CZ399799A3

CZ399799A3 - Arylsubstituované piperaziny používané v léčbě benigní prostatické hyperplasie

Info

Publication number: CZ399799A3
Application number: CZ19993997A
Authority: CZ
Inventors: Linda Jolliffe; William Murray; Virginia Pulito; Alan Reitz; Xiaobing Li; Linda Mulcahy; Cynthia Maryanoff; Frank Villani
Original assignee: Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc.
Priority date: 1997-05-12
Filing date: 1998-05-08
Publication date: 2000-04-12
Also published as: NO995518D0; EP0984777B1; ES2206928T3; WO1998051298A1; CA2289987A1; AU7366998A; NZ500992A; EA001904B1; PT984777E; ATE250033T1; DE69818255T2; US6593474B1; AP9901684A0; CN1515556A; HK1024630A1; BR9809804A; NO314144B1; JP4189867B2; NO995518L; AR012686A1

Description

Arylsubstituované piperaziny používané v léčbě benigní prostatické hyperplasie

Oblast techniky

Vynález se týká řady arylsubstituovaných piperazinů, farmaceutických prostředků, které je obsahují a meziproduktů používaných k jejich přípravě. Sloučeniny podle vynálezu selektivně inhibují vazbu k a-l_a adrenergickému receptorů, receptorů, který byl implikován v benigní prostatické hyperplasii. Dále sloučeniny podle vynálezu snižují intrauretrální tlak v in vivo modelech. Jako takové jsou sloučeniny podle vynálezu užitečné při léčbě této nemoci.

Dosavadní stav techniky

Benigní prostatická hyperplasie (BPH) nezhoubné zvětšení prostaty je nej rozšířenější benigní nádor u mužů. Přibližně 50 % všech mužů starších než 65 let má určitý stupeň BPH a třetina z nich má klinické symptomy, které jsou konzistentní s bráněním výtoku z močového měchýře (Hieble a Caine, 1986) .

V USA tvoří benigní a maligní nemoci prostaty u mužů starších 50 let více operativních zákroků než nemoci kteréhokoliv jiného orgánu.

Existují dvě složky BPH, statická a dynamická složka.

Statická složka je způsobena zvětšením prostatické žlázy, které může vést ke stlačení močové trubice a k obstrukci toku moče z močového měchýře. Dynamická složka je způsobena zvýšením tonusu hladkého svalu hrdla močového měchýře a prostaty samotné (což interferuje s vyprázněním močového měchýře) a je regulována alfa 1 adrenergickými receptory (al-AR) . Medicinální léčby použitelné pro BPH se zaměřují na tyto složky do různých stupňů a terapeutické možnosti se rozšiřuj i.

- 2 Možnosti chirurgické léčby se zaměřují na statickou složku BPH a zahrnují transuretrální resekci prostaty (TURP), transuretrální incisi prostaty (TUIP), otevřenou prostatektomii, balonovou dilataci, hypertemii, stenty a odstranění laserem. TURP je výhodná léčba pro pacienty s BPH a v USA bylo v roce 1990 provedeno přibližně 320 000 TURP a náklady zahrnovaly 2,2 miliardy dolarů (Weis a kol., 1993). Účinná léčba pro většinu mužů neměla dlouhodobě uspokojivé výsledky (Lepor a Rigaud, 1990). Komplikace zahrnují retrográdní ejakulaci (70 až 75 % pacientů), impotenci (5 až 10 %), postoperativní infekci močového traktu (5 až 10 %) a určitý stupeň inkontinence moči (2 až 4 %) (Mebust a kol., 1989). Dále, u 15 až 20 % mužů bylo nutné provést po deseti letech nebo více novou operaci (Wennberg a kol., 1987) .

Nehledě na chirurgické zákroky, existují určité léčebné terapie, které se zaměřují na statickou složku této situace. Finasterid (Proscar^R, Merck) je jedna z terapií, která je určena pro léčbu symptomatické BPH. Toto léčivo je kompetitivní inhibitor enzymu 5ce-reduktázy, která způsobuje konverzi testosteronu na dihydrotestosteron v prostatické žláze (Gromley a kol., 1992). Má se za to, že dihydrotestosteron je hlavní mitogen pro růst prostaty a činidlo, které inhibuje Sa-reduktázu a snižuje velikost prostaty a zlepšuje průtok moči prostatickou močovou trubicí. Ačkoliv je finasterid silným inhibitorem 5a-reduktázy a způsobuje značné snížení koncentrace dihydrosteronu v séru a tkáni, je pouze mírně účinným při léčbě symptomatické BPH (Oesterling, 1995) . Účinky finasteridu se stanou zřejmými během 6 až 12 měsíců a pro mnoho mužů je klinické zlepšení minimální (Barry, 1997) .

Dynamická složka BPH je řešena použitím činidla blokujícího adrenergický receptor (cel-AR blokátor) , který působí snížením tonusu hladkého svalu v samotné prostatové žláze. Byla zkoumána řada blokátorů al-AR (terazosin, prazosin a

doxazosin) pro léčbu symptomatické obstrukce vývodu z močového měchýře v důsledku BPH. Nejvíce byl zkoumán terazosin (Hytrin, Abbott) . Ačkoliv blokátory cel-AR jsou velmi dobře tolerovány, v 10 až 15 % případů působí nepříznivě (Lepor, 1995). Nežádoucí účinky na všechny členy této skupiny jsou podobné, posturální hypotenze je nej rozšířenější poznaný postranní účinek (Lepor a kol., 1992). V porovnání s inhibitory Sce-reduktázy mají činidla blokující al-R mnohem rychlejší počátek působení (Steers, 1995). Nicméně jejich terapeutický účinek, měřený zlepšením symptomu a maximem močové průtokové rychlosti je mírný (Oesterling, 1995).

Použití antagonistů cel-AR v léčbě BPH je závislé na schopnosti snížit tonus prostatického hladkého svalu, vedoucí ke zmírnění obstruktivních symptomů. Adrenergické receptory jsou nalezeny v celém těle a hrají dominantní úlohu v regulaci krevního tlaku, nazálním překrvení, funkci prostaty a ostatních procesech (Harrison a kol., 1991). Nicméně, existuje řada klonovaných subtypů receptoru cel-AR: al_a-AR, al_b-AR a alj-AR (Bruno a kol., 1991; Forray a kol., 1994; Hirasawa a kol., 1993; Ramarao a kol., 1992; Schwinn a kol., 1995; Weinberg a kol., 1994). Řada výzkumných laboratoří charakterizovala al-AR v lidské prostatě funkčně, radioligandovou vazbou a molekulárními biologickými technikami (Forray a kol., 1995; Yamada a kol., 1994). Tyto studie poskytují důkaz na podporu předpokladu, že subtyp 0!l_a-AR představuje většinu al-AR v lidském prostatickém hladkém svalu a zprostředkuje kontrakci v těchto tkáních. Tyto nálezy doporučují, že vývoj subtypu selektivního k antagonistů al_a-AR může vést k terapeuticky účinnému činidlu s větší selektivitou pro léčbu BPH.

