[go: up one dir, main page]

CZ302175B6 - Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus - Google Patents

Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus Download PDF

Info

Publication number
CZ302175B6
CZ302175B6 CZ20004359A CZ20004359A CZ302175B6 CZ 302175 B6 CZ302175 B6 CZ 302175B6 CZ 20004359 A CZ20004359 A CZ 20004359A CZ 20004359 A CZ20004359 A CZ 20004359A CZ 302175 B6 CZ302175 B6 CZ 302175B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
leu
ala
gly
wall
ser
Prior art date
Application number
CZ20004359A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20004359A3 (en
Inventor
Benbadis@Laurent
Brignon@Pierre
Gendre@François
Original Assignee
Compagnie Gervais Danone
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9526604&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ302175(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Compagnie Gervais Danone filed Critical Compagnie Gervais Danone
Publication of CZ20004359A3 publication Critical patent/CZ20004359A3/cs
Publication of CZ302175B6 publication Critical patent/CZ302175B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1238—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus, uložený ve sbírce kultur CNCM 14. ledna 1998 pod císlem I-1968, nesoucí bodovou nonsense mutaci v kódové sekvenci pro .beta.-galaktosidázu a postrádající .beta.-galaktosidázovou aktivitu. Soucást rešení tvorí také mlécný zákvas, obsahující uvedený kmen, zpusob výroby zakvašeného mlécného výrobku pomocí tohoto zákvasu a výsledný zakvašený mlécný výrobek, zejména jogurt.

