CZ20002463A3 - Nové inhibitory trombinu - Google Patents

Abstract

Jsou popsány sloučeniny vzorce A-B-D-E-F, kde A, B, D, E a F mají specifické významy, jejich příprava. Nové sloučeniny jsou užitečné k přípravě léčiv pro léčení asthma, artritidy, rhinitida, pankreatitidy, růstu nádorů, trombózy a tromboembolitických stavů.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových pětičlenných heterocyklických amidinů, jejich přípravy a jejich použití jako konkurenčních inhibitorů trypsinu podobných serinových proteáz, zejména trombinu a kininogenáz jako je kallikrein. Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují tyto sloučeniny jako účinné složky a použití těchto sloučenin jako trombinových inhibitorů, antikoagulantů a protizánětlivých přípravků.

Dosavadní stav techniky

Trombin náleží,ke skupině serinových proteáz a hraje ústřední úlohu v koagulační kaskádě jako terminální enzym. Jak vnitřní tak vnější koagulační kaskáda vede přes řadu zesilujících stupňů až k produkci trombinu z protrombinu. Trombinověkatalyzované štěpení fibrinogenu na fibrin pak iniciuje srážení krve a shlukování krevních destiček, které zase, vzhledem k vázání na faktor 3 krevních destiček a srážecí faktor XIII a velkému počtu vysoce aktivních mediátorů, podporují tvorbu trombinu.

Tvorba a působení trombinu jsou hlavní děje, které se uplatňují při rozvoji bílých, tepenných, i červených, žilních trombů a jsou proto potenciálně vhodnými místy, na která je možno zaměřit působnost léčivých látek. Trombinové inhibitory jsou, v kontrastu s heparinem, schopny nezávisle na kofaktorech schopné simultánně inhibovat účinky volného trombinu a vazby na krevní destičky. Tyto inhibitory jsou schopné zabránit akutní fázi tromboembolických příhod po perkutánní transluminální koronární ' l. >&Ll· • · angioplastii (PTCA) a lýze, a uplatnit se jako antikoagulanty v mimotělním oběhu (umělé srdce-plíce, hemodialýza). Mohou se také použít obecně pro prevenci trombózy, například po chirurgických zákrocích.

Je známo, že syntetické argininové deriváty ovlivňují enzymatickou aktivitu trombinu interakcí s aktivním serinovým zbytkem proteázového trombinu. Jako zvláště výhodné se ukázaly peptidy založené na sekvenci Phe-Pro-Arg, ve kterých je Nterminální aminokyselina v D-konfiguraci. D-Phe-Pro-Arg izopropylester je popsán jako konkurenční trombinový inhibitor (C.Mattson et al., Folia Haematol, 109 (1983) 43-51).

Substituce na C-zakončení ařgininu na aldehyd vede ke zvýšení inhibičního efektu. Tak například velké množství arginalů, schopných navázat hydroxylovou skupinu aktivního šeřinu v hemiacetalu bylo popsáno v EP 185390, 479489, 526877, 542525; a dále v WO 93/15756, 93/18060.

Trombinově-inhibiční aktivita peptidických ketonů, fluorovaných alkylketonů a ketoesterů, derivátů kyseliny borité, esterů kyseliny fosforečné a ketokarboxamidů se může vysvětlit podobně touto interakcí šeřinu (EP 118280, 195212, 362002, 364344,

41041 1, 471651, 589741, 293881, 503203, 504064, 530167; WO 92/07869, 94/08941).

Difenylestery peptidu 4-amidinofenylglycinfosfonátu, popsané J. Oleksyszynem et al. v J. Med. Chem. 37 (1994) 226231, jsou ireversibilními trombinovými inhibitory s nedostatečnou selektivitou účinku na jiné serinové proteázy.

DE 3 108 810, WO 93/11 152 a EP 601 459 popisují agmatin a z něho plynoucí argininové deriváty, které nejsou schopné interakce s aktivním serinem v serinových proteázách.

WO 94/29336, EP 0 601 459 a WO 95/23609 představují další vývoj, který nahrazuje agmatin arylamidinovým zbytkem.

EP 0 672 658 popisuje nejen trombinové inhibitory, které mají připojený agmatinový nebo benzamidinový zbytek, ale také trombinový inhibitor, který má amidinothiofen (příklad 65).

Kininogenázy jsou serinové proteázy, které uvolňují vazoaktivní peptidy, nazývané kininy (bradykinin, kalíidin a Met-Lys-bradykinin), z kininogenů. Kininogeny jsou multifunkční proteiny, které se vyskytují v reakcích koagulační a zánětové kaskády. Jako inhibitory mohou chránit buňky před poškozením cysteinovými proteázami (Můller Esterl, FEBS Lett. 182, (1985)

310-314). Důležitými kininogenázami jsou plazmový kallikrein, tkáňový kallikrein a tryptáza žírných buněk.

Kininy jako je bradykinin a kallidin jsou vasoaktivní peptidy, které ovlivňují velké množství biologických procesů. Mají významnou úlohu v zánětlivých procesech. Zvýšením vaskulární permeability způsobují snížení krevního tlaku a edém. Dále jsou velmi účinné jako látky produkující bolest, přirozeně vznikající v těle a mají velký význam jako buněčné mediátory ve patofyziologii astmatu, alergické rýmy a artritidy (K. D. Bhoola, C.D. Figueroa, K. Worthy, Pharmacological Reviews 44 (1) (1992) 1-80).

Bez ohledu na mechanizmus, který je podkladem pro zánětlivé procesy, odchází z krevních nádrží tekutina, která obsahuje všechny tyto proteinové systémy, je-li přítomná v krvi oběhového systému. To znamená, že únik plazmové tekutiny z krevních nádrží souvisí s chorobami jako je astma, rýma a interní záněty. Dále, tryptáza žírných buněk se uvolňuje zejména při alergických procesech (Salomonsson et al., Am. Rev. Respir. Dis. 146 (1992) 1535-1542).

Argininchlormethylketony H-(D)-Pro-Phe-Arg-CH₂CI a H-(D)-Phe-Phe-Arg-CH2-CI byly popsány Kettnerem a Shawem jako inhibitory plasmového kallikreinu (Biochem. ,17 (1978) 47784784 a Meth. Enzym. 80 (1981) 826-842).

Různé další syntetické deriváty benzamidinů a benzylaminů se ukázaly být inhibitory plazmového kallikreinu, přičemž benzamidiny mají výrazně vyšší inhibiční účinek (F. Markward, S. Drawert, P. Walsmann, Biochemical Pharmacology 23 (1974) 2247-2256).

PKSY-527, což je hydrochlorid N-(trans-4-aminomethylcyklohexylkarbonyl)-L-fenylalanin-4-karboxymethylanilid, je také účinný inhibitor těchto kininogenáz (Wanaka, Ohamoto et al., Thromb. Res., 57 (6) (1990) 889-895).