Podstata vynálezu

Vynález se týká sloučenin obecného vzorce I • ·

Ri

I kde:

A znamená (CH2)_n kde n je 1 až 6 R-L znamená C₁_galkyl, fenyl, substituovaný fenyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-^.galkyl, C-]__₅alkoxy a halogen, fenylC₁_₅alkyl nebo substituovaný fenylC₁_galkyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-L.galkyl, C-]__₅alkoxy a halogen;

R2 znamená vodík, C^_galkyl, C^.^alkenyl, C-^.galkinyl, fenylC-]__₅alkyl, nebo substituovaný fenyl C-j__₅alkyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-^.. 5 alkyl, Cf-salkoxy a halogen;

E znamená

• ·

• · · • · · · · · kde m je 1 až 5;

Rg je vodík, C₁_galkyl nebo kyslík kde jestliže je Rg je kyslík, čárkovaná vazba znamená vazbu a je-li Rg C₁_₆alkyl, čárkovaná čára není přítomná;

R₄ znamená kyslík, vodík, C-^galkyl, formyl, karboxy, _galkylkarbonyl, C₁_₅alkoxykarbonyl, fenylC-j^galkoxy, substituovaný fenylC^galkoxy kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující Ci_₅alkyl, C₁_₅alkoxy a halogen, amido a substituovaný amido kde dusíkaté substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahujících vodík, C-]__₅alkyl, C-j__galkoxy a hydroxy, kde pokud R₄ znamená kyslík, pak přerušovaná čára znamená vazbu a jestliže R₄ je jiný substituent, není přerušovaná čára přítomná;

Rg znamená vodík, C-j__galkyl nebo společně s Rg tvoří cyklohexanový, cyklopentanový nebo cyklopropanový kruh;

Rg znamená vodík, C-j__galkyl nebo společně cyklohexanový, cyklopentanový nebo cyklopropanový kruh;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

s R_c tvoří

Tyto sloučeniny jsou užitečné jako činidla modulující adrenergický receptor. Sloučeniny podle vynálezu se selektivně váží k al_a-AR receptorů, modulují aktivitu uvedeného receptorů a jsou selektivní na prostatové tkáně ve srovnání s aortovými tkáněmi. Jako takové představují uskutečnitelnou léčbu al_a-AR receptorem modulované choroby, které zahrnují, nikoliv však s omezením BPH.

fc · fc · · · • fcfc · • · fcfc· ·

Dále vynález také zahrnuje farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny obecného vzorce I a způsobu léčby chorob zprostředkovaných receptorem al_a-AR sloučeninami obecného vzorce I.

Kromě sloučenin obecného vzorce I předkládaný vynález zahrnuje meziproduktové sloučeniny obecného vzorce II. Tyto meziprodukty jsou užitečné k přípravě sloučenin obecného vzorce I a jsou následující:

Ri \

kde:

A znamená (CH₂)_n kde n je 1 až 6

R₁ znamená C₂_galkyl, fenyl, substituovaný fenyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C₁_₅alkyl, ^cl_5^alkoxy a halogen, fenylC₁_₅alkyl nebo substituovaný fenylC^^alkyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-j^.galkyl, C₁_₅alkoxy a halogen;

Ry znamená vodík, BOC nebo CBZ.

Dále předkládaný vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce III. Tyto sloučeniny jsou užitečné jako meziprodukty pro přípravu sloučenin obecného vzorce I a jsou následující.

• · · • · · • «·· · • · • ·♦··

Ί

Ο L(CH2)m III kde m znamená 1 až 5.

Výrazy používané v popise vynálezu jsou obecně používané významy a odborníkům jsou známé. HBS znamená Hankův vyrovnávací solný roztok. Nezávisle znamená, že pokud je přítomen více než jeden substituent, mohou být substituenty různé. Výraz alkyl znamená přímé, cyklické a rozvětvené alkylové skupiny a alkoxy znamená O-alkyl, kde alkyl je definovaný shora. LDA znamená lithium diisopropylamid, a BOP znamená benzotriazol-l-yl-oxy-tris(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfát. BOC znamená terč.butoxykarbonyl, PyBroP znamená brom-tris-pyrrolidinofosfonium hexafluorfosfát, CBZ znamená benzyloxykarbonyl a Ts znamená toluensulfonyl. DCC znamená 1,3-dicyklohexylkarbodiimid, DMAP znamená 4-N,Ν'-dimethylaminopyridin, EDCI znamená hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu a HOBT znamená 1-hydroxybenzotriazolhydrát. Symbol Ph znamená fenyl a PHT znamená ftalimido. Výraz účinná dávka se týká množství sloučeniny obecného vzorce I, které se váže k a/nebo antagonizuje účinek a-l_aadrenergického receptoru. Dále výraz účinná dávka znamená množství sloučeniny obecného vzorce I, které snižuje symptomy nemocí spojené s adrenergickým receptorem o;-l_a.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou připravit podle následujících schémat, kde některá schémata produkují více než jedno provedení vynálezu. V těchto případech je výběr schématu věcí úvahy syntetického chemika.

• 9

I 9 ··· • fe fefe 9

9 9

999 9 ·

• · • ····

Sloučeniny obecného vzorce I, kde je fenyl, R₂ je ^v°dík, r₃ je kyslík, A je (CH₂)₃ a m je 4, se mohou připravit jak je ilustrováno ve schématu 1. V tomto schématu se molekuly obecného vzorce I připraví konvergentní syntézou, kde poloviny molekuly jsou shromážděny a nakonec jsou spolu kopulovány.

