EA009697B1

EA009697B1 - Замещенные соединения бензо[e][1,4]оксазино[3,2-g]изоиндола и фармацевтические композиции, которые их содержат

Info

Publication number: EA009697B1
Application number: EA200500654A
Authority: EA
Inventors: Жерар Кудер; Франк Лепифр; Даньель-Анри Кеньяр; Пьер Ренар; Джон Хикман; Ален Пьерр; Лоранс Краус-Бертье
Original assignee: Ле Лаборатуар Сервье
Priority date: 2002-10-18
Filing date: 2003-10-17
Publication date: 2008-02-28
Also published as: ZA200502831B; CN100338071C; DE60313012D1; AU2003301531A1; ES2285259T3; EA200500654A1; CA2502484A1; FR2845994B1; UA79163C2; HK1084112A1; PT1556387E; EP1556387B1; US20060003997A1; KR100699661B1; CN1705669A; MA27339A1; MXPA05003693A; NO20052373L; FR2845994A1; KR20050059272A

Abstract

Соединения формулы (I)в которой Wпредставляет собой вместе с атомами углерода, к которому он присоединен, фенильную группу или пиридильную группу; Z представляет собой водород; Rимеет значения, указанные в описании; Rпредставляет собой атом водорода или группу формулы -CHCHO-R; Rи R, каждый, представляет собой линейную или разветвленную C-С-алкильную группу; n представляет собой целое число от 1 до 6 включительно. Лекарственные средства.

Description

Настоящее изобретение относится к новым соединениям бензо [е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола, к способу их получения и к фармацевтическим композициям, которые их содержат. Соединения согласно настоящему изобретению являются ценными для терапевтического применения в связи с их противоопухолевой активностью.

В литературе, I. Рйагш. 8е1епее§, 1974, 63(8), сс. 1314-1316, описан синтез соединений бензоксазинохинолина, обладающих противоопухолевыми свойствами. В патентной заявке ЕР 0841337 заявлены замещенные соединения 7,12-диоксабензо[а]антрацена и описаны их противоопухолевые свойства.

Соединения согласно настоящему изобретению являются новыми как по своей структуре, так и для их применения в качестве противоопухолевых средств. Их биодоступность также значительно превышает биодоступность соединений, известных из уровня техники.

В частности, настоящее изобретение относится к замещенным соединениям бензо[е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I)

в которой представляет собой вместе с атомами углерода, к которому он присоединен, фенильную группу или пиридильную группу,

Ζ представляет собой водород,

Кд представляет собой группу, выбранную из водорода и группы -С(О)-К₅, в которой К₅ представляет собой группу, выбранную из водорода и таких групп, как линейный или разветвленный С₁-С₆алкокси и арилокси, где под арилом подразумевают такую группу, как фенил,

К₂ представляет собой атом водорода или группу формулы -СН₂СН₂О-К₈, в которой К₈ представляет собой группу, выбранную из водорода и -8(О)К₆, где К₆ представляет собой линейный или разветвленный С₁-С₆-алкил и ΐ представляет собой число 2,

К₃ и К₄, каждый, представляет собой линейный или разветвленный С₁-С₆-алкил.

п представляет собой целое число от 1 до 6 включительно, а также их солям присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием, где под арилом подразумевают такую группу, как фенил, нафтил, дигидронафтил, тетрагидронафтил, инденил или инданил, каждая из этих групп необязательно замещена одной или несколькими одинаковыми или разными группами, выбранными из галогена, линейного или разветвленного С₁-С₆-алкила, линейного или разветвленного С₁-С₆-тригалоалкила, гидрокси, линейного или разветвленного С₁-С₆алкокси, и аминогруппы, необязательно замещенной одной или двумя линейными или разветвленными С₁-С₆-алкильными группами.

Среди фармацевтически приемлемых кислот можно отметить, но не ограничиваясь только ими, соляную, бромисто-водородную, серную, фосфоновую, уксусную, трифторуксусную, молочную, пировиноградную, малоновую, янтарную, глутаровую, фумаровую, винную, малеиновую, лимонную, аскорбиновую, метансульфоновую, камфорную кислоту и т.д.

Среди фармацевтически приемлемых оснований можно отметить, но не ограничиваясь только ими, гидроокись натрия, гидроокись калия, триэтиламин и т.д.

Предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения формулы (I), которые

в которой К₁, К₂, К₃, К₄, Ζ и п имеют значения, указанные для формулы (I).

В соответствии со вторым предпочтительным вариантом осуществления изобретения предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения формулы (I), которые предпочтительно соответствуют формуле (ГВ)

- 1 009697

в которой К₁, К₂, К₃, Кд, Ζ и η имеют значения, указанные выше.

В соответствии с третьим предпочтительным вариантом осуществления изобретения предпочти-

В одном варианте осуществления изобретения, который представляет интерес, предпочтительно группа Ζ в соответствии с изобретением представляет собой атом водорода.

