CZ299634B6

CZ299634B6 - Derivát amidinu a jeho použití

Info

Publication number: CZ299634B6
Application number: CZ0048699A
Authority: CZ
Inventors: Baucke@Dorit; Lange@Udo; Mack@Helmut; Seitz@Werner; Zierke@Thomas; Wolfgang Höffken@Hans; Hornberger@Wilfried
Original assignee: Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date: 1996-08-14
Filing date: 1997-07-29
Publication date: 2008-10-01
Also published as: DE59711714D1; ZA977239B; DE19632773A1; SK899A3; CO4900030A1; NZ333679A; TR199900310T2; WO1998006741A1; KR20000030002A; ES2221062T3; HUP0001826A2; AU3941797A; PL331540A1; NO990662D0; DK0956294T3; NO990662L; MY132820A; JP2000516598A; PT956294E; IL127751A0

Abstract

Jsou popsány deriváty amidinu obecného vzorce I, kde A, B, E a D mají významy uvedené v popisu, stejne jako zpusob jejich výroby. Tyto látky se mohoupoužívat k potlacování nemocí.

Description

JUDr. Otakar Švorčík, Hálkova 2, Praha 2, 12000 (54) Název vynálezu:

Derivát amidinu a jeho použití (57) Anotace;

Jsou popsány deriváty amidinu obecného vzorce I, kde A, B, E a D mají významy uvedené v popisu, stejně jako způsob jejich výroby. Tyto látky se mohou používat k potlačování nemocí.

i

Derivát amidinu a jeho použití

Oblast techniky 5

Vynález se týká nového derivátu čtyř- nebo pětičlenného rieíeroeykiického amidinu, způsobu jeho přípravy a jeho použití jako kompetitivního inhibitoru trypsinu podobných serinových proteáz, zvláště trombinu a kininogenáz, jako je kallikrein. Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují sloučeninu podle vynálezu jakožto účinnou látku a použití sloučenin podle vynálezu jakožto inhibitorů trombinu, antikoagulantů a jako protizánětlivých činidel.

Dosavadní stav techniky

Trombin patří do skupiny serinových proteáz a má centrální úkol v kaskádě koagulace krve jakožto terminální enzym. Jak vnitřní, tak vnější koagulační kaskáda vede četnými zesilovacími stadii k produkci trombinu z protrombinu. Trombinem katalyzované štěpení fibrinogenu na fibrin potom iniciuje koagulaci krve a agregaci krevních destiček, které jako takové v důsledku vázání faktoru 3 destiček a koagulačního faktoru XIII a velkého počtu vysoce aktivních mediátorir podporují vytváření trombinu.

Vytváření a působení trombinu jsou centrálními jevy ve vývoji jak bílých, arteriálních, tak červených, venózních trombů a jsou proto možnými účinnými body ataku drog. Inhibitory trombinu na rozdíl od heparinu jsou schopny nezávisle na kofaktorech inhibovat současně působení volného trombinu, jakož také trombinu vázaného na trombocyty. Jsou schopny předcházet v akutní fázi tromboemholickým příhodám po perkutánní, transluminární koronární angioplastii (PTCA) a lyže a slouží jako antikoagulanty v mimotělní cirkulaci (stroje srdce-plíce, hemodialýza). Mohou se také používat obecně k profylaxi trombózy, například po chirurgických zásazích.

Je známo, že syntetické deriváty argininu ovlivňují enzymatickou účinnost trombinu vzájemným působením s aktivním serinovým zbytkem proteázy trombin. Peptidy na bázi Phe-Pro-Arg, kde je N-koncová aminokyselina v D formě, jsou obzvláště příznivé. D-Phe-Pro-Arg isopropylester je popsán jako kompetitivní trombinový inhibitor (C. Mattson a kol., Folia Haematol, 109, str. 43 až 51, 1983).

Derivatizace argininu na C-zakončení na aldehyd vede k podpoře inhibičního působení. Proto byl popsán velký počet arginalů schopných vázat hydroxytové skupiny „aktivního“ šeřinu na hěifiiáčetatý' (evropské patentové spisy EP 185390, 479489/526877, 542525 a mezinárodní patentové přihlášky WO 93/15756, 93/18060).

40. ...

Trombin inhibiční aktivita peptidketonů, fluorovaných alkylketonů a ketoesterů, derivátů kyseliny borité, esterů fosforečné kyseliny a α-ketokarboxamidů se může podobně vysvětlovat serinovou interakcí (evropské patentové spisy EP 118280, 195212, 362002, 364344, 410411, 471651, 589741, 293881, 503203, 504064, 530167 a mezinárodní patentové přihlášky WO 92/07869,

94/08941).

Peptidy 4-amidinofenylglycinfosfonátdifenylestery, které popsal J. Oleksyszyn a kol. (J. Med. Chem. 37, str. 226 až 231, 1994) jsou ireverzibilními trombinovými inhibitory s nepostačující selektivitou se zřetelem na ostatní serinové proteázy.

⁵⁰

Německý patentový spis číslo DE3 108810, mezinárodní patentová přihláška WO 93/1II52 a evropský patentový spis číslo EP 601459 popisují agmatín a tedy deriváty argininu, které jsou neschopné vzájemného působení s aktivním serinem serinových proteáz.

_ i _

Mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336, evropský patentový spis číslo EP 0 601459 a mezinárodní patentová přihláška WO 95/23609 popisují další vývoj, přičemž se agmatinový zbytek nahrazuje arylamidinovým zbytkem.

Kininogenázy jsou serinové proteázy, které uvolňují vasoaktivní peptidy, označované jako kininy (bradykinin, kallidin a Mct-Lys-bradykrnin) z kininogenů. Kininogeny jsou mnonařunkční proteiny, které se vyskytují v kaskádě koagulačních a zánětlivých reakcí. Jakožto inhibitory chrání buňky od poškození cysteinovými proteázami (Milller Esterl, FEBS Lett. 182, str. 310 až 314, 1985). Důležitými kininogenázami jsou plasmový kallikrein, tkáňový kaltikrein a tryptáza žírných buněk.

Kininy, podobné bradykininu a kallidinu jsou vasoaktivní peptidy, které ovlivňují velký počet biologických procesů. Mají zásadní úlohu při zánětlivých procesech. Zvýšením vaskulámí permeability vedou k hypotenzi a k otokům. Kromě toho jsou velmi mocnými bolest produkující15 mi antacoidy a mají jako buněčné mediátory velký význam v patofyziologii astma, alergické rýmy a artritidy (K.D. Bhoola, C.D. Figueroa, K. Worthy, Pharmacological Revies 44(1), str. 1 až 80,1992).

Nezávisle na mechanizmech, které jsou základem zánětlivých procesů, dochází k výstupu tekutin z krevních cév, které obsahují všechny proteinové systémy cirkulující krve. To znamená, že má význam výstup plasmových kapalin z cév při nemocech, jako je astma, rýma a zánětlivá vnitřní onemocnění. Obzvláště při alergických procesech se přitom uvolňuje tryptáza žírných buněk (Salomonsson a kol., Am. Rev. Respir. Dis, 146, str. 1 535 až 1 542,1992).

Argininchlormethylketony H-(D)-Pro-Phe-Arg-CH2Cl a H-(D)-Phe-Phe~Arg~CH₂Cl popsali Kettner a Shaw jakožto plasmové kallikreinové inhibitory (BioChem. 17, str. 4778 až 4784, 1978 a Meth. Enzym. 80, str. 826 až 842, 1981).

Různé syntetické deriváty benzamidinů a benzylaminů se projevily jako inhibitory plasmového killikreinu, přičemž benzamidiny vykazují značně silnější inhibiční. působení (F. Markward,

S. Drawert, P. Walsmann, Biochemical Pharmacology 23, str. 2 247 až 2 256, 1974).

PKS1-527, hydrochlorid N-(trans~4-aminoinethylcykIohexylkarbonyl)-I..-fčnylalanin-4-karboxymethylanilid, je rovněž účinným inhibitorem kinogenázy (Wanaka, Ohamoto a kok, Tromb.

Res. 57 (6), str. 889 až 895,1990).

Podstata vvnáležu '

Podstatou vynálezu je derivát amidinu obecného vzorce Ϊ

kde znamená (I)

/

CZ 299W4 B6

R'

A skupinu obecného vzorce

R²

I

R¹ - í^cii2'm ^c <^CK2'n R³ kde znamená m 0,1 nebo 2, n 0,1 nebo 2,

R¹ skupinu HOOC- Ci_₆-alkyl~OOC- nebo -OH,

R² H,CM-alkylneboR^l-(CH2)_m,

R³ H nebo C^-alkyl,

B skupinu obecného vzorce

R⁴ _ n — --- C - CO I

R⁵ kde znamená

R⁴ H, C]_|-alkyl nebo R*-(CH2)_m- kde R¹ a m mají shora uvedený význam,

P 0 nebo 1,

R⁵ H nebo Ci-4-alkyl,

R⁶ H nebo Ci_₈-alkyl, fenyl, mající popřípadě jeden až tři stejné nebo různé substituenty ze souboru zahrnujícího

Ci^alkyl, CF₃, C_Malkoxy, F a Cl nebo znamená C₃_₈cyklo-alkyl, mající popřípadě jeden až čtyři stejné nebo různé substituenty C^alkyly, přičemž jedna nebo dvě jednoduché vazby

C-C kruhu jsou popřípadě nahrazeny dvojnou vazbou C=C, nebo je knim popřípadě přikondenzován fenolový kruh,

C7_t2-bicykloalkyl nebo Cio—tricykloalkyl nebo (R⁷ - C - R⁸)

-3CZ 299634 B6

R a R⁶ spolu dohromady ethylenovou nebo propylenovou skupinu,

R⁷ H nebo Cis—alkyl, fenyl, mající popřípadě jeden až tři stejné nebo různé substituenty ze souboru zahrnujícího r¹ Λιυ,,ι rr r¹ u γί__u r¹ Λ,,υ_ΛΛιυ,,ι .\j__ v/limity ι₉ 3 _? i palivu λ _y, i a c^i nvuu Zjiiamuiia iviuaiivj umjivi pvpi ipauc jai\u jcucn až čtyři stejné nebo různé substituenty Ci₄alkyly,

R⁸ H nebo Ci_₄—alkyl,

E skupinu obecného vzorce

kde znamená q 0 nebol,

D skupinu obecného vzorce >9 «10 *Ή ς\ ň y—z

R¹¹

R* RlO ¹

-H—C-< /'

I

R¹¹

R⁹ Rl° ’ ¹ nebo -N-C < ^x

I *=<

Rll kde znamená

R⁹ H nebo C,_₃-alkyl,

R¹⁰ H nebo Cn-alkyl,

R¹¹ H nebo Ci_4-alkyl,

X atom O, S nebo skupinu -NR¹², kde znamená R¹² H nebo Ci_g—alkyl,

Y -N= nebo -CR¹³-, kde znamená R¹³ H nebo C1₄—alkyl, dále Cl nebo CF₃,

Z -N= nebo-CR^l3=, a jeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami.

Deriváty aminokyseliny symbolu B jsou s výhodou v (D) konfiguraci, 3,4-dehydroprolin popři· pádě 4,5-dehydropipekolinová kyselina je v (L) konfiguraci.

Výhodnými jsou sloučeniny obecného vzorce I_} kde A až E znamenají:

A skupinu HOOC-(CH₂)_t-(t = 1, 2 nebo 3), (HOOC-CH₂)₂-CH- (HO-CH₂)₂CHHOOC-CH₂-CH(COOH)-, HOOC-CH(CH₂-CH₂OH>-, HOOC-CH(C_MalkylH

HOOC-C(C_Malkyl)^,C_Malkyl-OCC-(CH₂)_tB skupinu obecného vzorce

R⁶

R⁴ (R⁷ - C - R⁸)_p

I I

- N —-- C -- CO kde znamená p 0 nebo 1,

R⁴ H, Cμ-alky 1 nebo HOOC-(CH₂)_fn, kde m = 1,2 nebo 3,

R⁵ H nebo methyl,

R⁶ H nebo Cm-alkyl, fenyl mající popřípadě jeden až tři stejné nebo různé substituenty ze souboru zahrnujícího methyl, CF₃, methoxy, F a Cl nebo znamená C₃_₈cykloalkyl popřípadě substituovaný jedním až čtyřmi methyly, 1,4-cyklohexadienyl, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo20 [2.2.1 jheptyl, norbomyl, adamantyl, indanyl nebo dekalinyl,

R⁷ H nebo Ci s-alkyk fenyl, mající popřípadě jeden až tři stejné nebo různé substituenty ze souboru zahrnujícího methyl, CF₃, methoxy, F a Cl nebo znamená C₃_₈cykloalkyl, mající popřípadě jeden až čtyři methyly jako substituenty,

R⁸ H nebo Cm-alkyl, přičemž B má s výhodou konfiguraci D,

E skupinu obecného vzorce

kde znamená q 0 nebo 1, přičemž E má s výhodou konfiguraci L,

D skupinu obecného vzorce kde znamená

X atom S, O, nebo skupinu NH, NCH₃ nebo NC2H₅,

Y CH, OCH_3j C-Cl nebo C-CF₃,

Z CH, C-CH₃, C-C1 nebo C-CF₃, nebo X=S, O, NH, NCH₃; Y=N; Z=CH, C_CH₃, C-CF₃; nebo X=S, O, NH, NCH₃; Y=CH, C-CH₃, C-CF₃: Z-N;

nebo X=S, O, NH, NCH₃; Y=N; Z=N; nebo skupinu obecného vzorce

CHá—/ kde znamená

X atom S, O nebo skupinu NH, NCH₃ nebo NC₂H_S,

Y ČH, C-CH₃ nebo C-CF₃,

Z CH, C-CH₃, C-CF₃ nebo Q-C1 nebo X=O, NH, NCH₃; Y=N; Z=CH, C-CH₃, C-CF₃;

nebo X=O, S, NH, NCH_S; Y=CH, C-CH₃, C-CF₃; Z=N; 30 nebo X=O, S, NH, NCH₃; Y=Z=N;

nebo skupinu obecného vzorce

H

kde znamená

X atom S, O nebo skupinu NH, NCH₃ nebo NC2H5,

- 6 CZ 299634 B6

Y CH, OCH₃ nebo OCF₃,

Z CH, C-CH₃, C-CF₃ nebo C-Cl nebo X=O, NH, NCH₃; Y=N; Z=CH, C-CH, C-CF₃, C-Cl;

nebo X=O, S, NH, NCH₃; Y=CH, C-CH₃; Z=N;

io nebo X=O, NH, NCH₃; Y=Z=N;

a jejich soli s fyziologicky vhodnými kyselinami.

Obzvláště výhodnými jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde znamená 15

A skupinu HOOC-CH₂, HOOC-CH₂-CH₂, HOOC-CH(CH₃), HOOC-CH(C₂H₅), B skupinu obecného vzorce

R⁶

R⁴ (R⁷ - C - R⁸)

CO R’ kde znamená p 0 nebo 1,

R⁴ H nebo methyl,

R⁵ H nebo methyl,

R⁶ C_t_s—alkyl, C₅_₈cykloalkyl popřípadě substituovaný jedním až čtyřmi methyly, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1 jheptyl, norbomyl, adamantyl, indanyl nebo dekalínyl, přičemž obzvláště cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl,

R⁷ H nebo methyl,

R⁸ H nebo methyl,

E skupinu obecného vzorce

kde znamená

q. 0 nebo 1, _ Ί _

D skupinu obecného vzorce

H

I

-N-ČH₂

H

-9CZ 299634 B6 kde znamená

R¹⁴ H, CH₃, Cl, CF₃, s výhodou H,

R¹⁵ H, Cl, CF₃, s výhodou H,

R¹⁶ H,CH₃,C₂H₅,s výhodou CH₃,

R¹⁷ H, CH₃, CF₃, s výhodou H nebo CH₃,

Obzvláště výhodnými jsou následující sloučeniny:

tBuOOC-CH.2-(,D) chg-Pyř-NH-ČH₂-5^ (2-am)-thioph

HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH^CH₂-5-(2-am)-thiopl:

tBuOOC-CH₂- (D) Chg-Dép-NH-CH₂-5- (2-ám) -thioph

HOOČ-CH₂-(D)Chg-Dep-NH-CH2-5-(2-ám)-thioph.