Výchozí materiál pro jednu polovinu je mono N-substituovaný piperazin typu la. Zpracování la s mírnou bází jako je K₂CO₃a alkylačním činidlem, jako je akrylonitril v inertním rozpouštědle jako je MeOH při teplotě místnosti po dobu 2 až 24 hodin poskytuje nitril lb. Tento meziprodukt se může hydrogenovat za použití Raneyova niklu jako katalyzátoru za vzniku propylaminového meziproduktu lc. Druhá polovina molekuly je sestavena za použití sloučenin typu lc jako výchozího materiálu. Epsilon-kaprolaktam se zpracuje silnou bází jako je NaH v inertním rozpouštědle při 0 °C po dobu okolo 30 minut. Vzniklý anion se zpracuje alkylačním činidlem jako je terč.butylbromacetát v inertním rozpouštědle jako je akrylonitril při teplotě místnosti po dobu 2 hodin až dvou dnů a získá se ester le. Hydrolýza le s kyselinou jako je kyselina trifluoroctová při teplotě místnosti v průběhu 2 až 16 hodin poskytuje kyselinu lf. Zpracování aminu lc a kyseliny lf s peptidovým kopulačním činidlem jako je BOP a vhodným aminem jako je DMAP při teplotě místnosti po dobu 1 až 16 hodin poskytuje sloučeninu obecného vzorce I, lg. BOP může být nahrazen jiným kopulačním činidlem. Taková činidla zahrnují, nikoliv však s omezením, PyBroP, EDCI, HOBt apod. DMAP vhodně nahradí, nikoliv však s omezením

N-methylmorfolin, imidazol, DABCO apod.

Schéma 1 se může použít k přípravě sloučenin bez ohledu na lg. K přípravě sloučenin, kde m je 1 až 5, laktamy vhodné velikosti kruhu, jako je 2-azacyklooktanon, nahradí epsilon-kaprolaktam ve schématu 1.

K přípravě sloučenin, kde R-^ má jiný význam než fenoxy, je la nahrazen známými fenylpiperazinovými deriváty jako je N-(2-terc.butylfenyl)piperazin. K přípravě sloučenin, kde A je (CH₂)_n a n je 1 až 6, může být akrylonitril nahrazen alkylačními činidly, jako je 4-chlorbutyronitril.

Alternativně může být připraven meziprodukt lc jinými cestami, jak je uvedeno ve schématu 2.

Piperazinový derivát la se zpracuje mírnou bází a známé • ftft ft • ft · ftft • ftft · ft ftft · ft ft ftftft * ftft · • ft ftft • ftftftft ftalimidové deriváty, jako N-(4-brombutyl)ftalimid poskytují meziprodukt 2a. Zpracováním 2a s hydrazinem, jako je N-methylhydrazin ve vhodném rozpouštědle jako je MeOH nebo EtOH při teplotě refluxu se získají meziprodukty typu lc. Alternativně je piperazin la zpracován slabou bází a N-BOC chráněný amin, jako je N-terc.butoxykarbonyl-4-brombutylamin poskytuje odpovídající BOC chráněný amin. U tohoto aminu může být odstraněna chránící skupina zpracováním s kyselinou, jako je TFA a získají se meziprodukty typu lc.

Schéma 2

K přípravě sloučenin, kde R₂ neznamená vodík se použije schématu 3. Zpracováním sloučenin 1 g silnou bází, jako je NaH, následované alkylačním činidlem, jako je benzoylbromid dává sloučeniny typu 3a během 1 až 5 hodin při teplotě okolo 0 až 35 °C.

·· ·· ·· · ··♦ ©·· © « ©

Schéma 3

Sloučeniny, kde R₄ je kyslík, C₁_₅alkyl, formyl, karboxy, Ci-5^alkylkarb°ⁿyl, C₁_₅alkoxykarbonyl, fenylC₁_₅alkoxy, substituovaný fenylC₁_₅alkoxy, amido a substituovaný amido se mohou připravit podle schématu 4. Například k přípravě sloučenin, kde R₄ je ethoxykarbonyl, m je 2 a R₃ je karbonyl se zpracuje ethyl-2-pyrrolidon-5-karboxylát se silnou bází jako je NaH v inertním rozpouštědle při teplotě 0 °C po dobu 30 minut. Vzniklý anion se zpracuje s alkylačním činidlem, jako je terč.butylbromacetát v inertním rozpouštědle jako je acetonitril při teplotě místnosti po dobu 2 hodin až 2 dny a získá se ester 4a. Kyselou hydrolýzou 4a s kyselinou trifluoroctovou při teplotě místnosti v průběhu 2 až 16 hodin se získá kyselina 4b. Kopulováním kyseliny 4b a meziproduktového aminu lc s peptidovým kopulačním činidlem jako je PryBOP dává sloučeninu vzorce I, 4c. Ethylester sloučeniny 4c se může zpracovat různými činidly za získání derivátů, jako jsou amidy, karboxylové kyseliny, aldehydy atd., kde reakční složky a reakční podmínky jsou ve znalostech odborníka.

Schéma 4 ·· ·· • · · · • · · · • · *·· · • · · ·· ♦ ·

4b

OPh tíC”

·· « » · · » · · ··· « ··

4c

Ačkoliv nárokované sloučeniny jsou užitečné al-AR, některé sloučeniny jsou výhodné nebo Výhodné sloučeniny podle vynálezu zahrnují:

jako modulátory částečně výhodné.

Zvlášť

Zvlášť výhodný R^ je C-^.^alkyl.

výhodný R2 je vodík, C-^-^alkenyl a C^^.^alkinyl. výhodný E je

Zvlášť

Zvlášť A je 2 výhodné m je 3.

výhodný R-j je kyslík.

výhodný R₄ je vodík.

výhodný A je (CH2)_n, kde n je 2 až 4.

výhodné sloučeniny vzorce II nebo 3, R-l je C₂_galkyl a R₇ zahrnují sloučeniny, kde je vodík.

Zvlášť m je 3 výhodné sloučeniny vzorce

III zahrnují sloučeniny, kde

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou použít ve farmaceutických prostředcích pro léčbu pacientů s chorobami vztaženými k modulaci aktivity adrenergického receptoru al. Výhodná cesta je orální podání. Avšak sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány i jinými způsoby, včetně, nikoliv však s omezením, intravenózní infuzi. Rozsah orální dávky je od okolo 0,01 až 100 mg/kg denně. Výhodný rozsah orální dávky je od okolo 0,05 až 1,0 mg/kg denně. Rozsah infuzní dávky je od okolo 0,001 až 100 mg/kg/min inhibitoru s farmaceutickým •φ *· < φ · • φ φ φφφ φ** φ <

φ φ

• « · φ φ φ < φ • <

φ· φφ φ

φφφ φ φφ φ

• φφφφ *· *· nosičem během několika minut až několika dnů.