В другом варианте осуществления изобретения, который представляет интерес, предпочтительно группа К₁ в соответствии с изобретением представляет собой атом водорода и группу -С(О)-К₅, где К₅более предпочтительно представляет собой атом водорода.

Предпочтительно группа К₂ предпочтительно в соответствии с изобретением представляет собой атом водорода и группу -СН₂СН₂О-К₈, где К₈ более предпочтительно представляет собой атом водорода.

Более предпочтительно предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения, в которых η представляет собой целое число 2.

Наиболее предпочтительно группы К₃ и Кд предпочтительно в соответствии с изобретением, которые могут быть одинаковыми или разными, каждая представляет собой независимо друг от друга линейную или разветвленную С₁-С₆-алкильную группу.

Предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением являются

2-[2-(диметиламино)этил]-5-гидроксибензо[а]пирроло[3,Д-с]феноксазин-1,3-дион,

2-[2-(диэтиламино)этил]-5-гидроксибензо[а]пирроло[3,Д-с]феноксазин-1,3-дион,

2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)-2,3-дигидробензо[а]пирроло[3,Д-с]-феноксазин-8карбальдегид-1,3-дион,

2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо[а]пирроло[3,д-с]феноксазин-1,3-дион,

2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтилметансульфонат)бензо[а]пирроло-[3,д-с]феноксазин1,3-дион,

2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо[е]пиридо[2',3':5,6][1,Д]-оксазино[3,2-д]изоиндол-1,3-дион.

Энантиомеры, диастереоизомеры, Ν-оксиды, а также соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием предпочтительных соединений составляют неотъемлемую часть изобретения.

Настоящее изобретение также относится к способу получения соединений формулы (I), который характеризуется тем, что в качестве исходного вещества применяют соединение формулы (II)

Ζ

в которой и Ζ имеют значения, указанные для формулы (I), функциональную аминогруппу соединения формулы (II) защищают защитной группой Р_о, хорошо известной специалисту в данной области, получая соединение формулы (III)

- 2 009697

в которой Р_о представляет собой трет-бутоксикарбонильную или феноксикарбонильную группу и и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (III) подвергают реакции с диизопропиламидом лития, затем дифенилхлорфосфатом, получая соединение формулы (IV)

в которой Р_е, И Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (IV) подвергают реакции, в присутствии хлорида бис(трифенилфосфин)палладия, с соединением формулы (V)

в которой Р_е, и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (VI) или обрабатывают в инертной атмосфере диметилацетилендикарбоксилатом, получая соединение формулы (VII)

в которой Р_е, И Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (VII) или обрабатывают Ν-бромсукцинимидом и бензоилпероксидом, получая соединение формулы (VIII)

в которой Р_о, и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (VIII) подвергают воздействию соляной кислоты, получая соединение формулы (IX)

- 3 009697

в которой Α₁ и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (IX) подвергают воздействию ди-трет-бутилдикарбоната в присутствии 4диметиламинопиридина, получая соединение формулы (X)

в которой - - - представляет собой простую или двойную связь, Вос представляет собой третбутоксикарбонильную группу и Α₁ и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (X) подвергают воздействию 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинона, получая соединение формулы (XI)

в которой Вос, Α₁ и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (XI) подвергают воздействию метанолята натрия и затем гидролизуют, получая соединение формулы (XII)

η₂ν (СН₂)_П (XIII) в которой Вос, Α₁ и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (XII) подвергают реакции с соединением формулы (XIII)

N \

Кд в которой К₃, К₄ и η имеют значения, указанные для формулы (I), получая соединение формулы (Еа), частный случай соединений формулы (I)

в которой Вос, К₃, К₄, Αι, Ζ и η имеют значения, указанные выше, соединение формулы (Ι/а) необязательно подвергают воздействию в таких же условиях, что и соединение формулы (VIII), получая соединение формулы (Ι/Ь), частный случай соединений формулы (I)

- 4 009697

в которой К₃, Кд, ^₁, Ζ и η имеют значения, указанные выше, или подвергают воздействию в таких же условиях, что и соединение формулы (X), получая соединение формулы (XIV)

в которой Ρθ, ^₁ и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (XIV) необязательно подвергают воздействию в таких же условиях, что и со-

соединение формулы (1/с) или необязательно подвергают воздействию муравьиной кислоты, получая соединения формул (Ι/ά) и (Ι/е), частные случаи соединений формулы (I) / *з / ^кз

(1/0) (1/е) в которых К₃, К₄, ^₁, Ζ и η имеют значения, указанные выше, или необязательно подвергают взаимодействию с соединением формулы (XV)

К_8а----- Θ (XV) в которой Θ представляет собой уходящую группу и К_8а, который не представляет собой атом водорода, имеет такие же значения, как К₈ в формуле (I), получая соединение формулы (Ι/ί), частный случай соединений формулы (I)

