CZ57894A3 - SULFONATE AND CARBAMATE DERIVATIVE OF 3-AROYLBENZO(b)THIOPHENES AND PHARMACEUTICAL PREPARATION IN WHICH IT IS COMPRISED - Google Patents

Description

Sulfonátový a karbamátový derivát, 3-aroylbenzotblthiofenů a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Oblast techniky

Vynález se týká sulfonátového a karbamátového derivátu 3-aroylbenzolblthiofenů a farmaceutického prostředku, který ho obsahuje a je vhodný pro předcházení ztráty kostní hmoty, pro ošetřování hypercholesterolemie a hormonálního ošetření v případě rakoviny prsu a dělohy Dosavadní stav techniky

Mechanismus ztráty kostní hmoty není dobře znám avšak jako praktické důsledky jsou známy nerovnováha ve vytváření nové zdravé kosti a v resorpci staré kosti za ztráty kostní hmoty. Tato ztráta kostní hmoty zahrnuje jak pokles obsahu minerálů v kostech tak složek bílkovinové matrice kosti a vede ke zvýšené lámavosti především stehenních kostí, předloktních kostí a páteře. Tyto fraktury vedou ke zvýšení úmrtnosti, k výrazným ztrátám rovnováhy a pohyblivosti a v Četných případech ke zvýšení úmrtnosti v důsledku přidružených komplikací.

Ke ztrátě kostní hmoty dochází v případě širokého okruhu subjektů včetně žen v menopausálním období, žen, které prodělaly ♦ · hysterectomjf/. pacientů, kteří dlouhodobě prodělávají nebo prodělali podávání kortikosteroidů, nemocných se Cushingovým syndromem a nemocných s gonádovou dysgenes íNekontrolovaná ztráta kostní hmoty může vést k osteoporose může vést k závažnějším oslabujícím onemocněním, jehož hlavní charakteristikou je ztráta kostní hmoty (snížená hustota a zvětšení mezer mezi kostmi) bez ztráty objemu kostí za vzniku porozity a lámavosti kostí.

Nejběžnějším typem osteoporozy je osteoporoza v postmeno- ₃ paušálním období žen, postihující ‘podle Ujištění 20 až 25 milionů žen ve Spojených státech amerických. Výraznou charakteristikou post menopausální osteoporosy je značná a rychlá ztráta kostní hmoty v důsledku skutečnost.!, že válečníky neprodukují esterogen. Zjistilo se, že estrogeny jsou schopny omezit postup osteoporotické ztráty kostní hmoty a náhrada estrogenu představuje ošetřování post menopausální osteoporosy ve Spojených státech amerických a v četných jiných zemích.

Všechny savčí buňky potřebují cholesterol jakožto konstrukční složku svých buněčných membrán a pro nesterolové konečné produkty. Cholesterolu je také zapotřebí pro syntézu steroidního hormonu. Hlavní vlastností, pro kterou je cholesterol užitečný pro buněčné, membrány je jeho nerozpustnost ve vodě, která ho však činí možnou příčinou smrti. Jestliže se cholesterol hromadí na nepravém místě, například ve stěně arterie, nemůže být snadno mobilizován a jeho přítomnost vede k vývoji atherosklerotické destičky- Zvýšená koncentrace cholestrolu v seru, spojená s lipoproteiny s nízkou hustotou, se považuje za hlavní faktor přispívající k vývoji a postupu atherosklerosyV případě savců se lipoprotein sera skládá z cholesterolu spolu s cho 1 estery 1 estery, s triglyceridy, s fosfoliopidy a s apoproteiny. Sérum nebo lipoprotein plasmy sestává z několika frakcí. Hlavními frakcemi nebo třídami lipoproteinů plysiny jsou lipoprotein s velmi nízkou hustotou CVLDL - very lov density lipoprotein), lipoprotein s nízkou hustotou (LDL » lov density lipoprotein) , lipoprotein CIDL - lipoprotein) a lipoprotein s vysokou hustotou (HDL « high density lipoprotein). Tyto třídy lipoproteinů se navzájem liší velikostí a hustotou reklativnťch podílů triglyceridů a cho1estery1esterů v jádru a v povaze apoproteinů na povrchu.

V případě savců se cholesterol získá z exogenních zdrojů potravin stejně jako prostřednictvím endogenní syntézy. Endogenní syntéza cholesterolu zahrnuje komplexní soubor reakcí katalyzovaných enzymem a regulačních mechanismů obecně označovaných jakožto melavonátová cesta (melavonate pathvay”). Buňky představují komplexní problém při regulaci melavónátové syntézy, jelikož cholesterol, konečný produkt mevalonátového metabolismu, je odvozen z plasmy lipoproteinů s nízkou hustotou, který vstupuje do buňky prostřednictvím endocytosy, zprostředkované receptorem, stejně Jako ze syntézy uvnitř buňky- Každá buňka musí být vyrovnané vnější a vnitřní zdroje k udržení mevalonátové systezy za vyvarování se nadměrné akumulace sterolu. Této rovnováhy se dosahuje regulací zpětné vazby alespoň dvou sekvenciálních enzymů v mevalonátové synteze, 3-hydroxy-3-methylglutary1koenzymu A <HMG-CoA) synthasa a HMG-CoA reduktasa a také receptory LDL. V nepřítomnosti LDL si podržují savčí buňky vysoké aktivity dvou enzymů, čímž dochází k synteze mevalpnátu pro produkci cholesterolu stejně Jako nesterolových produktů- V přítomnosti LDL z exogenních zdrojů HMG-CoA se potlačuje aktivita synthasy a reduktasy a buňky produkují menší množství mevalonátu pro nesterolové konečné produkty.

Nadměrný výskyt poukazuje nato, že ošetření hyper1ipoproteinemi^ bude snižovat nebo předcházet atherosklerotickým komplikacím. Kromě diety, která udržuje normální tělesnou hmotnost a minimalizuje koncentrace lipidů v plasmě, terapie zahrnuje eliminaci faktorů, které eliminují hyper1ipoproteinemia a podávání terapeutických činidel, která snižují koncentraci lipoproteinů v plasmě buď snižováním produkce lipopreoteinů nebo podporou účinnosti jejich odstraňování z plasmy.

Slibná třída d^í^T^oučasně dostupných pro ošetřování hyper1ipoproteinemia, působí tak, že inhibuje HMG-CoA reduktasu omezováním syntézy enzymu endogenního cholesterolu, grogy této třídy současně ihnibují aktivitu enzymu. Popřípadě snižují endogenní syntézu cholesterolu a normálními hemostatickými mechanismy se snižuje cholesterol plasmy LDL receptrory k obnovení intracelulární rovnováhy cholesterolu.

Ve vztahu k Jiným buňkám těla mají Jaterní buňky rozhodující úkol v udržování chemostase cholestrolu sera Jak uvolňováním prekursorů LDL tak přijímáním receptorem zprostředkovávaného LDL. Jak na lidských tak na živočišných modelech se Jeví obrácený vztah mezi LDL receptory Jater a LDL hladinami cholesterolu v seru. Obecně vyšší počty hepatocytového receptorů vedou k nižšímu LDL, spojenému s hladinami sérového cholesterolu. Cholesterol, uvolňovaný do hepatocytů, se může ukládat Jako cholesterolestery, převáděné na žlučové kyseliny a může se uvolňovat, do žlučov^odu nebo může vstupovat, do oxycholesterolové zásoby (oxych^olesterol pool). Právě tato oxycholesterolová zásoba je pravděpodobně zahrnuta v represi konečného produktu jak genů LDL receptorů tak enzymů cholesterolové syntetické cesty.

V případě populace, kde koronární nemoce srdce jsou hlavním zdravotním problémem, se výskyt onemocnění výrazně nižší u žen než u mužů. To platí zvláště ve skupinách s nižším věkem, jako jsou muži a ženy ve věku 35 až 44 let.

Obecně je lipoproteinový metabolismus v plasmě ovlivňován cirkulační koncentrací gonadálních steroidů. Změny koncentrací sérového estrogenu a androgenu, vyplývající že změn gonadálního statusu nebo z podávání exogenních gonadálních steroidů, jsou spojeny se změnami hladin sérového lipoproteinu. Změny, ovlivněné estrogeny a androgeny, obecně podporují poznatek, že sexuální rozdíly lipoproteinů jsou způsobeny hormonálními rozdíly mezi mužem a ženou.

i

Obecně přijatý vztah mezi gonadálními steroidy a lipoproteiny plasmy je, že androgeny snižují HDL koncentrace a zvyšují LDL, což přispívá k tomu. že se pozorují nižší koncentrace HDL a vyšší koncentrace LDL u mužů ve srovnání se ženami. Estrogeny mají opačný vliv na lipoproteiny^: to znamená, že se koncentrace HDL zvyšuje a LDL snižuje. Předpokládá se, že tyto pohlavním steroidera podmíněné rozdíly koncentrace lipoproteinů přispívají k nižšímu výskytu kardiovaskulárních onemocnění u žen ve srovnání s muži. Po menopause se chránící působení estrogenů u žen ztrácí a výskyt kardiovaskulárních onemocnění vzrůstá a přibližuje se výskytu u mužů. V případě postmenopausálních žen. které užívají estrogeny, se obecně vyskytují kardiovaskulární onemocnění v menší míře než u žen, které je neužívají. Estrogen, zvlátě podávaný ústy, snižuje koncentraci LDL v plasmě a zvyšuje koncentraci HDL.

Mechanismus, kterým estrogen snižuje koncentrace LDL a zvyšuje koncentrace HDL, není znám.Obecně změny koncentrací lipoproteinu v plasmě vedou ke změnám jeho syntézy nebo rychlostí jeho katabolismu. Například estrogen může snižovat koncentraci LDL zvyšováním vylučování LDL z plasmy, Jelikož estrogen zvyšuje počet hepatických LDL receptorfl u živočichů.

Tamoxifen Cl-p-0-dimethy1aminoethoxyfeny1-trans-1,2-d i feny1but-l-en) Je dobře známá antiestrogenová sloučenina Jakožto účinná látka proti karcinom#, prsu savců CThe Merck Index, 11. vydání, str. 1430, 1989). Kromě toho mají tamoxifenové analogy rovněž antiestrogenní účinnost, včetně účinnosti proti karcinomů prsu savců Camerický patentový spis číslo 4 623660). Četné Jiné sloučeniny mají podobnou antiestrogenní účinnost, vedoucí k potlačování růstu nádoru prsu savců. Například 2-feny1-3-aroylbenzothiofeny a 2-feny1-3-aroylbenzothiofen-l-oxidy Jsou popisovány v americkém patentovém spise číslo 4 133814; 3-feny1-4-aroy1-1,2-dihydronaftaleny a i-aroyl-2-feny1naftalény Jsou popisovány v americkém patentovém spise číslo 4 230862; a 6-hydroxy-2-C4-hydroxyfeny1)-3C4- C2-piperidinoethoxyJbenzoy11benzotblthiofen Je popisován v americkém patentovém spise číslo 4 418068.

Jakkoliv mají estrogeny příznivé působení na kosti a lipidy sera, i při velmi nízkých koncentracích, dlouhodobá estrogenová terapie Je komplikována poruchami, včetně vzrůstu nebezpečí rakoviny dělohy a prsu, což působí, že se mnoho žen zříká této terapie. Nejnověji se navrhují terapeutické režimy, které sn-ižují až vylučují nebezpečí rakoviny, Jako Je podávání kombinací progestogenu a estrogenu, což způsobuje pravidelné odtahování krvácení, které Je nepřijatelné pro většinu starších žen.Skutečnost významných nežádoucích účinků, spojených s estrogenovou terapií a omezené schopnosti estrogenů zvrátit existující ztrátu kostní hmoty, podporuje nutnost vyvinout alternativní terapii pro léčení ztráty kostní hmoty, hypercholesterolemia a karcinoma prsu a dělohy, podmíněnému hormonem, kterou by se dosahovalo žádoucího působení bez doprovodných nežádoucích vlivů.