Podstata vynálezu

Vynález se týká sloučenin vzorce I

A-B-D-E-F I ve kterém A, B, D, E a F mají následující významy:

A: r²

I

R¹ (CH,). C (CBj)n

I

R^! * · · · · « © ····

5·· · · ···· · ·· · • ··· ·· · · ©·· ·· · • · ···· ···· ······ ·· ©β ·· ·· kde m je Ο, 1 nebo 2, n je 0, 1 nebo 2,

R¹ je HOOC-, Ci-6-alkyl-OOC-, aryl-CO-4-alkyl-OOC nebo -OH,

R² je H-, Ci-4-alkyl- nebo R¹-(CH₂)m a R³ je H- nebo C-ι -4-alkyl-,

B: _r6

I

-N - C - COI

R⁵ kde

R⁴je H-, Ci.4-alkyl- nebo R¹-(CH₂)m- (kde R¹ a m mají shora uvedené významy), p je O nebo 1,

R⁵ je H- nebo Ci-4-alkyl-,

R⁶ je H-, Ci-s-alkyl-, 2-thienyl-, 3-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2pyridyl-, 3-pyridyl-, 4-pyridyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří Ci.4-a1kyl-, CF₃-, Ci-4-alkoxy-, HO-, BnO-, F- nebo. CI-, nebo C3-8-cykloalkyl, který může nést až čtyři shodné nebo různé Ci-4-alkyl- radikály a/nebo kde jedna nebo dvě C-C jednoduché vazby v kruhu mohou být nahrazeny C=C dvojnou vazbou a/nebo fenylový kruh může být nekondenzovaný, C7-C1₂-bicykloalkyl- nebo Cio-tricykloalkyl- nebo R⁴ a R⁶ spolu mohou tvořit ethylenovou nebo propylenovou skupinu,

R⁷ je H, Ci-s-alkyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří Ci-4-alkyl-, CF3-, C1-4alkoxy-, F- nebo CI-, nebo C₃-₈-cykloalkyl-, který může nést až čtyři shodné nebo různé C-i-4-alkyl radikály, a

R⁸ je H nebo Ci-4-alkyl,

kde R²⁰ je H, Ci-4-alkyl, Bn nebo BnO(CO)- a kde platí následující: jestliže D je II, III nebo XI, pak E má následující význam:

RlO

R9 r11 γ—-z kde

a) v případě, že X = S, O, NH nebo NR¹², tak

Y je-CR¹³=, -CH= a

Z je-CR¹⁴= nebo

Y je-CR¹³= a

Z e -CH = nebo

b) v případě, že X = NR¹², tak

Y je -CH= a

Z je -CH = nebo

c) v případě, že X = S, O nebo NH,

Y je-CR¹⁵= a

Z je N= nebo Y je N= a Z je -CR^1S= nebo

d) v případě, že X = -NR¹²-, tak

Y je	-N =	a
Z je	-CR13·	= , -N =
nebo
Yje	-CR16	= a
Z je	N =
a	♦
R9	je	H- nebo Ci.3-alkyl-,
R10	je	H- nebo Ci,4-alkyl-,
R11	je	H- nebo Ci.4-alkyl-,
R12	je	CH3- nebo C2H5-,
R13	je	CI-, CF3- nebo Ci-4-alkyl-
R14	je	CI-, CF3- nebo Ci.4-alkyl-
R15	je	CF3- nebo C1.4-alkyl-,
Rie _ on	je	H-, CF3- nebo Ci_4-alkyl-

má význam uvedený shora, nebo, jestliže D je IV, VI, VII, Vlil, IX nebo X, pak E má následujíc! význam:

.x.

• · • ··· kde

X je O, S nebo -NR¹⁷

Y je N= a

Z je -CR¹⁶= nebo -N = nebo

Y je-CR¹⁶= a Z je-N = nebo

Y je-CR¹⁸= a Z je-CR¹⁹=

R⁹, R¹⁰, R¹¹, R¹⁶ a R²⁰ mají význam uvedený shora, R¹⁷ je H, CH₃-nebo C2H5-,

R¹⁸ je H-, CI-, CF₃- nebo Ci_₄-alkyl-,

R¹⁹je H-, CI-, CF₃- nebo Ci.₄-alkyl-, nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, X nebo XI, E má následující významy:

nebo

RlO

N kde

a) v případě, že X = S, tak

Y je -CR¹⁸= a

Z je -CR¹⁹= nebo

Y je -CR¹⁶=

Z je -N = nebo

b) v případě, že X = O nebo -NR¹²-, tak

Y je-N = ,-CR¹⁶= a

Z je -N = , -CR¹⁸= a

R⁹, R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹⁶, R¹⁸, R¹⁹ a R²⁰ mají shora zmíněné významy,

F:

y>^NH N-OH , —nebo ^NH2 NH₂ a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.

Deriváty aminokyselin, představované symbolem B mají výhodně (D) konfiguraci; azetidinkarboxylová kyselina, prolin a pipekolová kyselina D mají výhodně (L) konfiguraci.

Výhodné sloučeniny vzorce I jsou takové, kde A až E mají následující významy:

A: ..........

HOOC-(CH₂)t- (t = 1, 2 nebo 3), (HOOC-CH₂)₂-CH-,

HOOC-CH₂-GH(COOH)-, HOOC-CH(Ci.₄-alkyl)-,

HOOC-C(Ci-4-alkyl)₂-, Ci.₆-alkyl-OOC-(CH₂)_t-.

B je r⁶

-N-C-CO

I

R⁵ p je 0 nebo 1,

R⁴je H-, Ci-4-alkyl- nebo HOOC-(CH₂)m- (m = 1, 2 nebo 3), R⁵ je H, methyl

«

-10 R⁶ je Η-, Ci-s-alkyl-, 2-thienyl-, 3-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2pyridyl-, 3-pyridyl-, 4-pyridyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH3-O-, HO-, BnO-, F- nebo C1-, nebo C₃.e-cykíoalkyl, který může nést až čtyři methyl radikály, bicyklo[2.2.2]oktyl-, bicyklo[2.2.1 jheptyl-, adamantyl-, indanyl-, dekaiinyl-, «

R⁷ je H, Ci.8-alkyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF3-, CH3O-, F- nebo Cl-, nebo C3-s-cykloalkyl-, který může nést až čtyři methyl radikály,

R⁸ je H, Ci-4-alkyl,

kde R²⁰ je H, CH₃, Bn oder BnO(CO)- a kde platí následující:

jestliže D je II, III nebo XI, pak E znamená:

H

η Η ϊ—z

β • · 9 9 9 · 9 9 9 9 ···· ·· »9 9« 99 «· kde

a) v případě, že X = S, O nebo NR¹⁷, tak

Y je -CR¹³= nebo -CH= a Z je-CR¹⁴= nebo

Y je -CR¹³= a Z je -CH = nebo

b) v případě, že X = NR¹², tak

Y je -CH= a Z je -CH = , nebo

c) v případě, že X = S, O nebo NH, tak

Y je -CR¹⁵= a Z je N = nebo

Y je N= a Z je -CR¹⁵= nebo

d) v případě, že X = NR¹²,

- Y je N= a

Z je -CR¹⁶=, -N = nebo

Y je-CR¹⁶= a.

Z je -N= a

R¹² je CH₃- nebo C2H5-,

R¹³ je CI-, CF3- nebo Ci-4-alkyl-,

• •00 • · 0 · 0 0 * · ·' · 0 0

R¹⁴je CI-, CF3- nebo C.i.4-alkyl·, R¹⁵ je CF3- nebo C1 _₄-a!kyl-,

R⁶ je H-, CF₃- nebo Ci_₄-a.lkyl-,

R¹⁷ je H, CH₃- nebo C2H5

R²⁰ je jak je uvedeno shora, nebo jestliže D je IV, VI, VII, Vlil

E znamená:

, IX nebo X, pak H

kde

X	je 0,	S nebo -NR17- a kde
Y	je -N:	= a
z	je nebo	-CR16= nebo -N =
Y	je	-CR16= a
z	je nebo	-N =
Y	je	-CŘ18= a
z Λ	je	-cr19=
3 R16,	R17,	R20 mají shora zmíněné významy

R¹⁸ je H-, CI-, CF3- nebo Ci_4-alkyl- a R¹⁹ je H-, C.I-, CF3- nebo C1.₄-alkyl-, nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, X nebo XI, pak E má významy:

kde

a)

Y

Z v případě, že X = S, tak je -CR¹⁵= a je -CR¹⁹=

• · » ·

Y	nebo je -CR16=	a
z	je -N =
nebo

b) v případě, že X = O nebo -NR¹²,

Y je -N= nebo -CR¹⁶= a

Z je -N= nebo -CR¹⁵= a R¹², R¹⁶, R¹⁸, R¹⁹ a R²⁰ mají shora zmíněné významy,

F:

NH

NH, nebo

N-OH

NH, —2 a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.

