DE69725153T2

DE69725153T2 - Kaliumkanal-blocker

Info

Publication number: DE69725153T2
Application number: DE69725153T
Authority: DE
Inventors: Alexander Neil CASTLE; Patrick Sean HOLLINSHEAD; Floyd Philip HUGHES; Serafin Jose MENDOZA; Wendell Joseph WILSON; George Amato; Serge Beaudoin; Michael Gross; Grant Mcnaughton-Smith
Original assignee: Eli Lilly and Co; Icagen Inc
Current assignee: Eli Lilly and Co; Icagen Inc
Priority date: 1996-07-26
Filing date: 1997-07-23
Publication date: 2004-06-09
Anticipated expiration: 2017-07-24
Also published as: JP2002513385A; ATE250571T1; HUP0003250A1; WO1998004521A1; AU3803597A; HUP0003250A3; US6083986A; KR20000029605A; HK1020334A1; CA2261814A1; IL128205A0; IL128205A; BR9710587A; DE69725153D1; EP0923543B1; AU734711B2; EP0923543A1

Description

Hintergrund der Erfindung 1. Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft im weiteren Sinne eine Klasse von Verbindungen, die als Kaliumkanalinhibitoren brauchbar sind.
2. Beschreibung des Stands der Technik
Kaliumkanäle sind als eine Klasse von Kanälen überall in eukariotischen und prokariotischen Zellen zu finden und sie sind Schlüsselelemente bei der Kontrolle elektrischer und nicht-elektrischer Zellfunktionen. Subklassen dieser Kanäle sind in Bezug auf Aminosäuresequenz und funktionelle Eigenschaften benannt worden und schließen beispielsweise spannungsgesteuerte Kaliumkanäle (z. B. Kv1, Kv2, Kv3, Kv4) und einwärts gleichrichtende Kaliumkanäle (z. B. Kir1, Kir2, Kir3, Kir4, Kir5, Kir6) mit ein. Subtypen innerhalb dieser Subklassen sind nach ihrer mutmaßlichen Funktion, Pharmakologie und Verteilung in Zellen und Geweben charakterisiert worden (Chandy und Gutman, „Voltage-gated potassium channel genes" in Handbook of Receptors and Channels-Ligand and Voltage-gated ion Channels, Hrsg. R. A. North, 1995; Doupnik et al., Curr. Opin. Neurobiol. 5: 268, 1995).
Kaliumkanalinhibitoren führen zu einer Abnahme der Kaliumionenbewegung durch Zellmembranen. Folglich induzieren solche Inhibitoren eine Verlängerung des elektrischen Aktionspotentials oder der Depolarisation des Membranpotentials in Zellen, die die inhibierten oder blockierten Kaliumkanäle enthalten. Die Verlängerung des elektrischen Aktionspotentials ist ein bevorzugter Mechanismus zur Behandlung bestimmter Erkrankungen, z. B. von Herzarrhythmien (Colatsky et al., Circulation 82: 2235, 1990). Die Membran-Potentialdepolarisation ist ein bevorzugter Mechanismus für die Behandlung bestimmter anderer Erkrankungen, wie beispielsweise solcher bei denen das Immunsystem beteiligt ist (Kaczorowski und Koo, Perspectives in Drug Discovery and Design, 2: 233, 1994).
Insbesondere ist gezeigt worden, dass das Blockieren von Kaliumkanälen eine Vielzahl biologischer Prozesse reguliert, einschließlich der elektrischen Herzaktivität (Lynch et al., FASEB J. 6: 2952, 1992; Santuinetti, Hypertension 19: 228, 1992; Deal et al., Physiol. Rev. 76: 49, 1996), Neurotransmission (HalliWell, „K⁺ channels in the central nervous system" in Potassium Channels, Hrsg. N. S. Cook, S. 348, 1990) und T-Zellaktivierung (Chandy et al., J. Exp. Med. 160: 369, 1984; Lin et al., J. Exp Med. 177: 637, 1993). Diese Effekte werden durch spezifische Subklassen oder Subtypen von Kaliumkanälen vermittelt.
Wir haben verschiedene Typen von Kaliumkanälen kloniert und exprimiert, die die funktionellen, pharmakologischen und Gewebeverteilungseigenschaften zeigen, die sie zu Zielkandidaten für Kaliumkanäle zur Behandlung von Erkrankungen machen. Beispielsweise wird allgemein angenommen, dass der als I_Kur (I_sus) bezeichnete spannungsgesteuerte sogenannte delayed rectifier-Kaliumkanal, von dem berichtet worden ist, dass er das Kv1.5 α-Untereinheit-Genprodukt enthält, bei der Repolarisation des menschlichen atrialen Aktionspotentials von Bedeutung ist und ist somit ein Zielkandidat für einen Kaliumkanal zur Behandlung von Herzarrhythmien, insbesondere solchen, die im Vorhof eintreten (Wang et al., Circ. Res. 73: 1061, 1993; Fedida et al., Circ. Res. 73: 210, 1993; Wang et al., J. Pharmacol, Exp. Ther. 272: 184, 1995; Amos et al., J. Physiol., 491: 31, 1996). Ebenso bestimmt I_ka (der das Kv1.3 α-Untereinheit-Genprodukt umfasst} das Ruhemembranpotential in menschlichen T-Lymphozyten (Leonard et al, Proc. Natl. Acad. Sci. 89: 10094, 1992; Kaczorowski und Koo, Perspectives in Drug Discovery and Design, 2: 233, 1994) und ist daher ein Zielkandidat für einen Kaliumkanal zur Prävention der T-Zellenaktivierung in der Immunantwort bei immunreaktiven Leiden (Lin et al., J. Exp Med. 177: 637, 1993).
Verbindungen zur Verwendung als Pharmazeutika umfassen optisch aktive Aminoindanderivate und Zubereitungen davon, wie in der WO 96/21640 beschrieben ist, 3,4-disubstituierte Phenylsulfonamide und pharmazeutisch verträgliche Salze davon, wie in der WO 96/36596 beschrieben ist und Indan-ähnliche Verbindungen und Formulierungen, die solche Indan-ähnliche Verbindungen als aktiven Bestandteil enthalten, wie in der WO 97/25983 beschrieben ist.
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen, die als Inhibitoren der Kaliumkanalfunktion brauchbar sind. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind insbesondere als Inhibitoren von spannungsgesteuerten Kaliumkanälen aktiv. Die erfindungsgemäßen Kaliumkanalinhibitoren können daher zur Behandlung von Erkrankungen eingesetzt werden, bei denen die Verlängerung des zellulären Aktionspotentials hilfreich ist, was Herzarrhythmien einschließt, jedoch nicht auf diese beschränkt ist. Darüber hinaus können erfindungsgemäße Verbindungen zur Behandlung von Störungen eingesetzt werden, bei denen die Induktion der Zellmembran-Depolarisation hilfreich ist, was Störungen der Zellproliferation einschließt, jedoch nicht auf diese beschränkt ist.
Es ist daher ein Ziel der vorliegenden Erfindung, Verbindungen bereitzustellen, die zur Behandlung von Erkrankungen in Säugern, einschließlich Menschen, brauchbar sind, und insbesondere zum Management von Erkrankungen, die durch Inhibieren von Zellmembran-Kaliumkanälen behandelt werden können, wie beispielsweise der Kaliumkanäle, die für den kardialen Kaliumstrom I_Kur verantwortlich sind oder der Kaliumkanäle, die für den T-Lymphozyten-Kaliumstrom I_Kn verantwortlich sind und Kaliumkanäle, die eines der Kv1.5- oder Kv1.3-α-Untereinheit-Genprodukte enthalten.
Ein anderes Ziel der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen in Säugern, einschließlich Menschen, bereitzustellen, das auf die Inhibierung der Kaliumkanalfunktion antwortet, wobei das Verfahren umfasst, dass einem bedürftigen Säuger eine erfindungsgemäße Verbindung verabreicht wird.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
1 vergleicht die Wirkung von 3 nM Margatoxin und 10 μM 1-(p-Ethylphenyl) sulfimid-2-hydroxy-6-(m-methoxy)benzamido-indan (Verbindung 4) auf das Membranpotential in Eierstockzellen des chinesischen Hamsters (CHO Chinese hamster ovary), die menschliche Kv1.3-Kaliumkanäle exprimieren (CHO-Kv1.3). Die Wirkung von 10 μM von Verbindung 4 auf das Membranpotential in nicht-transfizierten CHO-Zellen (CHO-WT) ist ebenfalls angegeben.
2 zeigt die inhibitorische Wirkung von 10 μM von Verbindung 4 auf die Zunahme des Efflux von Rubidium 86 (⁸⁶Rb), der durch 60 mM KCl in CHO-Zellen, die menschliche Kv1.3- oder Kv1.5-Kaliumkanäle exprimieren, hervorgerufen wird.
3 veranschaulicht die Inhibierung von Kaliumströmen durch Verbindung 4 in CHO-Zellen mit angelegter Spannung, die Kv1.3 oder Kv1.5 exprimieren.
4 zeigt Aktionspotentiale, die in Herzmuskelzellen von Ratten in Abwesenheit eines Arzneistoffs (Kontrolle) hervorgerufen wurden, 2 Minuten nach Applikation von 1 μM von Verbindung 4 und nachdem der Arzneistoff ausgewaschen war.
5 vergleicht die inhibitorische Wirkung von 10 μM von Verbindung 4,1 nM von Margatoxin (MgTx) und 50 nM Charybdotoxin (CTX) auf die Phytohämoagglutinin (PHA)(1,25 oder 2,5 μg/ml) induzierte Stimulation des ³H-Thymidin-Einbaus in menschliche T-Lymphozyten.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Die Erfindung beschreibt Verbindungen und ihre Verwendung als Inhibitoren der spannungsabhängigen Kaliumkanalfunktion, insbesondere Kaliumkanäle (d. h. I_Kur, Kv1.5), die als Targets zur Behandlung von Herzarrhythmien dienen können, insbesondere solche, die im Vorhof eintreten (z. B. Vorhofflattern und Vorhoffibrillation)(Wang et al., Circ. Res. 73: 1061, 1993; Fedida et al., Circ. Res. 73: 210, 1993; Wang et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 272: 184, 1995), sowie Kaliumkanäle (d. h. I_Kn, Kv1.3), die als Targets zur Behandlung von immunologischen Erkrankungen dienen können (Kaczorowski und Koo, Perspectives in Drug Discovery and Design 2: 233, 1994). Die vorliegende Erfindung stellt folglich auch ein Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen bereit, die auf die Inhibierung der Kaliumkanalfunktion reagieren, wie beispielsweise Herzarrhythmien und verschiedene immunologische Erkrankungen, wobei die erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden.
Die Erfindung beruht insbesondere auf der Erkenntnis, dass die Verbindungen der folgenden Formel (I) Inhibitoren der Kaliumkanalfunktion sind. Insbesondere haben diese Verbindungen Aktivität gegen die Kaliumkanäle/Ströme I_Kur, I_Kn, Kv1.5, Kv1.3 beim Menschen gezeigt. Folglich sind diese Verbindungen bei der Behandlung von Herzarrhythmien und Störungen der Zellproliferation brauchbar.
In einem ersten Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung daher Verbindungen mit Kaliumkanal-inhibitorischer Aktivität der Formel (I):
in der R¹ gleich H, Alkyl ist oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl;
R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl;
R³ gleich Wasserstoff oder Methyl ist;
R⁴ gleich Wasserstoff oder Methyl ist;
X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist;
X² gleich C=O oder SO₂ ist;
Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist; wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist;
Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist, wobei q gleich 0 oder 1 ist;
Z gleich H, OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist;
wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸, oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist;
m = 1 bis 5;
R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist; wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist;
R⁶ gleich H oder Alkyl ist;
R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ gleich Alkyl ist;
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon, mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, dann X¹ und X² nicht beide C=O sein können, wenn Y¹ gleich (CH₂)_p mit p = 0 ist, wenn Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, und wenn R¹ und R² beide Methyl sind, und mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, X² gleich SO₂ ist, Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, R³ und R⁴ beide H sind und R¹ ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, dann X¹ nicht C=O sein kann, Y¹ nicht (CH₂)_p mit p = 0 sein kann und R² nicht Methyl sein kann, und mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, dann X¹ und X² nicht beide gleich C=O sein können, wenn Y¹ gleich O ist, Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, R¹ ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, und wenn R² ein Alkyl ist.
Geeignete Gegenionen L werden im Folgenden beschrieben und umfassen als nicht einschränkende Beispiele Bromid, Chlorid, Acetat und Tosylat.
Der Indanylkern kann an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert sein, NR³ und Z an der 1-bzw. 2-Stellung vorliegen und wobei X² = SO₂ ist.
R³ ist vorzugsweise Wasserstoff; X² ist SO₂; Y² ist (CH₂)_q, wobei q gleich 0 ist; R⁴ ist Wasserstoff; X¹ ist C=O;
R¹ ist ausgewählt aus der Gruppe aus einem ggf. substituierten Aryl und einem ggf. substituierten Heteroaryl;
R² ist ausgewählt aus der Gruppe aus einem ggf. substituierten Aryl und einem ggf. substituierten Heteroaryl;
Y¹ ist O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH; wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; und Z ist H oder OR⁵, wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ ist N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist;
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon.
In einem anderen Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung eine Verbindung mit Kaliumkanal-inhibierender Aktivität der Formel (II):
in der R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphthyl, ist;
R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl;
m gleich 0 oder 1 ist;
X gleich O oder S ist; und
Y ausgewählt ist aus (CH₂)_p, (CH₂O)_q und (NH)_r, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; q gleich 0 oder 1 ist und r gleich 0 oder 1 ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon.
R² ist vorzugsweise Phenyl per se oder Phenyl, das mit einer oder mehreren Gruppen in der 2(ortho)-, 2(meta)- oder 4(para)-Stellung substituiert ist, wobei die Gruppen ausgewählt sind aus C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Cyano, Halo und Trifluoromethyl.
Alternativ ist R² ein ggf. substituiertes Heteroaryl, ein ggf. substituiertes Heterocyclyl oder ein ggf. substituiertes Carbocycloalkyl, wobei die ggf. substituierten Gruppen mit C_1-6-Alkyl, C-_1-6-Alkoxy, Cyano, Halo und Trifluoromethyl substituiert sein können. Bevorzugter sind die Verbindungen der folgenden Formel (III):
in der R¹, R² und p wiederum die zuvor angegebene Bedeutung aufweisen; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon. R¹ ist vorzugsweise eine Arylgruppe, die ausgewählt ist aus Phenyl und β-Naphthyl und noch bevorzugter eine solche Arylgruppe, die mit Gruppen wie C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy sowie Cyano, Trifluoromethyl und Halogen substituiert ist. Entsprechend ist R² ein ggf. substituiertes Phenyl, ein ggf. substituiertes Heteroaryl, ein ggf. substituiertes Heterocyclyl oder ein ggf. substituiertes Carbocycloalkyl, von denen jedes mit C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Cyano, Halo und Trifluoromethyl substituiert sein kann.
Beispiele für Moleküle, die unter den Formeln I und II beschrieben sind, umfassen:
Beispiele für die unter Formel III beschriebenen Verbindungen umfassen die Verbindungen 2, 4, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 19, 20, 24, 26, 27 und 28.
Eine interessante Untergruppe von Verbindungen der Formel I sind in Formel IV gezeigt (im folgenden angegeben).
in der die Variablen die in Formel I angegebene Bedeutung mit den angegebenen Präferenzen aufweisen: R¹ ist vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe aus einem ggf. substituierten Aryl und einem ggf. substituierten Heteroaryl; R² ist vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe aus einem ggf. substituierten Aryl und einem ggf. substituierten Heteroaryl und Z ist vorzugsweise H oder OR⁵, wobei R⁵ die oben angegebene Bedeutung aufweist. R¹ und R² sind vorzugsweise Gruppen, die bei einem physiologischen pH nicht ionisiert sind.
In einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung der Formel I umfasst
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder Arzneistoffvorstufe davon;
und ein pharmazeutisch verträgliches Verdünnungsmittel oder Träger
mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, dann X¹ und X² nicht beide C=O sein können, wenn Y¹ gleich (CH₂)_p mit p = 0 ist, wenn Y² gleich (CH₂)_q(CH₂)_q mit q = 0 ist und wenn R¹ und R² beide Methyl sind, und mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, X² gleich SO₂ ist, Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, sowohl R³ als auch R⁴ gleich H sind, und R¹ ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, dann X¹ nicht C=O sein kann, Y¹ nicht (CH₂)_p mit p = 0 sein kann und R² nicht Methyl sein kann.
Der Indanylkern der Verbindung kann an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert sein, NR³ und Z an der 1- bzw. 2-Stellung vorliegen und X² gleich SO₂ sein.
Ein anderer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung umfasst, die ausgewählt ist aus den Formeln II, III, IV
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder Arzneistoffvorstufe davon; und ein pharmazeutisch verträgliches Verdünnungsmittel oder Träger.
Der Indanylkern der Verbindung kann an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert sein, wobei die Sulfonamid- und Hydroxylgruppen an der 1- bzw. 2-Stellung vorliegen.
In einem anderen Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung eine Verbindung, die eine Kaliumkanal-inhibierende Aktivität einer der Formeln I, II, III oder IV aufweist, zur therapeutischen Verwendung.
In einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung einer Formel, die ausgewählt ist aus den Formeln I, II, III oder IV zur in vitro-Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen oder in der Position eines Medikaments für die Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Der Indanylkern der Verbindung kann an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert sein, NR³ und Z an der 1- bzw. 2-Stellung vorliegen und X² gleich SO₂ sein.
Der Kaliumkanal kann ein spannungsgesteuerter Kaliumkanal sein.
Vorzugsweise ist der Kaliumkanal ausgewählt aus einem Kaliumkanal, der für den kardialen Kaliumstrom I_kur verantwortlich ist, einem Kaliumkanal, der für den T-Lymphozyten Kaliumstrom I_kn verantwortlich ist und Kaliumkanälen, die eines der Kv1.5 oder Kv1.3 α-Untereinheit-Genprodukte enthalten.
Ein anderer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Herzarrhythmien oder bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Störungen der Zellproliferation.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung der Formel IV bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Herzarrhythmien oder bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Störungen der Zellproliferation.
Ein anderer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung der Formel II oder bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Störungen der Zellproliferation.
Der hier alleine oder in Kombination verwendete Begriff „Alkyl" betrifft eine gerad- oder verzweigtkettige gesättigte Kohlenwasserstoffgruppe, die von 1–10 Kohlenstoffatome aufweist und die Begriffe „C_1-6-Alkyl" und „niedere Alkyle" betreffen solche Gruppen, die von 1–6 Kohlenstoffatome aufweisen, wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl und dergleichen.
Der hier alleine oder in Kombination verwendete Begriff „Alkoxy" betrifft eine gerad- oder verzweigtkettige Alkylgruppe, die an das Stammmolekül mittels einer -O-Verknüpfung kovalent gebunden ist und von 1–10 Kohlenstoffatome aufweist und die Begriffe „C_1-6-Alkoxy" und „niedere Alkoxy" betreffen solche Gruppen, die von 1–6 Kohlenstoffatome enthalten, wie Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy, t-Butoxy und dergleichen.
Der Begriff „Alkoxyalkyl" betrifft eine mit einer Alkoxygruppe substituierte Alkylgruppe.
Der Begriff „Haloalkyl" betrifft ein substituiertes Alkyl, vorzugsweise ein substituiertes niederes Alkyl, das mit einem oder mehreren Halogenatomen substituiert ist und vorzugsweise ein C₁- bis C₄-Alkyl ist, das mit 1–3 Halogenatomen substituiert ist. Ein Beispiel für ein Haloalkyl ist Trifluoromethyl.
Der hier alleine oder in Kombination verwendete Begriff „Alkanoyl" betrifft einen Acylrest, der von einer Alkancarbonsäure, insbesondere einer niederen Alkancarbonsäure, abgeleitet ist und schließt beispielsweise Acetyl, Propionyl, Butyryl, Valeryl und 4-Methylvaleryl mit ein.
Der Begriff „Aminocarbonyl" bedeutet ein Amino-substituiertes Carbonyl (Carbamoyl oder Carboxamid), wobei die Aminogruppe ein primäre, sekundäres (monosubstituiertes Amino) oder tertiäre Amino (di-substituierte Amino)-Gruppe sein kann, die als Substituent(en) ein niederes Alkyl aufweist (aufweisen).
Der Begriff „Carbocycloalkyl" betrifft stabile, gesättigte oder teilweise ungesättigte monocyclische, verbrückte monocyclische, bicyclische und Spiroringhydrocarbyle mit 3 bis 15 Kohlenstoffatomen, wie Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl, Bicyclohexyl, Bicyclooctyl, Bicyclononyl, Spirononyl und Spirodecyl. Der Begriff „ggf. substituiert" gibt an, wenn er sich hier auf „Carbocycloalkyl" bezieht, dass die Carbocycloalkylgruppe an einer oder mehreren substituierbaren Ringpositionen durch eine oder mehrere Gruppen substituiert sein kann, die unabhängig ausgewählt sind aus Alkyl (vorzugsweise niederes Alkyl), Alkoxy (vorzugsweise niederes Alkoxy), Nitro, Monoalkylamino (vorzugsweise ein niederes Alkylamino), Dialkylamino (vorzugsweise ein Di[niederes]alkylamino, Cyano, Halo, Haloalkyl (vorzugsweise Trifluoromethyl), Alkanoyl, Aminocarbonyl, Monoalkylaminocarbonyl, Dialkylaminocarbonyl, Alkylamido (vorzugsweise niederes Alkylamido), Alkoxyalkyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxy[niederes]alkyl), Alkoxycarbonyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxycarbonyl), Alkylcarbonyloxy (vorzugsweise ein niederes Alkylcarbonyloxy) und Aryl (vorzugsweise Phenyl), wobei Aryl ggf. substituiert ist mit Halogen-, niederen Alkyl- und niederen Alkoxygruppen.
Der hier verwendete Begriff „Heterocyclyl" betrifft ein stabiles, gesättigtes oder teilweise ungesättigtes, monocyclisches, verbrückt monocyclisches, bicyclisches und Spiroringsystem, das Kohlenstoffatome und andere Atome, die ausgewählt sind aus Stickstoff, Schwefel und/oder Sauerstoff, enthält. Vorzugsweise ist ein Heterocyclyl ein 5-oder 6-gliedriger monocyclischer Ring oder ein 8-11-gliedriger bicyclischer Ring, der aus Kohlenstoffatomen besteht und 1, 2 oder 3 Heteroatome enthält, die ausgewählt sind aus Stickstoff, Sauerstoff und/oder Schwefel. Der Begriff „ggf. substituiert" in Bezug auf „Heterocyclyl" hierin zeigt an, dass die Heterocyclylgruppe an einer oder mehreren substituierbaren Ringstellungen mit einer oder mehreren Gruppen substituiert werden kann, die unabhängig ausgewählt sind aus Alkyl (vorzugsweise niederes Alkyl), Alkoxy (vorzugsweise niederes Alkoxy), Nitro, Monoalkylamino (vorzugsweise ein niederes Alkylamino), Dialkylamino (vorzugsweise ein Di[niederes]alkylamino), Cyano, Halo, Haloalkyl (vorzugsweise Trifluoromethyl), Alkanoyl, Aminocarbonyl, Monoalkylaminocarbonyl, Dialkylaminocarbonyl, Alkylamido (vorzugsweise niederes Alkylamido), Alkoxyalkyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxy[niederes]alkyl), Alkoxycarbonyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxycarbonyl), Alkylcarbonyloxy (vorzugsweise ein niederes Alkylcarbonyloxy) und Aryl (vorzugsweise Phenyl), wobei Aryl ggf. substituiert ist mit Halogen-, niederen Alkyl- und niederen Alkoxygruppen. Beispiele für solche Heterocy clylgruppen sind Isoxazolyl, Imidazolinyl, Thiazolinyl, Imidazolidinyl, Pyrrolyl, Pyrrolinyl, Pyranyl, Pyrazinyl, Piperidyl, Morpholinyl und Triazolyl. Die Heterocyclylgruppe kann an die Stammstruktur durch ein Kohlenstoffatom oder durch ein Heteroatom des Heterocyclyls, das zu einer stabilen Struktur führt, gebunden sein.
Der hier verwendete Begriff „Heteroaryl" betrifft ein stabiles, aromatisches, monocyclisches oder bicyclisches Ringsystem, das Kohlenstoffatome und andere Atome enthält, die ausgewählt sind aus Stickstoff, Schwefel und/oder Sauerstoff. Vorzugsweise ist ein Heteroaryl ein 5- oder 6-gliedriger monocyclischer Ring (ggf. Benzo-fusioniert) oder ein 8-11-gliedriger bicyclischer Ring, der aus Kohlenstoffatomen besteht und 1, 2 oder 3 Heteroatome enthält, die ausgewählt sind aus Stickstoff, Sauerstoff und/oder Schwefel. Der Begriff „ggf. substituiert" in Bezug auf „Heteroaryl" hierin zeigt an, dass die Heteroarylgruppe an einer oder mehreren substituierbaren Ringpositionen mit einer oder mehreren Gruppen substituiert sein kann, die unabhängig ausgewählt sind aus Alkyl (vorzugsweise niederes Alkyl), Alkoxy (vorzugsweise niederes Alkoxy), Nitro, Monoalkylamino (vorzugsweise ein niederes Alkylamino), Dialkylamino (vorzugsweise ein Di[niederes]alkylamino), Cyano, Halogen, Haloalkyl (vorzugsweise Trifluoromethyl), Alkanoyl, Aminocarbonyl, Monoalkylaminocarbonyl, Dialkylaminocarbonyl, Alkylamido (vorzugsweise niederes Alkylamido), Alkoxyalkyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxy[niederes]alkyl), Alkoxycarbonyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxycarbonyl), Alkylcarbonyloxy (vorzugsweise ein niederes Alkylcarbonyloxy) und Aryl (vorzugsweise Phenyl), wobei Aryl ggf. mit Halogen-, niederen Alkyl- und niederen Alkoxygruppen substituiert ist. Beispiele solcher Heteroarylgruppen sind Isoxazolyl, Imidazolyl, Thiazolyl, Isothiazolyl, Pyridyl, Furyl, Pyrimidinyl, Pyrazolyl, Pyridazinyl, Furazanyl und Thienyl. Die Heteroarylgruppe kann an die Stammstruktur durch ein Kohlenstoffatom oder durch ein Heteroatom des Heteroaryls, das zu einer stabilen Struktur führt, gebunden sein.
Die spezifische chemische Natur der ggf. substituierten Heterocyclyl- und Heteroarylgruppen der Endgruppen R¹ und R² in den zuvor identifizierten Kaliumkanalinhibitorverbindungen ist nicht besonders kritisch und wie zuvor angemerkt wird ein breites Spektrum an Substituentengruppen in Betracht gezogen. Die Substituenten für die Heterocyclyl- und Heteroarylgruppen werden so ausgewählt, dass die Gesamtzahl der Kohlenstoff- und Heteroatome, die die substituierten Heterocyclyle und Heteroaryle umfassen, nicht mehr als etwa 20 beträgt.
Die hier zum Identifizieren von Substituentengruppen verwendeten Begriffe „Halo" und „Halogen" stehen für Fluor, Chlor, Brom oder Iod, vorzugsweise Chlor oder Fluor.
Der Begriff „Aryl", wenn er alleine oder in Kombination verwendet wird, betrifft ein unsubstituiertes oder ggf. substituiertes monocyclisches oder bicyclisches aromatisches Kohlenwasserstoffringsystem. Bevorzugt sind ggf. substituierte Phenyl- oder Naphthylgruppen. Die Arylgruppe kann ggf. an einer oder mehreren substituierbaren Ringpositionen mit einer oder mehreren Gruppen substituiert sein, die unabhängig ausgewählt sind aus Alkyl (vorzugsweise niederes Alkyl), Alkoxy (vorzugsweise niederes Alkoxy), Nitro, Monoalkylamino (vorzugsweise ein niederes Alkylamino), Dialkylamino (vorzugsweise ein Di[niederes]alkylamino), Cyano, Halo, Haloalkyl (vorzugsweise Trifluoromethyl), Alkanoyl, Aminocarbonyl, Monoalkylaminocarbonyl, Dialkylaminocarbonyl, Alkylamido (vorzugsweise niederes Alkylamido), Alkoxyalkyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxy[niederes]alkyl), Alkoxycarbonyl (vorzugsweise ein niederes Alkoxycarbonyl), Alkylcarbonyloxy (vorzugsweise ein niederes Alkylcarbonyloxy) und Aryl (vorzugsweise Phenyl), wobei Aryl ggf. substituiert ist mit Halo-, niederen Alkyl- und niederen Alkoxygruppen. Vorzugsweise ist die Arylgruppe Phenyl, das ggf. mit bis zu vier und üblicherweise mit einer oder zwei Gruppen substituiert ist, die vorzugsweise ausgewählt sind. aus C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy sowie Cyano, Trifluoromethyl und Halo.
Der Begriff „Aralkyl" alleine oder in Kombination betrifft einen Alkylrest, der die zuvor angegebene Bedeutung aufweist, in dem ein Wasserstoffatom durch einen Arylrest wie zuvor definiert ersetzt ist und schließt Benzyl und 2-Phenylethyl mit ein.
Der Begriff „Alkoxycarbonyl" alleine oder in Kombination bedeutet einen Rest der Formel -C(O)-Alkoxy, in der Alkoxy die zuvor angegebene Bedeutung aufweist.
Der Begriff „Alkylcarbonyloxy" alleine oder in Kombination steht für einen Rest der Formel -O-C(O)-Alkyl, in der Alkyl die zuvor angegebene Bedeutung aufweist.
Der Begriff „Alkenyl" bedeutet einen gerad- oder verzweigtkettigen Kohlenwasserstoff mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen, der eine oder mehrere Doppelbindungen, vorzugsweise eine oder zwei Doppelbindungen, enthält. Beispiele für Alkenyl umfassen Ethenylen, Propenylen, 1,3-Butadienyl und 1,3,5-Hexatrienyl.
Wenn nichts anderes angegeben ist, betrifft der hier verwendete Begriff „ggf. substituiert" die Substitution eines Ringsystems an einer oder mehreren Positionen mit einer oder mehreren Gruppen, die ausgewählt sind aus C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, ein ggf. substituiertes Phenyl, Cyano, Halo, Trifluoromethyl, C_1-8-Alkoxycarbonyl, C_1-6-Alkylcarbonyloxy, mono- & bis-(C_1-6-Alkyl)-carboxamid, C_1-6-Alkylamido, Nitro und mono- & bis-(C_1-6-Alkyl)-amino.
Der hier verwendete Begriff „Behandlung" beschreibt das Management und die Fürsorge für einen Patienten, der in schlechter Verfassung ist oder an einer Erkrankung oder einer Störung leidet, für die die Verabreichung einer erfindungsgemäßen Verbindung die Aktion oder Aktivität eines Kaliumkanals ändert, um das Auftreten von Symptomen oder Komplikationen zu verhindern, die mit der Verfassung, der Erkrankung oder der Störung verbunden sind, um die Symptome oder Komplikationen, die durch die Verfassung, die Erkrankung oder die Störung verursacht werden, zu lindern oder um die Verfassung, Erkrankung oder Störung insgesamt zu beseitigen.
Indanverbindungen der zuvor genannten Formeln, die gemäß der vorliegenden Erfindung als Kaliumkanalinhibitoren brauchbar sind, können gemäß der folgenden aufeinanderfolgenden Schritte hergestellt werden:

(1) Nitrierung von 1-Indanon, um ein Nitroindanon zu erhalten, das dann von Komponenten geringer Nebenprodukte abgetrennt wird;
(2) Reduktion des Produkts aus Schritt (1), wobei der entsprechende Alkohol erhalten wird;
(3) das Produkt von Schritt (2) einer Säure-katalysierten Dehydratation unterziehen, wobei das entsprechende Inden erhalten wird;
(4) Oxidieren der Doppelbindung des Produkts von Schritt (3), wobei das Epoxid erhalten wird;
(5) Umsetzen des Epoxids aus Schritt (4) mit Amoniumhydroxyd, wobei der Aminoalkohol erhalten wird;
(6) Schützen der Aminogruppe des Aminoalkohols mit einer herkömmlichen Schutzgruppe. Ein breites Spektrum an Aminoschutzgruppen wird üblicherweise eingesetzt, um die -NH₂-Funktionalität zu blockieren oder zu schützen, während andere funktionelle Gruppen an der Stammverbindung umgesetzt werden. Die Art der verwendeten Schutzgruppe ist nicht entscheidend, solange die derivatisierte -NH₂-Gruppe unter der (den) Bedingungen) der nachfolgenden) Reaktionen) stabil ist und zum geeigneten Zeitpunkt entfernt werden kann, ohne den Rest des Moleküls aufzureißen. Siehe T. W. Greene und P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Kapitel 7 (1991). Bevorzugte Aminoschutzgruppen sind t-Butoxycarbonyl (Boc), Phthalimid, ein cyclisches Alkyl und Benzyloxycarbonyl;
(7) Schützen der Hydroxylgruppe des Aminoalkohols mit einer herkömmlichen Schutzgruppe. Ein breites Spektrum an Hydroxyschutzgruppen wird üblicherweise verwendet, um die -OH-Funktionalität zu blockieren oder zu schützen, während andere funktionelle Gruppen an der Stammverbindung umgesetzt werden. Die Arten der verwendeten Schutzgruppen sind nicht entscheidend, solange die derivatisierte -OH-Gruppe unter der (den) Bedingungen) der nachfolgenden) Reaktionen) stabil ist und zum geeigneten Zeitpunkt entfernt werden kann, ohne den Rest des Moleküls aufzureißen. Siehe T. W. Greene und P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Kapitel 7 (1991). Eine geeignete „Hydroxyschutzgruppe" umfasst eines der Ether- oder Esterderivate der Hydroxygruppe, die üblicherweise verwendet werden, um die Hydroxygruppe zu blockieren oder zu schützen, während Reaktionen an anderen funktionellen Gruppen einer Verbindung durchgeführt werden. Hydroxyschutzgruppen umfassen tert-Butyldiphenylsilyloxy (TBDPS), tert-Butyldimethylsilyloxy (TBDMS), Triphenylmethyl (Trityl), Mono- oder Di-Methoxytrityl, oder einen Alkyl- oder Arylester;
(8) Entschützen der geschützten Aminogruppe des Produkts von Schritt (7), wobei ein aminofunktionelles Indan erhalten wird;
(9) Umsetzung des Produkts aus Schritt (8) mit einem Sulfonylchlorid, um eine R'-SO₂-Gruppe anzuhängen, wobei R' äquivalent ist zu R¹, wie es in Formel (I) definiert ist. Der Aminoalkohol wird in einem geeigneten Solvens mit dem Sulfonylchlorid (R'SO₂Cl) oder Sulfonylanhydrid in Gegenwart eines Säurefängers umgesetzt. Geeignete Solvenzien, in denen die Reaktion durchgeführt werden kann, schließen Methylenchlorid und Tetrahydrofuran mit ein. Geeignete Säurefänger umfassen Triethylamin und Pyridin;
(10) Reduzieren des sulfonilierten Produkts aus Schritt (9), wobei das entsprechende Anilin erhalten wird; und
(11) Acylieren des Produkts aus Schritt (10), um eine andere Substituentengruppe anzuhängen, wobei RCOCl verwendet wird, indem R äquivalent ist zu R² wie es in Formel (I) definiert ist.
(12) Entschützen der geschützten Hydroxygruppe des acylierten Produkts, um die gewünschte Verbindung herzustellen.

