [М+Н⁺]: 476,07988; найдено: 476,07980.

Синтез 92 1-(2-фтор-4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-028) н

Применяли способ Р2 с 2-фтор-5-трифторметилфенилизоцианатом и 8-(4-амино-3-фторфенокси)-2метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном, получая целевое соединение, выход 81%.

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 2,43 (с, 3Н, СН3), 6,60 (д, 1=5,4, 1Н, НРу), 7,07 (м, 1Н, Наром), 7,33 (м, 1Н, Наром), 7,41 (м, 1Н, Наром), 7,51 (м, 1Н, Наром), 8,24 (м, 1Н, Наром), 8,29 (м, 1Н, Наром), 8,64 (д, 1=5,4, 1Н, Н_Ру), 9,20 (с, 1Н, ЛН), 9,35 (с, 1Н, ЛН); ¹³С ЯМР (126 МГц, ДМСО-б₆): δ=160,3, 156,4, 153,1, 152,2,

151,2, 150,5, 145,6, 125,8, 123,9, 118,5, 116,0, 109,0, 106,8, 79,4, 28,0 м.д.; ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-б₆): δ = -60,7, -124,0, -125,3 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 492,1 (М+Н, 100), 5,17 мин; МСВР (7,15 мин): т/ζ вычисл. для С₂₂Н₁₄Р₅Л₅О₃ [М+Н⁺]: 492,10896; найдено: 492,10843.

Синтез 93 1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2,3-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)мочевина (АА-091)

- 70 019974

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дионом (50 мг, 173 мкмоль) и раствором 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразола (5,7 мл 61 мМ раствора в СН₂С1₂, 347 мкмоль), получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 65 мг (71%).

^!Н-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 6,38 (с, 1Н, Нпиразол), 6,57 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 7,00 (м, 1Н, Наром), 7,22 (м, 1Н, Наром), 7,42 (м, 1Н, 1=8,3, Наром), 7,54 (м, 4Н, Наром), 7,96 (д, 1Н, 1=5,3, НРу), 8,11 (м, 1Н, Наром), 9,05 (с, 1Н, ЫН), 9,10 (с, 1Н, Наром), 11,91 (уш с, 1Н, ЫН), 12,40 (уш с, 1Н, ЫН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,2, 32,0, 95,7, 108,2 (д, 1_РС=22,4), 112,5, 116,1, 121,8, 124,3, 124,6 (д, 1_РС=10,7), 127,3, 129,2, 136,9, 138,5, 140,6, 143,2, 148,7 (д, 1_РС=9,8), 150,3, 151,6, 152,3 (д, 1_РС=245), 154,8, 156,0, 160,8; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.): -124,4; ЖХ-МС (т/ζ): 531,1 (М+Н, 100), ву = 2,54 мин; МСВР (3,07 мин): т/ζ вычисл. для С₂₇Н₂₅РЫ₇О₄ [М+Н⁺]: 530,19466; найдено: 530,19433.

Синтез 94 1-(3-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевина (АА-086)

Применяя способ Р2 с 8-(4-амино-2-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (50 мг, 0,18 ммоль), получали целевое соединение (42 мг, 49%) в виде коричневого порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,60 (д, 1Н, НРу, 1=5,7 Гц), 7,27-7,30 (м, 1Н, Наром), 7,44-7,49 (м, 2Н, Наром), 7,53-7,57 (м, 1Н, Наром), 7,81 (дд, 1Н, Наром, 1=12,9 Гц, 1=2,3 Гц), 8,24 (с, 1Н, ЫН или СН), 8,39 (д, 1Н, НРу, 1=5,7 Гц), 8,63 (дд, 1Н, Наром, 1=7,4 Гц и 1=2,0 Гц), 9,04 (с, 1Н, ЫН или СН), 9,54 (с, 1Н, ЫН или СН), 13,00 (с, 1Н, ЫН). ¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-а6): -60,06, -123,20, -128,06. ЖХ-МС (т/ζ): 478 (М+Н, 100), ву=2,65 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл для С₂1Н₁₂Р₅Ы₅О₃: 478,0933; найдено: 478,0929.

Синтез 95 1-(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(3 -фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-087)

Применяя способ Р2 с 8-(4-амино-2-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (50 мг, 0,18 ммоль), получали целевое соединение (26 мг, 28%) в виде коричневого порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,32 (с, 9Н, трет-Ви), 6,43 (с, 1Н, СН), 6,58 (д, 1Н, НРу, 1=5,5 Гц), 7,21-7,25 (м, 1Н, Н^), 7,37 (т, 1Н, Н^, 1=9,0 Гц), 7,43-7,48 (м, 1Н, Н^), 7,56-7,59 (м, 4Н, Н^), 7,74 (дд, 1Н, Наром, 1=13,2 Гц, 1=2,0 Гц), 8,23 (с, 1Н, ЫН или СН), 8,38 (д, 1Н, НРу, 1=5,3 Гц), 8,57 (с, 1Н, ЫН или СН), 9,41 (с, 1Н, ЫН или СН), 12,99 (с, 1Н, ЫН). ¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-а6): -128,21. ЖХ-МС (т/ζ): 514 (М+Н, 100), ву=2,61 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл для С₂₇Н₂₄РЫ₇О₃: 514,1997; найдено: 514,2001.

Синтез 96 1 -(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(3 -фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-088)

- 71 019974

Применяли способ Е2 с 8-(4-амино-2-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (50 мг, 0,18 ммоль), получая целевое соединение (26 мг, 27%) в виде коричневого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,32 (с, 9Н, трет-Ви), 2,41 (с, 3Н, СН₃), 6,41 (с, 1Н, СН), 6,58 (д, 1Н, Нру, 1=5,7 Гц), 7,21-7,24 (м, 1Н, Наром), 7,35-7,40 (м, 3Н, Наром), 7,42-7,45 (м, 2Н, Наром), 7,74 (дд, 1Н, Н_аром, 1=13,2 Гц, 1=2,2 Гц), 8,23 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 8,38 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,7 Гц), 8,51 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 9,41 (с, 1Н, ΝΗ или СН), 12,99 (с, 1Н, ΝΗ). ¹⁹Е-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-6₆): -128,21. ЖХ-МС (т/ζ): 528 (М+Н, 100), ву=2,67 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл. для С₂₈Н₂₆РЫ₇О₃: 528,2153; найдено: 528,2156.

Синтез 97 1-(2-фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2-фтор-5-(трифтор-

Способ Е3. 2-Фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилин (29 мг, 85 мкмоль) растворяли в сухом ТГФ (5 мл), получая светло-желтый раствор. Добавляли к указанному раствору 2-фтор5-трифторметилфенилизоцианат (25 мкл, 170 мкмоль) и через 3 ч выпаривали все летучие составляющие. Полученное желтое масло растворяли в СН2С12 и очищали колоночной хроматографией на силикагеле. Элюирование ЕЮАс давало продукт в виде желтой полосы. Выход: 44 мг (96%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,76 (м, 4Н, Ы(СН₂СН₂)₂О), 3,84 (м, 4Н, Ы(СН₂СН₂)₂О), 6,70 (д, 1Н, 1=5,3, НРу), 7,04 (м, 1Н, Наром), 7,30 (м, 1Н, Наром), 7,41 (м, 1Н, Наром), 7,51 (м, 1Н, Наром), 8,21 (м, 1Н, Наром), 8,62-8,65 (м, 2Н, Наром + Нру), 8,84 (с, 1Н, Наром), 9,18 (с, 1Н, ΝΗ), 9,35 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 44,4, 65,9, 105,9, 108,3 (д, 1ЕС=22,3), 116,1 (д, 1ЕС=20,7), 116,3, 116,6, 119,5, 122,6, 122,8, 124,2 (д, 1ЕС=10,7), 125,0, 125,4 (м), 128,5 (д, 1ЕС=11,4), 136,3, 149,6 (д, 1ЕС=10,4), 152,1 (д, 1ес=16,4), 152,4 (д, 1ЕС=245), 153,4 (д, 1ЕС=248), 153,7, 153,9, 160,3; ¹⁹Е-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.): -60,7, -124,0, -125,3; ЖХ-МС (т/ζ): 547,0 (М+Н, 100), ву = 4,35 мин; МСВР (6,65 мин): т/ζ вычисл. для С₂₅Н₁₉Е₅М₆О₃ [М+Н⁺]: 547,15116; найдено: 547,15163.

Синтез 98 1-{2-фтор-4-(3-(метиламино)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевина (АА-055)

Е

Применяли способ Е2 с 2-фтор-5-(трифторметил)фенилизоцианатом и 8-(4-амино-3-фторфенокси)Ы-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3-амином, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 56 мг (80%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,95 (д, 1=4,6, 3Н, Ν№Η₃), 6,61 (д, 1=5,4, 1Н, Н_Ру), 7,03 (м, 2Н, Наром), 7,28 (м, 1Н, Наром), 7,40 (м, 1Н, Наром), 7,50 (м, 1Н, Наром), 8,03 (уш кв, 1=4,6, 1Н, \ΊΙ·₂)· 8,20 (м, 1Н, Наром), 8,31 (с, 1Н, Наром), 8,54 (д, 1=5,4, 1Н, Цу), 8,64 (м, 1Н, Наром), 9,17 (с, 1Н, ΝΗ), 9,34 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³СЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 27,1, 105,3, 108,3 (д, 1_ЕС=22,3), 116,1 (д, 1_ЕС=20,5), 116,3 (д, 1_ЕС=2,6), 116,6 (м), 119,4 (м), 122,0 (д, Э_ЕС=2,3), 122,8, 125,0, 125,4 (м), 128,5 (д, 1_ЕС=11,4), 139,6 (уш), 149,6 (д,

- 72 019974

1_РС=10,3), 152,0, 152,4 (д, 1_РС=245), 152,8, 153,4, 153,4 (д, 1_РС=248), 155,3, 160,4; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.): -60,8, -124,0, -125,3; ЖХ-МС (т/ζ): 491,0 (М+Н, 100), ву = 1,87 мин; МСВР (6,65 мин): т/ζ вычисл. для СиЫ^РзМсОз [Μ+Η⁺]: 547,15116; найдено: 547,15163.

Синтез 99 1-(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-041)

Применяли способ Р3 с 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом и 8-(4-амино-3фторфенокси)-3 -метилпиридо [2,3-Ь]пиразин-2(1Ы)-оном.

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви, 2,49 (с, 3Н, СН₃), 6,85 (с, 1Н, Ы_Ру), 6,85 (д, 1Н, 1=5,6 Гц, Яру), 7,04 (м, 1Н, Н^), 7,27 (м, 1Н, Н^), 7,43 (м, 1Н, Н^), 7,54 (м, 4Н, Н^), 8,15 (м, 1Н, Н_аром), 8,31 (д, 1=5,6 Гц, 1Н, Ы_Ру), 8,83 (с, 1Н, ΝΗ), 8,99 (с, 1Н, ΝΗ),12,40 (уш с, 1Н, ΝΗΛ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 21,0, 108,5 (д, 1РС=21), 109,7, 116,1 (д, 1РС=6), 116,6 (м), 119,5 (уш), 121,8 (м), 122,8, 124,5 (д, 1РС=10,8), 125,0, 125,4 (м), 128,1, 128,5 (д, 1РС=11,4), 143,9, 145,0, 148,8 (д, 1РС=10,4), 151,3, 152,0, 152,3 (д, 1РС=246), 153,4 (д, 1РС=249), 154,5; ¹⁹Р ЯМР (470 МГц, ДМСО-й6): δ=-125,3 м.д. ЖХ-МС (т/ζ): 528,1 (М+Н, 100), ву = 4,97 мин; МСВР (6,04 мин): т/ζ вычисл. для С₂₂Η₁₄р5N5NаО₃ |Μ+Να'|: 514,09090; найдено: 514,09051.

Синтез 100 1-(2-фтор-4-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2фтор -5 -(трифторметил) фе нил)мочевина (АА-056)

Е

Применяли способ Р3 с 2-фтор-5-(трифторметил)фенилизоцианатом и 2-фтор-4-(3-(4метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилином, получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества. Выход: 30 мг (64%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,26 (с, 3Н, СН₃), 2,48 (м, 4Н, N(СΗ₂СΗ₂)₂NΜе), 3,86 (м, 4Н, N(СΗ2СΗ2)2NΜе), 6,68 (д, 1=5,4, 1Н, Ыру), 7,06 (м, 2Н, Н_аром), 7,32 (м, 1Н, Н_аром), 7,43 (м, 1Н, Н_аром), 7,52 (м, 1Н, Наром), 8,22 (м, 1Н, Наром), 8,63 (д, 1=5,4, 1Н, Ыру), 8,66 (м, 1Н, Н_арон), 8,86 (с, 1Н, Н_аром), 9,19 (с, 1Н, ΝΗ), 9,36 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 43,9, 45,7, 54,2, 105,8, 108,3 (д, 1РС=22,3), 116,1 (д, 1РС=21,4), 116,3 (д, 1РС=2,6), 116,6 (м), 119,5 (м), 122,0 (д, 1РС=2,3), 122,3, 125,0, 125,4 (м), 128,5 (д, 1РС=11,4), 136,4, 149,6, 149,7, 151,5, 152,4 (д, 1РС=245), 153,4, 153,4 (д, 1РС=248), 153,6, 153,8, 160,3; ¹⁹РЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.): -60,8, -124,0, -125,3 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 560,1 (М+Н, 100), ву = 3,18 мин; МСВР (6,65 мин): т/ζ вычисл. для С^^РзЫ^ [М+Н⁺]: 547,15116; найдено: 547,15163.

Синтез 101 1-(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -(4-метилпиперазин-1 -

Применяли способ Р3 с 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом и 2-фтор-4-(3-(4метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилином, получая целевое соединение в виде твердого вещества кремового цвета. Выход: 44 мг (77%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 2,31 (уш, 3Н, СН₃), 2,56 (уш, 4Н,

- 73 019974

N(СΗ₂СΗ₂)₂NΜе), 3,88 (м, 4Н, Η(СΗ₂СΗ₂)₂NΜе), 6,41 (с, 1Н, Η_Ργ 6,66 (д, 1=5,3, 1Н, Н_Ру), 7,03 (м, 1Н, Наром), 7,27 (м, 1Н, Наром), 7,45 (м, 1Н, Наром), 7,56 (м, 4Н, Наром), 8,15 (м, 1Н, Наром), 8,61 (д, 1=5,3, 1Н, ^), 8,86 (м, 2Н, ΝΗ + Н_аром), 9,00 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 30,2, 32,0, 43,7, 45,3, 54,0,

95,2, 105,8, 108,3 (д, 1_РС=22,3), 116,2 (д, 1_РС=2,6), 121,8 (д, 1_РС=2,3), 122,4, 124,4, 124,5 (д, 1_РС=11,8), 127,3, 129,3, 136,4, 137,0, 138,5, 149,3 (д, 1_РС=10,6), 151,4, 152,2, 152,4 (д, 1_РС=245), 153,6, 153,8, 160,3, 160,8; ¹⁹ΡЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -60,8, -124,0, -125,3 м.д.; ЖХ-МС (т/ζ): 596,1 (М+Н, 100), ву = 3,10 мин; МСВР (6,65 мин): т/ζ вычисл. для ΥΗ₁₉Ρ₅Ν₆Ο₃ [Μ+Η⁺]: 547,15116; найдено: 547,15163.

Синтез 102 1 -(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(3 -(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-006)

Применяли способ Ρ2 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (46 мг, 65%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,26 (с, 9Н, трет-Ви), 2,36 (с, 3Н, Ме), 6,32 (с, 1Н, Наром,), 6,58 (д, 1Н, Ηρ^ 1=6,6 Гц), 6,82 (д, 1Н, Наром, 1=6,8 Гц), 7,21 (д, 1Н, Наром, 1=7,2 Гц), 7,30-7,43 (м, 6Н, Наром), 8,14 (с, 1Н, Наром,), 8,35 (д, 1Н, Ηρ^ 1=6,8 Гц), 8,74 (с, 1Н, NΗмочевина), 9,30 (с, 1Н, NΗмочевина), 12,88 (с, 1Н, ΝΗ„). ¹³С-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б6): 20,55 (СН₃), 30,17 (трет-Ви), 31,96 (трет-Ви), 95,84, 99,49, 106,47, 109,65, 113,47, 115,03, 118,50, 124,15 (2*С), 129,30, 129,57 (2*С), 130,48, 136,12, 136,59, 136,84, 141,56, 151,00, 151,72, 152,06, 154,39, 160,41, 160,50. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл для ^₈Η₂₇Ν₇Ο₃: 510,2248; найдено: 510,2253.

Синтез 103 1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-034)

Применяли способ Ρ2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-третбутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (11 мг, 17%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-бб), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,31 (с, 9Н, трет-Ви), 6,44 (с, 1Н, Наром,), 6,65 (д, 1Н, Наром, 1=5,4 Гц), 7,41-7,47 (м, 2Н, Наром), 7,57-7,62 (м, 5Н, Наром), 7,66-7,69 (м, 1Н, Наром), 7,93 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 7,96 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,11 (д, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц), 8,27 (д, 1Н, Наром, 1=4,5 Гц), 8,47 (с, 1Н, Наром), 8,82 (с, 1Н, NΗмочевин^), 9,15 (с, 1Н, NΗмочевин^), 12,82 (с, 1Н, ΝΗ^. ¹³С-ЯМР (ДМСОЛ), δ (м.д.), I (Гц): 30,17 (трет-Ви), 32,02 (трет-Ви), 95,74, 109,39, 111,11, 118,36, 121,83, 122,27, 124,24 (2*С), 126,33, 126,76, 127,24, 129,28 (2*С), 132,25, 137,19, 138,65, 144,91, 145,29, 152,31, 154,65, 160,81. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для ί’ί|Η;-ΝΌ₃: 546,2248; найдено: 546,2248.

Синтез 104 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-038)

Применяли способ Ρ2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 1-фтор2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (65 мг, 98%).

- 74 019974 'Н-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 6,64 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,3 Гц), 7,38-7,42 (м, 2Н, Н_аром), 7,53 (т, 1Н, Наром, 1=8,9 Гц), 7,59 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,70 (т, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 7,94 (д, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц), 8,07 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 8,26 (д, 1Н, Наром, 1=5,3 Гц), 8,28 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,44 (с, 1Н, Наром), 8,68 (д, 1Н, Наром, 1=7,2 Гц), 9,47 (с, 1Н, NΗмочевина), 9,51 (с, 1Н, NΗмочевина), 12,77 (с, 1Н, ΝΚлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), 1 (Гц): 109,22, 115,97, 116,14, 116,66, 116,89, 118,09, 119,27, 121,82, 122,07, 122,75, 123,01, 124,92, 125,18, 125,46, 126,29, 126,76, 126,81, 127,54, 128,70, 128,79, 131,73. МСВР (ЭИ): т/ζ [М+Н] вычисл для С₂5Н₁₅Р₄М₅Оз: 510,1184; найдено: 510,1180.

Синтез 105 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-014)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде бледно-розового твердого вещества (50 мг, 61%).

'Н-ЯМР (ДМСО-бб), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,54 (с, 3Н, Ме), 6,33 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,7 Гц), 7,40-7,43 (м, 2Н, Наром), 7,54 (т, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,60 (т, 1Н, Наром, 1=7,5 Гц), 7,72 (т, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,88 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 8,10 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,19 (д, 1Н, Наром, 1=5,3 Гц), 8,27 (д, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 8,70 (дд, 1Н, Наром, 1=7,3 Гц, 1=2,0 Гц), 9,34 (с, 1Н, XII. , . ,). 9,40 (с, 1Н, XI1. , . ,). 12,79 (с, 1Н, Ν^™). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,51 (Ме), 105,50, 115,97, 116,50, 117,29, 117,98, 119,22, 121,50, 122,07, 122,72, 124,89, 125,29, 126,35, 126,87, 127,38, 128,69, 131,71, 145,11, 145,67, 150,51, 152,39, 152,55, 154,36, 156,33, 159,10, 160,59. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С^пР^О^ 524,1340; найдено: 524,1324.

Синтез 106 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-039)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-3-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (28 мг, 42%).

'Н-ЯМР (ДМСО-бб), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,52 (с, 3Н, Ме), 6,60 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,3 Гц), 7,39-7,41 (м, 2Н, Наром), 7,51-7,54 (м, 1Н, Наром), 7,60 (т, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 7,71 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,95 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 8,07 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,22 (д, 1Н, Наром, 1=5,3 Гц), 8,26 (д, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц), 8,68 (д, 1Н, Наром, 1=6,6 Гц), 9,39 (с, 1Н, ИНмочевина), 9,44 (с, 1Н, ИНмочевина), 12,66 (с, 1Н, ΝΚлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСОά₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,97 (Ме), 108,47, 115,95, 116,11, 116,58, 116,86, 117,98, 119,20, 121,86, 121,97, 122,73, 124,90, 125,32, 126,30, 126,72, 126,80, 127,06, 127,47, 128,68, 131,67, 143,93, 144,82, 145,02, 152,44, 152,61, 154,41. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₆Н₁₇М₅О₃: 524,1340; найдено: 524,1341.

Синтез 107 1 -(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-008)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (65 мг, 80%).

- 75 019974

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет- Ви), 6,39 (д, 1Н, Н_аром, 1= 5,7 Гц), 6,43 (с, 1Н, Наром), 7,38 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,44 (т, 1Н, Наром, 1=7,0 Гц), 7,55-7,61 (м, 5Н, Наром), 7,66 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,85 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 7,94 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,10 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,25 (с, 1Н, Наром), 8,27 (д, 1Н, Наром, 1=5,7 Гц), 8,80 (с, 1Н, ИНмочевина), 9,13 (с, 1Н, ИНмочевина), 12,94 (с, 1Н, ИНлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 30,10 (трет-Ви, 31,95 (трет-Ви), 95,68, 105,78, 117,03, 118,05, 118,40, 121,32, 122,35, 124,16 (2*С), 126,22, 126,68, 126,92, 127,17, 127,71, 129,21 (2*С), 132,12, 137,12, 138,58, 145,13, 145,44, 151,12, 152,10, 152,24, 156,46, 160,74, 161,31. МСВР (ЭИ): т/ζ [М+Н] вычисл. для С31Н27И7О3: 546,2248; найдено: 546,2250.