Deriváty aminokyselin, představované symbolem B mají výhodně (D) konfiguraci; azetidinkarboxylová kyselina, prolin a pipekolová kyselina v symbolu D mají výhodně (L) konfiguraci.

Zejména výhodné sloučeniny vzorce I jsou ty, kde •I

A; HOOC-CH2, HOOC-CH₂-CH₂, HOOC-CH(CH₃), HOOC-CH(C₂H₅)

B: | f <^R7-f-^R8)p — _N-_c-_co— p je 0 nebo 1,

R‘ je H-, CH₃

R⁵ je H-, CH₃-,

• · ···· ···· ···· β · ·· ·· ·* ··

R⁶ je Ci-s-alkyl-, Cs-s-cykloalkyl-, který může nést až čtyři methyl radikály, 2-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2-pyridyl-, 3-pyridyl-, 4-pyridyl, fenyl, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH₃O-, HO-, BnO-, F- nebo CI-, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1]heptyl, adamantyl, indanyl, dekalinyl, zejména s důrazem na cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl,

R⁷ je H, CH₃-,

R⁸ je H, CH₃-,

kde

R²⁰ je H, BnO(CO)- a kde platí následující:

jestliže D je II, III nebo XI, pak E znamená:

H

H h Y—z kde

X je -S- a kde • · · ·

Y je -CH= a

Z je -CR¹³= nebo

Y je -CR¹³= a

Z je -CH = nebo

Y je -CR¹⁵= a

Z je -N = nebo

Y je -N= a

Z je -CR¹⁵= a

R¹³ je CI-, CF₃- nebo CH₃,

R¹⁵ je CF₃- nebo CH₃- a R²⁰ je jak je uvedeno shora, nebo jestliže D je IV, VI, VII, Vlil, IX nebo X, pak E znamená:

H

kde

X je S, a kde

Y je N= a

Z je -CR¹⁶= nebo

Y je -CR¹⁶= a

Z je -N = nebo

Y je -CR¹³= a

Z je -CH = nebo

Y je -CH= a

Z je -CR¹³= ·’ • · · • 9 · ·· · nebo

Y je -CH= a

Z je -CH = a

R¹³, R²⁰ mají shora zmíněné významy a R¹⁶ je H-, CF₃- nebo CH₃ nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil,

IX, X nebo XI, pak E znamená:

nebo

H

I

N —C I I Η H ^Xx

a) v případě, že X = S, Y je-CH = a Z je -CR^1S= nebo Y je -CR¹⁶= a Z je -N = nebo

Y je-CR¹⁸= a

Z je -CH = nebo

b) v případě, že X = O nebo NCH₃ Y je -CH= a Z je -CR¹⁶= nebo Y je-CR¹⁶= a Z je-CH = nebo

c) v případě, že X = -NR¹²Y je -N = a

Z je -CR¹⁸= a

R¹² je CH₃- nebo C2H5- a • · • ·

NH

R¹⁸ je H, CI-, CF₃- nebo CH₃-, a

R¹⁶, R²⁰ mají shora zmíněné významy

F:

N-OH nebo 2 nh₂ a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.

Aminokyselinové deriváty reprezentované symbolem B mají výhodně (D) konfiguraci; azetidinkarboxylová kyselina, prolin a pipekolová kyselina v symbolu D mají výhodně (L) konfiguraci.

Velmi výhodné sloučeniny vzorce I jsou ty, ve kterých A, B, D, E a F mají následující významy:

A: HOOC-CH2, HOOC-CH2-CH2, HOOC-CH(CH₃), HOOC-CH(C₂H₅)

R⁴ (R⁷-C-R⁸)_p

I I

-N - C - COI

R⁵ p je 0 nebo 1,

R⁴ je H-,

R⁵ je H-,

R® je C1-8 -alkyl-, 2-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2-pyridyl-, 3pyridyl-, 4-pyridyl-, Cs-s-cykloalkyl, který může nést až čtyři methyl radikály, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH₃O-, HO-, BnO-, F- nebo CI-, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1 jheptyl, adamantyl, indanyl, dekalinyl, se zvláštním důrazem na cyklopentyl-, cyklohexyl- a cykloheptyl-, • · · ·

D:

ví ···♦

IX kde platí následující:

jestliže D je II, III nebo XI, pak E znamená:

H

kde

X je S a je -CR¹³= je -CH= nebo

Y je -CH =

Z je -CR¹³= nebo je -CR¹⁵= je -N = nebo

Y je -N = a ‘ í

J u*«·

Z je -CR¹⁵= a

R¹³ je CI-, CF₃- nebo CH₃- a

R¹⁵ je CF₃- nebo CH₃-, nebo jestliže D je IV, V!, VII, Vlil, IX nebo X; pak E znamená:

H

kde

X je S a

Y je -N= a

Z je -CR¹⁶= nebo

Y je -CR¹⁶= a

Z je -N = nebo

Y je -CH = a

Z je -CR¹³= nebo

Y je -CR¹³= a

Z je -CH = nebo

Y je -CH= a

Z je -CH = a .

R¹³ má shora zmíněný význam a R¹⁶ je H, CF₃- nebo CH₃-, nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, X nebo XI, pak E znamená

X.

N —C-G Y ¹ 'V //

Η H Z' 'N-C—

I I \ Η H Z

• · · · · · · · · · · • · · · · ··» · · · · ^-20^-· · · ·· · · ·· · ···· ·· · · · · ·· ·· kde

a) v případě, že X = S,

Y je -CH= a

Z je -CR¹⁸= nebo

Y je -CR¹⁸= a

Z je -CH = nebo

Y je -CR¹⁶= a

Z je -N = nebo

b) v případě, že X = O nebo NCH₃

Y je -CH= a

Z je -CR¹⁶nebo

Y je -CR¹⁶= a

Z je -CH = nebo

c) v případě, že X = NCH₃

Y je -N = a

Z je -CR¹⁶=

R¹⁶ má shora zmíněné význam a R¹⁸je H, Cl- CF₃- nebo CH₃-,

F: nh

NH₂ nebo

NOH

NH,

···<

a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.

Aminokyselinové deriváty reprezentované symbolem B mají výhodně (D) konfiguraci; azetidinkarboxylová kyselina, prolin a pipekolová kyselina v symbolu D mají výhodně (L) konfiguraci.