Es ist zu erkennen, dass mindestens zwei chirale Zentren in den Verbindungen vorliegen, die in den Rahmen der vorliegenden Erfindung fallen und solche Verbindungen liegen daher in verschiedenen stereoisomeren Formen vor. Sämtliche der verschiedenen Stereoisomere sollen zur Erfindung gehören. Die Erfindung umfasst somit die cis- und trans-Isomere und die entsprechenden Enantiomere der Verbindungen der Formeln I–IV. Obwohl die Verbindungen als Racemate hergestellt werden können und als solche bequem verwendet werden können, können auch einzelne Enantiomere isoliert werden oder mittels bekannter Techniken bevorzugt synthetisiert werden, falls es gewünscht ist. Solche Racemate und individuellen Enantiomere und Gemische davon sollen ebenfalls zur Erfindung gehören.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch die pharmazeutisch verträglichen Arzneistoffvorstufen der Verbindungen von Formel I. Eine Arzneistoffvorstufe ist ein Arzneistoff, der chemisch modifiziert worden ist und an seiner Aktionsstelle biologisch inaktiv sein kann, der jedoch durch einen oder mehrere enzymatische oder andere in vivo-Prozesse zu der bioaktiven Stammform abgebaut oder modifiziert werden kann. Im Allgemeinen weist eine Arzneistoffvorstufe ein unterschiedliches pharmakokinetisches Profil auf als der Stammarzneistoff, so dass er beispielsweise über das Schleimhautepithel leichter absorbiert wird, eine bessere Salzbildung oder Löslichkeit aufweist und/oder eine bessere systemische Stabilität aufweist (z. B. eine erhöhte Plasmahalbwärtszeit).
Der Fachmann erkennt, dass chemische Modifikationen eines Stammarzneistoffs, um eine Arzneistoffvorstufe zu erhalten, umfassen: (1) terminale Ester oder Amidderivate, die mittels Esterasen oder Lipasen gespalten werden können; (2) terminale Peptide, die durch spezifische oder nicht-spezifische Proteasen erkannt werden können; oder (3) ein Derivat, das bewirkt, dass sich die Arzneistoffvorstufe an einer Aktionsstelle durch Membranselektion und Kombinationen der zuvor genannten Techniken akkumuliert. Herkömmliche Vorgehensweisen zur Selektion und Herstellung von Derivaten von Arzneistoffvorstufen sind in H. Bundgaard, Design of Prodrugs, (1985) beschrieben. Der Fachmann ist in der Herstellung von Arzneistoffvorstufen versiert und sich deren Bedeutung bewusst.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in ihrer reinen Form oder in Form von pharmazeutisch verträglichen Salzen verwendet werden, die von anorganischen oder organischen Säuren abgeleitet sind. Beispiele für Säuren, die verwendet werden können, um pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze von erfindungsgemäßen Verbindungen zu bilden, umfassen anorganische Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure und organische Säuren, wie Oxasäure, Maleinsäure, Bernsteinsäure und Zitronensäure. Diese Salze umfassen daher folgende, sind jedoch nicht darauf beschränkt: Acetat, Adipat, Alginat, Citrat, Aspartat, Benzoat, Benzolsulfonat, Bisulfat, Butyrat, Camphorat, Camphersulfonat, Digluconat, Cyclopentanpropionat, Dodecylsulfat, Ethansulfonat, Glucoheptanoat, Glycerophosphat, Hemisulfat, Heptanoat, Hexanoat, Fumarat, Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydroiodid, 2-Hydroxy-ethansulfonat, Lactat, Maleat, Methansulfonat, Nicotinat, 2-Naphthalinsulfonat, Oxalat, Pamoat, Pectinat, Persulfat, 3-Phenylpropionat, Picrate, Pivalat, Propionat, Succinct, Tartrat, Thiocyanat, p-Toluolsulfonat und Undecanoat.
Die basischen Stickstoff-haltigen Gruppen können auch quaternisiert werden mit Agentien, wie niederen Alkylhalogeniden, wie Methyl-, Ethyl-, Propyl- und Butylchloriden, -bromiden und -iodiden; Dialkylsulfaten, wie Dimethyl-, Diethyl-, Dibutyl- und Diamylsulfaten, langkettigen Halogeniden, wie Decyl-, Lauryl-, Myristyl- und Stearylchloriden, -bromiden und -iodiden, Aralkylhalogeniden, wie Benzyl- und Phenethylbromiden und anderen. Wasser- oder öllösliche oder -dispergierbare Produkte werden dabei im Allgemeinen erhalten.
Die pharmazeutisch verträglichen Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als verschiedene Solvate vorliegen, beispielsweise mit Wasser, Methanol, Ethanol, Dimethylformamid, Ethylacetat und dergleichen. Gemische solcher Solvate können ebenfalls hergestellt werden. Solche Solvate gehören ebenfalls zur vorliegenden Erfindung.
Das pharmakologische Profil der kaliumkanalinhibitorischen Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen kann vom Fachmann ohne Weiteres mittels Routineversuchen bewertet werden, wie beispielsweise den in den folgenden Beispielen veranschaulichten Vorgehensweisen und Techniken. Bei Tests zum Bewerten der Aktivität besonderer Verbindungen können Zellen, die stabil transfiziert wurden, um einen spezifischen Kaliumkanal zu exprimieren sowie native Säugerzellen verwendet werden. Insbesondere können Zellen, die stabil transfiziert wurden, um einen spezifischen Kaliumkanal zu exprimieren, die mit einem spannungsabhängigen fluoreszierenden Farbstoff behandelt worden sind, wie beispielsweise bis-(1,3-Dibutylbarbitursäure)trimethinoxonol dazu verwendet werden, die inhibitorische Aktivität von Kaliumkanal-inhibierenden Verbindungen zu messen, möglicherweise im Vergleich zu bekannten Inhibitoren. Al ternativ können solche Zellen mit einer nachweisbaren Spezies, wie beispielsweise ⁸⁶Rb markiert und dann mit einer besonderen Verbindung getestet zu werden, unter Bedingungen, die andererseits zum Aktivieren des Kaliumkanals geeignet sind, um die Kalium-inhibierende Aktivität der Verbindung zu bewerten. Die Kaliumkanal-inhibierende Aktivität einer Verbindung kann auch bestimmt werden, indem isolierte Säugerzellen und die gesamte Zellkonfiguration der bekannten Patch-Clamp-Technik (Hamill et al., Pflugers Archiv 391: 85, 1981) verwendet werden. Diese und andere bekannten Techniken können ohne Weiteres vom Fachmann eingesetzt werden, um das Aktivitätsniveau der erfindungsgemäßen Kaliumkanal-inhibierenden Verbindungen zu bewerten.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können über eine Vielzahl von Wegen verabreicht werden, einschließlich oral, parenteral, sublingual, intranasal, durch Inhalationsspray, rektal oder topisch in Dosierungseinheitsformulierungen, die herkömmliche, nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Träger, Adjuvantien und Vehikel nach Wunsch enthalten. Der hier verwendete Begriff parenteral umfasst subkutane Injektionen, intravenöse, intramuskuläre und intrakardiale Injektion oder Infusionstechniken. Topische Verabreichung kann auch die Verwendung einer transdermalen Verabreichung, wie transdermale Pflaster oder Iontophoresevorrichtungen umfassen.
Injizierbare Zubereitungen, beispielsweise sterile injizierbare wässrige oder ölartige Suspensionen können nach dem bekannten Stand der Technik formuliert werden, wobeigeeignete dispergierende oder benetzende Mittel und suspendierende Mittel verwendet werden. Die sterile injizierbare Zubereitung kann auch eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nicht-toxischen parenteral verträglichen Verdünnungsmittel oder Lösungsmittel, beispielsweise eine Lösung in 1,2-Propandiol, sein. Unter den verträglichen Vehikeln und Lösungsmitteln, die eingesetzt werden können, sind Wasser, Ringers' Lösung und isotonische Natriumchloridlösung. Darüber hinaus werden herkömmlicherweise sterile, fixierte Öle als ein Solvens oder Suspendiermedium eingesetzt. Zu diesem Zweck kann jedes milde nicht-flüchtige Öl einschließlich synthetischer Mono- oder Diglyceride eingesetzt werden. Darüber hinaus finden Fettsäuren, wie Oleinsäure, bei der Herstellung von injizierbaren Zubereitungen Verwendung.
Suppositorien für rektale Verabreichung des Arzneistoffs können hergestellt werden, indem der Arzneistoff mit einem geeigneten, nicht-reizenden Excipiens, wie Kokos butter und Polyethylenglykolen, gemischt wird, die bei normalen Temperaturen fest, bei der rektalen Temperatur jedoch flüssig sind und daher im Rektum schmelzen und den Arzneistoff freisetzen.
Feste Dosierungsformen für orale Verabreichung können Kapseln, Tabletten, Pillen, Pulver und Granülen umfassen. In solchen festen Dosierungsformen kann die aktive Verbindung mit mindestens einem inerten Verdünnungsmittel, wie Sucrose, Lactose oder Stärke, vermischt werden. Solche Dosierungsformen können auch, wie dies normale Praxis ist, zusätzliche Substanzen und andere inerte Verdünnungs- bzw. Streckungsmittel enthalten, z. B. Gleitmittel, wie Magnesiumstearat. Im Fall von Kapseln, Tabletten und Pillen können die Dosierungsformen auch Puffermittel enthalten. Tabletten und Pillen können darüber hinaus mit enterischen Beschichtungen hergestellt werden.
Flüssige Dosierungsformen für die orale Verabreichung können pharmazeutisch verträgliche Emulsionen, Lösungen, Suspensionen, Sirups und Elixiere umfassen, die inerte Verdünnungsmittel enthalten, die auf diesem Gebiet üblicherweise verwendet werden, wie beispielsweise Wasser. Solche Zusammensetzungen können auch Adjuvantien, wie Benetzungsmittel, Emulgier- und Suspendiermittel und Süßungs-, Aromatisierungs- und Parfümiermittel umfassen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Form von Liposomen verabreicht werden. Wie in der Technik bekannt ist, stammen Liposome im Allgemeinen von Phospholipiden oder anderen lipiden Substanzen ab. Liposome werden als mono- oder multilamellare hydratisierte Flüssigkristalle gebildet, die in einem wässrigen Medium dispergiert werden. Jedes nicht-toxische, physiologisch verträgliche und metabolisierbare Lipid, das in der Lage ist, Liposome zu bilden, kann verwendet werden. Die vorliegenden Zusammensetzungen in Liposomform können zusätzlich zu der erfindungsgemäßen Verbindung Stabilisatoren, Konservierungsmittel, Excipentien und dergleichen enthalten. Die bevorzugten Lipide sind die Phospholipide und Phosphatidylcholine (Lecithine), sowohl natürliche als auch synthetische. Verfahren zur Bildung von Liposomen sind in der Technik bekannt. Siehe beispielsweise Prescott, Hrsg., Methods in Cell Biology, Bd. XIV, Academic Press, New York, N. Y. (1976), S. 33 ff.
Um bevorzugte Verbindungen von weniger bevorzugten Verbindungen zu selektieren verwendet man beispielsweise die in vitro-Tests, die unter der Überschrift BioAssays im Folgenden im Einzelnen erläutert werden. Typischerweise ruft eine bevorzugte Verbindung bei einer Konzentration im Bereich von etwa 10 nM bis etwa 1 μM in den beschriebenen in vitro-Tests eine halbe maximale Blockieraktivität hervor. Der Durchschnittsfachmann erkennt, dass die finale und die optimale Dosis und das Dosierungsschema für jeden gegebenen Arzneistoff empirisch ermittelt wird.
Die einem Wirt verabreichte tägliche Gesamtdosis in einzelnen oder aufgeteilten Dosen kann in einer Menge von beispielsweise von 0,001 bis 100 mg Wirkstoff pro kg Körpergewicht auf täglicher Basis und üblicherweise 0,01 bis 10 mg/kg/Tag betragen. Dosierungseinheitszusammensetzungen können solche Mengen von Teilen davon enthalten, dass sie die tägliche Dosis ausmachen. Es wird angenommen, dass eine therapeutisch wirksame Serumkonzentration eines Wirkstoffs 10 nM bis 10 μM (5 ng/ml bis 5 μg/ml) beträgt.
Die Menge an Wirkstoff, die mit Trägermaterialien kombiniert werden kann, um eine Einzeldosisform zu erzeugen, hängt von dem behandelten Wirt und dem besonderen Verabreichungsmodus ab.
Es ist jedoch selbstverständlich, dass die spezifische Dosishöhe für jeden speziellen Patienten von einer Vielzahl von Faktoren abhängt, einschließlich der Aktivität der verwendeten spezifischen Verbindung, dem Alter, dem Körpergewicht, der allgemeinen Gesundheit, dem Geschlecht und der Diät des Patienten, der Verabreichungszeit, dem Verabreichungsweg, der Ausscheidungsgeschwindigkeit, ob eine Arzneistoffkombination verwendet wird, und der Schwere der vorliegenden Erkrankung.
Die vorliegende Erfindung wird in den folgenden Beispielen ausführlicher erläutert. Diese Beispiele sollen die Erfindung veranschaulichen, sollen diese jedoch nicht einschränken. Wenn nichts anderes angegeben ist, sind sämtliche Bezugnahmen auf Teile und Prozentteile auf das Gewicht bezogen und sämtliche Temperaturen in Grad Celsius angegeben. Der Umfang der Erfindung besteht nicht nur aus den folgenden Beispielen.
BEISPIELE
Herstellung der Verbindungen
Herstellung 1

