DE69921611T2

DE69921611T2 - Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften

Info

Publication number: DE69921611T2
Application number: DE69921611T
Authority: DE
Inventors: Michael Ankersen
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Helsinn Therapeutics US Inc
Priority date: 1998-01-16
Filing date: 1999-01-15
Publication date: 2005-11-03
Anticipated expiration: 2019-01-16
Also published as: NO20003629D0; EP1047709A1; PL341707A1; CA2318558A1; WO1999036431A1; ATE281467T1; AU2046599A; IL137007A0; HUP0100777A3; JP4382279B2; EP1506969B1; AU766305B2; EP1506969A1; EP1047709B1; BR9906975A; TW589325B; CN1288467A; HUP0100777A2; ATE470671T1; JP2002509156A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die Erfindung betrifft Verbindungen, die durch die N-N-Struktur der nachstehenden Formel I gekennzeichnet sind, diese enthaltende Zusammensetzungen und deren Verwendung zur Behandlung von medizinischen Störungen, die aus einem Mangel an Wachstumshormon resultieren.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Ein Wachstumshormon ist ein Hormon, das das Wachstum des gesamten wachstumsfähigen Gewebes stimuliert. Zusätzlich ist bekannt, dass Wachstumshormon eine Anzahl an Wirkungen auf Stoffwechselprozesse, z.B. Stimulierung von Proteinsynthese und Mobilisierung von freier Fettsäure aufweist, und eine Verschiebung des Energiestoffwechsels von Kohlehydrat- zu Fettsäurestoffwechsel bewirkt. Ein Fehlen des Wachstumshormons kann zu einer Vielzahl von schweren medizinischen Störungen, z.B. Zwergwuchs führen.
Ein Wachstumshormon wird aus der Hypophyse freigesetzt. Die Freisetzung liegt entweder direkt oder indirekt unter strenger Kontrolle einer Anzahl an Hormonen und Neurotransmittern. Wachstumshormonfreisetzung kann durch Wachstumshormon freisetzendes Hormon (GHRH) stimuliert und durch Somatostatin gehemmt werden. In beiden Fällen werden die Hormone aus dem Hypothalamus freigesetzt, jedoch wird deren Wirkung primär über bestimmte in der Hypophyse lokalisierte Rezeptoren vermittelt. Andere die Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse stimulierende Verbindungen wurden ebenso beschrieben. Zum Beispiel setzen Arginin, L-3,4-Dihydroxyphenylalanin (L-Dopa), Glucagon, Vasopressin, PACAP (ein Adenylylzyklase der Hypophyse aktivierendes Peptid), Muscarinrezeptoragonisten und ein synthetisches Hexapeptid, GHRP (Wachstumshormon freisetzendes Peptid) entweder durch eine direkte Wirkung auf die Hypophyse oder durch Beeinflussen der Freisetzung von GHRH und/oder Somatostatin aus dem Hypothalamus endogenes Wachstumshormon frei.
Bei Störungen oder Zuständen, in welchen erhöhte Gehalte an Wachstumshormon erwünscht sind, trägt die Proteinnatur von Wachstumshormon zu allem möglichen bei, macht jedoch parenterale Verabreichung nicht zuverlässig. Weiterhin sind andere direkt wirkende, natürliche Sekretagoge, z.B. GHRH und PACAP längere Polypeptide, wobei aus diesem Grund parenterale Verabreichung bevorzugt ist.
Die Verwendung von bestimmten Verbindungen zum Erhöhen der Gehalte an Wachstumshormon in Säugern wurde früher z.B. in EP 18 072 , EP 83 864 , WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/10933, WO 88/9780, WO 83/02272, WO 91/18016, WO 92/01711, WO 93/04081, WO 9517422, WO 9517423, WO 9514666, WO 9419367, WO 9534311, WO 9602530, WO 9615148, WO 9613265, WO 9622997, WO 9635713, WO 9638471, WO 9632943, WO 9700894, WO 9706803, WO 9709060, WO 9707117, WO 9711697, WO 9722620, WO 9723508, WO 9724369 und WO 9734604 vorgeschlagen.
Die Zusammensetzung von Wachstumshormon freisetzenden Verbindungen ist für deren Wachstumshormon freisetzende Wirksamkeit sowie deren Bioverfügbarkeit wichtig. Es ist deshalb eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, neue Hydrazidverbindungen mit Wachstumshormon freisetzenden Eigenschaften bereitzustellen. Außerdem ist es eine Aufgabe, neue Wachstumshormon freisetzende Verbindungen (Wachstumshormonsekretagoge) bereitzustellen, die spezifisch und/oder selektiv sind und im Wesentlichen keine Nebenwirkungen, wie z.B. Freisetzung von LH, FSH, TSH, ACTH, Vasopressin, Oxytocin, Kortison und/oder Prolactin aufweisen. Es ist auch eine Aufgabe, Verbindungen bereitzustellen, die über gute orale Bioverfügbarkeit verfügen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Erfindungsgemäß werden neue Verbindungen bereitgestellt, die unter normalen Versuchsbedingungen in vitro direkt auf die Hypophysezellen wirken, um Wachstumshormon daraus freizusetzen.
Diese Wachstumshormon freisetzenden Verbindungen können in vitro als einheitliche Forschungswerkzeuge zum Verständnis unter anderem dessen, wie Wachstumshormon Sekretion mit dem Hypophysegehalt gesteuert wird, verwendet werden.
Außerdem können die Wachstumshormon freisetzenden Verbindungen der vorliegenden Erfindung auch in vivo verabreicht werden, um endogene Wachstumshormonfreisetzung zu erhöhen.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Demzufolge betrifft die vorliegende Erfindung eine Verbindung der allgemeinen Formel I
wobei R¹ und R² unabhängig Wasserstoff, oder
C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind;
R^3a Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder Aryl oder Hetaryl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, ist;
R^4a C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder C_1-7-Acyl ist;
R^5a Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder Aryl oder Hetaryl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, ist; oder
R^3a und R^4a zusammen mit den Stickstoffatomen, an welche sie gebunden sind, ein heterocyclisches System, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, bilden können, oder
R^3a und R^5a zusammen mit den Stickstoffatomen, an welche sie gebunden sind, ein heterocyclisches System, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, bilden können;
a und b unabhängig 0, 1 oder 2 sind;
G Wasserstoff, -O-(CH₂)_k-Aryl ist
ist, wobei R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵ und R³⁶ unabhängig Wasserstoff Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind;
k und l unabhängig 0, 1 oder 2 sind;
ist, wobei R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ und R⁹ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind;
n, m und q unabhängig 0, 1, 2 oder 3 sind;
p 0 oder 1 ist
M -CR¹¹=CR^11a-, Arylen, Hetarylen, -O-, -S- oder eine Valenzbindung ist;
R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind; oder
ist, wobei R¹, R⁸, R⁹ und R¹⁰ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind; oder
R⁷ und R⁸ oder R⁷ und R⁹ oder R⁸ und R⁹ gegebenenfalls -(CH₂)_i-U-(CH₂)_j- bilden können, wobei i und j unabhängig 1 oder 2 sind und U -O-, -S- oder eine Valenzbindung ist;
n und m unabhängig 0, 1, 2 oder 3 sind;
o und p unabhängig 0 oder 1 sind;
M -CR¹¹=CR^11a- Arylen, Hetarylen, -O-, -S-, oder eine Valenzbindung ist;
R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind; oder
ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Außerdem können die Verbindungen der Formel I beliebige optische Isomere davon in Form von abgetrennten, reinen oder teilweise gereinigten optischen Isomeren oder razemischen Gemischen davon umfassen.
In der Verbindung der allgemeinen Formel I liegen zwei chirale Kohlenstoffatome vor, die in R- und/oder S-Konfiguration vorliegen können. In einer Ausführungsform liegen beide chirale Kohlenstoffatome in der R-Konfiguration vor.
Weiterhin können die Verbindungen der Formel I eine oder mehrere Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindungen mit der Möglichkeit von geometrischer Isomerie aufweisen, und es ist beabsichtigt, dass mögliche Stereoisomere (E- oder Z-Isomere) im Umfang der Erfindung eingeschlossen sind, wenn nicht ein spezielles geometrisches Isomer spezifiziert ist.
In einer Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R¹ Wasserstoff. In einer anderen Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R¹ C_1-6-Alkyl, wie C_1-4-Alkyl, insbesondere Methyl.
In einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R² Wasserstoff. In einer anderen Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R² C_1-6-Alkyl, wie C_1-4-Alkyl, insbesondere Methyl.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R^3a Wasserstoff. In einer anderen Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R^3a C₁_₆-Alkyl, wie C_1-4-Alkyl, insbesondere Methyl.
In einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R^4a C_1-6-Alkyl, wie C_1-4-Alkyl, insbesondere Methyl. In einer anderen Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R^4a C_1-7-Acyl, wie C_2-4-Acyl, insbesondere Acetyl.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R^5a Wasserstoff. In einer anderen Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist R^5a C_1-6-Alkyl, wie C_1-4-Alkyl, insbesondere Methyl.
In einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I können R^3a und R^4a zusammen mit den Stickstoffatomen, an welche sie gebunden sind, ein heterocyclisches System bilden, das gegebenenfalls mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl substituiert ist. Ein solches heterocyclisches System kann aromatisch oder nicht-aromatisch und z.B. aus Pyrazol, Pyridazin, Triazin, Indazol, Phthalazin, Cinnolin, Pyrazolidin, Oxopyrazolidin oder Pyrazolin ausgewählt sein. In einer besonderen Ausführungsform ist das heterocyclische System Oxopyrazolidin.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I bilden R^3a und R^5a zusammen mit den Stickstoffatomen, an welche sie gebunden sind, ein heterocyclisches System, das gegebenenfalls mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl substituiert ist. Ein solches heterocyclisches System kann aromatisch oder nicht-aromatisch und z.B. aus Pyrazol, Pyridazin, Triazin, Indazol, Phthalazin, Cinnolin, Pyrazolidin oder Pyrazolin ausgewählt sein.
Bilden R^3a und R^4a ein heterocyclisches System, können R^4a und R^5a gleichermaßen ebenso ein heterocyclisches System bilden oder kann R^5a Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder Aryl oder Hetaryl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, sein.
Bilden R^3a und R^5a ein heterocyclisches System, können R^4a und R^5a gleichermaßen ebenso ein heterocyclisches System bilden oder kann R^4a C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder C_1-7-Acyl sein.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist a 1.
In einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist b 1. In einer anderen Ausführungsform ist b 2.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist G
wobei R²⁷ und R²⁸ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind. In einer weiteren Ausführungsform sind R²⁷ und R²⁸ beide Wasserstoff. In noch einer weiteren Ausführungsform ist G 1-Napthyl oder 2-Napthyl. In der Verbindung der vorstehenden Formel I ist G vorzugsweise 2-Naphtyl.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist G
wobei R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰ und R³¹ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind. In einer weiteren Ausführungsform sind R²⁷, R²⁸, R³⁰ und R³¹ Wasserstoff und ist R²⁹ Aryl. In noch einer weiteren Ausführungsform ist R²⁹ Phenyl. In der Verbindung der vorstehenden Formel I ist G vorzugsweise Biphenyl-4-yl.
In einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist G -O-(CH₂)_k-aryl, wobei k 0, 1 oder 2 ist. In einer weiteren Ausführungsform ist k 1. In der Verbindung der vorstehenden Formel I ist G vorzugsweise Benzyloxy.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist G
wobei R²⁷ und R²⁸ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind. In einer weiteren Ausführungsform sind R²⁷ und R²⁸ beide Wasserstoff. In noch einer weiteren Ausführungsform ist G 1H-Indol-3-yl.
In einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist J
wobei R³², R³³, R³⁴, R³⁵ und R³⁶ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind. In einer Ausführungsform sind R³², R³³, R³⁴, R³⁵ und R³⁶ alle Wasserstoff. J ist vorzugsweise Phenyl.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist J
wobei R³² und R³³ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind. In einer weiteren Ausführungsform sind R³² und R³³ beide Wasserstoff. J ist vorzugsweise 2-Thienyl.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist D