Výběr sloučenin, zmíněných v příkladech, představují následující látky, které jsou velmi významné:

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-3-CF₃)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-am-3-CF₃)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-4-Me)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-4-CI)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-4-CF₃)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg. Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-Me)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Prq-NH—CH₂-5-(2-am-4-CI)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg Pro-NH-CH₂-5-(2-am-4-CF₃)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-GH2-5-(2-am-3,4-Me₂)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-2-(4-am)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(4-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-3-Me)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am-3-Me)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-3-Ci )-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-3-CI)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-4-Me)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-4-Me)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-4-CI)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-4-CI)-thioph

HOOC-CH2-(D)-Chea-Pro-N H-CH₂-2-(4-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cpa-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thioph

-*- *— Λ Λ

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-Me)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-CI)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-CF₃)-thioph

HOOC-CH₂-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thioph

HOOC-CH₂-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chea-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cpa-Pro-NH-CH₂-4-(2-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-4-(2-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cheg-Pro-NH-CH₂-4-(2-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cpg-Pro-NH-CH₂-4-(2-am)-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

MeOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOG-CH₂-(D)-Cpg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chea-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Cheg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thíaz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-Me)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-Me)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-CF₃)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-CF₃)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(5-am-4-Me)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(5-am-4-Me)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(5-am-4-CF₃)-thiaz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(5-am-4-CF₃)-thia₂

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am)-isox

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-oxaz • 4 4 444

-23 ,

4444 44

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-oxaz

HOOC-CH₂-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-(D)-Chea-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-5-(3-am)-fur

HOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-5-(3-am)-fur

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-2-(4-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-2-(4-am-1 -Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(4-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(4-am-1 -Me)-pyrr

HOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-2-(5-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-2-(5-am-1 -Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(5-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-2-(5-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-4-(2-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-4-(2-am-1 -Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-4-(2-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-4-(2-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-4-(2-am-1-Me)-pyrr

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-5-(3-ann-1-Me)-pyraz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-5-(3-am-1 - Me)-pyraz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am-1 -Me)-pyraz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-5-(3-am-1-Me)-pyraz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-5-(3-am-1 -Me)-pyraz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-3-(5-am-1 -Me)-pyraz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-3-(5-am-1 -Me)-pyraz

·· ·· 4· ·· ««

HOOC-CH2-(D)-Cha-P.ro-NH-CH2-3-(5-am-1 -Me)-pyraz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-3-(5-am-1-Me)-pyraz

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-3-(5-am-1-Me)-pyraz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH₂-3-(5-am-1-Me)-pyraz

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am)-oxadiaz tBuOOC-CH2 N-BOC-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-oxaz

HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am-4-CI)-thioph

EtOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am-4-C))-thioph

HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am-4-Me)-thioph

EtOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-5-(3-am-4-Me)-thioph tBuOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-4-(2-ham)-thioph tBuOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thioph tBuOOC-CH₂-(D)-Chg Aze-NH-CH₂-4-(2-ham)-thioph tBuOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thioph tBuOOCCH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaz tBuOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaz tBuOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaz tBuOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaz

Seznam	zkratek:
Adaala:	adamantylalanin
Adagly:	adamantylglycin
AIBN:	azobisizobutyronitril
Ac:	acetyl
am:	amidino
Aze:	azetidinkarboxylová kyselina
Br i:	benzyl
bs:	široký singlet
Boc:	terč. butyl oxy karbonyl
Bu:	butyl
Cbz:	benzyl oxy karbonyl
Cha:	cyklohexylalanin

Chea:	cykloheptylalanin
Cheg:	cykloheptylglycin
Chg:	cyklohexylglycin
Cog:	cyklooktylglycin
Cpa:	cyklopentylalanin
Cpg:	cyklopentylglycin
d:	dublet
TLC:	Chromatografie na tenké vrstvě
DCC:	dicyklohexylkarbodiimid
Dch:	dicyklohexylalanin
Dcha:	dicyklohexylamin
DCM:	dichlormethan
Dep:	4,5-dehydropipekolová kyselina
DMF:	dimethylformamid
DIPEA:	diizopropylethylamin
Dpa:	difenylalanin
EDC:	N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid hydrochlorid
Et:	ethyl
Eq:	ekvivalenty
Gly:	glycin
fur:	furan
ham:	hydroxyamidinyl
HOSucc:	hydroxysukcinimid
HPLC:	vysokoúčinná kapalinová chromatografie
imi:	imidazol
iPr:	isopropyl
isox:	isoxazol
Leu:	leucin
Lsg:	roztok
Me:	methyl
a-MeCha:	a-methylcyklohexylalanin

• « · » · ♦ · · · ·

P,P-Me2Cha: 2-amino-3-cyklohexyl-3-methylmáselná kyselina nebo β,β-dimethylcyklohexylalanin

4-MeCha: (4-methylcyklohex-1 -yI)alanin

Y-MeCha: (1 -methylcyklohex-1 -yl)alanin

3.3- Me2Cha: (3,3-d i methylcyklohex-1 -yl)alanin

4-MeChg: (4-methylcyklohex-1 -yl)glycin

3.3- Me2Chg: (3,3-d i methylcyklohex-1 -yl)glycin

MPLC: kapalinová chromatografie při tlaku kapaliny

MTBE: methyl terč.butylether

NBS: N-bromsuckinimid

Nog: norbornylglycin

Ohind: (2)-oktahydroindol-2-karboxylová kyselina

Oxadiaz: 1,2,4-oxadiazol

Oxaz: oxazol

Ph: fenyl

Phe: fenylalanin

Pie: pipekolová kyselina

PPA: propylfosfonanhydrid

Pro: prolin

Py: pyridin pydaz: (35)-2,3,4,5-tetrahydropyridazin-3-karboxylová kyselina

Pyr: 3,4-dehydroprolin pyraz: pyrazol pyrr: pyrrol pyzo-3: (3S)pyrazolidin-3-karboxylová kyselina q: kvartet

RT: pokojová teplota

RP-18: reversní fáze C-18 s: singlet str: singlet, široký t: triplet t: terciární

tBu: terč.butyl tert: terč.

TBAB: tetrabutylamonium bromid

TEA: trietylamin

TFA: trifluoroctová kyselina

TFFA; trifluoracetanhydrid thiaz: thiazol thioph: thiofen

Thz-2: thiazolÍdin-2-karboxylová kyselina

Thz-4: thiazolidin-4-karboxylová kyselina

5,5-Me2Thz-4: (45)-5.5-di methy lthiazolidin-4-karboxylová kyselina TOTU: O-(kyanoethoxykarbonylmethylen)amino-N,N,N', N'-tetramethyluronium tetrafluorborát triaz: 1,2,4-triazol

Z: benzyloxykarbonyl

V popisu a v nárocích jsou použity následující definice jednotlivých substituentů:

Termín cykloalkyl samostatně nebo jako součást jiného substituentu zahrnuje nasycené nebo cyklické uhlovodíkové skupiny, které obsahují daný počet uhlíkových atomů. C₃-₈-cykloalkyl znamená nasycené alicyklické kruhy se 3 až 8 C atomy, jako je například cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, 4-methylcyklohexyl, cykloheptyl nebo cyklooktyl.

Termín alkyl samostatně nebo jako součást jiného substituentu znamená radikál s lineárním nebo rozvětveným alkylovým řetězcem o délce, která je pro každý jednotlivý případ uvedena. Tak, C-i-4-alkyl je, například, methyl, ethyl, 1-propyl,

2- propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl-1-propyl, 1-butyl, 2-butyl, Ci-e-alkyl je například Ci-4-alkyl, pentyl, 1-pentyl, 2-pentyl,

3- pentyl, 1-hexyl, 2-hexyl, 3-hexyl, 4-methyl-1-pentyl nebo

3,3-dimethylbutyl. Kromě radikálů, uvedených jako možné významy C1.₄-a I ky I, Ci-e-alkyl znamená například C-j-e-alkyl, heptyl nebo oktyl.

Termín alkoxy” samostatně nebo jako součást jiného substituentu radikál s lineárním nebo rozvětveným alkylovým řetězcem o délce, která je pro každý jednotlivý případ uvedena a který je vázán k příslušné bazické sloučenině přes atom kyslíku. Tak Ci-4-alkoxy znamená například methoxy, ethoxy, 1-propoxy, 2-propoxy, 2-methyl-2-propoxy, 2-methyl-1 -propoxy, 1-butoxy, 2-butoxy.