Výzkumy ke splnění tohoto požadavku použitím sloučenin běžně známých Jakožto antiestrogeny, které vzájemně působí s receptářem estrogenu, mají omezený úspěch, pravděpodobně v důsledku skutečnosti, že tyto sloučeniny mají obecně úlohu směsného působení agonist/arttagonist. Je to proto, že ačkoliv tyto sloučeniny mohou antagonizovat vzájemné působení estrogenu s receptorem sloučeniny jako Lakové, mohou způsobovat. estrogenní odezvy ve tkáních, majících estrogenové receptory. Proto mají některé antiestrogeny stejné nepříznivé působení jako estrogenová terapie.

Vynález se týká sloučenin, farmaceutických prostředků, obsahujících tyto sloučeniny a způsobu inhibice ztráty kostní hmoty, ošetřování hypereholesterolemia a ošetřování hormonálně závislého kareinoma prsu a dělohy v podstatě bez nepříznivého působení estrogenové terapie použitím těchto sloučenin, které jsou tedy vhodné pro účinné a přijatelné ošetřování takových nemocí a stavů.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroy1benzolblthiofenů obecného vzorce I

<I>

kde znamená

X vazbu nebo skupinu -Clfe- ,

R² heterocyklické jádro ze souboru zahrnujícího pyrrolidinoskupinu, piperldinoskupinu a hexamethyleniminoskupinu,

R skupinu vzorce OH -OSO2-(CH2>nCH3 nebo

OCN-R³

R¹ atom vodíku, hydroxylovou skupinu, atom fluoru, chloru, skupinu vzorce -OSO2-<CH2)nCH3 nebo

Ϊ

-OCN-R³H

R³ vždy na sobě nezávisle alkylovou skupinus 1 ž 6 atomy uhlíku, cykl oal kýlovou skupinu s 3 až 6 atomy uhlíku, nesubstituovanou nebo substituovanou fenylovou skupinu, přičemž substituent ie volen ze souboru zahrnujícího atom fluoru nebo chloru, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, n vždy na sobě nezávisle 3, 4 nebo 5 za podmínky, že alespoň jeden ze symbolů R a R¹ znamená skupinu vzorce -OSO2-<CH2>nCH3 nebo

O

-OCN-R³li a jeho farmaceuticky vhodné soli a solvátyVynálezem jsou také farmaceutické prostředky, které obsahuj:

jakožto účinnou látku sloučeninu obecného vzorce I spolu s farmaceuticky vhodným nosičem, ředidlem nebo excipientem.

Vynález se také týká způsobu předcházení ztráty kostní hmoty, ošetřování hypyercholesteroleml$ a ošetřování hormonálně závislého karcinomy prsu a dělohy podáváním savcům, kteří takové ošetření potřebují, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být nepochybně označovány alespoň za použití methanonu jakožto molekulárního skeletgHsfti nebo za použití benzolb]thiofenu jakožto molekulárního skelettenfcu- Pro objasnění jsou sloučeniny obecného vzorce I c|ále označovány za použití jednoho nebo obou molekulových skeletp«ťjfObecně používané výrazy v souvislosti s obecným vzorcem I mají svůj běžný význam. Například výrazem “alkyl“ samotný^* nebo

Jako součást jiného substituentu se vždy míní alkylová skupina s přímým nebo s rozvětveným řetězcem s uvedeným počtem atomů uhlíku, jako například skupina methylová, ethylová, propylová a isopropylová a vyšší homology a isomery, jak vždy uvedeno.

Výrazem alkoxy se vždy míní alkylová skupina s uvedeným počtem atomů uhlíku, vázaná prostřednictvím atomu kyslíku, jako je například methoxyskuplna, ethoxyskupina a propoxyskupina a rovněž s rozvětveným řetězcem, jako je například isopropoxyskupina.

Benzolblthiofeny obecného vzorce I inhibují ztrátu kostní hmoty. která je důsledkem nedostatku endogenního estrogenu, ke které dochází u žen po ustání menstruace v důsledku přírodního, chirurgického nebo Jiného procesu- Snížení hustoty kostí a kostní hmoty, ke kterému dochází u mužů, je rovněž spojeno se ztrátou hormonální regulace a je proto také cílem terapie způsobem podle vynálezu.

BenzoCblthiofeny obecného vzorce I mohou také snižovat hladinu cholestrolu v seru lidí- Nadbytek sérového cholesterolu může být způsobem různými stavy a poruchami, včetně nedostatku endogenního estrogenu, ke kterému dochází u žen po ustání menstruace v důsledku přírodního, chirurgického nebo jiného procesu a u pacientů majících gonadální dysgenesi.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou také užitečné při terapeutickém ošetřování hormonálně podmíněného karcinomy.prsu a dělohy, pokud jsou podávány v účinném množství. Výrazem terapeutické ošetřování hormonálně podmíněného karcinom^ prsu a dělohy se zde vždy míní ovlňování proti existenci nebo růstu včetně profylaktického ošetření karcinomu, dělohy a prsu savců. Výrazem účinné množství se zde vždy míní dávka účinné látky dostatečná k dosažení profylaktického nebo terapeutického ošetřování karcinoma prsu a dělohy.

Výrazem hormonálně podmíněný karcinoma se obecně míní druh o ' takových karcinomy, jejichž růst Je ovlivňován jakýmkoliv způsobem přítomností, nepřítomností, nadbytkem nebo nedostatkem hormonů savců. Takové hormony zahrnují estrogen a prolaktin, při9 čemž tento výčet není míněn jako nějaké omezení.

Benzotb]thiofeny obecného vzorce I jsou řadou nesteroid£4{nich sloučenin, které vykazují silnou afinitu pro konvenční estrogenové receptory v primárních sexuálních cílových tkáních. Vyvozují však minimální estrogenní odezvy ve tkáních, a skutečně slouží jako potenciální antagonisty přírodních estrogenů, jako estradiolu. Na rozdíl od jiných strukturálně odlišných antiestrogenových sloučenin jsou benzothiofeny obecného vzorce I schopny antagonizovat klasické estrogenní odezvy v primárních sexuálních cílových tkáních za vyvolání estrogenní odezvy na hustotu kostí a hladiny chlolesterolu v seru. Tato dichotomie naznačuje selektivní agonist/antagonistové působení na specifické cílové buňky, což je vysoce žádoucí pro předcházení ztráty kostní hmoty a pro ošetřování hypercholesterolemie. Proto je primárním přínosem tohoto objevu skutečnost, že benzothiofeny obecného vzorce I inhibují ztrátu kostí a snižují hladiny cholesterolu v seru, nevyvolávají však význěmnější estrogenní odezvy v primárních sexuálních cílových tkáních. Proto se vynález týká způsobu inhibice ztráty kostí a snižování hladiny cholesterolu v seru, čehož se dosahuje podáváním lidem, kteří takové ošetření potřebují, takového množství sloučeniny obecného vzorce I, které inhibuje ztráty kostí a snižuje hladiny cholesterolu v seru, které však nevyvolává význěmnější estrogenní odezvy v primárních sexuálních cílových tkáních.

Výhodnými jsou podle vynálezu sloučeniny obecného vzorce I, kde znamená R² pyrrolidinoskupinu nebo piperidinoskupinu, R skupinu obecného vzorce -0S02-CCH2)nCH3, R¹ atom fluoru nebo chloru nebo skupinu obecného vzorce -OSO2-CCH2)nCH3, každé n vždy na sobě nezávisle 3, 4 nebo 5 a jejich farmaceuticky vhodné adiční soli s kyselinou nebo solváty.

Obzvláště výhodnými jsou podle vynálezu sloučeniny obecného vzorce I, kde znamená R² piperidinoskupinu, R skupinu obecného vzorce -OSOz-<CH2)nCH3, R¹skupinu obecného vzorce -OSO2-ÍCIfe )nCH3, každé n vždy na sobě nezávisle 3* nebo 4 a jejich farmaceuticky vhodné adiční soli s kyselinou nebo solváty.

Jak shora uvedeno, týká se vynález také farmaceuticky vhod10 ných solí sloučenin obecného vzorce I- Sloučeniny obecného vzorce I mohou reagovat s různými anorganickými zásadami a s anorganickými nebo organickými kyselinami pro přípravu farmaceuticky vhodných solí.

Jakožto příklady farmaceuticky vhodných minerálních kyselin, použitelných pro přípravu farmaceuticky vhodných solí. se uvádějí příkladně kyselina chlorovodíková, bromovodíková, jodovodíková, fosforečná a sírová- Jakožto příklady farmaceuticky vhodných organických kyselin, kterých lze použít pro přípravu farmaceuticky vhodných solí, se uvádějí kyselina p-toluensulfonová, methansulfonová, Stavelová, p-bromfenylsulfonová, karboxylová, jantarová, citrónová, bezoová a octová kyselina.

Jakožto takové farmaceuticky vhodné soli, připravené za použití minerálních nebo organických kyselin, se uvádějí příkladně sulfát, pyrosulfát, hydrogensulfát, sulfit, hydrogensulfit, fosfát, monohydrogensofát, dihydrogenfosfát, metafosfát, pyrofosfát, chlorid, bromid, jodid. acetát, propionát, dekanoát, kaprylát, akrylát, formát, isobutyrát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, malonát. sukeinát, suberát, sebekát, fumarát, maleát, butin-í,4-dioát, hexin-l,6-dioát, benzoát, chlorbenzoát, methylbenzoát, dinitrobenzoát, hydroxybenzoát, methoxybenzoát, ftalát, sulfonát, xylensulfonát, fenylacetát, feny1propionát, fenylbutyrát. citrát, laktát, gama-hydroxybutyrát, glýkolát, tartrát. methansulfonát. propansulfonát, naftalen-l-sulfonát, naftalen-2-sulfonát a mandelát. Výhodnými, farmaceuticky vhodnými adičními solemi s kyselinou, jsou soli s minerálními kyselinami, například s kyselinou chlorovodíkovou a bromovodíkovou a s organickými kyselinami, například s kyselinou citrónovou.

Adiční soli se zásadami se odvozují od netoxických anorganických zásad, jako jsou například amonium a hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhllčitany alkalických kovů a kovů alkalických zemin. Jakožto takové zásady, vhodné pro přípravu farmaceuticky vhodných solí, se příkladně uvádějí hydroxid sodný, draselný a amonný a uhličitan draselný. Obzvláště vhodnými jsou draselné a sodné soli.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I se mohou připravovat o sobě známými způsoby, které jsou například podrobně popsány v amerických patentových spisech číslo 4 133814 a 4 418068. Příklady přípravy analogických sloučenin jsou popsány ve shora uvedených amerických patentových spisech. Obecně se jako výchozích látek použitá benzotbjthiofenu s 6-hydroxylovou skupinou a s 2-<4-hydroxyfeny1)ovou skupinou. Výchozí sloučenina se chrání, alkyluje se a popřípadě se chránící skupina odstraňuje za získání sloučeniny obecného vzorce I. Dále se sloučenina obecného vzorce I může připravovat podle potřeby. Specifické způsoby přípravy sloučeniny obecného vzorce I jsou dále popsány. Může být potřebné přizpůsobení reaktivních funkčních skupin určitých substituentů. Takové modifikace jsou pracovníkům v oboru jasné a nepůsobí jim potíže.

Farmaceuticky vhodné adiční soli s kyselinou nebo se zásadou se zpravidla připravují reakcí sloučeniny obecného vzorce I s ekviraolárním množstvím nebo s nadbytkem kyseliny nebo zásady. Reakční složky se zpravidla nechávají reagovat v rozpouštědle pro obě složky, jako je například diethylether nebo benzen. Soli se zpravidla z roztoku vysráží v průběhu jedné hodiny až deseti dnů a mohou se izolovat odfiltrováním nebo se rozpouštědlo může odehnat o sobě známými způsoby.