1. Zu einer Lösung von 1-Indanon (25 g, 0,189 mol) in konzentrierter H₂SO₄ (84 ml) bei 0°C wurde eine Lösung von KNO₃ (8,33 g, 0,0824 mol) in H₂SO₄ (40 ml) zugegeben, so dass die Innentemperatur unterhalb 15°C gehalten wurde. Nach einstündigem Rühren bei 0°C wurde das Reaktionsgemisch auf gestoßenes Eis gegossen und 30 Minuten lang kräftig gerührt. Die Suspension wurde dann abfiltriert, an der Luft getrocknet und mittels LC (95% Ethylacetat/Toluol) gereinigt, wobei das nitrierte Indanon (18,90 g, 56%) als ein blass-gelber Feststoff erhalten wurde.
2. Eine Lösung des nitrierten Produkts (18,90 g, 0,107 mol) in Methanol (300 ml) wurde auf 0°C gekühlt und NaBH₄ (4,04 g, 0,107 mol) wurde in mehreren kleinen Portionen zugegeben. Die Reaktion wurde dann über Nacht bei 25°C gerührt. Die Lösung wurde bei 0°C mit methanolischer HCl (200 ml) gequencht, unter reduziertem Druck aufkonzentriert, in CH₂Cl₂ wieder aufgelöst, mit H₂O gewaschen und die organische Schicht wieder aufkonzentriert, wobei der rohe Alkohol als eine braune Flüssigkeit erhalten wurde.
3. Zu einer Lösung des rohen Alkohols in Toluol (100 ml) wurde eine katalytische Menge p-Toluolsulfonsäure zugegeben und die Reaktion wurde eine Stunde lang zum Rückfluss erhitzt, wobei eine Dean Stark-Falle zum Entfernen des H₂O verwendet wurde. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem wässrigem NaHCO₃ (3 × 200 ml) gewaschen, über MgSO, getrocknet, das Solvens unter Vakuum entfernt und das Produkt aus Methanol umkristallisiert, wobei das entsprechende Inden (13,41 g, 78 nach zwei Stufen) als ein gelbbrauner Feststoff erhalten wurde.
4. Zu einer Lösung des Indens (10,53 g, 0,0653 mol) in Dichlormethan (350 ml) bei 0°C wurde m-CPBA (929 g, 0,0924 mol) in kleinen Mengen über eine Stunde lang zugegeben. Nach Rühren über Nacht bei 25°C wurde das Gemisch mit gesättigtem, wässrigen Na₂SO₃ (2 × 200 ml), gesättigtem, wässrigen NaHCO₃ (2 × 200 ml) gewaschen, durch einen Wattebausch abfiltriert und unter Vakuum aufkonzentriert.
5. Eine Suspension des erhaltenen Epoxids in konzentriertem NH₄OH (250 ml) wurde über Nacht in einem Ölbad bei 45°C erhitzt. Am nächsten Tag wurde H₂O zugegeben und die basische wässrige Schicht mit NaCl gesättigt. Das trübe Reaktionsgemisch wurde mit THF extrahiert, bis mittels TLC kein Produkt mehr zu sehen war. Die organischen Schichten wurden vereinigt, über MgSO₄ getrocknet, aufkonzentriert und aus Ethylacetat umkristallisiert, wobei der entsprechende Aminoalkohol (11,54 g, 91 nach zwei Stufen) als ein flockiger gelbbrauner Feststoff erhalten wurde.
6. Zu einer Lösung des Aminoalkohols (8,34 g, 0,0429 mol) in THF (200 ml) wurde eine Lösung von di-tert-Butyldicarbonat (11,25 g, 0,0515 mol) in THF (50 ml) zugegeben. Nach einstündigem Rühren bei 25°C wurde das Solvens unter reduziertem Druck entfernt und der erhaltene Feststoff aus Ethylacetat umkristallisiert, wobei man die entsprechende Amino-geschützte Verbindung (11,34 g, 90%) als einen weißen Feststoff erhielt.
7. Unter N₂-Atmosphäre wurde ein 3I-Dreihalsrundkolben, der mit einem Overhead-Rührer und einem Zugabetrichter ausgestattet war, mit carboxyliertem Polystyrolharz (70 g, 2,77 nmol CO₂H/g Harz), wasserfreiem Dichlormethan (1000 ml) und wasserfreiem DMF (10 ml) befällt. Als nächstes wurde Oxalylchlorid (60,75 ml, 0,582 mol) mittels langsamer tropfenweiser Zugabe aus einem Zugabetrichter zugegeben. Nach Erhitzen unter Rückfluss unter N₂ über Nacht wurde das Solvens unter Vakuum entfernt, wobei ein Begasungsröhrchen verwendet wurde. Das Harz wurde danach mit wasserfreiem Dichlormethan (3 × 500 ml) gewaschen. Nach dem letzten Waschgang wurde das Harz unter Vakuum 2–3 Stunden lang getrocknet. Zu diesem Zeitpunkt wurde das Polymer in trockenem THF (1000 ml) resuspendiert und danach trockenes Pyridin (314 ml, 3,88 mol), DMAP (11,85 g, 0,0970 mol} und die aminogeschützte Verbindung (85,62 g, 0,291 mol) zugegeben. Das Gemisch wurde 10 Tage lang unter einer inerten Atmosphäre zum Rückfluss erhitzt. Das Solvens wurde durch Vakuum-Filtration entfernt und das Harz mit THF (3 × 300 ml), CH₂Cl₂ (3 × 300 ml) gewaschen und über Nacht in einem Vakuumofen getrocknet, wobei ein harzgebundenes, aminogeschütztes Indan (122,18 g) als ein gelbbraunes Harz erhalten wurde.
8. In einen Rundkolben, der mit einem Rührstäbchen versehen war, wurde das harzgebundene Indan (28 mg, 0,02827 mol), 0,500 ml Dichlormethan und TFA (0,109 ml, 0,14135 nmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei 25°C gerührt, das Harz durch Filtrieren aufgesammelt, in 10% TEA/CH₂Cl₂ resuspendiert, 15 Minuten lang gerührt, nochmals abfiltriert und schließlich mit Dichlormethan gewaschen, wobei die aminoentschützte Spezies erhalten wurde.
9. In einen 10 ml-Rundkolben wurde das harzgebundene, aminoentschützte Produkt (0,02827 mmol) gegeben und anschließend 5 ml einer Lösung aus Pyridin (0,03659 ml, 0,4524 mmol) und DMAP (0,518 mg, 0,004241 mmol) in Dichlormethan gegeben. Als nächstes wurde eine 1 M Lösung eines Elektrophils (z. B. eines Aroylchlorids) in Dichlormethan (0,1838 ml, 0,1838 mmol) zugegeben und das erhaltene Gemisch wurde bei 25°C über Nacht gerührt. Dann wurde das Solvens durch Vakuumfiltration entfernt und das Harz wurde mit CH₂Cl₂, DMF, Methanol, DMF, Methanol und CH₂Cl₂ gewaschen.
10. Zu einer Lösung der korrespondierenden acylierten Verbindung (0,02827 mmol) in DMF (0,625 ml) wurde SnCl₂ × 2 H₂O (102 mg, 0,4524 mmol) zugegeben, um die Nitrogruppe in eine Aminogruppe umzuwandeln. Nach 48-stüdigem Rühren bei 25°C wurde das Harz durch Filtrieren isoliert und mit CH₂Cl₂, DMF, Methanol, DMF, Methanol und CH₂Cl₂ gewaschen.
11. In einen 10 ml-Rundkolben wurde die aminofunktionelle Verbindung (0,02827 mmol) und dann 0,5 ml einer Lösung aus Pyridin (0,03659 mmol) und DMAP (0,518 mg, 0,004241 mmol) in Dichlormethan gegeben. Als nächstes wurde eine 1 M Lösung eines Elektrophils (z. B. ein Sulfonylchlorid) in Dichlormethan (0,1838 ml, 0,1838 mmol) und das erhaltene Gemisch über Nacht bei 25°C gerührt. Dann wurde das Solvens durch Vakuumfiltration entfernt und das Harz mit CH₂Cl₂ gewaschen.
12. Zu einem Kolben, der die Verbindung aus Schritt 11 (0,02827 mmol) enthält, wurde eine 1 M Lösung von NaOH in Methanol (0,375 ml, 0,375 mmol) und THF (0,400 ml) zugegeben. Nach Rühren über Nacht bei 25°C wurde die Reaktion mit 4 M HCL in Methanol (0,100 ml, 0,400 mmol) neutralisiert, das Harz abfiltriert und das Filtrat unter reduziertem Druck aufkonzentriert, wobei die gewünschte Zielverbindung erhalten wurde.