HOOC-CH₂- (D,L)Cpg-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am) -thioph ,HOOC-CH₂-(p-,L)Cheg-Pyr-TÍ7H-CH₂-5-(2-ani.)-thioph

HQOC-CH₂-(D,L)Cog-Pyr-NH-CH₂-5“(2-am).-thioph

HOOC-CH₂-(D,Ii)Nog-Pyr-NH-CH₂-5-( 2-am)-thioph

HOOC-CH2- (D, I»·.) Adaala-Pýr-NH-CH₂-5- (2-am) -thioph HOOC-CH2“(D,L),4-MeCha-Pyi-NH-CH₂-5-( 2-am)-thioph HOOC-CH₂- (Ď, L )Y-MeCha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am) -thioph HOOC-CH₂-(D,L)4-MeChg-Pyr-NH-CH₂-.5-(2-am)-thioph HOOC-CH₂ - (D_řL) 3,3-Me₂Chg-Pyr-NH-CH₂-5~ (2-am) - thioph HOOC-CH₂-(D,L) 3,3~Me2Cha-Pyr-NH-CH₂~5-(2^am)-thioph HOOC-CH2- (D, L) 4-ÍPrChg-Pyr-NH-CH₂-5- (2-am) -thioph HOOC-CH2- (D,L) 3,4,5(MeO)₃Phe-Pyr-NH-CH₂-5- (2-am) -thioph HOOC-CH2- (D, L) Chea-Pyr-KH-CH₂-5- (2 -am) -thioph HOOC-CH2-. {D,) Diphe-Pyr-KH-CH₂ -5- (2 -am) - thioph HOOC-CH2” (DfL )PP-Me₂Čha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am)-thioph HOOC-CH₂-(D_/XíjAdagly-Pyr-NH-CH2,-5-(2-am)-thioph HOpC-CH2-(D>L)-Í-.Tic-Pyx-NH-CH₂-5-(2-am)--thioph HOOC-€H₂- (D > L.) DCh-Pyr-KH-CH₂-5- (2-am j -thioph HOOC-CH₂-(D,L)4-iPrCha-Pyr-NH-CH₂-5-( 2-am) -thiopK HOOC-CH2 - CD) á-MeCha-Pyr-NH**CH₂-5 - (2 -am) - thioph HOOC-CH₂-(D)a-MeCha-Dep-NH-rCH₂-5 - (2-am) -thioph HOOC-CH2- (N-Me) (D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am)-thiopR HOOC-CH₂-(.D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am)-thioph HOOC-CH2- (D)Cha-Dep-KH-CH₂-5- (2-am) -thioph HOOC-CH₂- (D)Cha-Pyr-NH-CH₂-4-( 2-am) -thioph HOOC-CH₂- (D) Cha-Dep-NH-CH₂-4 - (2-am).-thioph HOOC-CH₂-(D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(3-am)-thioph HQGC-CH₂-(D )Cha-Dep-NH-CH₂-5-(3-am) -thioph HOOC-CH2-(DjChg-Pyr-NH~CH₂-5-(3-am)-thioph

HGOC-CHj-(D)Chg-Pyx-NH-CH₂-4-(2-am)-thiópk

HOOC-CH₂-(D)Cha-Pyr-NH-Cfí₂-5-(2-am)-fur

HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-GH₂-5”(2-am)-fur

HOOC-CH₂“(D)Cha-Pyr-NH-CH₂-4-(2-am)-fur

HOOC-CK2^ÍD)Cha“Děp-wH-GH₂-4-{2-am)-fur

HOOC-CH₂-(D)Cha-pyr-NH-CH₂-5-(3-am)-fur 'HOOC-CH^ (D) Cha-Děp-NH-CH₂ ^-5- (3-am)-fur

HOOC-CH2-{D)Chg-Pyr-NH-CK₂-5-(2-am)-fur

HOOC-CH₂“(D)Ghg-Pyr-KH-CH₂-5-{3-am)-fur

HOOC-CH2- (D) Cha-Pýř-NH-CH₂5- (l-Me-2-am j-pyrr HOOC-CH2“ (D.) Chg-Pyr-NH-CH₂-5- (l-Me-2 -am) -pyrr· HOOC-CH2- (D) Cha~Dep-NH-CH'₂-5- (. l-Me-2 -am) -pyrr HOOČ-CH2- (D) Cha-Pyr-NH-CH₂-4- (l-Me-2-am) -pyrr flGÓC-CH₂-(D)Čha-Dep-ŇH-ČH2-4-( l-Me-2 nám)-pyrr HOOC-CH2-(D)Chá~pyr-NH-CH₂-5^<'l-Me-3-am') -pyrr HOOG-CH₂“(^D)Cha-Dep-NH-GH₂-5-(l-Me-3-airi) -pyrr HOOC-CH2- {D,).Cha-Pyr-NH-ČH₂-5- (2-am-3,4-Me₂) -thiopk HOOC-CH2- (D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-( 2-am-3-Me) -thioph HOÓC-CH2- ( Cha-Pyr-NH-£H₂-5- {2-am-4^Me) -thioptí HOOČ-CH2-{D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am-3-Mé)-fur HOOC-ČHi- (DjCha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am-4-Me) -fur HOOC-CH2- {D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5- (3-amr-2-Me) -fur HOOC-CH2-(D)Chá-Pyr-NH-CH₂-2-(5-am)-thiaz HOOC-CH2- (D) Cha-Pyr-NH-CH₂-2- (4-am) -thiaz HÓOC-ČH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH₂“4-{2-ám)-thiaz HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am)-thiaz HOOC-GH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH₂-2~(5-am)-thiaz HOOC-CB2-(D)Chg-Pyr-NH-CH₂^2-(4-amj-thiaz HOOC-CH2-(D) chg-pyr-NH-CH₂-4- (2-am) - thiaz H0OC-CH₂-(D)Chg-Pyr-NB-CH₂-5-(2-am)-thiaz HOOC-CH2-(D)Cha-Děp-NH-CH₂-2-{5-am)-thiaz HOOC-CH2- (D)Cha-Pyr-NH-CH₂-2- (-4-amj -oxa2 HOOC-CH₂-(D)Chg-Pyr-NH-CH₂-2-(4-am-)-oxaz HÓOC-CH2- (D)Cha-Pyf-NH-CH₂5-(3-am-l-Me) -pyraz HOGC-CH2- (D) Cha-Pyr-NH-CH₂-3- (5-am) -1,2,4-óxadiáz HOÓC-CH2-(D )Cha-Pyr~NH-CH₂-5-( 3-am)-1,24-oxadiaz HOOG-CH2- (D)Chg-Pyr-NH-CH₂-5- (3-am)-1 _f 2,4-oxádiaz H0GC-CH₂-(D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(3-am-l-Me)-l,2,4-triaz HOOC-CH₂“CH₂-(D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am)-thioph HQGC-CH₂-CH₂- (D) Cha-Pyr-NH-CH₂-5- {2-am) -fur HOOC-CH₂-CH₂- (D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(l-Me-2-am) -pyrr {HGOC-CH₂) 2-'(D) Cha-Pyr-tJH-CH₂-5- (2-am) -thioph (HOOC-CH₂) ₂CH-(.Ď>Čha-Pyr-WH-.iGH₂>5- (2-am) -thioph. HOOC-CH2- (D)Chg-Pyr-NH-GH₂-5-(2-am) -1,3,4-thiadaz

-11 CZ 299634 B6

HOOC-CH₂- (D) Cha-Pyr-NH-CH₂-5- (2-am) -1,3, HOÓC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH₂-5- (2-am)-1,3, HOOC-CB2-(D)Cha-Pyr-NH-CH₂-5-(2-am)-1,3,

-thiadaz

-oxadiaz

V následujícím textu používané zkratky mají tyto významy:

Adaala:	Adamantylalanin
Adagly:	Adamanty1glyc in
AIBN:	Ažobisisobutyronitril
Ac:	Acetyí
Ala:	Alanin
airt:'	Amidino
Asp,:	Asparagová kyselina
Aze:	Azetidindikarboxylová kyselina
Bn:	Benzyl
Bůc:	tert-ButyíoxykarbOnyl
Bii:	Butyl
Cbz:	Benzýloxjkarbony.l
Cha:	Cy:kLohexylalanin
Chea:	Cyklóheptylalanin
Cheg:	.Cykloheptylglycin
Chg:	Cyklphexylglycin
Cog:	Cy.fclooktylglycin
Cpa:	Cyclopentylalanin
Cpg:	cyklopentylglycih
DCC;	Dicy&lohexylkarbodiimid
Pch:	Dicyfclohexylalanin
Dcha:	Dicyklohexylamin
DCM:	Díchlonnethan
Dep:	-4,5-Dehydropipe kólová kyselina
DMF:	Dimethylformamid
DIPEA:	. Diisopropylethylamin
Dpa:	Difenylalariin
Diphe:	2,5-Dihydro fenylalánin
Et:	Ethyl
Eg:	Ekvivá 1 e n.t v
fur:	Furan

-12CZ 299634 B6

Gly:

ham:

HGSucc: HPLC:

Hvd:

* imi;

2-Ind:

iPr:

Leu:

Mesd-MeCha:

PP~Me₂Cha:

4-MeCha: γ-MeCha:

3.3- :Me2Cfta: 4-MeChg:

3.3- Me₂Chg: MPLC:

MTBE:

MBS:

Hog:

Oxadiaz: Oxaz:

Ph:

Phě:

2Phi:

Pie:

pico:

pim:

PPA:

Pro:

Py:

Pyr: pyraz: pyrr:

RTs

RP-18:

Glycin

Hydroxyamidino

Hydroxysukcinimid

Vysokoúčinná kapalinová chromatógrfie

Hydroxyprólin

Imidazol

2-Dihydroindol karboxylová kysel i na iso-Propyl

Leucin

Methyl a-Methylcyklóhexylalariin

2-Ainino-3-c:5Klohe.xyl-3-niěthyl_má_selná. kyselina nebo PP“Ďimethylcyklohexylalanin.

(4-Methyl-Í-cyklohexyljalanin (l-Methýl-l-cyXlphexýl)alanin (3,3-Dimethyl-l-cyklóhexyl)alanin (4-Methyl-1-cyhexyl)glycin {3,3-Dimethy1-1-cyklohexy1)glycin Střednětlaká kapalinová chromát ograf.i e

MethyΓ-terč.-butvlether

Ň-Bromosukcinimid

Nórbornylglyóin

1.2.4- Oxadiazol

Oxazol

Fenyl

Fenylalanin

2-Perhydroindol· karboxy 1 ová kysel i na

Pipekol_ová kyselina

Pikoíyl

Piperidínvlmethvl

Anhydrid pr.opy 1 fosf on,ové kyseliny

Prolin

Pyridin

3.4- Dehydroprolin

Pyrazol

Pyrřol

Teplota místnosti

Reverzní fázová C-18

Ω

t:	Terciární
tBu:	Terciární butyl
tert:	Terciární
T3AB;	Tetrabutyiammoniůnt bromid
TEA:	Trietylamin
TFA:	Trifluorocťová kyselina
TFFAí	Aúhydrid trifluoroctové kyseliny
TLC:	Chromátografie v tenké vrstvě
thiaz:	Thiazol
thioph:	Thióíen
ÍTic:	l-Tetráhydroisochinoiinkarboxylová kyselina
3Tic:	3-Te t ra hydro isochino1inkatboxy1ová kyselina
TOTU:	0- (kyanoethoxykarbonyImethylen) amino] •-Ν,Ν,Ν
	' ťětrámethýlůfoniumťetťafluorborát
triaz:	1,3,4-Triázol
Ž:	Ben z yloxy karbony1

Vynález se také týká sloučenin, které obsahují strukturální prvek obecného vzorce

NH —- É -

NHa kde mají E a D shora uvedený význam, a na atomu dusíku skupiny E je atom vodíku, chránící 5 skupina, nesubstituovaná nebo substituovaná přírodní nebo nepřírodní aminokyselina, nesubstituovaná nebo substituovaná karboxylová kyselina nebo sulfonová kyselina nebo nesubstituovaná nebo substituovaná alkylová skupina. Strukturální je hodnotný jako složka fragment inhibitorů serinových proteáz a zvláště inhibitorů trombinu a kallikreinu.

Vynález se také týká meziproduktů obecného vzorce Ha a lib

A-B-E-D-CN (Ha) - « . A-B-E-D-CSNH₂ (lib) kde A, B, E a D mají u obecného vzorce I uvedený význam.

Tyto nové meziprodukty se používají pro přípravu sloučenin obecného vzorce I a jsou hodnotnými stavebními bloky pro přípravu inhibitorů serinových proteáz.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být jako takové nebo v podobě svých solí s fyziologicky vhodnými kyselinami. Jakožto příklady takových kyselin se uvádějí kyselina chlorovodíková, citrónová, vinná, mléčná, fosforečná, methansulfonová, octová, mravenčí, maleinová, fumarová, jantarová, hydroxyjantarová, sírová, glutarová, asparagová, pyrohroznová, benzoová, glukurono25 vá, stavěl o vá, askorbová a acetylglycin.

-14CZ 299634 B6

Nové sloučeniny obecného vzorce I se mohou používat pro následující indikace;

- nemocí, jejichž patogenní mechanismus spočívá přímo nebo nepřímo na proteolytickém působení trombinu,

- nemoci, jejichž patogenní mechanismus spočívá na aktivaci receptorů závislých na trombinu a signálních transdukcích, nemoci související se stimulací [například PAI-1, PDGF (od destiček odvozený růstový faktor), P-selektin, ICAM-1, tkáňový faktor] nebo inhibicí (například NO syntéza v buňkách hladkého svalstva) exprese genů v tělesných buňkách, nemoci odvozené od mitogenického působení trombinu,

- nemoci odvozené od na trombinu závisejících změn kontraktility a permeability epitheliálních buněk (například vaskukulární endothelíální buňky), na trombinu závislé tromboembolické příhody, jako je trombóza hloubkových žil, pulmonámí embolismus, myokardiální nebo mozkový infarkt, arteriální fibrilace, bypasová okluze, roztroušená íntravaskulámí koagulace (DIC), reokluze a pro snížení reperfuzní doby na komedikaci s trombolytiky, jako jsou streptokináza, urokináza, prourokináza, t-PA, APSAC, aktivátory plasminogenu ze slinných žláz živočichů a rekombinantní a mutované formy všech těchto látek, výskyt časné reokluze a pozdější restenózy po PTCA, na trombinu závislá proliferace buněk hladkého svalstva,

- akumulace aktivního trombinu v centrální nervové soustavě (například při Alzheimerově nemoci), r

nádorový růst a prevence adheze a metastáz nádorových buněk.

Nové sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou používat zvláště pro terapii a profylaxi na trombinu závislých tromboemholických příhod, jako jsou trombózy hloubkových žil, pulmonámí embolismus, myokardiální a mozkový infarkt, nestabilní angína a také pro terapii rozptýlené intravaskulární koagulace (DIC). Kromě toho jsou vhodné při kombinovanou terapii s trombolytiky, jako jsou streptokináza, urokináza, prourokináza, t-PA, APSAC a jiné aktivátory plasminogenu ke zkrácení reperfuzí doby a k prodloužení reokluzní doby.

Dalším výhodným oborem použití jsou prevence na trombinu závislé časné reokluze a pozdější restenózy po perkutanní transluminální koronární angioplastii, k předcházení na trombinu závislé proliferace buněk hladkého svalstva, k zabránění akumulace aktivního trombinu v centrální nervové soustavě (například při Alzheimerově nemoci), k omezování růstu nádorů a k zabránění mechanizmů, které vedou k adhezi a metastázování nádorových buněk.

Nové sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se také mohou používat pro povlekání umě50 lých povrchů, například hemodialyzních membrán a hadicových systémů a potřebných vedení, oxygenátorů vextrávaskulámí cirkulaci, stentů a srdečních klapek.

Nové sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se také mohou používat pro ošetřování patogenních mechanismů odvozených přímo nebo nepřímo od proteolytického působení kinino_ i <.

genáz, zvláště kallikreinu, například při zánětlivých onemocněních, jako jsou astma, pankreatitida, rýma, arthritis, kopřivka a jiné vnitřní zánětlivé nemoci.

Nové sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat o sobě známým způsobem orálně nebo parenterálně (subkutanně, intravenozně, intramuskulámě, intraperitoneálně, rektálně). Podávali se také mohou v podobě páry nebo spreje prostřednictvím nosohrtanové cesty,

Podávaná dávka závisí na věku, stavu a hmotnosti ošetřovaného jedince a na způsobu podání. Zpravidla je denní dávka účinné látky pro ošetřovaného jedince přibližně 10 až 2 000 mg při orálním podávání a 1 až 200 mg při parenterálním podání. Tato dávka se může podávat ve dvou nebo čtyřech jednotlivých podílech nebo jednou za den v depotní formě.

Nové sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou používat v podobě o sobě známých pevných nebo kapalných farmaceutických prostředků, jako jsou například nepovlečené nebo (filmem) povlečené tablety, kapsle, prášky, granule, čípky, roztoky, masti, krémy nebo spreje. Tyto farmaceutické prostředky se vyrábějí o sobě známým způsobem. Účinná látka se pro tyto účely mísí s farmaceutickými pomocnými činidly o sobě známými, jako jsou pojidla tablet, objemová činidla, konzervační činidla, rozptylovací činidla pro tablety, regulátory toku, změkčovadla, smáěedla, dispergátory, emulgátory, rozpouštědla, činidla zpomalující uvolňování, anti-.

oxidanty a/nebo hnací plyny (Sucker a kol.: Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978). Formy podání, získané tímto způsobem, zpravidla obsahuji hmotnostně 0,1 až 99 % účinné látky.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou připravovat způsoby znázorněnými na schématech 1 až ÍIÍ.

Stavební bloky A, B, E a D se vytvářejí s výhodou předběžně odděleně a posléze se používají ve vhodně chráněné formě (schéma I až HI).