Синтез 108 1-(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(4-(2-метил-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-009)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бледно-розового твердого вещества (56 мг, 71%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,30 (с, 9Н, трет-Ви), 2,48 (с, 3Н, Ме), 6,31 (д, 1Н, Наром, 1=5,6 Гц), 6,43 (с, 1Н, Наром), 7,37 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,43-7,46 (м, 1Н, Наром), 7,55-7,67 (м, 6Н, Наром), 7,84 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,95 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,10 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,18 (д, 1Н, Наром, 1=5,6 Гц), 8,80 (с, 1Н, ИНмочевина), 9,12 (с, 1Н, ИНмочевина), 12,78 (с, 1Н, ИНлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСОА), δ (м.д.), I (Гц): 20,58 (СНз), 30,13 (трет-Ви), 31,98 (трет-Ви). 95,63, 105,52, 117,30, 117,33, 118,37, 121,44, 122,36, 124,21 (2*С), 126,34, 126,68, 126,92, 127,21, 127,69, 129,26 (2*С), 132,14, 137,15, 138,58, 145,08, 145,64, 150,55, 152,23, 156,34, 159,15, 160,64, 160,75. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃₂Н₂₉И₇О₃: 560,2405; найдено: 560,2407.

Синтез 109 1-(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(4-(3 -метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-ил)мочевина (АА-035)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-3-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (50 мг, 41%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 2,51 (3Н, с, Ме), 6,43 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,3 Гц), 6,59 (с, 1Н, Наром), 7,38 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,44 (т, 1Н, Наром, 1=7,3 Гц), 7,55-7,61 (м, 5Н, Наром), 7,66 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,91-7,95 (м, 2Н, Наром), 8,09 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,21 (д, 1Н, Наром, 1=5,4 Гц), 8,80 (с, 1Н, ИНмочевина), 9,13 (с, 1Н, ИНмочевина), 12,65 (с, 1Н, ИНлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 20,95 (СН₃), 30,09 (трет-Ви), 31,95 (трет-Ви), 95,66, 108,51, 116,89, 118,33, 118,81, 121,79, 122,17, 124,16 (2*С), 126,28, 126,66, 126,69, 127,17, 127,74, 129,21 (2*С), 132,04, 137,12, 138,58, 143,77, 144,88, 144,99, 152,15, 152,24, 154,54, 160,74, 164,12. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃₂Н₂₉И₇О₃: 560,2405; найдено: 560,2402.

Синтез 110 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-010)

- 76 019974

Применяли способ Е2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (80 мг, 70%).

Ή-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 2,40 (с, 3Н, Ме), 6,40 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,6 Гц), 6,41 (с, 1Н, Н_аром), 7,37-7,39 (м, 3Н, Н_аром), 7,47 (д, 2Н, Н^, 1=8,1 Гц), 7,57 (т, 1Н, Н^, 1=7,6 Гц), 7,66 (т, 1Н, Н_аром, 1=7,6 Гц), 7,86 (д, 1Н, Н^, 1=8,4 Гц), 7,97 (д, 1Н, Н^, 1=8,3 Гц), 8,11 (д, 1Н, Н^, 1= 8,6 Гц), 8,25 (с, 1Н, Н_аром), 8,26 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,7 Гц), 8,77 (с, 1Н, 9,13 (с, 1Н,

12,94 (с, 1Н, N11·.). ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 20,51 (СН3), 30,11 (трет-Ви), 31,90 (трет-Ви), 95,01, 105,75, 117,02, 118,03, 118,17, 121,30, 122,30, 124,26 (2*С), 126,21, 126,62, 126,89, 127,61, 129,61 (2*С), 132,14, 136,05, 136,71, 137,09, 145,02, 145,44, 151,09, 152,08, 156,44, 160,46, 161,30. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃₂Н₂₉М₇О₃: 560,2405; найдено: 560,2403.

Синтез 111 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-ил)мочевина (АА-011)

н

Применяли способ Е2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бледнорозового твердого вещества (67 мг, 69%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 2,40 (с, 3Н, Ме), 2,48 (с, 3Н, Ме), 6,31 (д, 1Н, Наром, 1=5,6 Гц), 6,41 (с, 1Н, Наром), 7,37-7,38 (м, 3Н, Наром), 7,47 (д, 2Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,56 (т, 1Н, Наром, 1=7,5 Гц), 7,66 (т, 1Н, Наром, 1=7,4 Гц), 7,84 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 7,97 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,11 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,18 (д, 1Н, Наром, 1=5,6 Гц), 8,77 (с, 1Н, N11.,..). 9,13 (с, 1Н, Ν^™), 12,80 (с, 1Н, N11 . ,..). ¹³С-ЯМР (ДМСО-бб), δ (м.д.), I (Гц): 20,51 (2*СН3), 30,11 (трет-Ви), 31,91 (трет-Ви), 95,03, 105,51, 117,21, 117,33, 118,21, 121,40, 122,30, 124,26 (2*С), 126,31, 126,60, 126,85, 127,60, 129,61 (2*С), 132,11, 136,05, 136,71, 137,09, 145,04, 145,61, 150,48, 152,09, 156,28, 159,09, 160,47, 160,60. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃₃Н₃₁И₇О₃: 574,2561; найдено: 574,2558.

Синтез 112 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(3-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь] пиразин-8 -илокси)нафталин-1 -ил)мочевина (АА-036)

Применяли способ Е2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-3-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (71 мг, 49%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 2,40 (3Н, с, Ме), 2,52 (3Н, с, Ме), 6,41 (с, 1Н, Наром), 6,59 (д, 1Н, Наром, 1=5,4 Гц), 7,37-7,39 (м, 3Н, Наром), 7,47 (д, 2Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,57 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,66 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,92 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 7,96 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,09 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,21 (д, 1Н, Наром, 1=5,4 Гц), 8,76 (с, 1Н, N11. ,.. ,). 9,12 (с, 1Н, NНмо_Че_Βина), 12,65 (с, 1Н, N11 . ..). ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 20,51 (СН3), 20,93 (СН3), 30,11 (трет-Ви), 31,90 (трет-Ви), 95,00, 108,48, 116,88, 118,10, 118,75, 121,77, 122,13, 124,26 (2*С), 126,26, 126,61, 126,67, 127,61, 129,61 (2*С), 132,05, 136,04, 136,71, 137,09, 143,72, 144,88, 152,08, 154,51, 160,46, 164,11. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃₃Н₃₁И₇О₃: 574,2561; найдено: 574,2560.

Синтез 113 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-031)

- 77 019974

Применяли способ Р2 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трет-бутил-5изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (9 мг, 13%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,26 (с, 9Н, трет-Ви), 2,37 (с, 3Н, Ме), 6,32 (с, 1Н, Наром), 6,85 (дд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=1,7 Гц), 6,89 (д, 1Н, НРу,5, 1= 5,3 Гц), 7,19 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,31-7,33 (м, 2Н, Наром), 7,37-7,40 (м, 3Н, Наром), 7,47 (с, 1Н, Наром,), 8,37-8,41 (м, 3Н, Наром), 9,23 (с, 1Н, ХНмочевина), 12,54 (с, 1Н, Ж™). ¹³С-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-άβ): 20,55 (СН3), 30,16 (трет-Ви), 31,95 (трет-Ви), 95,15, 109,72, 110,44, 113,64, 115,03, 124,32 (2*С), 129,63 (2*С), 130,46, 135,97, 136,78, 136,82, 141,30, 145,25, 151,41, 154,18, 154,65, 160,48. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₈НЖ₇О₃: 510,2248; найдено: 510,2250.

Синтез 114 1-(4-(2-амино-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-ил)-3-(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-015)

Применяли способ Р2 с 2-амино-8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде бледно-розового твердого вещества (73 мг, 89%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,32 (д, 1Н, Наром, 1=5,5 Гц), 7,27 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,407,42 (м, 1Н, Наром), 7,54 (т, 1Н, Наром, 1=9,8 Гц), 7,59 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,70 (т, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,90 (д, 1Н, Наром, 1=5,5 Гц), 7,93 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,01 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,22 (д, 1Н, Наром, 1= 8,6 Гц), 8,69 (дд, 1Н, Наром, 1=7,3 Гц, 1=1,9 Гц), 9,27 (с, 1Н, Жочевина), 9,36 (с, 1Н, Жочевина), 12,59 (с, 1Н, ИНлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 106,41, 115,99, 116,14, 116,44, 118,47, 119,10, 119,36, 121,67, 121,90, 122,72, 124,89, 125,32, 126,38, 126,67, 127,61, 128,74, 130,87, 142,97, 143,57, 146,16, 151,73, 152,35, 152,68, 154,32, 157,17. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₅Н₁₆РЛ₆О₃: 525,1293; найдено: 525,1292.

Синтез 115 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенил)мочевина (АА-007)

Применяли способ Р2 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 1-фтор-2изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (30 мг, 42%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,61 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 6,89 (дд, 1Н, Наром, 1=8,0 Гц, 1=1,9 Гц), 7,26 (д, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,39-7,53 (м, 4Н, Наром), 8,18 (с, 1Н, Наром), 8,37 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 8,55 (д, 1Н, Наром, 1=7,2 Гц), 8,99 (с, 1Н, КНмочевши), 9,44 (с, 1Н, КНмочевши), 12,94 (с, 1Н, Ж™). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Л6), δ (м.д.), 1 (Гц): 106,41, 109,96, 113,96, 115,31, 116,00, 116,96, 118,50, 119,56, 122,74, 125,30, 128,43, 130,63, 141,05, 145,76, 151,01, 152,06, 152,68, 154,43, 154,66, 156,71, 160,53. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂1Н₁₃Р₄НО₃: 460,1027; найдено: 460,1023.

Синтез 116 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенил)мочевина (АА-032)

- 78 019974

Применяли способ Р2 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 1-фтор-2изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (49 мг, 73%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 6,87-6,88 (м, 2Н, Наром), 7,26 (д, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 7,40-7,54 (м, 4Н, Наром), 8,35 (д, 1Н, Нру,6, 1=5,3 Гц), 8,40 (с, 1Н, Наром), 8,54 (д, 1Н, Наром, 1=7,2 Гц), 9,05 (с, 1Н, N1. ·..+ 9,52 (с, 1Н, ΝΗ^,·,^), 12,62 (с, 1Н, ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 109,88, 110,21, 113,78,

115,14, 115,92, 116,09, 116,85, 119,46, 122,66, 125,11, 128,36, 130,41, 140,91, 144,46, 145,05, 151,96, 152,32, 152,60, 154,22, 154,57, 155,06. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₁Н₁₃Р₄М₅О₃: 460,1027; найдено: 460,1025.

Синтез 117 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио)фенил)мочевина (АА-060)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (5 мг, 12%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), I (Гц): : 2,50 (с, 3Н, СН₃), 2,52 (с, 3Н, СН₃), 6,66 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 7,17 (м, 1Н, Наром), 7,35 (д, 1Н, Наром, 1=2,7 Гц), 7,42 (м, 2Н, Наром), 8,17 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,31 (м, 2Н, Нру, + Наром ), 8,83 (м, 1Н, Наром), 9,01 (м, 1Н, Наром), 11,59 (уш, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 520 (М+Н, 100), ву=2,73 мин.

Синтез 118 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио)фенил)мочевина (АА-061)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (9 мг, 20%) в виде белого твердого вещества.

^!Н-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 2,35 (с, 3Н, СН₃), 2,37 (с, 3Н, СН₃), 2,43 (с, 3Н, СНз), 6,44 (с, 1Н, СН), 6,56 (д, 1Н, Н_Ру 1=5,6 Гц), 7,06 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц и 1=2,7 Гц), 7,23-7,27 (м, 3Н, Наром, 1=2,7 Гц), 7,42 (м, 2Н, Наром), 7,97 (с, 1Н, Наром), 8,12 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,22 (д, 1Н, Нру, 1=5,6 Гц), 8,32 (м, 1Н,Н_аром), 11,28 (уш, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ): 570 (М+Н, 100), ву=2,70 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл. для С₃₀Н₃₁К₇О₃8: 570,2281; найдено: 570,2282.

Синтез 119 1-(3-трет-бутил-1-(6-метоксипиридин-3-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-062)

- 79 019974

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 5-(3-третбутил-5-изоцианато-1Н-пиразол-1-ил)-2-метоксипиридином, получая целевое соединение (6 мг, 7%) в виде белого твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,77 (с, 9Н, трет-Ви), 4,40 (с, 3Н, СН₃), 6,93 (с, 1Н, СН), 7,15 (д, 1Н, НРу,5, 6 Гц), 7,36 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,51 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 7,59 (дд, 1Н, Наром, 1=11,7 Гц и 1=2,6 Гц), 8,31 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,7 Гц и 1=2,6 Гц), 8,58 (с, 1Н, Н_аром), 8,68 (уш, 1Н, Н_аром), 8,75-8,82 (м, 4Н, Н_Ру+Н_аром), 11,95 (уш, 1Н, ΝΉ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 40,3, 42,6, 63,6, 106,0, 117,3, 118,5,

118.7, 121,4, 126,9, 129,4, 132,5, 132,6, 135,7, 140,5, 146,6, 147,8, 153,3, 156,2, 161,5, 161,7, 162,6, 166,5,

171.8, 172,2, 173,6. ¹⁹Р-ЯМР (δ, м.д., ДМСО-б₆): -126,99. ЖХ-МС (т/ζ): 545 (М+Н, 100), ву=2,58 мин.

Синтез 120 1-(3-трет-бутил-1-(6-метоксипиридин-3-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-(метилтио)-4-(3оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-063)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 5-(3трет-бутил-5-изоцианато-1Н-пиразол-1-ил)-2-метоксипиридином, получая целевое соединение (97 мг, 53%) в виде белого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,27 (с, 9Н, трет-Ви), 2,43 (с, 3Н, СН₃), 3,92 (с, 3Н, 8СН₃), 6,37 (с, 1Н, СН), 6,59 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 6,99 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,03 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц, 1=2,6 Гц), 7,21 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,74 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,85 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц, 1=2,6 Гц), 8,18 (с, 1Н, ΝΉ), 8,33 (д, 1Н, Н_аром, 1=2,6 Гц), 8,35 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 8,37 (с, 1Н, СН), 8,98 (с, 1Н, ΝΉ), 12,94 (с, 1Н, ΝΉ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,3, 30,0, 31,9, 53,5, 95,3, 106,1, 110,8, 117,7, 118,2,

119.3, 124,4, 129,6, 132,0, 133,6, 136,3, 136,6, 142,6, 145,3, 149,9, 150,9, 151,9, 152,0, 156,3, 160,7, 161,0,

162.4. ЖХ-МС (т/ζ): 573 (М+Н, 100), ву=2,56 мин.

Синтез 121 1-(3-трет-бутил-1-(6-метоксипиридин-3-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2-метил-3-оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио)фенил)мочевина (АА-064)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 5-(3-трет-бутил-5-изоцианато-1Н-пиразол-1-ил)-2-метоксипиридином, получая целевое соединение (33 мг, 35%) в виде белого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,27 (с, 9Н, трет-Ви), 2,43 (с, 3Н, СН₃), 2,44 (с, 3Н, СН₃), 3,92 (с, 3Н, 8СН3), 6,37 (с, 1Н, СН), 6,53 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 7,99 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,03 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц, 1=2,6 Гц), 7,21 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,76 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,85 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц, 1=2,6 Гц), 8,26 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 8,33 (д, 1Н, Н_аром, 1=2,6 Гц), 8,35 (с, 1Н, ΝΉ), 8,96 (с, 1Н, ΝΉ), 12,76 (с, 1Н, ΝΉ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 15,3, 20,3, 30,0, 31,9, 53,5, 95,3, 105,8, 110,7, 117,5, 117,8,

119,4, 124,3, 129,5, 131,9, 133,5, 136,3, 137,6, 142,6, 145,5, 149,9, 150,4, 151,8, 156,2, 158,8, 159,9, 161,0,

162,3. ЖХ-МС (т/ζ): 587 (М+Н, 100), ву=2,63 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл. для С₂₉Н₃₀Ы₈О₄8: 587,2183; найдено: 587,2186.

Синтез 122 1 -(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(4-(2-метил-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 - 80 019974

Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио)фенил)мочевина (АА-065)

н

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (45 мг, 51%) в виде белого твердого вещества.

^!Н-ЯМР (ацетон-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 2,43 (с, 3Н, СН3), 2,44 (с, 3Н, СН3), 6,37 (с, 1Н, СН), 6,54 (д, 1Н, Н^у, 1=5,6 Гц), 7,02 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц и 1=2,6 Гц), 7,21 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,39-7,42 (м, 1Н, Наром), 7,53-7,55 (м, 4Н, Наром), 7,77 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,27 (д, 1Н, Нуу 1=5,6 Гц), 8,37 (с, 1Н, ИН), 8,98 (с, 1Н, ИН), 12,75 (уш, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,3, 20,3, 30,0, 31,9, 96,2, 105,8, 117,5, 117,8, 119,5, 123,9(2), 124,2, 127,0, 129,1(2), 131,8, 133,6, 136,8, 138,6, 145,5, 149,8,

150,4, 152,0, 156,2, 158,8, 159,9, 160,7. ЖХ-МС (т/ζ): 556 (М+Н, 100), ву=2,66 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл. для С₂9Н₂₉И₇О₃8: 556,2125; найдено: 556,2125.

Синтез 123 1-(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-(метилтио)-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь] пиразин-8 -илокси)фенил)мочевина (АА-066)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (54 мг, 59%) в виде светло-коричневого порошка.

^!Н-ЯМР (СОС13), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 2,43 (с, 3Н, СН3), 6,36 (с, 1Н), 6,88 (д, 1Н, Н^, 1=5,3 Гц), 7,06 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц, 1=2,7 Гц), 7,24 (д, 1Н, Наром, 1=2,7 Гц), 7,39-7,43 (м, 1Н, Наром), 7,527,55 (м, 4Н, Наром), 7,78 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,36 (м, 1Н, Наром), 8,38 (с, 1Н, ИН или СН), 8,41 (с, 1Н, ИН или СН), 8,98 (с, 1Н, ИН), 12,55 (уш, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,5, 30,0, 31,9,

96,2, 110,0, 117,8, 119,6, 123,9(3), 124,1, 127,0, 129,1(3), 131,6, 133,8, 136,8, 138,5, 144,0, 145,2, 149,7, 152,0, 154,4, 156,1, 160,7. ЖХ-МС (т/ζ): 542 (М+Н, 100), ву=2,52 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл. для С₂₈Н₂₇И₇О₃8: 542,1968; найдено: 542,1969.

Синтез 124 1 -(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-(метилтио)-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-067)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение (175 мг, 97%) в виде белого порошка.

^!Н-ЯМР (СОС1₃-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 2,43 (с, 3Н, СН₃), 6,36 (с, 1Н), 6,60 (д, 1Н, Щу 5, 1=5,6 Гц), 7,03 (дд, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц, 1=2,7 Гц), 7,21 (д, 1Н, Наром, 1=2,7 Гц), 7,39-7,43 (м, 1Н, Наром), 7,53-7,54 (м, 4Н, Наром), 7,77 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,18 (с, 1Н, ИН или СН), 8,35 (д, 1Н, 1=5,6

Гц), 8,37 (с, 1Н, ИН или СН), 8,98 (с, 1Н, ИН или СН), 12,89 (с, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,3, 30,0(3), 31,9, 96,2, 106,1, 117.7, 118,2, 119,3, 123,9(2), 124,3, 127,0, 129,1(2), 131,8, 133,7, 136,8,

138,5, 145,3, 149,9, 150,8, 152,0(2), 156,3, 160,6, 160,7. ЖХ-МС (т/ζ): 542 (М+Н, 100), ву=2,60 мин. МСВР (ЭИ): т/ζ (М+Н, 100) вычисл. для С₂₈Н₂₇И₇О₃8: 542,1968; найдено: 542,1968.

Синтез 125 1 -(4-(3 -(диметиламино)пиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3 -(2-фтор-5 - 81 019974

(трифторметил)фенил)мочевина (АА-068)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)-Ы,Х-диметилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3-амином и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 40 мг (66%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 3,28 (с, 6Н, ЯССНзЪ), 6,65 (д, 1=5,3, 1Н, ЫРу), 7,05 (м, 2Н, Н_аром), 7,30 (м, 1Н, Наром), 7,41 (м, 1Н, Н_аром), 7,51 (м, 1Н, Н_аром), 8,22 (м, 1Н, Наром), 8,60 (д, 1=5,3, 1Н, Нру), 8,65 (м, 1Н, Наром), 8,71 (с, 1Н, Наром), 9,19 (с, 1Н, ΝΗ), 9,36 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 27,1, 105,3, 108,3 (д, 1_РС=22,3), 116,1 (д, 1_РС=20,5), 116,3 (д, 1_РС=2,6), 116,6 (м), 119,4 (м), 122,0 (д, Э_РС=2,3),

122,8, 125,0, 125,4 (м), 128,5 (д, 1_РС=11,4), 139,6 (уш), 149,6 (д, 1_РС=10,3), 152,0, 152,4 (д, 1_РС=245), 152,8,

153,4, 153,4 (д, 1_РС=248), 155,3, 160,4; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -60,8, -124,0, -125,3; ЖХ-МС (2,28 мин): т/ζ 505,2 (М+Н, 100); МСВР (2,80 мин): т/ζ вычисл. для С₂зΗ₁7р5N₆О₂ [М+Н⁺]: 505,14059; найдено: 505,13996.