Description

Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus
Oblast techniky
Vynález se týká mutantního kmene Lactobacillus bulgaricus, uloženého ve sbírce kultur CNCM 14. ledna 1998 pod číslem 1-1968, nesoucího bodovou nonsense mutaci v kódové sekvenci pro β-galaktosidázu a postrádajícího β-galaktosidázovou aktivitu.
io
Dosavadní stav techniky
Jogurty se běžně získávají kvašením mléka kombinací kmenů Streptococcus thermophilus a Lactobacillus bulgaricus. Během kvašení, které se provádí při tepiotě přibližně 40 až 45 °C, používají tyto bakterie jako energetický substrát především laktózu a produkují kyselinu mléčnou, která působí srážení mléka. Tento krok kvašení (nazývaný také „acidifikace oky selo vání“) je ukončen ochlazením výrobku, jakmile jeho pH dosáhne hodnoty přibližně 4,8 až 4,5. Výrobek se pak během zbylého výrobního procesu, procesu balení a až do doby konzumace uchovává v chladu.
Ochlazení samozřejmě nezastaví kvašení mléčné kyseliny úplně; dokonce i pokud je výrobek uchováván při 4 °C, je v průběhu času pozorováno postupné zvyšování jeho kyselosti.
Tento jev, známý jako postacidifikace, dodatečné okyselování, je zodpovědný za degradaci orga25 noleptických kvalit (týkajících se chuti a vůně) výrobku během jeho uchovávání.
Dodatečné okyselování je výsledkem zejména toho, že bakterie, zvláště L. bulgaricus, využívají laktózu, zbývající ve výrobku na konci řízeného kroku okyselování. K odstranění tohoto jevu bylo navrženo použití kmenů L. bulgaricus, které kvasí laktózu jen obtížně nebo vůbec.
Jedním z enzymů, které jsou pro kvašení laktózy nezbytné, je β-galaktosidáza, která hydrolyzuje laktózu na glukózu a galaktózu. Pro získání kmenů L. bulgaricus, nevytvářejících dodatečné okyselování, bylo proto navrženo vyrobit umělé mutanty, nebo vybrat přírodní mutanty, u nichž je aktivita tohoto enzymu nepříznivě ovlivněna.
Například patent EP 402 450 (Genencor) popisuje výrobu, prováděnou umístěnou mutagenezí genu β-galaktosidázy, podmíněných mutantů L. bulgaricus, u nichž β-galaktosidáza, která je aktivní během kvašení při 40 °C, ztrácí svou aktivitu při teplotě anebo při pH, které odpovídají podmínkám uchovávání kvašených mléčných výrobků.
Patentová přihláška JP 90053437 popisuje výrobu umělého mutantu L. bulgaricus, který zcela ztratil schopnost kvasit laktózu, a výběr přírodního mutantu se sníženou schopností kvasit laktózu; tyto mutanty jsou ovšem oba schopné normálního vývoje a okyselování v přítomnosti 5. thermophilus, pod podmínkou, že je médium doplněno glukózou. Vedlejší kultury takových mutantů zachovávají jejich charakteristiky okyselování, v mléku postrádajícím glukózu, i po deseti pasážování (subkulti vacích).
Patent EP 0518 096 (Societé des Produits Nestlé) navrhuje použít pro výrobu jogurtu chabě dodatečně okyselující mutanty L. bulgaricus, které byly předem vybrány podle kriteria delece (vypadnutí) fragmentu β-galaktosídázového genu. Plošné testování (screening) a charakterizace těchto mutantů je usnadněno skutečností, že přítomnost této delece může být snadno ověřena na restrikčních profilech.Navíc jsou delece známé jako nezvratné mutace, což umožňuje snadné získání stálých mutantních kmenů z rodičovského kmenu. Patent 0518 096 popisuje dva typy slabě dodatečně okyselujících mutantů, vybraných tímto způsobem. První vykazuje deleci, ovliv55 ftující pouze gen β-galaktosidázy; pokud jsou takové mutanty kombinovány se 5. thermophilus
- 1 CZ 302175 B6 a kultivovány na mléce, vykazují i bez přídavku glukózy růstové a oky sel uj ící vlastnosti, které jsou srovnatelné s týmiž vlastnostmi u divokých kmenů, z nichž pocházejí. Druhý typ vykazuje širší deleci, prostírající se po genu β-galaktosidázy v rozsahu nejméně lkb; pokud jsou takové mutanty kombinovány se V thermophilus, rostou mnohem pomaleji a mnohem méně okyselují než divoké kmeny, z nichž pocházejí. Přidání glukózy do kultivačního média mělo na jejich okyselující a dodatečně okysel uj ící vlastnosti pouze slabý vliv.
Přírodní mutanty, u nichž je β-galaktosidáza neaktivní, je mnohem obtížnější vybrat a udržovat jako čisté kultury v případě bodových mutací než v případě delečních mutací; to se vysvětluje nižší pravděpodobností bodových mutací, vytvářejících neaktivní bílkovinu, větší obtížností lokalizace a charakterizace bodových mutací za použití restrikčních profilů a velmi vysokou rychlostí zvratu.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří mutantní kmen Laetobacillus bulgaricus, uložený ve sbírce kultur CNCM 14. ledna 1998 pod číslem 1-1968, nesoucí bodovou nonsense mutaci v kódové sekvenci pro βgalaktosidázu a postrádající β-galaktosidázovou aktivitu. Součást řešení tvoří také mléčný zákvas, obsahující uvedený kmen, způsob výroby zakvašeného výrobku pomocí tohoto zákvasu a výsledný zakvašený výrobek.
Kmen L. bulgaricus podle vynálezu byl uložen, podle Budapešťské smlouvy, 14. ledna 1998 v CNCM (Collection Nationale de Cultures de Mikroorganismem, Národní sbírce kultur mikroorganismů), uchovávané Pasteurovým ústavem v Paříži (Pasteur Institute, 25 rue du Dočteur Roux, Paris) pod číslem 1-1968.
Tento kmen má následující morfologické a biochemické charakteristiky:
- morfologie: Gram-positivní mikroorganismus, nepohyblivým, isolovaný nebo o krátkém řetězci, asporogenní, pleomorfní, tenké bacily;
- metabolismus: homofermentativní (samokvasný), kataláza(-);
- kvašení cukrů: D-glukóza (+), D-fruktóza (-), (D-mannóza (+), eskulin (+).
Autoři vynálezu sekvenovali laktózový operon mutantu 1-1968. Odpovídající sekvence je představována v připojeném seznamu sekvencí pod označením sekvence identifikačního Čísla 1 (sekv. id. č. 1). Sekvence translačních produktů (permeáza a β-galaktosidáza) jsou představovány pod označením sekv. id. č. 2 a sekv, id. č.3.
Analýza této sekvence odkryla dvě bodové mutace: jedna, v permeázovém genu (poloha 122 na sekvenci id. č. 1), indukuje výměnu aminokyseliny (Lys -> Asn); druhý, v genu β-galaktosidázy, (poloha 4519 na sekvenci id. č. 1) vkládá tzv. „stop-kodon“. Třebaže zachovává svá aktivní místa (polohy 464 a 531), je β-galaktosidáza produkovaná tímto mutantem inaktivní. Autoři vynálezu rovněž zaznamenali, že tato mutace zůstává stále po několika sériích pasážování, v kultivačním médiu obsahujícím glukózu. Na druhé straně v kultivačním médiu bez obsahu glukózy se tato nonsens ní mutace velmi rychle navrací do původního stavu (revertuje) tempem přibližně 10“6.
Předkládaný vynález rovněž zahrnuje mutantní kmeny, které jsou neschopné asimilovat laktózu a které jsou odvozeny od kmene 1-1968. Takové kmeny mohou být například získány indukováním jiných mutací na laktózovém operonu kmene 1-1968, místně řízenou mutagenezí.
-2CZ 302175 B6
Předmětem tohoto vynálezu je rovněž mléčný zákvas, konkrétně jogurtový zákvas, který se vyznačuje tím, že zahrnuje alespoň jeden kmen L. bulgaricus podle vynálezu jak byl výše definován, s výhodou v kombinaci s alespoň jedním kmenem 5. thermophilus.
K produkci zákvasu podle vynálezu může být použit jakýkoli kmen 5. thermophilus, hodící se pro výrobu jogurtu; výběr jednoho nebo více kmenů S. thermophilus může být činěn jako funkce přídavných charakteristik, které je volitelně žádoucí poskytnout konečnému výrobku.
Jako příklad kmenů S. thermophilus, jež mohou být použity v kombinaci s kmenem L. bulgaricus io podle vynálezu, lze zmínit následující kmeny, uložené v CNCM (Collection Nationale de Cultures de Mikroorganismes, Národní sbírce kultur mikroorganismů), uchovávané Pasteurovým ústavem v Paříži (Pasteur Institute, 25 rue du Docteur Roux, Paris):
- kmen uložený 25. srpna 1994 pod číslem 1-1470 a kmen uložený 23. srpna 1995 pod číslem I15 1620; tyto dva kmeny jsou popsány v Evropské patentové přihlášce, zveřejněné pod číslem
96/06924;
-kmeny uložené 30. prosince 1994 pod čísly 1-1520 a 1-1521; tyto dva kmeny jsou popsány v PCT mezinárodní přihlášce WO 96/20607;
-kmen uložený 24. října 1995 pod číslem 1-1630; charakteristiky tohoto kmene jsou popsány v PCT mezinárodní přihlášce WO 96/01701.
Tyto kmeny mohou být kombinovány spolu navzájem anebo s jedním či více z dalších průmyslo25 vých kmenů S. thermophilus.