wobei R⁷, R⁸, R⁹ und R¹⁰ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind;
n und m unabhängig 0, 1, 2 oder 3 sind;
o und p unabhängig 0 oder 1 sind;
M -CR¹¹=CR^11a-, Arylen, -O- oder -S- ist;
R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind. In einer Ausführungsform ist R⁷ Wasserstoff. In einer zweiten Ausführungsform ist R⁷ C_1-6-Alkyl, insbesondere Methyl. In einer dritten Ausführungsform ist R⁸ Wasserstoff. In einer weiteren Ausführungsform ist R⁸ C_1-6-Alkyl, insbesondere Methyl. In noch einer weiteren Ausführungsform ist R⁹ Wasserstoff. In noch einer weiteren Ausführungsform ist R⁹ C_1-6-Alkyl, insbesondere Methyl.
In einer weiteren Ausführungsform bilden R⁸ und R⁹ -(CH₂)_i-U-(CH₂)_j-, wobei i und j unabhängig 1 oder 2 sind und U -O-, -S- oder eine Valenzbindung ist. In noch einer weiteren Ausführungsform ist U eine Valenzbindung. In noch einer weiteren Ausführungsform beträgt die Summe i + j 3.
In einer weiteren Ausführungsform ist n 0. In noch einer weiteren Ausführungsform ist m 0. In noch einer weiteren Ausführungsform ist m 1. In einer weiteren Ausführungsform ist o 0. In noch einer weiteren Ausführungsform ist p 0. In einer weiteren Ausführungsform ist p 1. In noch einer weiteren Ausführungsform ist M -CR¹¹=CR¹¹ ^a-aryl, -O-, oder -S-. In einer weiteren Ausführungsform ist M -CH=CH-. In noch einer weiteren Ausführungsform ist M Phenylen.
In noch einer weiteren Ausführungsform der Verbindung der Formel I ist D
wobei R⁷, R⁸, R⁹ und R¹⁰ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind;
n und m unabhängig 0, 1, 2, oder 3 sind;
o und p unabhängig 0 oder 1 sind;
M eine Valenzbindung ist;
R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind. In einer Ausführungsform ist R⁷ Wasserstoff. In einer zweiten Ausführungsform ist R⁷ Methyl. In einer dritten Ausführungsform ist R⁸ Wasserstoff. In einer weiteren Ausführungsform ist R⁸ C_1-6-Alkyl, insbesondere Methyl. In noch einer weiteren Ausführungsform ist R⁹ Wasserstoff. In noch einer weiteren Ausführungsform ist R⁹ C_1-6-Alkyl, insbesondere Methyl. In einer weiteren Ausführungsform ist n 0. In noch einer weiteren Ausführungsform ist m 0. In einer weiteren Ausführungsform ist m 1. In einer weiteren Ausführungsform ist o 0. In noch einer weiteren Ausführungsform ist p 0. In einer weiteren Ausführungsform ist p 1.
In der Verbindung der vorstehenden Formel I ist D vorzugsweise 3-Aminomethylphenyl, 4-Amino-4-methylpent(1E)enyl, N-Methyl-3-aminomethylphenyl, 3-(1-Aminocyclobutyl)-1-propenyl oder 1-Amino-1-methylethyl.
Bevorzugte Verbindungen der Formel I der Erfindung sind: (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-{N'-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethylamid
3-Aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)benzamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-4-(1-Aminocyclobutyl)but-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazincarbonylethyl]carbamoyl)ethyl)amid
2-Amino-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-2-methylpropionamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid
2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid
2-Amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl)carbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid
2-Amino-N-[(1R)-1-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropylcarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid
2-Amino-N-[(1R)-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropinamid
Die besonders bevorzugte Verbindung der vorstehend bevorzugten Verbindungen ist (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)-ethyl)amid. Allgemeines Verfahren
Verbindungen der allgemeinen Struktur I können aus mono-, di- oder trisubstituierten Hydrazinen oder Hydrazonen und geeignet geschützten Aminosäuren mit geeigneten Kupplungsreagenzien wie 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid und 1-Hydroxybenzotriazol oder anderen auf dem Fachgebiet bekannten Kupplungsreagenzien in einem geeigneten Lösungsmittel wie Dimethylformamid oder Dichlormethan hergestellt werden. Die geeigneten Aminosäuren können durch Verfahren, die auf dem Fachgebiet bekannt und z.B. von T.W. Green (Protective Groups in Organic Synthesis, 2. Ausg., John Wiley and Sons, New York 1991) beschrieben sind, geschützt und die Schutzgruppen können dadurch abgespalten werden.
Es wird angenommen, dass Verbindungen der Formel I durch Enzyme eine verbesserte Widerstandsfähigkeit gegenüber proteolytischer Zersetzung zeigen, da sie nicht natürlich sind, insbesondere, da die natürlichen Amidbindungen durch nichtnatürliche Amidbindungs-mimetika ersetzt sind. Es wird erwartet, dass die erhöhte Widerstandsfähigkeit gegenüber proteolytischer Zersetzung, kombiniert mit der reduzierten Größe der Verbindungen der Erfindung im Vergleich mit bekannten Hormon freisetzenden Peptiden, deren Bioverfügbarkeit verglichen mit derjenigen der in der Literatur des Fachgebiets vorgeschlagenen Peptide verbessert.
In den vorstehenden Strukturformeln und innerhalb der vorliegenden Beschreibung weisen die folgenden Begriffe die angegebenen Bedeutungen auf:
Die vorstehend spezifizierten C_1-6-Alkyl-, C_1-6-Alkylen-, C_1-4-Alkyl- oder C_1-4-Alkylengruppen sollen diejenigen Alkyl- oder Alkylengruppen von bezeichneter Länge in entweder linearer oder verzweigter oder cyclischer Konfiguration einschließen. Beispiele für lineares Alkyl sind Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl und Hexyl und deren entsprechenden zweiwertigen Einheiten wie Ethylen. Beispiele für verzweigtes Alkyl sind Isopropyl, sec-Butyl, tert-Butyl, Isopentyl und Isohexyl und deren entsprechenden zweiwertigen Einheiten wie Isopropylen. Beispiele für cyclisches Alkyl sind C_3-6-Cycloalkyl wie Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyklopentyl und Cyclohexyl und deren entsprechenden zweiwertigen Einheiten wie Cyclopropylen.
Die vorstehend spezifizierten C_1-6-Alkoxygruppen sollen diejenigen Alkoxygruppen von bezeichneter Länge in entweder linearer oder verzweigter oder cyclischer Konfiguration einschließen. Beispiele für lineares Alkoxy sind Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Butoxy, Pentoxy und Hexoxy. Beispiele für verzweigtes Alkoxy sind Isopropoxy, sec-Butoxy, tert-Butoxy, Isopentoxy und Isohexoxy. Beispiele für cyclisches Alkoxy sind Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy, Cyclopentyloxy und Cyclohexyloxy.
Die vorstehend spezifizierten C_1-7-Acylgruppen sollen diejenigen Acylgruppen von bezeichneter Länge in entweder linearer oder verzweigter oder cyclischer Konfiguration einschließen. Beispiele für lineares Acyl sind Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Valeryl usw. Beispiele für verzweigtes Acyl sind Isobutyryl, Isovaleryl, Pivaloyl usw. Beispiele für cyclisches Acyl sind Cyclopentylcarbonyl, Cyclohexylcarbonyl usw.
Im vorliegenden Kontext soll der Begriff „Aryl" einwertige, carbocyclische aromatische Ringeinheiten einschließen, die entweder monocyclisch, bicyclisch oder polycyclisch, z.B. ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Phenyl und Naphthyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Halogen, Amino oder Aryl, sind.
Im vorliegenden Kontext soll der Begriff „Arylen" zweiwertige carbocyclische aromatische Ringeinheiten einschließen, die entweder monocyclisch, bicyclisch oder polycyclisch, z.B. ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Phenylen, Naphthylen, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Halogen, Amino oder Aryl, sind.
Im vorliegenden Kontext soll der Begriff „Hetaryl" einwertige heterocyclische aromatische Ringeinheiten einschließen, die entweder monocyclisch, bicyclisch oder polycyclisch, z.B. ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Pyridyl, 1-H-Tetrazoyl-5-yl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Pyrimidinyl, Thiadiazolyl, Pyrazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Oxadiazolyl, Thienyl, Chinolinyl, Pyrazinyl oder Isothiazolyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Halogen, Amino oder Aryl, sind.
Im vorliegenden Kontext soll der Begriff „heterocyclisches System" aromatische sowie nicht-aromatische Ringeinheiten einschließen, die monocyclisch, bicyclisch oder polycyclisch sein können, und in deren Ringstruktur mindestens ein, wie ein, zwei oder drei Stickstoffatom(e) und gegebenenfalls ein oder mehrere wie ein oder zwei andere Heteroatom(e), z.B. Schwefel- oder Sauerstoffatome enthalten. Das heterocyclische System ist vorzugsweise ausgewählt aus Pyrazol, Pyridazin, Triazin, Indazol, Phthalazin, Cinnolin, Pyrazolidin, Pyrazolin, Aziridin, Dithiazin, Pyrrol, Imidazol, Pyrazol, Isoindol, Indol, Indazol, Purin, Pyrrolidin, Pyrrolin, Imidazolidin, Imidazolin, Pyrazolidin, Oxopyrazolidin, Pyrazolin, Piperidin, Piperazin, Indolin, Isoindolin, oder Morpholin.
Der Begriff „Halogen" soll Chlor (Cl), Fluor (F), Brom (Br), und Iod (I) einschließen.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können ein oder mehrere asymmetrische Zentren (chirale Kohlenstoffatome) enthalten, und es ist beabsichtigt, dass Stereoisomere wie abgetrennte, reine oder teilweise gereinigte Stereoisomere oder racemische Gemische davon im Umfang der Erfindung eingeschlossen sind.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können gegebenenfalls in einer pharmazeutisch verträglichen Salzform wie in Form eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes von Verbindungen der Formel I vorliegen, die diejenigen einschließen, die durch Umsetzen der Verbindung der Formel I mit einer anorganischen oder organischen Säure wie Salz-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Essig-, Phosphor-, Milch-, Malein-, Mandel-, Phthal-, Zitronen-, Glutar-, Glucon-, Methansulfon-, Salicyl-, Bernstein-, Wein-, Toluolsulfon-, Trifluoressig, Sulfamin- oder Fumarsäure und/oder Wasser hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel I können in Form eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes oder, wo geeignet, als Alkalimetall- oder Erdalkalimetall- oder Niederalkylammoniumsalz verabreicht werden. Es wird angenommen, dass solche Salzformen in etwa dieselbe Aktivitätsordnung wie die Formen der freien Base zeigen.
In einem anderen Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Arzneimittel, das als Wirkstoff eine Verbindung der allgemeinen Formel I oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel umfasst.
Eine Verbindung der vorliegenden Erfindung enthaltende Arzneimittel können durch herkömmliche Techniken, wie z.B. in Remington's Pharmaceutial Sciences, 1985 oder in Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. Ausg. (1995), beschrieben, hergestellt werden. Die Zusammensetzungen können in herkömmlichen Formen, z.B. Kapseln, Tabletten, Aerosolen, Lösungen, Suspensionen oder topischen Anwendungen vorkommen.
Der pharmazeutische Träger oder das pharmazeutische Verdünnungsmittel, die eingesetzt werden, können ein herkömmlicher fester oder flüssiger Träger sein. Beispiele für feste Träger sind Laktose, Terra alba, Saccharose, Cyclodextrin, Talkum, Gelatine, Agar, Pektin, Akaziengummi, Magnesiumstearat, Stearinsäure oder Niederalkylether von Zellulose. Beispiele für flüssige Träger sind Sirup, Erdnussöl, Olivenöl, Phospholipide, Fettsäuren, Fettsäureamine, Polyoxyethylen oder Wasser.
Gleichermaßen kann der Träger oder das Verdünnungsmittel ein beliebiges, auf dem Fachgebiet bekanntes Material zur nachhaltigen Freisetzung wie Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat, allein oder mit einem Wachs gemischt, einschließen.
Wird ein fester Träger zur oralen Verabreichung verwendet, kann das Präparat in Tablettenform vorliegen, in eine Hartgelatinekapsel in Pulver- oder Pelletform eingefüllt sein oder in Form eines Trochus oder einer Pastille vorliegen. Die Menge an festem Träger variiert breit, beträgt jedoch gewöhnlich etwa 25 mg bis etwa 1 g. Wird ein flüssiger Träger verwendet, kann das Präparat in Form eines Sirups, einer Emulsion, einer Weichgelatinekapsel oder einer sterilen injizierbaren Flüssigkeit wie als wässrige oder nicht-wässrige flüssige Suspension oder Lösung vorliegen.