Синтез 126 1 -(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(4-(3 -(диметиламино)пиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)мочевина (АА-070)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)-Ы,Х-диметилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3-амином и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая продукт в виде светло-желтого твердого вещества. Выход: 65 мг (90%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 3,28 (с, 6Н, ЯССНэЪ), 6,41 (с, 1Н, Н_аром), 6,62 (д, 1Н, 1=5,2, Нру), 7,02 (м, 1Н, Н_аром), 7,26 (м, 1Н, Н_аром), 7,44 (м, 1Н, Н_аром), 7,55 (м, 4Н, Н_аром), 8,14 (м, 1Н, Н_аром), 8,59 (д, 1Н, 1=5,2, Н_Ру), 8,71 (с, 1Н, Н_аром), 8,87 (с, 1Н, ΝΗ), 8,99 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), I (Гц): 30,2, 32,0, 37,4, 95,2, 105,3, 108,3 (д, 1_РС=22,3), 116,2, 121,8, 121,9, 124,4 (д, 1_РС=10,7), 124,5, 127,4, 129,3, 136,0, 137,0, 138,5, 149,4 (д, 1_РС=10,2), 151,4, 152,4, 152,4 (д, 1_РС=245), 153,5,

154,2, 160,4, 160,8; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.): -125,3; ЖХ-МС (2,25 мин): т/ζ 541,1 (М+Н, 100); МСВР (2,85 мин): т/ζ вычисл. для С₂9Η₂9рN₈NаО₂ [М+Ыа⁺]: 563,22897; найдено: 563,22865.

Синтез 127 3 -трет-бутил-1 -(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразол-5 -амин

Навески 4-(метилсульфонил)фенилгидразина гидрохлорида (1,133 г, 5,09 ммоль) и 4,4-диметил-3оксопентаннитрила (0,697 г, 5,57 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 100 мл. Добавляли 0,2М НС1 в Е!ОН (42 мл) и кипятили полученную суспензию с обратным холодильником в течение 27 ч, в течение указанного времени все твердые вещества постепенно растворялись, образуя желтый раствор. Полученный раствор разбавляли 1М ЫаОН(_водн) (~16 мл) до рН 12-13, добавляли Е!ОАс (70 мл) и интенсивно перемешивали полученную двухфазную систему в течение 5 мин. Отделяли органический слой, высушивали (Мд§О₄), фильтровали и упаривали, получая желтое кристаллическое твердое вещество. Выход: 1,42 г (95%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,23 (с, 9Н, трет-Ви), 3,22 (с, 3Н, Ме), 5,45 (уш с, 2Н, ΝΗ₂), 5,46 (с, 1Н, НруД 7,90 (д, 2Н, 1=8,7, Наром), 7,98 (д, 2Н, 1=8,7, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), I (Гц): 30,0, 31,9, 43,7, 88,3, 121,6, 128,1, 136,7, 143,8, 148,0, 162,2; ЖХ-МС (1,98 мин): т/ζ 294,1 (М+Н, 100).

Синтез 128 раствор 3-трет-бутил-5-иоцианато-1-(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразола в СН₂С1₂

- 82 019974

Навеску 3-трет-бутил-1-(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразол-5-амина (295 мг, 1,01 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 100 мл и добавляли СН₂С1₂ (20 мл) и насыщенный водный раствор №1НС0₃ (20 мл). Полученную двухфазную систему перемешивали и охлаждали до 0°С, после чего добавляли по каплям 1,9М раствор фосгена в толуоле (1,06 мл, 2,02 ммоль) в течение 30 с. Полученную смесь интенсивно перемешивали в течение 10 мин, отделяли органическую фазу, промывали Н₂О (20 мл), высушивали (Мд80₄), фильтровали и концентрировали до 10 мл, получая 100 мМ раствор целевого соединения. ИК (ν, см^-1): 2260 (Ы=С=0).

Синтез 129 1-(3-трет-бутил-1-(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-090)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (56 мг, 0,206 ммоль) и 0,1М раствором 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразола в СН₂С1₂ (5,8 мл, 0,58 ммоль). Получали целевое соединение в виде желтого твердого вещества с выходом 41% (50 мг) после хроматографии на колонке Вю1адс 25+М.

Ή-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 1,30 (с, 9Н, трет-Ви), 3,27 (с, 3Н, 8О2СН3), 6,46 (с, 1Н, Нру), 6,65 (д, 1=5,6, 1Н, НруД 7,05 (м, 1Н, Н^), 7,30 (м, 1Н, Н^), 7,85 (д, 1=8,7, 2Н, Н^), 8,08 (д, 1=8,7, 2Н, Наром), 8,12 (м, 1Н, Наром), 8,17 (с, 1Н, Наром), 8,37 (д, 1=5,6, 1Н, Нру), 8,97 (с, 1Н, ΝΗ), 8,99 (с, 1Н, ΝΗ), 12,90 (с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 30,0, 32,1, 43,5, 97,0, 106,5, 108,5 (д, 1_РС=22,4), 116,4,

118,4, 122,0, 123,9, 124,7 (д, 1_РС=10,8), 128,3, 137,4, 138,7, 142,5, 145,6, 148,8 (д, 1_РС=10,5), 151,1, 151,5,

152,2, 152,5 (д, 1_РС=245), 156,6, 160,5, 162,1; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.): -124,3; ЖХ-МС (т/ζ): 592,1 (М+Н, 100), ву = 2,44 мин; МСВР (7,17 мин): т/ζ вычисл. для С₂₈Н₂₇РЫ₇0₅8 (М+Н, 100)⁺: 461,09798; найдено: 461,09771.

Синтез 130 1-(3-трет-бутил-1-(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2,3-диоксо1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)мочевина (АА-092)

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дионом (58 мг, 101 мкмоль) и 0,06М раствором 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-(4-(метилсульфонил)фенил)-1Н-пиразола в СН2С12 (6,8 мл, 0,41 ммоль). Получали целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 30 мг (49%).

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,30 (с, 9Н, трет-Ви), 3,27 (с, 3Н, 80₂СН₃), 6,45 (с, 1Н, Н_ру), 6,57 (д, 1Н, 1=5,7, Нру), 7,00 (м, 1Н, Наром), 7,22 (м, 1Н, Наром), 7,85 (д, 2Н, 1=8,7, Наром), 7,95 (д, 1Н, 1=5,7, НРу), 8,07 (д, 2Н, 1=8,7, Наром), 8,09 (м, 1Н, Наром), 8,94 (с, 1Н, ΝΗ), 8,97 (с, 1Н, Наром), 11,89 (с, 1Н, ΝΗ), 12,38 (с, 1Н, ΝΗ); ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.): -124,6; ЖХ-МС (т/ζ): 608,1 (М+Н, 100), ву = 2,39 мин; МСВР (3,07 мин): т/ζ вычисл. для С₂₈Н₂₇РЫ₇0₆8 [М+Н⁺]: 608,17221; найдено: 608,17142.

Синтез 131 1-(4-(2,3-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-072)

- 83 019974

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дионом и 1фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде бежевого твердого вещества. Выход: 52 мг (51%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,60 (д, 1=5,4, 1Н, Нру), 7,04 (м, 2Н, Наром), 7,27 (м, 1Н, Наром), 7,41 (м, 1Н, Наром), 7,52 (м, 1Н, Наром), 7,98 (д, 1=5,4, 1Н, Нру), 8,22 (м, 1Н, Наром), 8,64 (м, 1Н, Наром), 9,19 (с, 1Н, ЫН), 9,35 (с, 1Н, ЫН), 11,92 (с, 1Н, ЫН), 12,40 (с, 1Н, ЫН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), 1 (Гц):

106,6, 108,2 (д, 1_РС=22,5), 112,5, 116,0, 116,2, 116,6 (м), 119,5 (м), 120,6, 121,9 (д, Э_РС=2,3), 123,9 (кв, 1_РС=270), 124,3 (д, 1_РС=10,6), 125,4 (м), 128,5 (д, 1_РС=11,4), 140,6, 143,2, 149,0 (д, 1_РС=10,4), 150,2, 152,0,

152,3 (д, 1_РС=245), 153,4 (д, 1_РС=249), 154,7, 156,0; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.): -60,2, -123,5, -124,9; ЖХМС (т/ζ): 494,0 (М+Н, 100), ву = 2,57 мин; МСВР (3,06 мин): т/ζ вычисл. для С₂1Н₁₂Р₅Ы₅ЫаО₄ [М+Ыа⁺]: 516,07017; найдено: 516,06998.

Синтез 132 1-(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -морфолинопиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-071)

Раствор 2-фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилина (47 мг, 138 мкмоль) в сухом ТГФ (5 мл) обрабатывали раствором 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразола (1,1 мл, 0,25М раствора в СН₂С1₂, 275 мкмоль) при 0°С. Постепенно начинал образовываться желтый осадок, и через 1 ч при КТ добавляли гексан (20 мл) и отфильтровывали образовавшийся желтый осадок. Указанный осадок растворяли в МеОН/СН₂С1₂ (1:1), выпаривали на силикагеле и элюировали продукт с градиентом от 0 до 20% МеОН в ЕЮАс, получая продукт в виде светло-желтого твердого вещества. Выход: 71 мг (89%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), (м.д.), 1 (Гц): 1,30 (с, 9Н, трет-Ви), 3,77 (м, 4Н, Ы(СН2СН2)2О), 3,84 (м, 4Н, Ы(СН2СН2)2О), 6,41 (с, 1Н, Наром), 6,68 (д, 1Н, 1=5,2 Гц, Нру), 7,02 (м, 1Н, Наром), 7,27 (м, 1Н, Наром), 7,44 (м, 1Н, ^НаромХ ^7,55 (м, 4Н, ^НаромХ ^8,15 (^м, 1Н, Наром), ^8,63 (Ж 1Н, 1=^{5,2, Н}аромХ ^8,84 (^м, 2Н, И,,,,,,, ^{+ Н}мочевина^),8,98 (с, 1Н, Нмочевина); ¹³С-ЯМР (ДМСО-а₆), (м.д.), 1 (Гц): 30,2, 32,0, 44,4, 65,9, 95,1, 105,9, 108,3 (д, 1_РН=22,3), 116,3, 121,8, 122,5, 124,4 (д, 1_РН=10,7), 124,5, 127,4, 129,3, 136,3, 137,0, 138,3, 149,3 (д, 1_РН=10,4),

151,4, 152,1, 152,4 (д, 1_РН=245), 153,7, 153,9, 160,4, 160,8; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-а₆), (м.д.): -125,3; ЖХ-МС (т/ζ): 583,1 (М+Н, 100), ву = 2,33 мин; МСВР (2,88 мин): т/ζ вычисл. для С₃1Н₃₂РЫ₈О₃ [М+Н⁺]: 583,25759; найдено: 583,25719.

Синтез 133 1-(3 -трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -морфолинопиридо [2,3 -

Применяли способ Р2 с 2-фтор-4-(3-морфолинопиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)анилином и 3-третбутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая продукт в виде светло-желтого твердого вещества. Выход: 97 мг (90%).

Ή-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви, 2,39 (с, 3Н, СН₃), 3,77 (м, 4Н, Ы(СН₂СН₂)₂О), 3,84 (м, 4Н, Ы(СН₂СН₂)₂О), 6,40 (с, 1Н, Н_РД 6,67 (д, 1Н, 1=5,3, Н_РД 7,03 (м, 1Н, Н_аром), 7,27 (м, 1Н, Наром), 7,35 (д, 2Н, 1=8,3, Наром), 7,41 (д, 2Н, 1=8,3, Наром), 8,17 (м, 1Н, Наром), 8,62 (д, 1Н, 1=5,3, Нру), 8,80 (с, 1Н, ЫН), 8,84 (с, 1Н, Н_аром), 9,00 (с, 1Н, ЫН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,6, 30,2, 32,0, 44,4, 65,9, 94,6, 105,8, 108,3 (д, 1_РС=22,4), 116,2, 121,7, 122,5, 124,5, 124,6 (д, 1_РС=10,7), 129,7, 135,9,

136,3, 136,9 (д, 1_РС=5,7), 149,2 (д, 1_РС=10,4), 151,3, 152,1, 152,3 (д, 1_РС=245), 153,7, 153,9, 160,4, 160,8; ¹⁹Р-

ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.): -124,8; ЖХ-МС (т/ζ): 597,2 (М+Н, 100), ву = 2,43 мин; МСВР (3,01 мин): т/ζ

- 84 019974 вычисл. для С₃₂Н₃₄РЛ₈О₃ [М+Н⁺]: 597,27324; найдено: 597,27289.

Синтез 134 1-(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(4-(2,3-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)мочевина (АА-074)

Н

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2,3(1Н,4Н)-дионом и 3трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 33 мг (44%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 2,36 (с, 3Н, СН3, 6,37 (с, 1Н, Нпиразол), 6,53 (д, 1Н, 1=5,3, НРу), 6,91 (м, 1Н, Наром), 7,08 (м, 1Н, Наром), 7,29 (д, 2Н, 1=8,3, Наром), 7,38 (д, 2Н, 1=8,3, Наром), 7,90 (д, 1Н, 1=5,3, Н_Ру), 8,07 (м, 1Н, Н_аром), 9,14 (уш с, 1Н, ЛН), 9,24 (уш с, 1Н, Н_аром), 12,00 (уш с, 2Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,6, 30,2, 32,0, 94,8, 106,6, 107,8 (д, 1_РС=22,4), 115,8, 122,2,

124,3 (д, 1_РС=10,7), 129,5, 136,0, 136,7, 137,2, 141,1, 142,3 (уш), 149,2 (д, 1_РС=9,8), 150,7, 151,5, 151,6, 152,3 (д, 1_РС=245), 153,5, 156,3 (уш), 156,4, 160,5; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.): -124,4; ЖХ-МС (т/ζ): 544,0 (М+Н, 100), ву = 2,62 мин; МСВР (3,01 мин): т/ζ вычисл. для С₂₈Н₂₇РЛ₇О₄ [М+Н⁺]: 544,21031; найдено: 544,21063.

Синтез 135 1-(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(3 -(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь] пиразин-8 -илокси)фенил)мочевина (АА-075)

Н

Применяли способ Р2 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде светло-желтого твердого вещества (97 мг, 62%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,27 (с, 9Н, трет-Ви), 6,35 (с, 1Н, Наром,), 6,61 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 6,84 (дд, 1Н, Наром, 1=1,8 Гц, 1=8,0 Гц), 7,20 (д, 1Н, Наром, 1=1,2 Гц, 1=8,1 Гц), 7,36-7,42 (м, 2Н, Наром), 7,44 (т, 1Н, Наром, 1=2,1 Гц), 7,52-7,53 (м, 4Н, Наром), 8,18 (с, 1Н, Наром), 8,36 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 8,44 (с, 1Н, ЛНмочевина), 9,23 (с, 1Н, ЛНмочевина), 12,89 (с, 1Н, ЛНла_Ктам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,04 (трет-Ви), 31,89 (трет-Ви), 95,63, 106,54, 109,58, 113,54, 114,96, 118,38, 124,14 (2*С), 127,13, 129,14 (2*С), 130,46, 136,76, 138,40, 141,25, 145,42, 151,05, 151,42, 152,01, 154,34, 156,35, 160,40, 160,65.

Синтез 136 1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-076)

Применяли способ Р2 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трет-бутил-5изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества (57 мг, 29%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,27 (с, 9Н, трет-Ви), 6,35 (с, 1Н, Наром), 6,85 (дд, 1Н, Наром, 1= 8,1 Гц, 1=1,9 Гц), 6,88 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,3 Гц), 7,20 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,2 Гц, 1=1,2 Гц), 7,37-7,42 (м, 2Н, Н_аром), 7,47 (т, 1Н, Наром, 1=2,0 Гц), 7,52-7,53 (м, 4Н, Наром), 8,35-8,43 (м, 3Н, Наром), 9,23 (с, 1Н, ЛНмочевина), 12,54 (с, 1Н, ЛНлактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,04 (трет-Ви), 31,90 (трет-Ви). 105,11, 106,87, 109,67, 110,38, 111,17, 113,58, 115,00, 119,52, 124,14 (2*С), 127,35, 129,14 (2*С), 130,38, 136,77, 138,41, 141,21, 145,22, 151,42, 154,09, 154,55, 155,88, 160,66.

Синтез 137 1 -(4-(2-амино-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 -ил)-3 -(3 - 85 019974 трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-077)

Применяли способ Р2 с 2-амино-8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бежевого твердого вещества (46 мг, 51%).

'Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 2,40 (с, 3Н, Ме), 6,30 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,5 Гц), 6,39 (с, 1Н, Н_аром), 7,22 (д, 1Н, Н^м, 1=8,3 Гц), 7,37 (д, 2Н, Н^м, 1=8,2 Гц), 7,46 (д, 2Н, Н^м, 1=8,3 Гц), 7,56 (т, 1Н, Н_аром, 1=7,5 Гц), 7,63 (т, 1Н, Н^, 1=8,0 Гц), 7,86-7,91 (м, 3Н, Наром), 8,06 (д, 1Н, Н^, 1= 8,5 Гц), 8,72 (с, 1Н, Ν^™), 9,05 (с, 1Н, NΗмочевина), 12,58 (с, 1Н, \Н '³С-ЯМР (ДМСО-бв), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,50 (СН₃), 30,11 (трет-Ви), 31,90 (трет-Ви), 95,11, 106,44, 116,08, 118,75, 119,35, 121,56, 122,26, 124,22 (2*С), 126,33, 126,49, 126,55, 127,85, 129,58 (2*С), 131,26, 136,07, 136,67, 137,12, 142,95, 143,56, 146,12, 151,71, 152,21, 152,72, 157,14, 160,43. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃₂Н₃₀Ы₈О₃: 575,2514; найдено: 575,2519.

Синтез 138 1-(3 -трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(3 -(2-метил-3 -оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-078)

Применяли способ Р2 с 8-(3-аминофенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутил-5-изоцианато-1-п-толил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (89 мг, 57%).

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,26 (с, 9Н, трет-Ви), 2,36 (с, 3Н, Ме), 2,42 (с, 3Н, Ме), 6,32 (с, 1Н, Н_аром), 6,55 (д, 1Н, ^у, 1=6,6 Гц), 6,83 (дд, 1Н, Н_аром, 1=2,2 Гц, 1=8,1 Гц), 7,21 (д, 1Н, Н_аром, 1=7,9 Гц), 7,31 (д, 2Н, Н_аром, Т=8,3 Гц), 7,36 (с, 1Н, Н_аром), 7,37 (д, 2Н, Н_аром, 1=8,3 Гц), 7,44 (т, 1Н, Н_аром, 1=2,1 Гц), 8,27 (д, 1Н, ^у, 1=6,8 Гц), 8,48 (с, 1Н, NΗмочевина), 9,30 (с, 1Н, NΗмочевина), 12,75 (с, 1Н, NΗлαктам). '³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 20,42 (СН₃), 20,46 (СН₃), 30,08 (трет-Ви), 31,87 (трет-Ви). 95,67, 106,19,

109,72, 113,56, 114,91, 117,74, 124,08 (2*С), 129,49 (2*С), 130,38, 136,03, 136,51, 136,76, 141,44, 145,71, 150,40, 151,61, 154,30, 156,32, 158,98, 159,67, 160,33. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл для С₂₉Н₂₉Ы₇О₃: 524,2405; найдено: 524,2409.

Синтез 139 1 -(4-(3 -амино-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 -ил)-3 -(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-079)

Применяли способ Р2 с 3-амино-8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде желто-оранжевого твердого вещества (31 мг, 38%).

'Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,30 (д, 1Н, Н_аром, Т=5,5 Гц), 7,34 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,3 Гц), 7,41 (с, 1Н, Наром), 7,54 (т, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 7,60 (т, 1Н, Н_аром, 1=7,4 Гц), 7,71 (т, 1Н, Н_аром, 1=7,2 Гц), 7,99 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,01 (д, 1Н, Наром, 1=5,6 Гц), 8,04 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,24 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,69 (д, 1Н, Наром, 1=7,2 Гц), 9,32 (с, 1Н, NΗмочевина), 9,38 (с, 1Н, NΗмочевина), 12,39 (с, 1Н, Ν^™). '³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 104,61, 113,94, 116,00, 116,47, 118,03, 119,16, 121,96, 122,73, 124,89, 125,33,

- 86 019974

126,53, 126,72, 127,44, 128,73, 131,24, 144,29, 145,44, 146,76, 151,08, 152,38, 152,60, 154,35, 154,77. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл для С₂₅Н₁₆Е.₁Н₆О₃: 525,1293; найдено: 525,1292.

Синтез 140 1 -(4-(2-амино-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 -ил)-3 -(3 трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-080)

н

Применяли способ Е2 с 2-амино-8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде бледно-розового твердого вещества (70 мг, 80%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,29 (с, 9Н, трет-Ви), 6,31 (д, 1Н, Наром, 1=5,5 Гц), 6,41 (с, 1Н, Наром), 7,22 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,44 (т, 1Н, 1=7,0 Гц), 7,54-7,65 (м, 6Н, Наром), 7,85 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,88-7,91 (м, 2Н, Наром), 8,06 (д, 1Н, Наром, 6=8,6 Гц), 8,76 (С, 1Н, ННмочевина), 9,04 (С, 1Н, ННмочевина), 12,58 (с, 1Н, \Н _:..). ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,08 (трет-Ви), 31,92 (трет-Ви). 95,69, 106,46, 116,05, 118,94, 119,36, 121,56, 122,27, 124,12 (2*С), 126,32, 126,52, 126,55, 127,11, 127,97, 129,17 (2*С), 131,22, 137,15, 138,59, 142,95, 143,56, 146,22, 151,71, 152,33, 152,72, 157,12, 160,68. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃1Н₂₈Ы₈О₃: 561,2357; найдено: 561,2351.