Kmen (kmeny) S. thermophilus je (jsou) kombinován (kombinovány) s kmenem (kmeny) L. bulgaricus podle vynálezu, stejným způsobem a ve stejných poměrech jako v běžných jogurtových zákvasech; populace bakterie L. bulgaricus podle vynálezu může například představovat 10 až
90 % a lépe 20 až 50 % celkové bakteriální populace.
Předmětem předkládaného vynálezu je také způsob výroby kvašeného mléčného výrobku, který se vyznačuje tím, že zahrnuje krok, během něhož se mléko kvasí za použití zákvasu, zahrnujícího alespoň jeden kmen L. bulgaricus podle vynálezu, v přítomnosti alespoň jednoho cukru, který může být asimilován uvedeným kmenem; zvláště se může jednak o fruktózu, mannózu, a s výhodou glukózu. Uvedený kvašený výrobek je s výhodou jogurt.
Způsob podle vynálezu je podobný běžným způsobům výroby jogurtu s ohledem na hlavní způsoby provedení kroku řízeného okyselování; konkrétně se toto okyselování provádí při teplotě mezi 20 a 45 °C a s výhodou mezi 30 a 45 °C, vsádkově, tj. v jediném kroku a za použití jednoho kvasného tanku.
Trvání tohoto kroku řízeného okyselování je obecně 6 až 24 hodin a s výhodou 6 až 16 hodin; je tedy delší než v případě běžných způsobů výroby jogurtů (kde je to 3 až 5 hodin při 44 °C).
Kmeny L. bulgaricus podle tohoto vynálezu, i v kombinaci se S. thermophilus, rostou a okyselují mnohem pomaleji než kmeny divokého typu.
Navíc se rychlost růstu a okyselování kmenů L. bulgaricus podle tohoto vynálezu liší velmi významně v závislosti na množství glukózy přidané do mléka. Tato vlastnost umožňuje řídit jejich růst a okyselování jednoduchým přidáním požadovaného množství glukózy na počátku kvašení.
Autoři vynálezu rovněž pozorovali, že pokud jsou použity kmeny L. bulgaricus nebo zákvas podle tohoto vynálezu, okyselování se značně zpomaluje, pokud pH dosáhne hodnot v rozmezí 4,8 až
4,5 (což odpovídá rozmezí hodnot pH, v němž je okyselování zastaveno v případě běžných způ-3CZ 302175 B6 sobů) a stabilizuje se, i když se mléko udržuje při teplotě kvašení, na minimálním pH. Hodnota tohoto minimálního pH zásadné závisí na množství přidané glukózy.
Tato vlastnost umožňuje snížit, nebo dokonce odstranit, fázi chlazeni, používanou v běžných způsobech výroby jogurtů k zastavení kvašení. Odstraňuje také nutnost měření pH pro stanovení optimálního okamžiku k zastavení kvašení; u daného zákvasu a za daného množství přidané glukózy je možné, bez rizika překyselení, zastavit kvašení na konci daného časového období, vypočítaného jako funkce času, požadovaného pro dosažení minimálního pH. To umožňuje lepší kontrolu pravidelnosti konečného pH a struktury výrobku na konci kvašení.
Pro uskutečnění způsobu podle vynálezu a v závislosti na stupni okyselení, kterého je žádoucí dosáhnout, činí výhodně množství glukózy přidávané do mléka před kvašením 0,5 až lOg.l 1 a lépe 0,5 až 5 g.l
Kvašený výrobek získaný tímto způsobem může být uchováván po několik hodin pri teplotě blízké teplotě kvašení, bez poklesu pH, což umožňuje odstranit zařízení pro uchovávání meziproduktu v chladu a zvýšit kapacity kvasných tanků.
Uplatňování způsobu podle vynálezu umožňuje snížení dodatečného okyselení v kvašených výrobcích během jejich delší doby uchovávání. Stupeň dodatečného okyselení se může lišit v závislosti na složení zákvasu a na množství použité glukózy. Ovšem dodatečné okyselení je vždy jasně nižší než to, ktereje pozorováno v případě jogurtů, získaných s běžným zákvasem a běžnými způsoby.
Například pokusy, prováděné autory vynálezu, ukázaly, že za stejných podmínek uchovávání (28 dnů uchovávání při 10 °C) je Δ pH (rozdíl mezi pH v den 0, tj. DO a pH v den 28, tj. D28) mezi 0,05 a 0,4 v případě výrobků získaných za použití zákvasu podle vynálezu, zatímco v případě kontrolního zákvasu, kdy je kmen L. bulgaricus podle vynálezu nahražen kmenem divokého typuje Δ pH vždycky větší než 0,7.
Toto slabé dodatečné okyselování je doprovázeno dobrým přežíváním kmenů zahrnutých v zákvasu; populace L. bulgaricus je v kvašeném výrobku získaném podle vynálezu na konci uchovávání pouze mírně menší než v kontrolním výrobku.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také kvašené mléčné výrobky, které mohou být získány prováděním způsobu podle vynálezu.
Tyto výrobky mohou být uchovávány po dlouhou dobu a při vyšších teplotách než výrobky získané za použití běžných metod, ajejich organoleptické vlastnosti zůstávají během uchovávání stálé.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Biochemické testování β-galaktosidázové aktivity mutantu podle vynálezu
Aktivitu β-galaktosidázy kmene 1-1968 byla srovnána s toutéž aktivitou u kmene divokého typu L. bulgaricus (dále zde označovaného LbS), od něhož byl odvozen.
Bakterie se kultivují přes noc na MRS agarovém médiu (Merck) pri 37 °C v anaerobní nádobě (Merck) v přítomnosti zprostředkovatele kyslíku (AnaerocultA, Merck).
-4CZ 302175 B6
Klička bakterií, mající objem 10 μΐ (Nunc), byla resuspendována v 1 ml sterilní vody. Bakterie byly lyžovány 2 cykly důkladného protřepávání, 20 sekund při rychlosti otáčení 5000 otáček za minutu v přítomnosti skleněných perliček (0,5 mm v průměru, BIOSPEC PRODUCTS) a poté přidáním OJ 5 ml chloroformu. Směs byla protřepávána 30 minut při 37 °C a objem byl upraven na 2 ml sterilní vodou při 4 °C. Poté byla měřena aktivita β-galaktosidázy. Reakce byla započata tak, že k 0,2 ml buněčné suspenze bylo přidáno 1,2 ml 0,067 mol.l“1 NaH2PO4 pufru o pH 6,8, poté 0,05 ml L-cysteinu (SIGMA) a v čase t=0 0,05 ml o-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (SIGMA). Enzymová reakce byla zastavena po 0, 2, 5 nebo 10 minutách přidáním 1 ml 10% Na2CO3 pufru a po odstředění reakčního média bylo v supematantu prováděno měření OD (optιοί o ké hustoty) při 400 nm.
Galaktosidázové aktivity u LbS rodičovského kmene a u mutantu 1-1968 podle vynálezu, měřené jako funkce času, jsou uvedeny na obr. I.
Tyto výsledky ukazují, že β-galaktosidázaje u mutantu podle vynálezu zcela inaktivní.
Příklad 2
Stálost 1-1968 mutantního kmene L. bulgaricus
Stálost mutantu 1-1968 byla testována v médiu, obsahujícím jako zdroj uhlíku buď směs glukózy a laktózy, nebo pouze laktózu.
Kultura 1-1968, získaná v médiu MRS obsahujícím glukózu, byla pěstována ve vedlejší kultuře na sterilizovaném mléku, doplněném kvasnicovým autolyzátem (2 g/1), která mohla nebo nemusela být doplněna glukózou (20 g/1). Po dosažení pH v hodnotě 5,2 (srážení mléka) byly z každé vedlejší kultury odebrány vzorky, z nichž se určovala schopnost bakterií kvasit cukry a přítomnost β-galaktosidázové aktivity (X-gal deskové stanovení: bílé kolonie = β-galaktosidáza minus;
modré kolonie - β-galaktosidáza plus).
Výsledkyjsou uvedeny níže v Tabulce 1.
Tabulka 1
médium mléko + glukóza (20 g/1) mléko
doba k dosažení pH 5,2 6 hodin 20 hodin
kvašení cukrů glukóza, fruktóza, mannóza laktóza, glukóza, fruktóza, mannóza
X-gal deskové stanovení 100 % bílých kolonií 20 % bílých kolonií 80 % modrých kolonií
Tyto výsledky ukazují, že v přítomnosti glukózy se kmen 1-1968 nemění na kmen, schopný 40 využívat laktózu. Naproti tomu v médiu, obsahujícím laktózu jako jediný zdroj uhlíku, byl pozorován rychlý zvrat kmene 1-1968 do původního stavu.
-5CZ 302175 B6
Příklad 3
Okyselování, dodatečné okyselování a podmínky přežití varianty 1-1968 L. bulgaricus v symbió5 ze ze S. thermophilus\ Způsob výroby stabilizovaného jogurtu (kvašení ve větrané sušárně).
Jogurtové zákvasy byly připraveny spojením kmene 1-1968 podle vynálezu s různými průmyslovými kmeny 5. thermophihts (použité kmeny S. thermophihts jsou zde dále nazývány STÍ, ST2 a ST3).
io
Pro srovnání byly zákvasy připraveny také spojením LbS rodičovského kmene a stejných kmenů
5. thernwphilus.
Pro přípravu zákvasů byly kmeny zakvašeny odděleně na 1% na následující směsí:
složení pro 1 litr:
135 g práškového odstředěného mléka 2 g kvasnicového autolyzátu
920 ml destilované vody g glukózy (pouze pro kmen 1-1968) hydratace: 10 minut pasterizace: 30 minut při 95 °C
Mléko bylo poté ochlazeno na 44 °C a zaočkováno a následně inkubováno pri teplotě 44 °C až k dosažení kyselosti 85 °D (Dornicovy stupně) pro streptokoky a 80 °D pro laktobacily.
Kultury pak byly ochlazeny k zisku zákvasu obsahujícího 80% Streptococcus thermvphilus a 20 % Lactobacillus bulgaricus.
Takto připravené zákvasy byly použity k zaoěkování následujícího přípravku:
složení pro 1 litr:
99 % mléka
0, I nebo 2 g/1 glukózy hydratace: 10 minut pasterizace: 10 minut při 95 °C
Mléko pak bylo ochlazeno na 44 °C a zaočkováno na 1%.
Složení zákvasu a množství přidané glukózy je pro každý pokus uvedeno níže v Tabulce II.
-6CZ 302175 B6
Tabulka II
pokus glukóza (g/1) kmeny procenta
1 0 ST3 ST2 LbS 64% 16% 20 %
2 0 ST3 ST2 1-1968 64% 16 % 20 %
3 1 ST3 ST2 1-1968 64 % 16 % 20 %
1 4 0 STÍ LbS 80 % 20 %
5 0 STÍ 1-1968 80 % 20 %
6 2 STÍ 1-1968 80 % 20 %
Po zaočkování bylo mléko umístěno do baněk s kulatým dnem a inkubováno při teplotě 44 °C. Během inkubace byl monitorován profil okyselování. Výrobky byly při pH 4,6 zachovány nesražené ochlazením v chladicí jednotce (16 hodin pri 4 °C), io Poté byly výrobky podrobeny testu uchovávání při 10 °C. V tomto testu byla měřena hodnota pH a Domicova kyselost po l, 14, 21, a 28 dnech uchovávání.
Výsledky okyselování (doba k dosažení pH 4,6 a hodnota pH v Čase 24 hodin) jsou uvedeny níže v Tabulce lil:
- 7 CZ 302175 B6
Tabulka IH
pokus doba k dosažení pH 4,6 (min) doba k dosažení pH 4,5 (min) pH v čase 24 hodin
1 215 236 3,67
2 550 778 4,33
3 416 507 4,26
4 225 241 3,67
5 660 > 1500 4,54
6 390 465 4,35
Výsledky testu uchovávání při 10°C (monitorování pH a Domicovy kyselosti) a testu přežití (populace S. thermophilus a L. bulgaricus) po 28 dnech jsou uvedeny níže v Tabulce IV:
-8CZ 302175 B6
Tabulka IV
pokus doba skladování (dny) pH Dornicova kyselost S. thermophilus (buftky/ml) L. bulgaricus (buftky/ml)
1 1 4,41 101 7.25E+08 3,35E+08
14 3,98 140 ND ND
21 3,95 145 ND ND
28 3,9 148 7,35E+08 3,30E+O8
2 1 4,5 93 5,60E+08 2,90E+07
14 4,23 110 ND ND
21 4,18 112 ND ND
28 4,19 114 5,65E+08 1,87E+O7
3 1 4,49 96 6,90E+08 7,45E+07
14 4,14 115 ND ND
21 4,15 117 ND ND
28 4,15 120 8,65E+08 6,3OE+07
4 l 4,39 105 6,30E+07 4,40E+08
14 3,91 145 ND ND
21 3,9 151 ND ND
28 3,85 157 4.70E+08 6,30E+08
5 1 4,6 85 9,05E+08 6,70E+07
14 4,58 80 ND ND
21 4,53 80 ND ND
28 4,61 79 9.40E+08 7,0OE+O7
6 1 4,51 89 l,05E+09 l,96E+08
14 4,38 90 ND ND
21 4,39 96 ND ND
28 4,42 90 l,62E+09 l,91E+08
ND = nestanoveno
Tyto výsledky ukazují, že jogurty, vyráběné za použití symbiózy, spojující kmen 1-1968 s jedním nebo dvěma kmeny 5. thermophilus, vykazují výrazně snížené dodatečné okyselování vzhledem ke stejné symbióze s rodičovským kmenem LbS, a současně uchovávají bohatou populaci až do io konce kvašení a dobré přežívání po 28 dní při 10 °C.
-9CZ 302175 B6
Zastavení okyseIování a udržování pH kolem 4,6 až 4,5 po alespoň 24 hodin pří 44 °C umožňuje, v kontextu výroby míchaného jogurtu, snížit nebo dokonce odstranit běžně používanou fázi ochlazování v tanku.
SEZNAM SEKVENCÍ io <1 IO> COMPAGNIE GERVAIS DANONE GENDRE, Fran9ois BENBAD1S, Laurent BR1GNON, Pierre <120> MUTANTNÍ KMENY LACTOBACILLUS BULGARICUS POSTRÁDAJÍCÍ β-GALAKTOSlDÁZOVOU AKTIVITU <130> MJPcbl9l/l43 <140>
<14l>
<150> FR9806456 <151> 1998-05-22 <160> 3 < 170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <21I> 5059 <212> DNA <213> Lactobacillus bulgaricus <220>
<221> CDS <222> (122)..(1873) <220>
<221> CDS <222> (1877)..(4519) <400> I gcttgtctca cgcttgtcgt acgcggccgg tgcctttggc aacgacgtct tctacgcgac 60 tctgtcaacc tactttatcg tcttcgtcac cacccacctc tttaatgccg gtgaccacaa 120 g atg atc ttt atc atc acc aac ttg atc acc gcc atc cgg atc ggg gaa 169 Met Ile Phe Ile Ile Thr Asn Leu Ile Thr Ala Ile Arg Ile Gly Glu
10 15
gtc Val ctg ctc gac ccc ttg atc ggt aac gcc atc gac cgg acc gaa agc
Leu Leu Asp 20 Pro Leu Ile Gly Asn 25 Ala Ile Asp Arg Thr 30 Glu Ser
cgg tgg ggg aag ttc aag ccc tgg gtt gtg ggc ggg ggg atc atc agc
Arg Trp Gly Lys Phe Lys Pro Trp Val Val Gly Gly Gly Ile Ile Ser
35 40 45
tca tta gcc ctc tta gcc ctc Leu 55 ttt acc gac ttt ggc ggc att aac caa Asn Gin 313
Ser Leu 50 Ala Leu Leu Ala Phe Thr Asp Phe Gly 60 Gly Ile
agc aac ccc gtt gtt tac tta gta atc ttc ggt att gtt tac ttg att 361
Ser Asn Pro Val Val Tyr Leu Val Ile Phe Gly Ile Val Tyr Leu Ile
65 70 75 80
atg gat atc ttc tac tca ttt aaa gac act ggc ttc tgg gcc atg atc 409
Met Asp Ile Phe Tyr Ser Phe Lys Asp Thr Gly Phe Trp Ala Met Ile
85 90 95
ccg gcc ttg tcc ctg gat tcc cgg gaa aga gag aag acc tcc acc ttc 457
Pro Ala Leu Ser Leu Asp Ser Arg Glu Arg Glu Lys Thr Ser Thr Phe
100 105 110
gcc aga gtc ggc tcc acc atc ggg gcc aac ctg gtc ggg gta gtc atc 505
Ala Arg Val Gly Ser Thr Ile Gly Ala Asn Leu Val Gly Val Val Ile
115 120 125
acc cca atc atc ctc ttc ttc tcg gcc agc aag gcc aac ccc aac ggg 553
Thr Pro 130 Ile Ile Leu Phe Phe Ser 135 Ala Ser Lys Ala Asn Pro 140 Asn Gly
gat aag cag ggc tgg ttc ttc ttt gcc ttg atc gtg gcc att gtc ggc 601
Asp Lys Gin Gly Trp Phe Phe Phe Ala Leu Ile Val Ala Ile Val Gly
145 150 155 160
atc ttg acc tca att acc gtt ggt ctt ggt .act cac gaa gta aaa tcc 649
Ile Leu Thr Ser Ile Thr Val Gly Leu Gly Thr His Glu Val Lys Ser
165 170 175
gcc ctg cgg gaa agc aat gaa aag acc act ttg aag cag gtc ttt aag 697
Ala Leu Arg Glu Ser Asn Glu Lys Thr Thr Leu Lys Gin Val Phe Lys
180 185 190
gtc ctg ggg caa aac gac cag ctc ctc tgg ctg gcc ttt gcc tac tgg 745
Val Leu Gly Gin Asn Asp Gin Leu Leu Trp Leu Ala Phe Ala Tyr Trp
195 200 205
ttt tac ggc ctg ggt atc aac acc ctg aac gct .ctg caa ctt tac tac 793
Phe Tyr Gly Leu Gly Ile Asn Thr Leu Α3Π Ala Leu Gin Leu Tyr Tyr
210 215 220
ttc tca tac atc tta ggc gat gcc cgc ggc tac agc ctg ctt tac acc 841
Phe Ser Tyr Ile Leu Gly Asp Ala Arg Gly Tyr Ser Leu Leu Tyr Thr
225 230 235 240
atc aac acc ttt gtc ggt tta atc tet gca tcc ttc ttc cca tca ctg 889
ne Asn Thr Phe Val Gly Leu Ile Ser Ala Ser Phe Phe Pro Ser Leu
245 250 255
gcc aag aag ttc aac aga aat cgc ctc ttc tac gcc tgc atc gcg gtg 937
Ala Lys Lys Phe Asn Arg Asn Arg Leu Phe Tyr Ala Cys Ile Ala val
260 265 270
atg ctg tta ggg atc ggg gtc ttc tcc gtg gcc agc ggt tet ctg gcc 985
Met Leu Leu Gly Ile Gly Val Phe Ser Val Ala Ser Gly Ser Leu Ala
275 280 285
ctg tcc ctt gtt ggg gca gaa ttc ttc ttt att ccg cag cct ctg gcc 1033
Leu Ser Leu Val Gly Ala Glu Phe Phe Phe Ile Pro Gin Pro Leu Ala
290 295 300
ttc ctg gtc gtt ttg atg atc atc tet gac gct gtt gaa tac ggc cag 1081
Phe Leu Val Val Leu Met Ile Ile Ser Asp Ala Val Glu Tyr Gly Gin
305 310 315 320
ctg aaa act ggc cac aga gac gaa gct ttg acc ctg tet gtc cgg cca 1129
Leu Lys Thr Gly His Arg Asp Glu Ala Leu Thr Leu Ser Val Arg Pro
325 330 335
-11CZ 302175 B6
ttg Leu gtc Val gat Asp aag Lys 340 ctg Leu ggc ggg gcc Gly Gly Ala ttg Leu 345 tcc Ser aac Asn tgg Trp ttt Phe gtt Val 350 tcc Ser ttg Leu 1177
att gcc tta act gcc ggc atg acc act ggg gcg act gcc tea aca att 1225
Ile Ala Leu Thr Ala Gly Met Thr Thr Gly Ala Thr Ala Ser Thr Ile
355 360 365
aca get cat ggc cag atg gtc ttc aag tta get atg ttt gcc tta ccg 1273
Thr Ala His Gly Gin Met Val Phe Lys Leu Ala Met Phe Ala Leu Pro
370 375 380
gca gtc atg ctc ttg atc get gtt tet att ttc gcc aaa aag gtc ttc 1321
Ala Val Met Leu Leu Ile Ala Val Ser Ile Phe Ala Lys Lys Val Phe
385 390 395 400
ttg act gaa gaa aag cac gcg gaa atc gtc gac cag ctg gaa act caa l3ťÝ
Leu Thr Glu Glu Lys His Ala Glu Ile Val Asp Gin Leu Glu Thr Gin
405 410 415
ttc age caa age cat gcc caa aag ccg gcg caa get gaa age ttc act 1417
Phe Ser Gin Ser His Ala Gin Lys Pro Ala Gin Ala Glu Ser Phe Thr
420 425 430
ttg gcc age cca gtc tcc gga caa tta atg aac ctg gac atg gtt gac 1465
Leu Ala Ser Pro Val Ser Gly Gin Leu Met Asn Leu Asp Met Val Asp
435 440 445
gac ccg gtc ttt gcc gac aaa aag tta ggc gac ggc ttt gcc ctg gtg 1513
Asp Pro Val Phe Ala Asp Lys Lys Leu Gly Asp Gly Phe Ala Leu Val
450 455 4 60
cca gca gac ggt aag gtc tac gcg cca ttt gcc ggt act gtc ege cag 1561
Pro Ala Asp Gly Lys Val Tyr Ala Pro Phe Ala Gly Thr Val Arg Gin
465 470 475 480
ctg gcc aag acc cgg cac tcg atc gtc ctg gaa aat gaa cat ggg gtc 1609
Leu Ala Lys Thr Arg His Ser Ile Val Leu Glu Asn Glu His Gly Val
485 490 495
ttg gtc ttg att cac ctt ggc ctg ggc acg gtc aaa tta aac ggg act 1657
Leu Val Leu Ile His Leu Gly Leu Gly Thr Val Lys Leu Asn Gly Thr
500 505 510
ggc ttt gtc age tat gtt gaa gag ggc age cag gta gaa gcc ggc cag 1705
Gly Phe Val Ser Tyr Val Glu Glu Gly Ser Gin Val Glu Ala Gly Gin
515 520 525
cag atc ctg gaa ttc tgg gac ccg gcg atc aag cag gcc aag ctg gac 1753
Gin Ile Leu Glu Phe Trp Asp Pro Ala Ile Lys Gin Ala Lys Leu Asp
530 535 540
gac acg gta atc gtg acc gtc atc aac age gaa act ttc gca aat age 1801