-16CZ 299634 B6

Schéma I

(P znamená chráněnou skupinu, (P) znamená chráněnou skupinu nebo atom vodíku)

Ve schématu I se popisuje lineární výstavba molekuly obecného vzorce I kopulací aminu H-D-CN s N-chráněnou aminokyselinou obecného vzorce P-E-OH za získání sloučeniny obecného vzorce P-E-D-CN, ze které se odštěpuje N-koncová chránící skupina za získání sloučeniny obecného vzorce H-E-D-CN, která se kopuluje s N-chráněnou aminokyselinou obecného vzorce P-B-OH za získání sloučeniny obecného vzorce P-B-E-D-CN, ze které se odštěpuje chránící skupina P za získání sloučeniny obecného vzorce H-B-E-D-CN, která se následně alkyluje popřípadě chráněným stavebním blokem (P)-A-U (U. je, uvolňovaná skupina) nebo redukční alkylací sloučeninou obecného vzorce (P)-A'-U (U znamená aldehyd, keton) nebo Michaelovou adicí vhodným (P)A'-C=C-deri vátém za získání sloučeniny obecného vzorce (P)A-B-E-D-CN. Převedení nitrilové skupiny na amidinovou skupinu se provádí buď klasickou

Pinnerovou syntézou (R. Boder, D. G. Neilson, Chem. Rev. 61, str. 179,1962), nebo modifikovanou Pinnerovou syntézou, která probíhá přes iminothioesterovou sůl jakožto meziprodukt (H. Vieweg a kol., Pharmazie 39, str. 226, 1984) nebo přímo způsobem, který popsal A. Eschenmoser (Helv. Chimica Acta69, str. 1 224, 1986). Následně se v molekule ještě zbylé chránící skupiny odštěpí s výhodou kyselou hydrolýzou.

Jestliže se stavební blok D včleňuje v podobě H-D-CONH₂, provádí se na jednom chráněném mezistupni dehydratace amidové skupiny na nitrilovou skupinu nebo přeměna na thioamidovou skupinu. Nebo se může jako stavebního bloku D používat při syntéze H-D-CSNH₂.

- 17CZ 299634 B6

Schéma II (P) (P) (p:

(U) H

OH H..· <P) (P) (P) (P) (P)

H

-OH Ή •Cti

CN

NH₂ ^xS-alkyl ^NH NH nh₂

NH

NH₂

Schéma II popisuje lineární výstavbu molekuly obecného vzorce I alky lácí, redukční amínací nebo Michaelovou adicí sloučeniny obecného vzorce H-B-P na odpovídajícím způsobem vhod5 ný popřípadě chráněný stavební blok A za získání sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-P, odštěpením C-koncové chránící skupiny za získání sloučeniny obecného vzorce (Pý-A-B-OH, kopulací s H-E-P za získání (P)-A-B-E-P, odštěpením C-koncové chránící skupiny za získání sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-E-OH, kopulací se sloučeninou obecného vzorce H-D-CN za získání sloučeniny obecného vzorce (P)-A-E-C-D-CN a reakcí tohoto mezilo produktu za získání konečného produktu podobně jako při způsobu podle schéma L

Pokud mají sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-P stále ještě volnou skupinu NH na bloku B, musí se na tuto skupinu zavést chránící skupina před odštěpováním C-koncové chránící skupiny. Chránící skupiny musí být v každém případě navzájem ortogonální.

Jakožto alternativa k bloku obecného vzorce H-D-CN se může používat také bloku obecného vzorce H-D-CONH₂, H-D-CSNH₂, H-D-C-(NH)-NH₂, H-D-C(NP)NH₂, H-D-C(NP)NHP, přičemž v prvním případě kopulovaný meziprodukt obecného vzorce (P)-A-B-E-D-CONH₂ se dehydratuje za získání sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-E-D-CN nebo se přímo převádí za získání sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-E-D~CSNH₂.

o

Schéma III

Schéma III popisuje velmi účinný způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I konvergentní syntézou. Vhodně chráněné stavební bloky obecného vzorce (P)-A-B-OH a H-E-D-CN se navzájem kopulují a získaný meziprodukt sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-E-D-CN se nechává reagovat za získání konečného produktu jako podle schéma I.

Jakožto alternativa k bloku obecného vzorce H-D-CN se může používat také bloku obecného vzorce H-E-D-CN nebo H-E-D-CONH2 nebo H-E-D-CSNH₂, přičemž v prvním případě se dehydratuje kopulovaný meziprodukt (P}-A-B-E-D-CONH₂ za získání sloučeniny obecného vzorce (P)-A-B-E-D-CN nebo se převádí za získání obecného vzorce (P)-A-B-E-D-CSNH₂.

Jakožto N-koncové chránící skupiny se používají skupiny Boc, Cbz nebo Fmoc, s výhodou skupina Boc a jako C-koncové chránící skupiny se používají skupina methylová, terč-butylová a benzylová. Pokud se v molekule použije několika různých chránících skupin, musí být tyto skupiny navzájem ortogonální, pokud se nemají odštěpovat současně. Pokud meziprodukt obsahuje blok E, jsou chránící skupiny Cbz a benzyl nevhodné.

Žádané kopulační reakce a jiné reakce pro zavádění a odštěpování chránících skupin se provádějí zá podmínek osobě známých v chemii peptidů (M. Bodanszky, Á. Bodanszky „The Practice of Peptide Synthesis“, 2. vydání, Springer Verlag Heidelberg, 1994).

Chránící skupiny Boc se odštěpují za použití systému dioxan/HCÍ nebo TFA/DCM a chránící skupiny Cbz se odštěpují hydrogenolýzou fluorovodíkem. Hydrolýza esterových skupin se prová25 dí hydroxidem lithným v alkoholickém rozpouštědle nebo v systému dioxan/voda. K odštěpování terc.-butylové skupiny se používá trifluoroctová kyselina nebo systém dioxan/HU.

Při reakcích, které se řídí chromatografií v tenké vrstvě, se zpravidla používá jako mobilních fází:

A.	DCM/MeOH	95:5
B.	DCM/MeOH	9: 1
C.	DCM/MeOH	8:2
D.	DCM/MeOH/50 % HOAc	40:10:5
E.	DCM/MeOH/50 % HOAc	35:15:5

Pokud se dělení provádí sloupcovou chromatografií, používá se silikagelu a shora uvedených mobilních fází.

-10CZ 299634 B6

Při dělení reverzní fázovou chromatografií HPLC se používá systému aceton itril/voda a HOAc pufru,

Výchozí sloučeniny se mohou připravovat následujícími způsoby:

Jakožto používané stavební bloky A pro alky láci se příkladně uvádějí;

terč-butyl-a-bromacetát. terc.-butyl-(3-brompropionát, terc.-butyl-a-brompropionát, terc10 butyl-gama-brombutyrátpropionát, terč-butyl-a-brombutyrátpropionát, THP-chráněný bromethanol, THP-chráněný gama-brompropanol, α-brom-gama-butyrolakton, pro redukční aminací dihydroxyaceton, di-terc.-butylacetondikarboxylát a pro Michaelovu adici terč-butyl akry lát, terc.-butylmethakrylát a di-terc.-butylfumarát. Pokud shora uvedené terc.-butylestery nejsou obchodně dostupné, mohou se připravovat podobným způsobem, jako popsali G. Uray a W. Lindner (Tetrahedron 44, str. 4357 až 4362, 1988).

Stavební bloky B

Je známa velmi četná a nejrůznější literatura pro obecné a specifické způsoby syntézy amino20 kyselin. Přehled takové literatury je například v publikaci Houben-Weyl, svazek El 6d/ část 1, od str, 406.

Jakožto často používané prekurzory se uvádějí ethylester benzofenoniminoctové kyseliny, diethylacetamidornalonát a ethylisonitrilacetát.

Připravují se různé deriváty glycinu a alaninu například z ethylisonitrilacetátu a z odpovídajícího ketonu nebo aldehydu (H. J. Prdtorius, J. Flossdorf, M.R. Kula, Chem. Ber. 108, str. 3079,1975),

Syntéza cyklooktylglycinu, 2-norbornylglycinu, adamantylalaninu, gama-methylcyklohexyl30 alaninu, 4-Ísopropylcyklohex-l-ylalaninu, 4-methylcyklohex-l-ylalaninu a 4-methylcyklohex1-ylglycinu se provádí přes odpovídající ethyl-2-formylaminoakryláty (U. Schollkopf aR, Meyer, LiebigsAnn. Chem. str. 1 174, 1977), přičemž se vychází zethyelsteru isokyanoctové .kyseliny spříslušnými karbonylováni sloučeninami ze souboru zahrnujícího cyklooktanon, 2norbomanon, 1-formy ladamantan, 1 -formy l-l-methylcyklohexan, 1-formy 1-4-isopropy Icyklo35 hexan, 1 -formyM-methylcyklohexan a 4-methylcyklohexanon za použití následujících obecných způsobů:

Obeéný způsob přípravy ethyl-2-formyíaminoakrylátů

Roztok 100 ml ethyelsteru isokyanoctové kyseliny v 50 ml tetrahydrofuranu se.přidá po kapkách do 100 mmol terc.-butoxidu draselného ve 150 ml tetrahydrofuranu při teplotě 0 až -10 °C. Po 15 minutách se při téže teplotě přidá 100 mmol vhodné karbonylové sloučeniny v 50 ml tetrahydrofuranu, reakční směs se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti a rozpouštědlo se odežene na rotační odparce. Zbytek se smísí s 50 ml vody, 100 ml kyseliny octové a 100 ml

DCM a produkt se extrahuje DCM. Fáze DCM se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se odežene na rotační odparce. Získané produkty jsou téměř čisté, popřípadě se však mohou dále čistit sloupcovou chromatografií na silikagelu (mobilní fáze: systém ether/petrolether).

Obecný způsob přípravy hydrochloridů aminokyselin z ethyl-2-formylaminoakrylátů

Hydrogenuje se 100 mmol ethyl-2-formylaminoakrylátu v přítomnosti palladia na uhlí (10%) a vodíku ve 200 ml ledové kyseliny octové až do ukončení reakce. Katalyzátor se odfiltruje, kyselina octová se odežene co nejvíce na rotační odparce a zbytek se vaří pod zpětným chladičem ve 200 ml 50% koncentrované kyselině chlorovodíkové po dobu pěti hodin. Kyselina chloroCZ 299634 B6 vodíková se odežene na rotační odparce a produkt se vysuší při teplotě 50 °C ve vakuu a pak se několikrát promyje etherem. Hydrochloridy se získají jako slabě zbarvené krystaly.

Získá se 25,0 g cyklooktylglycinhydrochloridu z 18,9 g (150 mmol) cyklooktanu. Získá se 26,6 g

2-norbornylglycinhydrochloridu z 16,5 g (150 mmol) 2-norbomanonu. Získá se 26,0 g adamantylalaninhydroehloridu z 19,7 g (120 mmol) 1-formyladamantanu. Získá se 16,6 g gama-ntelhylcyklohexylalaninhydrochloridu z 12,6 g (100 mmol) 1 -formy 1-1-methylcyklohexanu. Získá se 25,9 g 4-methylcyklohexylglycinhydrochloridu z 16,8 g (150 mmol) 4-methylcyklohexanonu. Získá se 18,0 g trans-4-methyl-l-cyklohexylalaninhydrochloridu z!5,0g trans-1 -formyMio methylcyklohexanu. Získá se 10,0 g 3,3-dimethylcyklohex-l-ylalaninhydrochloridu z 9,0 g 3,3di methyl-1-formy Icykíohexanu.

Aldehyd l-formyl-3,3-dimethylcyklohexanu, potřebný pro přípravu, se připravuje způsobem založeným na způsobu, kteiý popsal Moskal a Lensen (Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 106, str. 137 až 141, 1987).

Roztok n—butyllithia v n-hexanu (72 ml, 115 mmol) se přidá po kapkách v průběhu 10 minut do míchaného roztoku diethylisokyanomethylfosfonátu (17 ml, 105 mmol) ve 280 ml bezvodého diethyletheru při teplotě -60 °C. Získaná suspenze se míchá při teplotě -60 °C po dobu 15 minut a v průběhu 10 minut se přidá roztok 3,3-dimethylcyklohexanonu (13 g, 105 mmol), ve 100 ml bezvodého diethyletheru za udržování teploty pod -45 °C. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu 0°C, míchá se při teto teplotě po dobu 90 minut a opatrně se přidá 150 až 200 ml 38% vodné kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs se intenzivně míchá při teplotě místnosti po dobu 15 hodin k dokonalému proběhnutí hydrolýzy. Organická fáze se oddělí, promyje se vždy

2 00 ml vody, nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nasyceného roztoku chloridu sodného. Vysuší se síranem horečnatým, zfiltruje se a zkoncentruje se na rotační odparce k odstranění rozpouštědla. Získaný zbytek se použije bez dalšího čištění jakožto výchozí látka pro syntézu aminokyseliny.

Příprava Boc-(D)-a-methylcyklohexylalanÍnu

Hydrogenuje se 3,4 g (12,2 mmol) Boc-(D)-a-methyl-Phe-OH ve 100 ml methanolu v přítomnosti 250 mg 5% rhenia na oxidu hlinitím za tlaku vodíku 1, MPa při teplotě 50 °C po dobu 24 hodin. Filtrací a odehnáním rozpouštědla se získá 2,8 g Boc-(D)-a-methyl-Cha-OH.

'H-MNRÍDMSO-dó, Óvppm): 12 (velmi široký signál, COOH); 1,7-0,8 (25H; 1,35 (s, Boc), 1,30 (s,Me)) /

Boc-(3-Ph)-Pro-OH se připravuje podobným způsobem, jako popsal J. Y. L. Chung a kol.

(J. Y. L. Chung a kol., J, Org. Chem. 55, str. 270, 1990).

Příprava Boc-l-tetralinglycinu

Boc-l-tetralinglycin se připravuje z 1,2-dihydronaftalenu. Nejdříve se 1,2-dihydronaftalen pře45 vádí reakcí s bromovodíkem na 1-tetralylbromid (podobně jako podle J. Med. Chem. 37, str. 1586, 1994). Bromid se nechává reagovat s diethylesterem acetamidmalonové kyseliny, hydrolyticky se štěpí a získaná α-aminokyselina se převádí o sobě známým způsobem na Boc chráněnou formu. Další možnosti přípravy popsal E. Reimann a D. Voss (E. Reimann, D. Voss, Arch. Pharm. 310, str. 102, 1977).

Příprava Boc-l-(D,L)Tic-OH

Boc-l-(D,L)Tic-OH se připravuje způsobem, který popsal R.T. Shuman a kol. (R.T. Shuman a kol., J. Med. Chem. 36, str. 314, 1993).

-21 CZ 299634 B6

Příprava Boc-l-(D,L)Dch-OH ?

Hydrogenuje se Boc-l-(D,L)Dpa-OH (1 mmol) ve 12 ml methanolu spolu v přítomnosti J katalytického množství 5% rhenia na oxidu hlinitém za tlaku 0,5 MPa, Filtrací a odstraněním ^1 rozpouštědla ve vakuu se získá produkt ve kvantitativním výtěžku. jjj ' V

Příprava cykloheptylglycinu, cyklopentylglycinu, 4-isopropylcyklohexylglycinu a 3,3-dimethylcyklohexylglycinu io Tyto aminokyseliny se připravují reakcí cykloheptanonu, cyklopentanonu, 4-isopropylcyklohexanonu a 3,3-dimethylcykIohexanonu s ethylisonitrilacetátem způsobem, který popsal H.J. Prátorius (HJ. Prátorius, J. Flossdorf, M. Kula, Chem. Ber. 108, str. 3079, 1975).

Příprava H-D,L-Chea-OH , ...

Pod zpětným chladičem se 4,0 g (19,39 mmol) cy klohepty 1 methyl methan sulfonátu, připraveného z cykloheptylmethanolu a z methansulfonylchloridu, vaří se 4,9 g (18,47 mmol) benzofenoniminglycinethylesteru, s 8,9 g (64,65 mmol) jemně práškovitého suchého uhličitanu draselného a s 1 g (3 mmol) tetrabutylamoniumbromidu v 50 ml suchého acetonitrilu v prostředí inertního plynu po dobu 10 hodin. Uhličitan draselný se odfiltruje, filtrát se odpaří k suchu a surový produkt se hydrolyzuje přímo se 20 ml 2N kyseliny chlorovodíkové ve 40 ml ethanolu za míchání při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodin. Reakění roztok se zředí a benzofenon se extrahuje ethylacetátem v kyselém oboru a následně se H-D,L-Chea~OEt extrahuje DCM v alkalickém oboru (hodnota , pH 9), roztok se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se na rotační odparce. Výtěžek je 3,7 g, což je přibližně 95 % teorie.

Boc-(D,L)-(3,4,5”-(MeO)3Phe-OH se připravuje alkylací benzofenoniminglycinethylesteru trimethoxybenzylchloridem, následným zavedením Boc chránící skupiny a zmýdelněním esteru.

D-(l,4-Cyklohexadien-l-yl)ala-OH se připravuje způsobem, který popsal G. Zivilichovsky a V. Gurvich (J. Chem. Soc., Perkin Trans 1 19, str. 2509 až 2515, 1995).

H-(D,L)-PP-Me2Cha-OH se připravuje způsobem, který popsal U. Schóllkopf a R. Meyer (L. Ann. Chem., str, 1174 až 1182,1977).

Tyto aminokyseliny se převádějí di-terc.-butyldikarboxylátem v systému voda/dioxan o sobě známými způsoby na formu s chránící skupinou Boc,a následně se nechávají překrystalovat ze systému ethvlacetát/hexan nebo se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (mobilní fáze: systém ethylacetát/petrolether).

Skupinou Boc chráněné aminokyseliny se používají jako stavební bloky B při způsobu podle schéma I.