Синтез 141 1 -(4-(3 -амино-2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1 -ил)-3 -(3 трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-081)

Применяли способ Е2 с 3-амино-8-(4-аминонафталин-1-илокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом, получая целевое соединение в виде желтооранжевого твердого вещества (46 мг, 44%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,30 (с, 9Н, трет-Ви), 6,28 (д, 1Н, Н_аром, 1=5,5 Гц), 6,42 (с, 1Н, Н_аром), 7,31 (д, 1Н, Наром, 6=8,3 Гц), 7,44 (т, 1Н, 6=7,1 Гц), 7,55-7,66 (м, 6Н, Наром), 7,89-7,96 (м, 2Н, Наром), 7,99 (д, 1Н, Наром, 6=5,5 Гц), 8,08 (д, 1Н, Наром, 6=8,6 Гц), 8,82 (с, 1Н, ΝΗ_{Μ04ββΙπκι}), 9,11 (с, 1Н, Жочевина), 12,38 (с, 1Н, ИН_лактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,08 (трет-Ви), 31,93 (трет-Ви). 95,78, 104,61, 113,91, 116,44, 118,37, 121,92, 122,14, 124,09 (2*С), 126,45, 126,47, 126,54, 127,09, 127,73, 129,15 (2*С), 131,63, 137,13, 138,59, 144,28, 145,43, 146,74, 151,01, 151,12, 152,33, 154,75, 160,69. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₃1Н₂₈Ы₈О₃: 561,2357; найдено: 561,2350.

Синтез 142 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(3-оксо-2-(трифторметил)-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-ил)мочевина (АА-082)

Применяли способ Е2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-2-(трифторметил)пиридо[2,3-Ь]пиразин3(4Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (31 мг, 45%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 6 (Гц): 6,40 (д, 1Н, Наром, 6=5,7 Гц), 7,41-7,42 (м, 1Н, Наром), 7,49 (д, 1Н, Наром, 6=8,3 Гц), 7,54 (т, 1Н, Наром, 6=9,9 Гц), 7,60 (т, 1Н, Наром, 6=7,6 Гц), 7,73 (т, 1Н, Наром, 6=7,7 Гц), 7,85 (д, 1Н, Наром, 6=8,4 Гц), 8,15 (д, 1Н, Наром, 6=8,3 Гц), 8,29 (д, 1Н, Наром, 6=8,6 Гц), 8,38 (д, 1Н, Наром) 6=5,7 Гц), 8,71 (д, 1Н, Наром, 6=6,0 Гц), 9,39 (с, 1Н, Жочевина), 9,42 (с, 1Н, Жочевина), 13,55 (с, 1Н, Жактам). А ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 105,66, 116,02, 116,54, 117,64, 118,82, 119,29, 121,01, 121,40, 122,08,

122,72, 124,88, 125,35, 126,15, 126,86, 127,63, 128,65, 132,23, 143,10, 144,37, 146,85, 152,39, 152,48, 153,32,

- 87 019974

154,36, 154,82, 162,35. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл для С₂₆Н₁₄Р₇И₅О₃: 578,1058; найдено: 578,1064. Синтез 143 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2-оксо-3-(трифторметил)-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)нафталин-1-ил)мочевина (АА-083)

Применяли способ Р2 с 8-(4-аминонафталин-1-илокси)-3-(трифторметил)пиридо[2,3-Ь]пиразин2(1Н)-оном и 1-фтор-2-изоцианато-4-(трифторметил)бензолом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (5 мг, 5%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 6,79 (д, 1Н, Наром, 1=5,3 Гц), 7,42-7,43 (м, 1Н, Наром), 7,47 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,55 (т, 1Н, Наром, 1=9,8 Гц), 7,62 (т, 1Н, Наром, 1=7,6 Гц), 7,74 (т, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 7,97 (д, 1Н, Наром, 1=8,5 Гц), 8,14 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 8,28 (д, 1Н, Наром, 1=8,6 Гц), 8,40 (д, 1Н, Наром, 1=5,2 Гц), 9,71 (дд, 1Н, Наром, 1=1,8, 7,2 Гц), 9,38 (с, 1Н, ИНмочевина), 9,42 (с, 1Н, ИНмочевина), 13,51 (с, 1Н, ИНлактам). “СЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 110,67, 116,02, 116,48, 117,14, 117,76, 118,64, 119,21, 120,84, 121,88,

122,73, 123,05, 124,89, 125,40, 126,13, 126,87, 127,05, 127,37, 128,67, 131,99, 141,78, 144,58, 146,66, 151,64, 152,39, 152,53, 154,36. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₆Н₁₄Р₇И₅О₃: 578,1058; найдено: 578,1051.

(У11) Синтез амидов.

1. Амиды из общих промежуточных соединений.

Синтез 144 И-(3 -(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3 -(трифторметокси) бензамид (АА-002) .ОСЕ.

Способ О1. 8-(3-Аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-он (43 мг, 0,169 ммоль) и диизопропилэтиламин (44 мкл, 0,254 ммоль) смешивали в сухом ТГФ (5,0 мл) и добавляли 3трифторметоксибензоилхлорид (57 мг, 0,254 ммоль). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 17 ч. После охлаждения до КТ выпаривали растворитель в вакууме. Полученный маслянистый остаток растворяли в ДХМ, промывали водой и высушивали над Мд§О₄. После выпаривания ДХМ полученный остаток помещали в Е!2О, растирали и фильтровали, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (45 мг, 60%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,68 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 7,01 (ддд, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц, 1=2,3 Гц, 1=0,7 Гц), 7,50 (т, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,62 (д, 1Н, Наром, 1=8,3 Гц), 7,68-7,72 (м, 3Н, Наром), 7,89 (с, 1Н, Наром), 7,99 (д, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 8,19 (с, 1Н, Наром), 8,39 (д, 1Н, НРу,6, 1=5,6 Гц), 10,53 (с, 1Н, ИНамид), 12,91 (с, 1Н, ИН_лактам). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 106,78, 111,77, 115,45, 117,10, 118,48, 120,08, 120,95, 124,07, 126,69, 130,39, 130,54, 136,68, 140,54, 145,47, 148,17, 151,16, 152,08, 154,21, 156,36, 160,28, 163,97. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₁Н₁₃Р₃И₄О₄: 443,0962; найдено: 443,0950.

Синтез 145 3-трет-бутил-И-(3-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)бензамид (АА-003)

Применяли способ О1 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутилбензоилхлоридом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (29 мг, 45%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,33 (с, 9Н, трет-Ви), 6,67 (д, 1Н, НРу 5, 1=5,6 Гц), 6,98 (ддд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=2,4 Гц, 1=0,8 Гц), 7,46 (т, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 7,48 (т, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,63 (д, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 7,70 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,74-7,77 (м, 2Н, Наром), 7,90 (т, 1Н, Наром, 1=1,7 Гц), 8,19 (с,

- 88 019974

1Н, Наром), 8,39 (д, 1Н, Нру,6, 1=5,6 Гц), 10,36 (с, 1Н, ΝΗ^), 12,91 (с, 1Н, ΝΗ^. ¹³С-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 31,00 (трет-Ви), 34,56 (трет-Ви), 106,78, 111,84, 115,20, 117,18, 118,53, 124,30, 124,79, 128,11, 128,67, 130,37, 134,44, 141,05, 145,54, 150,95, 151,20, 152,16, 154,22, 156,45, 160,45, 166,45. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₄Н₂₂Ы₄О₃: 415,1765; найдено: 415,1770.

Синтез 146 3-трет-бутил-М-(3-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)бензамид (АА-029)

Применяли способ С1 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трет-бутилбензоилхлоридом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (14 мг, 22%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,33 (с, 9Н, трет-Ви), 6,94 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,3 Гц), 7.00 (дд, 1Н, Н_аром, 1=8,1 Гц, 1=2,4 Гц), 7,46 (т, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 7,49 (т, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц), 7,63 (д, 1Н, Наром, 1=1,7 Гц), 7,71 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,75-7,77 (м, 2Н, Наром), 7,91 (т, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 8,39 (д, 1Н, Нру, 1=

5,3 Гц), 8,43 (с, 1Н, Наром), 10,37 (с, 1Н, ΝΗ^), 12,60 (с, 1Н, ΝΗ^. ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 30,99 (трет-Ви), 34,55 (трет-Ви), 110,60, 111,94, 115,27, 117,23, 117,99, 124,29, 124,79, 128,11, 128,67, 130,27, 134,40, 134,96, 141,00, 150,94, 153,95, 154,77, 155,88, 166,10. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₄Н₂₂Ы₄О₃: 415,1765; найдено: 415,1775.

Синтез 147 N-{3 -(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3 -(трифторметокси) бензамид (АА-030)

Применяли способ С1 с 8-(3-аминофенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-оном и 3-трифторметоксибензоилхлоридом, получая целевое соединение в виде белого твердого вещества (35 мг, 20%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 6,94 (д, 1Н, Нру, 1=5,3 Гц), 7,03 (дд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=2,3 Гц), 7,50 (т, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,61-7,62 (м, 1Н, Наром), 7,68-7,71 (м, 2Н, Наром), 7,75 (т, 1Н, Наром, 1=2,0 Гц), 7,90 (с, 1Н, Наром), 8,00 (д, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 8,39 (д, 1Н, Нру 1=5,3 Гц), 8,43 (с, 1Н, Наром), 10,54 (с, 1Н, N11... 12,61 (с, 1Н, N11 ....). ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 110,64, 111,98, 115,65, 117,27,

119,00, 120,17, 121,04, 123,09, 124,18, 126,78, 130,40, 130,65, 136,75, 140,58, 145,36, 148,26, 154,01, 154,61, 164,05. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для СДДОД: 443,0962; найдено: 443,0966.

Синтез 148 М-(3-(2-метил-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(трифторметокси)бензамид) (АА-004)

Применяли способ С1 с 8-(3-аминофенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3трифторметоксибензоилхлоридом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (74 мг, 87%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 2,44 (с, 3Н, Ме), 6,62 (д, 1Н, Нру, 1=5,6 Гц), 7,01 (дд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=2,3 Гц), 7,50 (т, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,61 (д, 1Н, Наром, 1=8,4 Гц), 7,67-7,71 (м, 2Н, Наром), 7,73 (т, 1Н, Наром, 1=2,1 Гц), 7,90 (с, 1Н, Наром), 8,01 (д, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 8,31 (д, 1Н, Нру, 1=5,6 Гц), 10,55 (с, 1Н, NN ... ), 12,77 (с, 1Н, N11..). ¹³С-ЯМР (ДМСО-а6), δ (м.д.), I (Гц): 20,52 (Ме), 106,55, 112,11, 115,72, 117,24, 117,91, 120,03 (ОСР₃), 120,23, 124,16, 126,85, 130,44, 130,62, 136,75, 140,66, 145,76, 148,26, 150,58, 154,25, 156,32, 159,24, 159,65, 164,08. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для С₂₂Н₁₅Р₃М₄О₄: 457,1124; найдено: 457,1118.

Синтез 149 3 -трет-бутил-М-(3 -(2-метил-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил) бензамид (АА-005)

- 89 019974

Применяли способ 01 с 8-(3-аминофенокси)-2-метилпиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном и 3-третбутилбензоилхлоридом, получая целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (77 мг, 97%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 1,33 (с, 9Н, трет-Ви), 2,44 (с, 3Н, Ме), 6,62 (д, 1Н, Η^, 1=5,6 Гц), 6,98 (дд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=2,4 Гц), 7,44-7,50 (м, 2Н, Наром), 7,63 (д, 1Н, Наром, 1=7,9 Гц), 7,70 (д, 1Н, Наром, 1=8,2 Гц), 7,74-7,77 (м, 2Н, Наром), 7,91 (с, 1Н, Наром), 8,30 (д, 1Н, Ηρ^ 1=5,6 Гц), 10,37 (с, 1Н, NΗаΜид), 12,77 (с, 1Н, ΝΗπϊΙΙ3ϊ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 20,52 (СН₃), 31,02 (трет-Ви), 34,57 (трет-Ви). 106,50, 112,06, 115,36, 117,20, 117,88, 124,36, 124,85, 128,11, 128,67, 130,34, 134,43, 141,07, 145,75, 150,58, 150,94, 154,19, 156,32, 159,20, 159,72, 166,14. МСВР (ЭИ): т/ζ [М+ Η] вычисл. для ΥΗ₂₄Ν₄Ο₃: 429,1921; найдено: 429,1921.

(VIII) Синтез обратных амидов.

1. Обратные амиды из общих промежуточных соединений.

Синтез 150 Ν-(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин8-илокси)бензамид (АА-001)

Способ Н1. Раствор А1Ме₃ (2М раствор в толуоле, 0,85 мл, 1,68 ммоль) добавляли по каплям к охлажденному (0°С) раствору 3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-амина (362 мг, 1,68 ммоль) в ТГФ (5,0 мл). По окончании добавления полученную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и продолжали перемешивание в течение 30 мин. Затем добавляли метиловый эфир 3-(3-оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)бензойной кислоты (100 мг, 0,336 ммоль) и кипятили полученную смесь с обратным холодильником в течение 19 ч. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры и осторожно гасили 5% водн. ΗΟ1 (3,0 мл). Осадок, полученный после выпаривания растворителя, помещали в ΟΗ₂α₂, промывали насыщенным раствором NаΗСΟ₃, высушивали над Μд§Ο₄ и выпаривали в вакууме. Полученный остаток хроматографировали (элюент: С^СГ/ЕЮАс: от 2/1 до 1/3) и получали целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (29 мг, 18%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-άβ), δ (м.д.), I (Гц): 1,31 (с, 9Н, трет-Ви), 6,39 (с, 1Н, Ηρ^, 6,71 (д, 1Н, Ηρ^ 1=5,6 Гц), 7,29-7,32 (м, 1Н, Наром), 7,41-7,44 (м, 2Н, Наром), 7,47 (дд, 1Н, Наром, 1=8,1 Гц, 1=2,4 Гц), 7,50-7,52 (м, 2Н, Наром), 7,61-7,64 (м, 2Н, Наром), 7,78 (д, 1Н, Наром, 1=7,7 Гц), 8,17 (с, 1Н, Наром), 8,42 (д, 1Н, Ηρ^ 1=5,6 Гц), 10,35 (с, 1Н, ΝΚ.γ, 12,94 (с, 1Н, Ν^™). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), I (Гц): 30,03 (трет-Ви), 32,00 (трет-Ви). 100,70, 107,39, 118,62, 118,67, 122,92, 122,98, 123,45, 124,39, 126,75, 128,87, 130,68, 135,32, 138,88, 145,58, 151,30, 152,17, 154,50, 156,35, 159,73, 160,71, 164,71. МСВР (ЭИ): т/ζ [М + Н] вычисл. для ΥΗ₂₄Ν₆Ο₃:481,1983; найдено: 481,1983.

(IX) Синтез мочевин из изоцианатов и нитро-аминопиридиновых промежуточных соединений.

Синтез 151 1-(4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3-(4-хлор-3-(трифторметил)фенил)мочевина

С)

Ν ΝΗ₂

Применяли способ Ρ2 с 4-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-3-нитропиридин-2-амином (150 мг, 0,5 ммоль) и 4-хлор-3-трифторметилизоцианатом, получая целевое соединение (247 мг, 93%) в виде оранжевого порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 2,47 (с, 3Н, СН₃), 6,02 (д, 1Н, Η^, 1=5,7 Гц), 7,04 (д, 1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц), 7,16 (с, 2Н, ΝΗ₂^), 7,21 (м, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 7,62 (м, 2Н, Наром), 7,85 (м, 1Н, Наром), 8,01 (д,

- 90 019974

1Н, Н_аром, 1=8,8 Гц), 8,11 (д, 1Н, Чру, 1=5,7 Гц), 8,20 ( с, 1Н, NΗмочевина1), 9,75 ( с, 1Н, NΗмочевиназ). ¹³С-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,6, 100,4, 116,5, 118,0, 119,8, 121,6, 122,7, 123,8, 124,0, 126,5, 126,8, 131,7, 132,0, 133,9, 139,2, 149,3, 152,4, 153,1, 153,7, 158,9. ЖХ-МС (т/ζ): 514 (М+Н, 100), ву=8,37 мин.

Синтез 152 1-(4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина

Ν ΝΗ,

Применяли способ Р2 с 4-(4-амино-3-(метилтио)фенокси)-3-нитропиридин-2-амином (1,04 г, 3,57 ммоль) и 2-фтор-5-трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (664 мг, 37%) в виде желтого порошка.

Ή-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,48 (с, 3Н, СН3), 6,02 (д, 1Н, 11. ·., 1=5,7 Гц), 7,02 (дд, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц, 1=2,7 Гц), 7,39 (м, 1Н, Наром), 7,50 (м, 1Н, Наром), 7,83 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,01 (д, 1Н, Чру, 1=5,7 Гц), 8,62 (дд, 1Н, Наром, 1=7,1 Гц, 1=1,6 Гц), 8,66 (с, 1Н, Наром), 9,69 ( с, 1Н, NΗмочевина1), 10,50 ( с, 1Н, ΝΗ^^β^^). ЖХ-МС (т/ζ): 498 (М+Н, 100), ву=5,54 мин.

Синтез 153 1 -(4-(2-амино-3 -нитропиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3 -(2-фтор-5 -(трифторметил) фенил)мочевина

Применяли способ Р2 с 4-(4-амино-3-фторфенокси)-3-нитропиридин-2-амином и 2-фтор-5трифторметилфенилизоцианатом, получая целевое соединение (выход 85%).

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,03 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 7,04 (дд, 1Н, 1=8,6, 2,2 Гц), 7,22 (уш, 2Н), 7,33 (дд, 1Н, 1=8,6, 2,9 Гц), 8,60 (м, 1Н), 9,22 (с, 1Н), 9,37 (с, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 470 (М+Н, 100).

Синтез 154 1 -(4-(2-амино-3 -нитропиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3 -(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Нпиразол-5 -ил)мочевина

Ν ΝΗ₂

Применяли способ Р3 с 3-трет-бутил-5-изоцианато-1-фенил-1Н-пиразолом (15 мл, 4,05 ммоль) и 4(4-амино-3-фторфенокси)-3-нитропиридин-2-амином (893 мг, 3,38 ммоль), получая целевое соединение с количественным выходом (1,71 г) в виде желтого твердого вещества после колоночной хроматографии с применением от 5 до 50% ЕЮАс в СЧ₂С1₂.

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 6,03 (д, 1Н, 1=5,7, Ч_Ру), 6,40 (с, 1Н, Η^_ζ), 7,01 (м, 1Н, Наром), 7,18 (уш с, 2Н, ΝΗ₂), 7,26 (м, 1Н, Наром), 7,43 (м, 1Н, Наром), 7,54 (м, 4Н, Наром), 8,01 (д, 1Н, 1=5,7, Ч_Ру), 8,16 (м, 1Н, Н_аром), 8,84 (с, 1Н, ΝΗ), 8,98 (уш с, 1Н, ΝΗ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,1, 32,0, 95,1, 100,6, 108,6 (д, 1РС=22,6), 116,6, 124,4, 125,2 (д, 1РС=10,8), 127,3, 129,3, 136,9, 138,4, 147,7 (д, 1РС=10,4), 151,1, 152,1 (д, 1РС=246), 153,2, 153,9, 158,8, 160,8, 170,3; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.): -124,7; ЖХ-МС (т/ζ): 506,1 (М+Н, 100), ву = 2,73 мин.

(X) Восстановление нитрогруппы в полученных сочетанием промежуточных соединениях (согласно схеме 9).

Синтез 155 1 -(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3 -(4-хлор-3 -(трифторметил) фенил)мочевина

- 91 019974

Способ С4. Суспензию порошка железа (44 экв., 78 мг, 1,4 ммоль) и хлорида аммония (5,8 экв., 109 мг, 2 ммоль) в этаноле (400 мкл) и воде (438 мкл) кипятили с обратным холодильником. Добавляли по частям соединение 1-(4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3-(4-хлор-3-(трифторметил)фенил)мочевину (180 мг, 0,35 ммоль) и полученную смесь кипятили с обратным холодильником при перемешивании в течение 24 ч. После охлаждения до КТ суспензию смеси фильтровали и промывали этанолом. После удаления растворителя неочищенный порошок растворяли в ЕЮАс, фильтровали для удаления осадка и выпаривали, получая целевое соединение (100 мг, 59%) в виде густого темного масла.

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,41 (с, 3Н, СН₃), 5,61 (с, 2Н, ИН_2Ру), 6,06 (д, 1Н, Н_Ру, 1=5,6 Гц), 6,79 (д, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 7,01 (с, 1Н, Наром), 7,26 (д, 1Н, НРу, 1=5,6 Гц), 7,58-7,69 (м, 4Н, Наром), 8,12 (с, 2Н, Ж,Ру), 8,27 ( с, 1Н, Жочевина1), 10,02 ( с, 1Н, Жочевинаэ). ¹³С-ЯМР (ДМСЮ-Л·,), δ (м.д.), 1 (Гц): 15,6,

103.8, 115,6, 116,3, 117,6, 119,9, 122,5, 122,6, 124,9, 131,7, 131,9, 132,4, 134,7, 139,5, 139,6, 144,1, 147,0,

149.9, 152,3, 152,8. ЖХ-МС (т/ζ): 484 (М+Н, 100), ву=5,81 мин.

Синтез 156 1 -(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3 -(2-фтор-5 -(трифторметил) фенил)мочевина

Применяли способ С4 с 1-(4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевиной (664 мг, 1,3 ммоль), получая целевое соединение (120 мг, 19%) в виде темного порошка после очистки колоночной хроматографией на силикагеле (ЕЮАс, затем ЕЮАс-МеОН: 95-5) (К(=0,33, ЕЮАс-МеОН, 95:5).