Farmaceutické prostředky se mohou použít za použití konvenčních farmaceutických pomocných látek a mísících technik. Orální dávkové formy mohou být elixíry, sirupy, kapsle, tablety apod. V případě typického pevného nosiče se použije jako inertní substance laktóza, škrob, glukóza, methylcelulóza, stearát hořečnatý, hydrogenfosforečnan vápenatý, mannitol apod; typické kapalné orální excipienty zahrnují ethanol, glycerol, vodu apod. Všechny pomocné látky se mohou smíchat pokud je to potřebné, s dezintegračními činidly, ředidly, granulačními činidly, mazadly, pojivý a pod. za použiti konvenčních technik známých odborníkům k přípravě dávkových forem. Parenterální dávkové formy se mohou použít za použití farmaceuticky přijatelných nosičů a ředidel, včetně, nikoliv však s omezením, vody a ostatních sterilních nosičů.

Typicky se sloučeniny obecného vzorce I izolují a používají jako volné báze, nicméně sloučeniny mohou být izolovány a používány jako jejich farmaceuticky přijatelné soli. Příklady takových solí zahrnují, nikoliv však s omezením bromidy, jodidy, chloridy, chloristany, sírany, maleáty, fumaráty, maláty, tartaráty, citráty, benzoáty, mandeláty, methansulfonáty, hydroethansulfonáty, benzensulfonáty, oxaláty, pamoáty, 2-naftalensulfonáty, p-toluensulfonáty, cyklohexansulfamáty a sacharináty.

Vynález je blíže ilustrován následujícími příklady. Tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a v žádném případě neomezují rozsah vynálezu.

• ·

- 15 Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

1-(2-Ftalimidoethyl)-4-(2-isopropyloxyfenyl)piperazin (sloučenina 1)

N-(2-Bromethyl)ftalimid (7,6 g, 30 mmol) a K₂CO₃ (6,2 g, 45 mmol) se přidají k roztoku N-(1-(2-isopropoxyfenyl)piperazinu (6,6 g, 30 mmol) v acetonitrilu (100 ml) a vzniklá směs se zahřívá při zpětném toku 2 dny. Směs se koncentruje ve vakuu a čistí se sloupcovou chromatografii na silikagelu za použití EtOAc/hexany (30:70) jako eluentu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako pevná látka: MS m/z 394 (MH⁺).

Příklad 2

1-(2-Aminoethyl)-4-(2-2-isopropyloxyfenyl)piperazin (sloučenina 2)

Roztok sloučeniny 1 (7,5 g, 19 mmol) v EtOH (70 ml) se míchá 10 minut při teplotě místnosti. Přidá se methylhydrazin (20 ml) a směs se zahřívá při zpětném toku 2,5 hodiny. Směs se ochladí na teplotu místnosti a vzniklá pevná sraženina se odstraní filtrací. Filtrát se koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v názvu, která se použije bez dalšího • · • ··· · • · ·

- 16 Čištění: MS m/z 264 (MH⁺).

Příklad 3

O

1-terc.Butoxykarbonylmethyl-2-piperidon (sloučenina 3)

95% hydrid sodný (1,67 g, 66 mmol) se přidá při teplotě 0 °C k míchanému roztoku δ-valerolaktamu (5,95 g, 60 mmol) v toluenu (100 ml) a vzniklá suspenze se míchá 1 hodinu. Potom se přidá po kapkách terč.butylbromacetát (8,86 ml, 60 mmol) a reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 10 hodin. Přidá se nasycený vodný NH₄C1 a vzniklá organická vrstva se promyje postupně solankou a H₂O. Spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄) a koncentrací ve vakuu se získá sloučenina 3 jako olej.

Příklad 4 co₂h l-Karboxymethyl-2-piperidon (sloučenina 4)

Kyselina trifluoroctová (15 ml) se přidá k míchanému roztoku sloučeniny 2 (12,93 g, 61 mmol) v methylenchloridu (30 ml) pod dusíkem. Směs se míchá 4 hodiny a koncentruje se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako pevná látka: MS m/z 158 (MH⁺).

• · • · • ·

• · ·

Příklad 5

N- [Ethyl-2- (2-isopropyloxyfenyl)piperazin-4-yl) ] - [1¹ - (2-oxypiperidinyl)]acetamid (sloučenina 5)

Roztok sloučeniny 2 (3,61 g, 23 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá k roztoku sloučeniny 4 (5,0 g, 19 mmol) v methylenchloridu (10 ml). Potom se přidá PyBroP (10,72 g, 23 mmol), DMAP (3,85 g, 31 mmol) a N-methylmorfolin (2,53 ml, 23 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti pod dusíkem 10 hodin. Vzniklá směs se promyje jedním dílem hydrogenuhličitanu sodného, solankou a vodou. Spojená organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a koncentruje se ve vakuu. Zbytek se čistí MPLC na silikagelu za použití směsi EtOAc/MeOH/triethylamin (90:5:5) jako eluentu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako olej: MS m/z 403 (MH⁺). Zpracováním izolované sloučeniny ekvimolárním množstvím kyseliny citrónové a ethylacetátu dává citrátovou sůl sloučeniny uvedené v názvu jako pevná látka.

Příklad 6

N- [Ethyl-2 - (2-isopropyloxyfenyl)piperazin-4-yl) ] -N-methyl-[1'-(2-oxypiperidinyl)]acetamid (sloučenina 6)

Hydrid sodný (95% těch. 10,6 mg, 0,44 mmol) se přidá při 0 • · · • · · · • · »

► · 9

99· « ··· ···· °C k míchanému roztoku sloučeniny 5 (140,5 mg, 0,35 mmol) v THF (5 ml) a vzniklá suspenze se míchá 30 minut. Po kapkách se přidá methyljodid (0,37 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Zbytek se koncentruje ve vakuu, rozpustí se v ethylacetátu a promyje se postupně vodným nasyceným roztokem chloridu amonného, solankou a vodou. Spojená organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a koncentruje se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako pevná látka: MS m/z 417 (MH⁺).

Biologické příklady

Biologická aktivita a selektivita sloučenin podle vynálezu byla demonstrována následujícími in vitro zkouškami. První zkouška testovala schopnost sloučenin obecného vzorce I vázat se receptory vázané na membránu al_a-AR, al^-AR a alj-AR.