Kromě toho mohou sloučeniny obecného vzorce I vytvářet solváty s vodou nebo s organickými rozpouštědly, jako je například ethanol. Takových solvátů se podle vynálezu může rovněž používat.

Následující příklady praktického provedení blíže objasňují sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu a způsoby jejich přípravy. Tyto příklady však vynález nijak neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava C6-<n-butylsulfonoy1)-2-[4-<n-butylsulfonoy1)feny1]benzo [ b] th i en-3 -y 1 ] [ 4- C 2- < 1 -p i per i d i ríy1)ethoxy1feny1]methanonu

Suspenduje se 5,1 g <10 mmol) £6-hydroxy-2-<4-hydroxyfenyl)benzoEb]thien-3-yl]£4-£2-<l-piperidiny1>ethoxyjfenyllmethanonhyd12 rochlorldu ve 250 ml suchého tetrahydrofuranu a přidá se 7,1 g o

<70 mmol) triethylaminu. Reakční směs se ochladí na teplotu 0 C v ledové lázni a přidá se 10 mg dimethylamlnopyrldinu <DMAP). Pomalu se přidá 4,7 g <30 mmol) n-butylsulfonoylchloridu. Reakční směs se vnese do prostředí dusíku a nechává se pomalu ohřát na teplotu místnosti a ponechává se reagovat po dobu 72 hodin. Reakční směs se zfiltruie a odpaří se za získání oleje. Olejovitý zbytek se rozpustí v chloroformu a chromatografu-Je se na silikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem od chloroformu až ke směsi chloroformu a methanoiu <19 : 1, objem : objem). Žádané frakce se spojí a odpaří se k suchu, čímž se získá 5.60 g 16-< n-buty1 su 1 fonoy1)-2-14-< n-buty1su1fonoy1)feny1]benzolblthien3-ylll4-12-<l-piperidinyl)ethoxy]feny11methanonu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku.

C36H43N08S3

MS <FD) m/e - 714 <M ♦ 1)

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 2

Příprava [6-<n-buty1sulfonoy1)-2-14-<n-buty1su1fonoy1)feny1]benzol blth i en-3-y 11 14-12-<l-piperidiny1)ethoxylfenyllmethanonhydrochloridu

Rozpustí se 5,4 g 16-<n-butylsulfonoy1)-2-14-<n-buty1sulfonoyl) feny11 benzolblthien -3- ylJ14-l2-<l- piperidinyl)ethoxy]feny 11methanonu v ethylacetátu <EtOAc) a přidává se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem tak dlouho, až se již více nevytváří sraženina. Kapalina se dekantuje a pevná látka se trituruje s etherem. Získaný t6-<n-butylsulfonoy1)-2-t4-<n-butylsulfonoyl)fenyl]benzolblthien- 3- yllt4-t2-<l-piperidinyl)ethoxylfenyl3methanonhydrochlorid se překrystaluje z horkého ethylacetátu za získání 3,74 g produktu ve formě bílého prášku.

Analýza pro C₃6H<43N0eS₃-HCl vypočteno: C 57,70 H 5.88 N 1,87 nalezeno: C 57,75 H 5.93 N 1,93

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 3

Příprava !6-<n-pentylsulfonoy1)-2-14-<n-pentylsulfonoy1)feny11benzolblthien-3-y1114-12-<1-piperidiny1lethoxy]feny1Imethanonu

Suspendují se 3 g <5,9 mmol) 16-hydroxy-2~<4-hydroxyfeny1)benzolblth i en-3-y1114-[2-<l-pi per i d i ny11ethoxy1feny11methanonhydrochloridu ve 1OO tul tetrahydrofuranu a přidá se 10 mg dimethylaminopyridinu <DMAP) a 3 g <30 mmol) triethylaminu. Reakčni směs se míchá při teplotě místnosti a v prostředí dusíku po dobu přibližně 20 minut. Pomalu se přidá 2,5 g <14,7 mmol) n-pentylsulfonoy Ichloridu, rozpuštěného ve 25 ml tetrahydrofuranu- Reakčni směs se nechává reagovat po dobu 18 hodin. Reakčni směs se zfiltruje a těkavé podíly se odstraní odpařením ve vakuu. Získaný materiál se rozpustí v malém množství cholroformu a chromatografuje se <HPLC) na siIikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem vycházejícím z chloroformu až ke směsi chloroformu a methanolu <19 =1, objem · objem). Žádané frakce se stanovují chromatograf lí v tenké vrstvě <TLC), spojí se a odpaří se k suchu, čímž se získá 3,82 g 16-<n-pentylsulfonoy1)-2-14-<n-pentylsulfonoy1)feny11 benzolblthien-3-y1114-12-<l-piperidiny1)ethoxy]fenyllmethanonu ve formě hustého olejeNMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS <FD) m/e - 743 <M + 2)

Analýza pro C38H47NO8S3 vypočteno: C 61,51 H 6,39 N 1,89 nalezeno: C 57,63 H 6,44 N 1,50

Příklad 4

Příprava 16-<n-penty1lsulfonoyl)-2-14-<n-pentylsulfonoyl)fenyllbenzotblthien-3-yll14-12-<1-piperidinyDethoxylfenyllmethanonhydroch1ořidu

Rozpustí se 3,7 g 16-<n-pentylsulfonoy1>-2-14-<n-pentylsulfonoy l)feny 13 benzolblthien-3-y11l4-12-<1-piperidinyDethoxylfeny1114 methanonu ve 25 ml ethylacetátu <EtOAc) a přidává se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem. Vytvoří se sraženina. Kapalina se dekantuje a kaučukovitá pevná látka se trituruje s etherem a vysuší se ve vakuu při teplotě místnosti, čímž se získá 2,12 g 16<n-pentylsulfonoy1)- 2-14-<n-pentylsulfonoyl)fenylJbenzotb3thien3-yl314-12-<l-pi per i d i ny1)ethoxy1feny11methanonhydroch1oř i du ve formě amorfní hygroskopické pevné látky.

Analýza pro C3eH<7NQeS3 HC1 vypočtena = C 58.63 H 6,22 Μ 1,80 nalezeno¹ C 57.35 H 6,45 M 1,38

NMR Je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 5

Příprava £6-<n-hexylsulfonoy1)-2-14-<n-hexylsulfonoy1)fenyl3benzol blthien-3-yll14-12-<l-piperidiny1)ethoxy3fenyUmethanonu

Suspendují se 3 g <5,9 mmol) [6-hydroxy-2-<4-hydroxyfeny1)benzolblthien-3-yll14-12-<l-piperidiny1)ethoxy]feny13methanonhydrochloridu ve 250 ml tetráhydrofuranu a přidá se 10 mg dimethylaminopyridinu CDMAP). Přidají se 4 g <40 mmol) triethylaminu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti a v prostředí dusíku po dobu přibližně 20 minut. Pomalu se přidá 3,6 g <19,6 mmol) n-hexylsulfonoylcloridu. rozpuštěného ve 25 ml tetráhydrofuranu. Reakční směs se nechává reagovat při teplotě místnosti a v prostředí dusíku po dobu tří dnů. Reakční směs se odpaří ve vakuu a znova se suspenduje v ethylacetátu a promyje se vodou. Organická vrstva se vysuší filtrací přes bezvodý síran sodný a odpaří se za získání žlutého oleje. Olej se rozpustí v chloroformu a chromatograf u Je se <HPLC) na silikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem vycházejícím z chloroformu až ke směsi chloroformu a methanolu <19 : 1. objem objem). Žádané frakce se stanovují chromatografií v tenké vrstvě <TLC), spojí se a odpaří se k suchu, čímž se získá 3,14 g 16-<n-hexylsulfonoyl)-2-I4-<n-hexylsul* fonoy1)feny13 benzolblthien- 3- yl314-12-<l-piperidiny1)ethoxy3feny13methanonu ve formě hustého oleje.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS <FD) m/e - 771 <M + 2)

Analýza pro C40H51NO8S3 vypočteno¹ C 62.39 H 6,68 N 1,82 nalezeno: C 62.33 H 6.62 N 2.03

Příklad 6

Příprava E6-<n-hexylsulfonoyl)-2-E4-<n-hexylsulfonoyl)feny13 benzo Eb3 thi en-3-yl3E4-E2-Cl-pi per i d i ny1)ethoxy1f eny13 methanonhydrochloridu

Rozpustí se 3 g E6-<n-hexylsulfonoy1>-2-E4-<n-hexylsulfonoy 1 )feny 11 benzolblthien-3-y 11 E4-E2-<1-piperidinyl )ethoxy3 feny13 methanonu ve 20 ml ethylacetátu <EtOAc) a přidává se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem. Nevytvoří se sraženina. Reakční směs se odpaří za získání hustého oleje a trituruje se několikrát s etherem a vysuší se ve vakuu při teplotě místnosti, čímž se získá 1,64 g [6-Cn-hexylsulfonoy1)-2-E4-Cn-hexylsulfonoy1)feny13 benzo E b3 th i en-3-y13 E 4-E 2-<1-p i per i d i ny 1) ethoxy 3 f eny 13 methanonhydrochloridu ve formě amorfního hygroskopického prášku.

Analýza pro C4oHsiN0eS3 HC1 vypočteno: C 59,67 H 6,50 N 1,74 nalezeno: C 59,47 H 6,59 N 1,77

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 7

Příprava £6-<n-butylsulfonoy1)-2-E4-<n-butylsulfonoy1)feny13benzo E b3 th ien-3-y13 E4-E 2-<1-pi per i d i ny1)ethoxy 3 feny13 methanonc i trátu

Rozpustí se 2 g <2,8 mmol) E6-<n-butylsulfonoyl)-2-E4-Cn-butylsulfonoy1)feny13 benzoEb3 thien-3-yl3 E4-E2-<1- piperidinyl)ethoxy3feny13methanonu ve 200 ml acetonu a přidá se 0,63 g <3 mmol) kyseliny ctové. Reakční směs se ponechá při teplotě místnosti a v prostředí dusíku po dobu 18 hodin. Reakční směs se odpaří ve vakuu při teplotě 50 C. Reakční směs se několikrát trituruje s etherem a vysuší se při teplotě místnosti ve vakuu, čímž se získá 16-<n-butylsulfonoyl)-2-t4-<n-butylsulfonoyl)fenyllbenzotb3thien-3-yl314-12-<l-pi per i d i ny 1)ethoxy]feny13methanonc i trá t ve formě bílého amorfního a hygroskopického prážku.

Analýza vypočteno: C 55.68 H 5.67 N 1,55 nalezeno: C 55,39 H 5,60 N 1,60

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 8

Příprava 16-<n-butylsulfonoy1)-2-14-<n-butylsulfonoy1)feny13 benzo 1 bl t h i en-3 -y 1314-13 - < 1 -p i per i d i ny1)propy1oxy3feny13methanonu

Rozpustí se 2,5 g <4,77 mmol) 16-hydroxy-2-<4-hydroxyfenyl)benzoí bJ th i en-3-y13 1 4-C 3-<1-piperi d i ny 1)propyloxy3feny11methanonhydřochloridu ve 100 ml tetrahydrofuranu a přidá se 3,9 g <39 mmol) triethylaminu a 10 mg dimethylaminopyridinu <DMAP).Reakční směs se míchá po dobu 15 minut při teplotě místnosti v prostředí dusíku.Pomalu se přidají 4 g <25,5 mmol) n-butylsulfonoylchloridu v 15 ml tetrahydrofuranu- Reakční směs se nechává reagovat při teplotě místnosti a v prostředí dusíku po dobu 18 hodin.Reakce se ukončí přidáním 25 ml methanolu a směs se odpaří ve vakuu. Surový produkt se chromatografuje na si1ikagelovém sloupci za eluování systémem chloroform/methanol <19 1, objem : objem). Žádané frakce se zjištují chromatografií v tenké vrstvě TLC, spojí se a odpaří se, čímž se získá 16-<n-butylsulfonoyl)-2-14-<n-butylsulfonoy1)feny13 benzolb]thien- 3-y1314-13-<1-piperidiny1)propyloxy3 feny13methanonu ve formě oleje.