^!Н-ЯМР (ДМСО-дб), δ (м.д.), 1 (Гц): 2,43 (с, 3Н, СН₃), 4,45 (с, 2Н, Жру), 5,57 (с, 2Н, Жру), 6,07 (д, 1Н, Нру, 1=5,6 Гц), 6,79 (дд, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц, 1=2,7 Гц), 7,01 (д, 1Н, Наром, 1=2,7 Гц), 7,27 (д, 1Н, Нру, 1=5,6 Гц), 7,37 (м, 1Н, Наром), 7,49 (м, 1Н, Наром), 7,67 (д, 1Н, Наром, 1=8,8 Гц), 8,57 (с, 1Н, Жочевина1), 8,62 (дд, 1Н, Наром, 1=7,3 Гц, 1=2,0 Гц), 9,43 ( с, 1Н, Ж_{мочевши3}). ¹³С-ЯМР (ДМСО-Д·,)· δ (м.д.), 1 (Гц): 15,4, 103,8, 115,4, 115,9, 116,0, 116,6, 117,3, 119,0, 119,8, 124,9, 128,6, 128,7, 131,3, 131,9, 135,5, 146,8, 150,2, 152,4, 152,5, 154,3. ЖХ-МС (т/ζ): 468 (М+Н, 100), ву=3,48 мин.

Синтез 157 1-(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил) мочевина

Р

Применяли способ С2 с 1-(4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевиной (500 мг, 1,08 ммоль), получая целевое соединение (450 мг, 95%) в виде желтого твердого вещества.

^!Н-ЯМР (ДМСО-Л₆), δ (м.д.), 1 (Гц):5,38 (уш, 2Н), 6,05 (д, 1Н, 1=5,9 Гц), 6,75-6,86 (м, 2Н), 7,21-7,33 (м, 4Н), 8,07 (дд, 1Н, 1=18,0, 9,7 Гц), 8,94 (уш, 1Н), 9,15 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 440 (М+Н, 100).

Синтез 158 1-(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2фторфенил)мочевина

- 92 019974

Применяли способ С2 с 1-(4-(2-амино-3-нитропиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3-(3-трет-бутил-1фенил-1Н-пиразол-5-ил)мочевиной (810 мг, 1,60 ммоль), получая целевое соединение в виде светлорозового твердого вещества (750 мг, выход 99%).

^!Н-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 1,28 (с, 9Н, трет-Ви), 4,45 (уш с, 2Н, ИН₂, 5,58 (уш с, 2Н, ИН₂), 6,06 (д, 1Н, 1=5,6, Нру), 6,38 (с, 1Н, Н,^, 6,78 (м, 1Н, Наром), 6,92 (м, 1Н, Наром), 7,26 (д, 1Н, 1=5,6, Нру), 7,41 (м, 1Н, Н_аром), 7,52 (м, 4Н, Н_аром), 7,98 (м, 1Н, Н_аром), 8,74 (с, 1Н, ИН), 8,82 (уш с, 1Н, ИН); ЖХ-МС (2,19 мин): т/ζ 476,2 (М+Н, 100).

(XI) Циклизация полученных сочетанием промежуточных соединений.

Синтез 159 1-(4-хлор-3-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2,3-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио)фенил)мочевина (АА-051)

Применяли способ Ό3 с 1-(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3-(4-хлор-3(трифторметил)фенил)мочевиной (65 мг, 0,1 ммоль), получая целевое соединение (9 мг, 12%) в виде бледно-белого порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСО-άβ), δ (м.д.), I (Гц): 2,46 (с, 3Н, СН3); 6,55 (д, 1Н, Нру 1=5,5 Гц), 7,03 (дд, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц, 1=2,5 Гц), 7,21 (д, 1Н, Наром, 1=2,6 Гц), 7,62 (м, 2Н, Наром), 7,83 (д, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 7,95 (д, 1Н, НРу, 1=5,0 Гц), 8,11 (м, 1Н, Наром), 8,22 (с, 1Н, ИН или СН), 9,81 (с, 1Н, ИН или СН), 11,89 (с, 1Н, ИН или СН), 12,38 (с, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 15,7, 106,2, 112,2, 116,5, 117,7, 119,6, 122,2, 122,7, 122,8, 124,1, 129,6, 131,6, 131,9, 133,4, 139,2, 140,4, 143,1, 150,1, 150,4, 152,4, 15,5, 155,8. ЖХ-МС (т/ζ): 538 (М+Н, 100), ву=4,98 мин.

Синтез 160 1-(4-(2,3-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-(метилтио)фенил)3-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-052)

н

Применяли способ Ό3 с 1-(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-(метилтио)фенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевиной (87 мг, 0,18 ммоль), получая целевое соединение (34 мг, 35%) в виде порошка.

^!Н-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 2,47 (с, 3Н, СН3), 6,56 (д, 1Н, Нру, 1=5,6 Гц), 7,02 (дд, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц, 1=1,7 Гц), 7,19 (д, 1Н, Наром, 1=1,7 Гц), 7,39 (м, 1Н, Наром), 7,50 (м, 1Н, Наром), 7,82 (д, 1Н, Наром, 1=8,7 Гц), 7,95 (дд, 1Н, Наром, 1=5,6 Гц, 1=0,9 Гц), 8,63 (д, 1Н, НРу, 1=6,7 Гц), 8,67 (с, 1Н, ИН), 9,52 (с, 1Н, ИН), 11,90 (с, 1Н, ИН), 12,39 (с, 1Н, ИН). ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 15,5, 106,2, 112,2, 115,9,

116,1, 116,7, 117,4, 119,2, 122,7, 124,6, 125,1, 128,6, 128,7, 131,9, 133,0, 140,4, 143,1, 150,3, 150,4, 152,4,

154,6, 155,8. ЖХ-МС (т/ζ): 522 (М+Н, 100), ву=4,82 мин.

Синтез 161 1-(4-(2-амино-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(4-хлор-3(трифторметил)фенил)мочевина (АА-021)

- 93 019974

Применяли способ Ό4 с 1-(4-хлор-3-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2,3-диаминопиридин-4илокси)фенил)мочевиной (50 мг, 0,12 ммоль), получая целевое соединение (10 мг, выход 17%) в виде белого твердого вещества.

Ή-ЯМР (СО₃ОБ), δ (м.д.), I (Гц): 8,03 (м, 2Н), 8,68-8,73 (м, 4Н), 8,94 (дд, 1Н, 1=8,8, 2,6 Гц), 9,58 (м, 2Н), 10,86 (уш, 1Н), 11,84 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 491,0 (М+Н, 100).

Синтез 162 1-(2-фтор-5-(трифторметил)фенил)-3-(4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенил)мочевина (АА-043)

Применяли способ Ό1 с 1-(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевиной, получая целевое соединение (выход 32%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,70 (д, 1Н, 1=5,4 Гц), 7,23 (д, 2Н, 1=9,6 Гц), 7,39 (м, 1Н), 7,50 (м, 1Н), 7,60 (д, 2Н, 1=9,6 Гц), 8,34 (д, 1Н, 1=5,4), 8,41 (с, 1Н), 8,61 (дд, 1Н, 1=7,4, 1,6 Гц), 12,52 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 492 (М+Н, 100).

Синтез 163 1-(4-(2-амино-3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-044)

Р

Применяли способ Ό4 с 1-(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевиной, получая 40 мг (25%) целевого соединения в виде белого твердого ве щества.

Ή-ЯМР (ДМСО), δ (м.д.), I (Гц): 6,57 (д, 1Н, 2Н, 1=5,6 Гц), 7,01 (дд, 1Н, 1=11,7, 2,8 Гц), 7,48-7,52 (м, 2Н), 8,10 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 8,15 (д, 1Н, 8,4 Гц), 8,60 (дд, 1Н, 1=8,4, 2,8 Гц), 9,34 (уш, 1Н), 9,5 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 493 (М+Н, 100).

Синтез 164 1-(4-(3-амино-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(2фтор-5-(трифторметил)фенил)мочевина (АА-022) р

Применяли способ Ό4 с 1-(4-(2,3-диаминопиридин-4-илокси)-2-фторфенил)-3-(2-фтор-5(трифторметил)фенил)мочевиной, получая целевое соединение (выход 38%).

Ή-ЯМР ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 6,56 (д, 1Н, 1=5,4 Гц), 7,02 (дд, 1Н, 1=9,2, 2,7 Гц), 7,24 (дд, 1Н, 1=11,3, 2,6 Гц), 7,47-7,52 (м, 2Н), 8,10 (д, 1Н, 5,4 Гц), 8,15 (м, 1Н), 8,61 (дд, 1Н, 1=7,3, 2,5 Гц), 9,35 (уш, 1Н), 9,50 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 493 (М+Н, 100).

Синтез 165 1-(3 -трет-бутил-1 -фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3 Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина и 1 -(3 -трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5 -ил)-3 -(2-фтор-4-(2-оксо1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-019 и АА-089)

- 94 019974

Применяли способ Ό1 с 1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2,3-диаминопиридин-4илокси)-2-фторфенил)мочевиной (730 мг, 1,54 ммоль), получая 1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5ил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевину в первой фракции (412 мг, 52%) и 1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевину во второй фракции (300 мг, 38%).

1-(3-трет-Бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8илокси)фенил)мочевина:

^!Н-ЯМР (ДМСО-йб), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,30 (с, 9Н, трет-Ви), 6,41 (с, 1Н, НП1!разол), 6,92 (д, 1Н, 1=5,4, Ну), 7,08 (м, 1Н, Наром), 7,31 (м, 1Н, Наром), 7,44 (м, 1Н, Наром), 7,55 (м, 4Н, Наром), 8,18 (м, 1Н, Наром), 8,37 (д, 1Н, 1=5,4, Ну), 8,43 (с, 1Н, Наром), 8,85 (с, 1Н, ИН), 9,01 (уш с, 1Н, ИН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-й6), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,2, 32,0, 95,1, 99,5, 108,6 (д, 1_РС=22,5), 116,5, 121,7, 124,4, 124,9 (д, 1_РС=10,8), 127,4, 129,3, 135,1,

136,9, 138,4, 139,5, 145,3 (уш), 148,4 (д, 1_РС=10,4), 149,7, 151,4, 152,2 (д, 1_РС=248), 160,8; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСОй₆), δ (м.д.): -124,7; ЖХ-МС (т/ζ): 514,1 (М+Н, 100), ву = 2,54 мин; МСВР (3,10 мин): т/ζ вычисл. для С₂7Н₂₅РИ₇Оз (М+Н, 100)⁺: 514,19974; найдено: 514,19856.

Синтез 166 1 -(4-(2-амино-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3 -(3 трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-057) и 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5ил)-3-(2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-085)

Применяли способ Ό4 с 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2,3-диаминопиридин-4илокси)-2-фторфенил)мочевиной (250 мг, 0,51 ммоль), получая после хроматографирования 1-(4-(2амино-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3 -(3 -трет-бутил-1 -п-толил-1Нпиразол-5-ил)мочевину (АА-057) (25 мг, выход 9%) и 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевину (АА-085) (15 мг, выход 6%).

-(4-(2-Амино-3 -оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3 -(3-трет-бутил-1 п-толил-1Н-пиразол-5 -ил)мочевина (АА-057):

^!Н-ЯМР (С1)_;О1И δ (м.д.), 1 (Гц): 1,36 (с, 9Н), 6,46 (с, 1Н), 6,65 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 6,97 (д, 1Н, 1=9,0 Гц), 7,04 (дд, 1Н, 1=9,0, 2,6 Гц), 7,41 (система АВ, 4Н), 8,05 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 8,11 (т, 1Н, 1=9,0 Гц), 8,79 (уш, 1Н), 9,00 (уш, 1Н), 11,24 (уш, 1Н), 12,26 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 544 (М+Н, 100).

1-(3-трет-Бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин8-илокси)фенил)мочевина (АА-085):

^!Н-ЯМР (ДМСО-йб), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,31-1,28 (м, 9Н), 3,33 (с, 3Н), 6,43 (с, 1Н), 6,66 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 7,05 (дд, 1Н, 1=8,1, 2,0 Гц), 7,31 (дд, 1Н, 1=11,8, 2,0 Гц), 7,45 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 7,85 (дд, 1Н, 1=8,0, 3,3 Гц), 8,15 (т, 1Н, 1=9,2 Гц), 8,18 (с, 1Н), 8,38 (д, 1Н, 1=6,0 Гц), 8,62 (д, 1Н, 1=3,3 Гц), 8,90 (с, 1Н), 8,98 (с, 1Н), 12,93 (уш, 1Н). ЖХ-МС: 544 (М+Н, 100). МСВР: т/ζ вычисл. для С₂₇Н₂₅РИ₈О (М+Н, 100): 543,2263; найдено: 543,2262.

Синтез 167 1-(4-(3-(бромметил)-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)3-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-058) и 1-(4-(2-(бромметил)-3-оксо-1,2,3,4тетрагидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3 -(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5ил)мочевина (АА-059)

- 95 019974

Способ Ό8. К раствору 1-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(4-(2,3-диаминопиридин-4илокси)-2-фторфенил)мочевины (300 мг, 0,61 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) добавляли за один прием этиловый эфир 3-бром-2-оксопропановой кислоты (390 мг, 2 ммоль). Полученную суспензию кипятили с обратным холодильником в течение 4 суток. Затем выпаривали растворитель и хроматографировали на приборе Вю1адс. получая 24 мг (выход 6%) 1-(4-(3-(бромметил)-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(3-трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевины и 13 мг (выход 4%) 1-(4-(2-(бромметил)-3-оксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(3трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевины.

I- (4-(3-(Бромметил)-2-оксо-1,2-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(3-третбутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-058):

Ή-ЯМР (С0₃0Б), δ (м.д.), I (Гц): 1,34 (с, 9Н), 2,42 (с, 3Н), 4,63 (с, 2Н), 6,46 (с, 1Н), 6,66 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 7,05 (1Н, дд, 1=9,0, 2,5 Гц), 7,13 (1Н, дд, 1=9,0, 2,5 Гц), 7,37-7,35 (АВ, 4Н), 8,16 (т, 1Н, 1=9,0), 8,34 (д, 1Н, 1=5,6 Гц); ЖХ-МС (т/ζ): 622-620 (М+Н, 100).

II- (4-(2-(Бромметил)-3-оксо-1,2,3,4-тетрагидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)-2-фторфенил)-3-(3трет-бутил-1-п-толил-1Н-пиразол-5-ил)мочевина (АА-059):

Ή-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.), I (Гц): 1,27 (с, 9Н), 2,08 (с, 3Н), 2,39 (с, 2Н), 6,92-6,90 (м, 2Н), 7,12 (м, 1Н), 7,13 (м, 1Н), 7,38-7,35 (4Н, АВ), 7,92 (1Н, д, 1=5,7 Гц), 8,09 (1Н, дд, 1=4,7, 5,0 Гц), 8,74 (1Н, с), 8,92 (1Н, уш); ЖХ-МС (т/ζ): 622-620 (М+Н, 100).

(XII) Синтез мочевин из активированных карбаматов и аминных промежуточных соединений.

Синтез 168 1-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(5-(трифторметил)пиридин-3 -ил)мочевина (АА-069)

Способ Р5. Навески 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-она (26 мг, 96 мкмоль) и проп-1-ен-2-ил-5-(трифторметил)пиридин-3-илкарбамата (45,8 мг, 186 мкмоль) помещали в круглодонную колбу объемом 10 мл, пропускали аргон и добавляли сухой ТГФ (3 мл). К полученной смеси добавляли Ν-метилпирролидин (1 капля) и кипятили указанную смесь с обратным холодильником в течение 48 ч. Выпаривали летучие вещества, вновь растворяли полученную смесь в МеОН (3 мл), выпаривали на силикагеле, помещенном в силикагелевую колонку, и очищали при помощи градиента 0-20% МеОН в ЕЮАс. Выход: 5 мг (11%).

Ή-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), I (Гц): 6,66 (д, 1=5,6, 1Н, Нру), 7,08 (м, 1Н, Наром), 7,35 (м, 1Н, Наром), 8,13 (м, 1Н, Наром), 8,18 (с, 1Н, Наром), 8,38 (д, 1=5,6, 1Н, Нру), 8,46 (с, 1Н, Наром), 8,59 (с, 1Н, Наром), 8,77 (с, 1Н, Н_аром), 8,96 (с, 1Н, ΝΗ), 9,67 (с, 1Н, ΝΗ), 12,95 (с, 1Н, ΝΗ); ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-'₆), δ (м.д.): -60,6, -123,7; ЖХ-МС (т/ζ): ЖХ-МС: 461,1 (М+Н, 100), ву = 2,44 мин; МСВР (7,17 мин): т/ζ вычисл. для С₂₀Н₁₃Р₄Ы₆О₃[М+Н⁺]: 461,09798; найдено: 461,09771.

Синтез 169 проп-1-ен-2-ил-5-(трифторметил)пиридин-3-илкарбамат

5-(Трифторметил)пиридин-3-амин (883 мг, 5,45 ммоль) суспендировали в сухом ТГФ (20 мл) и добавляли Ν-метилпирролидин (680 мкл, 6,54 ммоль), получая коричневую суспензию. Полученную смесь охлаждали до 0°С и добавляли по каплям изопропенилхлорформиат (715 мкл, 6,54 ммоль) в течение 15 мин. Оставляли суспензию нагреваться до КТ и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли ЕЮАс (60 мл) и Н₂О (10 мл), отделяли органический слой, промывали 50% раствором соли (10 мл), высушивали (Мд§0₄), фильтровали и упаривали до получения коричневого масла, затвердевавшего при стоянии (1,05

- 96 019974

г). Полученное твердое вещество помещали в СН2С12 (4 мл) и очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя Е(ОАе в СН₂С1₂ (6% 40%), с получением белого твердого вещества. Выход: 600 мг (45%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,96 (с, 3Н, СН₃), 4,78 (м, 1Н, СН), 4,80 (м, 1Н, СН), 8,27 (уш, 1Н, Н_аром), 8,62 (уш, 1Н, Н_аром), 8,86 (д, 1=5,5, 1Н, Н_Ру), 10,54 (с, 1Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 19,3, 102,1, 121,2, 123,5 (кв, 1РС=272), 125,1 (кв, 1РС=31), 135,8, 139,8 (кв, ЭРС=3,8), 143,7, 151,3, 152,2; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.): -61,2; ЖХ-МС (т/ζ): т/ζ 247,0 (М+Н, 100), ву = 4,49 мин.

Синтез 170 фенил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамат

Сухой пиридин (125 мкл, 1,55 ммоль) добавляли к суспензии 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо [2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-она (307 мг, 1,13 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл) в атмосфере аргона и охлаждали полученную смесь до 0°С. Добавляли по каплям в течение 5 мин фенилхлорформиат (170 мкл, 1,35 ммоль) и полученную светло-коричневую смесь перемешивали при 0°С еще в течение 5 мин, после чего указанную смесь оставляли нагреваться до КТ и перемешивали в течение 150 мин. Полученную коричневатую смесь упаривали досуха и разбавляли полученный остаток ЕЮЛе (60 мл) и Н₂О (30 мл). Отделяли органический слой, фильтровали (80 мг неочищенного продукта) и промывали фильтрат насыщенным водным раствором ЛаНСО3 и раствором соли. Органический слой выпаривали досуха, вновь растворяли в СН₂С1₂ и хроматографировали на колонке Вю1аде 25+М, элюируя 20% 100% Е(ОАе в СН₂С1₂, с получением целевого соединения в виде белого твердого вещества. Выход: 280 мг (81%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,71 (д, 1=5,6, 1Н, Н_Ру), 7,09 (м, 1Н, Н_аром), 7,23 (д, 1=7,9, 2Н, Н_аром), 7,26 (т, 1=7,9, 1Н, Наром), 7,33 (м, 1Н, Наром), 7,43 (д, 1=7,9, 2Н, Наром), 7,75 (м, 1Н, Наром), 8,18 (с, 1Н, Н_аром), 8,39 (д, 1=5,6, 1Н, Н_Ру), 10,06 (с, 1Н, ЛН_Вос), 12,97 (с, 1Н, ЛН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц):

107,1, 108,6 (д, 1_РС=22,9), 116,1 (д, Э_РС=3,3), 118,6, 121,8, 122,9 (д, 1_РС=12,0), 125,5, 125,6 (уш), 129,4, 145,6,

150,6, 151,3, 151,4 (уш), 152,3, 152,4, 154,8 (д, 1_РС=245), 156,4, 160,0; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.): -119,2; ЖХ-МС (т/ζ): 393,1 (М+Н, 100), ву = 2,44 мин.

Синтез 171 1-(2-нитро-4-(трифторметил)фенил)-1Н-имидазол

Смесь имидазола (0,997 г, 14,65 ммоль) и трет-ВиОК (1,722 г, 15,35 ммоль) помещали в колбу объемом 100 мл в атмосфере Аг и растворяли в сухом ДМСО (15 мл), получая бесцветный раствор. Через 5 мин добавляли в течение 30 с 1-фтор-2-нитро-4-(трифторметил)бензол (2,04 мл, 14,58 ммоль), при этом реакционная смесь немедленно темнела до черного цвета. Также было отмечено повышение температуры. Полученный черный раствор перемешивали при КТ в течение 20 мин. Добавляли ледяную воду (60 мл) и ЕЮАе (50 мл), отделяли органический слой и экстрагировали водную фазу дважды по 20 мл ЕЮАе. Органический слой промывали Н₂О (2x30 мл), раствором соли, высушивали, фильтровали и выпаривали, получая целевое соединение в виде оранжевого масла. Выход: 3,66 г (97%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 7,14 (с, 1Н, Наром), 7,49 (с, 1Н, Наром), 7,97 (д, 1=8,4, 1Н, Наром), 7,99 (с, 1Н, Наром), 8,28 (д, 1=8,4, 1Н, Наром), 8,59 (с, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 120,4, 122,7 (д, 1РС=274), 122,9, 129,5 (д, ЭРС=34), 129,9, 130,0, 130,9, 133,4, 137,4, 144,5; ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.): -60,8; ЖХ-МС (т/ζ): 258,1 (М+Н, 100), ву = 1,37 мин.