Asp Thr Val Ile Val Thr Val Ile Asn Ser Glu Thr Phe Ala Asn Ser
545 550 555 560
cag atg ctc ttg ccg atc ggc cac age gtc caa gcc ctg gat gat gta 1849
Gin Met Leu Leu Pro Ile Gly His Ser Val Gin Ala Leu Asp Asp Val
S65 570 575
ttc aag tta gaa ggg aag aat tag aaa atg age aat aag tta gta aaa 1897
Phe Lys Leu Glu Gly Lys Asn Met Ser Asn Lys Leu Val Lys
580 585 590
gaa aaa aga gtt gac cag gca gac ttg gcc tgg ctg act gac ccg gaa 1945
Glu Lys Arg Val Asp Gin Ala Asp Leu Ala Trp Leu Thr Asp Pro Glu
595 600 605
gtt tac gaa gtc aat aca att ccc ccg cac tcc gac cat gag tcc ttc 1993
Val Tyr Glu Val Asn Thr Ile Pro Pro His Ser Asp His Glu Ser Phe
610 615 620
- 12 CZ 302175 B6
caa agc Gin Ser 625 cag Gin gaa Glu gaa Glu ctg gag gag ggc aag tcc agt tta gtg cag tcc 2041
Leu Glu 630 Glu Gly Lys Ser Ser Leu Val 635 Gin Ser
ctg gac ggg gac tgg ctg att gac tac gct gaa aac ggc cag gga cca 2089
Leu Asp Gly Asp Trp Leu Ile Asp Tyr Ala Glu Asn Gly Gin Gly Pro
640 645 650 655
gtc aac ttc tat gca gaa gac ttt gac gat agc aat ttt aag tca gtc 2137
Val Asn Phe Tyr Ala Glu Asp Phe Asp Asp Ser Asn Phe Lys Ser Val
660 665 670
aaa gta ccc ggc aac ctg gaa ctg caa ggc ttt ggc cag ccc cag tat 2185
Lys Val Pro Gly Asn Leu Glu Leu Gin Gly Phe Gly Gin Pro Gin Tyr
675 680 685
gtc aac gtc caa tat cca tgg gac ggc agt gag gag att ttc ccg ccc 2233
Val Asn Val Gin Tyr Pro Trp Asp Gly Ser Glu Glu Ile Phe Pro Pro
690 695 700
caa att cca agc aaa aat ccg ctc gct tet tat gtc aga tac ttt gac 2281
Gin Ile Pro Ser Lys Asn Pro Leu Ala Ser Tyr Val Arg Tyr Phe Asp
705 710 715
ctg gat gaa gct ttc tgg gac aag gaa gtc agc ttg aag ttt gac ggg 2329
Leu Asp Glu Ala Phe Trp Asp Lys Glu Val Ser Leu Lys Phe Asp Gly
720 725 730 735
gcg gca aca gcc atc tat gtc tgg ctg aac ggc cac ttc gtc ggc tac 2377
Ala Ala Thr Ala Ile Tyr Val Trp Leu Asn Gly His Phe Val Gly Tyr
740 745 750
ggg gaa gac tcc ttt acc cca agc gag ttt atg gtt acc aag ttc ctc 2425
Gly Glu Asp Ser Phe Thr Pro Ser Glu Phe Met Val Thr Lys Phe Leu
755 760 765
aag aaa gaa aat aac cgc ctg gca gtg gct ctc tac aag tat tet tcc 2473
Lys Lys Glu Asn Asn Arg Leu Ala Val Ala Leu Tyr Lys Tyr Ser Ser
770 775 780
gcc tcc tgg ctg gaa gac cag gac ttc tgg cgc atg tet ggt ttg ttc 2521
Ala Ser Trp Leu Glu Asp Gin Asp Phe Trp Arg Met Ser Gly Leu Phe
785 790 795
aga tca gtg act ctt cag gcc aag ccg cgt ctg cac ttg gag gac ctt 2569
Arg Ser Val Thr Leu Gin Ala Lys Pro Arg Leu His Leu Glu Asp Leu
800 805 810 815
aag ctt acg gcc agc ttg acc gat aac tac caa aaa gga aag ctg gaa 2617
Lys Leu Thr Ala Ser Leu Thr Asp Asn Tyr Gin Lys Gly Lys Leu Glu
820 825 830
gtc gaa gcc aat att gcc tac cgc ttg cca aat gcc agc ttt aag ctg 2665
val Glu Ala Asn Ile Ala Tyr Arg Leu Pro Asn Ala Ser Phe Lys Leu
835 840 845
gaa gtg cgg gat agt gaa ggt gac ttg gtt gct gaa aag ctg ggc cca 2713
Glu Val Arg Asp Ser Glu Gly Asp Leu Val Ala Glu Lys Leu Gly Pro
850 855 860
atc aga agc gag cag ctg gaa ttc act ctg gct gat ttg cca gta gct 2761
Ile Arg Ser Glu Gin Leu Glu Phe Thr Leu Ala Asp Leu Pro Val Ala
865 870 875
gcc tgg agc gcg gaa aag cct aac ctt tac cag gtc cgc ctg tat tta 2809
Ala Trp Ser Ala Glu Lys Pro Asn Leu Tyr Gin Val Arg Leu Tyr Leu
880 885 890 895
- 13 CZ 302175 B6
tac Tyr cag gca ggc age Ser 900 ctc tta gag gtt age cgg cag gaa gtg ggt ttc Phe
Gin Ala Gly Leu Leu Glu Val Ser 905 Arg Gin Glu Val Gly 910
cgc aac ttt gaa cta aaa gac ggg att atg tac ctt aac ggc cag cgg
Arg Asn Phe Glu 915 Leu Lys Asp Gly Ile 920 Met Tyr Leu Asn Gly 925 Gin Arg
atc gtc ttc aag ggg gcc aac cgg cac gaa ttt gac agt aag ttg ggc
Ile Val Phe 930 Lys Gly Ala Asn Arg 935 His Glu Phe Asp Ser 940 Lys Leu Gly
cgg get atc aca gaa gag gat atg atc tgg gat atc aag acc atg aag
Arg Ala Ile 945 Thr Glu Glu Asp 950 Met Ile Trp Asp Ile 955 Lys Thr Met Lys
ega age aac atc aat get gtc cgc tgc tet cac tac ccg aac cag- tcc
Arg 960 Ser Asn Ile Asn Ala 965 Val Arg Cys Ser His 970 Tyr Pro Asn Gin Ser 975
ctc ttt tac cgg ctc tgt gac aag tac ggc ctt tac gtc att gat gaa
Leu Phe Tyr Arg Leu 980 Cys Asp Lys Tyr Gly 985 Leu Tyr Val Ile Asp 990 Glu
get aac ctg gaa age cac ggc acc tgg gaa aaa gtg ggg ggg cac gaa
Ala Asn Leu Glu 995 Ser His Gly Thr Trp L000 Glu Lys Val Gly Gly 1005 His Glu
gat cct age ttc aat gtt cca ggc gat gac cag cat tgg ctg gga gcc
Asp Pro Ser 1010 Phe Asn Val Pro Gly 1015 Asp Asp Gin His Trp 1020 Leu Gly Ala
age tta tcc cgg gtg aag aac atg atg get cgg gac aag aac cat get
Ser j Leu Ser .025 Arg Val Lys Asn L030 Met Met Ala Arg Asp 1035 Lys Asn His Ala
tea atc ctg atc tgg tet tta ggc aat gag tet tac gcc ggc act gtc
Ser Ile Leu 1040 Ile Trp Ser 1045 Leu Gly Asn Glu Ser 1050 Tyr Ala Gly Thr Val 1055
ttt gcc caa atg get gat tac gtc cgg aag get gat ccg acc cgg gtt
Phe Ala Gin Met Ala 1060 Asp Tyr Val Arg Lys L065 Ala Asp Pro Thr Arg 1070 Val
cag cac tat gaa ggg gtg acc cac aac cgg aag ttt gac gac gcc acc
Gin His Tyr Glu L075 Gly val Thr His Asn 1080 Arg Lys Phe Asp Asp 1085 Ala Thr
cag att gaa age cgg atg tat get ccg gce aag gta att gaa gaa tac
Gin Ile Glu 1090 Ser Arg Met Tyr Ala 1095 Pro Ala Lys Val Ile 1100 Glu Glu Tyr
ttg acc aat aaa cca gcc aag cca ttt atc tea gtt gaa tac get cac
Leu Thr Asn Lys Pro Ala Lys Pro Phe Ile Ser Val Glu Tyr Ala His
1105 1110 1115
gcc atg ggc aac tcc gtc ggt
Ala Met Gly Asn Ser Val Gly
1120 1125
aaa tac ccc cac tac cag ggc
Lys Tyr Pro His Tyr Gin Gly
1140
gga ctg gaa aaa gac ggg cac
Gly Leu Glu Lys 1155 Asp Gly His
gac ctg gcc gcc tac acg gcc ctg gaa Asp Leu Ala Ala Tyr Thr Ala Leu Glu 1130 1135 ggc ttc atc Gly Phe Ile 1145 ctg ctt tat Leu Leu Tyr 1160
2357
2905
2953
3001
304-9
3097
3145
3193
3241
3289
3337
3385
3433
3481
3529 tgg gac tgg att gac caa 3577 Trp Asp Trp Ile Asp Gin 1150 ggg ggc gac ttc gat gac 3625 Gly Gly Asp Phe Asp Asp 1165
- 14CZ 302175 B6
cgg Arg cca acc Pro Thr 1170 gac Asp tat Tyr gaa Glu ttc tgc Phe Cys 1175 ggg Gly aac Asn ggc Gly ctg gtc Leu Val 1180 ttt Phe gct Ala gac Asp 3673
cgg act gaa tcg ccg aaa ctg gct aat gtc aag gcc ctt tac gcc aac 3721
Arg Thr Glu Ser Pro Lys Leu Ala Asn Val Lys Ala Leu Tyr Ala Asn
1185 1190 1195
ctt aag tta gaa gta aaa gat ggg cag ctc ttc ctc aaa aac gac aat 3769
Leu Lys Leu Glu Val Lys Asp Gly Gin Leu Phe Leu Lys Asn Asp Asn
1200 1205 1210 1215
tta ttt acc aac agc tca tet tac tac ttc ttg act agt ctt ttg gtc 3817
Leu Phe Thr Asn Ser Ser Ser Tyr Tyr Phe Leu Thr Ser Leu Leu Val
1220 1225 1230
gat ggc aag ttg acc tac cag agc cgg cct ctg acc ttt ggc ctg gag 3865
Asp Gly Lys Leu Thr Tyr Gin Ser Arg Pro Leu Thr Phe Gly Leu Glu
1235 1240 1245
cct ggc gaa tcc ggg acc ttt gcc ctg cct tgg ccg gaa gtc gct gat 3913
Pro Gly Glu Ser Gly Thr Phe Ala Leu Pro Trp Pro Glu val Ala Asp
1250 1255 1260
gaa aaa gga gag gtc gtc tac cgg gta a cg gcc cac tta aaa gaa gac 3961
Glu Lys Gly Glu Val Val Tyr Arg Val Thr Ala His Leu Lys Glu Asp
1265 1270 1275
ttg cct tgg gcg gat gag ggc ttc act gtg gct gaa gca gaa gaa gta 4009
Leu Pro Trp Ala Asp Glu Gly Phe Thr Val Ala Glu Ala Glu Glu Val
1280 1285 1290 1295
gct caa aag ctg ccg gaa ttt aag ccg gaa ggg cgg cca gat tta gtt 4057
Ala Gin Lys Leu Pro Glu Phe Lys Pro Glu Gly Arg Pro Asp Leu Val
1300 1305 1310
gat tcc gac tac aac cta ggc ctg aaa gga aat aac ttc caa att ctc 4105
Asp Ser Asp Tyr Asn Leu Gly Leu Lys Gly Asn Asn Phe Gin Ile Leu
1315 1320 1325
ttc tcc aag gtc aag ggc tgg ccg gtt tcc ctc aag tat gcc ggt agg 4153
Phe Ser Lys Val Lys Gly Trp Pro Val Ser Leu Lys Tyr Ala Gly Arg
1330 1335 1340
gaa tac ttg aag cgg ctg ccg gaa ttt acc ttc tgg cgg gcc ctg acg 4201
Glu Tyr Leu Lys Arg Leu Pro Glu Phe Thr Phe Trp Arg Ala Leu Thr
1345 1350 1355
gac aac gac cgg gga gct ggt tac ggc tat gat ctg gcc cgg tgg gaa 4249
Asp Asn Asp Arg Gly Ala Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Ala Arg Trp Glu
1360 1365 1370 1375
aat gcc ggc aag tat gcc ege ttg aaa gac atc agc tgc gag gtc aag 4297
Asn Ala Gly Lys Tyr Ala Arg Leu Lys Asp Ile Ser Cys Glu Val Lys
1380 1385 1390
gaa gac tcc gtt ttg gtc aag act gcc ttt acg ttg cct gtc gcc tta 4345
Glu Asp Ser Val Leu Val Lys Thr Ala Phe Thr Leu Pro Val Ala Leu
1395 1400 1405
aag ggt gat tta act gtg acc tat gaa gtc gat gga cgg ggc aag att 4393
Lys Gly Asp Leu Thr Val Thr Tyr Glu Val Asp Gly Arg Gly Lys Ile
1410 1415 1420
gct gta aca gct gac ttc cca ggc gcg gaa gaa gcc ggt ctc ttg cca 4441