Eine typische Tablette, die durch herkömmliche Tablettiertechniken hergestellt werden kann, kann folgendes enthalten: Kern:

Wirkverbindung (als freie Verbindung oder Salz davon)	100 mg
Kolloidales Siliciumdioxid (Aerosil)	1,5 mg
Zellulose, microkrist. (Avicel)	70 mg
Modifizierter Zellulosegummi (Ac-Di-Sol)	7,5 mg
Magnesiumstearat

Beschichtung:

HPMC etwa	9 mg
Mywacett 9-40 T etwa	0,9 mg

Zur nasalen Verabreichung kann das Präparat eine Verbindung der Formel I enthalten, die in einem flüssigen Träger, insbesondere einem wässrigen Träger zur Aerosol-Verabreichung gelöst oder suspendiert ist. Der Träger kann Zusätze wie Löslichmacher, z.B. Propylenglykol, oberflächenaktive Mittel, Absorptionsver besserer wie Lecithin (Phosphatidylcholin) oder Cyclodextrin oder Konservierungsmittel wie Parabene enthalten.
Im Allgemeinen werden die Verbindungen der vorliegenden Erfindung in Dosierungseinheitsform dispergiert, die 50-200 mg Wirkstoff zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger pro Dosierungseinheit umfasst.
Die Dosierung der erfindungsgemäßen Verbindungen beträgt geeigneterweise 0,1-500 mg/Tag, z.B. etwa 5 bis etwa 50 mg, wie etwa 10 mg pro Dosis, wenn sie an Patienten, z.B. Menschen, als Arzneimittel verabreicht werden.
Es zeigte sich, dass Verbindungen der allgemeinen Formel I die Fähigkeit zum Freisetzen von endogenem Wachstumshormon in vivo aufweisen. Die Verbindungen können deshalb bei der Behandlung von Zuständen, die erhöhte Plasmagehalte an Wachstumshormon benötigen, wie bei Menschen oder älteren Patienten oder Viehbestand, welchem es an Wachstumshormon mangelt, verwendet werden.
Folglich betrifft die vorliegende Erfindung in einem besonderen Aspekt ein Arzneimittel zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse, wobei die Zusammensetzung als Wirkstoff eine Verbindung der allgemeinen Formel I oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel umfasst.
In einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse, wobei das Verfahren das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel I oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon an einen dies benötigenden Patienten umfasst.
In noch einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel I oder eines pharmazeutisch ver träglichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse.
Dem Fachmann ist es bekannt, dass die gegenwärtigen und möglichen Verwendungen von Wachstumshormon bei Menschen verschiedenartig und zahlreich sind. Folglich können Verbindungen der Formel I zum Zwecke des Stimulierens der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse verabreicht werden und dann selbst ähnliche Wirkungen oder Verwendungen als Wachstumshormon aufweisen. Die Verwendungen von Wachstumshormon können wie folgt zusammengefasst werden: Stimulierung von Wachstumshormonfreisetzung bei älteren Menschen, Verhütung von katabolischen Nebenwirkungen von Glucocorticoiden, Verhütung und Behandlung von Osteoporose, Behandlung von chronischem Müdigkeitssyndrom (chronic fatigue syndrom, CFS), Behandlung von akutem Müdigkeitssyndrom und Muskelverlust in Folge von Wahl-Operation, Stimulierung des Immunsystems, Beschleunigung der Wundheilung, Beschleunigung von Knochenfrakturheilung, Beschleunigung von komplizierten Brüchen, z.B. Ablenkung von Osteogenese, Behandlung von sekundär mit Brüchen verbundenem Schwund, Behandlung von Wachstumsverzögerung, Behandlung von Wachstumsverzögerung als Ergebnis von Nierenversagen oder -insuffizienz, Behandlung von Kardiomyopathie, Behandlung von chronischer Lebererkrankung, Behandlung von Thrombocytopänie, Behandlung von Crohn-Erkrankung, Behandlung von Kurzdarm-Syndrom, Behandlung von chronischer obstruktiver Pulmonalerkrankung (chronic obstructive pulmonary disease, COPD), Behandlung von mit Transplantation verbundenen Komplikationen, Behandlung von physiologischer Kurzstatur, einschließlich Kinder mit einem Mangel an Wachstumshormon und mit chronischer Erkrankung verbundener Kurzstatur, Behandlung von Fettsucht und mit Fettsucht verbundener Wachstumsverzögerung, Behandlung von Anorexie, Behandlung von mit dem Prader-Willi-Syndrom und dem Turner-Syndrom verbundener Wachstumsverzögerung; Erhöhen der Wachstumsgeschwindigkeit eines Patienten mit teilweisem Wachstumshormonunempfindlichkeitssyndrom; Beschleunigung der Wiedergewinnung und Reduzierung der Hospitalisierung von Verbrennungspatienten; Behandlung von Intrauterinwachstumsverzögerung, Skelettdysplasie, Hyperkortisolismus und Cushing-Syndrom; Einbringen von pulsierender Wachstumshormonfreisetzung; Ersatz von Wachstumshormon in Stresspatienten, Behandlung von Osteochondrodysplasie, Noonan-Syndrom, Schizophrenie, Depressionen, Alzheimer-Krankheit, verzögerte Wundheilung und psychosoziale Deprivation, Behandlung von Pulmonaldysfunktion und Ventilationsabhängigkeit, Behandlung von Herzversagen oder damit verbundener vaskulärer Dysfunktion, Behandlung von verschlechterter Herzfunktion, Behandlung oder Verhütung von Herzinfarkt, Senken des Blutdrucks, Schutz gegen ventrikuläre Dysfunktion oder Verhütung von Reperfusions-Vorfällen; Behandlung von Erwachsenen bei chronischer Dialyse; Minderung von proteinkatabolischen Reaktionen nach Haupt-Operation, Reduzieren von Kachexie und Proteinverlust aufgrund von chronischer Erkrankung wie Krebs oder AIDS; Behandlung von Hyperinsulinämie, einschließlich Nesidioblastose, helfsmäßige Behandlung zum Einsetzen des Eisprungs; Stimulieren von thymischer Entwicklung und Verhütung von mit dem Alter verbundenem Abfall von thymischer Funktion, Behandlung von immununterdrückten Patienten, Behandlung von Sarkopänie, Behandlung von Schwund in Verbindung mit AIDS; Verbesserung der Muskelstärke, Mobilität, Beibehalten der Hautdicke, Stoffwechselhomöostase, Nierenhomöostase bei gebrechlichen älteren Menschen, Stimulierung von Osteoblasten, Knochenwiederaufbau und Knorpelwachstum; Regulierung der Futteraufnahme; Stimulierung des Immunsystems bei Begleittieren und Behandlung von Altersstörung bei Begleittieren, Wachstumsunterstützer beim Viehbestand und Stimulierung von Wollwachstum bei Schafen und Behandlung von Stoffwechsel-Syndrom (Syndrom X). Außerdem können die Verbindungen der Formel I bei der Behandlung von Insulinresistenz, einschließlich NIDDM bei Säugern, z.B. Menschen, verwendet werden. Es wird weiterhin angenommen, dass die vorliegenden Verbindungen der Formel I die Schlafqualität verbessern und den relativen Hyposomatotropismus von Vergreisung aufgrund starker Erhöhung des REM-Schlafes und einer Verminderung der REM-Latenz verbessern können.
Für die vorstehenden Indikationen variiert die Dosierung abhängig von der eingesetzten Verbindung der Formel I, dem Verabreichungsmodus und der gewünschten Therapie. Jedoch werden im Allgemeinen Dosierungen zwischen täglich 0,0001 und 100 mg/kg Körpergewicht, vorzugsweise täglich etwa 0,001 bis etwa 50 mg/kg Körpergewicht an Patienten und Tiere verabreicht, um eine effektive Freisetzung von endogenem Wachstumshormon zu erhalten. Außerdem weisen die Verbindungen der Formel I keine oder im Wesentlichen keine Nebenwirkungen wie Nebenwirkungen, die z.B. Freisetzung von LH, FSH, TSH, ACTH, Vasopressin, Oxytocin, Kortison und/oder Prolaktin sind, auf, wenn sie in den vorstehenden Dosierungsgehalten verabreicht werden. Gewöhnlich umfassen Dosierungsformen, die zur oralen, nasalen, pulmonalen oder transdermalen Verabreichung geeignet sind, etwa 0,0001 mg bis etwa 100 mg, vorzugsweise etwa 0,001 mg bis etwa 50 mg der Verbindungen der Formel I, gemischt mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel.
Gegebenenfalls umfassen die Arzneimittel der Erfindung eine Verbindung der Formel I, kombiniert mit einer oder mehreren Verbindungen, die eine andere Aktivität zeigen, z.B. ein antibiotisches oder pharmakologisch aktives Material.
Der Verabreichungsweg kann ein beliebiger Weg, der die Wirkverbindung effektiv zu der geeigneten oder gewünschten Wirkungsstelle transportiert, wie oral, nasal, pulmonal, transdermal oder parenteral sein, wobei der orale Weg bevorzugt ist.
Neben der pharmazeutischen Verwendung der Verbindungen der Formel I können sie in vitro als Werkzeuge zum Untersuchen der Steuerung von Wachstumshormonfreisetzung nützlich sein.
Verbindungen der Formel I können auch in vivo als Werkzeuge zum Bewerten der Wachstumshormonfreisetzungsfähigkeit der Hypophyse nützlich sein. Zum Beispiel können Serumproben, die vor und nach Verabreichung dieser Verbin dung an Menschen entnommen wurden, auf Wachstumshormon untersucht werden. Ein Vergleich des Wachstumshormons in jeder Serumprobe würde direkt die Fähigkeit der Hypophyse des Patienten zum Freisetzen von Wachstumshormon bestimmen.
Verbindungen der Formel I können an handelswichtige Tiere zum Erhöhen deren Wachstumsgeschwindigkeit oder -grads und zum Erhöhen von Milch- oder Wollproduktion oder zur Behandlung von Krankheiten verwendet werden.
Eine weitere Verwendung von Wachstumshormonsekretagogonverbindungen der Formel I ist die Kombination mit anderen Sekretagogenen wie GHRP (2 oder 6), GHRH und dessen Analoga, Wachstumshormon und dessen Analoga oder Somatomedine, einschließlich IGF-1 und IGF-2.
Pharmakologische Verfahren
Verbindungen der Formel I können in vitro auf deren Effizienz und Wirksamkeit zum Freisetzen von Wachstumshormon in primären Hypophysekulturen von Ratten bewertet werden, und solch eine Bewertung kann wie nachstehend beschrieben durchgeführt werden.
Die Isolierung von Rattenhypophysezellen ist eine Modifikation von O. Sartor et al, Endocrinology 116, 1985, S. 952-957. Männliche Albino-Sprague-Dawley-Ratten (250 +/- 25 Gramm) wurden von Møllegaard, Lille Skensved, Dänemark, erworben. Die Ratten wurden in Gruppenkäfigen (vier Tiere/Käfig) behaust und in Räume mit 12-stündigem Lichtzyklus gegeben. Die Raumtemperatur variierte von 19-24°C und die Feuchtigkeit von 30-60%.
Die Ratten wurden enthauptet und die Hypophyse entfernt. Die neurointermediären Lappen wurden entfernt, und das übrige Gewebe wurde sofort in eisgekühlten Isolierungspuffer (Gey-Medium (Gibco 041-04030), ergänzt mit 0,25% D- Glucose, 2% nicht-essentiellen Aminosäuren (Gibco 043-01140) und 1% Rinderserumalbumin (BSA) (Sigma A-4503), gegeben. Das Gewebe wurde in kleine Stücke geschnitten und in Isolierungspuffer, ergänzt mit 3,8 mg/ml Trypsin (Worthington #3707 TRL-3) und 330 mg/ml DNase (Sigma D-4527), überführt. Dieses Gemisch wurde bei 70 Umdrehungen/Minute für eine Dauer von 35 Minuten bei 37°C in einer 95/5%igen Atmosphäre von O₂/CO₂ inkubiert. Das Gewebe wurde dann drei mal im vorstehenden Puffer gewaschen. Unter Verwendung einer Standard-Pasteurpipette wurde das Gewebe dann in einzelne Zellen gesaugt. Nach Dispersion wurden die Zellen durch einen Nylonfilter (160 mm) filtriert, um nicht aufgeschlossenes Gewebe zu entfernen. Die Zellsuspension wurde drei mal mit Isolierungspuffer, ergänzt mit Trypsinhemmstoff (0,75 mg/ml, Worthington #2829), gewaschen und schließlich in Kulturmedium DMEM (Gibco 041-01965), ergänzt mit 25 mM HEPES (Sigma H-3375), 4 mM Glutamin (Gibco 043-05030H), 0,075% Natriumbikarbonat (Sigma S-8875), 0,1% nicht-essentiellen Aminosäuren, 2,5% fötales Kalbserum (FCS, Gibco 011-06290), 3% Pferdeserum (Gibco 034-06050), 10% frischem Ratttenserum, 1 nM T₃ (Sigma T-2752) und 40 mg/l Dexamethason (Sigma D-4902), pH 7,3, auf eine Dichte von 2 × 10⁵ Zellen/ml resuspendiert. Die Zellen wurden in Mikrotiterplatten (Nunc, Dänemark), 200 ml/Mulde, gekeimt und für eine Dauer von 3 Tagen bei 37°C und 8% CO₂ gezüchtet.
Verbindungstest
Nach dem Züchten wurden die Zellen zwei mal mit Stimulierungspuffer (Hanks Balanced Salt Solution (Gibco 041-04020), ergänzt mit 1% BSA (Sigma A-4503), 0,25% D-Glucose (Sigma G-5250) und 25 mM HEPES (Sigma H-3375), pH 7,3), gewaschen und für eine Dauer von 1 Stunde bei 37°C vorinkubiert. Der Puffer wurde durch 90 ml Stimulierungspuffer (37°C) ausgetauscht. 10 ml Testverbindungslösung wurden zugesetzt und die Platten für eine Dauer von 15 Minuten bei 37°C und 5% CO₂ inkubiert. Das Medium wurde abdekantiert und auf GH-Gehalt in einem Testsystem des Typs rGH SPA analysiert.
Alle Verbindungen wurden in Dosen im Bereich von 10 pM bis 100 mM getestet. Eine Dosisansprechbeziehung wurde unter Verwendung der Hill-Gleichung (Abbildung P, Biosoft) konstruiert. Die Effizienz (maximales freigesetztes GH, E_max) wurde in % des E_max von GHRP-6 ausgedrückt. Die Wirkung (EC₅₀) wurde als die Konzentration bestimmt, die die Hälfte der maximalen Stimulierung der GH-Freisetzung induzierte.
Verbindungen der Formel I können auf deren Stoffwechselstabilität unter Verwendung des nachstehend beschriebenen Verfahrens bewertet werden:
Die Verbindung wird mit einer Konzentration von 1 mg/ml in Wasser gelöst. 25 ml dieser Lösung werden zu 175 ml der jeweiligen Enzymlösung (erhalten in einem Enzym:Substrat-Verhältnis (g/g) von etwa 1:5), zugesetzt. Die Lösung wird bei 37°C über Nacht stehen gelassen. 10 ml der verschiedenen Zersetzungslösungen werden gegen eine entsprechende Null-Probe unter Verwendung von Fließinjektions-Elektrosprüh-Massenspektrometrie (ESMS) mit ausgewähltem Ionenüberwachen des Molekülions analysiert. Verminderte sich das Signal verglichen mit der Null-Probe um mehr als 20%, wird das Übrige der Lösung durch HPLC und Massenspektrometrie analysiert, um den Grad und die Stelle(n) von Zersetzung genau zu identifizieren.
Verschiedene Standardpeptide (ACTH 4-10, Angiotensin 1-14 und Glucagon), wurden in die Stabilitätstests eingeschlossen, um die Fähigkeit der verschiedenen Lösungen zum Zersetzen von Peptiden nachzuweisen.
Standardpeptide (Angiotensin 1-14, ACTH 4-10 und Glucagon) wurden von Sigma, Mo, USA, erworben.
Enzyme (Trypsin, Chymotrypsin, Elastase, Aminopeptidase M und Carboxypeptidase Y und B) wurden alle von Böhringer Mannheim GmbH (Mannheim, Deutschland) erworben.
Pankreatischer Enzym-Mix: Trypsin, Chymotrypsin und Elastase in 100 mM Ammoniumbicarbonat, pH 8,0 (alle Konzentrationen 0,025 mg/ml).
Carboxypeptidase-Mix: Carboxypeptidase Y und B in 50 mM Ammoniumacetat, pH 4,5 (alle Konzentrationen 0,025 mg/ml).
Amminopeptidase-M-Lösung: Aminopeptidase M (0,025 mg/ml) in 100 mM Ammoniumbicarbonat, pH 8,0.
Massenspektrometrische Analyse wurde unter Verwendung von zwei verschiedenen Massenspektrometern durchgeführt. Ein Dreifach-Quadrupol-Instrument des Typs Sciex API III LC-MS (Sciex Instruments, Thornhill, Ontario), ausgestattet mit einer Elektronensprühionenquelle und einem Geschwindigkeitsfilter-Plasmadesorptionsinstrument des Typs Bio-Ion 20 (Bio-Ion Nordic AB, Uppsala, Schweden).