в которой Ρθ, К₃, К₄,К_8а,А|, Ζ и η имеют значения, указанные выше,

- 5 009697 с функциональной аминогруппы соединений формулы (Ι/ί) необязательно снимают защиту в соот-

в которой К₃, Кд, К_8а, ψ₁, Ζ и η имеют значения, указанные выше, соединения формул (Ι/Ь), (Ι/б) и (1/д) составляют соединения формулы (1/К) /*3 (СН₂)_П N

О

в которой К₂, К₃, Кд», ψ₁, Ζ и η имеют значения, указанные выше, соединения формулы (Ι/К) необязательно подвергают взаимодействию с соединением формулы (ΧΥΙ) н_1а-----о (XVI) в которой К_1а, который не представляет собой атом водорода, имеет такие же значения, как К₁ в формуле (Ι) и О имеет значения, указанные выше, получая соединение формулы (Ι/ι), частный случай соединений формулы (Ι)

в которой К_1а, К₂, К₃, Кд, ψ₁, Ζ и η имеют значения, указанные выше, или подвергают реакции с Ν-метилимидом малеиновой кислоты, получая соединение формулы (ΧΥΙΙ)

в которой Р_О, Ψ₁ и Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (ΧνΙΙ) необязательно подвергают воздействию в таких же условиях, что и соединение формулы (νΙΙ), получая соединение формулы (ΧνΙΙΙ)

в которой Р_О, Ψ₁ И Ζ имеют значения, указанные выше, соединение формулы (ΧνΙΙΙ) необязательно подвергают воздействию в таких же условиях, что и соединение формулы (ΧΙΙ), получая соединение формулы (Ι/б), как указано выше,

- 6 009697 соединения формул (1/а)-(1/1), представляющие собой совокупность соединений формулы (I), если это является подходящим, очищают в соответствии с обычными способами очистки, если это является желательным, могут быть разделены на их разные изомеры в соответствии с обычными способами разделения, и, если это является желательным, превращены в их Ν-оксиды и, если это является подходящим, в их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

Изобретение также относится к соединениям формулы (X), (XI) и (XIV), которые являются промежуточными продуктами при синтезе для применения для получения соединений формулы (I).

Соединения формул (II), (V), (XIII), (XV) и (XVI) являются или коммерчески доступными соединениями, или могут быть получены в соответствии с обычными способами органического синтеза, которые хорошо известны специалисту в данной области техники.

Соединения формулы (I) обладают ценными фармакологическими свойствами. Они обладают очень хорошей цитотоксичностью в условиях ίη νίΐτο не только по отношению к клеточным линиям лейкоза, но также действуют на линии солидных опухолей и, кроме того, обладают действием на клеточный цикл и активны в условиях ίη νίνο на модели лейкоза. Эти свойства делают их пригодными для терапевтического применения в качестве противоопухолевых средств.

Среды видов злокачественных новообразований, которые можно лечить при помощи соединений согласно настоящему изобретению, можно отметить, но не ограничиваясь только ими, аденокарциномы, карциномы, саркомы, глиомы и лейкозы.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат продукты формулы (I), их энантиомер, диастереоизомер, Ν-оксид или одну из их фармацевтически приемлемых солей присоединения с кислотой или основанием, самостоятельно или в сочетании с одним или несколькими инертными, нетоксичными наполнителями или носителями.

Среди фармацевтических композиций согласно изобретению особенно можно отметить те, которые являются пригодными для перорального, парентерального, назального ректального, подъязычного, глазного введения или введения в дыхательные пути, и в особенности таблетки или драже, подъязычные таблетки, саше, пакеты, желатиновые капсулы, таблетки для медленного растворения под языком, лепешки, суппозитории, кремы, мази, кожные гели, составы для инъекций или питья, аэрозоли, глазные капли или капли в нос.

Таким образом, учитывая фармакологические свойства соединений формулы (I), фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного компонента указанные соединения, в особенности пригодны для лечения злокачественных новообразований.

Полезная дозировка изменяется в зависимости от возраста и веса пациента, пути введения, природы терапевтического расстройства и любых сопутствующих видов лечения, и находится в диапазоне от 0,1 до 400 мг в сутки на одно или больше введений.

Примеры, представленные ниже, приведены только с целью иллюстрации изобретения и никоим образом его не ограничивают. Используемые исходные материалы являются известными продуктами или продуктами, которые получают в соответствии с известными способами.

Структура соединений, описанных в примерах, была определена согласно обычным спектрофотометрическим способам (инфракрасная спектрометрия, ядерный магнитный резонанс, массспектрометрия и т.д).

Приготовление А. трет-Бутил 3-[(дифеноксифосфорил)окси]-4Н-1,4-бензоксазин-4-карбоксилат.