Синтез 172 2-(1Н-пиразол-1-ил)-5-(трифторметил)анилин

Применяли способ С3 с 1-(2-нитро-4-(трифторметил)фенил)-1Н-пиразолом (1,80 г, 7,00 ммоль) в ЕЮН (40 мл), получая 760 мг (48%) целевого соединения в виде белых кристаллов после перекристаллизации из гексана.

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,12 (с, 2Н, ЛН₂), 6,56 (ν!, 1=2,1, 1Н, Наром), 6,95 (дд, 1=8,3, ⁴1РН=1,7, 1Н, Наром), 7,24 (д, ⁴1рн=1,7, 1Н, Наром), 7,48 (д, 1=8,3, 1Н, Наром), 7,82 (д, 1=1,8, 1Н, Наром), 8,23 (д, 1=2,5, 1Н, Наром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 106,9, 112,1, 112,9, 124,1 (д, 1_РС=273), 124,2, 127,4,

- 97 019974

128,3 (д, 4р_С=31,7), 130,6, 140,5, 142,1; ¹⁹Е-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.):-60,8.

Синтез 173 3-(2-нитро-4-(трифторметил)фенокси)пиридин

Коричневый раствор 1-фтор-2-нитро-4-(трифторметил)бензола (2,01 г, 9,61 ммоль) и 3гидроксипиридина (0,923 г, 9,71 ммоль) в сухом ДМФА (15 мл) в атмосфере Аг обрабатывали карбонатом цезия (3,28 г, 10,07 ммоль) за один прием и перемешивали полученную коричневую смесь при КТ в течение 2 ч. Добавляли Н₂О (50 мл) и ЕЮАс (50 мл) и отделяли органический слой. Водный слой экстрагировали ЕЮАс (2x30 мл). Объединенные органические слои промывали Н₂О (3x40 мл), раствором соли (40 мл), высушивали (Мд§О₄), фильтровали и упаривали досуха, получая светло-желтое твердое вещество. Выход: 2,62 г (96%).

Ή-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), I (Гц): 7,33 (д, 1=8,7, 1Н, Наром), 7,53 (м, 1Н, Наром), 7,71 (м, 1Н, Наром), 8,04 (дд, 1=8,9, ⁴1РН=2,3, 1Н, Наром), 8,49 (д, Х.2.2. 1Н, Наром), 8,52 (м, 1Н, Наром), 8,55 (д, 1=2,9, 1Н, Нарон); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), I (Гц): 120,7, 122,9 (д, 1_РС=274), 123,4, 124,3 (д, 1_РС=33,9), 125,0, 127,2,

131,7, 140,6, 141,6, 146,6, 151,3, 152,1; ¹⁹Е-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -60,4; ЖХ-МС (т/ζ): 285,0 (М+Н, 100), ву = 2,40 мин.

Синтез 174 2-(пиридин-3-илокси)-5-(трифторметил)анилин

Применяли способ С3 с 3-(2-нитро-4-(трифторметил)фенокси)пиридином (594 мг, 2,090 ммоль), получая целевое соединение в виде белого кристаллического твердого вещества. Выход: 501 мг (94%).

Ή-ЯМР (ДМСОО, δ (м.д.), I (Гц): 5,55 (с, 2Н, N1), 6,83 (д, 1=8,2, 1Н, Наром), 6,94 (д, 1=8,2, 1Н, Наром), 7,13 (с, 1Н, Наром), 7,33 (м, 1Н, Наром), 7,39 (м, 1Н, Наром), 8,33 (м, 1Н, Наром), 8,37 (м, 1Н, Наром); ¹³СЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), I (Гц): 111,7, 112,5, 119,7, 124,3 (д, 1_РС=274), 124,4, 124,5, 125,8 (д, 1_РС=33,9),

140,2, 141,0, 144,0, 144,1, 153,0; ¹⁹Е-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -60,3; ЖХ-МС т/ζ: 255,0 (М+Н, 100), ву = 2,26 мин.

Синтез 175 фенил-2-(пиридин-3-илокси)-5-(трифторметил)фенилкарбамат

Желтый раствор 2-(пиридин-3-илокси)-5-(трифторметил)анилина (263 мг, 1,035 ммоль) и пиридина (108 мкл, 1,341 ммоль) в сухом ТГФ (8 мл) обрабатывали по каплям фенилхлорформиатом (156 мкл, 1,242 ммоль) в течение 5 мин при 0°С. Полученную желтую суспензию перемешивали при 0°С еще в течение 5 мин, оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Полученную желтую суспензию фильтровали через хлопок, промывали ЕьО и разбавляли ЕЮАс. Полученный желтый раствор промывали насыщ. водным раствором №1НСО₃ (30 мл) и Н₂О (30 мл), высушивали и упаривали досуха, получая желтое масло. Очистка на колонке приводила к получению желтокоричневого твердого вещества. Выход: 300 мг (77%).

Ή-ЯМР (ДМСО-Й6), δ (м.д.), I (Гц): 6,90 (д, 1=8,5, 1Н, Наром), 7,23 (м, 2Н, Наром), 7,30 (м, 2Н, Наром), 7,42 (м, 4Н, Н_аром), 7,76 (уш с, 1Н, Н_аром), 8,55 (м, 1Н, Н_аром), 8,64 (уш с, 1Н, ΝΗ); ЖХ-МС (т/ζ): 375,0 (М+Н, 100), ву = 2,62 мин.

Синтез 176 1-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)-3-(2-(пиридин3 -илокси) -5 -(трифторметил) фенил)мочевина (АА-093)

- 98 019974

Применяли способ Р2 с 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (30,6 мг, 0,112 ммоль) и 60,6М раствором фенил-2-(пиридин-3-илокси)-5-(трифторметил)фенилкарбамата (1,6 мл, 0,097 ммоль). Через 40 ч полученную смесь выпаривали на силикагеле и помещали на колонку Вю!аде 12+М, которую элюировали 40-100% Е!ОАс в ДХМ. Выход: 4 мг (7%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,64 (д, 1=5,6, 1Н, НРу), 7,02 (д, 1=8,5, 1Н, Наром), 7,07 (м, 1Н, Наром), 7,32 (м, 2Н, Наром), 7,53 (м, 1Н, Наром), 7,65 (м, 1Н, Наром), 8,15 (с, 1Н, Наром), 8,26 (м, 1Н, Наром), 8,38 (д, 1=5,6, 1Н, Наром), 8,50 (м, 1Н, Наром), 8,58 (д, 1=2,8, 1Н, Наром), 8,74 (д, 1=2,8, 1Н, Наром), 9,36 (с, 1Н, ИН), 9,39 (с, 1Н, ИН), 12,88 (с, 1Н, ИН); ЖХ-МС (т/ζ): 553,1 (М+Н, 100), ву = 2,63 мин; МСВР (3,22 мин): т/ζ вычисл. для С₂₆Н₁₆Р₄И₆О₄ (М+Н, 100)⁺: 553,12419; найдено: 553,12312.

Синтез 177 1-(2-(1Н-пиразол-1-ил)-5-(трифторметил)фенил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо [2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-094)

Способ Р4. Смесь фенил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамата (36,3 мг, 0,093 ммоль) и 2-(1Н-имидазол-1-ил)-5-(трифторметил)анилина (21,1 мг, 0,093 ммоль) растворяли в сухом ДМСО (250 мкл) и перемешивали полученный оранжевый раствор при 60°С в течение 7 ч. Полученный раствор разбавляли Н2О, экстрагировали Е!ОАс, органический слой высушивали и упаривали досуха. После колонки (ДХМ/Е!ОАс) полученное масло растирали с Е!ОАс и собирали полученное белое твердое вещество. Выход: 11 мг (23%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): 6,67 (м, 2Н, Наром), 7,07 (м, 1Н, Наром), 7,31 (м, 1Н, Наром), 7,53 (м, 1Н, Наром), 7,69 (м, 1Н, Наром), 7,93 (с, 1Н, Наром), 8,04 (м, 1Н, Наром), 8,19 (с, 1Н, Наром), 8,35 (м, 1Н, Наром), 8,39 (м, 1Н, Наром), 8,59 (с, 1Н, Наром), 9,40 (с, 1Н, Наром), 9,52 (с, 1Н, Наром), 12,93 (с, 1Н, Наром); ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -60,3, -122,1; ЖХ-МС (т/ζ): 526,1 (М+Н, 100), ву = 2,54 мин; МСВР (3,10 мин): т/ζ вычисл. для С₂₄Н1₅Р₄И₇О₃ (М+Н, 100)⁺: 526,12453; найдено: 526,12498.

Синтез 178 1-(3 -трет-бутил-1 -(6-метилпиридин-3 -ил)-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-084)

Применяли способ Р4 с 65 мг (0,17 ммоль) фенил-2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидропиридо[2,3Ь]пиразин-8-илокси)фенилкарбамата и 45 мг (0,2 ммоль) 3-трет-бутил-1-(6-метилпиридин-3-ил)-1Нпиразол-5-амина (Ведап, 1. е! а1., 1. Меб. СИет. 2002, 45, 2994-3008). Получали 15 мг, выход 17%, целевого соединения.

Ή-ЯМР (САО1})- δ (м.д.), 1 (Гц): 1,31-1,28 (м, 9Н), 3,33 (с, 3Н), 6,43 (с, 1Н), 6,66 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 7,05 (дд, 1Н, 1=8,1, 2,0 Гц), 7,31 (дд, 1Н, 1=11,8, 2,0 Гц), 7,45 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 7,85 (дд, 1Н, 1=8,0, 3,3 Гц), 8,15 (т, 1Н, 1=9,2 Гц), 8,18 (с, 1Н), 8,38 (д, 1Н, 1=6,0 Гц), 8,62 (д, 1Н, 1=3,3 Гц), 8,90 (с, 1Н), 8,98 (с, 1Н), 12,93 (уш, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ): 529,12 (М+Н, 100). МСВР: т/ζ вычисл. для С₂₇Н₂₅РИ₈О (М+Н, 100): 529,2106; найдено: 529,2095.

(XI) Образование мочевин через перегруппировку Курциуса.

Синтез 179 Этил-3-трет-бутил-1-(циклопропилметил)-1Н-пиразол-5-карбоксилат

Способ I. Смесь 3-трет-бутил-1Н-пиразол-5-карбоксилата (993 мг, 5,06 ммоль) и карбоната цезия (2,71 г, 8,32 ммоль) в сухом ДМФА (10 мл) в атмосфере Аг обрабатывали по каплям в течение 15 мин бромметилциклопропаном (500 мкл, 5,16 ммоль) при 0°С. Затем полученную смесь оставляли нагреваться до КТ и перемешивали в течение 5 ч. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали Е!₂О.

- 99 019974

Объединенные органические фракции промывали Н₂О, высушивали (Мд§О₄), фильтровали и выпаривали, получая остаток, который вслед за этим пропускали через колонку, элюент: 40 100% СН₂С1₂ в гексане. Выход: 1,10 г (87%) бесцветного масла. Время реакции составляло 5 ч.

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 0,32 (м, 2Н, N..... рои ) 0,44 (м, 2Н, N..... р1,25 (м, 10Н, трет-Ви + Нциклопропил), 1,29 (т, 1=7,1, 3Н, СНз), 4,28 (м, 4Н, Νί.Ή_; + ОСЫ), 6,71 (с, 1Н, Н_аром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,2, 11,7, 14,0, 30,2, 31,6, 54,8, 60,6, 107,1, 131,4, 159,3, 159,4; ЖХ-МС (т/ζ): 251,1 (М+Н, 100), ву = 2,92 мин.

Синтез 180 этил-3 -трет-бутил-1 -(метоксиметил)-1Н-пиразол-5-карбоксилат

Применяли способ I с этил-3-трет-бутил-1Н-пиразол-5-карбоксилатом (1078 мг, 5,49 ммоль), карбонатом цезия (2,89 г, 8,87 ммоль) и хлор(метокси)метаном (426 мкл, 5,60 ммоль). Время реакции 16 ч. Элюент в колонке: 0^ 10% Е!ОАс в СН₂С1₂. Выход: 485 мг (37%) бесцветного масла.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1.26 (с, 9Н, трет-Ви), 1,30 (т, 3Н, 1=7,1, СН₃), 3,22 (с, 3Н, ОСН₃), 4,29 (кв, 2Н, 1=7,1, ОСН₂Н₃), 5,64 (с, 2Н, ОСН₂Ы), 6,69 (с, 1Н, Н_аром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 14,0, 30,0, 31,7, 56,0, 60,8, 80,0, 108,7, 132,7, 158,9, 160,5; ЖХ-МС (т/ζ): 241,1 (М+Н, 100), ву = 2,67 мин.

Синтез 181 этил-3 -трет-бутил-1 -(циклобутилметил) -1Н-пиразол-5 -карбоксилат

Применяли способ I с этил-3-трет-бутил-1Н-пиразол-5-карбоксилатом (1085 мг, 5,53 ммоль), карбонатом цезия (2,89 г, 8,87 ммоль) и (бромметил)циклобутаном (634 мкл, 5,64 ммоль). Время реакции составляло 16 ч. Элюент в колонке: 40 100% СН₂С1₂ в гексане. Выход: 0,98 г (67%) бесцветного масла.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,23 (с, 9Н, трет-Ви), 1,29 (т, 3Н, 1=7,1, СН₃), 1,76 (м, 4Н, СН₂), 1,89 (м, 2Н, СН₂), 2,69 (септ, 1Н, 1=7,1, СН), 4,27 (кв, 2Н, 1=7,1, ОСН₂СН₃), 4,45 (д, 2Н, 1=7,1, ЫСН₂, 6,69 (с, 1Н, Н_аром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 14,0, 17,7, 24,9, 30,2, 31,6, 35,7, 54,9, 60,5, 106,9, 131,6,

159,3 (два совпадающих пика); ЖХ-МС (т/ζ): 265,1 (М+Н, 100), ву = 3,06 мин.

Синтез 182 этил-3 -трет-бутил-1 -(2-(диметиламино)этил) -1Н-пиразол-5 -карбоксилат

Применяли способ I с этил-3-трет-бутил-1Н-пиразол-5-карбоксилатом (124 мг, 0,632 ммоль), карбонатом цезия (624 мг, 1,915 ммоль) и 2-хлор-Ы,Х-диэтиламина гидрохлоридом (96,8 мг, 0,672 ммоль). Время реакции составляло 48 ч. Элюент в колонке: 50^ 100% Е!ОАс в СН₂С1₂, после этого 0^ 10% МеОН в Е!ОАс. Выход: 103 мг (61%) бесцветного масла.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,25 (с, 9Н, трет-Ви), 1,31 (т, 3Н, 1=7,1, СН₃), 2,15 (с, 6Н, Ы(СН₃)₂), 2,60 (т, 2Н, 1=6,9, СН₂СН₂КМе₂), 4,29 (кв, 2Н, 1=7,1, ОСН₂СН₃), 4,51 (т, 2Н, 1=6,9, СН₂СН₂КМе₂), 6,70 (с, 1Н, Н_аром); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 14,1, 30,2, 31,6, 45,1, 48,8, 58,7, 60,6, 107,0, 132,1, 159,2, 159,6; ЖХ-МС (т/ζ): 268,2 (М+Н, 100), 1,89 мин.

Синтез 183 3-трет-бутил-1-(циклопропилметил)-1Н-пиразол-5-карбоновая кислота

Способ 1. Этил-3-трет-бутил-1-(циклопропилметил)-1Н-пиразол-5-карбоксилат (1,1 г, 4,39 ммоль) растворяли в смеси 4:1:1 ТГФ/МеОН/Н₂О (всего 25 мл), добавляли моногидрат гидроксида лития (200

- 100 019974 мг, 4,7 ммоль) и перемешивали полученную бесцветную смесь в течение 16 ч при КТ. Вслед за этим выпаривали все летучие вещества, растворяли полученный остаток в Н2О и доводили рН полученного раствора до 1 при помощи 10% водного раствора НС1. Полученную смесь молочного цвета экстрагировали ЕЮАс и промывали объединенные органические фракции раствором соли, высушивали и упаривали досуха, получая белое кристаллическое твердое вещество. Выход: 0,82 г (84%).

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 0,32 (м, 2Н, Нцикпопропил), 0,42 (м, 2Н, Нцикпопропил), 1,24 (м, 10Н, трет-Ви + Нцикпопропил), 4,29 (д, 2Н, 6=7,0, 4(61.6- 6,66 (с, 1Н, Наром), 13,10 (уш с, 1Н, СООН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 3,2, 11,8, 30,2, 31,6, 54,6, 107,1, 132,3, 159,2, 160,8; ЖХ-МС (т/ζ): 223,1 (М+Н, 100), ву = 2,57 мин.

Синтез 184 3-трет-бутил-1-(метоксиметил)-1Н-пиразол-5-карбоновая кислота

Применяли способ 1 с этил-3-трет-бутил-1-(метоксиметил)-1Н-пиразол-5-карбоксилатом (485 мг, 2,02 ммоль) в качестве исходного вещества. Выход: 413 мг (96%) белого кристаллического твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,25 (с, 9Н, трет-Ви), 3,21 (с, 3Н, ОСН₃), 5,64 (с, 2Н, ОСН₂Ы), 6,79 (с, 1Н, Н_аром), 13,30 (уш с, 1Н, СООН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,1, 31,6, 56,0, 79,7,

108,7, 133,8, 160,3, 160,4; ЖХ-МС (т/ζ): 213,1 (М+Н, 100), ву = 2,31 мин.

Синтез 185 3-трет-бутил-1-(циклобутилметил)-1Н-пиразол-5-карбоновая кислота

Применяли способ 1 с этил-3-трет-бутил-1-(циклобутилметил)-1Н-пиразол-5-карбоксилатом (0,98 г, 3,71 ммоль) в качестве исходного вещества. Выход: 842 мг (95%) белого кристаллического твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,23 (с, 9Н, трет-Ви), 1,76 (м, 4Н, СН₂), 1,89 (м, 2Н, СН₂), 2,69 (септ, 1Н, 1=7,1, ОН), 4,27 (кв, 2Н, 1=7,1, ОСН₂СН₃), 4,45 (д, 2Н, 1=7,1, ЫСН₂), 6,64 (с, 1Н, Н_аром), 13,07 (уш с, 1Н, СООН); ¹³С-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 17,7, 24,9, 30,2, 31,5, 35,8, 54,7, 106,9, 132,6,

159,1, 160,8; ЖХ-МС (т/ζ): 237,1 (М+Н, 100), ву = 2,74 мин.

Синтез 186 2-(3-трет-бутил-5-карбокси-1Н-пиразол-1-ил)-М,М-диметилэтанаминий хлорид

Этил-3-трет-бутил-1-(2-(диметиламино)этил)-1Н-пиразол-5-карбоксилат (98 мг, 0,367 ммоль) растворяли в 6М водном растворе НС1 (4 мл, 24,00 ммоль) и нагревали полученный бесцветный раствор при 80°С в течение 72 ч. Выпаривали в вакууме все летучие вещества, и полученное белое твердое вещество выпаривали совместно с ЕьО (10 мл), получая целевое соединение в виде белого твердого вещества. Выход: 100 мг (99%).

Ή-ЯМР (ДМСО-6₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,26 (с, 9Н, трет-Ви, 2,78 (д, 6Н, 1=4,8, СН₂СН₂Ж(СН₃)₂), 3,50 (кв, 2Н, 1=5,3, СН₂СН₂ИМе₂), 4,82 (т, 2Н, 1=6,6, СН₂СН₂ИМе₂), 6,78 (с, 1Н, Н_аром), 10,66 (уш с, 1Н, СООН); ЖХ-МС (т/ζ): 240,2 (М+Н, 100), ву = 1,56 мин.

Синтез 187 1 -(3 -трет-бутил-1 -(циклопропилметил)-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-097)

- 101 019974

Способ Р5. 3-трет-Бутил-1-(циклопропилметил)-1Н-пиразол-5-карбоновую кислоту (51 мг, 0,229 ммоль) помещали в атмосферу Аг и последовательно добавляли сухой триэтиламин (30 мкл, 0,23 ммоль) и сухой ДМФА (дифенилфосфорилазид) (1 мл), полученную смесь охлаждали до 0°С, добавляли за один прием ДФФА (1 экв.) и перемешивали полученный раствор при 0°С еще в течение 30 мин, а затем при КТ в течение 1 ч. Затем добавляли за один прием 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин3(4Н)-он (31,9 мг, 0,117 ммоль) и нагревали полученный раствор при 100°С в течение 45 мин. Полученный желтый раствор последовательно охлаждали до КТ и разбавляли ΕΐΟΑс. Органический слой промывали Н₂О, 0,1 М лимонной кислотой, насыщенным водным раствором ЫаНСО₃, раствором соли, высушивали и упаривали досуха, получая желтое твердое вещество. Добавляли Εΐ₂Ο, воздействовали на полученную смесь ультразвуком в течение 10 мин и оставляли на некоторое время. Образовавшийся осадок отфильтровывали и промывали Εΐ₂Ο, получая целевую мочевину. Выход: 35 мг (62%) белого твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-66), δ (м.д.), 1 (Гц): 0,35 (м, 2Н, 11.. . ... .. ), 0,47 (м, 2Н, 11.. . ... .. ), 1,24 (м, 10Н, трет-Ви + Н^проиХ 3,84 (д, 2Н, 1=6,7, ЫСН,), 6,12 (с, 1Н, Н_Шразол), 6,66 (д, 1=5,6, 1Н, НРу), 7,07 (м, 1Н, Наром), 7,34 (м, 1Н, Наром), 8,20 (м, 2Н, Наром), 8,38 (д, 1=5,6, 1Н, НРу), 8,80 (уш с, 1Н, ΝΉ), 8,85 (уш с, 1Н, ΝΉ), 12,93 (уш с, 1Н, ΝΉ); ¹⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -125,0; ЖХ-МС (т/ζ): 492,1 (М+Н, 100), 2,54 мин; МСВР (3,10 мин): т/ζ вычисл. для С₂₅Н₂₇РИ₇О₃ (М+Н, 100)⁺: 492,21539; найдено: 492,21664.