Uvedené aminokyseliny jakožto stavební bloky B se také v některých případech převádějí na odpovídající benzylestery a spojují se se stavebními bloky A vhodně chráněnými. V případě sloučenin s nechráněnou skupinou N-H se tato skupina následně chrání skupinou Boc, benzylesterová skupina se odstraní hydrogenací a stavební blok A-B-OH se čistí krystal izací, srážením solí nebo sloupcovou chromatografií. Tento způsob je dále objasněn na příkladu tBuOOC-CHHBoc) (D)Cha-OH.

⁵⁰

Příprava benzylesteru D-cyklohexyJalaninu

Suspenze 100 g (481 mmol) D-cyklohexylalaninhydrochloridu, 104 g (962 mmol) benzylalkoholu a 109,7 g (577 mmol) monohydrátu p-toluensulfonové kyseliny ve 2 200 ml toluenu se poma55 lu zehřeje na teplotu zpětného toku za použití odlučovače vody. V teplotním oboru 80 až 90 °C se

-22CZ 299634 B6 pozoruje vývoj chlorovodíku a rozpouštění suspenze za získání čirého roztoku. Když se voda neodlučuje (po přibližně čtyřech hodinách) oddestiluje se 500 ml toluenu, reakční nechá přes noc vychladnout, zfiltruje se vzniklá sraženina a promyje se dvakrát vždy hexanu. Získaný zbytek (195 g) se supenduje ve 2 000 ml dichlormethanu, po přidání vody se hodnota pH upraví za míchání na 9 až 9,5 postupným přidáváním 50% roztoku du sodného. Organická fáze se oddělí, promyje se dvakrat vždy 500 ml vody, vysusi se sodným, zfiltruje se k odstranění sušidla a získaný filtrát se zahustí, čímž se získá 115 g (94 % teorie) žádaného produktu ve formě bledého oleje.

již další směs se 1000 ml 1000 ml hydroxiSnanCni i o Příprava N-(terc-buty loxykarbonylmethy len)-D-cyklohexy lalaninbenzylesteru

Rozpustí se 115 g (440 mmol) D-cyklohexylalaninbenzylesteru ve 2000 ml acetonitrilu a při teplotě místnosti se přidá 607,5 g (4,40 mmol) uhličitanu draselného a 94,3 g (484 mmol) terc-butylbromacetátu a reakční směs se míchá při této teplotě po dobu tří dnů. Uhličitan se odfiltruje, promyje se acetonitrilem, matečný louh se zkoncentruje (za teploty 30 ^QC a za tlaku 20 000 Pa), zbytek se vyjme do 1000 ml methyl-terc-butyletheru a organická fáze se extrahuje 5% kyselinou citrónovou a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, Organická fáze se vysuší síranem sodným, zfiltruje se k odstranění sušidla a zahustí se, čímž se získá olej (168 g), který se použije přímo v další reakci.

Příprava N-Boc-N-(terc-butyloxykarbonylmethylen)-D-cyklohexylalanmbenzylesteru

Olej N-(terc-butyloxykarbonylmethylen)-D-cyklohexylalaninbenzylesteru (168 g, 447 mmol), získaný v předchozím stupni, se rozpustí v 1 400 ml acetonitrilu a po přidání 618 g (4,47 mmol) práškového uhličitanu draselného a 107,3 g (492 mmol) di-terc-butyldikarbonátu se míchá při teplotě místnosti po dobu šesti hodin. Uhličitan draselný se odfiltruje za odsávání, promyje se přibližně 1 000 1 cetonitrilu a filtrát se zkoncentruje. Získá se 230 g žádaného produktu.

Příprava N-Boc-N-(terc-butyloxykarbonylmethylen)-D-cyklohexylalanincyklohexylamonÍové 30 soli

Rozpustí se 115 gN-Boc-N-(terc-butyloxykarbonyImethylen)-D-cyklohexylalanínbenzylesteru v 1 000 ml Čistého ethanolu a hydrogenuje se v přítomnosti 9 g 10% palladia na uhlí vodíkem za tlaku okolí při teplotě 25 až 30 °C po dobu dvou hodin. Reakční směs se zfiltruje, rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce, čímž se získá 100 g (260 mmol) žlutého oleje, který se vyjme do 1 600 ml acetonu a zahřeje se na teplotu zpětného toku. Vyhřívací lázeň se odstraní a kapací nálevkou se plynule přidá roztok 27 g (273 mmol) cyklohexylaminu v acetonu. Žádaná sůl vykryštaluje ochlazením reakční směsi nateplotu místnosti. Pevná látka sé odfiltruje, promyje se 200 ml acetonu a pro konečné vyčištění se prekrystaluje ještě jednou z acetonu. Vysušením zbytku ve vakuové pícce při teplotě přibližně 30 °C se získá 70,2 g žádané soli v podobě bílého prášku.

N-Boc-N-(terc-Butyloxy karbony lmethylen)-D-cyklohexylglyc i ncyklohexylamoniová sůl se připravuje podobným způsobem ze cyklohexylglycinu jakožto prekurzoru.

Příprava N-Boc-N-(terc-butyloxy karbony lethylen)-D-cyklohexylal ani ncyklohexylamon i o vé soli

a) terc-Butyl ester 3-brompropionové kyseliny 50

Zavede se 16,64 g (109 mmol) brompropionové kyseliny, 150 ml kondenzovaného 2-methylpropenu a 2 ml koncentrované kyseliny sírové při teplotě -30 °C v protiproudu dusíku do skleněné nádoby vhodné jako autokláv, těsně se uzavře a míchá se při teplotě místnosti po dobu 72 hodin. Pro zpracování se reakční nádoba opět ochladí na teplotu -30 °C a reakční roztok se opatrně vlije do 200 ml ledem chlazeného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Nadbytek

2-methyl propenu se nechá odpařit za míchání a zbytek se extrahuje třikrát vždy 50 ml dichlormethanu, organické fáze se spojí, vysuší se síranem sodným, sušidlo se odfiltruje a roztok se zahustí ve vakuu vodní vývěvy. Olej ovitý zbytek se čistí sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: n-hexan, později systém n-hexan/diethylether 9:1). Získá se 18,86 g žádané sloučeniny.

b) N-(íerc.-B uty íoxykarbony letny ien)-D-cykiohexylalanÍnbenzy Sester

Rozpustí se 49,4 g (189mmol) D-cyklohexylalaninbenzylesteru ve 250 ml acetonitrilu a po přidání 31,6 g (151 mmol) terč-butylbromprop ion átu při teplotě místnosti se vaří pod zpětným ío chladičem po dobu pěti dnů. Vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje se několikrát acetonitrilem, filtrát se zahustí ve vakuu vodní vývěvy, zbytek se vyjme do 350 ml dichlormethanu, organická fáze se extrahuje 5% kyselinou citrónovou a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného.

Organická fáze se vysuší síranem sodným, sušidlo se odfiltruje a zbytek se zahustí. Olejovitý zbytek se čistí sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: dichlormethan později systém dichlor15 methan/methanol 95:5). Získá se mírně nečistý olej, kterého se přímo použije v dalším stupni.

c) N-Boc-N-(terc-Buty1oxykarbony1ethy1en)-D-cyklohexylalaninbenzylester

V předchozím stupni získaný N-(terc-butyloxykarbonylethylen)-D-cyklohexylalaninbenzylester v podobě oleje (30 g, max. 70 mmol) se rozpustí ve 150 ml acetonitrilu a po přidání 28 ml (160 mmol) diisopropyletbylaminu a 19,2 g (88 mmol) diterc.-buty ld i karbonátu se míchá při teplotě místnosti po dobu tří dnů. Reakční směs se zkoncentruje na rotační odparce za vakua vodní vývěvy, zbytek se vyjme do n-hexanu. promyje se pětkrát vždy 3 ml 5% roztoku kyseliny citrónové, spojené organické fáze se vysuší síranem sodným, sušidlo se odfiltruje a zbytek se po zahuštění podrobí dělení sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: systém hexan/ethylacetát 95:5). Získá se 32,66 g (64 mmol) žádaného produktu.

d) N-Boc-N -(terč .-Butyloxy karbony lethylen)-D-cyklohexylalan i ncyklohexylamoniová sůl

Rozpustí se 32,66 g (64 mmol) N-Boc-N-(terc-butyloxykarbony 1 ethylen)~D-cyklehexylalaninbenzylesteru ve 325 ml čistého ethanolu a hydrogenuje se vodíkem za tlaku okolí při teplotě 25 až 30 °C v přítomnosti 3 g 10% palladia na aktivním uhlí po dobu 14 hodin. Filtrací roztoku přes Celite^R, promytím ethanolem a odstraněním rozpouštědla na rotační odparce se získá 26,7 g žlutého oleje, který se vyjme do acetonu a zahřeje se na teplotu zpětného toku. Vyhřívací lázeň se odstraní a kapací nálevkou se plynule přidá roztok 7 g (70 mmol) cyklohexy laminu v acetonu. Žádaná sůl vykrystaluje ochlazením reakční směsi na teplotu místnosti. Pevná látka se odfiltruje, promyje se 25 ml acetonu a pro konečné vyčištění se překrystaluje ještě jednou z acetonu. Vysušením zbytku ve vakuové pícce při teplotě 30 °C se získá 26,6 g (54 mmol) žádané soli v podobě bílého prášku.

40’

N-Boc-N-(terc-Butyloxykarbonylmethylen)-D-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolin

a)

N-Boc-Pyr-OH (5 g, 23,45 mmol) se rozpustí v methanolu (50 ml) a přidá se chlorovodík vdioxanu (4N, 30 ml). Vaří se pod zpětným chladičem po dobu 12 hodin, rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a jako produkt se získá H-Pyr-OMe hydrochlorid. Výtěžek je 3,84 g (100 % teorie).

b)

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-OH (8 g, 20,75 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (75 ml) a při teplotě -10 °C se přidá ethyldiisopropy lamin (15,5 ml, 89,24 mmol). Míchá se při této teplotě po dobu 5 minut a do roztoku se přidá po kapkách roztok H-Pyr-OMe hydrochloridu (3,4 g, 20,75 mmol) v dichlormethanu (25 ml). Roztok anhydridu propanfosfonové kyseliny v ethylacetátu (50%, 20 ml, 26,96 mmol) se přidá po kapkách a reakční směs se míchá při teplotě -10 až 0 °C po dobu dvou hodin. Směs se zředí dichlormethanem a promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 80 ml), 5% roztokem kyseliny citrónové (2x15 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (1 x 20 ml). Organická fáze se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografíí (na silikagelu, (mobilní fáze; systém dichlormethan/methanol 95:5). Získá se 6,2 g (60 % teorie) žádaného produktu.

c)

Rozpustí se N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OMe (5,5 g, 11,12 mmol) vdtoxanu (40 ml) a po přidání roztoku hydroxidu sodného (IN, 22,2 ml, 22,24 mmol) se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin. Dioxan se odstraní na rotační odparce, vodná fáze se promyje ethylacetátem a okyselí se na hodnotu pH 1 až 2 roztokem hydrogensíranu draselného (20%). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem a spojené organické fáze se vysuší síranem Sodným. Výtěžek je 5 g (94 % teorie) bezbarvé pěny. Překrystalovánín z n-hexanu nasyceného vodou se získají bezbarvé krystaly (teplota tání je 158 až 160 °C).

N-Boc-N-{terc.-Butyloxykarbonylmethylen)-D-cyklohexylglycyl-3,4-dehydroprolin

Tato sloučenina se připravuje podobným způsobem zN-Boc-N-(terc-butyIoxykarbonylmethy[en)-D-cyklohcxylglycinu a ze 3,4-dehydroprolinmethylesteru.

(L)-3,4-Dehvdroprolin. používaný jako stavební blok E, je obchodně dostupný a (D,L)-4,5-dehydropipekolová kyselina se může připravovat způsobem, který popsal A. Burgstahler a C.E, Aiman (J. Org. Chem. 25, str. 489, 1960) a C. Herdeis a W. Engel (Arch. Pharm. 326, str. 297, 1993) a následným převedením působením (BOC)₂O na Boc-(D,L)-Dep-OH.

Stavební bloky D se připravují následujícím způsobem:

5-Am i nomethy 1-2-kyanothiofen

Způsob přípravy tohoto stavebního bloku je popsán v evropském patentovém spise číslo WO 95/23609. >

4-Aminomethyl-2-kyanothiofen

a) 2-Brom-4-formylthiofen

Rozpustí se 36 g (320 mmol) 3-formylthiofenu v 600 ml methylenchloridu a ochladí se na teplotu 5 °C, po částech se přidá 100 g (750 mmol) chloridu hlinitého a reakční směs se vaří pod zpětným chladičem. Po kapkách se přidá roztok 59 g (19 ml, 360 mmol) bromu ve 40 ml methylenchloridu v průběhu 45 minut a reakční směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu čtyř hodin. Po ochlazení se reakční roztok vlije do 600 g ledové vody a extrahuje se methylenchloridem. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem horečnatým a zkoncentruje se na rotační odparce. Získá se 64,5 g surového produktu, který se čistí sloupcovou chromatografíí (na silikagelu, mobilní fáze: systém methylenchlorid/ petrolether). Získá se 56,5 g mírně nečistého produktu.

b) 2-Kyano-4-formylthiofen

Přidá se 7,6 g (85 mmol) kyanidu mědneho do roztoku 13,53 g (70,82 mmol) 2-brom-4-formylthíofenu ve 25 ml dimethylformamidu a reakční směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 3,5 hodin, přičemž se původně bledě zelená suspenze změní na černý roztok. Po přidání vody se reakční směs několikrát extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se nasycenou

-25CZ 299634 B6 j

solankou, vysuší se síranem sodným a zkoncentrují se na rotační odparce za mírného vakua. Do zbytku (7 g) se přidá ether, čímž se získá 1,6 g čistého produktu. Matečný louh se čistí spolu se surovými produkty z jiných násad chromatografií (na silikagelu, mobilní fáze: systém methylenchlorid/petrolether 1:1). Celkem se nechává reagovat 56,5 g 2-brom-4-formyIthiofenu, čímž se získá 12,6 g čistého 2-kyano-4-formylthiofen (31 % teorie).

c) 2-Kyano-3-hydroxymethylthiofen

Přidá se 3,47 g (91,8 mmol) borohydridu sodného po částech do suspenze 12,6 g (91,8 mmol)

2-kyano-4-formylthiofenu ve 200 ml ethanolu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin, přičemž se pomalu vytváří čirý roztok. Zbytek se zahustí ve vakuu, vyjme se do ethylacetátu, promyje se postupně nasycenou solankou, 5% kyselinou citrónovou a nasycenou solankou, organická fáze se vysuší síranem sodným a zahustí se ve vakuu, čímž se získá 11,7 g téměř čistého produktu (výtěžek je 91,5 % teorie).

d) 3-Bromethyl-2-kyanothiofen

Rozpustí se lí,7g (84,07 mmol) 2-kyano-3-hydroxymethylthiofenu spolu se 24,1 g (91,87 mmol) tri feny Ifosfinu ve 100 ml tetrahydrofuranu při teplotě místnosti a za chlazení (v ledové lázni) se přidá po částech 30,47 g (91,87 mmol) tetrabrommethanu. Míchá se při teplotě místností pó dobu tří hodin, reakční směs se zahustí ve vakuu a čistí se chromatografií na silíkagelu (mobilní fáze: systém methylenchlorid/petrolether). Získá se 18,8 g bledě žlutého krystalického produktu stále ještě obsahujícího petrolether.

e) 4-N,N-Bis(terc.-butoxykarbonyl)aminomethyI-2-kyanothiofen ,

Rozpustí se 18,81 g 3-bromethyl-2-kyanothiofenu (surový produkt, maximum 84,07 mmol) ve 160 ml tetrahydrofuranu, reakční směs se ochladí na teplotu 5 °C a po částech se přidá 3,07 g (102,4 mmol) 80% suspenze hydridu sodného. Následně se po kapkách při teplotě 5 °C přidá

22,25 g (102,4 mmol) di-terc.-butyliminodikarboxylátu rozpuštěného ve 160 ml tetrahydrofuranu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Jelikož je podle chromatografie v tenké vrstvě konverze neúplná, udržuje se reakční směs zahříváním na teplotě 30 až 35 °C po dobu 4,5 hodin. Po ochlazení na teplotu 0 až 5 °C se pomalu po kapkách přidá 33 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, tetrahydrofuran se oddestiluje ve vakuu, zbytek se několikrát extra35 huje ethyl acetátem, ethylacetátové fáze se promyjí nasycenou solankou, vysuší se síranem sodným a zahustí se na rotační odparce ve vakuu. Viskózního červeného zbytku (34,61 g) se použije jakožto surového produktu v dalším reakčním stupni.

f) 4—Aminomethyl-2-kyanothiofenhydrochlorid . ......> ···. - . —

Rozpustí se 34,61 g 4-N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-2-kyanothiofenu (surový produkt, maximum 84,07 mmol) v 600 ml ethylacetátu, reakční směs se ochladí na teplotu 0 až 5 °C, nasytí se plynným chlorovodíkem a nechá se ohřát na teplotu místnosti. Po třech hodinách se získaná suspenze zahustí na rotační odparce a několikrát se společně destiluje s methylen45 chloridem. Zbytek se extrahuje za míchání etherem a vysuší se ve vakuu. Získá se 13,85 g produktu v podobě bledě zbarveného prášku. Výtěžek dvou stupňů je 94,3 % teorie. 2-Aminomethyl—4-kyanothiofen

a) 4-Kyanothiofen-2-karbaldehyd

Suspenduje se 49,3 g (258,05 mmol) 4-bromthiofen-2-karbaldehydu a 27,8 g (310,41 mmol) kyanidu mědného ve 130 ml absolutního dimethylformamidu a vaří se pod zpětným chladičem po dobu osmi hodin. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce ve vakuu při teplotě 40 °C a zbytek se suspenduje v ethylacetátu a převede se do Soxlethova přístroje. Zbytek se extrahuje