Die Mengenbestimmung der Verbindungen (vor und nach Zersetzung) wurde auf dem API-III-Instrument unter Verwendung einer einzelnen Ionenüberwachung des fraglichen Molekülions unter Fließinjektion des Analysats durchgeführt. Der flüssige Fluss (MeOH: Wasser 1:1) von 100 ml/min wurde durch eine HPLC-Einheit des Typs ABI 140B (Perkin Elmer Applied Biosystems Divisions, Foster City, CA) gesteuert. Die Instrumentparameter wurden auf Standardbetriebsbedingungen eingestellt und das SIM-Überwachen unter Verwendung des intensivsten Molekülions (in den meisten Fällen entsprach dies dem doppelt geladenen Molekülion) durchgeführt.
Die Identifizierung von Zersetzungsprodukten beinhaltete weiterhin die Verwendung von Plasmadesorptionsmassenspektrometrie (PDMS) unter Ausbringen der Probe auf mit Nitrozellulose beschichtete Ziele und Standardinstrumenteinstellungen. Die Genauigkeit der hierdurch bestimmten Massen ist im Allgemeinen besser als 0,1%.
Die Abtrennung und Isolierung von Zersetzungsprodukten wurde unter Verwendung einer Umkehrphasensäule des Typs HY-TACH C-18 mit 4,6 × 105 mm (Hewlett Packard Company, Palo Alto, CA) mit einem Acetonitrilstandard durchgeführt: TFA-Abtrennungsgradient. Das verwendete HPLC-System war HP1090M (Hewlett Packard Company, Palo Alto, CA).
Experimentalteil
Das Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I und diese enthaltenden Präparaten ist weiterhin in folgenden Beispielen veranschaulicht, die jedoch nicht als Beschränkung angesehen werden sollen.
Die Strukturen der Verbindungen werden entweder durch Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC), Kernmagnetresonanz (NMR, Bruker 400 MHz) oder Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) festgestellt. NMR-Verschiebungen (δ) sind in Parts per Million (ppm) angegeben, und nur ausgewählte Peaks sind angegeben. Schmp. ist Schmelzpunkt und ist in °C angegeben. Säulenchromatographie wurde unter Verwendung der durch W.C. Still et al., J. Org. Chem. 1978, 43, 2923-2925 auf Silicagel 60 von Merck (Art. 9385) durchgeführt. Als Ausgangsmaterialen verwendete Verbindungen sind entweder bekannte Verbindungen oder Verbindungen, die leicht durch an sich bekannte Verfahren hergestellt werden können. Die verwendete Methanol/Ammoniak-Verbindung ist eine 10%ige Ammoniaklösung in Methanol.
HPLC (Verfahren A1):
Die RP-HPLC-Analyse wurde unter Verwendung von UV-Detektion bei 214 nm und einer LI-Säule des Typs Hibar LiChrosorb RP-18 (5 μm) durchgeführt, die mit 1 ml/min eluiert wurde. Zwei Lösungsmittelsysteme wurden verwendet: Lösungsmittelsystem I: 0,1% Trifluoressigsäure in Acetonitril. Lösungsmittelsystem II: 0,1% Trifluoressigsäure in Wasser. Die Säule wurde mit einem Gemisch, zusammengesetzt aus 20% Lösungsmittelsystem I und 95% Lösungsmittelsystem II, äquilibriert. Nach Injektion der Probe ließ man einen Gradienten aus 20% bis 80% Lösungsmittelsystem I in Lösungsmittelsystem II über eine Dauer von 30 Minuten durchlaufen. Der Gradient wurde dann auf 100% Lösungsmittelsystem I über eine Dauer von 5 Minuten gestreckt, gefolgt von isokratischer Elution mit 100% dieses Systems für eine Dauer von 5 Minuten. Die RP-Analyse wurde unter Verwendung von UV-Detektionen bei 214, 254, 276 und 301 nm auf einer 5 m langen Silica- Säule des Typs 218TP54 mit 4,6 mm × 250 mm (The Separations Group, Hesperia) durchgeführt, die mit 1 ml/min bei 42°C eluiert wurde. Die Säule wurde mit 5% Acetonitril, in einem Puffer, bestehend aus 0,1 M Ammoniumsulfat, der auf pH 2,5 mit 4M Schwefelsäure eingestellt war, äquilibriert. Nach Injektion wurde die Probe durch einen Gradienten von 5% bis 60% Acetonitril in demselben Puffer innerhalb von 50 Minuten eluiert.
HPLC (Verfahren B1):
Die RP-HPLC-Analyse wurde unter Verwendung von UV-Detektion bei 214 nm und einer Säule des Typs Hibar LiChrosorb RP-18 (5 μm) 250-4 (Merck), die mit 1 ml/min eluiert wurde, durchgeführt. Zwei Lösungsmittelsysteme wurden verwendet: Lösungsmittelsystem I: 0,1% Trifluoressigsäure in Acetonitril. Lösungsmittel II: 0,1% Trifluoressigsäure in Wasser. Die Säule wurde mit einem Gemisch, zusammengesetzt aus 20% Lösungsmittelsystem I und 95% Lösungsmittelsystem II, äquilibriert. Nach Injektion der Probe ließ man einen Gradienten aus 20% bis 80% des Lösungsmittelsystems I in Lösungsmittelsystem II über eine Dauer von 30 min durchlaufen. Der Gradient wurde dann auf 100% Lösungsmittelsystem II über eine Dauer von 5 Minuten gestreckt, gefolgt von isokratischer Elution mit 100% dieses Systems für eine Dauer von 5 Minuten. Die RP-Analyse wurde unter UV-Detektionen bei 214, 254, 276 und 301 nm über einer 5 m langen Silica-Säule des Typs 218TP54 mit 4,6 mm × 250 mm (The Separations Group, Hesperia), die mit 1 ml/min bei 42°C eluiert wurde, durchgeführt. Die Säule wurde mit 5% (Acetonitril + 0,1% TFA) in einer wässrigen Lösung von TFA in Wasser (0,1%) äquilibriert. Nach Injektion wurde die Probe durch einen Gradienten aus 5% bis 60% (Acetonitril + 0,1% TFA) in demselben wässrigen Puffer innerhalb von 50 Minuten eluiert.
HPLC (Verfahren H8):
Die HPLC-Analyse wurde unter Verwendung eines Millenium-Systems von Waters^® unter Verwendung einer 3,5 m langen Symmetriesäule des Typs Waters^® C-18 mit 3 mm × 150 mm durchgeführt. Die Säule wurde auf 42°C erwärmt und mit einem linearen Gradienten aus 5 bis 90% Acetonitril, 85 bis 0% Wasser und 10% Trifluoressigsäure (0,5%) in Wasser für eine Dauer von 15 Minuten mit einer Fließgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert.
Die LC-MS-Analysen wurden auf einem System des Typs PE Sciex API 100 LC/MS unter Verwendung einer 3,5 m langen Symmetriesäule des Typs Waters^® C-18 mit 3 mm × 150 mm und eines positiven Ionensprühs mit einer Fließgeschwindigkeit von 20 ml/min durchgeführt. Die Säule wurde mit einem linearen Gradienten aus 5 bis 90% Aetonitril, 85 bis 0% Wasser und 10% Trifluoressigsäure (0,1%)/Wasser innerhalb von 15 min mit einer Fließgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert.
Beispiel 1
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
N'-Acetylhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung aus tert-Butylcarbamat (1,0 g, 7,6 mmol) und Pyridin (3,1 ml) in Methylenchlorid (5 ml) wurde langsam Essigsäureanhydrid (1,5 ml) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde zu Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und mit Wasser (2 × 10 ml) und Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen und getrocknet (MgSO₄), filtriert und in Vakuum eingeengt, um 0,95 g N'-Acetylhydrazincarbonsäure-tert-butylester als gelbes Öl zu erhalten.
LC-MS: R_t = 5,39, m/z = 349,6 (m + 1)
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,5 (s, 9H, (CH₃)₃C-O); 2,05 (s, 3H, CH₃CO) N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
N'-Acetylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,95 g, 5,45 mmol) wurde in Methylenchlorid (10 ml) gelöst, und Trifluoressigsäure (10 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch bei Raumtemperatur für eine Dauer von 1 Stunde gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und 3 mal mit Methylenchlorid abgezogen, um 1,0 g Essigsäurehydrazid zu erhalten. Dann wurde (2R)-2-(tert-Butoxycarbonylmethylamino)-3-phenylpropionsäure (0,76 g, 2,73 mmol) in einem Gemisch aus Dimethylformamid (3 ml) und Methylenchlorid (6 ml) gelöst, und ein Gemisch aus 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,45 g, 3,28 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,62 g, 3,28 mmol) wurde zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 20 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch aus Essigsäurehydrazid (1,0 g, 5,45 mmol) und Diisopropylethylamin (1,87 ml) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Ethylacetat (50 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (50 ml) gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit Ethylacetat (3 × 50 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Schichten wurden mit Wasser (2 × 50 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen und getrocknet (MgSO₄), filtriert, zu einem Öl eingeengt, und über Silica (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 0,81 g N-[(1R)- 2-(N-Acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester als gelbes Öl zu erhalten.
LC-MS R_t = 9,34, m/z = 336,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 10,17 min (H8)
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,32 + 1,40 (2s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer); 2,05 (s, 3H, COCH₃); 2,78 (s, 3H, N-CH₃) N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester (0,81 g, 2,42 mmol) wurde in Methylenchlorid (5 ml) gelöst, und Trifluoressigsäure (5 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch bei Raumtemperatur für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und 3 mal mit Methylenchlorid abgezogen und das übrige Öl über Silica (40 g) mit Methylenchlorid:(Methanol/Ammoniak) (9:1) chromatographiert, um 0,41 g Essigsäure-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazid als amorphes Pulver zu erhalten.
Dann wurde (2R)-2-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)-propionsäure (0,63 g, 1,92 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) gelöst, und ein Gemisch aus 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,26 g, 1,92 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,37 g, 1,92 mmol) wurde zugesetzt und für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Ein Gemisch aus Essigsäure- N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazid (0,41 g, 1,74 mmol) und DIEA (0,39 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt.
Methylenchlorid (50 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (50 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit wässrigem Natriumbicarbonat (10 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen und getrocknet (MgSO₄), filtriert, zu einem Öl eingeengt und über Silica (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:4) chromatographiert, um 0,59 g von N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester als Öl zu erhalten.
LC-MS R_t = 13,68 min, m/z = 547,2 (m + 1)
HPLC: R_t = 13,53 min (H8) (2E)-5-amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
Einer Lösung von N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-N'-Acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester (0,59 g, 1,08 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurde Trifluoressigsäure (5 ml) bei 0°C zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 90 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen. Das erhaltene Öl wurde in Methanol/Ammoniak (2 ml) gelöst, und Methylenchlorid (20 ml) und Silicagel (5 g) wurden zugesetzt, und es wurde im Va kuum eingeengt. Die erhaltene Pulver wurde durch Filtration mit Methylenchlorid (100 ml) und Methylenchlorid:(Methanol/Ammoniak) (9:1) extrahiert, und die vereinten Extrakte wurden im Vakuum eingeengt, um 0,41 g Rohprodukt als Schaum zu erhalten.
Dann wurde (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (0,21 g, 0,89 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) gelöst, und ein Gemisch aus 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,13 g, 0,98 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,17 g, 0,89 mmol) wurden zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch aus dem vorstehenden Rohprodukt (0,40 g, 0,89 mmol) und Diisopropylethylamin (0,20 ml) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt.
Methylenchlorid (50 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit wässrigem Natriumbicarbonat (10 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, zu 0,42 g eines lohfarbenen Schaums eingeengt. Der Schaum wurde in Methylenchlorid (5 ml) gelöst, auf 0°C abgekühlt, und Trifluoressigsäure (5 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 45 Minuten gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Methylenchlorid (50 ml) und Wasser (10 ml) abgeschreckt und auf einen pH-Wert von ~7 mit festem Natriumbicarbonat titriert. Die organische Schicht wurde abgetrennt und mit Wasser (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt.
Das erhaltene Produkt wurde in Acetonitril/Wasser 1:20 (10 ml) gelöst und auf eine Patrone des Typs C-18 Sep-Pak Classic^© (2,0 g, erworben von Waters^TM), die mit Acetonitril (100 ml) und Wasser (100 ml) vorgewaschen war, aufgebracht. Dann ließ man einen Gradient aus einem Eluenten, bestehend aus Wasser/Acetonitril/Trifluoressigsäure (10, 15, 20 und 25% Acetonitril in Wasser/0,1% Trifluoressigsäure), die Sep-Pak^© (2 g) durchlaufen. Die relevanten Fraktionen wurden vereinigt und auf 0,19 g des Trifluoressigsäuresalzes vor (2E)-5-Amino- 5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid als weißes amorphes Pulver lyophilisiert.
LC-MS R_t = 9,21 min, m/z = 572,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 26,45 min (A1), R_t = 28,40 (B1)
Beispiel 2
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
N'-Acetyl-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von N-Methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,62 g, 4,20 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurde Essigsäureanhydrid (0,79 ml, 8,40 mmol) und Pyridin (1,36 ml, 16,80 mmol) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (3 × 10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum ein geengt, um 0,32 g (41%) N'-Acetyl-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester als Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,45 + 1,48 (2s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer); 1,98 (s, 3H, COCH₃); 3,14 + 3,17 (2s, 3H, N-CH₃, rotamer) Essigsäure-N'-methylhydrazid
Einer Lösung von N'-Acetyl-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,3 g, 1,59 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 60 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen, um 0,32 g (100%) Essigsäure-N'-methylhydrazid-trifluoressigsäure als dünnes Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 2,13 (s, 3H, COCH₃); 2,98 (s, 3H, N-CH₃) N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butyl-ester
Einer Lösung von (2R)-2-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamin)-3-phenylpropionsäure (0,27 g, 0,96 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,13 g, 0,96 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid-Hydrochlorid (0,18 g, 0,96 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt. Dann wurden Essigsäure-N'- methylhydrazid (0,19 g, 0,96 mmol) und Diisopropylethylamin (0,41 ml, 2,40 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (10 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt, um 0,35 g (125%) rohes N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester als farbloses Öl zu erhalten.