Příklad 9

Příprava 16-<n-butylsulfonoy1)-2-14-<n-butylsulfonoyl)feny11 benzol blthien-3-y 13 14-13-<l-piperidiny1)propyloxylfenyllmethanonhydrochloridu

Rozpustí se 16-<n-butylsulfonoy1)-2-14-<n-butylsulfonoyl)feny13 benzolblthien -3- y13l4-13-<l-piperidinyl)propyloxy3 feny13 methanonu v systému ethy3acetát/hexan a směsí se probublává plyn17 ný chlorovodík. Reakční směs se odpaří a chromatografuje se <HPLC) na si 1 ikage1ovém sloupci za eluování chloroformem a pak systémem chloroform/methanol <19 j 1, oblém : oblém). Žádané frakce se zjištují chromatografií v tenké vrstvě TLC, spoií se a odpaří se, čímž se získá 2.50 g í6-<n-butylsulfonoyl)-2-t4-<n-butylsulfonoy1)f eny 13 benzot bl thien- 3- y 11[4-[3-<l-piperídinyl)pro~ pyloxylfenyllraethanonhydrochloridu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku.

NMR 1e konsistentní s navrženou strukturou.

MS: <FD) m/e - 728 <M-HC1)

Analýza pro C37H46NO8S3-HC1 vypočteno: C 58,14 H 6,07 N 1,83 nalezeno: C 57,90 H 6,05 N 1,82

Příklad 10

Příprava [6-Cn-butylsulfonoy1)-2-[4-<n-butylsulfonoy1)feny13benzo t b3 th i en-3-y13 14-[2-<1 -pyrro 1 i d i ny 1) ethoxy 3 f eny 13 methanonu

Suspendule se 1,5 g <3 mmol) [6-hydroxy-2-C4-hydroxyfeny 1 )benzol bl thien- 3- y 13 14-[2-<l-pyrrol idiny 1)ethoxy3 f eny 13methanonhydrochloridu ve 200 ml tetrahydrof uranu. Přidá se 1,5 g <15 mmol) triethylaminu a 10 mg 4-N,N-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se míchá po dobu několika minut v prostředí dusíku. Rozpustí se 1,56 g <1O mmol) n-butylsulfonoylchlorídu v 50 ml tetrahydrofuranu a pomalu se přidá do reakční směsi v průběhu 20 minut. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin v prostředí dusíku. Reakční směs se odpaří ve vakuu za získání kaučukovitého produktu. Kaučukovítý produkt se suspenduje ve 100 ml ethylacetátu a promyje se roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak vodou. Organická vrstva se vysuší filtrací přes bezvodý síran sodný a odpaří se za získání žlutého oleje. Konečný produkt se překrystaluje z horkého systému ethylacetát/hexan, čímž se získá 410 mg [ 6-< n-buty lsulf onoy 1 )-2-[4-<n-buty lsulf onoy 1 )f eny 13 benzot bl thien*

3-yl3 í4-[2-<l-ppyrrolidiny1)ethoxy]fenyl]methanonu.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS <FD) m/e - 700 <M + 1)

Analýza pro CssH^iNOsS vypočteno¹ C 60.20 H 5.86 N 2.01 nalezeno: C 59,94 H 5.94 N 2.00

Příklad 11

Příprava [6-<n-butylsulfonoyl)-2-[4-<n-butylsulfonoy1)feny13benzol blthien-3-y11[4-12-<1-pyrrolidlny1)ethoxy3 feny11 methanonhydrochloridu

Rozpustí se 350 mg <0,5 mmol) t6-<n-butylsulfonoyl)-2-[4-nbutylsulfonoyl) fenyllbenzotb]thien -3-yl3C4-[2-<1-pyrrolidinyl)ethoxylfenylimethanonu v 10 ml ethylacetátu <EtOAc) a přidává se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem- Nevytváří se žádná sraženina a reakční směs se odpaří za získání kaučukovité bílé látky. Produkt se <dvakrát) trituruje s etherem a vysuší se ve vakuu při teplotě místnosti, čímž se získá 220 mg C6-<n-butylsulfonoy1)-2[4-<n-butylsulfonoyl)feny1]benzolb]thien- 3-yl][4-C2-C1-pyrrolidiny 1) ethoxy]feny13 methanonhydroch1oř i duNMR ie konsistentní s navrženou strukturou.

Analýza pro C35H41NO8S HC1 vypočteno: C 57.09 H 5,75 N 1,90 nalezeno: C 57,27 H 5,91 N 1,86 molekulová hmotnost 736,37

Příklad 12

Příprava [6-hydroxy-2-[4-<n-butylsulfonoy1)feny13 benzolb]thien-3yl][4-[2-<l-pi per i d i ny1)ethoxy]feny13 methanonu

Suspenduje se 20 g <0,04 mmol) [6-hydroxy-2-<4-hydroxyfenyl>benzotb3thien-3-y13 t4-C2-<l-piperidinyl)ethoxy3fenyl]methanon<Raloxifen)hydrochloridu ve 250 ml tetrahydrofuranu. Přidá se 10 g <0,1 mol) triethylaminu a 10 mg 4-N,N-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se míchá po dobu někalika minut v prostředí dusíku. Rozpustí se &,25 g <0,04 mol) n-butylsulfonoylchloridu v 25 ml tetrahydrofuranu a pomalu se přidá do reakční směsi v průběhu 20 minut. Reakční směs se nechává reagovat při teplotě místnosti po dobu pěti dnů v prostředí dusíku. Reakční směs se odpaří ve vakuu za získání kaučukovitého produktu- Kaučukovítý produkt se suspenduje ve ethylacetátu a promyje se postupně vodou, zředěným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak vodou. Organická vrstva se vysuší filtrací přes bezvodý síran sodný a odpaří se za získání amorfní pevné látkyZískaná pevná látka se rozpustí v 50 ml methylenchloridu a chromatografuJe se (HPLO na si1ikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem od chloroformu až ke směsi chloroformu a methanolu (19 : 1, objem : objem). Čtyři frakce se identifikují chromatografií v tenké vrstvě (TLC) a odpaří se ve vakuu,čímž se získají amorfní pevné látky:

Frakce A: [6-(n-butyIsulfonoy1)-2-C4-(n-butylsulfonoy1)fenyl1 benzol bJthien-3-y11[4-[2-(1- piperidiny1)ethoxylfenyllmethanon, 5,43 g

Frakce B = C6-hydroxy-2-C4- (n-butylsulfonoyl)fenyllbenzoCblthien3-yll[4-C2-(l-piperidinyl)ethoxy]fenyllmethanon, 2,19 g Rf = 0,50, silikagel, chloroform - methanol (19 · 1) objem/objem

Frakce C= [6-(n-butylsulfony1)-2-(4-hydroxyfeny1)benzo[b]thien-3yll[4-í2-(l-piperidinyl)ethoxylfenyllmethanon, 3,60 g, Rf = , 0,41, silikagel, chloroform - methanol (19 1) objem/objem

Frakce D = Raloxifen, 3,94 g

Celá frakce B se rozpustí v horkém ethylacetátu a přidá se hexan a krystalizaci se získá 1,89 g [6-hydroxy-2-[4-(n-butylsulfonoy 1)feny11benzofblthien- 3- y1][4-t2-(1-piperidiny1)ethoxylfeny11methanonuNMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS (FĎ) m/e = 594 (Μ * 1) Analýza pro C32H35NO6S2 vypočteno: C 64,80 H 5,90 nalezeno: c 64,85 H 6,07

N 2,36 N 2,49

Příklad 13

Příprava 16-hydroxy-2-14-<n-butylsulfonoy1)feny1]benzotb)thien-3y1114-12-<1-piperidiny1)ethoxy]feny13methanonhydrochlorldu

Rozpustí se 1,7 g <2,36 mmol) 16-hydroxy-2-14-<n-butylsulfonoyl)fenyl3benzotb]thien-3-yl]14-12-<l-piperidlnyl)ethoxy]fenyl] methanonu v ethylacetátu <EtOAc) a přidává se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem. Vytváří se hustá bílá sraženina- Kapalina se dekantuje. Zbylá pevná látka se <dvakrát) trituruje s etherem a vysuší se. čímž se získá 1.57 g 16-hydroxy~2-14-<n-butylsulfonoy1)fenyl]benzolb]thien-3-yl]14-12-<l-piperidiny1)ethoxy]feny1]methanonhydrochlorldu ve formě bílého amorfního prášku.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS <FD) m/e - 594 <M + 1)

Analýza pro C32H35NO6S2 HC1 vypočteno: C 60,99 H 5,76 N 2,22 nalezeno: C 61,17 H 5.88 N 2.27 molekulová hmotnost 630,23

Příklad 14

Příprava 16-< n-buty1su1fonoy1)-2-14-hydroxyfeny1]benzolb]-th i en3-yl3l4-C2-<l-piperidinyl)ethoxy]feny13methanonu

Rozpustí se celá frakce C podle příkladu 17 v 50 ml horkého ethylacetátu a hexanu. Nedojde k žádné krystalizací. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, čímž se získá 3,17 g 16-<n-butylsulfonoy1)-214-hydroxyfenyl]benzolb]thien-3-y1314-12- <l-piperidinyl>ethoxy]fenyl3methanonu ve formě olejovíté bílé pevné látky.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS <FD) m/e - 594 <M + 1)

Analýza pro C32H35NO6S2 vypočteno: C 64,80 H 5,90 N 2,36 nalezeno: C 64,37 H 5,87 N 2,28 molekulová hmotnost 593

Příklad 15

Příprava 16-(n-butylsulfonoyl)-2-14-hydroxyfenyl]benzotblthien3 -y 11 1 4-1 2-(1-píper i d i ny 1) ethoxy3feny11methanonhydroch1oř i du

Rozpustí se 3 g 16-(n-butyIsulfonoyl)-2-14-hydroxyfeny13 benzolb]thien -3 - yl]t4-l2-(l-piperidiny1)ethoxy3feny1]methananu v 50 ml ethylacetátu a přidá se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem. Vytváří se hustá bílá sraženina. Kapalina se dekantuje. Zbylá pevná látka se (dvakrát) trituruje s etherem a vysuší se, čímž se získá 2,51 g 16-Cn-butyIsulfonoy1)-2-14hydroxyfeny1]benzol b]thien-3-y1114-12- (1-piperidiny1)ethoxy]feny1]methanonhydrochloridu ve formě bílého amorfního prášku.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

MS (FD) ra/e - 594 (M-HC1)

Analýza pro C32H35NO6S2 - HC1 vypočteno: c 60,99 H 5,76 N 2,22 nalezeno: C 60,71 H 5,84 N 2,21 molekulová hmotnost 630,23

Příklad 16

Příprava 16-tN-(4-chlorfeny1)karbamoyl]-2-14-lN-(4-chlorfeny1)karbamoy 1 ] f eny 1 ] benzol b3 th i en-3-y1314-12-(1-p i per i d i ny 1)ethoxy 3 f eny13 methanonu