Příklad 14

Byly publikovány DNA sekvence tří klonovaných lidských subtypů al-AR. Navíc, klonovaná cDNA byla exprimována jak dočasně v buňkách COS, tak stabilně v různých savčích buněčných liniích (HeLa, LM (tk-), CHO, fibroblast rat-1) a bylo zjištěno, že si udržuje aktivitu radioligandové vazby a schopnost kopulace na fosfoinositidovou hydrolýzu. Použili jsme publikované informace o sekvenci DNA k návrhu primérů pro použití v amplifikaci RT-PCR každého subtypu k získání klonované cDNA. Z komerčně dostupných zdrojů se získal lidský A+ RNA a zahrnovaly vzorky hippocampu a vzorky prostaty, zdroje, které jsou citovány v literatuře. Pro prvotní průzkum se použila radioligandová vazebná zkouška, která zahrnuje membránové preparáty z buněk exprimujících individuálně klonovaný receptor cDNA. Radioznačené ligandy s vazebnou aktivitou na všechny tři subtypy (neselektivní) jsou komerčně dostupné ([1251]-HEAT, [3H]-prazosin.

• ·

Každý subtyp receptoru a-1 byl klonován z poly+ RNA standardní metodou RT-PCR. Použily se následující zdroje polyA+ RNA pro klonování subtypů receptoru al: al_a-AR, lidský hippocampus a prostata, al^-AR, lidský hippcampus, al^-AR, lidský hippocampus. Výsledné cDNA se klonovala na savčí expresní vektor pcDNA3 (Invitrogen Corp., San Diego CA).

Každá DNA byla uspořádána pro verifikaci a ke stanovení možných mutací zavedených během amplifikace. Každá odchylka v sekvenci od publikovaného konsensu pro každý receptorový subtyb byla korigována mutagenézí směrovanou na příslušné místo.

Tři subtypy al-AR (a, b, d) byly transfektovány do buněk COS za použití standardního DEAE-dextranového postupu s chlorochinovým šokem. V tomto pokusu byla každá miska (100 mm) s tkáňovou kulturou očkována 3,5 x 10® buněk a transfektována s 10 /zg DNA. Přibližně 72 hodin po transfekci byly buňky sklizeny a připravily se membrány COS.

Transfektovane buňky COS z 25 desek (100 mm) byly seškrábány a suspendovány v 15 ml TE pufru (50 mM Tris-HCl, 5mM EDTA, pH 7,4). Suspenze byla narušena v homogenizéru. Potom byla odstředěna při lOOOxg po dobu 10 minut při 4 °C. Supernatant se odstřeďoval při 34 500 x g po dobu 20 minut při teplotě 4 °C. Pelety se znovu suspendovaly v 5 ml TNE pufru (50 mM Tris-HCl, 5 mM EDTA, 150 mM NaCl, pH 7,4) . Vzniklý membránový aparát byl alikvotní a uchovával se při -70 °C. Proteinová koncentrace se stanovila následnou membránovou solubilizací s TritonemX-100.

Schopnost každé sloučeniny vázat se ke každému ze subtypů al-AR byla posouzena v receptorové vazebné zkoušce.

[1251]-HEAT a neselektivní δΙ-AR ligand se použijí jako radioznačený ligand. Každá jamka z 96-jamkové plotny obsahovala: 140 μΐ TNE, 25 μΐ [1251]-HEAT zředěný v TNE (50 000 cpm; finální koncentrace 50 pM), 10 μΐ testované sloučeniny zředěné v DMSO (finální koncentrace 1 pM-10 μΜ), 25 ml COS > · · · • · · · « · buněčného membránového preparátu exprimujícího jeden ze tří subtypů al-AR (0,05-0,2 mg membránového proteinu). Plotna se inkubovala 1 hodinu při teplotě místnosti a reakční směs se filtrovala přes filtrační desku Packard GF/C. Filtrační plotna se sušila 1 hodinu ve vakuové peci. Do každé jamky se přidala scintilační kapalina a filtrační plotna se hodnotila v scintilačním čítači Packard Topcount. Data se analyzovali za použití software GraphPad Prism. Tabulky A a B uvádějí seznam hodnot IC_5Q vyjádřených nanomolární koncentrací pro vybrané sloučeniny podle vynálezu ve všech receptorových subtypech.

Tabulka A

Slouč.	R,	A	R,	R<
5*	i-prop	CHj	H	H
6	hprop	ch₂	ch₃	H
7	i-prop	ch₂	ch₂chch₂	H
8	i-prop	ch₂	CH₂(C)CH₃	H
9	í-prop	ch₂	CH₂Ph	H
10	i-prop	ch₂	H	CO₂C₂H₅
11	i-prop	ch₂	H	H
12	ch₃	(ch₂)₂	H	H

O l(CH₂)m

Rf m rt1a-AR a1b-AR ix1d-AR

3	8.7	46120	372
3	53	763900	650
3	103	172500	372
3	237	170200	358
3	88	4226	348
2	20	26310	260
4	18	3536	505
3	98	109000	30530

ii*» indikuje citrátovou sůl • ·

Tabulka B • · · · • · · · • ftft · • · ft·· * • · · • · · ·

Slouč, R_t a R·, i-prop CH₂ H m_a1a-AR

18 a1b-AR ft1d-AR

1932 189 • · ft • · ft • · · · · · • · ·· ftft

Příklad 15

Antagonistická účinnost vybraných sloučenin obecného vzorce I se demonstrovala následovně: Vazba agonistu na al-AR způsobí aktivaci PLC přes G-proteinový kopulační mechanizmus (Minneman a Esbenshade, 1994). PLC katalyzuje hydrolýzu fosfatidyl inositol 4,5-bifosfátu (PIP2), generací dvou druhotných matricových molekul, inositol 1,4,5-trifosfátu (IP3) a diacylglycerolu (DAG) s konečným výsledkem mobilizace intracelulámích vápníkových zásob. Látky, které projevovaly aktivitu v primární zkoušce, tím, že selektivně inhibovaly vazbu radioligandu k al_a-AR se hodnotí na schopnost antagonizovat mobilizaci cytosolického vápníku v buněčných liniích stabilně exprimujících jednotlivé receptorové subtypy.

Příprava stabilních buněčných linií exprimujících každý receptorový subtyp: Alfa 1 adrenergické receptorové subtypy (a, b, d) ve vektoru pcDNA3 se transfektují do HEK (lidská embryonická ledvina) buněk za vzniku receptor exprimujících buněčných linií. Transfekce se provede za použití kationtového lipidového činidla DMRIE-C (GibcoBRL) smíchaného s 2-3 μg DNA a redukovaného sérového media OPTI-MEM 1 (GibcoBRL). Buňky v 100 mm tkáňových kulturních plotnách se pokryjí komplexem lipid-DNA a inkubují se při 37 °C, 5% C0₂ •99 999 • 9

po dobu 5 až 6 hodin. Potom se přidá sérum obsahující růstové medium a buňky se inkubuji dalších 48 hodin. Potom se každá plotna rozštěpí do selekčního média obsahujícího 250, 300 nebo 350 ^g/ml antibiotika G418 (geneticin). Plotny se živí každé 4 dny vhodným selekčním mediem. Po přibližně 3 týdnech se kolonie seberou pro každý subtyp ze selekčních ploten obsahujících 300 ^g/ml G418. Kolonie se expandují a zmrazí. Dvanáct buněčných linií každého subtypu se sleduje na vazbu alfa 1 adrenergického receptoru za použití celobuněčné vazebné zkoušky. Pozitivní kultury se následně analyzují za použití vápníkové mobilizační zkoušky.