Стадия А. трет-Бутил 2,3-дигидро-4Н-1,4-бензоксазин-3-он-4-карбоксилат.

В инертной атмосфере 73 ммоль 2Н-1,4-бензоксазин-3-она растворяли в 100 мл ацетонитрила в присутствии 3,65 ммоль 4-диметиламинопиридина и 80 ммоль ди-трет-бутилдикарбоната. Смесь перемешивали в течение 4 ч. После концентрирования остаток ресуспендировали в этилацетате. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После выпаривания растворителя и очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 8/2), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 72°С.

ИК (КВг): у_с= о = 1713, 1779 см^-1; у_сос = 1148 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 250 (М+1).

Стадия В. трет-Бутил 3-[(дифеноксифосфорил)окси]-4Н-1,4-бензоксазин-4-карбоксилат.

В инертной атмосфере 12 ммоль ΤΜΕΌΑ добавляли к раствору 10 ммоль продукта, полученного на вышеописанной стадии А, в 50 мл безводного ТГФ. После охлаждения раствора до -78°С по каплям добавляли 12 ммоль 2М ЬИА (в растворе гептан/ТГФ). После перемешивания в течение 2 ч к реакционной смеси по каплям добавляли 12 ммоль дифенилхлорфосфата, смесь выдерживали при -78°С дополнительно в течение 2 ч. После возвращения температуры до температуры окружающей среды раствор гидролизовали и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После очищения остатка путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 9/1), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 64°С.

- 7 009697

ИК (КВг): ν = 1732 см^-1; ν_Ρ=₀ 1313 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 482 (М+1).

Приготовление В. Фенил 3-[(дифеноксифосфорил)окси]-2,3-дигидро-4Н-пиридо-[3,2-Ь][1,4]оксазин-4-карбоксилат.

Стадия А. Фенил 2,3-дигидро-4Н-пиридо[3,2-Ь][1,4]оксазин-3-он-4-карбоксилат.

В инертной атмосфере раствор 10 ммоль 2Н-пиридо[3,2-Ь][1,4]оксазин-3-она в 50 мл тетрагидрофурана охлаждали до -78°С. При этой температуре по каплям добавляли 11 ммоль 1,6М раствора нбутиллития в гексане. После взаимодействия в течение 30 мин при -78°С, по каплям добавляли 11 ммоль фенилхлорформиата и продолжали перемешивать дополнительно в течение 2 ч. После возвращения температуры до температуры окружающей среды, раствор гидролизовали и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и упаривали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 8/2), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 97°С.

ИК (КВг): ν^₀ = 1717 см^-1; 1803 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 271 (М+1).

Стадия В. Фенил 3-[(дифеноксифосфорил)окси]-4Н-пиридо[3,2-Ь][1,4]оксазин-4-карбоксилат.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии В приготовления А, исходя из соединения, полученного на вышеописанной стадии.

Точка плавления: 82°С.

ИК (КВг): ν^₀ = 1749 см^-1; ν_Ρ=₀ 1294 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 503 (М+1).

Приготовление С. 8-(Пинаконборонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-7-ен.

Стадия А. 8-(Трифторметил)сульфонилокси-1,4-диоксаспиро [4.5] дец-7-ен.

В инертной атмосфере 2М раствор 6,4 ммоль БПА в смеси ТГФ/гептан разводили 8 мл ТГФ. Температуру снижали до -78°С и затем медленно добавляли 6,4 ммоль 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-она, растворенного в 8 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при этой температуре и добавляли 9,6 ммоль Ν-фенилтрифторметансульфонимида, растворенного в 8 мл ТГФ. После перемешивания в течение 15 мин приблизительно при 78°С и последующего возращения температуры до температуры окружающей среды на ночь смесь концентрировали. После очищения на нейтральном геле глинозема (петролейный эфир/этилацетат: 95/5), выделяли ожидаемый продукт.

ИК (Ναί,Ί пленка): ν^ 1692 см^-1; ν₃₀2 = 14 1 8 см^-1.

Стадия В. 8-(Пинаконборонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-7-ен.

В инертной атмосфере 0,7 ммоль продукта, полученного на вышеописанной стадии А, 1,05 ммоль пинаконборана, 0,028 ммоль хлорида бис(трифенилфосфин)палладия(11), 0,084 ммоль трифениларсина и 2,1 ммоль триэтиламина смешивали в 3 мл толуола и затем нагревали при 80°С в течение 2 ч. После охлаждения остаток ресуспендировали в этилацетате и промывали насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После очищения остатка путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 9/1), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 58°С.

ИК ( КВг): ν = 1635 см^-1; ν^ = 1115, 1143 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 267 (М+1).

Пример 1. 8-(трет-Бутоксикарбонил)-2-[2-(диметиламино)этил]-5-гидрокси-2,3-дигидробензо[а] пирроло [3,4-с]феноксазин-1,3-дион.