Rozpustí se 5,56 g (10,7 mmol) 16-hydroxy-2-(4-hydroxyfeny 1)benzo tb3thien-3-y1314- 12-(1- p iper i d i ny1)ethoxy 3 f eny13 methanonu ve 200 ml suchého tetrahydrofuranu a přidá se 5,45 g (35,2 mmol) 4-chlorfeny1isokyanátu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku. Po 18 hodinách se rozpouštědlo odstraní odpařením ve vakuu a zbytek se znova rozpustí v chloroformu. Chloroformový roztok se ochladí na teplotu -20 C na 24 hodiny a pak se vytvořená sraženina odfiltruje. Zbylá roztok se chromatograf u je (Vaters Prep 500, HPLC) na si1ikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem vycházejícím z chloroformu a končícím systémem chloroform/methanol * (19 = 1, objem/objera). Žádané frakce se zjišťují chromatografií v tenké vrstvě (TLC), spojí se a odpaří se k suchu, čímž se získá 4,01 g 16- tN-(4-chlorfenyl>22 karbamoy13-2-14-1 N-<4-chlorf eny1)karbamoy13 f eny13 benzolblthien-3yl314-t2-(l-piperidinyl)ethoxy3fenyl3methanonu ve formě tříslově zabarveného amorfního práškuMS CFD) m/e - 779,78

Analýza pro C42H35CI2N3O6S vypočteno: C 64,60 H 4,48 N 5,38 nalezeno: C 65,69 H 4,81 N 4.83

Příklad 17

Příprava 16-1N-<4-chlorfenyl)karbamoy13-2-14-1N-<4-chlorfeny1)karbamoy13 feny13 benzolb3thien-3-y1314-12-<l-piperidiny1)ethoxy3f eny13 methanonhydroch1ořidu

Rozpustí se 4,01 g 16-tN-<4-chlorfenyl>karbamoyl3-2-14-1N¢4-ch1orfeny1)karbamoy13 feny13 benzolb3 th i en-3-y1314-12-(1-p1per1diny1)ethoxy3feny13methanonu ve 200 ml etheru a přidá se malé množství tetrahydrofuranu k podpoře rozpuštění. Přidává se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem tak dlouho, dokud se vytváří sraženina. Reakční směs se odpaří k suchu a trituruje se několikrát s etherem. Provede se zkouška k vykrystalování soli z horkého ethylacetátu a z absolutního ethanolu. Odpařením rozpouštědla se získá 2.58 g 16-CN-C4-chlorfenyl)karbamoy13-2-14-tN-<4-chlorfenyl)karbamoy13 feny13benzotb3thien-3-y1314-12-Cl-piperidinyl)ethoxy3fenyl3methanonhydrochloridu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku. _t

Analýza pro C42H35CI2N3O6S HC1 vypočteno: C 61,73 H 4,44 N 5,14 nalezeno: C 57.43 H 4,29 N 4,19

NMR je konsistentní s navrženou strukturou za obsahu nestanoveného množství rozpouštědla.

Příklad 18

Příprava 16-<N-n-buty1karbamoy1)-27t4-CN-n-butylkarbamoyl)fenyl3benzotblthien-3-y1314-12-Cl-piperidiny1)ethoxy3feny13methanonu

Rozpustí se 4,47 g <9 mmol) 16-hydroxy-2-C4-hydroxyfeny1)23 benzoCb]thien-3-y13 C4-[2-<1-piperidiny1jethoxy3feny13methanonu ve 250 ml tetrahydrofuranu a přidají, se 4 g <40 mmol) n-buty1isokyanátu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku a nechává se reagovat po dobu 72 hodin. Reakční směs se odpaří a zbytek se rozpustí v minimálním množství chloroformu. Získaný roztok se chromatografuje <HPLC> na si1ikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem od chloroformu k systému chloroform/methanol <19 ^: 1), čímž se získá 4,87 g [6-<N-n-butylkarbamoy 1j-2-Γ4-<N-n-butylkarbamoy1>feny13 benzolb3 thien-3-y1314-12-<1piperidiny1jethoxy3 feny 13methanonu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku.

Analýza vypočteno: C 67,73 H 6,75 N 6,52 nalezeno: C 66,43 H 6,67 N 6,24

MS <FD> m/e - 672 <M + 1)

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 19

Příprava [6-<N-methylkarbamoy1}-2-[4-<N-methylkarbamoy1>feny13 benzo Cb3thien-3-yl314-t2-<l-pi per i d i ny1)ethoxy 3 feny13 methanonu

Připraví se suspenze 3 g <5,9 mmol) 16-hydroxy-2-<4-hydroxyfeny l)benzotb3thien-3-y 13 14-12-<l-piperidiny 1) ethoxy 3 feny 13 methanonhydrochloridu ve 250 ml bezvodého tetrahydrof uranu. Do této suspenze se přidají 2 g <10 mmol) triethylaminu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku po dobu přibližně 15 minut- Do míchané směsi se přidá 5,8 g <20 mmol) methylisokyanátu. Reakční směs se nechává reagovat po dobu 36 hodin. Reakční směs se zfiltruje a odpaří se k suchu ve vakuu- Zbytek se rozpustí v 30 ml chloroformu a chromatografuje se <HPLC) na silikagelovém sloupci za eluování lineárním gradientem od chloroformu k systému chloroform/methanol <19 ' 1). Frakce se analyzují chromatografií v tenké vrstvě <TLC> a bádané frakce se spojí a odpaří se ve vakuu k suchu, čímž se získá 2,2 g C6-<N-methylkarbamoyl>2-[4-<N-methylkarbamoy1)feny13 benzolb3thien-3-y13(4-C2-<l-piperi24 dinyl)ethoxy3fenyl]methanonu ve formě amorfního prášku.

C32H33N3 06S

IR: 3465, 2942, 1741 cm^-1 (chloroform)

MS (FD) m/e - 588 CM * 1)

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 20

Příprava [6-(N-methylkarbamoy1)-2-14-(N-methylkarbamoy1)fenyl3benzolbl th i en-3-yl]14-12-(1-pí per id1ny1)ethoxy]feny1]methanonhydrochloridu

Rozpustí se 20 g 16-(N-methylkarbamoyl)-2-t4-(N-methylkarbamoyl)feny13 benzolblthien-3-y1]14-12-Cl-piperidiny1)ethoxy3feny13methanonu ve 20 ml ethylacetátu a přidá se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem. Vytváří se bílá sraženina. Reakční směs se odpaří ve vakuu. Pevná látka se překrystaluje ze systému aceton/ ethylacetát, zfiltruje se, promyje se ethylacetátem a vysuší se čímž se získá 1,98 g 16-(N-methylkarbamoy1)-2-14-(N-methylkarbamoy1)feny1]benzo tblthien-3-yl314-t2-<l-plper1d1ny1)ethoxy1feny13methanonhydroch1or1du

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Analýza pro C32H34CIN3O6S vypočteno: C 61,58 H 5,49 N 6,73 nalezeno: C 61,25 H 5,96 N 5,97

Příklad 21

Příprava 16-(N-ethylkarbamoyl)-2-14-(N-ethylkarbamoyl)fenyl3benzo1b31hlen-3-y1314-12-(1-píper idiny1)ethoxy 3 f eny13 methanonu

Připraví se suspenze 4 g (7,85 mmol) 16-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)benzotb3thlen-3-y1314-12-(l-piperldiny1)ethoxy3fenyl3methanonhydrochloridu ve 250 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Do této suspenze se přidají 3 g (30 mmol) triethylaminu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku po dobu přibližně 15 minut. Do míchané směsi se přidá 1,67 g (23,5 mmol) ethylisokyanátu. Reakční směs se nechává reagovat po dobu 24 hodin. Pro25 běhnutí reakce se zkouší chromatografií v tenké vrstvě <TLC) a jelikož není úplné, přidá se dalších 4,5 g isokyanátu. Po 96 hodinách se reakční směs zfiltruje a chromatografuje se jako podle příkladu 19, čímž se získá 4,23 g E6-<N-ethylkarbamoy1)-2-E4-<Nethy1karbamoy1) f eny1]benzoCblthien- 3-y13 E4-C 2-<1-piperidi ny 1)ethoxy 3feny11methanonu ve formě bílého amorfního prášku.

C34H37N3O6S

MS <FD) m/e - 616 <M + 1)

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 22

Př íprava E 6-< N-ethy1karbamoy1)-2-E 4-<N-ethy1karbamoy1) feny13benzo E b3 th i en-3-y13 £ 4-C 2-<1-p i per i d i ny 1) ethoxy 1 f eny 11 methanonhydrochloridu

E6-<N-ethylkarbamoy 1 )-2-E4-<N-ethy lkarbamoy 1 )fenyl3 benzoEb] th i en-3-y13 E 4-E 2-<1-p i per i d i ny1) ethoxy 3 f eny 13 methanonhydroch 1 oř i d se připravuje v podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 20 a získá se v množství 3,58 g.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Analýza pro C34H38CIN3O6S vypočteno: c 62,61 H 5,87 N 6,44 nalezeno-' C 62,33 H 6,16 N 6,41

Příklad 23

Příprava E 6-< N-isopropy1karbamoy1)-2-E 4-< N-i sopropy1karbamoy1) f eny 13 benzo E b3 th i en-3-y13 C 4-E 2-<1-p i per i di ny1) ethoxy 3 f eny 13 methanonu

Připraví se suspenze 4 g <7,85 mmol) E6-hydroxy-2-<4-hydroxy f eny 1 ) benzoE b3thien-3-yl3E4-E2-<l-pi per i d i ny1) ethoxy 3 f eny 13 met- . hanonhydrochloridu ve 250 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Do této suspenze se přidají 3 g <30 mmol) triethylaminu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku po dobu přibližně 15 minut. Do míchané směsi se přidá 2,77 g <32,6 mmol) isopropylisokyanátu- Reakční směs se nechává reagovat po dobu 24 hodin.

Proběhnutí reakce se zkouší chromatografií v tenké vrstvě <TLC) a jelikož není úplné, přidá se dalších 10,8 g <130,4 mmol) isokyanátu. Po 96 hodinách se produkt Izoluje v podstatě způsobem podle příkladu 19, čímž se získá 4,01 g E6-<N-isopropylkarbamoyl)-2-í4<N-isopropy1karbamoy1)feny13benzotblthlen-3-y13[4-C2-<l-piperldlnyl)ethoxy]feny13methanonu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku.

C36H41N3O6S

MS <FD) m/e - 644 <M + 1)

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 24

Příprava 16-<N-isopropy1karbamoy1)-2-[4-<N-isopropy1karbamoy1 )f enyl3 benzolblthlen- 3-yl](4- C2-<l-piperidinyl)ethoxylfenyllmethanonhydrochlorldu

16-< N-i sopropylkarbamoy1)-2-C 4-< N-isopropy1karbamoy1)feny13benzoC blthien-3-yllE4-[2-<l -pí per i d i ny 1 )ethoxy 3 f eny 13 methanonhydrochlorid se připravuje v podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 20 a získá se v množství 3,58 g ve formě bílého krystalického prášku.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Analýza pro C36H42CIN3O6S vypočteno: C 63.56 H 6,22 N 6,18 nalezeno: C 63,63 H 6,52 N 5,95

Příklad 25

Příprava C 6- < N-cyk1ohexy1karbamoyl)-2-[4-<N-cyklohexy1karbamoy1) f eny 13 benzotbl thieny1-3-y13 [4-(2-<l-plperidiny l )ethoxylfeny llmethanonu

Připraví se suspenze 3 g <5,9 mmol) C6-hydroxy-2-<4-hydroxyf eny 1 )benzotb3 thien-3-y 13 E4-C2-<l-piperidiny 1 )ethoxylfenyllmethanonhydrochloridu ve 250 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Do této suspenze se přidají 2 g <20 mmol) triethylaminu a reakční směs se

- 27 míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku po dobu přibližně 15 minut- Do míchané směsi se přidá 14,5 g <105 mmol) cyklohexylisokyanátu. Reakční směs se nechává reagovat po dobu 48 hodin a přidá se dalších 20 mmol isokyanátu. Po dalších 24 hodinách se produkt izoluje v podstatě způsobem podle příkladu 19, čímž se získá 4,07 g E6-CN-cyklohexylkarbamoy1)-2-E4-CN-cyklohexylkarbamoy 1 )feny13 benzolb]thieny1-3-y11[4-[2-<l-piperidiny1)ethoxylfeny1]methanonu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku.