Vynález se dále týká sloučenin, které obsahuji následující strukturní prvek:

nh₂ kde D a E mají významy, uvedené v kterémkoliv z nároků 1 až 4, a kde alespoň jeden z radikálů, vybraných ze souboru, do kterého patří atom vodíku, chránící skupina, nesubstituovaná nebo substituovaná přírodní nebo nepřírodní aminokyselina, nesubstituovaná nebo substituovaná karboxylová kyselina, nesubstituovány nebo substituovaný alkylový radikál je navázán na dusíkovém atomu strukturního bloku D.

Vynález se dále týká sloučenin, které obsahují následující strukturní prvek:

-29 -E

NH kde E má význam uvedený v kterémkoliv z nároků 1 až 4 a kde alespoň jeden z radikálů, vybraných ze souboru, do kterého patří atom vodíku, chránící skupina, nesubstituovaná nebo substituovaná přírodní nebo nepřírodní aminokyselina, nesubstituovaná nebo substituovaná karboxylová kyselina, nesubstituovaný nebo substituovaný alkylový radikál je navázán na dusíkovém atomu skupiny NR⁹

Konečně vynález se také týká sloučenin jeden z následujících strukturních prvků:

které obsahují

kde Q je CH₃ nebo Cl, T je NCH₃, O nebo S a W je NCH₃ nebo S.

Vynález se dále týká meziproduktů vzorců Va a Vb \ ; 7·«, «ϊ

-30 A - Β - D - Ε - CN Va,

A - B - D - E - CSNH₂ Vb, kde A, B, D a E mají shora uvedené významy.

Tyto nové meziprodukty se používají k přípravě sloučenin I a jsou cennými strukturními bloky pro syntézu inhibitorů serinových proteáz.

Tyto sloučeniny vzorce I mohou existovat jako takové nebo ve formě solí s fyziologicky přijatelnými kyselinami. Příklady takových kyselin jsou: kyselina chlorovodíková, kyselina .citrónová, kyselina vinná, kyselina mléčná, kyselina fosforečná, kyselina methansulfonová, kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina maleinová, kyselina fumarová, kyselina jantarová, kyselina hydroxyjantarová, kyselina sírová, kyselina glutarová, kyselina aspartová, kyselina pyruvová, kyselina benzoová, kyselina glukurohová, kyselina šťavelová, kyselina askorbová a acetylglycin.

Pokud ve sloučeninách vzorce I, R1 je Ci-6-alkyl-OOC, aryl-Co-4-alkyl-OOC a/nebo F je hydroxyamidin mohou tyto sloučeniny působit in vivo jako prodrogy, ze kterých vznikají enzymaticky odpovídající karboxylové deriváty R¹ = HOOC- nebo odpovídající amidiny F = -C( = NH)-NH₂.

Prodrogy sloučenin vzorce I jsou ty sloučeniny, které jsou metabolizovány in vivo a tím poskytují farmakologicky účinné sloučeniny vzorce I. Tato konverze může být způsobena například prvotním metabolizmem v játrech.

Nové sloučeniny vzorce I jsou kompetitivní inhibitory trypsinu podobných serinových proteáz, zejména trombinu, a dále kininogenáz jako je kallikrein. Mohou se použít pro následující indikace:

-chorob, jejichž patogenetický mechanizmus je přímo nebo nepřímo odvozen od proíeolytického účinku trombinu,

- chorob, jejichž patogenetický mechanizmus je odvozen od trombinově-závislé aktivace receptorů a vedení signálů,

-chorob spojených se stimulací [např. vlivem PAI-1, PDGF (růstový faktor krevních destiček), P-selektin, ICAM-1, tkáňový faktor] nebo inhibicí (např. syntéza NO v buňkách hladkého svalstva) exprese genů-v tělních buňkách,

- chorob odvozených od mitogenního účinku trombinu,

- chorob odvozených od trombinově-závislé změny kontraktility a permeability epitelových buněk,

- trombinově-závislé tromboembolické příhody,

- roztroušené intravaskulární koagulace (DIC),,

- reokluze a pro snížení reperfuzní doby na současné podávání trombolytik, jako je streptokiňáza, urokináza, prourokináza, t-PA, APSAC, plasminogenové aktivátory ze slinných žláz zvířat a rekombinační a mutované formy všech těchto látek,

- projevů časné reokluze a následné restenózy po PTCA,

- trombinově-závislé proliferace buněk hladkého svalstva,

- hromadění aktivního trombinu v CNS (např. při Alzheimerově chorobě),

- růstu nádorů a k prevenci adheze a metastáz nádorových buněk.

Nové sloučeniny se dají použít k léčení a prevenci trombinově závislých tromboembolických příhod jako je trombóza hlavních cév plicních embolií, infarktů myokardu nebo mozku a nestabilní angíny a také pro terapii roztroušené intravaskulární

-32 koagulace (DIC). Dále se mohou použít pro kombinovanou terapii s trombolytiky jako je streptokináza, urokináza, prourokináza, t-PA, APSAC a další plasminogenové aktivátory, ke zkrácení doby potřebné k reperfuzi a k prodloužení doby reokluze.

Dalšími výhodnými oblastmi použití jsou prevence trombinově-závislé časné reokluze a následné restenózy po perkutánní transluminální koronární angioplastii, prevence trombinově-indukované proliferace buněk hladkého svalstva, prevence akumulace aktivního trombinu v CNS (např. při Alzheimerově chorobě), potlačování nádorů a preventivní potlačování mechanismů, které vedou k adhezi a metastáze nádorových buněk.

Nové sloučeniny se také mohou používat pro povlékání umělých povrchů jako jsou povrchy hemodialyzačních membrán a povrchy trubicových systémů a spojovacích prostředků, které jsou pro vedení krve nutné, dále pro povlékání povrchů okysličovacích přístrojů při mimocévním oběhu, implantátů a srdečních chlopní.

Nové sloučeniny se dále se dále mohou používat pro léčení chorob, jejichž patogenetický mechanizmus je přímo nebo nepřímo odvozen od proteolytického účinku kininogenáz, zejména kallikreinu, například zánětlivých chorob jako je astma, pankreatitis, rýma, arthritis, kopřivka a dále interních chorob, při kterých se uplatňuje kallikrein.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat běžným způsobem orálně nebo parenterálně (subkutánně, intravenózně, intramuskulárně, interperitoneálně, rektálně). Lze je zaké podávat v plynné podobě nebo ve formě sprejů prostorem nosohltanu.

-33 • · · · ··· · · · · • · · · · ··· · · · · • ··· ·· · · · · · * · · • · · · · · ···· • ••· ·· ·· ·· -·· ··

Dávkování závisí na věku, kondici a hmotnosti pacienta a na typu podávání. Pravidlem je, že denní dávka účinné látky pro jednu osobu je 10-2000 mg při orálním podávání a asi 1-200 mg při parenterálním podávání. Tato dávka sé dá rozdělit na 2 až 4 jednotlivé dávky nebo se dá podávat jednou denně v zásobní formě.

Nové sloučeniny se dají použít v obvyklé pevné nebo kapalné farmaceutické formě, např. jako nepovlečené nebo (filmem) povlečené tablety, kapsle, prášky, granule, cukrem povlečené tablety, supositoria, roztoky, masti, krémy nebo spreje. Tyto formy se vyrábějí známými způsoby. Účinné látky se mohou pro tyto účely mísit s běžnými farmaceutickými přísadami jako jsou tabletová pojivá, nadouvacími činidly, konzervačními prostředky, desintegrátory tablet, regulátory tečení, změkčovadly, zvlhčovacími prostředky, dispergačními prostředky, emulgátory, roztoky, prostředky pro zpomalování uvolňování účinné látky, antioxidanty a/nebo hnacími plyny (cf. H. Sucker et al.; Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978). Formy k podávání, získané touto cestou obvykle obsahují od 0_#1 do 99% hmotnostních procent účinné látky.