Herstellung 2
trans-1-Benzamido-2-acetoxy-6-aminoindan
Ein Teil trans-1-tert-Butyloxycarbamido-2-hydroxy-6-nitroindan wird in einem Gemisch aus Pyridin (16 Teile), 4-Dimethylaminopyridin (0,15 Teile) und THF aufgelöst, während Acetylchlorid (1,2 Teile) tropfenweise zugegeben wird. Nach einigen Stunden wurde die Reaktion mit kaltem Wasser versetzt und die organische Schicht abgetrennt. Die organische Lösung wurde mit kalter 1 N HCL gewaschen, die organische Schicht getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-tert-Butyloxycarbamido-2-acetoxy-6-nitroindan erhielt. Eine Lösung dieses amino- und hydroxygeschützten Nitroindans in THF wird mit einem Strom trockener HCl 5 Minuten lang behandelt und dann eine weitere Stunde lang gerührt. Die Lösung wird sorgfältig mit kaltem, gesättigtem Natriumbicarbonat versetzt, die organische Phase wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-Amino-2-acetoxy-6-nitroindan erhält. Eine Lösung der aminoentschützten Verbindung in einem Gemisch aus Pyridin (16 Teile), 4-Dimethylaminopyridin (0,15 Teile) und CH₂Cl₂ wird mit einer Lösung eines Benzoylchlorids (1,2 Teile) behandelt und die Reaktion über Nacht gerührt. Die Reaktion wird auf Eiswasser gegossen, die organische Schicht abgetrennt und danach mit 1 N HCL und Salzlösung gewaschen. Die organischen Stoffe werden getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-Benzamido-2-acetoxy-6-nitroindan erhält. Eine Lösung diesen acylierten Produkts (1 Teil) in DMF wird mit SnCl₂ × 2 H₂O (16 Teile) versetzt und über Nacht gerührt. Die Reaktion wird auf Eiswasser gegossen, die Reaktion wird basisch gemacht und das Gemisch mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die organischen Extrakte werden mit Salzlösung gewaschen, die Lösung wird getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-Benzamido-2-acetoxy-6-aminoindan erhält.
Herstellung 3
trans-1-Benzamido-2-hydroxy-6-carboxyamido-indan
Eine Lösung aus trans-1-Benzamido-2-acetoxy-6-nitroindan (1 Teil), das wie unter Herstellung 2 beschrieben hergestellt wurde, in EtOAc wird in Gegenwart von PtO₂ einige Stunden lang mit H₂ (60 psi) versetzt. Der Katalysator wird entfernt und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-Benzamido-2-acetoxy-6-aminoindan erhält. Eine Lösung dieses Aminoindans (1 Teil) in einem Gemisch aus Pyridin (16 Teile), 4- Dimethylaminopyridin (0,15 Teile) und CH₂Cl₂ wird in einer Lösung aus einem Aroylchlorid (RCOCl) (1,2 Teile) versetzt und die Reaktion über Nacht gerührt. Die Reaktion wird in Eiswasser gegossen, die organische Schicht abgetrennt und nachfolgend mit gesättigter, wässriger Natriumbicarbonatlösung und Salzlösung gewaschen. Die organischen Stoffe werden getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-Benzamido-2-acetoxy-6-carboxaminoindan erhält. Eine Lösung dieses Indans in 1 M NaOH in Methanol wurde über Nacht gerührt. Die Reaktion wurde in Eiswasser gegossen und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Salzlösung gewaschen, getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man trans-1-Benzamido-2-hydroxy-6-carboxyamido-indan erhielt.
Herstellung 4
trans-1-Benzamido-2-hydroxy-6-carboxamido-indan
Eine Lösung eines Benzamids (2 Teile) in DMF wird mit NaH (2 Teile) versetzt und die Reaktion gerührt, bis die Gasentwicklung aufhört. Zu der Reaktion wird 1,2-Epoxy-6-nitroindan (1 Teil) zugegeben und die Reaktion über Nacht bei 60°C gerührt. Die Reaktion wird in Eiswasser gegossen und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die organischen Extrakte werden mit Wasser gewaschen, getrocknet und das Solvens verdampft. Der Rückstand wird chromatographiert, wobei trans-1-Benzamido-2-hydroxy-6-nitroindan erhalten wird. Zu einer Lösung des Nitroindans (1 Teil) in einem Gemisch aus Pyridin (16 Teile), 4-Dimethylaminopyridin (0,15 Teile) und einem inerten organischen Solvens, wie beispielsweise THF oder CH₂Cl₂, wird Acetylchlorid (1,2 Teile) tropfenweise zugegeben. Nach einigen Stunden wird die Reaktion mit kaltem Wasser versetzt und die organische Schicht abgetrennt. Die organische Lösung wird mit kalter 1 N HCL gewaschen, die organische Schicht wird getrocknet und das Solvens wird verdampft, wobei man trans-1-Benzamidoamido-2-acetoxy-6-nitroindan erhält. Durch Verarbeitung dieses geschützten Indans wie in Herstellung 2 wird das trans-1-Benzamido-2-hydroxy -6-carboxamido-indan erhalten.
Herstellung 5
1-Benzamido-6-carboxamidoindan
Ein Gemisch aus 6-Nitroindan-1-on (1 Teil) und Raney-Nickel in EtOH wird einige Stunden lang mit Wasserstoff (60 psi) versetzt. Der Katalysator wird entfernt und das Solvens verdampft, wobei man 6 Aminoindan-1-on erhält. Eine Lösung des Aminoindanons (1 Teil) in einem Gemisch aus Pyridin (16 Teile), 4-Dimethylaminopyridin (0,15 Teile) und CH₂Cl₂ wird mit einer Lösung eines Acylchlorids (1,2 Teile) versetzt und die Reaktion über Nacht gerührt. Die Reaktion wird in Eiswasser gegossen, die organische Schicht abgetrennt und danach mit gesättigter, wässriger Natriumbicarbonat- und Salzlösung gewaschen. Die organischen Stoffe werden getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man das 6-Carboxamidoindan-1-on erhält. Eine Lösung dieses Produkts (1 Teil) in einem Gemisch aus EtOH und NH₃ (5 Teile) wird mit Wasserstoff (60 psi) in Gegenwart von sulfidiertem Pd-C- versetzt. Nach einigen Stunden wird der Katalysator entfernt und das Solvens verdampft, wobei man 1-Amino-6-carboxamido-indan erhält. Eine Lösung des Indans (1 Teil) in einem Gemisch aus Pyridin (16 Teile), 4-Dimethylaminopyridin (0,15 Teile), und CH₂Cl₂ wird mit einer Lösung eines Benzoylchlorids (1,2 Teile) versetzt und die Lösung über Nacht gerührt. Die Reaktion wird in Eiswasser gegossen, die organische Schicht abgetrennt und danach mit gesättigtem, wässrigem Natriumbicarbonat und Salzlösung gewaschen. Die organischen Stoffe werden getrocknet und das Solvens verdampft, wobei man das 1-Benzamido-6-carboxamido-indan erhält.
Beim Arbeiten mit der Säulenchromatographie wurden Standard-Flash-Chromatographietechniken verwendet. Eine gut bekannte Literaturstelle, in der geeignete Flash-Chromatographietechniken beschrieben werden, ist Still, W. C. Kahn, und Nitra, J. Org. Chem. 43: 2932 (1978). Produkt-enthaltende Fraktionen werden im Allgemeinen unter reduziertem Vakuum verdampft, wobei das Produkt erhalten wird.
Optische Rotationen wurden erhalten, indem Methanol, Pyridin oder ein anderes geeignetes Solvens verwendet wurde. Das Hydrochloridsalz der speziellen Verbindung wurde hergestellt, indem die freie Base in Diethylether gegeben wurde. Während diese Etherlösung gerührt wurde, wurde eine Lösung von HCl in Diethylether tropfenweise zugegeben, bis die Lösung sauer wurde. Alternativ wurde die Etherlösung mit trockenem HCl-Gas behandelt.
Das Maleatsalz der speziellen Verbindung wurde hergestellt, indem die freie Base in Ethylacetat gegeben wurde und mit Maleinsäure versetzt wurde. Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert und getrocknet, wobei das entsprechende Maleatsalz der freien Base erhalten wurde.
Herstellung 6 Synthese von Verbindung 4
Zu eiskalter konz. H_ZSO₄ (100 ml) wurde 1-Indanon (15 g, 0,11 mol) zugegeben und anschließend wurde eine Lösung von KNO₃ (17 g, 1.5 eq) in Konz. H₂SO₄ (50 ml) langsam (2 Stunden) zugegeben. Das erhaltene Gemisch wurde auf gepacktes, körniges Eis (1,5 1) gegossen und mit Wasser (die gesamte wässrige Schicht betrug 11) und Et₂O (11) verdünnt. Die Et₂O-Schicht wurde abgetrennt und mit Wasser (2 × 200 ml) gewaschen. Die vereinigten wässrigen Schichten wurden langsam mit KOH (75 g) versetzt und mit CH₂Cl₂ (2 × 500 ml) extrahiert. Die vereinigten CH₂Cl₂-Schichten wurden mit Wasser (500 ml) gewaschen. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄), abfiltriert und mit Silikagel (30 g) versetzt. Der erhaltene Feststoff wurde auf eine Silikagelsäule (2,5'' × 13'') aufgetragen und mittels Flash-Chromatographie gereinigt. Nach Entfernen des Solvens erhielt man das Produkt als einen Feststoff (14,5 g, 74%). R_f (Silikagel): 0,23 (30% EtOAc, 70% Hexane). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,42 (s, 1H), 8,37 (dd, J = 2,1, 8,4, 1H), 7,65 (d, J = 8,3, 1H), 3,26 (m, 2H), 2,78 (m, 2H). ¹³C NMR (75 MHZ, CDCl₃) δ 204,71, 160,94, 147,76, 138,04, 128,73, 127,88, 118,90, 36,49, 25,98.
Das 6-Nitro-1-indanon (14,5 g, 0,082 mol) wurde in McOH (160 ml) aufgelöst und auf 0°C abgekühlt. Das NaBH₄ (3,2 g, 1 eq, granulär) wurde in 5 Portionen in Abständen von 20 Minuten zugegeben. Das erhaltene Gemisch ließ man 12 Stunden lang rühren und langsam auf rt kommen. Das Gemisch wurde dann wieder auf 0°C abgekühlt, tropfenweise mit 6 N HCl (40 ml, 3 eq) versetzt und mit Wasser (800 ml) und CH₂Cl₂ (400 ml) verdünnt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit CH₂Cl₂ (2 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄) und abfiltriert. Nach Entfernen des Solvens erhielt man das Produkt als einen Feststoff (14,6 g, 99%), der im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet wurde. R_f (Silikagel): 0,15 (5% EtOAc, 45% Hexane, 50% CH₂Cl₂).
Das 1-Hydroxy-6-nitroindan (14,6 g, 0,082 mol) wurde mit p-TsOH·H₂O (1,5 g, 0,1 eq) in PhMe (80 ml) 3 Stunden lang bei 90°C erhitzt. Das meiste Solvens wurde entfernt und das erhaltene Gemisch mit CH₂Cl₂ (240 ml) verdünnt. Das m-CPBA (34 g, 1,2 eq) wurde in 20 Minuten-Intervallen in 4 Portionen zugegeben. Man ließ das Gemisch 12 Stunden lang rühren, versetzte mit gesättigter, wässriger NaHCO₃ (400 ml), rührte weitere 30 Minuten lang und verdünnte dann mit H₂O (200 ml) und CH₂Cl₂ (100 ml). Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit CH₂Cl₂ (2 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄) und abfiltriert (2'' Silikagel). Durch Entfernen des Solvens erhielt man das Produkt als einen Feststoff (14 g, 96%), der im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet wurde. R_f (Silikagel): 0,49 (5% EtAOc, 45% Hexane, 50% CH₂Cl₂). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,34 (s, 1H), 8,16 (d, J = 8,2, 1H), 7,38 (d, J = 8,2, 1H), 4,35 (d, J = 1,9, 1H), 4,22 (d, J = 2,7, 1H), 3,31 (d, J = 18,9, 1H), 3,06 (dd, J = 2,5, 18,8, 1H).
Das 6-Nitro-1,2-epoxyindan (3,0 g, 17 mmol) wurde in konzentriertem NH₄OH (60 ml) suspendiert und 12 Stunden lang bei 35°C und 4 Stunden lang bei 50°C gerührt. Das erhaltene dunkle Gemisch wurde mit Salzlösung (170 ml) verdünnt, mit NaCl gesättigt, einem leichten Vakuum unterzogen und mit 15% 1-PrOH/CHCl₃ (170 ml) gerührt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit 15% 1-PrOH/CHCl₃ (4 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄) und abfiltriert. Durch Entfernen des Solvens erhielt man das Produkt als einen gelbbraunen Feststoff (3,0 g, 91%), der in dem nächsten Schritt ohne weitere Reinigung eingesetzt wurde. R_f (Silikagel): 0,20 (2% AcOH, 18% McOH, 80% CHCl₃).
Zu einer eiskalten Suspension des Aminoindanderivats (390 mg, 2,0 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (6 ml) wurde NEt₃ (0,33 ml, 1,2 eq) zugegeben und anschließend langsam das Sulfonylchlorid (451 mg, 1,1 eq) als eine Lösung in CH₂Cl₂ (2 ml) langsam zugegeben. Das Eisbad wurde entfernt und das heterogene Gemisch 3 Stunden lang gerührt. Das erhaltene homogene Gemisch wurde mit CH₂Cl₂ (8 ml), Wasser (8 ml) und gesättigter, wässriger NH₄Cl (2 ml) verdünnt. Die organische Schicht wurde zusammen mit dem ausgefällten Produkt von der wässrigen Schicht abgetrennt. Die wässrige Schicht wurde mit CH₂Cl₂ (3 × 2 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit I-PrOH (3 ml) versetzt, getrocknet (Na₂SO₄) und abfiltriert. Das meiste Solvens wurde entfernt und zu dem erhaltenen Feststoff wurden Hexane/CH₂Cl₂ (1/1, 20 ml) zugegeben. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Hexanen/CH₂Cl₂ (1/1, 10 ml) gewaschen und einem Hochvakuum unterzogen, wobei das Produkt (600 mg, 83%) erhalten wurde. R_f (Silikagel): 0,27 (30% EtOAc, 20% Hexane, 50% CH₂Cl₂). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 7,97 (d, J = 8,3, 1H), 7,81 (d, J = 8,2, 2H), 7,33 (d, J = 7,9, 2H), 7,21–7,26 (m, 2H), 4,49 (d, J = 6,1, 1H), 4,36 (dd, J = 7,2, 13,8, 1H), 3,30 (bs, 2H), 3,21 (dd, J = 7,1, 16,7, 1H), 2,78 (dd, J = 7,4, 16,8, 1H), 2,69 (q, J = 7,7, 2H), 1,21 (t, J = 7,5, 3H). ¹³C NMR (75 MHZ, CDCl₃) δ 150,35, 147,44, 147,35, 141,41, 137,57, 128,84, 126,96, 125,60, 123,87, 119,57, 79,33, 64,55, 37,66, 28,53, 14,62.
Zu einer Suspension des Nitroindanderivats (5,2 g, 14 mmol) in absolutem EtOH (70 ml) wurde SnCl₂·2H₂O (13 g, 14 eq) zugegeben. Nach Erhitzen des Gemischs bei 50°C für 12 Stunden wurde der meiste EtOH entfernt und der erhaltene Rückstand mit CHCl₃ (70 ml), gesättigtem, wässrigen NaHCO₃ (140 ml) und Wasser (70 ml) versetzt. Das Gemisch wurde 30 Minuten lang gerührt und dann mit 15% I-PrOH/CHCl₃ (70 ml) und Wasser (70 ml) verdünnt. Die wässrige Schicht (die ausgefälltes Zinnnebenprodukt enthält) wurde mit 15% I-PrOH/CHCl₃ (3 × 70 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄) und abfiltriert. Entfernen des Solvens ergab das Produkt als einen Feststoff (4,5 g, 97%), der in dem nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet wurde. R_f (Silikagel): 0,23 (30% EtAOc, 20% Hexane, 50% CH₂Cl₂).
Zu einer eiskalten Suspension des 6-Aminoindanderivats (2,3 g, 6,9 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (21 ml) wurde das Säurechlorid (1,2 g, 1,05 eq) zugegeben und anschließend langsam das NEt₃ (1,2 ml, 1,2 eq) zugegeben. Das Eisbad wurde entfernt und nach einer Stunde wurde das erhaltene homogene Gemisch mit CH₂Cl₂ (20 ml), Was ser (35 ml) und gesättigtem wässrigen NH₄Cl (7 ml) versetzt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit CH₂Cl₂ (3 × 20 ml) extrahiert. Die vereinigten CH₂Cl₂-Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄), abfiltriert und mit Silikagel (7 g) versetzt. Verdampfen des Solvens ergab einen Feststoff, der auf eine Silikagelsäule (1,5'' × 9'') aufgetragen wurde und mittels Flash-Chromatographie gereinigt wurde. Entfernen des Solvens ergab das Produkt als einen kristallinen Feststoff (3,0 g, 93%). R_f (Silikagel): 0,16 (30 EtOAc, 20% Hexane, 50% CH₂Cl₂). ¹H NMR (300 MHZ, DMSO-d6) δ 10,16 (s, 1H), 8,09 (d, J = 8,3, 1H), 7,80 (d, J = 8,4, 2H), 7,37–7,59 (m, 7H), 7,10–7,15 (m, 2H), 5,03 (d, J = 5,6, 1H), 4,40–4,45 (m, 1H), 4,03–4,09 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,02 (dd, J = 6,8, 15,8, 1H), 2,64 (q, J = 7,5, 2H), 2,50–2,57 (m, 1H), 1,16 (t, J = 7,7, 3H). HRMS (FAB) m/e ber. für C₂₅H₂₇N₂O₅S (MH⁺) 467.1640, erh. 467.1648.
Die Abtrennung des Enantiomers der Verbindung 4 wurde mittels HPLC mit einer Chiralpak AS-Säure (Chiral Technologies) durchgeführt, wobei mit Hexane/Ethanol/Methanol (60/20/20) eluiert wurde. Die analytische Trennung der Enantiomere mit einer 4,6 mm × 250 mm-Säule und einer Fließgeschwindigkeit von 1 ml/min ergab Retentionszeiten 6,7 (1R, 2R) und 11,1 (1S, 2S) Minuten.
Alternativ kann Verbindung 4 enantioselektiv hergestellt werden durch asymmetrische Epoxidation, wie im Folgenden beschrieben wird.
Zu einer Lösung von 5-Nitroinden (1,28 g, 7,94 mmol) in CH₂Cl₂ (5 ml) wurden 415 mg (2,42 mmol) 4-Phenylpyridin-N-oxid gegeben und anschließend 154 mg (0,24 mmol) (S,S)-N,N'-bis-(3,5-di-tert-Butylsalyciden)-1,2-cyclohexandiaminomangan-III-chlorid. Nach Abkühlen auf 0°C wurden 12 ml 0,05 M NaH₂PO₄ und anschließend eiskaltes 10–13% NaOCl zugegeben. Nach einer Stunde bei 0°C wurde das Reaktionsgemisch abfiltriert (Celit), mit CH₂Cl₂ (200 ml) gewaschen. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit CH₂Cl₂ (50 ml) extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde mit H₂O (50 ml) gewaschen und mit Salzlösung (50 ml) gewaschen und dann über Na₂SO₄ getrocknet. Reinigen mittels Flash-Chromatographie unter Verwendung von Silikagel (1 : 1; Hexane : Et₂O) ergab das (1S, 2R)-Epoxid (988 mg, 71%, 70% ee) als gelben Feststoff.
Der enantiomere Überschuss wurde mittels HPLC mit einer Chiralcel OB-H-Säure (Chiral Technologies) bestimmt, wobei mit Hexanen/Isopropylalkohol (80/20; 1 ml/min) eluiert wurde. Mit einer 4,6 mm × 250 mm-Säule betragen die Retentionszeiten der Enantiomere 33,6 und 36,3 Minuten. Dieses enantioangereicherte Epoxid wurde dann dazu verwendet, die enantioangereicherte Verbindung 4 wie zuvor beschrieben herzustellen. Eine weitere Enantioanreicherung (> 90% ee) wurde durch Umkristallisieren von Verbindung 4 aus I-PrOH-Hexane erhalten.
Herstellung 7 Synthese von Verbindung 24
Zu einem heterogenen Gemisch der Carbonsäure (36 mg, 1,1 eq) und CH₂Cl₂ (2,5 ml) wurde HOBt (39 mg, 1,2 eq) und anschließend EDC (60 mg, 1,3 eq) zugegeben. Nach 20 Minuten erhielt man ein homogenes Gemisch, das mit dem 6-Aminoindanderivat (80 mg, 0,24 mmol) versetzt wurde. Nach 6-stündigem Rühren wurde die Mischung mit CHCl₃ (2 ml), Salzlösung (2 ml) und gesättigtem, wässrigem NaHCO₃ (2 ml) verdünnt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit CHCl₃ (3 × 2 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄), abfiltriert und mit Silikagel (300 mg) versetzt. Entfernen des Solvens ergab einen Feststoff, der auf eine Silikagelsäule (0,5'' × 7'') aufgetragen und mittels Flash-Chromatographie gereinigt wurde. Entfernen des Solvens ergab das Produkt als einen Feststoff (108 mg, 100%). R_f (Silika gel): 0,45 (50% EtOAc, 50% CH₂Cl₂). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 9,95 (s, 1H), 7,98 (d, J = 7,7, 1H), 7,87 (d, J = 8,2, 2H), 7,73 (dd, J = 7,6, 7,6, 1H), 7,37 (d, J = 8,1, 1H), 7,20–7,35 (m, 4H), 7,08 (d, J = 8,1, 1H), 6,93 (d, J = 5,6, 1H), 4,30–4,50 (m, 2H), 3,13 (dd, J = 6,7, 15,4, 1H), 2,50–2,80 (m, 6H), 1,14 (t, J = 7,6, 3H). ¹³C NMR (75 MHZ, CDCl₃) δ 162,53. 157,36, 149,69, 148,57, 139,70, 137,84, 137,28, 136,29, 135,68, 128,62, 127,32, 126,42, 125,38, 120,86, 119,47, 116,14, 80,41, 65,17, 37,06, 28,50, 23,94, 14,72.
Herstellung 8 Synthese von Verbindung 22
Eine Suspension des 6-Amidoindanderivats (0,174 g, 0,373 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (10 ml) wurde mit EDC-HCl (0,120 g, 0,626 mmol), 4-DMAP (0,100 g, 0,819 mmol), NEt₃ (0,080 ml, 0,57 mmol) und mono-Methylsuccinat (0,079 g, 0,60 mmol) versetzt. Das erhaltene homogene Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 2,5 Stunden lang gerührt und mit H₂O (15 ml), gesättigtem, wässrigen NH₄Cl (15 ml) und CH₂Cl₂ (20 ml) versetzt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), abfiltriert und aufkonzentriert. Flash-Chromatographie auf Silika ergab das Produkt als einen weißen Feststoff (0,190 g, 88 %). R_f (Silikagel): 0,75 (20% Hexane: 20% CH₂Cl₂: 60% EtOAc). ¹H NMR (300 MHZ, DMSO-d₆) δ 9,59 (s, 1H), 7,88 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,68–7,56 (m, 3H), 7,47 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,42–7,39 (m, 1H), 7,19–7,11 (m, 3H), 5,17 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,90 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 3,29 (dd, J = 8,7 und 15,9 Hz, 1H), 2,81–2,26 (m, 8H), 1,25 (t, J = 7,8 hz, 3H); HRMS (FAB) m/e ber. für C₃₀H₃₃N₂O₈S (MH⁺) 581.1958; erh. 581. 1958.
Herstellung 9 Synthese von Verbindung 25
Zu einer Lösung von 6-Nitro-1-indanon (2,0 g, 12 mmol) in McOH (25 ml) wurde NH₄Oac (9,4 g, 10 eq) und anschließend NaCNBH₃ (830 mg, 1,1 eq) zugegeben. Das Gemisch wurde 40 Stunden lang bei 45°C gerührt und dann abfiltriert (Celite). Das Solvens wurde entfernt und zu dem erhaltenen Rückstand wurde Wasser (60 ml) und Et₂O (60 ml) zugegeben. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt, mit 6 N NaOH (24 ml), versetzt, mit NaCl gesättigt und mit CHCl₃ (1 × 60 ml, dann 3 × 30 ml) extrahiert. Die vereinigten CHCl₃-Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und mit 4 N HCl/Dioxan (2 ml, 0,6 eq) versetzt. Entfernen des Solvens ergab einen Feststoff, der mit trockenem Et₂O (120 ml, 1 Stunde) gerührt und abfiltriert wurde. Das HCl-Salz des Produkts wurde so als ein Feststoff (900 mg, 35%) erhalten und in dem nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet. R_f (Silikagel): 0,13 (1% AcOH, 9% McOH, 90% CHCl₃). ¹H NMR (300 MHZ, CD₃OD) δ 8,47 (d, J = 1,7, 1H), 8,25 (dd, J = 2,1, 8,4, 1H), 7,59 (d, J = 8,4, 1H), 4,90–5,10 (m, 1H, Solvensinterferenz), 3,20–3,35 (m, 1H), 3,05–3,20 (m, 1H), 2,65–2,80 (m, 1H), 2,15–2,30 (m, 1H). ¹³C NMR (75 MHZ, CD₃OD) δ 152,10, 147,δ0, 140,26, 125,96, 124,55, 119,78, 54,71, 30,23, 29,73.
Zu einer Suspension des Nydrochloridsalzes von 1-Amino-6-nitroindan (900 mg, 4,2 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (8 ml) wurde NEt₃ (1,4 ml, 2,4 eq) zugegeben. Das erhaltene homogene Gemisch wurde dann mit dem Sulfonylchlorid (940 mg, 1,1 eq) versetzt und 3 Stunden lang gerührt. Das erhaltene heterogene Gemisch wurde mit CH₂Cl₂ (8 ml), Wasser (8 ml) und gesättigtem, wässrigen NH₄Cl (4 ml) verdünnt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit CH₂Cl₂ (3 × 4 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄), abfiltriert und mit Silikagel (4 g) versetzt. Entfernen des Solvens ergab einen Feststoff, der auf eine Silikagelsäule (1,5'' × 9,5'') aufgetragen wurde und mittels Flash-Chromatographie gereinigt wurde. Entfernen des Solvens ergab das Produkt als einen Feststoff (1,28 g, 88%). R_f (Silikagel): 0,29 (30% EtOAc, 70% Hexane). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 7,98 (dd, J = 1,9, 8,2, 1H), 7,70–7,85 (m, 3H), 7,25–7,40 (m, 3H), 5,77 (d, J = 9,2, 1H), 4,82 (dd, J = 7,9, 16,3 1H), 2,85–3,00 (m, 1H), 2,65–2,85 (m, 3H), 2,25–2,40 (m, 1H), 1,75–1,90 (m, 1H), 1,26 (t, J = 7,6, 3H). ¹³C NMR (75 MHZ, CDCL₃) δ 150,45, 149,64, 147,39, 144,16, 137,88, 128,82, 127,04, 125,32, 123,66, 119,62, 57,85, 34,36, 29,92, 28,60, 14,78.
Das 6-Nitroindanderivat (1,09 g, 3,15 mmol) und SnCl₂·H₂O (3,6 g, 5 eq) wurden bei 50°C bei absolutem EtOH (7 ml) 12 Stunden lang erhitzt. Der meiste EtOH wurde entfernt und der erhaltene Rückstand mit CH₂Cl₂ (30 ml), Wasser (30 ml) und gesättigtem, wässrigem NaHCO₃ (30 ml) verdünnt. Nach 30-minütigem Rühren wurde die wässrige Schicht abgetrennt und mit CH₂Cl₂ (3 × 30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet (Na₂SO₄), abfiltriert und mit Silikagel (2 g) versetzt. Entfernen des Solvens ergab einen Feststoff, der auf eine Silikagelsäule (1,0'' × 11'') aufgetragen und mittels Flash-Chromatographie gereinigt wurde. Entfernen des Solvens ergab das Produkt als einen Feststoff (906 mg, 91%). R_f(Silikagel): 0,16 (15% EtOAc, 35% Hexane, 50% CH₂Cl₂). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 7,84 (2H), 7,35 (2H), 6,93 (1H), 6,53 (1H), 6,39 (1H), 5,20 (1H), 4,70 (1H), 3,51 (2H), 2,50–2,85 (4H), 2,24 (1H), 1,66 (1H), 1,28 (3H). ¹³C NMR (75 MHZ, CDCl₃) δ 149,52, 145,46, 143,37, 138,52, 132,53, 128,60, 127,24, 125,20, 115,55, 110,73, 58,57, 34,72, 28,92, 28,62, 15,01. HRMS (FAB) m/e ber. für C₁₇H₂₀N₂O₂S (M) 316.1245, erh. 316.1245.
Zu einer Lösung des 6-Aminoindanderivats (200 mg, 0,63 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (3 ml) wurde das Säurechlorid (120 mg, 1,1 eq) und anschließend NEt₃ (0,11 ml, 1,2 eq) zugegeben. Man ließ das Gemisch O/N rühren und verdünnte dann mit Wasser (6 ml), gesättigtem, wässrigem NH₄Cl (1 ml) und CHCl₃ (100 ml). Die CHCl₃-Schicht wurde abgetrennt, getrocknet (Na₂SO₄) und abfiltriert. Entfernen des Solvens ergab einen Feststoff, der mit Et₂O gewaschen wurde. Auf diesem Weg wurde das Produkt als ein weißer Feststoff (260 mg, 92%) erhalten. R_f (Silikagel): 0,28 (15% EtOAc, 35% Hexane, 50% CH₂Cl₂). ¹H NMR (300 MHZ, DMSO-d6) δ 10,18 (s, 1H), 8,07 (d, J = 9,1, 1H), 7,78 (d, J = 8,1, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,62 (d, J = 8,1), 7,35–7,55 (m, 5H), 7,10–7,20 (m, 2H), 4,60–4,75 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,50–2,80 (m, 4H), 1,80–1,95 (m, 1H), 1,45–1,60 (m, 1H), 1,18 (t, J = 7,6, 3H). HRMS(FAB) m/e ber. für C₂₅H₂₇N₂O₄S (MH⁺) 451.1691, erh. 451.1692.