C42H49N3O6S

MS CFD) m/e - 724 CM + 1)

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 26

Př í prava 16- < N -cy k 1 ohexy 1 karbamoy l)-2-E4-CN-cykl ohexy 1 karbamoy 1) feny 13 benzolblthieny1-3-y11E4-E2-Cl-piperidiny1)ethoxy3feny13methanonhydroch1oř i du

Převádí se 3,9 g t6-CN-cyklohexylkarbamoy1)-2-E4-CN-cyklohexy 1 karbamoy 1) f eny 13 benzo t b] th i eny l-3-yl3E4-E2-<l-pi per i d i ny 1) ethoxy3feny13methanonu na svoji hydrách1ořidovou sůl v podstatě způsobem podle příkladu 20 a surový produkt se překrystaluje z horkého ethylacetátu. Získají se 3 g 16-CN-cyklohexy lkarbamoy 1) -2t4-CN-cyklohexy 1 karbamoy 1 )f eny 13 benzof b] thieny 1 -3~y 13 E4-E2-C1 -pi peridinyl) ethoxy] fenyllmethanonhydrochloridu ve formě bílého prášku.

NMR je konsistentní s navrženou strukturou.

Analýza pro C42H50CIN3O6S vypočtena: C 66,34 H 6,63 N 5,53 na1ezeno- C 66,32 H 6,92 N 5,62

Příklad 27

Příprava E6-CN-fenylkarbamoy1)-2-E4-CN-fenylkarbamoy1)fenyl3benzo E b 3 th i en-3-y13E4-E2-Cl-pi per i d i ny1)ethoxy 3 f eny13 methanonu

Připraví se suspenze 3 g <5,9 mmol) E6-hydroxy-2-C4-hydro28 xyfeny 1 )benzol blthien-3-y13 C4-[2-<1 -piperIdiny 1)ethoxy 1 f eny 11 methanonhydrochloridu ve 250 ml bezvodého tetrahydrof uranu. Do této suspenze se přidají 2 g <20 mmol) triethylaminu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti v prostředí dusíku podobu přibližně 15 minut. Do míchané směsi se přidá 15 ml fenylisokyanátu. Reakční směs se nechává reagovat po dobu 96 hodin a přidá se dalších 5 ml isokyanátu- Po dalších 48 hodinách se reakční směs zfiltruje a odpaří se za získání oleje. Olej se trituruje s heptanem a kapalina se dekantuje. Olej se rozpustí ve chloroformu a chromatograf u Je se <HPLC) na si 1 ikage1ovém sloupci za eluování lineárním gradientem, vycházejícím od chloroformu po systém chloroform/methanol <19 = 1). Žádané frakce se spojí a odpaří se za získání 3,31 g [6-< N-f enylkarbamoyl)-2-[4-CN-f eny1karbamoy1)feny11benzotblthien-3-y1114-C2-< 1-piperidiny 1 )ethoxy]fenyUmethanonu ve formě oleje.

C42H37N3O6S

MS <FD) m/e - 711 a něco 212 <difenylmočovina)

NMR Je konsistentní s navrženou strukturou.

Příklad 28

Příprava 16-<N-feny1karbamoy1)-2-[4-<N-feny11karbamoy1)feny11benzotblthien- 3-yl]E4- C2-<l-piperidiny1)ethoxy]fenyllmethanonhydrochloridu

Rozpustí se 3,2 g t6-<N-fenylkarbamoy1)-2-t4-<N-fenylkarbamoy 1 )f eny 13 benzot bl thien-3-y 11 [4-C 2-<1-piper idiny 1 )ethoxylf eny 11 methanonu v ethylacetátu a zfiltruje se. Přidá se roztok etheru nasyceného chlorovodíkem. Vytváří se bílá sraženina. Kapalina se dekantuje. Pevná látka se rozpustí v malém množství acetonu, . zfiltruje se a odpaří se k suchu, čímž se získá 270 mg [6-<N-fenylkarbamoy 1)-2-[4-<N-f eny lkarbamoyl )f eny 11 benzot blthien-3-y 1] E4C2-<l-piperidinyl)ethoxy1feny1jmethanonhydrochlořidu ve formě tříslově zabarveného amorfního prášku.

Analýza pro C42H38CIN3O6S vypočteno: C 67,42 H 5,12 N 5,62 nalezeno: C 67,51 H 5,37 N 5,50

V podstatě shora popsanými způsoby může pracovník v oboru připravovat sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I.

Jak shora uvedeno. Jsou sloučeniny podle vynálezu užitečné pro inhibici ztráty kostní hmoty, ke snižováni hladiny cholesterolu v seru a pro ošetřování na hormonech závislých karcinoma prsu a dělohy savců. Vynález se proto také týká způsobu inhibice ztráty kostní hmoty, snižování hladiny cholesterolu v krvi a ošetřování na hormonu závislého karcinoma prsu a dělohy podáváním savcům, kteří potřebují ošetření pro inhibici ztráty kostní hmoty, ke snižováni hladiny cholesterolu v seru a pro ošetřování na hormonech závislých karcinoma prsu a dělohy savců, účinného množství sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I nebo Její farmaceuticky vhodné soli nebo solvátu.

Výrazem farmaceuticky účinné množství se zde vždy míní množství sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu, které Je schopné inhibovat ztrátu kostní hmoty, snižovat hladinu cholesterolu v seru nebo inhibovat hormonálně závislou rakovinu prsu nebo dělohy. Způsob zahrnuje lékařské terapeutické a/nebo profylaktické ošetřování. Určitou dávku podávané sloučeniny obecného vzorce I v souhlase s lékařským terapeutickým a/nebo profylaktickým ošetřováním stanovuje ostatně lékař se zřetelem na okolnosti ošetřovaného případu, Jako Jsou určitá podávaná sloučenina, cesta podání, ošetřovaný stav a podobné skutečnosti. Zpravidla Je denní dávka účinné látky přibližně 0,1 až přibližně 1000 mg/kg tělesné hmotnosti podávaná buď samostatně nebo ve směsi s estrogenem nebo spolu s estrogenem. Výhodnou Je denní dávka přibližně 0,5 až 600 mg/kg a především přibližně 1,0 až přibližně 300 mg/kg. Obecně se za vhodnou a účinnou považuje denní dávka estrogenu přibližně 0,01 až 4,0 mg a především přibližně 0,1 až přibližně 2,0 mg.

Ošetřování způsobem podle vynálezu Je vhodné pro muže i ženy. V podstatě nepřítomnost estrogenní odezvy umožňuje můžům využívat způsobu podle vynálezu bez projevu feminizující odezvy estrogenu nebo estrogenových antagbnistů Jako gynecomastia- 5 vy30 važuje úbytek kostní hmoty se statistickým objemem kosti, například osteoporosa a Cushingova nemoc. K deficitu estrogenu může docházet přirozeně, například v období post_jnenopausy nebo chirurgicky. Nemocní s dlouhodobým ošetřováním probíhajícím nebo prodělaném podáváním kortikosteroidů a s gonadální dysgenesí mohou rovněž užívat sloučeniny podle vynálezu a farmaceutické prostředky, které je obsahují.

Sloučeniny nebo farmaceutické prostředky podle vynálezu se mohou podávat orálně a rektálně, transdermá1ně, subkutánně, intravenozně, intramuskulérně nebo intranasá1ně. Před podáním se sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I s výhodou zpracovávají na farmaceutické prostředky. Vynález se proto také týká farmaceutických prostředků, které obsahují farmaceuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli nebo solvátu samotných nebo ve směsi s estrogenem spolu s farmaceuticky vhodnými nosiči, ředidly nebo excipienty.

Účinná látka je v takových farmaceutických prostředcích obsažena ve hmotnostním množství přibližně 0,1 až 99,9 vztaženo na hmotnost farmaceutického prostředku jako celku. Výrazem farmaceuticky vhodný se míní ředidlo, nosič naebo excipient, které jsou kompatibilní s ostatními složkami a nemají nepříznivého vlivu na ošetřovaného jedince. _Λ tv

Farmaceutické prostředky podle vynálezu se připjavují o sobě známými způsoby za použití snadno dostupných složek. Pro výrobu farmaceutických prostředků se účinná látka obecného vzorce I podle vynálezu zpravidla mísí s nosiči nebo se ředí nosiči nebo se zapouzdřuje do nosiče, který může mít formu kapsla, sáčku, papírku nebo jiného obalu. Pokud nosič slouží jako ředidlo, může to být pevná, polopevná nebo kapalná látka, která působí jako nosič, excipient nebo prostředí pro účinnou látku. Farmaceutické prostředky mohou proto mít formu tablet, pilulek, prášků, kosočtverečků, sáčků, elixírů, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (jakožto pevné nebo kapalné prostředí), měkkých a tvrdých že latinových kapslí, čípků, sterilních vstřikovátelných roztoků a sterilních balených prášků. Jakožto typické farmaceutické pro31 středky pro místní nanášení se uvádějí masti, krémy, gely a lotiony obsahující například až hmotnostně 10 % účinné látky Následující příklady farmaceutických prostředků vynález toliko opět objasňují, nijak však neomezují. Účinnou látkou” se zde vždy míní sloučenina obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodná sůl nebo solvát.

Příklad farmaceutického prostředku 1

Tvrdé želatinové kapsle se připravují z následujících složek¹

Množství (mg/kapsle)

účinná látka	250
škrob, sušený	200
stearát hořečnatý	10
ce1kem	460

Uvedené složky se smísí a plní se do tvrdých želatinových kapslí v množství 460 mg.

Příklad farmaceutického prostředku 2

Tablety se připravují z následujících složek:

Množství <mg/tableta) účinná látka 250 celulóza, mikrokrystalická 400 oxid křemičitý, sublimovaný 10 kyselina stearová 5 celkem 605 mg

Uvedené složky se smísí a slisují se na tablety vždy o hmotnosti 665 mg.

Příklad farmaceutického prostředku 3

Aerosolový roztok se připravuje z následujících složek:

účinná látka ethano1

Hmotnost

0,25

25,75 hnací prostředek 22 (chlordif luorraethan) 70,00 celkem 100,00

Účinná látka se smísí s ethanolem a směs se vnese po do části hnacího prostředku 22 ochlazeného na teplotu -30 C a vše se převede do plnicího zařízení. Požadované množství se plňí do nádobek z nerezavějící ocele a zředí se zbytkem hnacího prostředku. Obal se opatří ventilem.

farmaceutického prostředku 4

Tablety, obsahující vždy 60 mg účinné látky, se připravují z následujících složek:

Množství (mg/tableta) účinná látka 60,0 škrob 45,0 celulóza, mikrokrystalická 35,0 polyvinylpyrrolidon (10¾ roztok ve vodě) 4,0 natriumkarboxymethy1ováný škrob 4,5 stearát hořečnatý 0,5 mastek 1.0 celkem 150,0

Účinná látka, škrob a celulóza se vedou sítem No.45 mesh U.S. (průměr ok 355 mikrometrů) a důkladně se promísí. Se získaným práškem se smísí roztok polyviny lpyrrol i donu a směs se vede sítem No- 14 mesh U.S. (průměr ok 1400 mikrometrů). Takto získané granule se suší při teplotě 50 C vedou sítem No-18 mesh U.S. (průměr ok 1000 mikrometrů). Natriumkarboxymethy1ováný škrob, stearát hořečnatý a mastek se vedou sítem No. 60 mesh U.S. (průměr ok 250 mikrometrů), přidají se do granulí, promísí se a směs se lisuje na tablety vždy o hmotností 150 mg.