Buňky HEK 293 exprimující lidský ala-AR se zpracují trypsinem a promyjí se jednou s HBSS. Buněčné pelety se znovu suspendují v HBSS s 0,05% BSA na 1 až 5 x 10^ buněk/ml. Potom se k buněčné suspenzi přidá 5 mM roztok Fluo-3 (ve 2/3 obj. DMSO a 1/3 obj. pluronové kyseliny) za vzniku finální koncentrace Fluo-3 5μΜ. Potom se buňky inkubují mírným kolébáním ve tmě při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Po inkubaci se buňky promyjí 3x HBSS a znovu se suspendují v HBSS s 1,25 mM CaC^ na 0,7 x 10 ® buněk/ml. Buněčné alikvoty (100 μΐ) se pipetují do každé jamky 96-jamkové mikroplotny. Potom se zavede při teplotě místnosti vápníková mobilizace s norepinefrinem (10 μΜ). Dvě minuty před zkouškou se přidají k buňkám antagonisty za využití pipetovacího zařízení pro 96-jamek. Poté se přidá agonist a fluorescentní signál se sleduje po dobu 2 až 3 minut za použití FLIPR (Molecular Devices, USA). Sloučenina 5 inhibuje mobilizaci cytosolického vápníku na IC₅₀ při 99 μΜ.

Příklad 16

Antagonistická účinnost a selektivita sloučenin podle vynálezu pro prostatové tkáně ve srovnání s aortovými tkáněmi a rovněž jejich antagonisty se demonstruje následovně. Kontraktilní odezva krysí prostatické tkáně a krysí aortové

0 • 00 · • · 0 «00 tkáně se zkoumá v přítomnosti a nepřítomnosti antagonistických sloučenin. Jako indikace selektivity antagonismu, účinky testované sloučeniny na vaskulární kontraktil i tu hladké tkáně (cel^/AR a al^-AR) se porovnávají s účinky na prostatický hladký sval (al_a-AR). Proužky prostatické tkáně a kroužky aorty se získají ze samců krys Long Evans o hmotnosti 275 g a usmrcených cervikální dislokací. Prostatické tkáně se umístí pod tenzi 1 g v 10 ml lázni obsahující fosfátový pufrový fyziologický roztok pH

7,4 při 32 °C a isometrická tenze se měří silovým převodníkem. Aortová tkáň se umístí pod tenzí 2 g v 10 ml do lázně fosfátového fyziologického roztoku pH 7,4 při teplotě 37 °C. Měří se schopnost testované sloučeniny snižovat norefedrinem zavedenou kontraktilní odezvu na 50 % (IC^q) · Sloučenina 5 inhibuje kontraktilní odezvu v aortové tkáni na IC₅₀ použitím 31,9 μΜ a v prostatové tkáni na IC₅₀ použitím 1,3 μΜ.

Příklad 17

Vybrané sloučeniny podle vynálezu se testují na svojí schopnost antagonizovat fenylefrinem (PE) zavedené zvýšení intrauretrálního tlaku u psů. Selektivita těchto sloučenin se demonstruje porovnáním jejich účinku na PE indikuvané zvýšení středního arteriálního tlaku (MAP) u psa.

Samci malého stavěcího psa se anestetizují a cévkují k měření intrauretrálního tlaku (IUP) v prostatické močové trubici. Střední arteriální tlak (MAP) se měří za použití katétry umístěné ve femorální arterii. Psům se na počátku podá šest i.v. bolusových dávek (1 až s 32 mg/kg) fenylefrinu (PE) ke stabilizaci kontrolní agonistové křivky dávka agonistu-odezva. IUP a MAP se zaznamenávají po každé následující dávce dokud se IUP nevrátí na základní hladinu. Psům se potom podá i.v. bolusová dávka antagonistové sloučeniny, následovaná i.v. PE stimulů vzestupných dávek jak • · ·· ·· • · ♦ · • · · · • · · « · · • ♦ * · · ·

je uvedeno v kontrolní agonistové křivce dávka agonistu-odezva. Zaznamená se IUP a MAP měření následující každý PE stimul. Antagonistická sloučenina se zkoumá v dávkovém rozsahu 3 až 300 ^g/kg v polovičních inkrementech. Interval mezi dávkami antagonistu je alespoň 45 minut a provedly se tři experimenty na dávku pro každou testovanou sloučeninu. Graf uvedený dále zobrazuje střední procentuální redukce v IUP a MAP pro sloučeninu 5 a 12.

Účinky sloučeniny 5 na

IUP a MAP při 10 ^tg/kg PE u psů

Účinky sloučeniny 5 na IUP a MAP při 10

Ag/kg PE u psů

IUP

MAP «·· · ··· ·♦«

ODKAZY

Breslin D, Fields DW, Chou T-C, Marion DN, Kane M, Vaughan ED, and Felsen D (1993) Medical management of benign prostatic hyperplasia: a canine model comparing the in vivo efficacy of alpha-1 adrenergic antagonists in the prostatě.

J. Urol. 149: 395-399.

Bruno JF, Whittaker J, Song J, and Berelowitz M. (1991) Molecuar cloning and sequencing of a cDNA encoding a human a IA adrenergic receptor. Biochem. Biophys, Res. Commun. 179: 1485-1490.

Bylund DB, Eikenberg DC, Hieble JP, Langer SZ, Lefkowitz RJ, Minneman KP, Molinoff PB, Ruffolo RR, and Trendelenburg U (1994) IV. International Union of Pharmacology nomenclature of adrenoceptors. Pharmacol. Rev. 46: 121-136.

Carruthers SG (1994) Adverse effects of a 1-adrenergic blocking drugs. Drug Safety 11: 12-20.

Faure C, Gouhier C, Langer SZ, and Graham D (1995)

Quantification of al-adrenoceptor subtypes in human tissues by competitive RT-PCR analysis. Biochem. Biophys. Res.

Commun. 213: 935-943.