Стадия А. трет-Бутил 3-(1,4-диоксаспиро[4.5]дец-7-ен-8-ил)-4Н-1,4-бензоксазин-4-карбоксилат.

В инертной атмосфере 1М раствор 1 ммоль продукта из приготовления А и 5% хлорид бис(трифенилфосфин)палладия(11) в тетрагидрофуране перемешивали в течение 10 мин при температуре окружающей среды. К реакционной смеси добавляли 1,5 ммоль продукта из приготовления С, несколько капель этанола и 2 ммоль 2М водного раствора карбоната натрия, затем ее нагревали в колбе с обратным холодильником в течение одного часа. После охлаждения и гидролиза раствор экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 6/4), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 92-93°С.

ИК (КВг): ν^₀ = 1711 см^-1;

ν_№(Ρ = 1113, 1163 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 372 (М+1).

Стадия В. Диметил 12-(трет-бутоксикарбонил)-3,3-(1,2-этилендиокси)-1,2,3,4,4а,6а-гексагидро-12Нбензо[а]феноксазин-5,6-дикарбоксилат.

В замкнутой системе 8 ммоль продукта, полученного на вышеописанной стадии А, и 40 ммоль диметилацетилендикарбоксилата перемешивали при 80°С в течение 22 ч. В результате очистки путем хро- 8 009697 матографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 7/3), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 234-235°С.

ИК (КВг): ν_ο=ο = 1728 см^-1; у_СОс = 1152 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 514 (М+1).

Стадия С. Диметил 12-(трет-бутоксикарбонил)-3,3-(1,2-этилендиокси)-1,2,3,4-тетрагидро-12Нбензо [а] феноксазин-5,6-дикарбоксилат.

В инертной атмосфере 0,92 ммоль продукта, полученного на вышеописанной стадии В, и 2,75 ммоль перекристаллизованного Ν-бромсукцинимида в 23 мл дистиллированного четыреххлористого углерода нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 10 мин, используя лампу 60 Вт, в присутствии каталитического количества бензоилпероксида. После охлаждения раствор фильтровали и затем концентрировали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 6/4), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: <50°С.

ИК (КВг): у_с=₀ = 1701, 1717, 1733 см^-1д_С0С = 1152, 1195 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 512 (М+1).

Стадия Ό. Диметил 3-оксо-1,3,4,12-тетрагидро-2Н-бензо[а]феноксазин-5,6-дикарбоксилат.

мл 12М соляной кислоты по каплям добавляли к 0,6 ммоль продукта, полученного на вышеописанной стадии С, растворенного в 3 мл этанола. Смесь перемешивали в течение 1,5 ч при температуре окружающей среды. После нейтрализации насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагирования этилацетатом, органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 5/5 до 0/10), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 250-251°С.

ИК (КВг): у_с=₀ = 1695, 1720 см^-1; ν_ΝΗ = 3430 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 366 (М+1).

Стадия Е. Диметил 12-(трет-бутоксикарбонил)-3-[(трет-бутоксикарбонил)окси]-1,2-дигидро-12Нбензо[а]феноксазин-5,6-дикарбоксилат.

В инертной атмосфере 0,69 ммоль соединения, полученного на вышеописанной стадии Ό, растворяли в 10 мл тетрагидрофурана. После добавления 1,73 ммоль 4-диметиламинопиридина и 1,73 ммоль ди-трет-бутилдикарбоната, смесь перемешивали в течение 12 ч. После концентрирования остаток ресуспендировали в этилацетате и дважды промывали 1М раствором соляной кислоты. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали, получая ожидаемый продукт.

ИК (№С1 пленка): ν<>₀ = 1728, 1756 см^-1; у_С0С = 1139 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 568 (М+1).

Стадия Е. Диметил 12-(трет-бутоксикарбонил)-3-[(трет-бутоксикарбонил)окси]-12Н-бензо[а]феноксазин-5,6-дикарбоксилат.

В инертной атмосфере 0,62 ммоль соединения, полученного на вышеописанной стадии Е, растворяли в 5 мл толуола в присутствии 4,96 ммоль 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинона и смесь нагревали при 90°С в течение 24 ч. После охлаждения и концентрирования реакционную смесь ресуспендировали в дихлорметане и промывали 8% раствором гидроокиси натрия. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном и органические фазы объединяли, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 7/3), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 101-102°С.

ИК (КВг): у_с=₀ = 1731, 1739, 1756, 1766 см^-1; ν^ = 1149 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 566 (М+1).

Стадия О. Диметил 12-(трет-бутоксикарбонил)-3-гидрокси-12Н-бензо[а]феноксазин-5,6-дикарбоксилат.