Experimentální část

Sloučeniny vzorce I se mohou připravovat například tak, jak je znázorněno na schématech l-lll.

Strukturní bloky A, B, O a E jsou výhodně sestavovány odděleně napřed a použity ve vhodně chráněné formě (viz schémata l-lll).

• · • · • · φ φ

-34 • Φ· · ··

Schéma I

A Β D Ε

(Ρ'= chránící skupina, (Ρ) = chránící skupina nebo Η)

Schéma I popisuje lineární sestavivání molekuly I napojováním aminu H-E-CN na N-chráněnou aminokyselinu P-D-OH, aby se získalo P-D-E-CN, odstraněním N-terminální chránící skupiny za vzniku H-D-E-CN, napojením N-chráněné aminokyseliny P-B-OH, čímž se získá P-B-D-E-CN, odstraněním chránící skupiny P, aby se získalo H-B-D-E-CN, následnou alkylací nechráněným nebo chráněným (P)-A-U strukturním blokem (U = odštěpitelná skupina) nebo reduční alkylací (P)-A'-U (U = aldehyd, keton) nebo Michaelovou adicí s vhodným (P)-A-C = C- derivátem, což poskytne (P)-A-B-D-E-CN. Konverze nitrilové funkční skupiny na amidinovou skupinu se provádí buď klasickou Pinnerovou syntézou (R. Boder, D.G. Neilson, Chem. Rev. 61 (1962) 179)

4 4 4 « • · 4 4

444 4 4 9 9 444 44 4

4 444 4 4 444

4444 44 44 44 44 44

-35 nebo modifikovanou Pionérovou syntézou, při které se jde přes meziprodukty, kterými jsou soli iminothioesterů (H. Vieweg et al., Pharmazie 57 (1984) 226) nebo přímo metodou A. Eschenmosera (Heiv. Chimica Acta 69 (1986) 1224. Následně se chránící skupina, která je stále přítomná v molekule, odštěpí, výhodně kyselou hydrolýzou.

Jestliže se při syntéze použije jako strukturní blok E H-E-CONH₂, pak se dehydratace amidové skupiny na nitrilovou skupinu nebo konverze na thioamidovou funkční skupinu se provádí na chráněných meziproduktech. Jako alternativa se může strukturní blok E při syntéze použít ve formě H-E-CSNH2.

Schéma II

-36 Schéma II znázorňuje lineární sestavování molekuly sloučeniny vzorce I alkylací, redukční aminaci nebo Michaelovou adicí H-B-P na příslušné vhodné nechráněné nebo chráněné strukturní bloky A, což poskytuje (P)-A-B-P, odtržení C-terminální chránící skupiny za účelem získání (P)-A-B-OH, navázání na H-D-P, což poskytuje (P)-A-B-D-P, odtržení C-terminální chránící skupiny, což poskytuje (P)-A-B-D-OH, napojení H-E-CN, což poskytuje strukturu vzorce (P)-A-B-D-E-CN a reakci těchto meziproduktů, která poskytuje finální produkt, jak je znázorněn na schématu I.

Pokud mají sloučeniny (P)-A-B-P ještě volnou NH funkční skupinu na B, musí se před odtržením C-terminální chránící skupiny napřed tato NH funkční skupina opatřit chránící skupinou. Chránící skupiny, které se v tomto případě používají, musí být vůči sobě kolmé.

Jako alternativu k tomuto H-E-CN bloku je také možno použít H-E-CONH2., H-E-CSNH2, H-E-C(NH)NH₂, H-E-C(NP)NH₂, H-E-C(NP)NHP, přičemž po navázání vzniká meziprodukt typu (P)-A-B-D-E’CONH2, který se v jednom provedení dehydratuje na (P)-A-B-D-E-CN nebo ve druhém provedení převádí přímo na (P)-A-B-D-E-CSNH₂, například pomocí reakce s použitím Lawessoncva činidla.

• ·

-37 Schéma III

A B D E

Schéma III znázorňuje velmi účinnou cestu přípravy sloučenin vzorce I konvergentní syntézou. Vhodně chráněné strukturní bloky (P)-A-B-OH a H-D-E-CN se spojí a výsledný meziprodukt vzorce (P)-A-B-D-E-CN se uvede do reakce, která poskytuje finální produkt, jak je znázorněn ve schématu I.

Jako alternativu je také místo H-D-E-CN možné použít H-D-E-CONH2 nebo H-D-E-CSNH2, přičemž po napojení vznikne meziprodukt složení (P)-A-B-D-E-CONH2, který se v prvním provedení dehydratuje na (P)-A-B-D-E-CN nebo se převádí na (P)-A-B-D-E-CSNH₂.

Používanými N-terminálními chránícími skupinami jsou Boc, Cbz nebo Fmoc, výhodně Boc a C-terminální chránící skupiny jsou methyl, terč.butyl a benzyl. Pokud je v molekule přítomno více chránících skupin, musí být vůči sobě kolmé, pokud se nemají odštěpovat současně.

-38 • * * $ • Λ · » · · • · · · · « « · '»

Požadované kopulační reakce a další reakce pro zavádění a odštěpování chránících skupin se provádějí za obvyklých podmínek peptidové chemie (viz M. Bodanszky, A. Bodanszky The Practice of Peptide Synthesis, 2nd edition, Springer Verlag Heidelberg, 1994).

Chránící skupiny Boc se odštěpují působením dioxanu/HCI nebo TFA/DCM, Cbz chránící skupiny se odštěpují hydrogenolýzou nebo působením HF. Hydrolýza esterových funkcí se provádí působením LiOH v alkoholickém rozpouštědle nebo ve směsi dioxan/voda. Pro štěpení terc.butylesterů se používá TFA nebo HCI.

s	Průběh reakcí byl monitorován pomocí TLC, obvykle použitím následujících mobilních fází:
A.	DCM/MeOH	95:5
B.	DCM/MeOH	9:1
C	DCM/MeOH	8:2
D	DCM/MeOH/50% HOAc	40:10:5
E.	DCM/MeOH/50% HOAc	35:15:5

Pokud je zmiňováno oddělování sloupcovou chromatografií, tak tyto separace byly prováděny na silikagelu pomocí shora zmíněných mobilních fází.

Separace pomocí HPLC s reverzní fází byla prováděna pomocí elučního činidla o složení acetonitril/voda a s použitím pufru HOAc.

Všechny reakce byly rutinně prováděny pod dusíkovou atmosférou.

-39 Výchozí sloučeniny se mohou připravovat následujícími metodami:

Příklady strukturních bloků A, které se používají pro alkylací jsou terč.butyl α-bromacetát, terč.butyl β-brompropionát, terč.butyl α-brompropionát, terč.butyl y-brombutyrát, terc.butyl α-brombutyrát, THP-protected bromethanol, THP-chráněný y-brompropanol, a-brom-y-butyrolakton, pro redukční aminaci se používají dihydroxyaceton, di-terc.butyl acetondikarboxylát a pro Michaelovu adici terc.butyl akrylát, terc.butyl metakrylát a diterc.butyl fumarát. Ty z uvedených terc.butyl esterů, které se nedají koupit, lze připravit metodami podobnými metodě, která je popsána v publikaci G. Uray, W. Lindner, Tetrahedron, 44, 1988 4357-4362.