-26-’ přes noc, žlutý roztok se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se na rotační odparce ve vakuu a získaná žlutá pevná látka se překrystaluje z etheru. Získá se 25,3 g produktu (80 % teorie).

b) 4_Kyanothiofen-2-karbaldehydoxim

Rozpustí se 11,6 g (84,6 mmol) 4-kyanothiofen-2-karba!dehydu ve 140 ml methanolu a přidá sc 12,3 g (116,1 mmol) uhličitanu sodného. Přidá se 6,5 g (93,5 mmol) hydroxylaminhydrochloridu po částech za chlazení na teplotu 15 °C a reakční směs se míchá při teplotě 10 °C po dobu dvou hodin. Po přidání 80 ml vody se reakční směs extrahuje pětkrát vždy 50 ml diethyletheru, organická fáze se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 12,5 g žádaného produktu v podobě žlutého krystalického prášku (96 % teorie).

c) 2-AminomethyM-kyanothiofenhydrochlorid

Přidává se opatrně 11,22 g (171,64 mmol) jemného zinkového prachu v několika malých podílech do roztoku 4,65 g (30,60 mmol) 4-kyanothiofen-2-karbaldehydoximu v 50 ml trifluoroctové kyseliny, ochlazené na teplotu 0 až 5 °C tak, aby teplota nepřekročila 15 °C. Míchá se po dobu tří hodin při teplotě místnosti, nadbytek zinku se dekantuje a trifluoroctová kyselina se v podstatě odstraní za sníženého tlaku (olejové vývěvy). Zbylý olej se ochladí na teplotu 0 °C a směs 150 ml

3N roztoku hydroxidu sodného a 2 1 methylenchloridu, ochlazená na teplotu 0 °C, se přidá po částech. Nerozpustné podíly se odfiltrují, organická fáze se oddělí, vodná fáze se extrahuje osmkrát vždy 20 ml methylenchloridu, spojené organické fáze se vysuší síranem sodným za chlazení ledem a přidá se 20 ml 6M methanolické kyseliny chlorovodíkové, Produkt se vy sráží v podobě hydrochloridu jakožto bílá pevná látka a krystalizace se ukončí udržováním suspenze přes noc na teplotě 4 °C. Získá se 2,2 g produktu v podobě bezbarvých jehlic (50 % teorié). 5-Aminomethyl-3,4-dimethylthiofen-2-karboxamidhydrochlorid

Suspenduje se 19 g (105,42 mmol) 5-kyano-3,4-dimethylthiofen-2-karboxamidu v 760 ml methanolu a ve 110 ml 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové a po přidáni 9,5 g palladia na uhlí (10%) se hydrogenuje při teplotě místnosti. Po přijetí 4,7 1 vodíku (4 hodiny) se methanol oddeštiluje ve vakuu a vodná fáze se extrahuje třikrát ethylacetátem a suší se vymrazováním. Získá se 16,3 g žádaného produktu v podobě bílé pevné látky (70,4 % teorie).

5-Aminomethylisoxazol-3-karboxamid

a) Ethyl-5-chlormethylisoxazol-3-karboxylát

Po kapkách se přidá 21,2 g (210 mmol) triethylaminu do míchané směsi 30 g (198 mmol) ethyl-2-chlor-2-hydroxyiminoacetátu a 150 ml propargylchloridu, ochlazeného na teplotu 10 až 15 °C. Míchá se po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti, přidá se voda, reakční směs se extrahuje etherem, organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu na rotační odparce. Zbytek se destiluje ve vakuu 66,6 Pa, přičemž produkt destiluje při teplotě 116 až 122 °C.

'

b) 5-ChIormethy I isoxazol-3-karboxylová kyselina

Smíchá se 47,3 g (250 mmol) ethyl-5-chlormethylisoxazol-3-karboxylátu ve 150 ml ethanolu se 14 g (250 mmol) hydroxidu draselného a reakční směs se míchá při teplotě 60 až 70 °C po dobu šesti hodin. Po ochlazení a zahuštění ve vakuu se zbytek vyjme do vody a extrahuje se etherem, vodná fáze se okyselí chlorovodíkovou kyselinou a extrahuje se několikrát etherem, etherové fáze se vysuší síranem sodným a zahustí se ve vakuu (olejové vývěvy při teplotě 50 °C). Získá se 31 g žádaného produktu (77 % teorie).

-27CZ 299634 B6

c) 5-Chlormethylisoxazol-3-karbonylchlorid

Pod zpětným chladičem se vaří 120 g (743 mmol) 5-<hlormethylisoxazol-3-karboxyIové kyseliny spolu s 500 ml thionylchloridu a se dvěma kapkami pyridinu po dobu 10 hodin, reakční směs se zahustí ve vakuu a následně se destiluje za tlaku 2 666 Pa. Produkt destiluje při teplotě 125 až 133 °C, čímž se získá 78 g žádaného produktu (58 % teorie).

d) 5-Chlormethylísoxazol-3-karboxamid io Amoniak se zavádí do roztoku 10 g (55,56 mmol) 5-chlormethylisoxazol-3-karbonylchloridu ve 100 ml methylenchloridu při teplotě 10 až 15 °C po dobu jedné hodiny a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Roztok se ochladí na teplotu 0 °C, sraženina se odfiltruje za odsávání, promyje se malým množstvím studeného methylenchloridu a zbytek se extrahuje za míchání vodou dvakrát k odstranění amoniových solí. Sušením ve vakuu se získá

6,58 g čistého produktu v podobě světlého prášku (74 % teorie).

e) 5-Aminomethylisoxazol-3-karboxamidhydrochlorid

Přidá se 2,44 g (15,2 mmol) 5™chlormethylisoxazol-3-karboxamidu do směsi 100 ml koncentro20 váného amoniakálního roztoku a 72 ml methanolu, roztok se zahřeje na teplotu 40 °C, přičemž se kontinuálně sytí plynným amoniakem. Prekurzor se nechává reagovat po dobu šestí hodin. Methanol se odstraní ve vakuu, vodná fáze se extrahuje dvakrát methylenchloridem a vodná fáze se šetrně ve vakuu odpaří k suchu. Získá, se bílá pevná látka, která se použije jakožto surový produkt při kopulaci s Boc-dehydroprolinem.

2-AminomethylthiazoM-thiokarboxamid se připravuje způsobem, který popsal G. Videnov, D. Kaiser, C. Kempter a G. Jung (Angew. Chemie 108, str, 1 604, 1996) za odstranění chránící skupiny z N-Boc-chráněné sloučeniny etherovou kyselinou chlorovodíkovou v methylenchloridu.

4- Aminomethylthiazol-2-thiokarboxamid

Jakožto předběžný stupeň používaný 4-aminomethylthiazol-2-karboxylát se připravuje způsobem popsaným v americkém patentovém spise US 4 826 816. Po zavedení chránící skupiny BOc na aminovou skupinu se esterová skupina zmýdelní, získaná kyselinová skupina se převádí přes smíšený anhydrid (isobutylkarbonát) na karboamid a pak se převede Lawessonovým reakčním činidlem nathioamid. Odštěpením chránící skupiny se získá žádaný meziprodukt.

5- Aminomethyl-2-kyanofuran

a) 5-Kyanofuran-2-karbaldehyd

Přidá se 165 ml (264 mmol) 1,6 molámího roztoku n-butyllithia v n-hexanu v průběhu 20 minut do roztoku 26,7 g (264 mmol) diisopropylaminu v 600 ml tetrahydrofuranu, ochlazeného na teplotu -78 °C. Teplota roztoku se nechá stoupnout na -20 °C, roztok se opět ochladí na teplotu -75 °C a při této teplotě se pomalu po kapkách přidá roztok 22,3 g (240 mmol) 2-kyanofuranu ve 100 ml tetrahydrofuranu. Míchá se po dobu 30 minut, pomalu po kapkách se přidá 93 ml d i methyl formaidu a reakční směs se míchá po dobu dalších 30 minut. Pro zpracování se přidá roztok 40 g kyseliny citrónové ve 200 ml vody při teplotě -70 °C. Zahustí se na rotační odparce, přidá se 600 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a reakční směs se extrahuje třikrát vždy 200 ml diethylétheru. Spojené organické extrakty se suší síranem horečnatým. Sušidlo se odfiltruje a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: dichlormethan). Eluát se zahustí a zbytek se podrobuje destilaci s vodní párou (teplota varu azeotropní směsi s vodou je 60 až 65 °C za tlaku 13,33 Pa). Extrakcí destilátu

-2RCZ 299634 B6 diethyletherem, vysušením organické fáze a zahuštěním roztoku se získá 10,6 g (88 mmol, 36 % teorie) žádané sloučeniny.

¹H-NMR (270 MHz, d₆-DMSO): δ = 7,7 (d, 1H), 7,8 (d, 1H), 9,75 (s, l H).

b) 5-Hydroxymethyl-2-kyanofiiran

Přidá se 2,34 g (62 mmol) borhydridu sodného po částech do roztoku 30 g (0,25 mol) 5-kyanofuran-2-karbaldehydu v 500 ml absolutního ethanolu ochlazeného na teplotu -30 °C. io Roztok se míchá při teplotě -30 °C po dobu dvou hodin za chlazení a hodnota pH se nastaví

5% roztokem kyseliny citrónové ve vodě na 7. Reakční směs se zahustí ve vakuu vodní vývěvy, do zbytku se přidá nasycený roztok chloridu sodného a reakční směs se extrahuje několikrát vždy 150 ml diethyletheru. Spojené organické fáze se vysuší síranem horečnatým, sušidlo se odstraní, rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy při teplotě místnosti. Získá se 27 g (22 mmol,

88 % teorie) žádané sloučeniny v podobě temně červeného oleje, kterého se používá bez dalšího čištění v následující reakci.

'H-NMR (250 MHz. d₆-DMSO): δ = 4,4 (m, 2H), 5,6 (bs. lH),6,6(d, lH),7,5(d, 1H).

c) 5-Brommethyl-2-kyanofuran

Přidá se 38 g (145 mmol) trifenylfosfmu do roztoku 15 g (121 mmol) 5-hydroxymethyl-2kyanofuranu ve 250 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se ochladí na teplotu -10 °C a přidá se roztok 48 g (145 mmol) tetrabrommethanu ve 100 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se při této teplotě po dobu tří hodin. Reakční směs se zahustí na rotační odparce ve vakuu vodní vývěvy a zbytek se čistí sloupcovou chromatografíí (mobilní fáze; petrolether/dichlormethan 1:1, R_f = 0,5). Získá se 11,5 g žádané sloučeniny.

'H-NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 4,8 (m, 2H), 6,7 (d, 1H), 7,7 (d, 1H).

d) 5-N,N-Bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyI-2-kyanofuran

Přidá se po částech 4,0 g (135 mmol) hydridu sodného (80% suspenze v minerálním oleji) do roztoku 22,9 g (123 inmol) 5-brommethyl-2-kyanofuranu ve 400 ml tetrahydrofuranu ochlazeného na teplotu 0 °C. Po kapkách se přidá roztok 29,4 g (135 mmol) di-terc -butyliminodikarboxylátu ve 200 ml tetrahydrofuranu, přičemž se dbá, aby teplota nepřekročila 5 °C. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Jelikož je zreagování (podle chromatografie v tenké vrstvě) neúplné, přidá se celkem 1,2 g hydridu sodného ve třech podílech v průběhu devíti hodin. Pro dokonalé zreagování se reakční směs zahříváním udržuje na teplotě 35 °C po dobu tří hodin, nechá se vychladnout ha teplotu místnosti a pomalu se přidá 600 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodné vývěvy, zbytek se několikrát extrahuje ethylacetátem. Spojené organické fáze se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem horečnatým a zahustí se na rotační odparce. Získá se 37,3 g olejovitého zbytku, který stále ještě obsahuje di-terc-butylimino45 dikarboxylát a kterého se bez čištění používá jako surového produktu v následujícím stupni.

'H-NMR (250 MHz, d_s-DMSO): δ = 1,4, 1,45 (s, 18H), 4,75 (s, 2H), 6,55 (d, 1H), 7,55 (d, 1H).

e) 5-Aminomethyl-2-kyanofuranhydrochlorid

Rozpustí se 37,3 g 5-N,N-bis(terc.-butoxykarbonyl)aminomethyl-2-kyanofuranu (surový produkt ze stupně d) (maximum 123 mmol) v 600 ml ethylacetátu, ochlazeného na teplotu 0 °C. Roztok se nasytí plynným chlorovodíkem a po 30 minutách se oddělí bílá sraženina. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Získaná suspenze se zahustí na rotační odparce, zbytek se extrahuje za míchání diethyletherem, rozpouštědlo se odstraní filtrací

-?o CZ 299634 B6

I a pevný zbytek se suší při teplotě místnosti ve vakuu. Získá se 15,1 g žádané sloučeniny (77 % teorie při dvou stupních) v podobě slabě okrově zabarveného prášku.

'H-NMR (250 MHz, dff-DMSO): 6 = 4,15 (bs, 2H), 6,85 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 8,8-9,0 (bs, 3H).

5-Aminomethy!-3-kyanofuran

a) EthyM-oxopentanoát io Pod zpětným chladičem se vaří 100 g (0,86 mol) 4-oxopentanové kyselin, 150 ml ethanolu a 1 ml kyseliny sírové ve 200 ml benzenu tak dlouho, až ustane oddělování vody v Dean-Starkově odlučovači. Ochlazená reakční směs se promyje vodou, roztokem uhličitanu sodného a opět vodou a vysuší se za teploty zpětného toku za použití Dean-Starkova odlučovače. Když je odlučování vody ukončeno, odstraní se rozpouštědlo destilací a zbytek se destiluje za sníženého tlaku. Teplota varu produktu je 85 až 87 °C/2 132,8 Pa a výtěžek je 105,5 g (85 % teorie).

b) EthyM,4-diethoxypentanoát

Směs 171,3 g (1,19 mol) ethyl-4-oxopentanoátu 207 ml (184,2 g, 1,24 mol) triethylortoformátu, 26 ml absolutního ethanolu a 1 g p-toluensulfcnové kyseliny se vaří pod zpětným chladičem po dobu osmi hodin za intenzivního míchání a pak se destiluje ve vakuu. Získá se 187,9 g (72,5 % teorie) ethyl-4,4-diethoxypentanoátu o teplotě varu 104 až 106/1 866,2 Pa.

c) Ethyl-2-formyllevulinát

Směs 106,3 g (0,489 mol) ethyM,4-diethoxypentanoátu a 80 ml (73,6 g, 0,99 mol) ethylformátu se přidá po kapkách do intenzivně míchané suspenze 12,7 g (0,55 grarnatomu) sodíku (v podobě tenkých lístků) ve 300 ml bezvodého benzenu pří teplotě 10 až 15°C v průběhu tří hodin.

v míchání se pokračuje po dobu dalších tří hodin, načež se reakční směs nechá stát přes noc. Za intenzivního míchání se přidá 250 ml vody a v míchání se pokračuje po dobu dalších 15 minut. Vodná vrstva se oddělí a benzenová vrstva se extrahuje 70 ml vody. Spojené vodné extrakty se okyselí na hodnotu pH 2 a extrahují se ethylacetátem (5 x 50 ml) a organické extrakty se vysuší chloridem vápenatým,

- '

Ethylacetátový roztok se destiluje za sníženého tlaku a shromáždí se frakce o teplotě varu 102 až 110 °C/133,3 Pa. Tato frakce je směsí ethyl-2-formyllevulinátu a jeho diethylketalu. Poměrný obsah složek v této směsí závisí na intenzitě míchání a na době oddělování fází při izolaci formylačních produktů.