Herstellung 10 Synthese des Cis-Analogen von Verbindung 4
Trifluoromethansulfonsäure (0,73 ml, 8,3 mmol) wurde tropfenweise zu einer Aufschlämmung von 5-Nitroindenoxid (735 mg, 4,15 mmol) in CH₃CN (6,8 ml) bei –40°C zugegeben. Nach 30 Minuten ließ man das Reaktionsgemisch sich über eine Stunde lang auf rt erwärmen und dann wurde Wasser (4 ml) zugegeben. Nach 10-minütigem Rühren wurde das Acetonitril durch Destillieren bei Atmosphärendruck (Tiegeltemperatur 100°C) entfernt. Der wässrige Rückstand wurde bei 100°C weitere 5 Stunden lang gehalten und dann auf Raumtemperatur abgekühlt. Die wässrige Phase wurde mit CH₂Cl₂ (10 ml) extrahiert und dann mit 1 N NaOH auf pH 13 basifiziert und mit CH₂Cl₂ (3 × 10 ml) extrahiert. Die organischen Stoffe wurden vereinigt, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (5% McOH/95 % EtOAc) des Rückstands ergab den cis-Aminoalkohol als einen braunen Feststoff (518 mg, 64%). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,17 (s, 1H), 8,13 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,50–4,45 (m, 1H), 4,45–4,40 (m, 1H), 3,52–3,49 (m, 1H), 3,17– 3,03 (m, 1H), 1,43 (s, 9H). Dieses Produkt wurde zum cis-Analogen der Verbindung 4 umgewandelt, wobei die bei der Synthese von Verbindung 4 beschriebenen Vorgehensweisen verwendet wurden.
Herstellung 11 Synthese von Verbindung 21
Eine Lösung von 5-Nitroinden (800 mg, 4,97 mmol) und tert-Butyl-N,N-dichloro-carbamat (924 mg, 4,97 mmol) in Toluol (10 ml) wurden 5 Stunden lang bei 50°C erhitzt. Die erhaltene Lösung wurde auf 0°C abgekühlt und mit einer gesättigten Lösung von Natrium-Metabisulfid (10 ml) 20 Minuten lang gerührt. Die organischen Stoffe wurden mit Ether (2 × 10 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (80% Hexane/20% Et₂O) des Rückstands ergab das gewünschte Produkt als ein farbloses Öl (312 mg, 22%). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,27 (s, 1H), 8,17 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,28 (bs, 1H), 4,84 (bs, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,52 (dd, J = 17,0, 7,3 Hz, 1H), 3,04–2,98 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).
Natriumazid (222 mg, 3,43 mmol) wurden zu einer gerührten Lösung des Nitroindanderivats (715 mg, 2,28 mmol) in DMSO (3 ml) bei rt zugegeben. Die erhaltene purpurrote Lösung wurde 14 Stunden lang bei 50°C erhitzt, auf rt abgekühlt und mit Wasser (5 ml) verdünnt. Die organischen Stoffe wurden mit EtOAc (4 × 5 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (80% Hexane/20% Et₂O) des Rückstands ergab das gewünschte Produkt als ein farbloses Öl (675 mg, 68%). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,17 (s, 1H), 8,13 (m, 1H), 7,38 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,74 (bs, 1H), 4,93 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,61–4,50 (m, 1H), 3,20 (dd, J = 16,6, 7,4 Hz, 1H), 2,92 (dd, J = 16,6, 9,0 Hz, 1H), 1,43 (s, 9H).
Triphenylphosphin (270 mg, 1,03 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung des Azidonitroindanderivats (300 mg, 0,94 mmol) in THF (4 ml) bei rt zugegeben. Nach 1 Stunde wurde das Solvens unter reduziertem Druck entfernt und mit McOH (4 ml) ersetzt. Die neue Lösung wurde auf 0°C abgekühlt und Natriumborhydrid (36 mg, 0,94 mmol) wurde portionsweise zugegeben. Nach 30 Minuten bei 0°C wurden 5 Tropfen Eisessig zugegeben. Die Reaktion wurde zum Trocknen eingedampft und in EtOAc (20 ml) aufgenommen. Die organische Phase wurde mit 1 N HCl (2 × 10 ml) gewaschen und die wässrige Phase wurde mit 1 N NaOH auf pH 11 basifiziert und mit EtOAc reextrahiert (3 × 10 ml). Die organischen Stoffe wurden vereinigt, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert, wobei das gewünschte Produkt als ein blassbrauner Feststoff erhalten wurde (196 mg, 71%). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,17 (s, 1H), 8,06 (dd, J = 8,2, 1,9 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,27 (bs, 1H), 4,41 (bs, 2H), 3,28–3,21 (m, 1H), 2,94–2,87 (m, 1H), 1,42 (s, 9H).
p-Ethylsulfonylchlorid (240 mg, 1,17 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung von Aminonitroindanderivat (330 mg, 1,12 mmol) und Triethylamin (171 μl, 1,23 mmol) in THF (5 ml) bei 0°C zugegeben. Die Reaktion wurde dann 2 Stunden lang bei 50°C erhitzt und abgekühlt und EtOAc (15 ml) wurde zugegeben. Die organischen Stoffe wurden mit Salzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (50% Hexane/50% Et₂O) des Rückstands ergab das gewünschte Produkt als einen weißen Feststoff (247 mg, 48%). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,07 (d, J = 8,4, 2,1 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,39–7,31 (m, 4H), 5,20–4,98 (m, 2H), 4,81–4,73 (m, 1H), 4,44 (p, J = 6,7 Hz, 1H), 3,25 (dd, J = 16,7, 6,5 Hz, 1H), 2,89 (dd, J = 17,2, 6,4 Hz, 1H), 2,72 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,29 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Natriumborhydrid (68 mg, 1,7 mmol) wurde portionsweise zu einer gerührten Lösung von Nitroindanderivat (168 mg, 0,36 mmol) und Nickelchlorid (10 mg, 0,08 mmol) in THF/Methanol (1 : 1, 3 ml) bei 0°C portionsweise zugegeben. Nach 20 Minuten wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser (5 ml) gequencht, mit EtOAc (3 × 10 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert, wobei das gewünschte Produkt als ein blassbrauner Feststoff (156 mg, 99%) erhalten wurde. ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,11 (bs, 1H), 5,04–4,92 (bs, 2H), 4,63– 4,55 (bs, 1H), 4,32–4,24 (m, 1H), 3,04–2,94 (m, 1H), 2,75 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,68–2,55 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
m-Anisoylchlorid (6,5 μl, 0,046 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung des Aminoindanderivats (20 mg, 0,046 mmol) und Triethylamin (7,7 μl, 0,055 mmol) in THF (3 ml) bei 0°C zugegeben. Nach 30 Minuten wurde das Reaktionsgemisch mit EtOAc (10 ml) verdünnt, mit Salzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (50% Hexane/50% EtOAc) des Rückstands ergab das gewünschte Endprodukt als einen weißen Feststoff (22 mg, 84%). ¹H NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 7,84 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,70–7,61 (m, 2H), 7,40– 7,34 (m, 4H), 7,18 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,11–6,91 (m, 2H), 4,98 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,98– 4,90 (bs, 1H), 4,69 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,39–4,30 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,14 (dd, J = 15,9, 6,7 Hz, 1H), 2,76 (dd, J = 15,9, 5,1 Hz, 1H), 2,71 (q, J = 7,7 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Trifluoressigsäure (0,5 ml) wurde zu einer gerührten Lösung des Zwischenprodukts (22 mg, 0,04 mmol) in CH₂Cl₂ (2 ml) bei 0°C zugegeben. Das Eisbad wurde entfernt und man ließ die Reaktion sich über eine Stunde lang auf rt erwärmen. Das Solvens wurde unter reduziertem Druck entfernt und durch EtOAc (5 ml) ersetzt. Eine gesättigte, wässrige Lösung von NaHCO₃ wurde zu der organischen Lösung zugegeben und das biphasische System 30 Minuten lang kräftig gerührt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert, wobei das gewünschte Produkt als ein gebrochen weißer Feststoff erhalten wurde (11 mg, 61 %). ¹H NMR (300 MHZ, DMSO-d₆) δ 10,1 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,69–7,40 (m, 7H), 7,15–7,11 (m, 2H), 5,73 (s, 2H), 4,53 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,85 (dd, J = 15,8, 6,2 Hz, 1H), 2,65 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,53–2,44 (m, 1H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Herstellung 12 Synthese der Regioisomeren von Verbindung 4:
Eine Lösung von konz. H₂SO₄ (30 g) und konz. HNO₃ (10 g) wurde tropfenweise über 2 Stunden zu einer gerührten Lösung von Indan (10 g, 81,6 mmol) bei –20°C zugegeben. Die erhaltene purpurrote Lösung wurde dann 1 weitere Stunde gerührt und danach wurde Wasser (20 g) tropfenweise zugegeben. Die organischen Stoffe wurden mit EtOAc (3 × 20 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (80% Hexane/20% Et₂O) des Rückstandes ergab ein 2 : 3-Gemisch der beiden Produkte (5,33 g, 37%) als ein viskoses Öl. Dieses Material wurde im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung direkt verwendet.
Eine Lösung von CrO₃ (7,59 g, 75,9 mmol) in 50%iger wässriger Essigsäure (84 ml) wurde tropfenweise zu einer gerührten Lösung der beiden Nitroindane (3,0 g, 18,4 mmol) in Essigsäure (75 ml) bei rt zugegeben. Nach der Zugabe wurde weitere 24 Stunden lang gerührt. Dann wurde langsam Isopropylalkohol (50 ml) zugegeben und das grüne Gemisch wurde 30 Minuten lang bei rt gerührt. Die organischen Stoffe wurden mit Et₂O (4 × 20 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Flash-Chromatographie (30% EtOAc/70% Hexane bis 50% EtOAc/50% Hexane) ergab drei getrennte Verbindungen in einem Verhältnis von 3 : 3 : 1 (A : B : C) in einer kombinierten Ausbeute von 22%. ¹H NMR der Verbindung A (300 MHz, CDCl₃) δ 8,36 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,25 (dd, J = 7,0, 2,0 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,32–3,27 (m, 2H), 2,88–2,83 (m, 2H).
Rhodiumtrichlorid (1 mg, Kat.) wurde zu einer Lösung von 1-Nitroinden (150 mg, 0,93 mmol) in absolutem Ethanol (8 ml) bei rt zugegeben. Die erhaltene Lösung wurde 14 Stunden lang zum Rückfluss erhitzt, danach wurde das Solvens entfernt und der Rückstand mittels Flash-Chromatographie (5% Et₂O/95% Hexane) gereinigt, wobei man das gewünschte Produkt (64 mg, 43%) als einen blassbraunen Feststoff und Ausgangsmaterial (76 mg, 51%) erhielt. ¹H NMR des Produkts (300 MHZ, CDCl₃) δ 8,15 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,74–7,70 (m, 2H), 7,34 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 6,95–6,90 (m, 1H), 3,54 (s, 2H).
Dieses Regioisomer von Verbindung 4 wurde synthetisiert, indem dieselbe allgemeine Vorgehensweise wie zur Herstellung von Verbindung 4 verwendet wurde. ¹H NMR (300 MHZ, CD₃OD) δ 8,24 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,50–7,36 (m, 6H), 7,09 (dd, J = 8,1, 2,5 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,10 (bs, 1H), 4,36 (dd, J = 8,1, 5,1 Hz, 1H), 4,10 (q, J = 6,0 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,07 (dd, J = 15,8, 6,6 Hz, 1H), 2,70 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,59 (dd, J = 15,6, 5,8 Hz, 1H), 1,23 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Dieses Regioisomer von Verbindung 4 wurde auf dieselbe allgemeine Vorgehensweise synthetisiert, die zur Herstellung von Verbindung 4 verwendet wurde. ¹H NMR (300 Hz, CDCl₃) δ 7,91 (d, J = 8,3 Hz, 3H), 7,61 (s, 1H), 7,42–735 (m, 5H), 7,22 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,10 (dd, J = 7,9, 1,38 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,56–4,51 (m, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,38 (s, 1H), 3,25 (dd, J = 15,7, 7,7 Hz, 1H), 2,81–2,72 (m, 3H), 1,28 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
BioAssays
1. Klonieren, Konstruieren und Testen von CHO-Zellen, die menschliche spannungsgesteuerte Kaliumkanäle exprimieren
Menschliche spannungsgesteuerte Kaliumkanäle wurden aus genomischer, zellulärer HeLa-DNA mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) kloniert, sequenziert um ihre Zusammensetzung zu verifizieren und dann permanent in Eierstock-Zelllinien des chinesischen Hamsters (Chinese Hamster Ovary, CHO) (erhalten von ATCC) exprimiert, wobei dem Fachmann bekannte Verfahren verwendet wurden.
Üblicherweise wurden HeLa-Zellen (etwa 1000 Zellen) in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung gewaschen, pelletisiert und in 50 μl sterilem Wasser lysiert. PCR-Reagenzien einschließlich spezifischer Endprimer wurden direkt zu dem Lysat zugegeben und das Gemisch wurde 40 Temperaturzyklen unterzogen. Die Reaktionsprodukte wurden auf einem Agarosegel aufgetrennt und eine DNA-Bande, die der erwarteten Größe des amplifizierten Produkts entsprach, wurde isoliert und in den Klonierungssektor pCRll (Invitrogen) subkloniert. Das Konstrukt wurde in E. coli amplifiziert und eine Reihe von unabhängigen Subklonen isoliert und sequenziert, um die Identität des klonierten Kanals zu verifizieren. Fehlerfreie Teile dieser Klone wurden dann zusammen ligiert, um ein vollständiges cDNA-Konstrukt zu bilden und dieses Konstrukt wurde in den eukaryotischen Expressionsvektor pCDNA3 (Invitrogen) subkloniert. Das fertige Konstrukt enthielt eine Kozak-Sequenz am Anfang, um die Proteinsynthese zu steuern. CHO-Zellen wurden mit dem Konstrukt transfiziert und stabile, exprimierende Zellen wurden ausgewählt, indem G418 in das Kulturmedium eingeführt wurde. Nach 3 Wochen wurden stabil transfizierte Zellen bei limitierter Dichte gesät und einzelne Klone isoliert und bis zur Konfluenz gezüchtet.
Stabile Klone wurden auf spannungsgesteuerte Kaliumkanalexpression mittels eines ⁸⁶Rubidium (⁸⁶Rb)-Ionenflusstests (siehe im Folgenden unter Methodologie) getestet. Im Fall des Kaliumkanäls Kv1.3 wurden vier positive Klone und eine negative Kontrolle in dem Rubidiumeffluxtest auf Inhibierung des Effluxes durch Margatoxin, einem bekannten selektiven Blocker für Kv1.4-Kanäle getestet. Sämtliche positive Klone zeigten einen KCl-stimulierten ⁸⁶Rb-Efflux zwischen 7 bis 10-fach über Basal, der bei einem Level von etwa 95% inhibiert wurde, wenn Margatoxin vorhanden war. Diese Klone wurden darüber hinaus mittels Elektrophysiologie getestet und es wurde klar gezeigt, dass sie Eigenschaften besitzen, die mit der Expression des Kaliumkanals konsistent sind.
2. ⁸⁶Rubidiumefflux aus Zellmonoschichten
CHO-Zellen, die entweder mit menschlichem Kv1.5 oder Kv1.3 stabil transfiziert waren sowie nicht-transfizierte Zellen wurden bis zu etwa 90% Konfluenz in 24 Well-Gewebekulturplatten gezüchtet. Das Gewebekulturwachstumsmedium wurde dann entfernt und mit 1 ml Iscoves modifiziertem DMEM ersetzt, das ⁸⁶Rb in einer Konzentration von 1 μCi/ml enthielt und drei Stunden lang bei 37°C inkubiert, um eine intrazelluläre Aufnahme des Isotops zu ermöglichen. Am Ende der Inkubationsperiode wurde die ⁸⁶Rb-Lösung abgesaugt und die Zellen drei mal mit Earls Balanced Salt Solution (EBSS) gewaschen. Die Zellen wurden dann 15 Minuten bei Raumtemperatur in 0,6 ml/Well EBSS oder EBSS, das die zu testenden Verbindungen enthielt, inkubiert. Am Ende dieser Periode wurde eine 0,3 ml-Probe zur Analyse entnommen, um den Basalefflux von ⁸⁶Rb zu bestimmen. Zu jeder Vertiefung wurden dann 0,3 ml einer modifizierten EBSS mit hohem KCl-Gehalt zugegeben, die 125 mM KCl enthielt (NaCl ersetzt durch KCl; KCl Endkonzentration in jeder Vertiefung betrug 65 mM) und die zu testenden Verbindungen enthielt. Die hohe KCl-Konzentration wurde dazu verwendet, die Zellen zu Membranpotentialen zu depolarisieren, die Kv1.3- und Kv1.5-Kanäle aktivieren. Nach 15-minütiger Inkubation wurde eine weitere 0,3 ml-Probe zur Analyse entnommen. Schließlich wurden 0,3 ml 0,2% Natriumdodecylsulfat in EBSS zu jeder Vertiefung zugegeben, um die Zellen zu lysieren. Von diesem Lysat wurden 0,3 ml zur Analyse entnommen, um den Zellendgehalt von ⁸⁶Rb zu bestimmen.
Die Proben wurden in einem Wallac Microbeta Liquid Scintillation Counter auf Cerenkov-Emission gezählt. Der Efflux wurde als Prozentsatz des anhänglichen Zellgehalts an ⁸⁶Rb angegeben.
3. Fluoreszenzmessung des Zellmembranpotentials
CHO-Zellen, die stabil transfiziert waren mit Genen, die für menschliche spannungsgesteuerte Kaliumkanäle kodieren, wurden bis zu 80–90% Konfluenz in 96 Well-Gewebekulturplatten gezüchtet. Am Versuchstag wurden sie wiederholt mit einem modifizierten EBSS (116 mM NaCl, 5,4 mM KCl, 1,8 mM CaCl₂, 0,8 mM MgCl₂, 20 mM HE- PES, 5 mM Glukose; pH 7,4, 300 mOsm) plus 5 μM des spannungsempfindlichen Oxonol-Farbstoffs, bis-(1,3-Dibutylbarbitursäure)trimethinoxonol (DiBac₄(3)) in Kontakt gebracht. DiBac₄(3) bindet an intrazelluläre Proteine in einem Membranpotential-abhängigen Prozess, wobei die effektive Konzentration fluoreszierender Moleküle verändert wird. Eine Zunahme der Fluoreszenz zeigt eine Membran-Depolarisierung an, während eine Abnahme der Fluoreszenz eine Membran-Hyperpolarisierung anzeigt (Epps et al., Chemistry and Physics of Lipids, 69: 137, 1994). Die Zellen in jeder Vertiefung wurden dann in EBSS + 5 μM DiBac₄(3) 30 Minuten lang bei 37°C inkubiert. Die 96 Well-Platte wurde dann in eine Kammer mit einer kontrollierten Temperatur von 35°C gegeben, und zwar in einem sogenannten fluorescence imaging plate reader auf Laserbasis (NovelTech Inc.). Die Daten wurden alle 60 Sekunden für Zeiträume im Bereich von 20 bis 40 Minuten gesammelt. Um eine vergleichende Quantifizierung der Größenordnung der Arzneistoff-induzierten Änderungen in dem Fluoreszenzsignal zu erlauben, wurden die Veränderungen verglichen mit der Zugabe von EBSS + 5 μM DiBac₄(3) ohne Arzneistoff und EBSS + 5 μM DiBac₄(3) + 30 mM KCl ohne Arzneistoff und als Prozentsatz der Zunahme der Fluoreszenz angegeben, die induziert wurde, indem die Zellen 30 mM KCl ausgesetzt waren. (Es ist bekannt, dass ein Anstieg des extrazellulären KCl Zellen depolarisiert). Für einen wirksamen Einsatz von DiBac₄(3) in den zuvor beschriebenen Tests wurde der Kontakt der Farbstoff-haltigen Lösungen mit Kunststoffen und Proteinen auf ein Mindestmaß begrenzt.
4. Elektrophysiologische Studien
Elektrophysiologische Aufzeichnungen nativer Kanäle in Zellen und Zelllinien, klonierten und exprimierten Kanälen in Zellen (z. B. CHO-Zellen) sowie von isolierten kardialen Myocyten wurden durchgeführt, indem die gesamte Zellkonfiguration der sogenannten Patch Clamp-Technik verwendet wurde (Hamill et al., Pflugers Archiv 391: 85, 1981). Die Zelllinien wurden wie zuvor beschrieben hergestellt (Klonieren usw.). Kardiale Myocyten von Ratten und Menschen wurden isoliert, wobei die in Castle und Slawsky, J. Pharmacol. Exp. Ther. 264: 1450, 1993 bzw. Wang et al., Circ. Res., 73: 1061, 1993, beschriebenen Verfahren verwendet wurden. Die Zellen wurden auf Labordeckgläser, sogenannte coverslips, mit einer Dichte von 2 × 10^–4 Zellen pro coverslip platiert und innerhalb 24–48 Stunden für gezüchtete Zelllinien und innerhalb 6 Stunden für isolierte kardiale Myocyten verwendet. Die coverslips wurden in eine kleine Kammer (Volumen 200 μl) auf die mechanische Stufe eines invertierten Mikroskops gegeben und mit extrazellulärer Aufzeichnungslösung durchströmt (2 ml/Min.). Die Arzneistoffanwendung wurde mittels einer Reihe von Glaskapillarröhrchen mit enger Bohrung (innerer Durchmesser ~100 μm) erreicht, die etwa 200 um von der Zelle positioniert waren. Die Anwendung von Spannungs-Clamp-Pulsen, Datenerfassung und die Analyse wurden von einem 75 MHz Pentiumcomputer kontrolliert, wobei pCLAMP 6.0 Software (Axon Instruments Inc. Foster City, CA) verwendet wurde.
5. Lymphozyten-Proliferationsuntersuchungen
Ein T-Lymphozyten-Proliferationstest wurde durchgeführt, wobei menschliche periphere T-Lymphozyten verwendet wurden, die mittels Zentrifugation auf Lymphozyten-Abtrennmedium (Organon Teknika) isoliert wurden, und anschließender Haftung der Nicht-T-Zellen auf Nylonwolle (es wurde gefunden, dass T-Lymphozyten nach der Isolation eine Lebensfähigkeit von > 98% aufweisen, und zwar mittels Trypanblauausschluss). Die Zellen wurden in RPMI-Medium resuspendiert, das mit 10% fetalem Rinderserum bei einer Konzentration von 1 × 10⁶ Zellen/ml ergänzt war. 100 μl Zellen/Well wurden auf eine 96-Well-Platte verteilt. Die Zellen wurden in Gegenwart oder Abwesenheit verschiedener Antagonisten 3 Tage lang mit Phytohämoagglutinin (1,25 oder 2,5 μg/ml Endkonzentration) stimuliert. Am 4. Tag wurden die Zellen mit [³H]Thymidin weitere 18 Stunden lang gepulst und auf Glasfaser-Filtermatten mit extensivem Waschen geerntet. Die Matten wurden in einem Wallac Microbeta Liquid Scintillation-Zähler unter Verwendung eines aufgeschmolzenen Scintillant gezählt. Weitere Wells wurden am Ende der 18-Stundenperiode gezählt, um festzustellen, ob die Arzneistoffbehandlungen eine zelluläre Toxizität verursachten.
BEISPIEL 1
Wirkung von Verbindung 4 auf das Membranpotential in Zellmonoschichten
Die Inhibition von spannungsgesteuerten Kaliumkanälen durch Verbindung 4 und verwandte Moleküle wurde ursprünglich bewertet durch ihre Fähigkeit, die Zellmembran-Depolarisation in Monoschichten von CHO-Zellen zu induzieren, die mit cDNA für menschliche Kv1.5- oder Kv1.3-Kaliumkanäle permanent transfiziert waren. Die Wirkungen der Indanverbindung 4 und verwandter Moleküle wurde mit den Wirkungen bekannter Inhibitoren für Kv1.5 oder Kv1.3 verglichen, das Membranpotential zu verändern, wie mit dem spannungsabhängigen fluoreszierenden Farbstoff DiBac₄(3) nachgewiesen wurde, der induziert durch 30 mM KCl zur Depolarisierung normalisiert war. 1 veranschaulicht beispielsweise die Wirkung von Verbindung 4 auf Membranpotential in Monoschichten von CHO-Zellen, die menschliches Kv1.3 darstellen, die bei 10 um eine Depolarisation hervorrufen, deren Größenordnung ähnlich derjenigen ist, die durch das Kv1.3-spezifische Blockierungstoxin Margatoxin hervorgerufen wird. Die Werte sind ± Standardfehler aus 4 Messungen. Die Zugabe von Agentien ist durch Pfeile angegeben. Die Basislinienfluoreszenz wird durch offene Symbole angegeben. Die durch die Verbindung 4 induzierte Depolarisation lag in nicht-transfizierten Zellen nicht vor.
BEISPIEL 2
Wirkung von Verbindung 4 auf ⁸⁶Rubiniumflüsse von Zellmonoschichten, die Kv1.5 oder Kv1.3 exprimieren
Die Wirkung von Verbindung 4 auf den Efflux von ⁸⁶Rb aus vorgeladenen Monoschichten von CHO-Zellen, die entweder menschliches Kv1.5 oder Kv1.3 exprimieren, ist in 2 gezeigt. Die Werte sind ± Standardfehler (n = 4) der Menge an in einem Zeitraum von 15 Minuten freigesetztem ⁸⁶Rb und sind als Prozentsatz des anfänglichen Zellgehalts angegeben. Die Beziehung zwischen dem KCl-induzierten Efflux und der Aktivierung von Kv1.3 oder Kv1.5 wird durch die Beobachtung gestützt, dass nicht-transfizierte CHO-Zellen keine Zunahme des ⁸⁶Rb-Effluxes in Gegenwart von KCl zeigen. Die unterschiedliche Wirkung von 5 nM Margatoxin bestätigte die kanalspezifische Aktivierung von ⁸⁶Rb-Efflux von CHO-Zellen, die Kv1.3 und Kv1.5 exprimieren. Ein Anstieg der Geschwindigkeit des ⁸⁶Rb-Effluxes nach Exposition von 60 mM KCl trat in Zellen ein, die Kv1.5 und Kv1.3 exprimieren, lag jedoch nicht in nicht-transfizierten (Wildtyp)-Zellen vor. In Kv1.3 exprimierten Zellen kann der von 60 mM KCl hervorgerufene Anstieg der ⁸⁶Rb-Effluxgeschwindigkeit vollständig aufgehoben werden, und zwar durch eine vorherige Exposition von entweder 5 nM Margatoxin oder 10 μM Verbindung 4. Entsprechend inhibiert 10 μM Verbindung 4 den von 60 mM KCl hervorgerufenen Anstieg in der ⁸⁶Rb-Effluxrate in CHO-Zellen, die Kv1.5 exprimieren, völlig.
BEISPIEL 3
Wirkung von Verbindung 4 und verwandter Verbindungen auf Kv1.5 und Kv1.3 Kaliumkanäle

