DE1193200B

DE1193200B - Verfahren zur Herstellung von reinen Praeparaten des Kallikrein-Inaktivators

Info

Publication number: DE1193200B
Application number: DEF39461A
Authority: DE
Inventors: Dr Fritz Schultz
Original assignee: Bayer AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 1963-04-11
Filing date: 1963-04-11
Publication date: 1965-05-20
Also published as: AT248610B; CH441620A; DK103250C; BE646312A; BR6458347D0; NL6403416A; NL143421B; GB1040503A; LU45831A1

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

A61k

Deutsche KL: 30 h-2/10

Nummer:
Aktenzeichen:
Anmeldetag:
Auslegetag:

1193 200
F 39461IV a/30 h
11. April 1963
20. Mai 1965

Gegenstand des deutschen Patentes 1 155 563 ist ein Verfahren zur Herstellung von reinen Präparaten des Kallikrein-Inaktivators, dadurch gekennzeichnet, daß man den Kallikrein-Inaktivator aus seinen Lösungen mit Metaphosphorsäure ausfällt, den Nieder- S schlag abtrennt, durch Auflösen in Laugen oder Salzlösungen zerlegt und die Lösung nach an sich bekannten Methoden von den Salzen befreit.

Es wurde nun gefunden, daß man reine Präparate des Kallikrein-Inaktivators auch dadurch herstellen kann, daß man den Kallikrein-Inaktivator aus seinen Lösungen mit wasserlöslichen Salzen der Metaphosphorsäure unter Vermeidung eines Überschusses des Fällungsmittels ausfällt, den Niederschlag abtrennt, durch Auflösen in Ammoniak, Laugen oder Salzlösungen zerlegt und die Lösung nach an sich bekannten Methoden von den Salzen befreit. Geeignete wasserlösliche Salze sind vor allem die Alkali- und Ammoniumsalze.

Das sich das erfindungsgemäße Verfahren in dieser Weise durchführen läßt, ist überraschend, denn bisher wurde angenommen, daß wasserlösliche Salze der Metaphosphorsäure mit dem Kallikrein-Inaktivator keinen Niederschlag bilden. Es hat sich jedoch gezeigt, daß ein solcher Niederschlag dann auftritt, wenn ein Überschuß des Fällungsmittels vermieden wird.

Die Zerlegung der schwerlöslichen Verbindung kann erfolgen durch Auflösung in Natronlauge, Ammoniak oder in Salzlösungen, beispielsweise wäßrigen Lösungen von NaCl oder NH₄Cl in Konzentrationen von mehr alsl°/₀.

Die Entfernung der Metaphosphorsäure bzw. der Salze erfolgt nach an sich bekannten Methoden, z. B. durch Behandlung der Lösungen mit Austauschern, Dialyse usw.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann angewendet werden auf Lösungen, die den Kallikrein-Inaktivator enthalten, und die gewonnen wurden aus inaktivatorhaltigen tierischen Organen, wie Parotis, Lunge, Leber, Pankreas, Milz, Lymphdrüsen usw.

Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren wird der Kallikrein-Inaktivator in Ausbeuten, die bei 80% liegen, in Form von nahezu reinen Lösungen gewonnen. Lyophilisiert man die Lösungen, so erhält man eine leicht wasserlösliche Substanz, von der 0,16 bis 0,19 γ die biologische Aktivität einer Kallikrein-Inaktivator-Einheit haben.

Beispiel 1

1,080 g Kallikrein-Inaktivator vom Reinheitsgrad 0,54 y/KIE werden in 40 cm³ aqua redest, gelöst und mit 1,3 cm³ einer 10%igen Natriummetaphosphat-Verfahren zur Herstellung von reinen Präparaten des Kallikrein-Inaktivators

Anmelder:

Farbenfabriken Bayer Aktiengesellschaft,
Leverkusen

Als Erfinder benannt:

Dr. Fritz Schultz, Wuppertal-Sonnborn

lösung, die mit Natronlauge auf einen pH von 11,0 eingestellt war, gefällt. Der Niederschlag wird durch Zentrifugieren abgetrennt, mit 10 cm³ aqua redest, gewaschen und nach abermaligem Zentrifugieren in 100 cm³ aqua redest, suspendiert. Dann wird unter Rühren mit 5 cm³ n/10-Natronlauge gelöst. Diese Lösung läßt man durch eine Austauschersäule fließen, die mit 15 cm³ Kationenaustauscher und 45 cm³ Anionenaustauscher beschickt war.

Die aus der Säule ausfließende Lösung enthält 1,6 Millionen KIE vom Reinheitsgrad 0,18y/KIE.

Beispiel 2

0,675 g Kallikrein-Inaktivator vom Reinheitsgrad 0,71 y/KIE werden in 30 cm³ aqua redest, gelöst und mit 3,55 cm³ einer 2%igeri wäßrigen Lösung von Natriumhexametaphosphat gefällt. Der pH-Wert des Fällungsmittels beträgt 5,9.

Der Niederschlag wird durch Zentrifugieren abgetrennt und mit 10 cm³ aqua redest, gewaschen. Nach abermaligem Zentrifugieren wird in 100 cm³ aqua redest, suspendiert und durch Zugabe von einigen Tropfen Ammoniak gelöst.

Man läßt diese Lösung durch eine mit einem Kationen- und einem Anionenaustauscher beschickte Säule fließen und erhält eine salzfreie Lösung, die 670 000 KIE vom Reinheitsgrad 0,19y/KIE enthält.

Beispiel 3

0,765 g Kallikrein-Inaktivator vom Reinheitsgrad 0,45 y/KIE werden in 30 cm⁸ aqua redest, gelöst und mit 4,25 cm³ einer l^o/<,igen wäßrigen Lösung von Natriummetaphosphat, die mit Natronlauge auf pH 13,0 eingestellt war, gefällt.

Der Niederschlag wird durch Zentrifugieren abgetrennt, mit 10 cm³ aqua redest, gewaschen und nach abermaligem Zentrifugieren in 100 cm³ aqua redest.

509 570/388

unter Zusatz von etwas Natronlauge gelöst. Die Lösung wird wie im Beispiel 1 und 2 durch Austauscher von Salzen befreit und enthält dann 1,1 Millionen KIE vom Reinheitsgrad 0,18y/KIE.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung von reinen Präparaten des Kallikrein-Inaktivators, dadurch gekennzeichnet, daß man den Kallikrein-Inaktivator aus seinen Lösungen mit wasserlöslichen Salzen der Metaphosphorsäure unter Vermeidung eines Überschusses des Fällungsmittels ausfällt, den Niederschlag abtrennt, durch Auflösen in Ammoniak, Laugen oder Salzlösungen zerlegt und die Lösung nach an sich bekannten Methoden von den Salzen befreit.

Bei der Bekanntmachung der Anmeldung ist ein Versuchsbencht ausgelegt worden.

509 570/388 5. 65 © Bundesdruckerei Berlin