Benzenová vrstva se podobně vysuší chloridem vápenatým, rozpouštědlo se odstraní a zbytek se destiluje za sníženého tlaku a získaná směs ethyllevulinátu a ketalu se zpracuje jako ve stupni b) místo čistého ethyllevulinátu. Stupen 2) a 3a) se opakuje až do získání potřebného množství ethyl-2-formyllevulinátu.

d) Ethyl-5-methylfuran-3-karboxylát

Shora uvedená směs ethyl-2-formyllevulinátu a jeho diethylketalu se rozpustí v benzenu, přidá se katalyzátor a získaný roztok se vaří pod zpětným chladičem za použití Dean-Starkova odlučovače po dobu 3 až 3,5 hodin až do dokonalého odstranění vody. Reakční směs se destiluje za sníženého tlaku, čímž se získá 15 g (97 mmol) ethyl-5-methyIfuran-3~karboxylátu o teplotě varu 97/1 999,5 Pa.

e) 5~MethyIfuran-3-karboxylová kyselina

-30CZ 299634 B6

Směs 31,7 g (206mmol) ethyl-5-methylfuran-3-kar boxy latu, 40 ml 45% roztoku hydroxidu draselného a 100 ml vody se vaří pod zpětným chladičem za míchání po dobu čtyř hodin, ochladí se na teplotu 10 °C a okyselí se 15% kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH l. Získaná reakční směs se ponechá při této teplotě po dobu dvou hodin, sraženina se odfiltruje a vysuší se do konstantní hmotnosti při teplotě 45 až 50 °C, čímž se získá 23,7 g (188 mmol, 91 % teorie) 5-methy lfuran-3-karboxy lové kysel iny.

f) 5-Methylfuran-3-karbonylchlorid ío Přidá se 39,2 g (188 mmol) chloridu fosforečného po malých částech do míchané suspenze 23,7 g (188 mmol) 5-methylfuran-3-karboxylové kyseliny ve 100 ml benzenu. Pozoruje se značný vývin tepla a chlorovodíku. Získaná reakční směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu čtyř hodin, načež se destiluje ve vakuu, Čímž se získá 24,7 g (171 mmol, 91 % teorie) chloridu kyseliny o teplotě varu 79 °C/1 599,6 Pa.

g) 5-Methy1furan-3-karboxamid

Přidá se po kápkách 24,7 g (171 mmol) 5-methylfuran-3-karbonylchloridu do míchané směsi 80 ml 25% roztoku hydroxidu amonného a 80 ml benzenu při teplotě 25 až 40 °C. Získaná reakční směs se míchá po dobu tří hodin a nechá se stát přes noc. Další den se odfiltrují bílé krystaly 5-methylfuran-3-karboxamidu, promyjí se studenou vodou a vysuší se do konstantní hmotnosti při teplotě 40 až 45 °C, čímž se získá 19,7 g (158 mmol, 92 % teorie) produktu o teplotě tání 158 °C.

h) 5-Methyl-3-kyanofuran

Přidá se 32,9 g chloridu fosforečného po malých částech do suspenze 19,7 g (158 mmol) 5-methylfuran-3-karboxamidu ve 100 ml benzenu při teplotě 30 až 40 °C. Získaná reakční směs se vaří pod zpětným chladičem až do vyčeření (3,5 až 4 hodiny) a destiluje se ve vakuu.

Shromažďuje se frakce o teplotě varu 79 až 140 °C/1 999,5 Pa. Druhá destilace poskytuje 12,7 g (119 mmol, 75 % teorie) žádané sloučeniny o teplotě varu 79 až 80 °C/1 999,5 Pa. i) 5-Brommethyl-3-furankarbonitril _T

Rozpustí se 12,7 g (119 mmol) 5-methyl-3-kyanofuranu ve 100 ml tetrachlormethanu a přidá se 22 g (122 mmol) NBS a 12 g (73 mmol) AIBN. Získaná reakční směs se zahřeje za intenzivního míchání ná teplotu 70 °C, kdy se nastartuje exotermická reakce. Po ukončení vývoje tepla se reakční směs míchá při teplótě 80 °C po dobu tří hodin, ochladí se ha teplotu místnosti a získaný sukcinimid se odfiltruje a promyje se na filtru tetrachlormethanem (2x15 ml).

· ' '

Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se destiluje ve vakuu, čímž se získá 12,7 g (86 mmol, 57% teorie) 5-brommethyl-3-furankarbonitrilu o teplotě varu 105 ^ŮC/133,3 Pa. Spektrum 'H-NMR vykazuje obsah nečistot, které produkují signál při o 1,3 a 2,2 ppm. Obsah těchto nečistot je dostatečně nízký po druhé destilaci, ztrácí se však přibližně 15 % produktu.

5-Brommethyl-3-furankarbonitril je bílá krystalická látka o teplotě tání 40 až 45 °C.

'H-NMR (CDClj, ppm): δ = 4,41 (2H, CH₂), 6,58 (1H, H4), 7,92 (ÍH, H2),

13C-NMR (CDC1₃, ppm): 20,86 (CH₂), 99,03 (CN nebo méně pravděpodobně C3), 109,97 (C4),

112,27 (C3 (nebo CN), 149.84 (C2), 152, 32 (C5).

Reakční produkt je silně dráždivý a proto se s ním musí zacházet s nej vyšší opatrností.

5-N,N-Bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-3-kyanofuran se připravuje podobným způsobem jako 5-N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-2-kyanofuran. Následné odštěpení terč-butoxy karbony lové skupiny se provádí nasyceným roztokem chlorovodíku v chloroformu.

2-Amidino-5-(N-Boc-aminomethyl)-l-methylpyrrolhydroacetát

a) 5-Kyano-l-methylpyrrol-2-karbaldehyd

1-Methylpyrrol se může převádět na 2-kyano-l-methylpyrrol reakcí s chlorsulfonylisokyanátem io a s dimethylformamidem v acetonitrilu (například C.E. Loader a kol., Can. J. Chem. 59, str. 2 673 až 2 676, 1981). Diisopropylamin (17,5 ml, 124,38 mmol) se zavádí do tetrahydrofuranu (100 ml) v prostředí dusíku. Při teplotě -78 °C se přidá po kapkách roztok n—butyllithia v hexanu (15%, 75,9 ml, 124,38 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě -20 °C po dobu minut, znova se ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se při této teplotě přidá roztok

N-methylpyrroI-2-karbonitrilu (12 g, 113,07 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml). Míchá se při teplotě -78 °C po dobu 45 minut, po kapkách se přidá dimethylformamid (43,9 ml, 546,46 mmol) a v míchání se pokračuje při této teplotě po dobu dvou hodin. Přidá se monohydrát kyseliny citrónové (20,56 g), reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a přidá se voda (112 ml). Tetrahydrofuran se odstraní na rotační odparce, vodná fáze se nasytí chloridem sodným a extrahuje se diethyletherem (3 x200 ml). Spojené organické fáze se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se čistí bleskovou chromatografií (silikagel, dichlormethan). Výtěžek je 8,25 g 5-kyano-l-methylpyrro1-2-karbaldehydu (54 % teorie).

'H-NMR (CDC1₃, ppm): 5 = 4,1 (s, 3H), 6,8 (d, 1H), 6,9 (d,lH), 9,7 (s, 1H).

b) 5-Hydroxymethyl-l-methylpyrrol-2-karbonitril

Rozpustí se 5-kyano-l-methylpyrrol-2-karbaldehyd (8,2 g, 61,1 mmol) získaný způsobem podle odstavce a) vethanolu (200 ml) a při teplotě -10 °C se přidá natriumborhydrid (2,31 g, 61,13 mmol). Míchá se při teplotě 0 až 5 °C po dobu 1,5 hodin, rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a do zbytku se přidá ledová voda a 20% roztok hydrogensíranu sodného. Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické fáze se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou až do neutrální reakce a vysuší se síranem sodným.

Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se čistí bleskovou chromatografií (silikagel, mobilní fáze: dichlormethan/methanol, 97,5:2,5). Výtěžek je 7,6 g (91 % teorie). 'H-NMR (CDCIj, ppm): δ = 1,9 (t, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,6 (d, 2H), 6,1 (d, IH), 6,7 (d, 1H).

c) 5-Azidomethyl-l-methylpyrrol-2-karbonitril

Rozpustí se 7,5 g (55,08 mmol) 5-hydroxymethyl-I-methyIpyrrol-2-karbonitrilu v dimethylformaidu (220 ml) a přidá se při teplotě 0 °C 43,34 g (165,25 mmol) trifenylfosfinu. Míchá se při této teplotě po dobu 5 minut, přidá se 54,8 g (165,25 mmol) tetrabromethanu. Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 minut a při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu 0 °C, přidá se 4,37 g (76,21 mmol) azidu sodného a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4,5 hodin. Po kapkách se přidá nasycený roztok chloridu sodného při teplotě 0 °C a reakční směs se zředí ethylacetátem. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje diethyletherem. Spojené organické fáze se promyjí vodou a vysuší se síranem sodným.

Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se čistí bleskovou chromatografií (silikagel, mobilní fáze: ethylacetát/hexan, 1:20). Výtěžek je 5,6 g (63 % teorie).

‘H-NMR (CDClj, ppm): δ = 3,75 (s, 3H), 4,35 (s, 2H), 6,2 (d, 1H), 6,7 (d, 1H).

. 3? .

d) 5-Aminomethy 1-1-methy lpyrrol-2-karbonitril

5-Azidomethyl-l-methylpyrrol-2-karbonitril (4,71 g, 29,25 mmol), získaný způsobem podle odstavce c), se rozpustí v methanolu (100 ml) a přidá se palladium na uhlí (10%, 1 g). Reakční I směs se hydrogenuje vodíkem za tlaku 0,1 MPa po dobu čtyř hodin, Katalyzátor se odfiltruje přes 1

Celíte* a filtrát se zkoncentruje na rotační odparce. Zbytek se extrahuje za míchání systémem · dichlormethan/diethylether, 1:1. Produkt se odfiltruje za odsávání a vysuší se ve vakuové pícce při teplotě 35 °C. získá se 2,7 g produktu (68 % teorie).

’Η-NMR (CDCI₃, ppm): δ = 3,75 (s, 3H), 3,85 (s, 2H), 6,05 (d, 1H), 6,7 (d, 1H).

e) 5_(N-Boc-Am inornethy l)-1 -methy lpyrrol-2-karbonitri 1

5-AminomethyI-l-methylpyrrol-2-karbonitril (2,7 g, 19,97 mmol), získaný způsobem podle odstavce d), se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a přidá se triethylamin (2,8 ml, 19,97 mmol).

Roztok di-terc-butyldikarbonátu (4,36 g, 19,97 mmol) v dichlormethanu (30 ml) se přidá po kapkách. Míchá se při teplotě místnosti po dobu dvou hodin, přidá se voda a vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojené organické fáze se vysuší síranem sodným a zkoncentrují se na rotační odparce. Surový produkt se používá bez dalšího čištění v následujícím stupni. Výtěžek je 4,4 g (94 % teorie).

'H-NMR (CDCIj, ppm): δ = 1,45 a 1,55 (každé s, celkem 9H), 3,7 (s, 3H), 4,3 (d, 2H), 4,7 (sbř,

1H), 6,05-(d, 1H), 6,7 (d, 1H). '

f) 5-(N-Boc-Am inornethy 1)-1 -methy lpyrrol-2-hydroxyamidin

5-(N-Boc-Aminomethyl)-l-methylpyrrol-2-karbonitril (4,3 g, 18,27 mmol), získaný způsobem podle odstavce e), se rozpustí v systému methanol/dichlormethan (100 ml, 1:1) a přidá se hydroxylaminhydrochlorid (3,17 g, 45,61 mmol), Ethyldiisopropylamin (19,1 ml, 109,65 mmol) se přidá po kapkách při teplotě místnosti. Míchá se při teplotě 40 °C po dobu dvanácti hodin, rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce, do zbytku se přidá voda, reakční směs se okyselí na hodnotu pH 5 kyselinou octovou a extrahuje se systémem dichlormethan/ethylacetát. Spojené organické fáze se vysuší síranem sodným a zkoncentrují se·na rotační odparce. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografíí (silikagel, mobilní fáze: systém dichlormethan/methanol, 95:5).

Výtěžek je 3,4 g (69 % teorie).

'H-NMR (CDCIj, ppm): δ = 1,4 (s, 9H), 3,7 (s, 3H), 4,3 (d, 2H), 4,7-4,9 (m, 3H), 6,05 (d, IH), ' 6,3 (d, 1H), 7,3 (sbr, IH).

g) 2-Amidino-5-(N-“Boc-aminométhyl)-l-methylpyrrolhydroacetát

5-(N-Boc-Aminomethyl)-l-methy]pynOl-2-hydroxyamidin (3,4 g, 12,67 mmol), získaný způsobem podle odstavce f), se rozpustí v methanolu (150 ml) a přidá se kyselina octová (1,45 ml, 25,31 mmol) a Raneyův nikl (421 mg). Reakční směs se hydrogenuje vodíkem za tlaku

0,1 MPa pří teplotě 50 °C po dobu pěti hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, katalyzátor se odfiltruje přes Celite^R a filtrát se zkoncentruje. Surový produkt se používá bez čištění v následující reakci. Výtěžek je 3,7 g (94 % teorie),

FAB-MS (M+Ff): 253.

2-Amidino-5-(N-Boc-aminomethyl)-l-methylpyrrolhydroacetát

a) 5-Kyano-l-methylpyrrol-3-karbaldehyd

Chlorid hlinitý (24,24 g, 180,86 mmol) se rozpustí v systému nitromethan/dichlormethan ‘(1:1, 320 ml) a po ochlazení na teplotu -20 °C se přidá l-methyIpyrrol-2-karbonitril (8g,

75,36 mmol). α,α-Dichlordimethylether (10,4 g, 90,43 mmol), rozpuštěný v dichlormethanu (42 ml) se přidá po kapkách. Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu čtyř hodin a vlije se na led (200 g). Vodná fáze se extrahuje diethyletherem. Spojené organické fáze se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhiičitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného až do neutrální reakce. Reakční směs se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce. Surový produkt se používá bez čištění v následující reakci. Výtěžek je 9,2 g (91 % teorie).

'H-NMR (CDC1_3j ppm): δ = 3,80 (s, 3H), 7,20 (s, 1H), 7,4 (s, 1H), 9,85 (s, 1H).

b) 4-Aminomethyl-l-methylpyrroI-2-karbonitril

4-Aminomethyl-l-methylpyrrol-2-karbonitril se připravuje z 5-kyano-l-methy lpyrrol-3karbaldehydu podobně jako 5-aminomethyl-l-methylpyrrol-2-karbonitriI. Avšak 4-azidomethy 1-1-methy lpyrro 1-2-karbon itri I se s výhodou redukuje Staudingerovou reakcí (například S. Nagarajan a kol. J. Org. Chem. 52, str. 5 044 až 5 046,1987).

c) 2-Amidino-4-(N-Boc-aminomethyl)-] -methylpyrrolhydroacetát

2-Amidíno-5-(N-Boc-amiriomethyl)-l-methylpyrrolhydroacetát se připravuje z 4-aminomethyl-l-methylpyrrol-2-karbonitriIu podobně jako 2-amidinc^5-(N-Boc-aminomethy!)-lmethylpyrrolhydroacetát.

’

FAB-MS (M+H⁺): 253.

4-Amidino-2-(N-Boc-aminomethyl)-l-methylpyrrolhydroacetát

a) 4-Kyano-1 -methy lpy rroI-2-karbaldehyd l-Methylpyrrol-2-karbaldehyd (10 g, 91,6 mmol) se rozpustí v acetonitrilu (100 ml) a ochladí se na teplotu -45 °C. Chlorsulfonylisokyanát (38,9 g, 274,9 mmol) vacetonitrilu (40 ml) se přidá po kapkách v průběhu 40 minut. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvanáct hodin.

Po kapkách se přidá di methyl formám i d (35 ml) a reakční směs se zahříváním udržuje na teplotě 50 °C po dobu jedné hodiny. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs vnese do ledu (200 ml) a do 2N roztoku hydroxidu sodného (286 ml). Vytvořená sraženina, se odfiltruje za odsávání. Filtrát se extrahuje diethyletherem. Spojené organické fáze se promyjí zředěným roztokem hydrogenuhiičitanu sodného a vodou do neutrální reakce a vysuší se síranem sodným.

Rozpouštědlo se oddeštiluje ve vakuu vodní vývěvy a zbytek se spojí s dříve získanou sraženinou. Překiystalováním z petroletheru se získá 4-kyano-l-methylpyrrol-2-karbaldehyd (4,3 g)) (například C.E. Loader a kol., Can. J. Chem. 59, str. 2 673 až 2 676, 1981).

'H-NMR (CDC1₃, ppm): δ = 4,0 (s, 3H), 7,2 (s, 1H), 7,3 (s, 1H), 9,6 (s, 1H).

^I3C-NMR(CDC1₃, ppm): δ = 37,4; 94,1; 114,7; 125,8; 132,2; 135,8; 179,7. b) 5-Aminomethyl-l -methy lpyrrol-3-karbonitril

5-Aminomethyl-l-methylpym>l-3-karbonitril se připravuje z 4-kyano-l-methylpyrrol-2karbaldehydu podobně jako 5-aminomethy 1-1 -methylpyrrol-2-karbon itri 1.

‘H-NMR (DMSO-d₆, ppm): δ = 3,6 (s, 3H), 3,8 (s, 2H), 4,2 (sbr, 2H), 6,4 (s, 1H), 7,6 (s, 1H).

c) 3-Amidino-5-(N-Boc-aminomethyl)-l-methylpyrrolhydroacetát

3- AmidÍno-5-(N-Boc-aminomethyl)-l-niethylpyrrolhydroacetát se připravuje z 5-aminomethyl-l-methylpyrrol-3-karbonitrilu podobně jako 2-amidino-5-(N-Boc-aminomethyl)-lmethylpyrrolhydroacetát,

FAB-MS (M-H-f): 253.

4- Aminomethyl-3-kyano-l ,2,4—oxadiazolhydrochlorid io a) N-Boc-5-AmínomethyI-3“kyano-1.2,4-oxadiazo]

Ethyl-N-Boc-5-Aminomethyl-l,2,4-oxadiazol-2-karboxylát (S. Borg a kol., J. Org. Chem. str. 3112 až 3120, 1995) se rozpustí v methanolu (50 ml). Roztokem se vede amoniak při teplotě -10 °C až teplotě místnosti až do dokončení konverze. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce. Získaný surový produkt se rozpustí v dichlormethanu (70 ml) a přidá se při teplotě -5 °C diisopropylethylamin (2,9 ml, 16,55 mmol). Anhydrid trifluoroctové kyseliny (1,06 ml, 7,61 mmol), rozpuštěný v dichlormethanu (10 ml) se přidá po kapkách. Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 1,5 hodin, zředí se dichlormethanem, promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát 5% roztokem kyseliny citrónové a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se oddestiluje na rotační odparce a surový produkt se čistí chromatografií (silikagel, mobilní fáze: systém dichlormethan/methanol, 97,5:2,5). Výtěžek je 1,2 g (80 % teorie).

b) 5-Aminomethyl-3-kyano-l,2,4-oxadiazolhydrochlorid

N-Boc-5-Aminomethyl-3-kyano-l,2,4-oxadiazol (0,9 g, 4,0 mmol), získaný způsobem podle odstavce a), se rozpustí v dichlormethanu (45 ml) a při teplotě místnosti se přidá 4M kyselina chlorovodíková v dioxanu (3,9 ml, 15,61 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a rozpouštědlo se oddestiluje na rotační odparce. Výtěžek je 645 mg (100% teorie).