Flavahan NA and VanHoutte PM (1986) a-Adrenoceptor classification in vascular smooth muscle. Trends Pharmacol. Sci. 7: 347-349.

Ford APDW, Arredondo NF, Blue DR, Bonhaus DW, Jasper J Dava MS, Lesnick J, Pfister JR, Shieh IA, Vimont RL, Williams RJ, McNeal JE, Stamey TA, and Clarke DE (1996) RS-17053 (N-[2-(2-Cyclopropylmethoxyphenoxy)ethyl]-5-chloro-a, a-dimethyl-ΙΗ-indole-3-ethanamine hydrochloride), a selective αΙΑ-adrenoceptor antagonist, displays low affinity for • fc ♦ · · · • · · ♦ • · ··· · ·* · • ···· functional a 1-adrenoceptors in human prostatě: Implications for adrenoceptor classification. Mol. Pharmacol. 49: 209-215.

• fc • fcfc fc • fc

Forray C, Bard JA, Wegzel JM, Chiu G, Shapiro E, Tang R,

Lepor H, Hartig PR, Weinshank RL, Branchek TA, and Gluchowski C (1994) The αΐ-adrenergic receptor that mediates smooth muscle contraction in human prostatě has the pharmacological properties of the cloned human ale subtype. Mol. Pharmacol. 45: 703-708.

Gormley G, Stoner E, Bruskewitz RC et al. (1992) The effects of finasteride in men with benign prostatic hyperplasia. N. Engl. J. Med. 327: 1185-1191.

Hatano A Takahashi H, Tamaki M, Komeyama T, Koizumi T, and Takeda M (1994) Pharmacological evidence of distinct αΐ-adrenoceptor subtypes mediating the contraction of humanprostatic urethra and peripheral artery Br. J. Pharmacol. 113: 723-728.

Harrison JK, Pearson WR, and Lynch KR (1991) Molecular characterization of al- and al-adrenoceptors. Trends Pharmacol. Sci. 12: 62-67.

Hieble JP and Caine M (1986) Etiology of benign prostatic hyperplasia and approaches to pharmacological management. Fed. Proč. 45: 2601-2603.

Hirasawa A, Horie K, Tanaka T, Takagaki K, Murai M, Yano J, and Tsujimoto G (1993) Cloning, functional expression and tissue distribution of human cDNA for the a lc-adrenergic receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 195: 902-909.

Holek CM, Jones CHM, and Haeusler G (1983) Differential interactions of clonidine and methoxamine with postsynaptic α-adrenoceptors of rabbit main pulmonary artery. Cardiovasc.

4

9

4 • 4 4

4

994 • ·Φ·Φ

Res. 5: 240-248.

Lepor H and Rigaud G (1990) The efficacy of transurethral resection of the prostatě in men with moderate symptoms of prostatism. J. Urol. 143: 533-537.

Lepor H, Auerbach S, Puras-Baez A et al placebocontrolled multi-center study of safety of terazosin in the treatment of hyperplasia. J. Urol. 148: 1467-1474.

(1992) A randomized, the efficacy and benign prostatic

Lepor H (1995) (BPH) J. Clin.

a-Blockade

Endocrinol for benign prostatic Metab. 80: 750-753.

hyperplasia

Marshall I, Buřt RP, Andersson PO, Chapple CR, Greengrass PM, Johnson GI, and Wyllie MG (1992) Human alc-adrenoceptor: functional characterisation in prostatě. Br. J. Pharmacol.

107 (Proč. Suppl. Dec.): 327P.

Marshall I, Buřt RP, and Chapple CR (1995) Noradrenaline contraction of human prostatě mediated by alA-(ale-)adrenoceptor subtype. Br. J. Pharmacol. 115: 781-786.

Mebust WK, Holtgrewe HL, Cockett ATK, and Peters PC (1989) Transurethral prostatectomy: immediate and postoperative complication: A cooperative study of 13 participating institutions evaluating 3,885 patients J. Urol, 141: 243-247.

Minneman KP, Han C and Ábel PW (1988) Comparison of αΐ-adrenergic receptor subtypes distiguished by chloroethylclonidine and WB4101. Mol. Pharmacol. 33: 509-514.

Minneman KP and Esbenshade TA (1994) al-Adrenergic receptor subtypes. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 34: 117-133.

Morrow AL and Creese I (1986) Characterization of • · 0 0 ♦ 0 0 0

000 0000

0 «00 al-adrenergic receptor subtypes in rat brain: A reevaluation of [3H]WB4101 and [3H]prazosin binding. Mol. Pharmacol. 29:

321-330.

Muramatsu I (1992) A pharmacological perspective of al-adrenoceptors: subclassification and functional aspects, in α-Adrenoceptors (Fujiwara M, Sugimoto T, and Kogure K, eds.). Excerpta Medica Ltd., Tokyo, 193-202.

Muramatsu I, Oshita M, Ohmura T, Kigoshi S, Akino H, Gobara M, and Okada K (1994) Pharmacological characterization of al-adrenoceptor subtypes in the human prostatě: functional and binding studies. Br. J. Urol. 74: 572-577.

Oesterling JE (1995) Benign prostatic hyperplasia. Medical and minimally invasive treatment options. N. Engl. J. Med. 332: 99-109.

Price DT, Lefkowitz RJ, Caron MG, Berkowitz D, and Schwinn DA (1994) Localization of mRNA for three distince al-adrenergic receptor subtypes in human tissues: implications for human α-adrenergic physiology. Mol. Pharmacol. 45: 171-175.

Ramarao CS, Kincade Denker JM, Perez DM, Gaivin RJ, Riek RP, and Graham RM (1992) Genomic organization and expression of the human alB-adrenergic receptor. J. Biol. Chem. 267: 21936-21945.

Schwinn DA, Johnston Gl, Page SO, Mosley MJ, Wilson KH,

Worman NP, Campbell S, Fidock MD, Furness LM, Parry-Smith DJ, Peter B, and Bailey DS (1995) Cloning and pharmacological characterization of human alpha-1 adrenergic receptors: sequence corrections and direct comparison with other species homologues. JPET 272: 134-142.

Weinberg DH, Trivedi P, Tan CP, Mitra S, Perkins-Barrow A,

Borkowski D, Strader CD, and Bayne M (1994) Cloning, expression and characterization of human a adrenergic receptors alA, alB, and alC. Biochem. Biophys. Res. Commun. 201: 1296-1304.

Weis KA, Epstein RS, Huse DM, Deverka PA and Oster G (1993) The costs of prostatectomy for benign prostatic hyperplasia. Prostatě 22: 325-334.