Strukturní bloky B:

V literatuře je popsána široká škála možností pro obecnou a specifickou syntézu aminokyselin. Jejich přehled je podán, mimo jiné, v díle Houben-Weyl, Volume E16d/Part 1, strany 406 a další.

Prekursory, které byly použity, jsou benzofenonimin ethyl esteru kyseliny octové, diethyl acetamidomalonát a ethyl izonitrilacetát.

Byly připravovány různé racemické glycinové a alaninové deriváty, například se vycházelo z ethyl izonitrilacetátu a vhodného ketonu nebo aldehydu (viz H.-J. Prátorius, J. Flossdorf, M.-R. Kula Chem. Ber. 108 (1975) 3079).

« t · τ * ·

-40 v e·

Syntézy cyklooktylglycinu, cykloheptylglycinu, 2-norbonyIglycinu, adamantylalaninu, y-methylcyklohexylalaninu, 4-isopropyl-1 -cyklohexyl alani nu, 4-methyl-1 -cyklohexyl alaninu, 4-methyl-1-cyklohexylglycinu, cykloheptylalaninu a cyklopentylalaninu byly prováděny přes příslušné ethyl 2-formylaminoakryláty (U. Schollkopf a R. Meyer, Liebigs Ann. Chem. 1977, 1174 a H.-J. Prátorius, J. Flossdorf, M.-R. Kula Chem. Ber. 108 (1985) 3079), přičemž se vycházelo z ethyl isokyanoacetátu a relevantních karbonylových sloučenin cyklooktanonu, cyklo- heptanonu, 2-norbornanonu, 1 -formyladamantanu, 1 -formyl-1-methylcyklohexanu, 1 -formyl-4-isopropylcyklohexane, 1 -formyl-4-methylcyklohexanu a 4-methyl-cyklohexanonu, formylcyklohexanu a formylcyklopentanu s použitím následujících obecných metod:

Obecná metoda pro syntézu ethyl 2-formylaminoakrylátů:

Roztok 100 m ethyl isokyanoacetátu v 50 ml THF byl po kapkách přidán k 100 m kalium terč butoxidu ve 150 ml THF při 0 až -10°C. Po 15 minutách bylo při stejné teplotě přidáno 100 mmol vhodné karbonylové sloučeniny v 50 ml THF, reakční směs byla ponechána pomalu ohřát na pokojovou teplotu a rozpouštědlo bylo odstripo.váno na rotační odparce. Zbytek byl smísen s 50 ml vody, 100 ml kyseliny octové a 100 ml DCM, načež byl produkt extrahován DCM. DCM fáze byla sušena Na2SO4 a rozpouštědlo bylo odstripováno na rotační odparce. Výsledné produkty byly téměř čisté, ale po ochlazení byly, pokud to bylo potřebné, ještě dále čištěny sloupcovou chromatografií na silikagelu (mobilní fáze: směsi éter/petroléter).

Obecná metoda pro získání hydrochloridů aminokyselin, při které se vychází z ethyl 2-formylaminoakrylátů • 4 » 4 ·

• 4 • · »44· 44

100 m ethyl 2-formylaminoakrylátů bylo hydrogenováno pomocí Pd/C (10%) a vodíku v 200 ml ledové kyseliny octové, až do ukončení reakce. Pak byl odfiltrován katalyzátor, kyseliny octová byla odstripována v největší možné míře na rotační odparce a zbytek byl refluxován v 200 ml 50% koncentrované kyseliny chlorovodíkové 5 hodin. Kyselina chlorovodíková byla odstripována na rotační odparce a produkt byl sušen při 50°C za sníženého tlaku a pak několikrát promyt éterem. Hydrochloridy byly získány v podobě nahnědlých krystalů.

z výchozích 18,9 g (150 mmol) cyklooktanonu byio získáno 25,0 g cyklooktylglycin hydrochloridu. Z výchozích 22,4 g (200 mmol) cykloheptanonu bylo získáno 36,2 g cykloheptylglycin hydrochloridu. Z 16,5 g (150 mmol) 2-norbornanonu bylo získáno 26,6 g 2-norbonylglycin hydrochloridu. Z 19,7 g (120 mmol) 1-formyladamantanu bylo získáno 26,0 g adamantylalanin hydrochloridu. Z 2,6 g (100 mmol) 1-formyl-1-methylcyklohexanu bylo získáno 16,6 g y-methylcyklohexytalanin hydrochloridu. Z 16,8 g (150 mmol) 4-methylcyklohexanonu bylo získáno 25,9 g 4-methylcyklohexylglycin hydrochloridu. Z 15 g trans-1-formyl-4-methylcyklohexanu bylo získáno 18 g trans-4-methyl-1-cyklohexylalanin hydrochloridu. Z výchozích 9g 3,3-dimethyl-1 formylcyklohexanu bylo získáno 10 g 3,3-dimethyl-1-cyklohexylalanin hydrochloridu.

Aldehyd 1 -formyl-3,3-dimethylcyklohexanu, který je pctřebný pro syntézu, byl připraven metodou založenou na publiokaci Moskal a Lensen (Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 106 (1987) 137-141).

Roztok n-butyllithia v n-hexanu (72 ml, 115 mmol) byl po kapkách přidán v průběhu 10 minut k míchanému roztoku

-42 diethyl isokyanomethylfosfonátu (17 ml, 105 mmol) v 280 ml bezvodého diethyléteru při -60°C. Výsledná suspenze pak byla míchána při -60°C po dobu 15 min a v průběhu 10 min byl přidán roztok 3,3-dimethylcyklohexanonu (13 g, 105 mmol) v 100 ml bezvodého diethyléteru, přičemž byla teplota udržována pod hodnotou -45°C. Reakční směs byla ponechána ohřát na O°C a po míchání při této teplotě po dobu 90 min bylo přidáno 150-200 ml 38% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Získaná směs byla živě míchána při pokojové teplotě po dobu 15 h, aby kompletně proběhla hydrolýza. Organická fáze pak byla oddělena a promyta po 200 ml vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Pak byla sušena síranem hořečnatým, filtrována a zahuštěna na rotační odparce za účelem odstranění rozpouštědla. Výsledný zbytek byl použit bez dalšího čištění jako výchozí materiál pro syntézu aminokyseliny.

Cyklopentylglycin byl připraven hydrolýzou s použitím N-acetyl-(D,L)-cyklopentylglycinu s 6N kyselinou chlorovodíkovou, přičemž uvedený N-acetyl-(D,L)-cyklopentylglycin byl připraven jak je popsáno v literatuře J.T. Hillem a F.W. Dunnem, J. Org. chem. 30 (1965), 1321.

Boc-(D)-a-methylcyklohexylalanin

3,4 g (12,2 mmol) Boc-(D)-a-methyl-Phe-OH bylo hydrogenována v 100 ml MeOH za přítomnosti 250 mg 5% Rh na AI2O3 při tlaku 10 bar vodíkem a při teplotě 50°C po dobu 24 h. Filtrace a odpaření rozpouštědla vedlo k získání 2,8 g Boc-(D)-amethyl-Cha-OH. ¹H NMR (DMSO-d6, δ v ppm): 12 (velmi široký signál, COOH); 1,7-0,8 (25 H; 1,35 (s, Boc), 1,30 (s, Me))

-43 • 4 ·· 4'4 ·'· · » *

4 · · 4 · 4' · ♦ ··.; 4.

• 4 * 4 4 4 4· » 4 4 V • ····« · 4 · .-4 4 · 4 4 • · 4 · 4 4 ·_··._· • · 4 4 4 · '·.>· ‘4.4 * · <· 4

Boc-(3-Ph)-Pro-OH byl syntetizován metodou podobnou metodě, popsané v publikaci J.Y.L. Chunga et al. (J.Y.L. Chung et al., J.Org.Chem. 55 (1990) 270).