Příklad farmaceutického prostředku 5

Kapsle, obsahující vždy 80 mg účinné látky, se připravují z následujících složek:

Množství (mg/kapsle)

účinná látka	30
škrob	59
mikrokrystalická celulóza	59
stearát hořečnatý	2
ce1kem	200

Účinná látka, škrob a stearát horečnatý se smísí, vedou se sítem No.45 mesh IJ-S. (průměr ok 355 mikrometrů) a plní se do tvrdých želatinových kapslí v množství vždy 200 mg.

Příklad farmaceutického prostředku 6

Čípky, obsahující vždy 225 mg účinné látky, se připravují z následujících složek:

Množství (mg) účinná látka 225 glyceridy nasycených mastných kyselin do 2000 ce1kem 2225

Účinná látka se vede sítem No.60 mesh U.S. (průměr ok 250 mikrometrů) a suspenduje se v glyceridech nasycených mastných kyselin, předem roztavených za použití minimálně nutného tepla. Směs se lije do formy na čípky o nominální kapacitě 2,0 g a nechá se ochladit.

Příklad farmaceutického prostředku 7

Suspenze, obsahující vždy 50 mg účinné látky připravuje z následujících složek:

účinná látka natr i umkarboxymethy1ce1u1óza sirup roztok kyseliny benzoové chutová přísada *

barv ivo čištěná voda do

Účinná látka se vede sítem No. 45 mesh U.S.

v 5,0 ml, se

50,00	mg
50,00	mg
1,25	ml
0,10	ml
q.V.
q.v.

5,0 ml (průměr ok 355 mikrometrů) a smísí se s natriurakarboxymethy1celulózou a se sirupem za vzniku hladké pasty. Přidá se za míchání roztok kyseliny benzoové, chutové přísady a barviva, zředěné trochou vody. Pak se přidá dostatečné množství vody k dosažení požadovaného objemu.

Farmaceutický prostředek 8

Intravenozní prostředek se připravuje z následujících složek¹ účinná látka 100 mg isotonická solanka 1000 ml

Shora uvedený roztok se podává intravenozně rychlostí 1 ml/min.

Následující hodnocení sloučenin pdole vynálezu se provádí na modelu post menopausální osteoporosy, přičemž se stanovuje působení různých ošetření na na hustotu distální stehenní kosti a na obsah cholesterolu v seru.

Hustota kosti

Samičky krysy Sprague Davley, staré 75 dní <o hmotnosti 225 až 275 g) se získají od organizace Charles River Laboratories (Portage, MI). Krysy se chovají v klecích po třech a mají nadbytek potravy podle libosti <za obsahu vápníku přibližně hmotnostně 1 %) a vody. Teplota v místnosti se udržuje 22,2 ± 1,7 C za minimální relativní vlhkosti vzduchu 40 Perioda osvitu je 12 hodiny světla a 12 hodin tmy.

Týden po příchodu se provede oboustranné odnětí vaječníků anestetizovanýra krysám <44 mg/kg Ketaminu a 5 mg/kg Xylazinu CButler, Indianopolis, INI podané intramuskulárně). S ošetřováním nosičem, estrogenem nebo sloučeninou obecného vzorce I se započne ve dni chirurgického zákroku po probrání z anestesie. Orální dávka se podává sondou v 0,5 ml 1^ karboxymethylcelulózy <CMC). Tělesná hmotnost se stanovuje ve dni chirurgického zákroku a za týden po něm a dávka se upravuje po*dle změn tělesné hmotnosti. Nosičem a estrogenem ošetřované krysy s odebranými vajčníky <0VX) a neodebranými vaječníky <nedotčené) se hodnotí paralelně s každou experimentální skupinou jakožto negativní a pozitivní kontrolaKrysy se ošetřují denně po dobu 35 dní <6 krys na ošetřovanou skupinu) a usmrtí se asfyxiací oxidem uhličitým 36.den. V některých případech se shromažďují kardiatické vzorky krve (pro stanovení cholesterolu) od anestetizovaných (systémem Ketamin/Xylazin) krys před asfyxiací oxidem uhličitým. Perioda 35 dní je dostatečná k dosažení maximální redukce hustoty kostí, jak shora popsáno. Ve chvíli usmrcení se vyjme děloha, odříznou se vnější tkáně a odstraní se kapalný obsah před stanovením mokré hmotnosti k potvrzení deficience estrogenu, související s úplným odstraněním vaječníkŮ. Hmotnost dělohy se rutinně snižuje přibližně 75 % jako odezva na odnětí vaječníkú. Děloha se vloží do 10¾ neutrálně pufrovaného formalinu k umožnění následné histologické analyzy.

Vyříznou se pravé stehenní kosti a hodnotí se distální metaphysa 1 mm od čéškového žlábku jednofotonovou absorpciometrií. Výsledky densitometrického měření představují výpočet hustoty kosti jako funkci minerálního obsahu a šířky kosti.

Cholesterol v seru <4 denní zkouška)

Samičky krysy Sprague Davley, staré 75 dní (o hmotnosti 200 až 225 g) se získají od organizace Charles River Laboratories (Portage, MI). Krysy se buď oboustranně zbaví vaječníkú (OVX) nebo se podrobují zákroku Sham v organizaci Charles River Laboratories a po jednom týdnu se dodávají.

Krysy se po příchodu chovají v kovových zavěšených klecích po třech nebo po čtyřech a mají nadbytek potravy podle libosti (za obsahu vápníku přibližně hmotnostně 0,5 a vody po dobu o

jednoho týdne. Teplota v místnosti se udržuje 22,2 ± 1,7 C za minimální relativní vlhkosti vzduchu 40 %. Perioda osvitu je 12 hodiny světla a 12 hodin tmy.

Dávkovači režim/tkáň - shromažďování. Po jednotýdenní aklimatizaci (tedy dva týdny po odnětí vaječníkú) se započne s podáváním zkoušené sloučeniny' obecného vzorce I- Všechny sloučeniny se podávají orálně v dávce 1 ml/kg tělesné hmotnosti, pokud není jinak uvedeno. Subkutánně se podává 170-estradiol ve

20¾ polyethylenglykolovém nosiči, přičemž 17-a-ethinylestradiol a zkoušená sloučenina podávají orálně, pokud nejí jinak uvedeno, ve formě suspenze v 1¾ karboxymethylcelulóze nebo v 20¾ cyklodextrinu. Denní dávka se krysám podává po dobu čtyř dnů. Po čtyřech dnech dávkování se krysy zváží a anestetizují se systémem Ketazin/Xylazin <2 : 1, objem = objem) kardiatickou punkcí. Krysy se pak usmertí asfyxiací oxidem uhličitým, vyřízne se děloha a stanoví se její hmotnost.

Analytické stanovení cholesterolu. - Vzorky krve se nechají srazit při teplotě místnosti v průběhu dvou hodin a získané sérum se odstřeďuje po dobu 10 minut za počtu otáček 3000/min. Sérový cholesterol se stanovuje vysoce přesnou zkouškou na cholesterol Boehringer Mannheim Diagnostice - Při této zkoušce se cholesterol oxiduje na cholest—4-en-3-on a peroxid vodíku. Peroxid vodíku se pak nechává reagovat s fenolem a s 4-aminofenazonem v přítomnosti peroxidasy za získání p-chinon^iminového barviva, které se hodnotí spektrofotometricky při 500 nm. Koncentrace cholesterolu se pak vypočte proti standardní křivce. Celá zkouška se automatizuje za použití Blomek Automated Workstation.

Děložni eosinofilní peroxidasová zkouška

Děloha ze zkoušky hustoty kostí i z hodnocení cholesterolu v seru se udržuje při teplotě 4 ’c až do doby enzymatické analýzy. Děloha se pak homogenizuje v 50 objemech 50 nM Tris pufru (hodnota pH 8,0), obsahujícím 0,005 ¾ tritonu X-100. Po přidání 0,01¾ peroxidu vodíku a 10 mM o-fenylendiaminu (konečné koncentrace) v Tris pufru se monitoruje vzrůst absorbance po dobu jedné minuty při 450 nm. Přítomnost eosinofilů v děloze je indikací estrogenní účinnosti sloučeniny. Maximální rychlost 15 sekundového intervalu se stanovuje v počátdeční lineární části reakční křivky.

Při zkouškách používaný 173-estradiol a 17-a-ethinylestradiol jsou produkty společnosti Sigma CHeraical Co., St. Louis, Mo.

• Všechny experimentální skupiny zahrnují 5 až 6 krys. Statistické porovnání se provádí za použití jednocestné analyzy rozptylu a v případech statistické významnosti (kdy p se rovná nebo je < menší než 0,05), jsou průměry odděleny analýzou rozpětí. Výsledky * se uvádějí jakožto procentová změna vypočtená ve srovnání s kontrolními krysami ošetřenými pojidlem.

V americkém patentovém spise číslo 4 418068 se popisuje způsob přípravy [6- (methylsulfonoyloxy)-2- 14- (methylsulfonoyloxy)fenyl]benzoCblthien-3-yll[4-[2- (1-piperidiny1)ethoxy]feny11 methanongydroch1or1du a [6-( fenylsulf onoy1oxy)-2-14-< feňylsulfonoyloxy)feny13 benzotb]thien-3-y1314- 12-<1-piperidiny1)ethoxy]feny 13 methanonhydrochl oř idu jakožto meziproduktů s chráněou hydroxylovou skupinou, vhodných pro přípravu žádaných sloučenin podle toho patentu. Tyto meziprodukty se rovněž připravují a hodnotí shora popsanými zkušebními systémy.

Výsledky čtyřdenního hodnocení jsou uvedeny v tabulce I a 35 denního hodnocení v tabulce II- V tabulkách III a IV se uvádějí výsledky, získané za použití chráněných meziproduktů podle amerického patentového spise číslo 4 418068 za použití stejných způsobů hodnocení a sulfonátových analogů nespadajících do rozsahu vynálezu, přičemž podle obecného vzorce I znamená R a R¹ vždy

G skupinu -0S02-CCH2)n-CH3a n 2 nebo 6, X vazbu a R² pipe* „ V , „ ridinoskupinu (pouze hodnocení čtyřdenní zkoušky).