Синтез 188 1-(3-трет-бутил-1-(метоксиметил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-дигидро-

Применяли способ Р5 с 3-трет-бутил-1-(метоксиметил)-1Н-пиразол-5-карбоновой кислотой (49,5 мг, 0,233 ммоль) и 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (31,9 мг, 0,117 ммоль). Выход: 45 мг (80%) белого твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,24 (с, 9Н, трет-Ви), 3,25 (с, 3Н, ОСН₃), 5,28 (с, 2Н, ОСН₂И), 6,26 (с, 1Н, Наром), 6,67 (д, 1=5,6, 1Н, НРу), 7,07 (м, 1Н, Наром), 7,34 (м, 1Н, Наром), 8,22 (м, 2Н, Наром), 8,38 (д, 1=5,6, 1Н, Н_Ру), 9,01 (уш с, 1Н, ΝΉ), 9,11 (уш с, 1Н, ИН), 12,93 (уш с, 1Н, ΝΉ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,1, 31,8, 55,7, 77,5, 93,1, 106,5, 108,5 (д, 1_РС=22,9), 116,5 (д, 1_РС=3,3), 118,4, 121,5, 124,9 (д, 1_РС=12,0), 137,6, 145,5, 148,5 (д, 1_РС=10,4), 150,9, 151,2, 152,2, 152,3 (д, 1_РС=245), 156,5, 159,9, 160,5; ЖХ-МС (т/ζ): 482,1 (М+Н, 100), 2,48 мин; МСВР (3,05 мин): т/ζ вычисл. для С₂₃Н₂₄РЫ₇МаО₄ [М+Иа]⁺: 504,17660; найдено: 504,17641.

Синтез 189 1-(3-трет-бутил-1-(циклобутилметил)-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-фтор-4-(3-оксо-3,4-

Применяли способ Р5 с 3-трет-бутил-1-(циклобутилметил)-1Н-пиразол-5-карбоновой кислотой (78,5 мг, 0,332 ммоль) и 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (41мг, 0,151 ммоль). Выход: 50 мг (60%) белого твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,22 (с, 9Н, трет-Ви), 1,82 (м, 4Н, СН₂), 1,98 (м, 2Н, СН₂), 2,72 (септ, 1Н, 1=7,1, СН), 3,96 (д, 2Н, 1=7,1, ИСН₂), 6,11 (с, 1Н, Н_аром), 6,66 (д, 1=5,6, 1Н, Н_Ру), 7,07 (м, 1Н, Н_аром), 7,33 (м, 1Н, Наром), 8,21 (м, 2Н, Наром), 8,38 (д, 1=5,6, 1Н, НРу), 8,79 (уш с, 1Н, ΝΉ), 8,83 (уш с, 1Н, ΝΉ), 12,93 (уш с, 1Н, ΝΉ); ¹³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 16,4, 23,9, 29,0, 30,4, 33,7, 50,5, 91,7,

- 102 019974

105,2, 107,1 (д, 1_РС=22,4), 115,2, 117,0, 120,2, 123,7 (д, 1_РС=10,7), 134,8, 144,2, 147,1 (д, 1_РС=10,3), 149,8, 150,0, 150,8, 150,9 (д, 1_РС=245), 155,1, 157,3, 159,2; ЖХ-МС (т/ζ): 507,1 (М+Н, 100), 2,65 мин; МСВР (3,24 мин): т/ζ вычисл. для С₂₆Η₂₈РN7NаО₃ [М+Ыа]⁺: 528,21299; найдено: 528,21311.

Синтез 190 1 -(3 -трет-бутил-1 -(2-(диметиламино)этил)-1Н-пиразол-5-ил)-3 -(2-фтор-4-(3 -оксо-3,4дигидропиридо[2,3-Ь]пиразин-8-илокси)фенил)мочевина (АА-100)

Применяли способ Р5 с 3-трет-бутил-1-(2-(диметиламино)этил)-1Н-пиразол-5-карбоновой кислоты гидрохлоридом (89 мг, 0,323 ммоль) и 8-(4-амино-3-фторфенокси)пиридо[2,3-Ь]пиразин-3(4Н)-оном (41 мг, 0,151 ммоль). Использовали 2 экв. триэтиламина и не проводили промывку лимонной кислотой. Выход: 34 мг (41%) оранжевого твердого вещества.

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 1,21 (с, 9Н, трет-Ви), 2,24 (с, 6Н, СН₂СН₂Ы(СН₃)₂), 2,68 (т, 2Н, 1=6,8, СН₂СН₂ХМе₂), 4,04 (т, 2Н, 1=6,8, СНдаМеЖ 6,10 (с, 1Н, Н^, 6,64 (д, 1=5,6, 1Н, Н_Руг), 7,06 (м, 1Н, Наром), 7,33 (м, 1Н, Наром), 8,16 (м, 2Н, Наром), 8,37 (д, 1=5,6, 1Н, Нгу), 8,89 (уш с, 1Н, ЦН), 9,05 (уш с, 1Н, ЯН), 12,92 (уш с, 1Н, ЫН); '³С-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): 30,3, 31,8, 45,0, 45,5, 57,8, 93,7, 106,5, 108,5 (д, 1_РС=22,4), 116,4, 118,4, 122,1, 124,9 (д, 1_РС=10,7), 136,6, 145,5, 148,7 (д, 1_РС=10,3), 151,2, 151,6,

152,2, 152,5 (д, 1_РС=245), 156,5, 159,0, 160,5; '⁹Р-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.): -124,5; ЖХ-МС (1,90 мин): т/ζ 509,1 (М+Н, 100); МСВР (3,24 мин): т/ζ вычисл. для С₂₅Н₃₀РН₈О₃ (М+Н, 100)⁺: 509,24194; найдено: 509,24249.

Синтез 191 5-[(4-амино-2-фторфенилокси)карбониламино-5-(1-К-аллил-3-т-бутилимидазолил)] пи-

Применяли способ Р2 с 34 мг (0,13 ммоль) 5-(4-амино-2-фторфенилокси)пиридин-[2,3]-пиразин-2она и 0,26 ммоль 1-Н-аллил-3-трет-бутилимидазолил-5-изоцианатом, получая 38 мг (выход 42%) целевого продукта.

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆), δ (м.д.), 1 (Гц): δ 4,59 (д, 2Н, 1=2,5 Гц), 4,90 (д, 1Н, 1=18,6 Гц), 5,15 (д, 1Н, 1 =

10,3 Гц), 5,92-6,00 (м, 1Н), 6,15 (с, 1НХ 6,64 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 7,05 (д, 1Н, 1=8,6 Гц), 7,34 (д, 2Н, 1=11,7 Гц), 8,18 (с, 1Н . . ) 8,20 (т, 1Н, 1=9,1 Гц), 8,37 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 8,81 (с, 1Н, ЯН), 8,86 (с, 1Н, ЯН), 12,95 (с, 1Н, КН). ЖХ-МС (т/ζ): 478,1 (М+Н, 100)⁺, ву = 2,51 мин; МСВР: (М+Иа)⁺ вычисл. для С^Н^Р^О^а, 500,1817, найдено: 500,1816.

Синтез 192 5-[(4-амино-2-фторфенилокси)карбониламино-5-(1-Н-пропаргил-3-трет-бутилимидазолил)]пиридин-[2,3]-3-пиразин-2-он (АА-096)

Применяли способ Р2 с 35 мг (0,13 ммоль) 5-(4-амино-2-фторфенилокси)пиридин-[2,3]-пиразин-2она и 0,2 ммоль 1-N-пропаргил-3-трет-бутилимидαзолил-5-изоцианата получая 49 мг (выход 80%) целе вого продукта.

'Н-ЯМР (ДМСО-б6), δ (м.д.), 1 (Гц): δ 4,82 (с, 2Н), 6,15 (с, 1Н_Шразол), 6,65 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 7,06 (д, 1Н, 1=8,7 Гц), 7,35 (д, 2Н, 1=11,7 Гц), 8,18 (с, 1Н_{пиразин}), 8,20 (т, 1Н, 1=9,1 Гц), 8,37 (д, 1Н, 1=5,7 Гц), 8,91 (с, 1Н, ЯН), 9,02 (с, 1Н, ЯН), 12,95 (с, 1Н, КН). ЖХ-МС (т/ζ): 476,1 (М+Н, 100), ву = 2,41 мин; МСВР: (М+Н, 100)⁺ вычисл. для С₂₄Н₂₂РИ₇О₃ 476,1841, найдено: 476,1844.

Биологические способы

Биологические способы - киназное исследование ОЕЬРТА.

- 103 019974

Соединения оценивали при помощи киназного исследования, выполнявшегося в соответствии со следующим протоколом.

Готовили следующие реактивы.

- 104 019974

Буферный раствор ИЕЬРТА Ктахе (ΌΚΒ):

Реактив	Исходная концентрация	Объем на мл (мкл)	Объем на планшет 10 мл (мкл)
20 мМ МОПС рН 7,2	0,2 М	100	1000
0,5 М ЭГТА рН 8,0	0,5 М	10	100
10 мМ МдС1₂	1 М	10	100
0,1 % β-меркаптоэтанол	-	1	10
25 мМ β-глицерофосфат	0,5 М	50	500
Вода	100%	829	8290

МОПС = 3-[Ы-морфолино]пропансульфокислота (81дта М3183).

ЭГТА = этиленгликоль-бис-(2-аминоэтиловый простой эфир-N,N,N',N'-тетрауксусная кислота (81дта Ε3889).

ΌΚΒ1 (ΌΚΒ с В-КАР и белком МЕК):

объединяли 4950 мкл ΌΚΒ и 50 мкл исходного раствора 2,5 мг/мл О8Т-МЕК (получая 1 мг МЕК на 40 мкл). Затем добавляли 22,5 мкл В-КАР, получая ~0,2 мкл В-КАР на 40 мкл.

ΌΚΒ2 (ΌΚΒ с белком МЕК):

объединяли 4950 мкл ΌΚΒ и 50 мкл исходного раствора 2,5 мг/мл О8Т-МЕК (получая 1 мг МЕК на 40 мкл). Применяли 500 мкл указанного раствора для контроля регургитации крови (Μο^ ου (ВО)) и контрольных клеток, трансфицированных пустым вектором (етр1у уесФг (ЕУ)).

АТФ:

исходный раствор 100 мМ разбавляли до 500 мкМ, получая конечную концентрацию в опыте 100 мкМ.

Ингибиторы (исследуемые соединения):

исходный раствор 100 мМ разбавляли до 10; 3; 1; 0,3; 0,1; 0,03; 0,01; 0,003; 0,001; 0,0003; 0,0001 мМ в ДМСО на планшете для лекарственного средства, получая концентрацию в опыте 100; 30; 10; 3; 1; 0,3; 0,1; 0,03; 0,01; 0,003; 0,001 мкМ.

Первичное антитело:

фосфо-МЕК1/2 С8Т #91218, разбавленное 1:1000 в буферном растворе для анализа ИЕЬРТА (АВ). Преинкубировали антитело в АВ в течение 30 мин при комнатной температуре перед применением.

Вторичное антитело:

вторичное антитело к кроличьему белку, меченное европием, Регкт Е1тег #АЭ0105, разбавленное 1:1000 в буферном растворе для анализа ИЕЬРТА (АВ). Преинкубировали антитело в АВ в течение 30 мин при комнатной температуре перед применением (первичное и вторичное антитела инкубировали совместно).

Твин:

0,1%Твин 20 в воде.

Буферный раствор для анализа:

буферный раствор для анализа ИЕЬРТА Регкт Е1тег #4002-0010.

Активирующий раствор:

активирующий раствор ИЕЬРТА Регкт Е1тег #4001-0010.

Планшеты для анализа:

черные 96-луночные планшеты с глутатионовым покрытием РегЬю #15340.

Методика.

1. Предварительно блокировали лунки 5% молоком в ТВ8 в течение 1 ч.

2. Промывали лунки 3x200 мкл ТВ8.

3. Наносили на планшеты 40 мкл ИКВ1 для всех ингибиторов (исследуемых соединений), контроля ДМСО и, возможно, других контрольных соединений.

4. Наносили на планшеты 40 мкл ИКВ2 для лунок ВО и ЕУ.

5. Добавляли ингибиторы (исследуемые соединения) по 0,5 мкл на лунку согласно выбранной схеме планшета.

6. Добавляли 0,5 мкл ДМСО в лунки контроля по среде.

7. Добавляли 2 мкл В-КАР в ячейки ВО и ЕУ.

8. Преинкубировали с ингибиторами (исследуемыми соединениями) в течение 10 мин при комнатной температуре и встряхивании.

9. Добавляли 10 мкл 500 мкМ исходного раствора АТФ в ИКВ, получая 100 мкМ концентрацию в опыте.

10. Запечатывали планшеты при помощи %р8еа1 и инкубировали при комнатной температуре и встряхивании в течение 45 мин.

- 105 019974

11. Промывали планшеты 3x200 мкл 0,1% Твин 20/вода для остановки реакции.

12. Добавляли 50 мкл на лунку смеси антител и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и встряхивании.

13. Промывали планшеты 3x200 мкл 0,1% Твин 20/вода.

14. Добавляли 100 мкл активирующего раствора ИЕЬР1А на лунку, закрывали фольгой и инкубировали при комнатной температуре и встряхивании в течение 30 мин.

15. Считывали на У1с!ог с использованием протокола Ецгоршт.

Фоновые значения (пустой вектор (Етр1у Уес!ог)) вычитали из всех значений. Контроль ДМСО принимали за 100% активности и вычисляли тестовые значения (ответ) в процентном выражении от контроля ДМСО. Данные наносили на график при помощи программного обеспечения СгарНраб Рпкт и вычисляли линию нелинейной регрессии при помощи уравнения доза-ответ с изменяющимся наклоном сигмоидальной кривой (Υ = низшее + (высшее-низшее)/(1+10^Л((Ьод ЕС₅₀-Х)-коэффициент Хилла)), где X представлял собой логарифм концентрации, Υ представлял собой ответ). Значение 1С₅₀, полученное по указанной методике, представляет собой концентрацию лекарственного средства, при которой контрольное значение флуоресценции в процентах находится посередине между насыщением и плато нулевого эффекта. Обычно проводили три независимых исследования и указывали среднее значение 1С₅₀.

Биологические способы - клеточное исследование фосфо-ЕКК.

Соединения оценивали при помощи клеточного исследования, проводимого в соответствии со следующим протоколом.

День 0.

Высевали 16000 клеток/лунку в 99 мкл среды в 96-луночный планшет.

День 1.

1. Добавляли к клеткам 1 мкл ингибитора (итого 1 мкл раствора).

2. Инкубировали клетки с исследуемым соединением в течение 6 ч при 37°С.

3. Аспирировали раствор из всех лунок.

4. Фиксировали клетки при помощи 100 мкл 4% формальдегида/0,25% Тгйоп Х-100 ФСБ на лунку.

5. Инкубировали планшет в течение 1 ч при 4°С.

6. Аспирировали фиксирующий раствор и добавляли 300 мкл ТВБ на лунку.

7. Оставляли планшет на ночь при 4°С.

День 2.

1. Промывали планшет 2x200 мкл ФСБ на лунку.

2. Блокировали при помощи 100 мкл 5% сухого молока в ТВБ.

3. Инкубировали планшет в течение 20 мин при 37°С.

4. Промывали планшет 2x0,1% Твин/Н₂О.

5. Добавляли 50 мкл 3 мкг/мл первичного антитела рЕКК (§1§та М8159), разбавленного в 5% сухого молока/ТВБ, в каждую лунку.

6. Инкубировали планшет в течение 2 ч при 37°С.

7. Промывали планшет 3x0,1% Твин/Н₂О.

8. Добавляли 50 мкл 0,45 мкг/мл вторичного антитела к белку мыши, меченного европием (Регкт Е1тег), в каждую лунку.

9. Инкубировали планшет в течение 1 ч при 37°С.

10. Промывали планшет 3x0,1% Твин/Н₂О.

11. Добавляли 100 мкл активирующего раствора (Регк1п Е1тег) в каждую лунку.

12. Оставляли планшет примерно на 10 мин при комнатной температуре с последующим встряхиванием планшета.

13. Считывали флуоресценцию европия с разрешением по времени на У1с!ог2.

14. Промывали планшет 2x0,1% Твин/Н₂О.

15. Измеряли концентрацию белка при помощи БЦК (бицинхониновой кислоты) (§1§та) путем добавления 200 мкл раствора на лунку.

16. Инкубировали планшет в течение 30 мин при 37°С.

17. Считывали уровни поглощения при 570 нм на планшет-ридере.

Отметим, что подсчет для европия нормализовывали по уровням белка путем деления подсчета на поглощение.

Значения фона (без клеток) вычитали из всех величин. Контрольные образцы с ДМСО принимали за 100% активности и вычисляли значения для исследуемых соединений (ответ) в процентном выражении от ДМСО-контроля. Данные наносили на график при помощи программного обеспечения СгарБраб Рпкт и вычисляли линию нелинейной регрессии при помощи уравнения доза-ответ с изменяющимся наклоном сигмоидальной кривой (Υ = низшее + (высшее-низшее)/(1+10Л((Ьод ЕС₅₀-Х)-коэффициент Хилла)), где X представлял собой логарифм концентрации, Υ представлял собой отклик). Значение 1С₅₀получали по указанной методике как концентрацию лекарственного средства, при которой контрольное значение флуоресценции в процентах находится посередине между насыщением и плато нулевого эф

- 106 019974 фекта. Обычно проводили три независимых исследования и указывали среднее значение 1С₅₀.

Биологические способы - исследование клеточной пролиферации 8КБ (8КБ С1₅₀).

Культуры клеток меланомы ХУМ266.4 культивировали обычным образом в среде БМЕМ/10% фетальной бычьей сыворотки, при 37°С, в насыщенной влагой атмосфере с 5% СО₂. Культуры поддерживали в фазе экспоненциального роста при помощи пересева перед тем, как происходит слияние клеток (интервалы в 3-5 дней). Суспензии отдельных клеток получали путем сбора клеток из колбы для культивирования тканей на 80 см² при помощи 5 мл имеющегося в продаже трипсина ЭДТА. Через 5 мин отделенные клетки смешивали с 5 мл полной культуральной среды и получали осадок центрифугированием (1000 об/мин в течение 7 мин). После аспирации надосадочной жидкости сгустки клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды и полностью дезагрегировали клетки, пропуская весь объем туда-обратно через иглу толщиной 19 гейдж (даиде). Концентрацию клеток определяли при помощи гемоцитометра (разбавление 1/10). Подходящий объем, обеспечивающий по меньшей мере 2-кратный избыток в ряде проводимых тестов, обычно 100-200 мл, получали разбавлением клеточной суспензии до 10000 клеток/мл и распределяли по 100 мкл/лунку в 96-луночные планшеты с использованием программируемого 8-канального перистальтического насоса, получая 1000 клеток/лунку, оставляя колонку 12 в качестве фона. Планшеты возвращали в инкубатор на 24 ч для обеспечения повторного прикрепления клеток.

Исследуемые соединения готовили в концентрации 20 мМ в диметилсульфоксиде. Аликвоты (200 мкл) разбавляли в 20 мл культуральной среды, получая концентрацию 200 мкМ, и выполняли 10 серийных разбавлений в 3 раза путем переноса 5 мл к 10 мл. Аликвоты (100 мкл) каждого из разбавленных растворов добавляли в лунки при помощи 8-канальной пипетки, осуществляя, таким образом, конечное разбавление в 2 раза и получая диапазон дозировок от 100 до 0,005 мкМ. Колонка 11 получала только чистую культуральную среду. Каждый компонент анализировали в четырех повторах, при этом каждый повтор представлял собой среднее по четырем лункам, по два планшета на соединение.

После 6 дней дальнейшего роста планшеты опустошали и фиксировали клетки в 10% трихлоруксусной кислоте в течение 10 мин на льду. После тщательного промывания проточной водопроводной водой планшеты высушивали и окрашивали добавлением 50 мкл раствора 0,1% сульфородамина-В в 1% уксусной кислоте, в течение 10 мин при комнатной температуре. Краситель выливали и тщательно промывали планшеты под струей 1% уксусной кислоты, удаляя таким образом несвязанный краситель, и высушивали. Связанный краситель переводили в раствор путем добавления 150 мкл буферного раствора Трис рН 8, с последующим 10-минутным встряхиванием на планшетном шейкере (приблизительно 500 об/мин). Поглощение при 540 нм в каждой лунке (пропорциональное числу присутствующих клеток) определяли при помощи планшет-ридера.

После усреднения результатов в рядах А-Ό и Е-Н вычитали фоновое значение (ряд 12) и представляли полученные результаты как процент от величины в отсутствие обработки (ряд 11). Полученные указанным образом 10 значений (в четырех повторах) наносили на график относительно логарифма концентрации лекарственного средства и анализировали при помощи нелинейной регрессии, приводя к четырехпараметрическому логистическому уравнению при наложении ограничений там, где это целесообразно. Значение 1С₅₀ получали по указанной методике как концентрацию лекарственного средства, при которой контрольное значение А₅₄₀ в процентах находится посередине между насыщением и плато нулевого эффекта.

Результаты биологических исследований

Следующие соединения анализировали в ходе киназного исследования ПЕЬР1А, описанного выше с АА-001 по АА-056.

Следующие соединения обладают 1С₅₀ ВКАР менее 1,0 мкМ:

АА-001, АА-002, АА-003, АА-004, АА-005, АА-006, АА-007, АА-008, АА-009, АА-010,

АА-011, АА-012, АА-013, АА-014, АА-015, АА-016, АА-017, АА-018, АА-019, АА-020, АА-021,

АА-022, АА-023, АА-024, АА-025, АА-026, АА-027, АА-028, АА-029, АА-030, АА-031, АА-032,

АА-034, АА-037, АА-038, АА-039, АА-042, АА-044, АА-045, АА-046, АА-047, АА-048, АА-049,

АА-050, АА-051, АА-052, АА-053, АА-054, АА-055, АА-056.