'H-NMR (DMSO-d₆, ppm): 5 = 4,6 (s, 2H), 9,2 (s, 3H).

N-Methyl-5-aminomethylpyrazol-3-karboxamid

a) Methyl-N-methyl-5-amidopyrazol-3-karbóxylát

N-Methýl-3-methoxykarboňylpyrazol-5-karbonylchlorid (připravený ze 3,7 g, 20,09 mmol N-methyl-3-methoxykarbonyl-3-karboxylové kyseliny, J. Org. Chem. 54, str. 428, 1989) se rozpustí v toluenu a reakční směs se ochladí na teplotu -10 °C. Při teplotě -10 až 0 °C se reakční směsí vede amoniak tak dlouho, až je konverze dokonalá. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce. Zbytek se vyjme do ethanolu, míchá se po dobu 15 minut a ethanol se odpaří na rotační odparce. Zbytek se rozpustí v teplé vodě a nechá se vysrážet při teplotě 0 °C. Sraženina se odfiltruje za odsávání, promyje se acetonem a vysuší se při teplotě 45 °C za sníženého, tlaku.

Výtěžek je 1,5 g (41 % teorie).

b) Methyl-N-methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxylát

Methyl-N-methyl-5-amidopyrazol-3-karboxylát (1,5 g, 8,19 mmol), získaný způsobem podle odstavce a), se vyjme do dichlormethanu (20 ml). Při teplotě -10 °C se přidá diisopropylethylamin (3,85 ml, 22,11 mmol) a při této teplotě se přidá roztok anhydridu trifluoroctové kyseliny (1,3 ml, 9,44 mmol) v dichlormethanu (5 ml) po kapkách v průběhu 45 minut. Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu jedné hodiny, zředí se dichlormethanem a následně se promyje dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát 5% roztokem

kyseliny citrónové a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se oddestiluje na rotační odparce. Výtěžek je 1,35 g (100 % teorie).

El-MS(M+): 165.

c) N-Methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxylát

Methyl-N-methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxylát (1,35 g, 8,19 mmol), získaný způsobem podle odstavce b), se zavede do methanolu (50 ml) a ochladí se na teplotu -10 °C. Reakční směsí se io vede amoniak po dobu osmi hodin. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu hodin, přičemž prekurzor dokonale zreaguje. Sraženina se odfiltruje za odsávání, promyje se studeným methanolem a vysuší se za sníženého tlaku. Výtěžek je 1,22 g (100 % teorie).

'H-NMR (DMSO-d_ň, ppm): δ = 4,0 (s, 3H), 7,4 (s, 1H), 7,5 (s, 1H), 7,8 (s, 1H).

d) N-Methyl-5-amínomethylpyrazol-3-kařboxámid

N-Methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxylát (0,4 g, 2,66 mmol), získaný způsobem podle odstavce

c), se rozpustí v kyselině octové (30 ml) a přidá se 10% palladium na uhlí (78 mg). Reakční směs se hydrogenuje vodíkem za tlaku okolí při teplotě místnosti tak dlouho, až je konverze dokonalá.

Katalyzátor se odfiltruje přes Celite^R a rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce. Výtěžek je

0,4 g (100 % teorie).

EI-MS (M+): 154.

Příklad 1

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklQhexylatanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-amidino)30 thienylmethylamidhydroacetát

a) 3,4-Dehydroprolyl-542-kyano)thienylmethylamid

Boc-3,4-Dehydroprolin (5 g, 23,4 mmol) a 5-aminomethyl-2-kyanothiofenhydrochlorid (4,5 g, 35 25,8 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (25 ml) a při teplotě 0 °C se přidá ethyldiisopropylamin (28 ml, 163,8 mmol) s 50% roztokem anhydridu propansulfonové kyseliny v ethylacetátu (24,8 ml, 117 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu jedné hodiny, ohřeje se na teplotu místnosti a míchá se při teplotě místnosti'po dobu dvanácti hodin. Reakční směs se zředí dichlormethanem a následně se promyje roztokem hydrogensíranu sodného (4x), roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x) a nasyceným roztokem chloridu sodného (lx). Reakční směs se vysuší Síranem sodným a sušidlo se odfiltruje. Rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. K odstranění chránící skupiny Boc se zbytek smísí s dichlormethanem (95 ml), míchá se při teplotě místnosti, odpaří se k suchu a kodestiluje se s dichlormethanem, opět se zkoncentruje a čistí se sloupcovou chromatografií. Získá se 6,6 g žádaného produktu, který stále ještě obsahuje malé množství rozpouštědla.

b) N-(terc.-Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5(2-kyano)th íenylmethy lam id

Rozpustí se t-Bu0₂C-CH₂-Boc-(D)-Cha-OH (7,3 g, 18,98 mmol) a H-Pyr-NH-CH₂-5-(2CNý-thiofhydrochlorid (5,12 g, 18,98 mmol) v dichlormethanu (100 ml) a přidá se ethyldiisopropylamin (12,26 g, 94,9 mmol). Reakční směs se ochladí na teplotu 0 °C a 50% roztok anhydridu propansulfonové kyseliny v ethylacetátu (20 ml) se přidá po kapkách. Míchá se při teplotě 0 až 10 °C po dobu tří hodin, zředí se dichlormethanem (100 ml) a promyje se zředěným roztokem hydrogensíranu sodného (3x), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x) a vodou (lx). Reakční směs se vysuší síranem sodným a sušidlo se odfiltruje. Rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Získá se 12,47 g světle hnědavého oleje.

c) N~(terc-Butoxykarbony1methyIen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyI-55 (2-amidothiokarbonyl)thienylmethylamid

N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklofiexylalanyl-3,4-(lehydroprolyl-5-(2kyano)thienylmethy!amid, získaný způsobem podle odstavce b) se rozpustí v pyridinu (70 ml) a v triethylaminu (12 ml). Reakční směs se ochladí na teplotu 0 °C a nasytí se sirovodíkem ío (roztok zezelená). Míchá se při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Nadbytek sirovodíku se vytěsní dusíkem a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Zbytek se rozpustí v diethyletheru (200 ml) a promyje se zředěným roztokem hydrogensíranu sodného (2x), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x) a vodou (lx). Reakční směs se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Surový produkt (12,6 g) se čistí bleskovou chromatografií (silikagel, mobilní fáze: gradient z dichlormethanu po dichlormethan/methanol, 40:1). Získá se 12,1 g žádaného produktu, který stále ještě obsahuje malé množství rozpouštědla.

d) N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-BoC)“(D)-cyk[ohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-520 (2-5-methylimidokarbonyl)thienylmethylamidhydrojodÍd

N-(terc-ButoxykarbonylmethyIen)-(N-BOC)-(D)-cyklohexylalanyl~3,4-dehydroprolyl-5-(2“ amidothiokarbonyl)thienylmethylamid, získaný způsobem podle odstavce c) se rozpustí v dichlormethanu (120 ml) a přidá se methyljodid (16,24 g, 114,38 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvanácti hodin a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Získá se 14,6 g žádaného produktu v podobě žlutavého oleje.

e) N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)~{N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3.4-dehydroprolyl-5(2-amidino)thienylmethylamidhydroacetát

Surový N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N^;-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-S-methylimidokarbonyl)-thienylmethylamidhydrojodid, získaný způsobem podle odstavce d) se rozpustí v acetonitrilu (90 ml) a přidá se octan amonný (2,94 g, 38,12 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin a při teplotě 40 °C po dobu

1,5 hodin. Přidá se 10% roztok octanu amonného v methanolu (14,65 g, 19,05 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 50 °C po dobu 4,5 hodin a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Zbytek se smísí s dichlormethanem, soli se odfiltrují za odsávání a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se převede na acetátovou sůl na ionexu (Fluka, objednací číslo No. 00402). Získá se 11,15 g žádaného produktu v podobě žlutavého oleje.

f) N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexyla]anyl-3.4-deliydroprolyl-5-(2-amÍdino)thienylmethylamidhydroacetát

N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N’’Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroproIyl-5-(245 amidino)thienylmethylamidhydracetát, získaný způsobem podle odstavce e) se rozpustí v dichlormethanu (175 ml) a přidá se etherový roztok kyseliny chlorovodíkové (38,3 ml) po kapkách. Reakění směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy. Zbytek se smísí s dichlormethanem a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy (2x). Surový produkt (9,35 g) se čistí na ionexu (Fluka, objednací číslo No. 00402) a následně bleskovou chromatografií (silikagel, mobilní fáze: gradient z dichlormethan/methanolu, 4:1, přes dichlormethan/methanol/50% kyselina octová 40:10:2 po dichlormethan/methanol/50% kyselina octová 35:15:5). Získaný produkt se rozpustí ve vodě. Nerozpustný podíl se odfiltruje a filtrát se lyofitizuje, čímž se získá 5,55 g amorfní bílé pevné látky.

FAB-MS (M+fE): 462.

_ 77 _

Následující sloučeniny se získají způsobem podle příkladu 1:

Příklad 2

N-(Hydroxykarbonylethylen)_(D)-cyklohexylalanyl-3.4~dehydroprolyl-5-(2-amidino)thieny[methylamidhydroacetát ίο FAB-MS (M+Ff): 476.

Při všech stupních jako podle příkladu 1 se vycházízN-(terc-butoxykarbonylethylen)-(N-Boc)(Dj-eyklohexylalaninu a ze 3,4-dehvdroprolyl-5-(2-kyano)thienylmethylamidhydu.

Příklad 3

N-(HydroxykarbonylmethylenHD)-cyklohexylglyeyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-amidino)thienylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁴): 448.

Při všech stupních jako podle příkladu 1 se vychází zN-(terc-butoxykarbonylmethylen)-(NBoc)-(D)-cyklohexylglycinu a ze 3,4-dehydroprolyl-5-(2-kyano)thienylmethylamidu.

Příklad 4

N-( Hydroxykarbonyl methyl en)-(D)-cykl ohexylalany 1-3,4-dehyd rop roly l-5-(2-amid i n 0-3,430 dimethyl)thienylmethylamidhydroacetát FAB-MS (M+H⁺): 490.

Připravuje se z 5-aminomethyl-3,4-dimethylthiofen-2-karboxamidu kopulací $Boc-3,4-de35 hydroprolinem za získání Boc-3,4-dehydroprolyl-5-(2-karbamoy1-3;4-dimethyl)thienylmethylamidu jako podle příkladu 1. Po odstranění chránící skupiny Boc se tento vybudovaný blok kopuluje s N-(terc -butoxykarbonylmethylen)—(N-Boc)-(D)—cyklohexylalaninem jako podle příkladu 1. Dehydratace amidové ňá nitrilóvovi šupinu se provádí následujícím způsobem:

Rozpustí se 4,8 g (7,42 mmol) N-(terc.-butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-karbamoyl-3,4-dimethyl)thienylmethylainidu v 60 ml dichlormethanu s 3,83 g (29,64 mmol) diisopropylethylaminu, ochlazeného na teplotu 0 °C. Pomalu po kapkách se přidá 2,8 g anhydridu trifluoroctové kyseliny v 3 ml dichlormethanu a reakční směs se míchá při teplotě 0 až 5 °C po dobu dvou hodin. Reakční směs se zředí 60 ml dichlormethanu a postupně se promyje třikrát 20 ml 20% kyseliny citrónové, dvakrát 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhlicitanu sodného a dvakrát nasycenou solankou a dichlormethanová fáze se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se na rotační odparce. Získá se 5,35 g N-(terc-butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-kyano-3,4-dimethyl)thienylmethylamidu, který stále ještě obsahuje rozpouštědlo a kterého se přímo používá v následujícím stupni.

Konverze nitrilové skupiny na amidinovou skupinu a následující odstranění chránící skupiny se provádí jako podle příkladu 1.

Příklad 5

N-(Hydroxy karbony 1 methy lenffDj-cyklohexyla lany 1-3,4-dehvdrop roly 1-5-(3-amid i no)thienylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺); 462.

Připravuje se způsobem jako podle příkladu 1, používá se však 5-aminomethyl-3-kyanothiofen· hydrochloridu místo 5-aminomethyl-2-kyanothiofenhydrochloridu.

Příklad 6

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyM-(2-amidino)15 thienylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺): 462.

Připravuje se způsobem jako podle příkladu 1, používá se však 4_aminomethyl-2-kyanothiofen20 hydrochloridu místo 5-aminomethyl-2-kyanothÍofenhydrochloridu.

Příklad 7a

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cykIohexylalanyl-(D)-4_í5-dehydropipekolyl-5-(2am i d i n o)th i eny 1 methy 1 am i d hyd roacetát FAB-MS (M+FT): 476.

Příklad 7b

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl~4,5-dehydropipekolyl-5-(2-amidino)thienylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺): 476.

Připravuje se způsobem jáko podle příkladu 1, používá $e racemieké Boc-(D,L)-4.5-dehýdropipekolové kyseliny místo Boc-3,4-dehydroprolinu. Je možné ve stupni N-(terc-butoxy40 ' karbonylmethylen)-(N-Boe)-(D)-cyklohexýlalanyl-(D,L)-4,5-dehydropipekolyl-5-(2-kyano)thienylmethylamidu oddělit obě diastereomemí sloučeniny chromatografíí (silikagel, mobilní fáze systém cyklohexan/ethylacetát, 7:3). Oba diastereomery se následně převádějí na konečné produkty způsobem jako podle příkladu 1.

Příklad 8

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-eyklohexylglycyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3-amidino)thienylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺): 448.

Připravuje se způsobem jako podle příkladu 1, používá se však 5-aminomethyl-3-kyanothiofenu aN-(terc.-butoxykarbonylmethyIen)”N-Boc-(D)-cyklohexylglycyl-3,4-dehydroproIÍnu.

Příklad 9

N^(Hydroxykarbonylmethylen)-(DWyklohexylglycyl-3₁4-dehydroprolylM-(2-amídino)thienylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺): 448.

Připravuje se způsobem jako podle příkladu 1, používá se však 4-aminomethyl-2-kyanothiofenu a N-(terc.-butoxykarbonylmethylen)-N-Boc-(Dpcyklohexylglyeyl-3.4—dehydroprolinu.

¹⁰

Příklad 10

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cykIohexylalaňyl-3,4_dehydroprolyl-5-(2-amidino)15 furanylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺): 446.

Připravuje se způsobem jako podle příkladu 1, používá se však 5-aminomethyl-2-kyanofuran20 hydrochloridů místo 5-aminomethyl-2-kyanothiofenhydrochlorÍdu.

Příklad 11

N-(l-lydroxykarbonylethylen)-(DMyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-amidino)furanylmethylamidhydroacetát FAB-MS (M+řf): 460.

Připravuje se způsobem jako podle příkladu 1, používá se však 5-aminomethyl-2~kyanofuranhydrochloridu místo 5-aminomethyl-2-kyanothiofenhydrochloridu.

Příklad 12

N-{Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cykIohexylglycyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-amidino)furanylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+fC): 432.

^r

Příklad 13

N-(Hyďroxykarbonylmethylen)-(D)^_cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3-amidino)45 . furanylmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+FT): 446.

Příklad 14

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-{2-amidino-lmethyl)pyrrolmethylamidhydrochlorid

a)

5-(N-Boc-Aminomethyl-l-methy]pyrrol-2-amidinhydroacetát (1,5 g, 4,4 mmol) se rozpustí v Ísopropanolu (70 ml) a po přidání ísopropanolové kyseliny chlorovodíkové (5,5 M, 4,5 ml,

24,0 mmol) se zahříváním udržuje na teplotě 50 °C po dobu dvou hodin. Po ochlazení na teplotu místnosti se rozpouštědlo odstraní na rotační odparce a zbytek se přidá do roztoku t-BuO₂CCH₂-(B0c)-(D)--Cha-Pyr-OH v dimethylformamidu (50 ml). Roztok se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se N-methylmorfolin (1,92 ml, 17,44 mmol). Následně se přidá po částech TOTU (1,18 g, 3,58 mmol). Míchá se při teplotě 0 °C po dobu 45 minut, rozpouštědlo se odstraní na io rotační odparce a surový produkt čistí chromatografií MPLC (RP-18, mobilní fáze systém aceton itril/voda). Získá se 980 mg (45 % teorie) produktu.

FAB-MS (M+H⁺):615.

b)

Produkt (550 mg. 0,845 mmol), získaný podle odstavce a) se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a roztok se nasytí při teplotě 0 až 5 °C plynným chlorovodíkem. Reakční směs se následně míchá pří teplotě 0 °C po dobu 1,5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se lyofilizuje. Získá se 450 mg (100 % teorie) produktu.