В инертной атмосфере 0,28 ммоль соединения, полученного на вышеописанной стадии Е, растворяли в 2 мл метанола в присутствии 0,34 ммоль метанолята натрия. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 12 ч. После концентрирования и гидролиза смесь экстрагировали этилацетатом, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и упаривали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 7/3), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 90-91°С (разложение).

ИК (КВг): у_с=₀ = 1722 см^-1; ν^ = 1152 см^-1; ν_0Η = 3442 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 466 (М+1).

Стадия Н. 8-(трет-Бутоксикарбонил)-2-[2-(диметиламино)этил]-5-гидрокси-2,3-дигидробензо[а] пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3-дион.

В инертной атмосфере 0,26 ммоль соединения, полученного на вышеописанной стадии О, нагревали при 100°С в 4 мл Ν,Ν-диметилэтилендиамина в течение 7 ч. После охлаждения избыток диамина выпаривали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол: 95/5), выделяли

- 9 009697 ожидаемый продукт.

Точка плавления: 190°С (разложение).

ИК (КВг):у_с=о = 1705, 1762 см^-1; усо = 1249 см^-1; ν0Η = 3446 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 490,5 (М+1).

Пример 2. Гидрохлорид 2-[2-(диметиламино)этил]-5-гидроксибензо[а]пирроло[3,4-с]феноксазин1,3-диона.

мл 12М соляной кислоты по каплям добавляли к 0,2 ммоль соединения из примера 1, растворенного в 4 мл этанола. Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч при температуре окружающей среды и затем концентрировали. При добавлении диэтилового эфира образовывался осадок, который отфильтровывали, получая ожидаемый продукт.

ИК (КВг): у_с=₀ = 1686, 1744 см^-1; ν_ΝΗ,_0Η = 3431 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 390 (М+1).

Пример 3. 8-(трет-Бутоксикарбонил)-2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)-2,3-дигидробензо [а]пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3-дион.

Стадия А. Диметил 12-(трет-бутоксикарбонил)-3-(2-гидроксиэтокси)-12Н-бензо[а]феноксазин-5,6дикарбоксилат.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии Р примера 1, исходя из соединения со стадии В примера 1.

Точка плавления: 87-88°С.

ИК (КВг): ν^ = 1725 см^-1; ν_0Η = 3440 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 510 (М+1).

Стадия В. 8-(трет-Бутоксикарбонил)-2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)-2,3-дигидробензо [а]пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3-дион.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии Н примера 1, исходя из соединения с вышеописанной стадии А.

Точка плавления: >80°С (разложение).

ИК (КВг): ν<>₀ = 1707, 1763 см^-1; ν_0Η = 3447 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 534 (М+1).

Пример 4. 8-(трет-Бутоксикарбонил)-2-[2-(диметиламино)этил]-5-{2-[(метилсульфонил)окси] этокси}-2,3-дигидробензо [а]пирроло-[3,4-с] феноксазин-1,3-дион.

В инертной атмосфере 0,93 ммоль триэтиламина и затем 0,93 ммоль мезилхлорида добавляли к раствору 0,06 ммоль соединения из примера 3 в 3 мл дихлорметана при 0°С. Продолжали перемешивать при 0°С в течение 8 ч. При температуре окружающей среды раствор гидролизовали и затем экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. В результате очистки путем хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол: 95/5), выделяли ожидаемый продукт.

Точка плавления: 70-80°С (смола).

ИК (КВг): ν = 1707, 1763 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 612 (М+1).

Пример 5. 2-[2-(Диметиламино)этил]-5-{2-[(метилсульфонил)окси]этокси}-1,2,3,8-тетрагидробензо [а] пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3 -дион.

0,03 ммоль соединения из примера 4 растворяли в 1 мл муравьиной кислоты и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 ч. После концентрирования остаток ресуспендировали в дихлорметане и промывали 2М раствором карбоната натрия и затем водой. Органические фазы объединяли, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После очищения путем хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол: 9/1), выделяли ожидаемый продукт.

ИК (КВг): ν = 1686, 1702 см^-1; ν_ΝΗ = 3432 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 512 (М+1).

Пример 6. 2-[2-(Диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо [а]пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3 дион.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой из примера 5, исходя из соединения из примера 3.

Точка плавления: 216°С (смола).

ИК (КВг): у_с=0 = 1690, 1741 см^-1 ; = 3427 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 434 (М+1).

Пример 7. 8-(Формил)-2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо[а]пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3-дион.

Ожидаемый продукт получали при очистке путем хроматографии на силикагеле согласно примеру 6.

Точка плавления: 202°С.

ИК (КВг): ν^ = 1693, 1732 см^-1; ν,.. = 3428 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 462 (М+1).

- 10 009697

Пример 8. 8-(Феноксикарбонил)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метил-2,3-дигидробензо[е]пиридо[2',3':5,6] [1,Д]оксазино [3,2-д] изоиндол-1,3-дион.