LC-MS: R_t = 10,29 min, m/z = 350,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 10,77 min (H8) Essigsäure-N'-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazid
Einer Lösung von N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester (0,35 g, 1,00 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zugesetzt und das Gemisch wurde für 30 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen und über Silicagel (40 g) mit Methylenchlorid:(Methanol/Ammoniak) (9:1) chromatographiert, um 110 mg (44%) Essigsäure-N'-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazid als Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,85 (s, 3H, COCH₃): 2,25 (s, 3H, N-CH₃): 3,05 (s, 3H, N-CH₃) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid
Einer Lösung von (2R)-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamin)-3-(2-naphthyl)propionsäure (0,18 g, 0,53 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,072 g, 0,53 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid-Hydrochlorid (0,10 g, 0,53 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt. Dann wurden Essigsäure-N'-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazid (0,11 g, 0,44 mmol) und Diisopropylethylamin (0,098 ml, 0,57 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (10 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, im Vakuum eingeengt und über Silicagel (40 g) mit Ethylacetat chromatographiert, um 0,14 g (57%) N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester als farbloses Öl zu erhalten.
Einer Lösung von N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester (0,14 g, 0,25 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) bei 0°C wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 90 Minuten gerührt. Dann wurden Methylenchlorid (50 ml) und gesättigtes Natriumbicarbonat (5 ml) zugesetzt und das Gemisch mit festem Natriumbicarbo nat bis pH = 7 titriert. Die Wasserschicht wurde abgetrennt und mit Methylenchlorid (20 ml) extrahiert, und die vereinten organischen Schichten wurden mit Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, und im Vakuum eingeengt, um 0,10 g (87%) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid als Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,68 (s, 3H, N-CH₃): 1,98 (s, 3H, COCH₃) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(naphthyl)ethyl)-N-methylamid
Einer Lösung von (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (0,066 g, 0,27 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,037 g, 0,27 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid-Hydrochlorid (0,052 g, 0,27 mmol) zugesetzt, und das wurde Gemisch auf 0°C abgekühlt. Dann wurden (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid (0,10 g, 0,22 mmol) und Diisopropylethylamin (0,049 ml, 0,29 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (10 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Produkt wurde über Silicagel (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 0,10 g (66%) ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester als farbloses Öl zu erhalten.
Eine Lösung von ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester (0,1 g, 0,146 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) wurde auf 0°C abgekühlt, und Trifluoressigsäure (2 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurden Methylenchlorid (50 ml) und gesättigtes Natriumbicarbonat (5 ml) zugesetzt und das Gemisch mit festem Natriumbicarbonat bis pH = 7 titriert. Die Wasserschicht wurde abgetrennt und mit Methylenchlorid (20 ml) extrahiert, und die vereinten organischen Schichten wurden mit Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene Produkt wurde in Acetonitril/Wasser 1:20 (10 ml) gelöst, und auf eine C-18-Patrone des Typs Sep-Pak Classic^© (2,0 g, erworben von Waters^TM), die mit Acetonitril (100 ml) und Wasser (100 ml) vorgewaschen war, aufgebracht. Dann ließ man einen Gradienten aus einem Eluenten, bestehend aus Wasser/Acetonitril/Trifluoressigsäure (10, 50, und 70% Acetonitril in Wasser/0,1% Trifluoressigsäure) die Sep-Pak^© (2 g) durchlaufen. Die relevanten Fraktionen wurden vereinigt und auf 0,054 g (53%) des Trifluoressigsäuresalzes von (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid als weißes amorphes Pulver lyophilisiert.
LC-MS: R_t = 8,74 min, m/z = 586,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 29,53 min (A1); R_t = 31,35 min (B1)
¹H-NMR DMSO) ausgewählte Peaks: δ 1,05 (s, 6H, C-(CH₃)₂): 1,77 (s, 3H, COCH₃); 6,2 (d, 1H, C=CH-CO); 6,3 (m, 1H, CH₂-CH=C)
Beispiel 3
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
N'-Benzylidenhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von tert-Butylcarbamat (10,0 g, 75,64 mmol) in 99% Ethanol (100 ml) wurde Benzaldehyd (7,64 ml, 75,64 mmol) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 60 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt, filtriert und der Niederschlag mit kaltem Ethanol gewaschen und getrocknet, um 13,47 g (81%) N'-Benzylidenhydrazincarbonsäure-tert-butylester als weiße Kristalle zu erhalten.
Fp. 184-186°C
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,52 (s, 9H, (CH₃)C): 7,34–7,92 (m, 7H, arom.) N'-Benzyliden-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von N'-Benzylidenhydrazincarbonsäure-tert-butylester (2,0 g, 9,07 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (20 ml) wurde Methyliodid (4,54 ml, 72,6 mmol) zugesetzt und die Lösung auf 0°C abgekühlt. Natriumhydrid (60%ige Dispersion in Mineralöl, 1,09 g, 27,2 mmol) wurde langsam zugesetzt und das Gemisch bei Raumtemperatur für eine Dauer von 3 Tagen gerührt. Tetrahydrofuran (50 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch filtriert. Das Filtrat wurde im Valkuum eingeengt und über Silica (100 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 1,97 g (93%) N'-Benzyliden-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester als gelbes Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,58 (s, 9H, (CH₃)₃C): 3,34 (s, 3H, N-CH₃) N-Methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von N'-Benzyliden-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (1,97 g, 8,41 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (50 ml) wurde Palladium auf Kohlenstoff (10%ig, 0,2 g) zugesetzt und das Gemisch mit Wasserstoff behandelt. Nach einem Verbrauch von 260 ml Wasserstoff wurde das Gemisch durch Celite filtriert und auf 1,25 g (100%) N-Methyl-hydrazincarbonsäure-tert-butylester eingeengt.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,5 (s, 9H, (CH₃)₃C-O): 3,05 (s, 3H, N-CH₃) N-Methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von (2R)-2-(N-(((9H-Fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N-methylamino)-3-phenylpropionsäure (0,6 g, 1,5 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,22 g, 1,65 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,29 g, 1,50 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt. Dann wurden N-Methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,22 g, 1,50 mmol) und Diisopropylethylamin (0,33 ml, 1,95 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (20 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (20 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (20 ml), Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Produkt wurde über Silica (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 0,65 g (82%) N-((2R)-2-[N-(((9H-Fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N-methylamino]-3-phenylpropionyl)-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester als weißen Schaum zu erhalten.
Einer Lösung von N'-((2R)-2-[N-(((9H-Fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N-methylamino]-3-phenylpropionyl)-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,65 g, 1,23 mmol) in Methylenchlorid (4 ml) wurde Tris(2-aminoethyl)amin (4 ml) zugesetzt und das Gemisch bei Raumtemperatur für eine Dauer von 60 Minuten gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Kochsalzlösung (2 × 20 ml), Phosphatpuffer (pH = 6,2 × 20 ml), Wasser (20 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt, um 0,34 g (90%) N-Methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazincarbonsäure-tert-butylester als gelbes Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,35 + 1,4 (s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer) 2,2 (s, 3H, N-CH₃) 2,5 (s, 3H, N-CH₃) N'-[(2R)-2-(N-((2R)-2-[N-(((9H-Fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N-methylamino]-3-(2-naphthyl)propionyl)-N-methylamino)-3-phenylpropionyl]-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von (2R)-2-[N-(9H-Fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)-N-methylamino]-3-naphthalin-2-ylpropionsäure (0,6 g, 1,33 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,18 g, 1,33 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,25 g, 1,33 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt. Dann wurden N-Methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-phenylpropionyl)hydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,34 g, 1,11 mmol) und Diisopropylethylamin (0,25 ml, 1,44 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (10 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Produkt wurde über Silica (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (2:1) chromatographiert, um 0,53 g (64%) N'-[(2R)-2-(N-((2R)-2-[N-(((9H-Fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N-methylamino]-3-(2-naphthyl)propionyl)-N-methylamino)-3-phenylpropionyl]-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester als farbloses Öl zu erhalten.
¹H-NMR (DMSO) ausgewählte Peaks: δ 1,25 + 1,55 (2s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer) 2,3 + 2,35 (2s, 3H, N-CH₃, rotamer) 2,65 + 2,68 (2s, 3H, N-CH₃, rotamer) 2,95 + 3,0 (2s, 3H, N-CH₃, rotamer) N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N'-methylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure((9H-fluoren-9-yl)methyl)ester
Einer Lösung von N'-[(2R)-2-(N-((2R)-2-[N-(((9H-Fluoren-9-yl)methoxy)-carbonyl)-N-methylamino]-3-(2-naphthyl)propionyl)-N-methylamino)-3-phenylpropionyl]-N-methylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,27 g, 0,36 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) bei 0°C wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 90 Minuten gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) und gesättigtes Natriumbicarbonat (5 ml) zugesetzt und das Gemisch mit festem Natriumbicarbonat bis pH = 7 titriert. Die Wasserschicht wurde abgetrennt und mit Methylenchlorid (20 ml) extrahiert, und die vereinigten organischen Schichten wurden mit Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt, um 0,18 g (78%) N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N'-methylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure((9H-fluoren-9-yl)methyl)ester als weißes amorphes Pulver zu erhalten.
LC-MS: R_t = 14,03 min, m/z = 641,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 13,80 min (H8) N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure((9H-fluoren-9-yl)methyl)ester
Einer Lösung von N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N'-methylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure((9H-fluoren-9-yl)methyl)ester (0,18 g, 0,28 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) wurden Essigsäureanhydrid (0,053 ml) und Pyridin (0,027 ml) zugesetzt, und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen, um 0,21 g (110%) N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure((9H-Fluoren-9-yl)methyl) ester als farbloses Öl zu erhalten.
LC-MS: R_t = 16,48 min, m/z = 683,0 (m + 1)
HPLC: R_t = 15,81 min (H8) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid
Einer Lösung von N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure((9H-Fluoren-9-yl)methyl)ester (0,21 g, 0,31 mmol) in Methylenchlorid (4 ml) wurde Tris(2-Aminoethyl)amin (4 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 60 Minuten gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Kochsalzlösung (2 × 20 ml), Phosphat-Puffer (pH = 6,2 × 20 ml), Wasser (20 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt, um 0,13 g (92%) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid als farbloses Öl zu erhalten.
LC-MS: R_t = 8,57 min, m/z = 461,2 (m + 1) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
Einer Lösung von (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-eniocsäure (0,1 g, 0,42 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,06 g, 0,42 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,08 g, 0,42 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt. Dann wurden (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid (0,13 g, 0,28 mmol) und Diisopropylethylamin (0,062 ml, 0,36 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (10 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Produkt wurde über Silica (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 0,12 g (63%) ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-carbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester als farbloses Öl zu erhalten.
Eine Lösung von ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester (0,1 g, 0,146 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) wurde auf 0°C abgekühlt, und Trifluoressigsäure (2 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 30 Minuten ge rührt. Dann wurden Methylenchlorid (50 ml) und gesättigtes Natriumbicarbonat (5 ml) zugesetzt und das Gemisch wurde mit festem Natriumbicarbonat bis pH = 7 titriert. Die Wasserschicht wurde abgetrennt und mit Methylenchlorid (20 ml) extrahiert, und die vereinigten organischen Schichten wurden mit Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene Produkt wurde in Acetonitril/Wasser 1:20 (10 ml) gelöst und auf eine C-18-Patrone des Typs Sep-Pak Classic^© (2,0 g, erworben von Waters^TM), die mit Acetonitril (100 ml) und Wasser (100 ml) vorgewaschen war, aufgebracht. Dann ließ man einen Gradienten aus einem Eluenten, bestehend aus Wasser/Acetonitril/Trifluoressigsäure (10, 50 und 70% Acetonitril in Wasser/0,1% Trifluoressigsäure) die Sep-Pak^© durchlaufen. Die relevanten Fraktionen wurden vereinigt und auf 0,086 g (84%) des Trifluoressigsäuresalzes von (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid als weißes amorphes Pulver lyophilisiert.
LC-MS: R_t = 9,255 min, m/z = 586,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 31,47 min (A1), R_t = 33,30 (B1)