Tabulka I	*
Zkouška 4-denní	krys s oboustranně vyjmutými vaječníky <0VX)
Příklad číslo 1	Dávka mg/kg 0,10 1,00 10,00	Zvýšení hmotnosti dělohy * -7.2 -8,9 -6,4	Eosinof i lni peroxldasa CVmax) 5,2 5,6 5,0	Pokles sterolu	chole- v seru % 32,0 44,8 65,2
2	0,01	0	4.2		0
	0.10	22,4	4.2		32,9
	1.00	32,6	5,2		58,0
	10,00	27,6	7,0		69,9
4	0,10	-8,4	5,2		-10,9
	1,00	-1,3	3,2		14,7
	10.00	24,2	5.6		37,7
6	0,10	-11,8	3,8		29,7
	1,00	-11,8	4.1		15,1
	10,00	10,1	4,4		26,6
9	0.10	19,5	4,7		31,7
	1.00	43,9	7.3		52,0	•i
	10,00	56,1	22,9		73,0
11	0,10	2,8	14,9		33,4
	1,00	17,7	14,4		61,7	»
	10,00	22,3	10,1		62,3	• «
13	0,10	33,3	7,7		44,4	-
	1.00	12,5	7,6		72,0
	10,00	25.0	5,5	í	75,2
15	0,10	6,3	5,3		72,7

1,00	16,7	4,8	69,9
10,00	-2,0	5,3	72,1
0,01	16,7	5,3	24,3
0, 10	19,0	4,9	23,0
1,00	45,2	10,7	52,0
0,10	48,8	3,1	43,8
1,00	35,1	3,7	65,5
10,00	41,8	1,2	63,0
0,10	34,9	4,8	28,2
1,00	42,3	7,1	56,1
10,00	50,5	5,3	55,7
0,10	13,0	3,5	12,2
1,00	23,7	4,6	51,3
10,00	14,4	5,2	52,8

Tabulka II

Zkouška 35-denní krys s oboustranně vyjmutými vaječníky (OVX)

	Příklad	Dávka	Obsah minerálu v kosti
1	číslo	mg/kg	%
*
	2	0,01	-40,0
		0,10	-17,5
		1,00	- 7,5
w		10,00	50,0
-	4	0,01	10,7
		0,10	14,7
		i, 00	41,3
		10,00	54,2

Zvýšení Pokles cholehmotnosti dělohy sterolu v seru % vůči OVX %

14,4	0,9
49,0	16,4
71,2	30,7
73,5	48,2
-1,0	2,3
-4,8	-37,0
74,8	-24,0
33,3	51,3

6	0,01 0,10 1,00	6,7 10.0 0	13.4 16,2 27,6	-1.5 -15,3 -11,6	u
	10,00	40,0	77,6	-2,0	a
20	0,01	-2,1	38,6	45,0	>
	0.10	20,8	89,2	42,6	I
	1,00	12,5	78,4	57,7
	10,00	25,0	90,6	53,6
22	0,01	-24.4	-2,3	9.2
	0.10	6,7	55,0	31,9
	1,00	44,4	48,4	53,5
	10,00	42,2	48,8	59.5
24	0,01	-24,4	4,2	19,9
	0,10	33,3	40,0	30,6
	1.00	31,1	81.6	49.6
	10,00	64,4	42,0	50,5
26	0,01	0	1,3	0,5
	0,10	-29,2	41,1	39.4
	1,00	54,2	96,9	51.3	a
	10,00	50,0	62,5	45,0	l
28	0,01	-0,6	13,4	-6,1	<*>
	0.10	42,7	61,8	10,4
	1,00	22.1	80,8	4,4	t
					• ·

Tabulka III

Zkouška 4-denní krys s oboustranně vyjmutými vaječníky COVX)

V	Dávka Zvýšení	Eosinof i lni	Pokles chole-
	Sloučenina	hmotnosti	peroxidasa	sterolu v ser
w	mg/kg i	dělohy %	(Vmax)	%
- «	[6-(methylsulfonoy1oxy)-	0,10	-19,6	6,2	1,7
	2-C4-(methylsulfonoyloxy) 1,00	-20,8	8.3	6,2
	feny13 benzolbl-thien -3-y1314-12-<l-piperidi- ny 1)ethoxy 3 feny13 methanonhydroch1or i d	10,00	-17.8	6,2	3,7
	16-Cfenylsulfonoyloxy)-	0,10	20,9	4,8	-6,8
	2-[4-<fenylsulfonoyloxy)	1,00	-7,0	3,6	-0,2
	feny1]benzolbl-thien -3-y1314-12-<l-piperidi- ny1)ethoxy 3 feny13 methanonhydroch1or i d	10,00	27,9	4,9	6, 1
	16-<n-propylsulf onoy1)-	0,10	-22,2	16,1	-8,0
	2-14-<n-propylsulfonoy1)	1,00	-12,6	6,6	7,3
a *	feny 13 benzolbl-thien -3-y1314-12-<l-piperidi- ny 1)ethoxy 3 feny13 methanonhydroc h1or i d	10,00	4,8	11,6	10,7
	[6-<n-heptylsulfonoyl>-	0,10	2,9	3,6	11,6
	2-C4-(n-heptylsulfonoy1)	1,00	-2,6	4,0	9,9
	feny 13 benzolb]-thien	10,00	3,5	3,5	13,5

-3-y13[4-12-<l-piperidiny1)ethoxy3 feny13 methanonhydroc h1or i d

Tabulka IV

Zkouška 35-denní krys s oboustranně vyjmutými vaječníky (OVX)

Dávka Obsah Zvýšení Pokles cholé-

Sloučenina m 16-(methy1su1fonoy1oxy)-	minerálu ;g/kg v kosti %	hmotnosti sterolu dělohy * -17,7	v seru * 4,0	A «
0,01	2,3
2-14-(methy1su1fonoy1oxy)	0,10	5,6	-10,5	3,6	r
feny 13 benzolbl-thien	1,00	2,8	-13,4	2,6
-3-yl](4-12-Cl-piperidi-	10,00	5,6	-7,9	3.5
ny1)ethoxy]fenyl]
methanonhydroch1or i d
16-(fenylsulfonoyloxy>-	0,01	-35,3	-6,4	-10,8
2-14-<fenylsulfonoyloxy)	0,10	5,9	-7,7	-14,4
feny13 benzolb]-thien	1,00	-17,6	-9,9	-19,0
-3-yl]14-12-Cí-piperidi-	10,00	-50,0	-29,4	-15,5

ny 1)ethoxy]f eny13 methanonhydroch1oř i d

Inhibice nádoru prsu, navozeného DMBA

Navodí se nádory prsu u samiček krysy Sprague Davley od organizace Harlan Industries, Indianapolis, Indiána. Ve stáří přibližně 55 dní se krysán podá jediná dávka 20 mg 7,12-dimethy1benztalantracenu <DMBA>. Přibližně 6 týdnů po tomto podání se týdně hmatem vyšetřují prsní žlázy v týdenních intervalech pro zjištění nádorů. Jakmile se zjistí jeden nebo několik nádorů, změří se jejich největší a nejmenší průměr kaliprem, rozměry se zaznamenají a určí rovnoměrně rozdělí se krysy pro pokusy. Krysy se podle možnosti podle různých rozměrů nádorů u ošetřované a u kontrolní skupiny tak, aby nádory středních rozměrů byly ekvivalentně rozděleny ve zkoušených skupinách. Pro kontrolní a zkoušené skupiny se používá vždy 5 až 9 krys. Pro každou zkoušku se uvádí střední počet pokusných krys v následující tabulce.

Zkoušené sloučeniny se podávají buď intraperitoneálními injekcemi v 2¾ akaciíff nebo orálně. Orálně podávané sloučeniny jsou buď rozpuštěny nebo jsou suspendovány v 0,2 ml kukuřičného ole43 * je. Každá dávka včetně kontrolními^· akaci«& a kukuřičného oleje $e každé zkoušené kryse podává jednou denně- Po počátečním změření nádoru a selekci zkoušených krys se nádory měří shora uvedeným « způsobem. Ošetřování a měření nádoru krys se provádí po dobu tří

Š až pěti týdnů, přičemž na konci ošetřování se změří konečný ná-w dar*. Pro každé ošetření zkoušenou látkou a pro každé kontrolní ošetření se stanoví střední plocha nádoru. Střední změna nádoru se posuzuje se zřetelem na svoji významnost Studentovou zkouškou. Výsledky této zkoušky jsou uvedeny v tabulce V.

Průmyslová využitelnost

Sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroylbenzolblthiofenů a a jeho farmaceuticky vhodné soli a solváty, popřípadě ve formě farmaceutického prostředku jsou vhodné pro inhibici ztráty kostní hmoty, pro snižování cholesterolu v seru a pro ošetřování hormonálně závislého karcinome prsu a dělohy.

Claims (11)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sulfonátový a karbamátový derivát, 3-aroylbenzotbjthiofenfl obecného vzorce I

   Cti

   JAJ.OINiSVIA

   0H3A0'.SÁWg'dd avy o

   1 6 .111 7 l oi§oa i , ‘ < o u b F kde znamena |

   X \vazbu nebo skupinu -CIfe- , ·(··□ , · 2.

   R² heterocyklické jádro ze souboru zahrnujícího pyrrolid inoskupinu, piperidinoskupinu a hexamethyleniminoskupinu,

   R skupinu vzorce OH -OSO2-<CH2>nCH3 nebo 0

   -OCN-R³H

   R¹ atom vodíku, hydroxylovou skupinu, atom fluoru, chloru, skupinu vzorce -OSO2-<CH2>nCH3 nebo

   O tl

   -OCN-R³1

   H

   R³ vždy na sobě nezávisle alkylovou skupinu s 1 ž 6 atomy uhlíku, cykl oal kýlovou skupinu s 3 až 6 atomy uhlíku, popřípadě atomem* fluoru nebo chloru, alkylovou skupinou s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku substituo45 j vanou fenylovou skupinu, n vždy na sobě nezávisle 3, 4 nebo 5 ¹ za podmínky, že alespoň jeden ze symbolů R a R¹ znamená skupinu

   4 vzorce -OSO2-(Cífe )nCH3 nebo

   Ϊ O + II

   -OCN-R³h a jeho farmaceuticky vhodné soli a solváty.
2. 2. Sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroylbenzotb]thiofenů obecného vzorce I podle nároku 1, kde znamená R² pyrrolidinoskupinu nebo piperidinoskupinu
3. 3. Sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroylbenzotb]thiofenů obecného vzorce I podle nároku 1, kde znamená R skupinu vzorce -0S02-<CH2)nCH3 a n 3,
4. 4 nebo 54. Sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroylbenzotb]thiofenů obecného vzorce I podle nároku 1, kde znamená R¹ atom vodíku, hydroxylovou skupinu, atom fluoru nebo chloru nebo skupinu vzorce -OSOa-CCH2>nCH₃ a n 3, 4 nebo
5. 5.

   i * 5. Sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroylbenzotb]thiofenů obecného vzorce I podle nároku 1, kde znamená R² piperidinoskupinu, R a R¹ skupinu obecného vzorce -OSO2-<CH2>n£H3 a n na sobě nezávisle 3 nebo 4.
6. 6. Sulfonátový a karbamátový derivát 3-aroylbenzotb]thiofenů obecného vzorce I podle nároku 5, kterým je 16-Cn-butylsulfonoy1)2-14-(n-butylsulfonoy1)fenyl]benzolb] thien-3-y1114- t2-(l-piperid i ny 1) ethoxy ] f eny 1 ] methanon nebo .jeho farmaceuticky vhodná sůl nebo solvát46
7. 7. Sulfonátový a karbamátový derivát. 3-aroy 1 benzolb]thiofenfl t obecného vzorce I podle nároku 5, kterým je 16-<n-pentylsulfοποί y1)-2-14-C n-pentylsulf onoy1>f eny1]benzolb]thien-3-yl314-t2-(l-piperidiny1)ethoxy]fenyl]methanon nebo jeho farmaceuticky vhodná * sůl nebo solvát. ?
8. 8. Farmaceutický prostředek pro inhibici ztráty kostní hmoty, pro snižování cholesterolu v seru a pro ošetřování hormonálně závislého karcinoma prsu a dělohy , vyznačující se t í m , že jakožto účinnou látku obsahuje sulfonátový nebo karbamátový derivát 3-aroy1benzotb]thiofenfl obecného vzorce I podle nároku 1 až 7 spolu s jedním nebo s několika farmaceuticky vhodnými nosiči.

   _-___/λ^αα****'*'
9. 9. Ji.iUiSlI. í4£íoučeninafc. podle nároku 1 až Iwro přípravu farmaceutického prostředku pro inhibici ztráty kostní hmoty.
10. 10. -Použití Sloučen i podle nároku 1 až ^pro přípravu farmaceutického prostředku pro snižování hladiny cholesterolu v seru.

    /Ar-/
11. 11. Použifri ^loučenin^ podle nároku 1 až 7^pro přípravu farmaceutického prostředku pper'·' pro ošetřování' hormonálně závislého karcinom^ prsu a dělohy.

    < ϋ -σ r- 73 ΓΌ x>< r=' > O S O Ní; > l\S TNI o o czx tss oo o< o <= σ Γ“ —1 < to cr vr X. o ř—»