Кроме того, следующие соединения анализировали в ходе киназного исследования ПЕЬР1А, описанного выше с АА-001 по АА-098.

Следующие соединения обладают 1С₅₀ ВКАР менее 0,1 мкМ:

- 107 019974

АА-002, АА-003, АА-004, АА-005, АА-006, АА-007, АА-008, АА-009, АА-010, АА-011,

АА-014, АА-015, АА-017, АА-018, АА-019, АА-020, АА-021, АА-023, АА-024, АА-025, АА-026, АА-027, АА-028, АА-029, АА-032, АА-044, АА-045, АА-047, АА-048, АА-050, АА-051, АА-052, АА-054, АА-060, АА-061, АА-062, АА-063, АА-064, АА-065, АА-067, АА-069, АА-072, АА-074, АА-075, АА-079, АА-080, АА-086, АА-087, АА-088, АА-093, АА-094, АА-095, АА-096, АА-097, АА-098.

Следующие соединения обладают 1С₅₀ ВКАР по меньшей мере 0,1 мкМ, но менее 1,0 мкМ:

АА-001, АА-012, АА-013, АА-016, АА-022, АА-030, АА-031, АА-033, АА-034, АА-035,

АА-037, АА-038, АА-039, АА-040, АА-041, АА-042, АА-043, АА-046, АА-049, АА-053, АА-055, АА-056, АА-057, АА-058, АА-059, АА-066, АА-068, АА-071, АА-076, АА-077, АА-078, АА-081, АА-082, АА-083, АА-084, АА-085, АА-089, АА-090, АА-091, АА-092.

Одно соединение, соединение АА-016, обладает 1С₅₀ ВКАР 0,252 мкМ.

Следующие соединения исследовали в ходе клеточного исследования фосфо-ЕКК, описанного выше от АА-001 до АА-056.

Следующие соединения обладают 1С₅₀ рЕКК менее 10 мкМ:

АА-001, АА-002, АА-003, АА-004, АА-005, АА-006, АА-007, АА-008, АА-009, АА-010, АА-011, АА-013, АА-014, АА-015, АА-016, АА-017, АА-018, АА-019, АА-020, АА-021, АА-022, АА-023, АА-024, АА-025, АА-026, АА-027, АА-028, АА-029, АА-031, АА-033, АА-034, АА-035, АА-036, АА-037, АА-038, АА-039, АА-040, АА-041, АА-043, АА-044, АА-045, АА-046, АА-050, АА-051, АА-052, АА-053, АА-054.

Кроме того, следующие соединения исследовали в ходе клеточного исследования фосфо-ЕКК, описанного выше с АА-001 до АА-099.

Следующие соединения обладают 1С₅₀ рЕКК менее 1,0 мкМ:

АА-003, АА-006, АА-008, АА-009, АА-010, АА-011, АА-014, АА-015, АА-016, АА-017, АА-018, АА-О19, АА-023, АА-024, АА-025, АА-026, АА-028, АА-031, АА-033, АА-034, АА-035, АА-036, АА-040, АА-041, АА-051, АА-052, АА-053, АА-057, АА-059, АА-060, АА-061, АА-062, АА-063, АА-064, АА-065, АА-066, АА-067, АА-071, АА-072, АА-073, АА-074, АА-075, АА-077, АА-078, АА-079, АА-080, АА-081, АА-084, АА-085, АА-087, АА-088, АА-089, АА-090, АА-091, АА-093, АА-094, АА-095, АА-096, АА-097, АА-099.

Следующие соединения обладают 1С₅₀ рЕКК по меньшей мере 1,0 мкМ, но менее 10 мкМ:

АА-001, АА-002, АА-004, АА-005, АА-007, АА-013, АА-020, АА-021, АА-022, АА-027, АА-029, АА-037, АА-038, АА-039, АА-043, АА-044, АА-045, АА-046, АА-050, АА-054, АА-058, АА-069, АА-070, АА-076, АА-083, АА-086, АА-092, АА-098.

Одно соединение, соединение АА-016, обладает 1С₅₀ рЕКК 0,096 мкМ.

Следующие соединения исследовали в ходе исследования клеточной пролиферации 8КБ, описанного выше с АА-001 до АА-036 и с АА-038 до АА-056.

Следующие соединения обладают С1₅₀ 8КВ менее 10 мкМ:

АА-001, АА-002, АА-003, АА-004, АА-005, АА-006, АА-008, АА-009, АА-010, АА-011,

АА-013, АА-014, АА-015, АА-016, АА-017, АА-018, АА-019, АА-020, АА-021, АА-022, АА-023, АА-024, АА-025, АА-026, АА-027, АА-028, АА-029, АА-030, АА-031, АА-032, АА-033, АА-034, АА-035, АА-036, АА-037, АА-038, АА-039, АА-040, АА-041, АА-042, АА-043, АА-044, АА-045, АА-046, АА-047, АА-048, АА-049, АА-050, АА-051, АА-052, АА-053, АА-054, АА-056.

Кроме того, следующие соединения исследовали в ходе исследования клеточной пролиферации 8КВ, описанного выше с АА-001 до АА-036 и с АА-038 до АА-099.

Следующие соединения обладают С1₅₀ 8КВ менее 1,0 мкМ:

- 108 019974

АА-005, АА-006, АА-008, АА-009, АА-010, АА-011, АА-014, АА-015, АА-016, АА-017,

АА-018, АА-019, АА-023, АА-024, АА-027, АА-028, АА-031, АА-033, АА-034, АА-035, АА-038,

АА-040, АА-041, АА-051, АА-052, АА-053, АА-056, АА-057, АА-059, АА-060, АА-061, АА-062,

АА-063, АА-064, АА-065, АА-066, АА-067, АА-071, АА-073, АА-074, АА-075, АА-077, АА-078,

АА-079, АА-080, АА-081, АА-084, АА-085, АА-087, АА-088, АА-089, АА-090, АА-091.

Следующие соединения обладают СР, 8КВ по меньшей мере 1,0 мкМ, но менее 10 мкМ:

АА-001, АА-002, АА-003, АА-004, АА-007, АА-012, АА-013, АА-020, АА-021, АА-022,

АА-025, АА-026, АА-029, АА-030, АА-032, АА-036, АА-039, АА-042, АА-043, АА-044, АА-045,

АА-046, АА-047, АА-048, АА-049, АА-05О, АА-054, АА-055, АА-058, АА-068, АА-069, АА-070,

АА-072, АА-076, АА-083, АА-086, АА-092, АА-093, АА-094, АА-095, АА-096, АА-097, АА-098, АА-099.

Одно соединение, соединение АА-016, обладает СР, 8КБ 0,062 мкМ.

Исследование ΐη νίνο 1

АА-018 не стандартизовано 5 мг/кг/сутки внутрибрюшинно

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей Сг1:СЭ1-Еохп1пи. На следующий день начинали лечение исследуемым соединением. Суспензию исследуемого соединения в ДМСО:солевом растворе для инъекций 1:19 (об:об) инъецировали внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно в количестве 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 1.

Исследование ΐη νίνο 2

АА-018 не стандартизовано 10 мг/кг/сутки внутрибрюшинно

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей 0'ι1:0Ό1-Εοχη1ηιι. На следующий день начинали лечение исследуемым соединением. Суспензию исследуемого соединения в ДМСО:солевом растворе для инъекций 1:19 (об:об) инъецировали внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно в количестве 18 доз. Затем животные были под наблюдением по окончании лечения. Полученные результаты показаны на фиг. 2.

Исследование ΐη νίνο 3

АА-019 не стандартизовано 5 мг/кг/сутки внутрибрюшинно

н

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей 0'ιΊ:0Ό1-Εοχη1ηιι. На следующий день начинали лечение исследуемым со

- 109 019974 единением. Суспензию исследуемого соединения в ДМСО:солевом растворе для инъекций 1:19 (об:об) инъецировали внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно в количестве 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 3.

Исследование ΐη νίνο 4

АА-019 не стандартизовано 10 мг/кг/сутки внутрибрюшинно

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей Сг1:СЭ1-Рохп1пи. На следующий день начинали лечение исследуемым соединением. Суспензию исследуемого соединения в ДМСО:солевом растворе для инъекций 1:19 (об:об) инъецировали внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно в количестве 18 доз. Затем животные были под наблюдением по окончании лечения. Полученные результаты показаны на фиг. 4.

Исследование ΐη νίνο 5

АА-019 не стандартизовано 15 мг/кг/сутки перорально

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей Сг1:СИ1-Рохп1пц. На следующий день начинали лечение исследуемым соединением. Суспензию в ДМСО:воде 1:19 (об:об) вводили через желудочный зонд в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно в количестве 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 5.

Исследование ΐη νίνο 6

АА-019 стандартизовано 10/5 мг/кг/сутки внутрибрюшинно

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей Сг1:СЭ1-Рохп1пи. Группы по 8 животных со средним диапазоном размеров опухолей распределяли на лечение по группам по объему опухоли. Лечение исследуемым соединением в дозе 10 мг/кг начинали на 12 день после введения клеток. Суспензию исследуемого соединения в ДМСО:солевом растворе для инъекций 1:19 (об:об) инъецировали внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг массы тела. После 10 доз дозировку уменьшали до 5 мг/кг/сутки. Лечение продолжали ежедневно до общего количества 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 6.

Исследование ΐη νίνο 7

АА-019 стандартизовано 15 мг/кг/сутки перорально

- 110 019974

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей С^ί:С^1-Рοxп1ηи. Группы по 8 животных со средним диапазоном размеров опухолей распределяли на лечение по группам по объему опухоли. Лечение исследуемым соединением в дозе 10 мг/кг начинали на 12 день после введения клеток. Суспензию в ДМСО:воде 1:19 (об:об) вводили через желудочный зонд в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно до общего количества 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 7.

Исследование ΐη νίνο 8

АА-062 стандартизовано 50 мг/кг/сутки перорально

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей С^ί:С^1-Рοxп1ηи. Группы по 8 животных со средним диапазоном размеров опухолей распределяли на лечение по группам по объему опухоли. Лечение исследуемым соединением в дозе 10 мг/кг начинали на 13 день после введения клеток. Суспензию в ДМСО:воде 1:19 (об:об) вводили через желудочный зонд в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно до общего количества 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 8.

Исследование ΐη νίνο 9

АА-067 стандартизовано 10 мг/кг/сутки перорально

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей С^ί:С^1-Рοxп1ηи. Группы по 8 животных со средним диапазоном размеров опухолей распределяли на лечение по объему опухоли. Лечение исследуемым соединением в дозе 10 мг/кг начинали на 14 день после введения клеток. Суспензию в ДМСО:воде 1:19 (об:об) вводили через желудочный зонд в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно до общего количества 24 дозы. Полученные результаты показаны на фиг. 9.

Исследование ΐη νίνο 10

АА-017 стандартизовано 20 мг/кг/сутки перорально

10⁷ клеток меланомы человека А375М инокулировали подкожно в 0,2 мл суспензии в правый бок самкам безтимусных мышей С^ί:С^1-Рοxп1ηи. Группы по 8 животных со средним диапазоном размеров опухолей распределяли на лечение по объему опухоли. Лечение исследуемым соединением в дозе 10

- 111 019974 мг/кг начинали на 14 день после введения клеток. Суспензию в ДМСО:воде 1:19 (об:об) вводили через желудочный зонд в дозе 10 мл/кг массы тела. Лечение продолжали ежедневно до общего количества 24 дозы (представлены данные за первые 16 дней). Полученные результаты показаны на фиг. 10.

Выше описаны принципы, предпочтительные варианты реализации и методы работы согласно настоящему изобретению. Однако не следует считать, что настоящее изобретение ограничено конкретными рассмотренными вариантами реализации. Напротив, приведенные выше варианты реализации следует рассматривать лишь в качестве иллюстративных, но не ограничивающих, при этом следует понимать, что в указанные варианты реализации специалистом в данной области техники могут быть внесены изменения, не выходя за рамки настоящего изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, выбранное из соединений следующей формулы и его фармацевтически приемлемых солей:

где -В⁰¹ независимо представляет собой -Н, -В¹, -В^1Х, -ОН, -ИН2, -ИНВ¹, -ИВ^!2 или -ИВ^ваВ^вв; где каждый -В¹ независимо представляет собой С_1-6алкил;

каждый -В^1Х независимо представляет собой С1_-4алкил, замещенный от одной до трех группами, выбранными из -Е, -С1, -Вг и -I;

-ИВ^ваВ^вв, если присутствует, независимо представляет собой пиперидино, пиперазино или морфолино и возможно замещен одной группой, представляющей собой С1_-4алкил;

-В°² независимо представляет собой -Н, -В², -В^2Х, -ОН, -ИН2, -ИНВ², -ИВ²2 или -ИВ^ВСВ^№; где каждый -В² независимо представляет собой С1-6алкил;

каждый -В^2Х независимо представляет собой С1_-4алкил, замещенный от одной до трех группами, выбранными из -Е, -С1, -Вг и -I;

-ИВ^ВСВ^№, если присутствует, независимо представляет собой пиперидино, пиперазино или морфолино и возможно замещен одной группой, представляющей собой С1_-4алкил;

-Х- независимо представляет собой -О-;

-М- независимо выбран из где каждый п независимо равен 0 или 1;

каждый В^РН1 независимо представляет собой -Е или -8В³; где каждый -В³ независимо представляет собой С_1-4алкил; -Ь- независимо выбран из где каждый -В^И1 независимо представляет собой -Н;

-1 независимо представляет собой фенил, пиразолил или пиридил и возможно замещен одним или двумя заместителями, выбранными из -Е, -С1, -Вг, -I, -В⁴, -ОН, -ОВ⁴, -СЕ3, -ОСЕ3 и -РИ, где каждый -В⁴независимо представляет собой С1-4алкил и каждый -РИ обозначает фенил, возможно замещенный одним заместителем, выбранным из -Е, -С1, -Вг, -I, -В⁵, -ОН, -ОВ⁵, -СЕ3 и -ОСЕ3, где каждый -В⁵ независимо представляет собой С1-4алкил.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

-В⁰¹ независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СЕ₃, -СН₂Вг, -ИН₂, -ИНМе, -ИМе₂, морфолино, пиперазино или И-метилпиперазино;

-В°² независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СЕ₃, -СН₂Вг, -ИН₂, -ИНМе, -ИМе₂, морфолино, пиперазино или И-метилпиперазино.
3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что или

-В⁰¹ независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СЕ₃, -СН₂Вг, -ИН₂, -ИНМе, -ИМе₂, морфолино, пиперазино или И-метилпиперазино и

- 112 019974

-К²’² независимо представляет собой -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ХНМе, -ХМе₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино; или

-К⁰¹ независимо представляет собой -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ДНМе, -ХМе₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино и

-К²’² независимо представляет собой -Н, -ОН, -Ме, -СР₃, -СН₂Вг, -ΝΗ₂, -ДНМе, -ЫМе₂, морфолино, пиперазино или Ν-метилпиперазино.
4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что или

-К⁰¹ представляет собой -ОН и

-К²’² независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ДНМе, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино, или

-К²’¹ независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ДНМе, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино и

-К²’² представляет собой -ОН.
5. Соединение по п.1, отличающееся тем, что или

-К⁰¹ представляет собой -Ме или -ΝΗ₂ и

-К⁰² представляет собой -ОН; или

-К⁰¹ представляет собой -ОН и

-К²’² представляет собой -Ме или -ΝΗ₂.
6. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

-К⁰¹ представляет собой -ОН и

-К²’² представляет собой -Н.
7. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

-К⁰¹ представляет собой -Н и

-К²’² представляет собой -ОН.
8. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

-К⁰¹ представляет собой -ОН и

-К²’² представляет собой -ОН.
9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что или

-К⁰¹ независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ДНМе, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино и

-К²’² независимо представляет собой -Ме, -ΝΗ₂, -КНМе, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино; или

-К²’¹ независимо представляет собой -Ме, -ΝΗ₂, -КНМе, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино и

-К²’² независимо представляет собой -Н, -Ме, -ΝΗ₂, -ΝΗΧ'ίο, морфолино, пиперазино или Νметилпиперазино.
10. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что -М- независимо представляет собой .РН1 и каждый -К^рн1 независимо представляет собой -Р или -8К³; где каждый -К³ независимо представляет собой С1_-4алкил.
11. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что -М- независимо представляет собой
12. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что -М- независимо представляет собой и каждый -К^рн1 независимо представляет собой -Р или -8К³; где каждый -К³ независимо представ- 113 019974 ляет собой С1-4алкил.
13. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что -М- независимо представляет собой
14. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что -М- независимо представляет собой
15. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что -М- независимо представляет собой
16. Соединение по любому из пп.1-15, отличающееся тем, что -Ь- независимо представляет собой где каждый -К?'¹ независимо представляет собой -Н.
17. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся фенил и является возможно замещенным.
18. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся пиразолил и является возможно замещенным.
19. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся 1Н-пиразол-5-ил и является возможно замещенным.
20. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся тем, пиридил и является возможно замещенным.
21. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся тем, пирид-3-ил и является возможно замещенным.
22. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся тем, что -I независимо представляет собой тем, тем, тем, что что что что что

-I

-I

-I

-I

-I независимо независимо независимо независимо независимо представляет представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой собой где -К^Р¥1 независимо представляет собой фенил или пиридил и возможно содержит один заместитель, выбранный из -Р, -С1, -Вг, -I, -К⁵, -ОН, -ОК⁵, -СР₃ и -ОСР₃; и -К^Р¥2 независимо представляет собой -К⁴.
23. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся тем, что -I независимо представляет собой где -К^Р¥1 независимо представляет собой фенил и возможно содержит один заместитель, выбранный из -Р, -С1, -Вг, -I, -К⁵, -ОН, -ОК⁵, -СР₃ и -ОСР₃; и -К^Р¥2 независимо представляет собой -К⁴.
24. Соединение по п.23, отличающееся тем, что -К^Р¥1 независимо представляет собой фенил и возможно содержит один заместитель, выбранный из -Р, -С1, -Вг, -I, -К⁵, -ОН и -ОК⁵, где -К⁵ представляет собой -Ме.
25. Соединение по п.23, отличающееся тем, что -К^Р¥1 независимо представляет собой фенил и возможно содержит один заместитель, выбранный из -К⁵, где -К⁵ представляет собой -Ме.

- 114 019974
26. Соединение по любому из пп.22-25, отличающееся тем, что -К^р¥2 независимо представляет собой -1Ви.
27. Соединение по любому из пп.22-26, отличающееся тем, что -I независимо представляет собой
28. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся тем, что -I независимо выбран из
29. Соединение по любому из пп.1-16, отличающееся тем, что -I независимо представляет собой где т независимо равно 0, 1 или 2;

каждый -К^рН2 независимо представляет собой -Р, -С1, -Вг, -I, -К⁴, -ОН, -ОК⁴, -СР₃ или -ОСР₃, где каждый -К⁴ независимо представляет собой С1_4алкил.
30. Соединение по п.29, отличающееся тем, что каждый -К^рН2, если он присутствует, независимо представляет собой -Г, -С1, -1Ви, -СР₃ или -ОСР₃.
31. Соединение по п.1, выбранное из следующих соединений, а также их фармацевтически приемлемых солей:

- 115 019974 (АА-011), (АА-016), (АА-017), (АА-018), (АА-019), (АА-031), (АА-033), (АА-034), (АА-035), (АА-036),

- 116 019974

- 117 019974

- 118 019974
32. Соединение по п.1, выбранное из следующих соединений, а также их фармацевтически приемлемых солей:

- 119 019974 з

(АА-002), (АА-003), (АА-004), (АА-005), (АА-007), (АА-012), (АА-013), (АА-014), (АА-015), (АА-020), (АА-021),

- 120 019974 (АА-022).

(АА-023), (АА-024), (АА-025), (АА-026), (АА-027), (АА-028), (АА-029), (АА-030), (АА-032), (АА-037),

- 121 019974 (АА-039), (АА-042), (АА-043), (АА-044), (АА-046), (АА-047), (АА-048), (АА-049), (АА-050), (АА-051),

- 122 019974 (АА-052), (АА-054), (АА-055), (АА-056), (АА-068), (АА-072), (АА-079), (АА-082), (АА-083) и

- 123 019974
33. Соединение по п.1, представляющее собой следующее соединение или его фармацевтически приемлемую соль:
34. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-33 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
35. Способ получения фармацевтической композиции, включающий стадию смешивания соединения по любому из пп.1-33 и фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя.
36. Применение соединения по любому из пп.1-33 для лечения человека или животного.
37. Применение соединения по любому из пп.1-33 для лечения пролиферативного нарушения.
38. Применение по п.37, отличающееся тем, что указанное пролиферативное нарушение представляет собой рак.
39. Применение по п.38, отличающееся тем, что указанный рак представляет собой меланому или колоректальный рак.
40. Применение соединения по любому из пп.1-33 для получения лекарственного средства для лечения пролиферативного нарушения.
41. Применение по п.40, отличающееся тем, что указанное пролиферативное нарушение представляет собой рак.
42. Применение по п.41, отличающееся тем, что указанный рак представляет собой меланому или колоректальный рак.
43. Способ лечения пролиферативного нарушения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в указанном лечении, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-33.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что указанное пролиферативное нарушение представляет собой рак.
45. Способ по п.44, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой меланому или колоректальный рак.
46. Способ ингибирования пролиферации клеток, ингибирования развития клеточного цикла, стимулирования апоптоза или осуществления комбинации одного или нескольких из указанных воздействий, ίη νίίτο или ίη νίνο, включающий приведение клетки в контакт с эффективным количеством соединения по любому из пп.1-33.