Стадия А. Фенил 3-(1,Д-диоксаспиро[Д.5]дец-7-ен-8-ил)-ДН-пиридо[3,2-Ь'][1,Д]оксазин-Д-карбоксилат.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии А примера 1, исходя из соединения из приготовления В.

ИК (КВг): у_с=о = 1741 см^-1; у_сос = 1111, 1197 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 393 (М+1).

Стадия В. 8-(Феноксикарбонил)-5,5-(1,2-этилендиокси)-2-метил-2,3,3а,3Ь,4,5,6,7,13а,13Ь-декагидробензо[е]пиридо[2',3':5,6][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндол-1,3-дион.

В замкнутой системе 1 ммоль продукта, полученного на вышеописанной стадии А, и 3 ммоль Νметилимида малеиновой кислоты перемешивали при 95°С в течение 2 ч в присутствии нескольких капель толуола. После очищения путем хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат: 6/Д) выделяли продукт.

Точка плавления: 150°С (смола).

ИК (КВг): у_с=_о = 1701, 1786 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 504 (М+1).

Стадия С. 8-(Феноксикарбонил)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метил-2,3-дигидробензо-[е]пиридо[2',3':5,6] [1,4]оксазино[3,2-д]изоиндол-1,3-дион.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии С примера 1, исходя из соединения с вышеописанной стадии В.

Точка плавления: 250°С (смола).

ИК (КВг): у_с=_о = 1707, 1752 см^-1; усос = 1191 см^-1; ν0Η = 3463 см^-1.

Масс-спектр: т/ζ 498 (М+1).

Пример 9. 2-[2-(Диметиламино )этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо[е]пиридо-[2',3':5,6] [1,4]оксазино [3,2-д]изоиндол-1,3-дион.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии Н примера 1, исходя из соединения из примера 8.

Масс-спектр: т/ζ 435 (М+1).

Пример 10. 8-(трет-Бутоксикарбонил)-2-[2-(диэтиламино)этил]-5 -гидрокси-2,3 -дигидробензо [а]пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3-дион.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой, описанной на стадии Н примера 1, исходя из соединения со стадии С примера 1 и Ν,Ν-диэтилэтилендиамина.

Пример 11. 2-[2-( Диэтиламино)этил]-5 -гидроксибензо [а]пирроло [3,4-с] феноксазин-1,3 -дион.

Ожидаемый продукт получали в соответствии с методикой из примера 2, исходя из соединения из примера 10.

Фармакологическое исследование соединений по изобретению

Пример 12. Действие в условиях ίη νίίτο.

Б1210 лейкоз мыши.

Использовали клетки Б1210 лейкоза мыши в условиях ίη νίίτο. Клетки культивировали в КΡΜI 1640 полной питательной среде, содержащей 10%-ную фетальную телячью сыворотку, 2 мМ глутамина, 50 ед./мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина и 10 мМ Нерек, рН 4. Клетки распределяли на микропланшетах и подвергали действию цитотоксических соединений в течение четырех удвоенных периодов или 48 ч. После этого определяли количество жизнеспособных клеток при помощи колориметрического исследования, используя тетразолий в микрокультуре (1. Саптс11ае1 и др., Сансе г Кек.; 47, 939-942 (1987)). Результаты выражали в виде значений ГС50, концентрации цитотоксического средства, которая ингибирует пролиферацию обработанных клеток на 50%. Все соединения по изобретению обладают хорошей цитотоксичностью по отношению к этой клеточной линии. Например, соединение из примера 2 обнаруживает Κ'Τ, 0,25 мкМ по отношению к Б1210.

Линии клеток человека.

Соединения по изобретению также исследовали на линиях клеток человека, имеющих происхождение от солидных опухолей, в соответствии с таким же протоколом исследования, который описанный для лейкоза мыши Б1210, но с периодами инкубации 4 дня вместо 2 дней. Например, соединение из примера 2 обнаруживает КС, 0,27 мкМ по отношению к Όυ145 раку предстательной железы, 0,16 мкМ по отношению к А549 немелкоклеточному раку легких, 0,06 мкМ по отношению к НТ-29 раку ободочной кишки и 0,26 мкМ по отношению к КВ-3-1 плоскоклеточному раку.

Эти различные результаты являются очевидным доказательством сильного противоопухолевого действия соединений по изобретению по отношению к лейкозам и солидным опухолям.

Пример 13. Действие на клеточный цикл.

Клетки Б1210 инкубировали в течение 21 ч при 37°С в присутствии различных концентраций исследуемых соединений. Затем клетки фиксировали при помощи 70 об.% этанола, дважды промывали в

- 11 009697

РВ8 и инкубировали в течение 30 мин при 20°С в РВ8, содержащем 100 мкг/мл РНКазы и 50 мкг/мл йодида пропидия. Результаты выражали, исходя из процента клеток, которые находились в С2+М фазе через 21 ч, по сравнению с контролем (контроль: 20%). Соединения по изобретению представляют значительный интерес при концентрации ниже 2,5 мкМ, вызывая накопление по крайней мере 80% клеток в С2+М фазе через 21 ч.