Eine direkte Messung der inhibitierenden Wirkung von Verbindung 4 und verwandter Verbindungen auf Ionenströme wurde gemessen, wobei der gesamte Zell-Patch-Clamping-Test wie er beschrieben wurde verwendet wurde. Die inhibitorische Wirkung von Verbindung 4 auf ionische Ströme durch Kv1.5- und Kv1.3-Kanäle in CHO-Zellen ist beispielsweise in 3 veranschaulicht. 500 ms Spannungsklemmschritte von –80mV bis +60mV wurden auf einzelne Zellen alle 20 Sekunden für Kv1.5 und alle 60 Sekunden für Kv1.3 angelegt. In Abwesenheit von Arzneistoff aufgezeichnete Stromspuren und anschließend eine 5-minütige Präinkubation mit 10 μM Verbindung 4 sind gezeigt. Die Wirksamkeit von Verbindung 4 und repräsentativer struktureller Homologe als Inhibitoren von Kv1.5 sind in Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1

Verbindung	50% Kanalinhibierung
	(IC₅₀)
4	0,1 μM (etwa)
2	1 μM (etwa)
16	1 μM (etwa)
13	1 μM (etwa)
11	1 μM (etwa)
15	1 μM (etwa)
17	> 1 μM (etwa)
12	> 1 μM (etwa)
10	> 1 μM (etwa)