¹H-NMR (DMSO) ausgewählte Peaks: δ 5,3 (dd, 1H, C=CH-CO) 5,7 (t, 1H, CH-CH₂C₆H₅) 6,15 (d, 1H, CH₂-CH=C) 6,4 (m, 1H, CH-CH₂C₁₀H₇)
Beispiel 4
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
N,N',N'-Trimethylhydrazincarbonsäure-tert-butylester
Einer Lösung von tert-Butylcarbamat (1,0 g, 7,56 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (40 ml) bei 0°C wurden Natriumhydrid (60%ige Dispersion in Öl, 2,73 g, 68 mmol) und Methyliodid (11,3 ml, 181 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde für eine Dauer von 3 Tagen gerührt. Dann wurde Tetrahydrofuran (100 ml) zugesetzt und die Suspension filtriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Das erhaltene Produkt wurde in Ethylacetat gelöst und über Silicagel (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert und eingeengt, um 0,53 g (40%) N,N',N'-Trimethylhydrazincarbonsäure-tert-butylester als dünnes Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,48 (s, 9H, (CH₃)₃C-O) 2,6 (s, 6H, 2 N-CH₃) 2,9 (s, 3H, N-CH₃) N-Methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-Trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester
Einer Lösung von N,N',N'-Trimethylhydrazincarbonsäure-tert-butylester (0,52 g, 2,99 mmol) in Methylenchlorid (4 ml) wurde Trifluoressigsäure (4 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 60 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen, um 0,61 g von N,N,N'-trimethylhydrazintrifluoracetat als dünnes Öl zu erhalten.
Dann wurde (2R)-2-(tert-Butoxycarbonylmethylamino)-3-phenylpropionsäure (1,0 g, 3,58 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) gelöst, und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,34 g, 1,79 mmol) wurde zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch aus N,N,N'-Trimethylhydrazintrifluoracetat (0,37 g, 1,96 mmol) und Diisopropylethylamin (0,92 ml, 5,34 mmol) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 2 Tagen gerührt.
Methylenchlorid (50 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (50 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem, wässrigem Natriumbicarbonat (2 × 10 ml) und Wasser (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, im Vakuum eingeengt, und über Silica (100 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 0,30 g N-Methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester als amorphes Pulver zu erhalten.
HPLC: R_t = 13,03 min (H8)
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,23 + 1,35 (2s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer) 2,25 + 2,42 + 2,45 (3s, 6H, N-N(CH₃)₂, rotamer) N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-((1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester
Einer Lösung von N-Methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester (0,3 g, 0,89 mmol) in Methylenchlorid (1 ml) wurde Trifluoressigsäure (1 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt, drei mal mit Methylenchlorid abgezogen und in Methylenchlorid:(Methanol/Ammoniak) (1:1) (2 ml) suspendiert und mit Trifluorammoniumacetat ausgefällt. Dann wurde Diethylether (10 ml) zugesetzt und das Gemisch filtriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt, um 0,31 g von (2R)-2-Methylamino-3-phenylpropionsäuretrimethylhydrazid als Öl zu erhalten.
Dann wurde (2R)-2-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)-propionsäure (0,35 g, 1,07 mmol) in Methylenchlorid (20 ml) gelöst, und ein Gemisch aus 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,15 g, 1,07 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,21 g, 1,07 mmol) wurde zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch aus (2R)-2-Methylamino-3-phenylpropionsäuretrimethyl-hydrazid (0,21 g, 0,89 mmol) und Diisopropylethylamin (0,20 ml) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Methylenchlorid (30 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit wässrigem Natriumbicarbonat (10 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, zu einem Öl eingeengt und über Silica (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (3:7) chromatographiert, um 0,43 g von N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1,N',N'trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester als Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 0,92 + 1,22 (2s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer) 5,0 + 5,3 (2t, 1H, CH-CH₂C₆H₅, rotamer) 6,3 + 6,45 (2t, 1H, CH-CH₂C₁₀H₇, rotamer) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Einer Lösung von N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester (0,43 g, 0,79 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) wurde Trifluoressigsäure (2 ml) bei 0°C zugesetzt und für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen. Das erhaltene Öl wurde in Methanol/Ammoniak (2 ml) gelöst, und Methylenchlorid (20 ml) und Silicagel (5 g) wurden zugesetzt und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene Pulver wurde durch Filtration mit Methylenchlorid (50 ml) und Methylenchlorid:(Methanol/Ammoniak) (9:1) extrahiert, und die vereinten organischen Extrakte wurden im Vakuum auf 0,36 g Rohprodukt als Schaum eingeengt.
Dann wurde (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (0,12 g, 0,48 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) gelöst, und ein Gemisch aus 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,065 g, 0,48 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,092 g, 0,48 mmol) wurde zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch aus dem erhaltenen Rohprodukt (0,18 g, 0,40 mmol) und Diisopropylethylamin (0,09 ml, 0,53 mmol) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt.
Methylenchlorid (50 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit wässrigem Natriumbicarbonat (10 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert, auf 0,14 g eines farblosen Öls eingeengt. Das Öl wurde in Methylenchlorid (2 ml) gelöst, auf 0°C abgekühlt, und Trifluoressigsäure (2 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Methylenchlorid (50 ml) und Wasser (10 ml) abgeschreckt und auf pH ~7 mit festem Natriumbicarbonat titriert. Die organische Schicht wurde abgetrennt und mit Wasser (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt.
Das erhaltene Produkt wurde in Acetonitril/Wasser 1:20 (10 ml) gelöst und auf eine C-18-Patrone des Typs Sep-Pak Classic^© (2,0 g, erworben von Waters^TM), die mit Acetonitril (100 ml) und Wasser (100 ml) vorgewaschen war, aufgebracht. Dann ließ man einen Gradienten aus einem Eluenten, bestehend aus Wasser/Acetonitril/Trifluoressigsäure (10, 15, 20 und 25% Acetonitril in Wasser/Trifluoressigsäure) die Sep-Pak^© durchlaufen. Die relevanten Fraktionen wurden vereinigt und auf 0,072 g des Trifluoressigsäuresalzes von (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1- (N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid als weißes amorphes Pulver lyophilisiert.
LC-MS: R_t = 9,96 min, m/z = 572,4 (m + 1)
HPLC: R_t = 35,23 min, (A1), R_t = 37,45 (B1)
¹H-NMR (DMSO) ausgewählte Peaks: δ 5,1(t, 1H, CH-CH₂C₆H₅) 6,1 (t, 1H, CH₂-CH=C) 6,2 (d, 1H, C=CH-CO) 6,4 (t, 1H, CH-CH₂C₁₀H₇)
Beispiel 5
3-Aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl-2-(2-naphthyl)ethyl)benzamid
Einer Lösung von 3-[(9H-Fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)methyl]benzoesäure (0,18 g, 0,48 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,065 g, 0,48 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,092 g, 0,48 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf 0 °C abgekühlt. Dann wurde (2R)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazin-carbonyl)ethyl]-propionamid (0,18 g, 0,40 mmol) und Diisopropylethylamin (0,089 ml, 0,52 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (10 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (10 ml) und Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Produkt wurde über Silicagel (40 g) mit Heptan:Ethylacetat (1:1) chromatographiert, um 0,12 g (37%) (3-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl]-benzyl)carbaminsäure((9H-fluoren-9-yl)methyl)ester als farbloses Öl zu erhalten.
Einer Lösung von (3-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl]benzyl)carbaminsäure((9H-fluoren-9-yl)methyl)ester (0,12 g, 0,15 mmol) in Methylenchlorid (4 ml) wurde Tris(2-aminoethyl)amin (4 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 90 Minuten gerührt. Dann wurde Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und das Gemisch mit Kochsalzlösung (2 × 20 ml), Phosphat-Puffer (pH = 6,2 × 20 ml), Wasser (20 ml), Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt.
Das erhaltene Produkt wurde in Acetonitril/Wasser 1:20 (10 ml) gelöst und auf eine C-18-Patrone des Typs Sep-Pak Classic^© (0,25 g, erworben von Waters^TM), die mit Acetonitril (10 ml) und Wasser (10 ml) vorgewaschen war, aufgebracht. Dann ließ man einen Gradienten aus einem Eluenten, bestehend aus Wasser/Acetonitril/Trifluoressigsäure (10, 30 und 70% Acetonitril in Wasser/Trifluoressigsäure) die Sep-Pak^© (2 g) durchlaufen. Die relevanten Fraktionen wurden vereinigt und auf 0,08 g (77%) des Trifluoressigsäuresalzes von 3-Aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl-2-(2-naphthyl)ethyl)benzamid als weißes amorphes Pulver lyophilisiert.
LC-MS: R_t = 9,87 min, m/z = 580,2 (m + 1)
HPLC: R_t = 35,28 min, (A1), R_t = 37,43 (B1)
¹H-NMR (DMSO) ausgewählte Peaks: δ 5,7 (t, 1H, CH-CH₂C₆H₅) 6,2 (t, 1H, CH-CH₂C₁₀H₇) 6,8–7,9 (m, 16H, arom.)
Beispiel 6
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
N-(1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
Einer Lösung von (2R)-2-(tert-Butoxycarbonylmethylamino)-3-phenylpropionsäure (3,0 g, 10,74 mmol), 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (2,06 g, 10,74 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (1,46 g, 10,74 mmol) in Methylenchlorid wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch aus N',N'-Dimethylhydrazin (1,23 ml, 16,11 mmol) und Diisopropylethylamin (2,39 ml, 13,96 mmol) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt.
Ethylacetat (100 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch mit Wasser (20 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem, wässrigem Natriumbicarbonat (2 × 10 ml) und Wasser (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt und über Silica (100 g) mit Heptan:Ethylacetat (2:3) chromatographiert, um 2,19 g N-Methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester als amorphes Pulver zu erhalten.
HPLC: R_t = 10,81 min (H8)
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,25 + 1,30 + 1,45 + 1,50 (4s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer) 2,45 + 2,50 + 2,60 (3s, 6H, N-N(CH₃)₂, rotamer) 2,80 (s, 3H, N-CH₃) (2R)-2-Methylamino-3-phenylpropionsäure-N',N'-dimethylhydrazid
Einer Lösung von N-Methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester (2,19 g, 6,81 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurde Trifluoressigsäure (5 ml) zugesetzt, und es wurde bei Raumtemperatur für eine Dauer von 90 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid (3 × 2 ml) abgezogen, um das Trifluoressigsäuresalz von (2R)-2-Methylamino-3-phenylpropionsäure-N',N'-dimethylhydrazid in quantitativer Ausbeute zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 2,30 (s, 3H, HN-CH₃) 2,45 + 2,50 (2s, 6H, N-N(CH₃)₂, rotamer) N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
Einer Lösung von 2 (R)-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(naphth-2-yl)propionsäure (1,77 g, 5,37 mmol) in Methylenchlorid (20 ml) wurden 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,73 g, 5,37 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (1,03 g, 5,37 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurden (2R)-2-Methylamino-3-phenylpropionsäure-N',N'-dimethylhydrazid (2,41 g, 5,37 mmol) und Diisopropylethylamin (3,7 ml, 21,5 mmol) zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt, über Silica (100 g) mit Methylenchlorid (90): Methanol/Ammoniak (10/1) chromatographiert, um 2,52 g N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester als gelbes Öl zu erhalten.
LC-MS: R_t = 13,18 min, m/z = 533,2 (m + 1)
HPLC: R_t = 14,12 min (H8)
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,15 + 1,25 + 1,30 + 1,45 (4s, 9H, (CH₃)₃-C, rotamer) (2R)-N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid
Einer Lösung von N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester (2,52 g, 4,73 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurde Trifluoressigsäure (5 ml) bei 0°C zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 60 Minuten gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt und drei mal mit Methylenchlorid abgezogen, um das Trifluoressigsäuresalz von (2R)-N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid in quantitativer Ausbeute als gelbes Öl zu erhalten.
HPLC: R_t = 7,61 min (H8)
LC-MS: R_t = 7,72 min, m/z = 433,2 (m + 1) ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
Einer Lösung von (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (0,35 g, 1,42 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wurde ein Gemisch aus 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,193 g, 1,42 mmol) und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid (0,272 g, 1,42 mmol) zugesetzt, und es wurde für eine Dauer von 30 Minuten gerührt. Dann wurde ein Gemisch des erhaltenen rohen (2R)-N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid und Diisopropylethylamin (0,61 ml, 3,55 mmol) zugesetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt, über Silica (40 g) mit Ethylacetat (95):Methanol/10% Ammoniak (5) chromatographiert, um 0,37 g ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester als Öl zu erhalten.
HPLC: R_t = 14,51 min (H8)
LC-MS: R_t = 13,39 min, m/z 658,4 (m + 1)
Einer Lösung von ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl carbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester (0,36 g, 0,55 mmol) in Methylenchlorid (3 ml) wurde Trifluoressigsäure (3 ml) bei 0°C zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 30 Minuten gerührt.
Methylenchlorid (50 ml) und Wasser (10 ml) wurden zugesetzt, und die Lösung wurde mit festem Natriumbicarbonat bis pH > 7 titriert. Die Wasserschicht wurde mit Methylenchlorid (25 ml) extrahiert, und die vereinten organischen Schichten wurden getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt.