Ala Val Thr Ala Asp Phe Pro Gly Ala Glu Glu Ala Gly Leu Leu Pro
1425 1430 1435
- 15CZ 302175 B6
gcc Ala 1440 ttt Phe 1 ggc ttg Gly Leu aac ctg gcc ctg cca aaa Lys gaa Glu 1450 ctg Leu acc gat tac cgc Tyr Arg 1455 4489
Asn Leu 1445 Ala Leu Pro Thr Asp
tac tat ggt ctg gga cct aat gag agc taa ccagaccgct tggaaggtaa 4539
Tyr Tyr Gly Leu Gly Pro Asn Glu Ser
1460 1465 ttacctgggc atctaccagg gagcggtaaa aaagaacttt agcccatacc tgcgtccgca 4599 ggaaacgggc aaccggagca aggttcgctg gtaccagctc tttgatgaaa agggcggctt 4659 ggaatttacg gccaatgggg cagacttgaa cttgtctgct ttgccatatt ctgccgccca 4719 aattgaagca gcggaccacg cttttgaact gactaacaat tacacttggg ttagagcctt 4779 aagcgcccag atgggggtcg gcggggatga ctcctggggg cagaaggtcc acccggaatt 4939 ctgcctggat gctcaaaaag cccgccagct ccgcctggtg attcagcccc ttttactaaa 4899 ataaatgcta caattgactt aacaggatga aattttagta aaagcaaagc gegtgaggaa 4959 gatggcaacg atcagagaag tgccaaggca gccggcgtgt cgctagcgac ggtttcccgc 5019 gtcttgaact atgaccagac cctgtcagtc aatgaggcaa 5059 <210> 2 <211> 583 <2J2> PRT <213> Lactobacillus bulgaricus <400> 2
Met 1 Ile Phe Ile Ile 5 Thr Asn Leu Ile Thr 10 Ala Ile Arg Ile Gly 15 Glu
Val Leu Leu Asp Pro Leu Ile Gly Asn Ala Ile Asp Arg Thr Glu Ser
20 25 30
Arg Trp Gly Lys Phe Lys Pro Trp Val Val Gly Gly Gly Ile Ile Ser
35 40 45
Ser Leu Ala Leu Leu Ala Leu Phe Thr Asp Phe Gly Gly Ile Asn Gin
50 55 60
Ser Asn Pro Val Val Tyr Leu Val Ile Phe Gly Ile Val Tyr Leu Ile
65 70 75 80
Met Asp Ile Phe Tyr Ser Phe Lys Asp Thr Gly Phe Trp Ala Met Ile
85 90 95
Pro Ala Leu Ser Leu Asp Ser Arg Glu Arg Glu Lys Thr Ser Thr Phe
100 105 110
Ala Arg Val Gly Ser Thr Ile Gly Ala Asn Leu Val Gly Val Val Ile
115 120 125
Thr Pro Ile Ile Leu Phe Phe Ser Ala Ser Lys Ala Asn Pro Asn Gly
130 135 140
Asp Lys Gin Gly Trp Phe Phe Phe Ala Leu Ile Val Ala Ile Val Gly
145 150 155 160
- 16CZ 302175 B6
lle Leu Thr Ser lle Thr Val Gly Leu Gly Thr His Glu Val Lys Ser
165 170 175
Ala Leu Arg Glu Ser Asn Glu Lys Thr Thr Leu Lys Gin Val Phe Lys
180 185 190
Val Leu Gly Gin Asn Asp Gin Leu Leu Trp Leu Ala Phe Ala Tyr Trp
195 200 205
Phe Tyr Gly Leu Gly lle Asn Thr Leu Asn Ala Leu Gin Leu Tyr Tyr
210 215 220
Phe Ser Tyr Xle Leu Gly Asp Ala Arg Gly Tyr Ser Leu Leu Tyr Thr
225 230 235 240
lle Asn Thr Phe Val Gly Leu Xle Ser Ala Ser Phe Phe Pro Ser Leu
245 250 255
Ala Lys Lys Phe Asn Arg Asn Arg Leu Phe Tyr Ala Cys Xle Ala Val
260 265 270
Met Leu Leu Gly lle Gly Val Phe Ser Val Ala Ser Gly Ser Leu Ala
275 280 285
Leu Ser Leu Val Gly Ala Glu Phe Phe Phe Xle Pro Gin Pro Leu Ala
290 295 300
Phe 305 Leu Val Val Leu Met 310 lle lle Ser Asp Ala 315 Val Glu Tyr Gly Gin 320
Leu Lys Thr Gly His 325 Arg Asp Glu Ala Leu 330 Thr Leu Ser Val Arg 335 Pro
Leu Val Asp Lys 340 Leu Gly Gly Ala Leu 345 Ser Asn Trp Phe Val 350 Ser Leu
lle Ala Leu 355 Thr Ala Gly Met Thr 360 Thr Gly Ala Thr Ala 365 Ser Thr lle
Thr Ala 370 His Gly Gin Met Val 375 Phe Lys Leu Ala Met 380 Phe Ala Leu Pro
Ala 385 Val Met Leu Leu lle 390 Ala Val Ser lle Phe 395 Ala Lys Lys Val Phe 400
Leu Thr Glu Glu Lys 405 His Ala Glu lle Val 410 Asp Gin Leu Glu Thr 415 Gin
Phe Ser Gin Ser 420 His Ala Gin Lys Pro 425 Ala Gin Ala Glu Ser 430 Phe Thr
Leu Ala Ser 435 Pro Val Ser Gly Gin 440 Leu Met Asn Leu Asp 445 Met Val Asp
Asp Pro 450 Val Phe Ala Asp Lys 455 Lys Leu Gly Asp Gly 460 Phe Ala Leu Val
Pro 465 Ala Asp Gly Lys Val 470 Tyr Ala Pro Phe Ala 475 Gly Thr Val Arg Gin 480
Leu Ala Lys Thr Arg 485 His Ser Xle Val Leu 490 Glu Asn Glu His Gly 495 Val
- 17CZ 302175 B6
Leu Val Leu Ile His Leu Gly Leu Gly Thr Val Lys Leu Asn Gly Thr
500 505 510
Gly Phe Val Ser Tyr Val Glu Glu Gly Ser Gin Val Glu Ala Gly Gin
515 520 525
Gin Ile Leu Glu Phe Trp Asp Pro Ala Ile Lys Gin Ala Lys Leu Asp
530 535 540
Asp Thr Val Ile Val Thr Val Ile Asn Ser Glu Thr Phe Ala Asn Ser
545 550 555 560
Gin Met Leu Leu Pro Ile Gly His Ser Val Gin Ala Leu Asp Asp Val
565 570 575
Phe Lys Leu Glu Gly Lys Asn
580 <210> 3 <211> 880 <212> PRT <213> Lactobacillus bulgaricus <400> 3
Met 1 Ser Asn Lys Leu 5 Val Lys Glu Lys Arg Val Asp Gin Ala Asp Leu
10 15
Ala Trp Leu Thr Asp Pro Glu Val Tyr Glu Val Asn Thr Ile Pro Pro
20 25 30
His Ser Asp His Glu Ser Phe Gin Ser Gin Glu Glu Leu Glu Glu Gly
35 40 45
Lys Ser 50 Ser Leu Val Gin Ser 55 Leu Asp Gly Asp Trp 60 Leu Ile Asp Tyr
Ala 65 Glu Asn Gly Gin Gly 70 Pro Val Asn Phe Tyr 75 Ala Glu Asp Phe Asp 80
Asp Ser Asn Phe Lys 85 Ser Val Lys Val Pro 90 Gly Asn Leu Glu Leu 95 Gin
Gly Phe Gly Gin 100 Pro Gin Tyr Val Asn 105 Val Gin Tyr Pro Trp 110 Asp Gly
Ser Glu Glu 115 Ile Phe Pro Pro Gin 120 Ile Pro Ser Lys Asn 125 Pro Leu Ala
Ser Tyr 130 Val Arg Tyr Phe Asp 135 Leu Asp Glu Ala Phe 140 Trp Asp Lys Glu
val 145 Ser Leu Lys Phe Asp 150 Gly Ala Ala Thr Ala 155 Ile Tyr Val Trp Leu 160
Asn Gly His Phe Val 165 Gly Tyr Gly Glu Asp 170 Ser Phe Thr Pro Ser 175 Glu
Phe Met Val Thr 180 Lys Phe Leu Lys Lys 185 Glu Asn Asn Arg Leu 190 Ala Val
- 18CZ 302175 B6
Ala Leu Tyr 195 Lys Tyr Ser Ser Ala 200 Ser Trp Leu Glu Asp 205 Gin Asp Phe
Trp Arg 210 Met Ser Gly Leu Phe 215 Arg Ser Val Thr Leu 220 Gin Ala Lys Pro
Arg 225 Leu His Leu Glu Asp 230 Leu Lys Leu Thr Ala 235 Ser Leu Thr Asp Asn 240
Tyr Gin Lys Gly Lys 245 Leu Glu Val Glu Ala 250 Asn Ile Ala Tyr Arg 255 Leu
Pro Asn Ala Ser 260 Phe Lys Leu Glu Val 265 Arg Asp Ser Glu Gly 270 Asp Leu
Val Ala Glu 275 Lys Leu Gly Pro Ile 280 Arg Ser Glu Gin Leu 285 Glu Phe Thr
Leu Ala 290 Asp Leu Pro Val Ala 295 Ala Trp Ser Ala Glu 300 Lys Pro Asn Leu
Tyr 305 Gin Val Arg Leu Tyr 310 Leu Tyr Gin Ala Gly 315 Ser Leu Leu Glu Val 320
Ser Arg Gin Glu Val 325 Gly Phe Arg Asn Phe 330 Glu Leu Lys Asp Gly 335 Ile
Met Tyr Leu Asn 340 Gly Gin Arg Ile val 345 Phe Lys Gly Ala Asn 350 Arg His
Glu Phe Asp 355 Ser Lys Leu Gly Arg 360 Ala Ile Thr Glu Glu 365 Asp Met Ile
Trp Asp 370 Ile Lys Thr Met Lys 375 Arg Ser Asn Ile Asn 380 Ala Val Arg Cys
Ser 385 His Tyr Pro Asn Gin 390 Ser Leu Phe Tyr Arg 395 Leu Cys Asp Lys Tyr 400
Gly Leu Tyr Val Ile 405 Asp Glu Ala Asn Leu 410 Glu Ser His Gly Thr 415 Trp
Glu Lys Val Gly 420 Gly His Glu Asp Pro 425 Ser Phe Asn Val Pro 430 Gly Asp
Asp Gin His 435 Trp Leu Gly Ala Ser 440 Leu Ser Arg Val Lys 445 Asn Met Met
Ala Arg 450 Asp Lys Asn His Ala 455 Ser Ile Leu Ile Trp 4 60 Ser Leu Gly Asn
Glu 465 Ser Tyr Ala Gly Thr 470 Val Phe Ala Gin Met 475 Ala Asp Tyr Val Arg 480
Lys Ala Asp Pro Thr 485 Arg Val Gin His Tyr 490 Glu Gly Val Thr His 495 Asn
Arg Lys Phe Asp 500 Asp Ala Thr Gin Ile 505 Glu Ser Arg Met Tyr 510 Ala Pro
Ala Lys Val 515 Ile Glu Glu Tyr Leu 520 Thr Asn Lys Pro Ala 525 Lys Pro Phe
- 19CZ 302175 B6
Ile Ser Val Glu Tyr Ala His Ala Met Gly Asn Ser Val Gly Asp Leu
530 535 540
Ala Ala Tyr Thr Ala Leu Glu Lys Tyr Pro His Tyr Gin Gly Gly Phe
545 550 555 560
Ile Trp Asp Trp Ile Asp Gin Gly Leu Glu Lys Asp Gly His Leu Leu
565 570 575
Tyr Gly Gly Asp Phe Asp Asp Arg Pro Thr Asp Tyr Glu Phe Cys Gly
580 585 590
Asn Gly Leu Val Phe Ala Asp Arg Thr Glu Ser Pro Lys Leu Ala Asn
595 600 605
Val Lys Ala Leu Tyr Ala Asn Leu Lys Leu Glu Val Lys Asp Gly Gin
610 615 620
Leu Phe Leu Lys Asn Asp Asn Leu Phe Thr Asn Ser Ser Ser Tyr Tyr
625 630 635 640
Phe Leu Thr Ser Leu Leu Val Asp Gly Lys Leu Thr Tyr Gin Ser Arg
645 650 655
Pro Leu Thr Phe Gly Leu Glu Pro Gly Glu Ser Gly Thr Phe' Ala Leu
660 665 670
Pro Trp Pro Glu Val Ala Asp Glu Lys Gly Glu Val Val Tyr Arg Val
675 680 685
Thr Ala His Leu Lys Glu Asp Leu Pro Trp Ala Asp Glu Gly Phe Thr
690 695 700
Val Ala Glu Ala Glu Glu Val Ala Gin Lys Leu Pro Glu Phe Lys Pro
705 710 715 720
Glu Gly Arg Pro Asp Leu Val Asp Ser Asp Tyr Asn Leu Gly Leu Lys
725 730 735
Gly Asn Asn Phe Gin Ile Leu Phe Ser Lyš Val Lys Gly Trp Pro Val
740 745 750
Ser Leu Lys Tyr Ala Gly Arg Glu Tyr Leu Lys Arg Leu Pro Glu Phe
755 760 765
Thr Phe Trp Arg Ala Leu Thr Asp Asn Asp Arg Gly Ala Gly Tyr Gly
770 775 780
Tyr Asp Leu Ala Arg Trp Glu Asn Ala Gly Lys Tyr Ala Arg Leu Lys
785 790 7 95 800
Asp lle Ser Cys Glu Val 805 Lys Glu Asp Ser 810 Val Leu Val Lys Thr 815 Ala
Phe Thr Leu Pro Val Ala Leu Lys Gly Asp Leu Thr Val Thr Tyr Glu
820 825 830
Val Asp Gly Arg Gly Lys Xle Ala Val Thr Ala Asp Phe Pro Gly Ala
835 840 845
Glu Glu Ala Gly Leu Leu Pro Ala Phe Gly Leu Asn Leu Ala Leu Pro
850 855 860
Lys Glu Leu Thr Asp Tyr Arg Tyr Tyr Gly Leu Gly Pro Asn Glu Ser
865 870 875 880
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (8)

1. Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus, uložený ve sbírce kultur CNCM 14. ledna 1998 pod číslem 1-1968, nesoucí bodovou nonsense mutaci v kódové sekvenci pro β-galaktosidázu a postrádající β-galaktosidázovou aktivitu.
2. Mléčný zákvas, vyznačující se tím, že obsahuje kmen Lactobacillus bulgaricus podle nároku 1.
3. Mléčný zákvas podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedený kmen Lactobacillus bulgaricus je spojen s alespoň jedním kmenem S. thermophilus.
4. Způsob výroby zakvašeného mléčného výrobku, vyznačující se tím, že zahrnuje krok, během nějž se mléko kvasí za použití mléčného zákvasu, zahrnujícího kmen Lactobacillus bulgaricus podle nároku 1 v přítomnosti alespoň jednoho cukru, který může být uvedeným kmenem Lactobacillus bulgaricus asimilován.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že cukrem, který může být kmenem Lactobacillus bulgaricus asimilován, je glukóza.
6. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 4 nebo 5, vyznačující se tím, že zastavení kvašení se provádí bez ochlazení uvedeného mléčného výrobku,
7. Zakvašený mléčný výrobek, připravitelný způsobem podle kteréhokoliv z nároků 4 až 6.
8. Zakvašený mléčný výrobek podle nároku 7, vyznačující se tím, že tímto výrobkem je jogurt.
CZ20004359A 1998-05-22 1999-05-17 Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus CZ302175B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9806456A FR2778921B1 (fr) 1998-05-22 1998-05-22 Souches mutantes de lactobacillus bulgaricus depourvues d'activite beta-galactosidase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20004359A3 CZ20004359A3 (en) 2001-05-16
CZ302175B6 true CZ302175B6 (cs) 2010-12-01