Andere Verbindungen, die als Beispiele der Formeln (I), (II) und (III) illustriert sind, zeigten IC₅₀-Werte von größer als 5 μM jedoch weniger als 50 μM.
BEISPIEL 4
Wirkung von Verbindung 4 auf I_Kur in menschlichen Vorhofmyocyten
Der sogenannte delayed rectifier spannungsgesteuerte Kaliumkanal, der für den karidalen ionischen Strom verantwortlich ist, der verschiedentlich als I_Kur oder I_Sus bezeichnet wird, enthält vermutlich das Kv1.5-α-Untereinheit-Genprodukt. Es wird allgemein angenommen, dass I_Kur (oder I_Sus) bei der Repolarisation des menschlichen Vorhofaktionspotentials von Bedeutung ist (Wang et al., Circ. Res. 73: 1061, 1993; Fedida et al., Circ. Res. 73: 210, 1993; Wang et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 272: 184, 1995). Es wurde gefunden, dass 1 μM von Verbindung 4 die I_Kur-Ströme in isolierten, menschlichen Vorhofmyocyten um > 50% inhibiert.
BEISPIEL 5
Wirkung von Verbindung 4 auf das kardiale Aktionspotential
Eine funktionelle Konsequenz der Kaliumkanalinhibition im Herzen ist eine Verlängerung der Dauer des Aktionspotentials. Diese Zunahme der Dauer des Aktionspotentials und die daraus resultierende Verlängerung der effektiven Refraktärzeit um die elektrische Erregung im Herzen zu propagieren, wird vom Mechanismus her den antirhythmischen Eigenschaften von Mitteln zugesprochen, die Kaliumkanäle blockieren. 1 μM von Verbindung 4 verlängert das Aktionspotential um > 50% in isolierten menschlichen atrialen Myocyten. Entsprechend zeigt 4, dass 1 μM Verbindung 4 das Aktionspotential in kardialen Myocyten von Ratten verlängert.
BEISPIEL 6
Lymphozyten-Proliferationstest von Verbindung 4
Eine funktionelle Konsequenz der I_Kn (Kv1.3)-Inhibierung in menschlichen Lymphozyten ist eine Inhibierung einer durch Antigen hervorgerufenen Zellproliferation (Chan dy et al., J. Exp. Med. 160: 369, 1984; Lin et al., J. Exp. Med. 177: 637, 1993). Eine solche Wirkung wäre daher immunosuppresiv und ergäbe Therapien für Leiden, in denen die Immunzellaktivierung und Proliferation verhindert oder behandelt werden muss.
Verbindung 4 wurde in einem in vitro-Lymphozyt-Proliferationstest geprüft, um festzustellen, ob seine Kv1.3-blockierende Wirkung zu funktionellen Änderungen in einem menschlichen Zellsystem führen würden. Wie in 4 gezeigt ist, inhibierten Margatoxin, Charybdotoxin und Verbindung 4 sämtliche die Lymphozyten-Proliferation in einem ähnlichen Ausmaß, im Vergleich zu Kontrollen mit nur PHA. Verbindung 4 war für menschliche T-Lymphozyten nicht toxisch, da nach 90 Stunden Exposition von 10 μM der Verbindung 4 keine Abnahme der Lebensfähigkeit der Zellen vorlag.

Die Prinzipien, bevorzugten Ausführungsformen und Vorgehensweisen der vorliegenden Erfindung sind in der vorstehenden Beschreibung beschrieben worden. Die Erfindung, die hier geschützt werden soll, soll jedoch nicht auf die besonderen beschriebenen Formen beschränkt sein, da diese der Veranschaulichung dienen und nicht einschränkend wirken sollen. Der Fachmann erkennt Variationsmöglichkeiten in den zuvor beschriebenen Verfahren und er erkennt geeignete Modifikationen, die auf der obigen Beschreibung basieren, um die erfindungsgemäßen Verbindungen herzustellen und zu verwenden. In der vorstehenden Beschreibung werden die folgenden Abkürzungen verwendet:

Bezeichnung	Reagens oder Fragment
m-CPBA	meta-Chloroperoxybenzoesäure
Ac	Acetyl [CH₃C(O)-]
LC	Flüssigkeitschromatographie
THF	Tetrahydrofuran
TLC	Dünnschichtchromatographie
DMF	Dimethylformamid
DMAP	para-Dimethylaminopyridin
TEA	Triethylamin
Me	Methyl
Et	Ethyl
EtOH	Ethanol
Et₂O	Diethylether
McOH	Methanol
EtOAc	Ethylacetat

Bezeichnung	Reagens oder Fragment
pTSA	para-Toluolsulfonsäure
TsOH·H₂O	para-Toluolsulfonsäure·Wasser
PhMe	Toluol
I-PrOH	iso-Propanol
AcOH	Essigsäure
NEt₃	Triethylamin
TFA	Trifluoressigsäure
(S,S)Mn-salem	(S,S)-N,N'-bis-(3,5-di-terf-butylsalyciden)-1,2-cyclohexandiaminomangan-(III)-chlorid
PPNO	4-Phenylpyridin-N-oxid
HOBt	1-Hydroxybenzotriazol
EDC	1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodümidhydrochlorid
4-DMAP	4-Dimethylaminopyridin
NH₄Oac	Ammoniumacetat
MeCN	Acetonitril
BocNCl₂	terf-Butyl-N,N-dichloro-carbamat
DMSO	Dimethylsulfoxid
Ph₃P	Triphenylphosphin
Dibac₄	bis-(1,3-Dibutylbarbitursäure) trimethinoxonol
rt	Raumtemperatur

Claims

Verbindung, die eine kaliumkanalhemmende Aktivität aufweist, mit der Formel
in der R¹ gleich H, Alkyl ist oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R³ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; R⁴ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist; X² gleich C=O oder SO₂ ist; Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist; wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist, wobei q gleich 0 oder 1 ist; Z gleich H, OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist; wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ ist, oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist; wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist; R⁶ gleich H oder Alkyl ist; R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ gleich Alkyl ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, dann X¹ und X² nicht beide C=O sein können, wenn Y¹ gleich (CH₂)_p mit p = 0 ist, wenn Y² gleich (CH₂)_q(CH₂)_q mit q = 0 ist, und wenn R¹ und R² beide Methyl sind, und mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, X² gleich SO₂ ist, Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, R³ und R⁴ beide H sind und R¹ ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, dann X¹ nicht C=O sein kann, Y¹ nicht (CH₂)_p mit p = 0 sein kann und R² nicht Methyl sein kann, und mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, dann X¹ und X² nicht beide gleich C=O sein können, wenn Y¹ gleich 0 ist, Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, R¹ ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, und wenn R² ein Alkyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei der Indanylkern an der 1-, 2- und 6- Stellung substituiert ist, NR₃ und Z an den Stellungen 1 respektive 2 vorliegen, und wobei X² gleich SO₂ ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, die eine kaliumkanalinhibitorische Aktivität aufweist, wobei R³ gleich Wasserstoff ist; X² gleich SO₂ ist; Y² gleich (CH₂)_q ist, wobei q gleich 0 ist; R⁴ gleich Wasserstoff ist; X¹ gleich C=O ist; R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; Y¹ gleich O, (CN₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist; wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; und Z gleich H oder OR⁵ ist, wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig voneinander ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon.
Verbindung, die eine kaliumkanalinhibitorische Aktivität aufweist mit der Formel:
in der R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphtyl, ist; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; m gleich 0 oder 1 ist; X gleich O oder S ist; und Y ausgewählt ist aus (CH₂)_p, (CH₂O)_q und (NH)_r, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; q gleich 0 oder 1 ist und r gleich 0 oder 1 ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei der Indanylkern an der 1-, 2- und 6- Stellung substituiert ist, und wobei die Sulphonamid- und Hydroxylgruppen an der 1-Stellung respektive 2- Stellung vorliegen.
Verbindung nach Anspruch 4 oder Anspruch 5, die die Formel aufweist:
in der R¹, R² und p die in Anspruch 4 angegebene Bedeutung aufweisen, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H, Alkyl ist oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² gleich Wasserstoff oder Methyl ist; R⁴ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist; X² gleich C=O oder SO₂ ist; Y¹ gleich O, (CH₂)p, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist; wobei q gleich 0 oder 1 ist; Z gleich H, OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist; wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist; wobei jedes R⁹ unabhängig voneinander ausgewählt ist aus H oder Alkyl, und L ein Gegenion ist; R⁶ gleich H oder Alkyl ist; R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ gleich Alkyl ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon; und einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel oder Träger mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, dann X¹ und X² nicht beide C=O sein können, wenn Y¹ gleich (CH₂)_p mit p = 0 ist, wenn Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist und wenn R¹ und R² beide Methyl sind, und mit der Maßgabe, dass, wenn Z gleich H ist, X² gleich SO₂ ist, Y² gleich (CH₂)_q mit q = 0 ist, sowohl R³ als auch R⁴ gleich H sind, und R¹ ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, dann X¹ nicht C=O sein kann, Y¹ nicht (CH₂)_p mit p = 0 sein kann und R² nicht Methyl sein kann.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 7, wobei der Indanylkern der Verbindung an den 1-, 2- und 6-Stellungen substituiert ist, NR³ und Z an der 1-respektive 2-Stellung vorliegt und wobei X² gleich SO₂ ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; und Z gleich H oder OR⁵ ist, wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist, m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig voneinander ausgewählt ist aus H oder Alkyl, und L ein Gegenion ist, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder Arzneistoffvorstufe davon; und ein pharmazeutisch verträgliches Verdünnungsmittel oder Träger.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphtyl, ist; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; m = 0 oder 1 ist; X gleich O oder S ist; und Y ausgewählt ist aus (CH₂)_p, (CH₂O)_q und (NH)_r; wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; q gleich 0 oder 1 ist, und r gleich 0 oder 1 ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon; und ein pharmazeutisch verträgliches Verdünnungsmittel oder Träger.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 10, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert ist, wobei die Sulphonamid- und Hydroxylgruppen an der 1- respektive 2- Stellung vorliegen.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der folgenden Formel:
in der R₁, R₂, m und p die in Anspruch 10 angegebene Bedeutung aufweisen; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Arzneistoffvorstufe davon; und ein pharmazeutisch verträgliches Verdünnungsmittel oder Träger.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur therapeutischen Verwendung.
Verwendung einer Verbindung der Formel:
in der R¹ gleich H, Alkyl ist, oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R³ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; R⁴ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist; X₂ gleich C=O oder SO₂ ist; Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist, wobei q gleich 0 oder 1 ist; Z gleich H, OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist; wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig voneinander ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist; R⁶ gleich H oder Alkyl ist; R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ gleich Alkyl ist; zur in vitro-Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Verwendung nach Anspruch 14, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert ist, NR³ und Z an der 1- respektive 2- Stellung vorliegen und in der X² gleich SO₂ ist.
Verwendung einer Verbindung der Formel:
in der R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; Y¹ gleich O, (CH₂)_pCH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Z gleich H oder OR⁵ ist, worin R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist, m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig voneinander ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist; zur in vitro-Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Verwendung einer Verbindung der Formel:
in der R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphtyl, ist; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; m gleich 0 oder 1 ist; X gleich O oder S ist; und Y ausgewählt ist aus (CH₂)_p, (CH₂O)_q und (NH)_r, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; q gleich 0 oder 1 ist und r gleich 0 oder 1 ist; zur in vitro-Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Verwendung nach einem der Ansprüche 14 bis 17, wobei der Kaliumkanal ein spannungsgesteuerter Kaliumkanal ist.
Verwendung nach Anspruch 18, wobei der Kaliumkanal ausgewählt ist aus einem Kaliumkanal, der für den kardialen Kaliumstrom I_kur verantwortlich ist, einem Kaliumkanal, der für den T-Lymphocyten Kaliumstrom I_kn verantwortlich ist und Kaliumkanäle, die ein Produkt des Kv1.5- oder Kv1.3-α-Untereinheitgens enthalten.
Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H, Alkyl ist oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalky; R³ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; R⁴ Wasserstoff oder Methyl ist; X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist; X² gleich C=O oder SO₂ ist; Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist, wobei q gleich 0 oder 1 ist; Z gleich H, OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist; worin R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist; R⁶ gleich H oder Alkyl ist; R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ gleich Alkyl ist; zur Herstellung eines Medikaments zur Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Verwendung nach Anspruch 20, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert ist, wobei NR³ und Z an der 1- respektive 2-Stellung vorliegt, und wobei X² gleich SO₂ ist.
Verwendung einer Verbindung der Formel:
in der R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; Y¹ gleich O, (CH₂)_p CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; und Z gleich H oder OR⁵ ist, wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist, m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl, und L ein Gegenion ist; zur Herstellung eines Medikaments zur Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Verwendung einer Verbindung der Formel:
in der, R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphtyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; m gleich 0 oder 1 ist; X gleich O oder S ist; und Y ausgewählt ist aus (CH₂)_p, (CH₂O)_q und (NH)_r, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist, q gleich 0 oder 1 ist und r gleich 0 oder 1 ist; zur Herstellung eines Medikaments zur Inhibierung des Kaliumtransports durch Zellmembranen, die Kaliumkanäle aufweisen.
Verwendung nach einem der Ansprüche 20 bis 23, wobei der Kaliumkanal ein spannungsgesteuerter Kaliumkanal ist.
Verwendung nach Anspruch 24, wobei der Kaliumkanal ausgewählt ist aus einem Kaliumkanal, der für den kardialen Kaliumstrom I_kur verantwortlich ist, einem Kaliumkanal, der für den T-Lymphocyten Kaliumstrom I_kn verantwortlich ist und Kaliumkanäle, die ein Produkt des Kv1.5- oder Kv1.3-α-Untereinheitgens enthalten.
Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H, Alkyl ist oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R³ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; R⁴ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist; X² gleich C=O oder SO₂ ist; Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist, wobei q gleich 0 oder 1 ist; Z gleich H; OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist; wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl, und L ein Gegenion ist; R⁶ gleich H oder Alkyl ist; R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ Alkyl ist; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Herzarrhythmien.
Verwendung nach Anspruch 26, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6- Stellung substituiert ist, NR³ und Z an der 1- respektive 2- Stellung vorliegen und wobei X² gleich SO₂ ist.
Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H, Alkyl ist oder ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, einem gegebenenfalls substituierten Aryl, einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substitutierten Carbocycloalkyl; R³ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; R⁴ gleich Wasserstoff oder Methyl ist; X¹ gleich C=O, C=S oder SO₂ ist; X² gleich C=O oder SO₂ ist; Y¹ gleich O, (CH₂)_p, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; Y² gleich O, (CH₂)_q, HC=CH oder NH ist, wobei q gleich 0 oder 1 ist; z gleich H, OR⁵ oder NR⁶R⁷ ist; wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl; und L ein Gegenion ist, R⁶ gleich H oder Alkyl ist; R⁷ gleich H, Alkyl oder CO₂R¹⁰ ist, wobei R¹⁰ Alkyl ist; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung der Zellproliferation.
Verwendung nach Anspruch 28, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert ist, wobei NR³ und Z an der 1- respektive 2-Stellung vorliegen und wobei X² gleich SO₂ ist.
Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel:
in der R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; Y¹ gleich O, (CH₂)_P, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; und Z gleich H oder OR⁵ ist, wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist, m = 1 bis 5; R⁸ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹, wobei jedes R unabhängig ausgewählt ist aus H oder Alkyl, und L ein Gegenion ist, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Herzarrhythmien.
Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Aryl und einem gegebenenfalls substituierten Heteroaryl; Y¹ gleich O, (CH₂)_P, CH₂O, HC=CH oder NH ist, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; und Z gleich H oder OR⁵ ist, wobei R⁵ gleich H, (CH₂)_m-R⁸ oder C(O)-(CH₂)_m-R⁸ ist; m = 1 bis 5; R⁶ gleich N(R⁹)₂, N(R⁹)₃L oder CO₂R⁹ ist, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe aus H oder Alkyl und L ein Gegenion ist, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung der Zellproliferation.
Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphtyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; m gleich 0 oder 1 ist; X gleich O oder S ist; und Y ausgewählt ist aus (CH₂)_p, (CH₂O)_q und (NH)_r, wobei p gleich 0,1 oder 2 ist; q gleich 0 oder 1 ist und r gleich 0 oder 1 ist; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Herzarrhythmien.
Verwendung nach Anspruch 32, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6-Stellung substituiert ist und wobei die Sulphonamid- und Hydroxylgruppen an der 1- respektive 2-Stellung vorliegen.
Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel:
in der R¹ gleich H oder ein gegebenenfalls substituiertes Aryl ist, das ausgewählt ist aus der Gruppe aus Phenyl und β-Naphthyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe aus einem gegebenenfalls substituierten Phenyl, einem gegebenenfalls substituierten Heterocyclyl und einem gegebenenfalls substituierten Carbocycloalkyl; m = 0 oder 1 ist; X gleich O oder S ist; und Y ausgewählt ist aus (CH₂)_P, (CH₂O)_q und (NH)_r, wobei p gleich 0, 1 oder 2 ist; q gleich 0 oder 1 ist und r gleich 0 oder 1 ist, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung der Zellproliferation.
Verwendung nach Anspruch 34, wobei der Indanylkern der Verbindung an der 1-, 2- und 6- Stellung substituiert ist, und wobei die Sulphonamid- und Hydroxylgruppen in der 1- respektive 2-Stellung vorliegen.