Das erhaltene Produkt wurde in Acetonitril/Wasser 1:20 (10 ml) gelöst und auf eine C-18-Patrone des Typs Sep-Pak Classic^© (0,25 g, erworben von Waters^TM), die mit Acetonitril (10 ml) und Wasser (10 ml) vorgewaschen war, aufgebracht. Dann ließ man einen Gradienten aus einem Eluenten, bestehend aus Wasser/Acetonitril/Trifluoressigsäure (10, 30 und 70% Acetonitril in Wasser/Trifluoressigsäure) die Sep-Pak^© (2 g) durchlaufen. Die relevanten Fraktionen wurden vereinigt und auf 196 mg des Trifluoressigsäuresalzes von (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid als weißes amorphes Pulver lyophilisiert.
HPLC: R_t = 30,42 min (A1), R_t = 30,38 min (B1), R_t = 8,40 min (H8),
LC-MS: R_t = 8,99 min, m/z = 558,4
Beispiel 7
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid (Beispiel 6) unter Verwendung von (2R)-2-(N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(thiophen-2-yl)propionsäure statt (2R)-2-(tert-Butoxycarbonylmethylamino)-3-phenylpropionsäure. N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
LC-MS: R_t = 8,92 min, m/z = 328,4 (m + 1)
¹H-NMR (CDCl₃) ausgewählte Peaks: δ 1,35 + 1,40 + 1,42 + 1,45 (4s, 9H, C-(CH₃)₃, rotamer) 2,45 + 2,55 + 2,60 (3s, 6H, (CH₃)₂N-N, rotamer) 2,80 + 2,85 (2s, 3H, N-CH₃) N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 13,96 min (H8)
LC-MS: R_t = 13,11 min, m/z = 539,4 (m + 1) (2R)-N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid
HPLC: R_t = 7,41 min (H8)
LC-MS: R_t = 7,74 min, m/z = 439,2 (m + 1) ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 14,43 min (H8)
LC-MS: R_t = 13,31 min, m/z = 664,4 (m + 1) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
HPLC: R_t = 30,03 min (A1), R_t = 29,88 min (B1)
LC-MS: R_t = 8,97 min, m/z = 564,4 (m + 1)
Beispiel 8
N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid (Beispiel 6) unter Verwendung von 3-[tert-Butoxycarbonylmethylamino)methyl]benzoesäure statt (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure. N-(3-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]benzyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 14,63 min (H8)
LC-MS: R_t = 13,68 min, m/z = 680,2 (m + 1) N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid
HPLC: R_t = 31,17 min (A1), R_t = 30,58 min (B1)
LC-MS: R_t = 8,92 min, m/z = 580,2 (m + 1)
Beispiel 9
(2E)-5-Amino-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)-2-phenyethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid (Beispiel 4) unter Verwendung von (2R)-N-tert-Butoxycarbonylamino-N-methyl-D-4,4'-biphenylalanin anstelle von 2(R)-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(naphth-2-yl)propionsäure. N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 16,70 min (H8)
LC-MS: R_t = 17,29 min, m/z = 573,4 (m + 1) (2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-N-methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]propionamid
HPLC: R_t = 8,56 min (H8)
LC-MS: R_t = 10,51 min, m/z = 473,2 (m + 1) ((3E)-4-[N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 16,22 min (H8)
LC-MS: R_t = 17,16 min, m/z = 698,6 (m + 1) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid
HPLC: R_t = 37,23 min (A1), R_t = 38,88 min (B1), R_t = 10,88 min (H8)
LC-MS: R_t = 11,14 min, m/z = 598,4 (m + 1)
Beispiel 10
(2E)-4-(1-Aminocyclobutyl)but-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid (Beispiel 4) unter Verwendung von (2E)-4-(1-(tert-Butoxycarbonylamino)cyclobutyl)but-2-ensäure statt (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (1-((2E)-3-[N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl]allyl)cyclobutyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 15,75 min (H8)
LC-MS: R_t = 16,63 min, m/z = 684,2 (m + 1) (2E)-4-(1-Aminocyclobutyl)but-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
HPLC: R_t = 35,28 min (A1), R_t = 36,92 min (B1), R_t = 10,48 min (H8),
LC-MS: R_t = 10,57 min, m/z = 584,4 (m + 1)
Beispiel 11 [nicht Teil der Erfindung]
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid (Beispiel 9), jedoch unter Verwendung von N-Aminopiperidin statt N,N',N'-trimethylhydrazin. N-Methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester
LC-MS: R_t = 13,68 min, m/z = 362,0 (m + 1) (2R)-2-(Methylamino)-3-phenyl-N-(piperidin-1-yl)propionamid
HPLC: R_t = 5,55 min (H8)
LC-MS: R_t = 6,87 min, m/z = 262,4 (m + 1) N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 16,22 min (H8)
LC-MS: R_t = 15,41 min, m/z = 599,2 (m + 1) (2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-N-methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]propionamid
HPLC: R_t = 9,11 min (H8)
LC-MS: R_t = 9,71 min, m/z = 499,2 (m + 1) ((3E)-4-[N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 16,25 min (H8)
LC-MS: R_t = 15,13 min, m/z = 724,6 (m + 1) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid
HPLC: R_t = 37,03 (A1), R_t = 35,93 (B1), R_t = 10,45 (H8),
LC-MS: R_t = 10,24 min, m/z = 624,4 (m + 1)
Beispiel 12
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]-carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 4) unter Verwendung von (2R)-2-(N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(thiopen-2-yl)propionsäure statt (2R)-2-(tert-Butoxycarbonylmethylamino)-3-phenylpropionsäure N-Methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 12,88 min (H8),
LC-MS: R_t = 13,29 min, m/z = 342,2 (m + 1) (2R)-2-(Methylamino)-3-(2-thienyl)propionsäure-trimethylhydrazid
HPLC: R_t = 5,26 min (H8),
LC-MS: R_t = 6,67 min, m/z = 242,6 (m + 1) N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 15,85 min (H8) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylydrazincarbonyl)ethyl]propionamid
HPLC: R_t = 8,79 min (H8),
LC-MS: R_t = 9,72 min, m/z = 453,2 (m + 1) ((3E)-1,1-Dimethyl-4-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl]but-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 15,83 min (H8),
LC-MS: R_t = 16,19 min, m/z = 678,2 (m + 1) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
HPLC: R_t = 33,85 min (A1), R_t = 35,38 min (B1)
LC-MS: R_t = 10,02 min, m/z = 578,2 (m + 1)
Beispiel 13
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl] carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 4) unter Verwendung von 2-tert-Butoxycarbonylamino-3-(1-H-indol-3-yl)propionsäure statt 2(R)-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(naphth-2-yl)propionsäure. ((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 13,85 min (H8)
LC-MS: R_t = 14,24 min, m/z = 522,2 (m + 1) (2R)-2-Amino-3-(1H-indol-3-yl)-N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]propionamid
HPLC: R_t = 9,02 min (H8)
LC-MS: R_t = 9,06 min, m/z = 422,2 (m + 1) [(3E)-4-((1R)-2-(1H-Indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl]carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 13,98 min (H8)
LC-MS: R_t = 15,24 min, m/z = 647,4 (m + 1) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)amid
HPLC: R_t = 30,56 min (A1), R_t = 32,10 (B1)
LC-MS: R_t = 9,24 min, m/z = 547,4 (m + 1)
Beispiel 14
2-Amino-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-2-methylpropionamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)amid (Beispiel 13) unter Verwendung von 2-tert-Butoxycarbonylamino-2-methylpropionsäure statt (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure. [(1R)-1-((1R)-2-(1H-Indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethylcarbamoyl)-1-methylethyl]carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 13,51 (H8)
LC-MS: R_t = 13,68 min, m/z = 607,4 (m + 1) 2-Amino-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-2-methylpropionamid
HPLC: R_t = 29,8 (A1), R_t = 31,29 (B1)
LC-MS: R_t = 9,21 min, m/z = 507,6 (m + 1)
Beispiel 15 [nicht Teil der Erfindung]
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 4) unter Verwendung von N-Methyl-N-(piperidin-1-yl)amin statt N,N',N'-Trimethylhydrazin. N-(piperidin-1-yl)formamid
Eine Lösung von N-Aminopiperidin (2,0 ml, 18,5 mmol) und Methylformiat (2,3 ml, 37 mmol) wurde für eine Dauer von 4 Tagen in einem verschlossenen Röhrchen bei 40°C gerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingeengt, in Ether (100 ml) suspendiert und filtriert, um 1,84 g N-(piperidin-1-yl)formamid als weißes Pulver zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,40 (m, 6H, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-) 2,75 (m, 4H, -CH₂CH₂-N-CH₂CH₂-) 6,80 (d, 1H, NH) 7,90 + 8,30 + 8,35 (3s, 1H, CHO-N, rotamer) N-methyl-N-(piperidin-1-yl)amin
Einer Lösung von Lithiumaluminiumhydrid (0,66 g, 17,4 mmol) in trockenem Tetrahydrofuran (20 ml) bei 0°C wurde langsam eine Lösung von N-(Piperidin-1-yl)formamid (1,86 g, 14,5 mmol) in Tetrahydrofuran (20 ml) zugesetzt und das Gemisch für eine Dauer von 3 Stunden gerührt. Dann wurden Ethylacetat (20 ml) und 6 N Chlorwasserstoff (30 ml) zugesetzt, und das Tetrahydrofuran wurde unter reduziertem Druck entfernt. Das Gemisch wurde mit 30%igem Natriumhydroxid auf pH 11 titriert und die Wasserschicht mit Methylenchlorid (3 × 100 ml) extrahiert, und die vereinten organischen Schichten wurden getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene Öl wurde über Silica (40 g) mit Methylenchlorid (9):Methanol (1) chromatographiert, um 1,76 g N-Methyl-N-(piperidin-1-yl)amin als dünnes gelbes Öl zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,65 + 1,90 (2m, 6H, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-, rotamer) 2,75 (s, 3H, N-CH₃) 3,25 (m, 4H, -CH₂CH₂-N-CH₂CH₂-) N-Methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]-carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 15,12 min (H8)
LC-MS: R_t = 15,74 min, m/z = 376,4 (m + 1) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-phenyl-N-(piperidin-1-yl)propionamid
HPLC: R_t = 7,15 min (H8)
LC-MS: R_t = 8,56 min, m/z = 276,4 (m + 1) N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 17,53 min (H8)
LC-MS: R_t = 18,20 min, m/z = 587,4 (m + 1) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]-3-(2-naphthyl)propionamid
HPLC: R_t = 9,61 min (H8)
LC-MS: R_t = 10,76 min, m/z = 487,4 (m + 1) ((3E)-1,1-Dimethyl-4-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)-ethyl)carbamoy]but-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 17,42 min (H8) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
HPLC: R_t = 38,85 min (A1), R_t = 40,19 min (B1), R_t = 11,42 min (H8)
LC-MS: R_t = 12,11 min, m/z = 612,4 (m + 1)
Beispiel 16 [Nicht Teil der Erfindung]
(2E)-5-Amino-5-methylhez-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-(2-thienyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-phenylethyl]-carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 15) unter Verwendung von (2R)-2-(N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(thiopen-2-yl)propionsäure statt (2R)-2-(tert-Butoxycarbonylmethylamino)-3-phenyl-propionsäure. N-Methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-(2-thienyl)ethyl]carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 14,85 min (H8)
LC-MS: R_t = 15,39 min, m/z = 382,2 (m + 1) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-(piperidin-1-yl)-3-(2-thienyl)propionamid
HPLC: R_t = 6,83 min (H8)
LC-MS: R_t = 8,34 min, m/z = 282,2 (m + 1) N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-(2-thienyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 17,53 min (H8)
LC-MS: R_t = 17,83 min, m/z = 593,4 (m + 1) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2(2-thienyl)ethyl]-3-(2-naphthyl)propionamid
HPLC: R_t = 9,48 min (H8)
LC-MS: R_t = 10,62 min, m/z = 493,4 (m + 1) ((3E)-1,1-Dimethyl-4-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)-2-(2-thienyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl]but-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 17,19 min (H8) (2E)-5-Amino-5-methyl-hex-2-ensäure-N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)carbamoyl)2-(2-thienyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
HPLC: R_t = 39,47 min (A1), R_t = 41,43 min (B1), R_t = 11,30 min (H8)
LC-MS: R_t = 12,17 min, m/z = 618,4 (m + 1)
Beispiel 17
(2E)-5-Amino-5-methyl-hex-2-ensäure-N-methyl-N-[(1R)-1-benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methyl-hex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)-N-methylamid (Beispiel 1) unter Verwendung von 3-Pyrazolidinon statt Essigsäurehydrazid. N-[(1R)-1-Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 10,70 min (H8)
LC-MS: R_t = 10,34 min, m/z = 348,4 (m + 1) N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert-butylester
HPLC: R_t = 14,22 min (H8)
LC-MS: R_t = 14,84 min, m/z = 559,4 (m + 1) (2R)-N-[(1R)-1-Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid
HPLC: R_t = 8,26 min (H8) (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-benryl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
HPLC: R_t = 29,21 min (A1), R_t = 8,43 min (H8)
LC-MS: R_t = 9,24 min, m/z = 584,4 (m + 1)
Beispiel 18 [Nicht Teil der Erfindung]
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((piperidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]-carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 4) unter Verwendung von N-Aminopiperidin statt Trimethylhydrazin.
HPLC: R_t = 34,78 min (A1), R_t = 33,74 min (B1)
LC-MS: R_t = 9,81 min, m/z = 598,4 (m + 1)
Beispiel 19 [Nicht Teil der Erfindung]
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((pyrrolidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]-carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 4) unter Verwendung von N-Aminopyrrolidin statt Trimethylhydrazin.
HPLC: R_t = 31,78 min (A1), R_t = 30,78 min (B1)
LC-MS: R_t = 8,92 min, m/z = 584,4 (m + 1)
Beispiel 20 [Nicht Teil der Erfindung]
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((pyrrolidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl}ethyl)-N-methylamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-((pyrrolidin-1-yl)carbamoyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 19) unter Verwendung von (2R)-N-tert-Butoxycarbonylamino-N-methyl-D-4,4'-biphenylalanin statt 2(R)-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(naphth-2-yl)propionsäure.
HPLC: R_t = 34,80 min (A1), R_t = 34,04 min (B1)
LC-MS: R_t = 9,46 min, m/z = 610,4 (m + 1)
Beispiel 21
2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid
Hergestellt analog zu (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]-carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid (Beispiel 4) unter Verwendung von 3-Benzyloxy-2-tert-butoxycarbonylaminopropionsäure statt 2(R)-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(naphth-2-yl)propionsäure und N-tert-Butyloxycarbonyl-a-aminoisobutyrsäure statt (2E)-5-(tert-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure.
Isoliert als zwei Diastereoisomere:

Verbindung 1 HPLC: R_t = 32,20 min (A1), R_t = 33,78 min (B1) LC-MS: R_t = 9,64 min, m/z = 498,2 (m + 1)
Verbindung 2 HPLC: R_t = 31,05 min (A1), R_t = 32,56 min (B1) LC-MS: R_t = 9,42 min, m/z = 498,2 (m + 1)

Beispiel 22
2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid
Hergestellt analog zu 2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid (Beispiel 21) unter Verwendung von (2R)-2-Methylamino-4-phenylbutyrsäure-N,N-dimethydrazin statt (2R)-2-Methylamino-3-phenyl propionsäure-N',N'-dimethylhydrazin.
Isoliert als zwei Diastereoisomere:

Verbindung 1 HPLC: R_t = 28,44 min (A1), R_t = 28,73 min (B1) LC-MS: R_t = 8,21 min, m/z = 498,4 (m + 1)
Verbindung 2 HPLC: R_t = 30,50 min (A1), R_t = 30,50 min (B1) LC-MS: R_t = 8,61 min, m/z = 498,4 (m + 1)

Beispiel 23
2-Amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl)carbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid
Hergestellt analog zu 2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid (Beispiel 22) unter Verwendung von (2R)-2-Amino-4-phenylbutyrsäure-N,N-dimethylhydrazin statt (2R)-2-Methylamino-3-phenylbutyrsäure-N',N'-dimethylhydrazin.
Isoliert als zwei Diastereoisomere:

Verbindung 1 HPLC: R_t = 27,82 min (A1), R_t = 27,78 min (B1) LC-MS: R_t = 8,41 min, m/z = 484,4 (m + 1)
Verbindung 2 HPLC: R_t = 29,48 min (A1), R_t = 29,58 min (B1) LC-MS: R_t = 8,67 min, m/z = 498,4 (m + 1)

Beispiel 24
2-Amino-N-[(1R)-1-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropylcarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid
Hergestellt analog zu 2-Amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl)carbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid (Beispiel 23) unter Verwendung von (2R)-2-tert-Butoxycarbonylamino-3-(1H-indol-3-yl)propionsäure statt 3-Benzyloxy-2-tert-butoxycarbonylaminopropionsäure.
HPLC: R_t = 25,65 min (A1), R_t = 27,71 min (B1)
LC-MS: R_t = 8,11 min, m/z = 493,4 (m + 1)
Beispiel 25
2-Amino-N-[(1R)-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid
Hergestellt analog zu 2-Amino-N-[(1R)-1-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropylcarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid (Beispiel 24) unter Verwendung von (2R)-2-Methylamino-4-phenylbutyrsäure-N,N-dimethylhydrazin statt (2R)-2-Amino-3-phenylbutyrsäure-N',N'-dimethylhydrazin.
HPLC: R_t = 27,02 min (A1), R_t = 27,31 min (B1)
LC-MS: R_t = 8,07 min, m/z = 507,4 (m + 1)

Claims

Verbindung der Formel I
wobei R¹ und R² unabhängig Wasserstoff, oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind; R^3a Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder Aryl oder Hetaryl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, ist; R^4a C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder C_1-6-Acyl ist; R^5a Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, oder Aryl oder Hetaryl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, ist; oder R^3a und R^4a zusammen mit den Stickstoffatomen, an welche sie gebunden sind, ein heterocyclisches System, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, bilden können, oder R^3a und R^5a zusammen mit den Stickstoffatomen, an welche sie gebunden sind, ein heterocyclisches System, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C_1-6-Alkyl, Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, bilden können; a und b unabhängig 0, 1 oder 2 sind; G Wasserstoff, -O-(CH₂)_k-Aryl ist
ist, wobei R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³ R³⁴, R³⁵, und R³⁶ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind; k und l unabhängig 0, 1 oder 2 sind;
ist, wobei R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ und R⁹ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind; n, m und q unabhängig 0, 1, 2 oder 3 sind; p 0 oder 1 ist M-CR¹¹=CR^11a-, Arylen, Hetarylen, -O-, -S- oder eine Valenzbindung ist; R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind; oder
ist, wobei R⁷, R⁸, R⁹ und R¹⁰ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind; oder R⁷ und R⁸ oder R⁷ und R⁹ oder R⁸ und R⁹ gegebenenfalls -(CH₂)_i-U-(CH₂)_j- bilden können, wobei i und j unabhängig 1 oder 2 sind und U -O-, -S- oder eine Valenzbindung ist; n und m unabhängig 0, 1, 2 oder 3 ist; o und p unabhängig 0 oder 1 ist; M -CR¹¹=CR¹¹ ^a- Arylen, Hetarylen, -O-, -S-, oder eine Valenzbindung ist; R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R¹ C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei R² Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei R^3a Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei R^4a C_1-8-Alkyl oder C_1-6-Acyl ist.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei R^5a Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1-3 oder 6, wobei R^3a und R^4a zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, ein heterocyclisches System bilden.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei a und b unabhängig 1 oder 2 sind.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei G -O-(CH₂)_k-aryl,
ist, wobei R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰ und R³¹ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind und k 0, 1 oder 2 ist.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei J
ist, wobei R³², R³³, R³⁴, R³⁵ und R³⁶ unabhängig Wasserstoff, Halogen, Aryl, Hetaryl, C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Alkoxy sind.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei D
wobei R⁷, R⁸, R⁹ und R¹⁰ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind; n und m unabhängig 0, 1, 2 oder 3 sind; o und p unabhängig 0 oder 1 sind; M -CR¹¹=CR^11a-, Arylen, -O- oder -S- ist; R¹¹ und R^11a unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Aryl oder Hetaryl, sind.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1-10, wobei D
wobei R⁷, R⁸, R⁹ und R¹⁰ unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogen, Amino, Hydroxy, Aryl oder Hetaryl, sind; n und m unabhängig 0, 1, 2, oder 3 sind; o und p unabhängig 0 oder 1 sind; M eine Valenzbindung ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1-10, wobei R⁸ und R⁹ -(CH₂)_i-U-(CH₂)_j- bilden, wobei i und j unabhängig 1 oder 2 sind und U -O-, -S- oder eine Valenzbindung ist.
Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, ausgewählt aus: Bevorzugte Verbindungen der Formel I der Erfindung sind: (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazin)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-{N'-methyl-N'-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethylamid
3-Aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}-2-(2-naphthyl)-ethyl)benzamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazincarbonyl)-2-phenylethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-N-methylamid
(2E)-4-(1-Aminocyclobutyl)but-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)amid
2-Amino-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl)ethyl)-2-methylpropionamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylamid
2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-phenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazincarbonyl)ethyl]carbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid
2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid
2-Amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl)carbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid
2-Amino-N-[(1R)-1-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropylcarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid
2-Amino-N-[(1R)-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazincarbonyl)-3-phenylpropyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid
und pharmazeutisch verträgliche Salze davon.
Arzneimittel, umfassend als Wirkstoff eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1-14 oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1-14 oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse eines Säugers.