Пример 14. Действие в условиях ΐη у1уо.

Противоопухолевое действие на Р 388 лейкоз.

Линию Р388 (лейкоз мышей) получали из Национального онкологического института (Фредерик, США). Клетки опухоли (10⁶ клеток) прививали в день 0 в полость брюшины самкам мышей В6И2Р1 (Ша Сгебо, Франция). В каждой исследуемой группе использовали шесть мышей весом от 18 до 20 г. Продукты вводили внутрибрюшинно в 1-й день. Противоопухолевое действие выражали в виде % О/К

Среднее время жизни опытных животных % О/К (мышь) = ----------------------------------------- х 100

Среднее время жизни контрольных животных

Полученные результаты свидетельствуют о значительной активности в условиях ΐη у1уо на модели лейкоза Р 388 при значении О/К 210% для дозы 50 мг/кг при низкой токсичности соединений, что указывает на очень хороший терапевтический индекс.

Пример 15. Фармацевтическая композиция: раствор для инъекций.

Соединение из примера 2 10 мг

Дистиллированная вода для инъекций 25 мл

Claims

1. Замещенные соединения бензо [е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) в которой

Α₁ представляет собой вместе с атомами углерода, к которому он присоединен, фенильную группу или пиридильную группу,

Ζ представляет собой водород,

К₁ представляет собой группу, выбранную из водорода и группы -С(О)-К₅, в которой К₅ представляет собой группу, выбранную из водорода и таких групп, как линейный или разветвленный С1-С6алкокси и арилокси, где под «арилом» подразумевают такую группу, как фенил,

К₂ представляет собой атом водорода или группу формулы -СИ₂СИ₂О-К₈, в которой

К₈ представляет собой группу, выбранную из водорода и -8(О)К₆, где К₆ представляет собой линейный или разветвленный С₁-С₆-алкил и ΐ представляет собой число 2,

К₃ и К₄ каждый представляет собой линейный или разветвленный С₁-С₆-алкил, η представляет собой целое число от 1 до 6 включительно, а также их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

2. Замещенные соединения бензо [е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) по п.1, отличающиеся тем, что они представляют собой соединения формулы ДА) в которой К₁, К₂, К₃, К₄, Α₁, Ζ и η имеют значения, указанные для формулы (I), их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

3. Замещенные соединения бензо [е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) по п.1 или 2, отличающиеся тем, что они представляют собой соединения формулы (ГВ)

- 12 009697 в которой К₁, К₂, К₃, К₄, Ζ и η имеют значения, указанные выше, их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

4. Замещенные соединения бензо[е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) по п.1 или 2, отличающиеся тем, что они представляют собой соединения формулы ДС) в которой К₁, К₂, К₃, К₄, Ζ и η имеют значения, указанные выше, их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

5. Замещенные соединения бензо[е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) по любому из пп.1-4, отличающиеся тем, что К₁ представляет собой атом водорода или группу -С(О)-К₅, где К₅ более предпочтительно представляет собой атом водорода, их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

6. Замещенные соединения бензо[е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) по любому из пп.1-5, отличающиеся тем, что К₂ представляет собой атом водорода или группу -СН₂СН₂О-К₈, где К₈ более предпочтительно представляет собой атом водорода, их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

7. Замещенные соединения бензо [е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) в соответствии с любым из пп.1-6, отличающиеся тем, что η представляет собой целое число 2, их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

8. Замещенные соединения бензо[е][1,4]оксазино[3,2-д]изоиндола формулы (I) по п.1, которые представляют собой

2-[2-(диметиламино)этил]-5-гидроксибензо[а]пирроло[3,4-с]феноксазин-1,3-дион,

2-[2-(диэтиламино)этил]-5-гидроксибензо[а]пирроло[3,4-с]феноксазин-1,3-дион, 2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)-2,3-дигидробензо[а]пирроло[3,4-с]феноксазин-8карбальдегид-1,3-дион,

2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо[а]пирроло[3,4-с]-феноксазин-1,3-дион, 2-[2-(диметиламино)этил]-5-(2-гидроксиэтокси)бензо [е]пиридо [2',3':5,6][1,4]-оксазино [3,2д]изоиндол-1,3-дион, их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

9. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая в качестве активного компонента по крайней мере одно замещенное соединение бензо [е][1,4]оксазино [3,2д]изоиндола формулы (I) по любому из пп.1-8, самостоятельно или в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми инертными, нетоксичными наполнителями или носителями.

10. Фармацевтическая композиция по п. 9, пригодная в качестве лекарственного средства для лечения злокачественных опухолей.