Wennberg JE, Roos N, Sóla L, Schori A, and Jaffe R (1987) Use of claims data systems to evaluate health care outcomes: mortality and reoperation following prostatectomy. JAMA 257: 933-936.

Yamada S, Tanaka C, Kimura R, and Kawabe K (1994) Alpha 1-adrenoceptors in human prostatě: characterization and binding characteristics of alpha 1-antagonists. Life Sci. 54: 1845-1854.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

Arylsubstituovaný piperazin obecného vzorce I kde:

A znamená (CH₂)_n kde n je 1 až 6 R^ znamená C₁_galkyl, fenyl, substituovaný fenyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-^.^alkyl, Cx_₅alkoxy a halogen, fenylCx_₅alkyl nebo substituovaný fenylC₁_₅alkyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C₁_₅alkyl, C₁_₅alkoxy a halogen;

R₂ znamená vodík, C₁_galkyl, C₂_₅alkenyl, C₂_₅alkinyl, fenylC₁_₅alkyl, nebo substituovaný fenyl C₁_₅alkyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující Cx_₅alkyl,

Οχ_5alkoxy a halogen;

E znamená • · · · • · ··· · • · · *· *· nebo kde m je 1 až 5;

R₃ je vodík, C-^galkyl nebo kyslík, kde jestliže R^ je kyslík, čárkovaná vazba znamená vazbu a je-li R₃ C₁_galkyl, čárkovaná čára není přítomná;

R₄ znamená kyslík, vodík, C₁_₅alkyl, formyl, karboxy, C-]__₅alkylkarbonyl, C-j__₅alkoxykarbonyl, fenylC₁_₅alkoxy, substituovaný fenylC₁_₅alkoxy kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C₁_^alkyl, C-]__₅alkoxy a halogen, amido a substituovaný amido kde dusíkaté substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahujících vodík, C₁_galkyl, C-]__₅alkoxy a hydroxy, kde pokud R₄ znamená kyslík, pak čárkovaná čára znamená vazbu a jestliže R₄ je jiný substituent, není čárkovaná čára přítomná;

R₅ znamená vodík, C-j__₅alkyl nebo společně s R₅ tvoří cyklohexanový, cyklopentanový nebo cyklopropanový kruh;

Rg znamená vodík, C-^galkyl nebo společně s R₅ tvoří φφ •

> φ φφφ φ

«φ • «φφφ • · φ φ • · · φ * · · · • · «φφ • · φ ·· φφ φ φ • φ • « • φ φ φ

φ φ cyklohexanový, cyklopentanový nebo cyklopropanový kruh;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
2. Arylsubstituované piperaziny podle nároku 1, kde Rznamená C₁_galkyl, n je 2 až 4a R₂ je vodík, C₁_galkyl nebo C₂_galkenyl.
3. Arylsubstituované piperaziny podle nároku 2 kde E znamená
4. Arylsubstituované piperaziny podle nároku 2, kde R₃ je kyslík a R₄ je vodík, alkoxykarbonyl nebo kyslík.
5. Arylsubstituované piperaziny podle nároku 4, kde R₄ je vodík a E je
6. Arylsubstituované piperaziny podle nároku 5, kde m je 2 až 5
7. Arylsubstituované piperaziny a jejich farmaceuticky přijatelné soli vybrané ze skupiny, která zahrnuje N-[ethyl-2-(2-isopropyloxyfenyl)piperazin-4-yl)]-[!'-(2-oxypiperidinyl)Jacetamid, N-[ethyl-2-(2-isopropyloxyfenyl)piperazin-4-yl)]-N-methyl-[1'-(2-oxypiperidinyl)]acetamid, • · · * « · · · • * · ·«· • « ·· ♦· a N-[propyl-3-(2-isopropyloxyfenyl)piperazin-4-yl)]-[1'-(2-oxypiperidinyl)]acetamid.
8. Sloučenina N-[ethyl-2-(2-isopropyloxyfenyl)piperazin-4-yl) ] [1¹ -(2-oxypiperidinyl)]acetamid a její farmaceuticky přijatelné soli.
9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
10. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu podle nároku 6 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
11. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu podle nároku 8 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
12. Způsob léčby nemoci zprostředkované a-l_a adrenergickým receptorem, vyznačující se tím, že se podá pacientovi sloučenina podle nároku 1 v účinné dávce.
13. Způsob léčby nemoci zprostředkované a-l_a adrenergickým receptorem, vyznačující se tím, že se podá pacientovi sloučenina podle nároku 6 v účinné dávce.
14. Způsob léčby nemoci zprostředkované a-l_a adrenergickým receptorem, vyznačující se tím, že se podá pacientovi sloučenina podle nároku 8 v účinné dávce.
15. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že se sloučenina podá orálně a účinná dávka je 0,01 až 100 mg/kg denně.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačuj ící tím, že dávka je 0,05 až 1 mg/kg denně.
17. Způsob léčby benigní prostatické hyperplasie, vyznačující se tím, že se podá účinná dávka sloučeniny podle nároku 1.
18. Arylsubstituovaný piperazin obecného vzorce II

A znamená (CH₂)_n kde n je 1 až 6

R-j_ znamená rozvětvený C₂_₆alkyl, fenyl, substituovaný fenyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-|__₅alkyl, C₁_₅alkoxy a halogen, fenylC-j^alkyl nebo substituovaný fenylC-]__₅alkyl kde fenylové substituenty jsou nezávisle vybrány z jedné nebo více skupin obsahující C-j^alkyl, Ci_5alkoxy a halogen;

R₇ znamená BOC nebo CBZ.
19. Arylsubstituovaný piperazin podle nároku 18, kde n je 2 až 4 a je rozvětvený C₂_galkyl.
20. Arylsubstituovaný piperazin podle nároku 18, kde R₇ je vodík nebo BOC.
21. Arylsubstituovaný piperazin vybraný ze skupiny zahrnující • · · » · ·

1- (2-aminoethyl) -4- (2-2-.isopropyloxyfenyl)piperazin,

1-(3-aminopropyl)-4-(2-2-isopropyloxyfenyl)piperazin, a 1-(4-aminobutyl)-4-(2-2-isopropyloxyfenyl)piperazin.
22. Sloučenina 1-(aminoethyl)-4-(2-2-isopropyloxyfenyl)piperazin.
23. Sloučenina obecného vzorce III lil kde m j e 1, 3, 4 nebo 5.
24. Sloučenina podle nároku 23, kde m je 3 až 5.
25. Sloučenina, 1-terc.butoxykarbonylmethyl-2-piperidon.