FAB-MS (M+Ff): 459,,

Příklad 15

N-(Hydroxykarbonytmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-2-(4-amidino-lmethyl)pyrrolmethylamidhydrochlorid

Tato sloučenina se připravuje způsobem podle příkladu 14.

FAB-MS (M+H⁺): 459.

Příklad 16

N-(HydroxykarbonyImethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyM-(2-amidino-lmethyljpyrrolmethylamidhydrochlorid

Tato sloučenina se připravuje způsobem podle příkladu 14.

FAB-MS (M+řf): 459.

Příklad 17

N-{terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(0)-eyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-2-(4amidothiokarbonyl)oxazolmethylamidhydrochlorid

a)

Rozpustí se t-Bu0₂C-CH₂-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-OH (2,36 g, 4,92 mmol) v dichlormethanu (60 ml). Při teplotě -10 °C se přidá diisopropylethylamin (4,3 ml, 24,59 mmol) po kapkách. Míchá se při této teplotě po dobu 5 minut, přidá se 2-aminomethyloxazoM-thiokarbamidhydro55 chlorid (Ig, 5,16 mmol, [G. Videnov a kol., Angew. Chem. 108, str. 1 604 až 1 609, 1996]) Boc skupina v N-Boc-2-aminomethyloxazoM-thiokarbamidu, popsaném v uvedené literatuře, se odštěpí etherovou kyselinou chlorovodíkovou a zkoncentro váním se získá odpovídající hydrochlorid), posléze se po kapkách v průběhu 20 minut přidá 50% roztok anhydridu propanfosfonové kyseliny v ethylacetátu (5,06 ml, 6,39 mmol) zředěný dichlormethanem (10 ml).

Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu jedné hodiny a nechá se ohřát na teplotu místnosti v průběhu tří hodin. Reakční směs se zředí dichlormethanem, promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát 5% roztokem kyseliny citrónové a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se čistí chromatografií (silikagel, mobilní fáze:

io systém dichlormethan/methanol, 95:5). Výtěžek je 2,5 g (82 % teorie).

^lH-NMR (DMSO-dí„ ppm): δ = 0,5-2,0 (m, 31H), 3,1-5,5 (m, 8H), 5,8-6,2 (m, 2H), 8,5-9,3 (m, 3H), 9,8 (sbr, IH).

b) N-(terc-Butoxykarbony lmethylen)-(N-BOC)-(D)-cyklohexy lalany 1-3,4-dehydroproly l·2-(4-amidino)oxazolmethylam idhydroacetát

Produkt, získaný způsobem podle odstavce a) se rozpustí v acetonu (50 ml) a po přidání methyíjodidu (1,97 ml, 31,29 mmol) se vaří pod zpětným chladičem po dobu dvou hodin. Rozpouštědlo a nadbytek methyljodidu se odstraní na rotační odparce. Získaný surový produkt se rozpustí v tetrahydrofuranu (50 ml) a po přidání octanu amonného (466 mg, 6,05 mmol) se zahříváním udržuje na teplotě 60 °C po dobu 1,5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se převede na acetát za použití ionexu (acetát na polymemím nosiči, Fluka 00402) a čistí se chromatografií (silikagel, mobilní fáze: systém dichlormethan/methanol/kyselina octová,

75:20:5), Výtěžek je 2,0 g (75 % teorie).

FAB-MS (M+H⁺): 603.

c) N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cykÍohexyla1anyl_3,4-dehydroprolyl-2-(4-amidmo)30 oxazolmethylamidhydrochlorid

N-(těrc-Butoxykarbonylmethy1en)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-2-(4amidino)oxazolmethylamidhydroacetát (1,95 g, 2,94 mmol), získaný způsobem podle odstavce b) se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a přidá, se 4M kyselina chlorovodíková v dioxanu (3,7 ml,

14,71 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvacet hodin, rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje se. Výtěžek je 1,5 g (100% teorie).

13-H-NMR(DMSO-d₆, ppm): δ =168,6; 167,8; 166,2; 162,2; 156,4; 144,7; 129,6; 127,7; 125,5; 67,9; 55,0; 53,5; 45,3; 36,4; 35,7; 33,0; 32,5; 32,0; 25,7; 25,4; 25,2.

Příklad 18

N-(Hydroxykarbonylmethy len)-(D)-cyklohexy lalany 1-3,4-dehydroproly l-5-(3~am tdino)—1

2,4-oxadiazolmethylamidhydrochlorid

a) N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-BOC)-(D)~cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl“ 5-{3-kyano)-l ,2,4-oxadiazoImethylamid

Rozpustí se N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OIl (1,93 g, 4,0 mmol) v dichlormethanu (65 ml). Při teplotě -10 °C se přidá diisopropylethylamin (3,1 ml, 17,67 mmol). Přidá se 5-aminomethyl-3-kyano-l,2,4-oxadiazolhydrochlorid (645 mg,4,0 mmol) rozpuštěný v dichlormethanu (30 ml). Míchá se po dobu 5 minut, přidá se 50% roztok anhydridu propanfosfonové kyseliny v ethylacetátu (3,9 ml, 4,93 mmol) zředěný dichlormethanem (15 ml) po kapkách v prů-42CZ 299634 B6 běhu 30 minut. Ponechá se po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C, reakční směs se zředí dichlormethanem a promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát 5% roztokem kyseliny citrónové a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se čistí chromatografií (silikagel, mobilní fáze: systém dichlormethan/methanol, 95:5). Výtěžekje 1,55 g (71 % teorie). FAB-MS (M+Ff): 587.

b) N-(terc-ButOx\ykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5ío (3-amidino)-l,2,4-oxadÍazolmethylamidhydroacetát

N-ýtere -Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3.4-dehydroprolyl-5-(3kyano)-l,2,4-oxadiazolmethylamid (1,5 g, 2,56 mmol), získaný způsobem podle odstavce a), se rozpustí v methanolu (5 ml) a přidá se acetylcystein (450 mg, 2,76 mmol). Do reakční směsi se zavádí amoniak při teplotě 35 °C až do ukončení konverze. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se převede na acetát za použití ionexu (acetát na polymerním nosiči, Fluka 00402) a čistí se chromatografií (RP-18, mobilní fáze: aceton itril/voda). Výtěžek je 300 mg (18 % teorie).

FAB-MS (M+Ff): 604.

c) N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyk1ohexylalanyl-3,4~dehydroprolyM-(3-amidino)1,2,4-oxadiazolmethylamidhydrochlorid

N-(terc.-Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3amidino)-!,2,4-oxadiazolmethylamidhydroacetát (300 mg, 0,45 mmol), získaný způsobem podle odstavce b), se rozpustí v dichlormethanu (20 ml) a při teplotě místnosti se přidá 4M roztok kyseliny chlorovodíkové vdioxanu (0,6 ml, 2,48 mmol), Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvacet hodin, rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje se. Výtěžekje 230 mg (98 % teorie),

FAB-MS (M+Ff): 448.

Příklad 19

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3-amidino-Nmethylpyrazolmethylamidhydrochlorid

a) N-{terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalany]-3,4“dehydroprolyl-5(3-amido-N-methyl)pyrazolmethylamid

Zavede se N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr™OH (i,25 g, 2,59 mmol) do dichlormethanu (30 ml). Při teplotě -10°C se po kapkách přidá diisopropylethylamin (1,95 ml,

11,16 mmol). Přidá se roztok N-methyl-5-aminomethylpyrazol-3-karboxamidu (0,4 g,

2,59 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml). Míchá se po dobu 5 minut, přidá se 50%.roztok anhydridu propanfosfonové kyseliny v ethylacetátu (2,36 ml, 3,11 mmol) a po kapkách se přidá dichlormethan (5 ml) v průběhu 5 minut. Míchá se po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C po dobu 45 minut a reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti na 12 hodin. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce, zbytek se vyjme do dichlormethanu a promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného, dvakrát 5% roztokem kyseliny citrónové a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se čistí chromatografií (RP-18, mobilní fáze: systém aceton itril/voda). Výtěžekje 220 mg (14 % teorie).

_ Δ7 _

FAB-MS (M+řf): 617. í i

b) N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-BOC)-(D)-cykÍohexylalanyl-3,4-dehydroprolyI- 4

5-(3-kyano-N-methyl)pyrazolniethylamid í

N-(terc-Butoxykarbony!methylen)-(N-Boc)-(D}-cyklohexyialanyl-3,4-dehyuroprolyl-5-(3- j amido-N-methyl)pyrazolmethylamid (220 g, 0,36 mmol), získaný způsobem podle odstavce a) 1 se rozpustí v dichlormethanu (15 ml) a při teplotě -10 °C se přidá diisopropylethylamid (0,17 ml, J

0,96 mmol). Míchá se po dobu 5 minut a roztok anhydridu trifluoroctové kyseliny (0,057 ml, io 0,41 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se přidá po kapkách. Ponechá se po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C, reakční směs se zředí dichlormethanem a promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát 5% roztokem kyseliny citrónové a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce. Výtěžek je 180 mg (84 % teorie).

c) N-(terc-Butoxy karbony lmethylen)-(7s’-BocHD)-cyklohexylalany 1-3,4-dehydroprolv 1-5(3-amidino-N-methyl)pyrazolmethylamidhydroacetát

N-(terc-Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(320 kyano-N-methyl)pyrazolmethylamid (180 g, 0.3 mmol), získaný způsobem podle odstavce b) se rozpustí v methanolu (1 ml) a přidá se acetylcystein (52,8 mg, 0,32 mmol). Do reakční směsi se zavádí amoniak při teplotě 35 °C až do ukončeni konverze. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a surový produkt se převede na acetát za použití ionexu (acetát na polymerním nosiči,

Fluka 00402). Surový produkt se čisti chromatografií (RP-18, mobilní fáze: acetonitril/voda).

Výtěžek je 50 mg (16 % teorie).

FAB-MS (M+H⁺): 616.

d) N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydrQproIyl-5-(3-amidino3 0 N-methy 1 py razo l methyl am idhydroch lo r id

N-(terc -Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)~(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3amidino-N-methyl)pyrazolmethylamidhydroacetát 150 mg, 0,081 mmol), získaný způsobem podle odstavce c) se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a přidá se 5M kyselina chlorovodíková v diethyletheru (0,147 ml). Míchá se při teplotě místnosti po dobu dvanáct hodin. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce, surový produkt se vyime do vody a lyofilizuie se. Výtěžek je 40 mg 192 % teorie).

FAB-MS (M+Ff): 460, . . - ,

Příklad 20

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3-amidino)45 isoxazolmethylamidhydrochlorid

N-(Hydroxykarbonylrnethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4~dehydroprolyl-5-(3-amidino)isoxazolmethylamidhydrochlorid se připravuje z 5-aminomethylisoxazol-3-karboxarnidu azBoc3,4-dehydroprolinu. Po kopulaci a odstranění chránící skupiny Boc se získaný blok váže na N50 (terc.-butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanin za získání N-(terc.-butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4_dehydroprolyl-5-(3-karbamoyl)isoxazotmethylamidu. Po dehydrataci primární aminoskupiny na nitrilovou skupinu způsobem podle příkladu 4 se získá amidin dále popsaným způsobem.

-44 _

N-(terc-Butoxy karbony Imethy len)-(N-Boc)-(D)-cykIohexylaIany 1-3,4-dehydroprol y 1-5-(3amidino)isoxazolmethylamidhydroacetát

Rozpustí se 1,75 g 13,0 mmol) N-( terč-butoxy karbony Imethy Ien)-(N-Boc)-(D)-cyklohexyl5 alanyl-3,4-dehydroprolyl-5-(3-kyano)isoxazolmethylamidu v 10 ml methanolu, přidá se 0,54 g (2,28 mmol) N-acetylcysteinu a vaří se pod zpětným chladičem v plynném amoniaku po dobu čtyř hodin. Odstranění N-acetylcysteinu, vyčištění produktu a konverze na acetátovou sůl se provede chromatografií MPL (RP-18, mobilní fáze: acetonitril/voda/Ο,ΙΜ kyselina octová). Vymražovacím sušením se získá 1,39 g bílého prášku (70 % teorie).

Odstraněním chránící skupiny z vyčištěného produktu etherovou · kyselinou chlorovodíkovou v dichlormethanu se získá žádaný produkt.

FAB-MS (M+fT): 448.

Příklad 21 .

N-(Hydroxykarbohylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3_;4-dehydroproIy]-2-(4-amidÍno)20 thiazolmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+H⁺): 463.

Připravuje se způsobem podle příkladu' 1 ze 2-aminomethylthiazoI-4-thiokarboxamidu a z 25 N-Boc-N-(terc.-butyloxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4—dehydroprolinu.

Příklad 22

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycyl-3₎4-dehydroprolyl-2-(4-amidino)thiazolmethylamidhydrochlorid FAB-MS (M+H⁺): 449.

' Příklad 23

N-( Hydro xykarbony Imethy len)-(D)-cyklóhexýlalány 1-3,4-dehydroprolyl-4-(2-amidino)thiazolmethylamidhydroacetát ‘40

FAB-MS (M+FT): 463.

Připravuje se způsobem podle příkladu 1 ze 4-aminomethylthiazol~2-thiokarboxamidu a z N-(terc.~butoxykarbonylmethylem)-N-Boc-(D)-cyklohexylalany]-3,4-dehydroprolinu.

Příklad 24

N-(Hy droxy karbony Imethy len )-(D)-cyklohexy lglycy 1-3,4-dehydroproly l-4-(2-am i dino)50 thiazolmethylamidhydroacetát FAB-MS (M+Ff): 449.

Připravuje se způsobem podle příkladu i ze 4-aminomethylthiazol-2-thiokarboxamidu a z N-(terc-butoxykarbony Imethy ten)~N-Boc-(D)-cyklohexy lglycy 1-3,4-dehydroprol inu.

CZ 299634 Bó

Příklad 25

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyI-3,4-dehydroprolyl-2-(5-amidino)thiazolmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+Ff): 463.

Připravuje se způsobem podle příkladu 21.

Příklad 26

N-<HydroxykarbonylmethylenHD)-cyklohexylglycyl-3,4-dehydroprolyl-2-(5-amidino)thiazolmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+Ff): 449.

Připravuje se způsobem podle příkladu 22,

Příklad 27

N-{Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl-2-(5-amidino)thiazolmethylamidhydroacetát.

FAB-MS (M+Ff): 463.

Připravuje se způsobem podle příkladu 23.

Příklad 28

N-(Hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycyl-3,4-dehydroprolyl-5-(2-amidino)thiazolmethylamidhydroacetát

FAB-MS (M+Ff): 449.

Připravuje se způsobem podle příkladu 24.

Průmyslová využitelnost

Derivát amidinu jakožto kompetitivní inhibitor trypsinu podobných serinových proteáz, zvláště trombinu a kininogenáz, jako je kallikrein je vhodný pro výrobu farmaceutických prostředků, použitelných jako antikoagulantů ajako protizánětlivých činidel.

-4fiCZ 299634 Bó

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Derivát amidinu obecného vzorce 1 kde znamená io A skupinu obecného vzorce

R²

I

R¹ - (^CH2>ni - ^c - (^CH2>n I

R³ kde znamená m 0,1 nebo 2, η 0, 1 nebo 2,

R¹ skupinu HOOC- Ci^-alkyl-OOC- nebo -OH,

20 R² H, Ci-4-alkyl nebo R-(CH₂)_m,

R³ H nebo C alkyl,

B skupinu obecného vzorce

R⁶

I

R⁴ (R⁷ - C - R?)_p

I I

- N - C —- CO I

R⁵ ²⁵ , kde znamená

R⁴ H, C1-4-alkyl nebo R¹- (CH₂)_m-, kde R¹ a m mají shora uvedený význam,

-47 CZ 299634 Bó

P O nebol,

R⁵ H nebo Ci_₄—alky 1,

5 R⁶ H nebo Cj g-alkyl, fenyl, mající popřípadě jeden až tři stejné nebo různé substituenty ze souboru zahrnujícího C^alkyl, CF₃, Ci^alkoxy, F a Cl nebo znamená C^gcykloalkyl, mající popřípadě jeden až čtyři stejné nebo různé substituenty Ci_₄alkyly, přičemž jedna nebo dvě jednoduché vazby C-C kruhu jsou popřípadě nahrazeny dvojnou to vazbou C=C, nebo je knim popřípadě přikondenzován fenolový kruh, C₇_i2 bicykloalkyl nebo C ] o—tricykloalky 1 nebo

R⁴ a R⁶ spolu dohromady ethylenovou nebo propylenovou skupinu,

15 R⁷ H nebo C_t_8—alkyl, fenyl, mající popřípadě jeden až tři stejné nebo různé substituenty ze souboru zahrnujícího Cí^alky 1, CF3, Ci_4alkoxy, F a Cl nebo znamená C₃_₈cykloalkyl, mající popřípadě jako jeden až čtyři stejné nebo různé substituenty C| ₄alkyly,

R⁸ H nebo C^alkyl,

E skupinu obecného vzorce kde znamená

25 q 0 nebo 1,

D skupinu obecného vzorce kde znamená 30

R⁹ H nebo C^-atkyl,

R^t0 H nebo Cj_4-alkyl,

35 R¹¹ H nebo Ci_4-alkyl,

X atom O, S nebo skupinu -NR¹², kde znamená R¹² H nebo Ci_6-alkyl,

Y -N= nebo -CR¹³=, kde znamená R¹³ H nebo C _{t 4}—alkyl, dále Cl nebo CF₃, 40

Z -N= nebo-CR¹³= ajeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami, .42 _