Family

ID=9526604

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20004359A CZ302175B6 (cs) 1998-05-22 1999-05-17 Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus

Country Status (18)

Country Link
US (2) US6875601B1 (cs)
EP (1) EP1078074B2 (cs)
JP (2) JP4576047B2 (cs)
AR (1) AR016496A1 (cs)
AT (1) ATE288492T1 (cs)
AU (1) AU772004B2 (cs)
CA (1) CA2329494C (cs)
CZ (1) CZ302175B6 (cs)
DE (1) DE69923554T3 (cs)
DK (1) DK1078074T3 (cs)
ES (1) ES2237099T5 (cs)
FR (1) FR2778921B1 (cs)
HU (1) HUP0102019A3 (cs)
IL (3) IL139812A0 (cs)
PL (1) PL202208B1 (cs)
PT (1) PT1078074E (cs)
RU (1) RU2232816C2 (cs)
WO (1) WO1999061627A2 (cs)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2778921B1 (fr) * 1998-05-22 2001-05-11 Gervais Danone Sa Souches mutantes de lactobacillus bulgaricus depourvues d'activite beta-galactosidase
MY143693A (en) 2004-03-24 2011-06-30 Nestec Sa Shelf stable product wih living micro-organisms
FR2876874B1 (fr) * 2004-10-22 2007-02-16 Gervais Danone Sa Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par l'utilisation d'ingredients leurres
FR2877012B1 (fr) * 2004-10-22 2010-09-10 Gervais Danone Sa Souches de streptococcus thermophilus ami deficientes a post-acidification reduite
FR2876876B1 (fr) * 2004-10-22 2007-02-16 Gervais Danone Sa Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par l'utilisation de microorganismes presentant une capacite de metabolisation reduite
FR2886313B1 (fr) * 2005-05-31 2007-08-17 Gervais Danone Sa Souches mutantes de bacteries lactiques possedant une lactose permease non phosphorylable.
FR2895877B1 (fr) * 2006-01-06 2012-06-22 Gervais Danone Sa Poudre de lait fermente ou yaourt a haute densite en ferments lactiques
EP1820851B9 (fr) * 2006-02-20 2012-06-27 Compagnie Gervais Danone Souches de Lactobacillus helveticus ne fermentant pas le lactose
EP2258205A1 (en) * 2009-06-03 2010-12-08 Yoplait France Process for manufacturing of a fermented dairy product
US8555933B2 (en) * 2009-07-24 2013-10-15 Tyco Electronics Corporation Wire untwisting tool
ES2762445T3 (es) 2011-04-29 2020-05-25 Gervais Danone Sa Uso de cepas mutantes resistentes a la nisina de lactobacilos para reducir la post-acidificación en productos alimenticios
SG11201509806UA (en) * 2013-05-31 2015-12-30 Meiji Co Ltd Fermented milk that does not undergo increase in acid level, and method for producing same
CN103275953B (zh) * 2013-06-25 2014-06-18 山东大学 一种转苷底物特异性拓宽的β-半乳糖苷酶
EP3375292A1 (en) * 2014-06-19 2018-09-19 Chr. Hansen A/S Method of producing a fermented milk product with improved control of post acidification
EA034611B1 (ru) 2014-06-19 2020-02-27 Кхр. Хансен А/С Способ получения ферментированного молочного продукта с улучшенным контролем последующего подкисления
MX2018008608A (es) * 2016-01-21 2018-11-19 Chr Hansen As Metodo de produccion de un producto lacteo fermentado usando lactobacillus casei.
WO2018130630A1 (en) 2017-01-13 2018-07-19 Chr. Hansen A/S Process for producing a fermented milk product
MX2019010711A (es) * 2017-03-28 2019-12-11 Chr Hansen As Composicion de bacterias de acido lactico para preparar productos alimenticios fermentados con dulzor y sabor natural incrementados.
US11479763B2 (en) * 2017-04-07 2022-10-25 Dupont Nutrition Biosciences Aps Bacillus host cells producing β-galactosidases and lactases in the absence of p-nitrobenzylesterase side activity
CN114072508B (zh) * 2019-03-14 2024-10-08 国际营养与健康丹麦有限公司 新的乳酸细菌
US20230200406A1 (en) * 2020-05-29 2023-06-29 Chr. Hansen A/S Lactic acid bacteria composition for preparing fermented food products
CN115960757B (zh) * 2022-10-11 2024-04-09 南京工业大学 一株可以耐受低pH生产L-乳酸的乳酸菌及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0253437A (ja) * 1988-08-18 1990-02-22 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 発酵乳の製造方法
US5382438A (en) * 1991-06-14 1995-01-17 Nestec S.A. Preparation of yogurt with lac(-) L. bulgaricus
EP1078074A2 (fr) * 1998-05-22 2001-02-28 Compagnie Gervais-Danone Souches mutantes de lactobacillus bulgaricus depourvues d'activite beta-galactosidase

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8801529A (nl) 1988-06-15 1990-01-02 Nl Zuivelonderzoek Inst Werkwijze voor het selecteren en stabiel handhaven van recombinant dna in melkzuurbacterien.
CA2002796C (en) * 1988-11-21 1999-02-16 Stanley E. Mainzer Production of fermented food products
US5639648A (en) * 1988-11-21 1997-06-17 Genencor International, Inc. Production of fermented food
EP0382332A3 (en) * 1989-01-06 1990-11-14 Collaborative Research Inc. Improved supersecreting mutants of saccharomyces cerevisiae
US5691185A (en) * 1993-10-08 1997-11-25 Chr. Hansen A/S Lactic acid bacterial suppressor mutants and their use as selective markers and as means of containment in lactic acid bacteria
CA2249208A1 (en) * 1996-03-27 1997-10-02 The Johns-Hopkins University Stationary phase, stress response sigma factor from mycobacterium tuberculosis, and regulation thereof
US5840556A (en) * 1996-05-08 1998-11-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Agriculture Molecular genetic construction of vaccine strains of pasteurellaceae

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0253437A (ja) * 1988-08-18 1990-02-22 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 発酵乳の製造方法
US5382438A (en) * 1991-06-14 1995-01-17 Nestec S.A. Preparation of yogurt with lac(-) L. bulgaricus
EP1078074A2 (fr) * 1998-05-22 2001-02-28 Compagnie Gervais-Danone Souches mutantes de lactobacillus bulgaricus depourvues d'activite beta-galactosidase

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mollet a Delley (1990) J. Bacteriol. 172, 5670-5676 *

Also Published As

Publication number Publication date
PL202208B1 (pl) 2009-06-30
ATE288492T1 (de) 2005-02-15
DK1078074T3 (da) 2005-06-06
PT1078074E (pt) 2005-05-31
PL345223A1 (en) 2001-12-03
RU2232816C2 (ru) 2004-07-20
CZ20004359A3 (en) 2001-05-16
EP1078074B2 (fr) 2013-10-09
IL139812A (en) 2010-11-30
EP1078074B1 (fr) 2005-02-02
HUP0102019A2 (hu) 2001-09-28
AU3714799A (en) 1999-12-13
US7563436B2 (en) 2009-07-21
AU772004B2 (en) 2004-04-08
DE69923554T3 (de) 2014-03-20
DE69923554T2 (de) 2006-02-16
IL200443A (en) 2016-08-31
WO1999061627A2 (fr) 1999-12-02
FR2778921B1 (fr) 2001-05-11
IL139812A0 (en) 2002-02-10
FR2778921A1 (fr) 1999-11-26
CA2329494C (fr) 2011-08-23
ES2237099T3 (es) 2005-07-16
EP1078074A2 (fr) 2001-02-28
AR016496A1 (es) 2001-07-04
JP2002516110A (ja) 2002-06-04
WO1999061627A3 (fr) 2000-02-03
CA2329494A1 (fr) 1999-12-02
US20050196388A1 (en) 2005-09-08
ES2237099T5 (es) 2014-02-05
DE69923554D1 (de) 2005-03-10
JP2010166932A (ja) 2010-08-05
IL200443A0 (en) 2011-07-31
US6875601B1 (en) 2005-04-05
JP4576047B2 (ja) 2010-11-04
HUP0102019A3 (en) 2006-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ302175B6 (cs) Mutantní kmen Lactobacillus bulgaricus
AU659154B2 (en) Yogurt
KR101695908B1 (ko) 파지 내성에 기초하여 선별된 식품의 텍스처 조절용 유산균
CA1187325A (en) Process for the production of yogurt
JP5898220B2 (ja) テクスチャを改変する乳酸菌株
US6056979A (en) Streptococcus Thermophilus strain, fermentation process using such strain and product obtained
MX2008015834A (es) Bacterias acidolacticas de postacidificion baja.
KR20110069796A (ko) 발효유 제품 중의 비피도박테리아의 생장을 증진시키는 방법
US6242226B1 (en) Products containing a dextran composition obtained from culturing Leuconostoc mesenteroidesssp. cremoris
EP3675642B1 (en) Process for producing a mesophilic fermented milk product
MXPA97002389A (en) Streptococcus thermophilus stem, fermentation procedure using strain and productobten
CN104694418B (zh) 一株具有低β‑半乳糖酶活性的德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株及其应用
US20190320673A1 (en) New bacteria
KR20230148251A (ko) 발효제품 제조용 유산균 조성물
WO2023082047A1 (en) Compositions and methods for producing fermented dairy prod-ucts for storage at ambient temperature
MXPA00011491A (en) Mutant lactobacillus bulgaricus
WO2023061994A1 (en) Process and bacterial strains for producing food product for storage at ambient temperature

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20190517