Příprava Boc-1-tetralinylglycinu

Boc-1 -tetralinylglycin byl připraven z 1,2-dihydronafthalenu. 1,2-Dihydronaftalen byl nejprve převeden na 1 -tetralyl bromid působením HBr (podobně reakci v J. Med. Chem. 57 (1994) 1586). Bromid byl následně uveden do reakce s diethyl acetamidomalonátem a po hydrolytickém štěpení byla výsledná aaminokyselina převedena na Boc-chráněnou formu zaobvyklých podmínek. Jiná možná příprava je popsána E. Reimannem a D. Vossem (E. Reimann, D. Voss, Arch. Pharm. 310 (1977) 102).

Příprava Boc-(D,L)Dch-OH ‘

Boc-(D, L)-Dpa-OH (1 mmol) byl. hydrogenován ve 12 ml MeOH spolu s katalytickými přísadami 5% Rh/A1 203 za tlaku 5 bar. Filtrace a odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku vedlo k téměř kvantitativnímu výtěžku.

Příprava H-D,L-Chea-OH

4,0 g cykloheptylmethyl methansulfonátu (19,39 mmol), připraveného z cykloheptylmethanolu a methansulfonylchloridu, bylo acetonitrilu pod atmosférou inertního plynu 10 h refluxováno spolu s 4,9 g ethylesteru benzofenoniminglycinu (18,47 mmol), 8,9 g suchého jemně práškového uhličitanu draselného (64,65 mmol) a 1 g tetrabutylamonium bromidu (3 mmol) v 50 ml suchého. Uhličitan draselný pak byl odfiltrován, filtrát byl odpařen

-44 ««· » « ¹ · · · I • '· • · ;· 9 > · e· 9 . '9 9 do sucha a surový produkt byl přímo hydrolyzován působením 20 ml 2N kyseliny chlorovodíkové ve 40 ml ethanolu, s použitím míchání při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodin. Reakční roztok pak byl zředěn a benzofenon byl extrahován do ethylacetátu při kyselé reakci, načež byl extrahován H-D,L-Chea-OEt do DCM při alkalické reakci (pH = 9) a roztok byl vysušen síranem hořečnatým a koncentrován v rotační odparce. Výtěžek 3,7 g ξ 95% teoretického výtěžku.

Boc-(D,L)-(3,4,5-(MeO)3)Phe-OH byl připraven alkylací ethylesteru benzofenoniminglycinu s trimethoxybenzyl chloridem, následným přidáním chranné Boc skupiny a hydrolýzou esteru.

H-(D,L)-p,p-Me₂Cha-OH byl připraven podle postupu popsaného v U. Schollkopf, R. Meyer, L. Ann. Chem. (1977) 1174-82.

Uvedené aminokyseliny byly převedeny běžnými postupy di-terc.butyldikarbonátem v soustavě voda/dioxan na Boc-chráněnou formu a následně rekrystalizovány ze směsi, ethyl acetát/hexan nebo vyčištěny kolonovou chromatografií na silikagelu (mobilní fáze: směsi ethylacetát/petrolether ).

Boc-chráněné aminokyseliny byly využity jako B strukturní bloky jak je ukázáno ve Schématu I.

Uvedené aminokyseliny jako B sruktumí bloky byly rovněž v některých případech konvertovány na odpovídající benzylestery a navázány na odpovídajícím způsobem chráněné A sruktumí bloky. V případě sloučenin s funkční skupinou N-H, které byly stále volné, byly následně chráněny Boc skupinou,

-45 é· 9» ·· 9 9 ·'» *· ·» « ♦ » · · · 9 * · • 9 · 9 9 · · 9 · * * í «9» 9 9 9 9 fc '*' ·♦ *' · · • 9 «99 9 9 · · · • 99 9' 9 9 9 9 9.9 ·* ·· benzylesterová skupina byla odstraněna hydrogenací a strukturní blok A-B-OH byl vyčištěn krystalizací, vysrážením jako sůl nebo kolonovou chromatografií. Tento postup je popsán v dáie uvedeném příkladu pro tBuOOC-CH2-(Boc)(D)Cha-OH.

Syntéza benzylesteru (D)-cyklohexylalaninu

Suspenze 100 g (481 mmol) (D)-cyklohexylalanin produktuu, 104 g (962 mmol) benzylalkoholu a 109,7 g (577 mmol) monohydrátu p-toluensulfonové kyseliny v 2200 ml toluenu byla pomalu zahřívána s refluxem s oddělovačem vody. V rozmezí teplot 80-90°C byl pozorován vznik chlorovodíku a rozpouštění suspenze za vzniku čirého roztoku. Když se dále neoddělovala voda (kolem 4 h), bylo oddestilováno 500 ml toluenu, byla reakční směs ponechána ochladit přes noc a výsledný zbytek byl odfiltrován a dvakrát promyt, pokaždé 1000 ml hexanu. Výsledný zbytek (195 g) byl pak suspendován v 2000 ml dichlormethan a po přidání 1000 ml vody bylo pH upraveno na hodnotu 9-9,5 pcstupným přidáváním 50 % roztoku hydroxidu sodného za současného míchání. Organická fáze byla odstraněna, promyta dvakrát, pokaždé 500 ml vody, vysušena síranem sodným a filtrována pro odstranění desikantu, zakoncentrováním filtrátu do sucha Bylo získáno 115 g (94%) požadovaného produktu ve formě světlého oleje.

Benzylester N-(te rc. b utyloxykarb onyl methy len)-(D)-cykl ohexylalaninu

115 g (440 mmol) benzylesteru (D)-cyklohexyialaninu bylo rozpuštěno v 2000 ml acetonitrilu a při teplotě místno-sti bylo přidáno 607,5 g (4,40 mol) uhličitanu draselného a 94,3 g (484 m nol) terc.butylbromacetátu a směs byla míchána při této .» · «<

• · ♦ t · » • · ·

-46 .♦ · · · • ’ · ··· ·· * · · '9 · · « « · · teplotě po 3 dny. Uhličitan byl odfiltrován, promyt acetonitrilm, matečný louh byl zakoncentrován (30 °C, 20 mbar), zbytek byl převeden do 1000 ml methyl terc.butyletheru a organická fáze byla extrahována 5% kyselinou citrónovou a nasyceným roztokem sodného bikarbonátu. Organická fáze byla vysušena síranem sodným, filtrována pro odstranění desikantu, koncentrována a výsledný olej (168 g) byl přímo využit v další reakci.

Benzyl ester N-Boc-N-( terč. butyloxykarbony I methylen )-(D)-cyklohexylalaninu

Olej (168 g, 447 mmol) získaný v předchozí syntéze byl rozpuštěn v 1400 ml acetonitrilu a po přidání 618 g (4,47 mmol) prášku uhličitanu draselného a 107,3 g (492 mmol) diterc. butyldikarbonátu byl míchán při teplotě místnosti po dobu 6 dnů. Uhličitan draselný byl odfiltrován s odsáváním, promyt přibližně 1000 ml acetonitrilu a filtrát byl koncentrován. Bylo získáno 230 g požadovaného produktu.

Cyklohexylamoniová sůl N-Boc-N-(terc.butyloxykarbonylmethyle T)-(D)-cyklohexylalaninu

115 g benzylesteru N-Boc-N-(terc.butyloxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalaninu bylo rozpuštěno v 1000 ml čistého etanolu a hydrogenováno v přítomnosti 9 g 10% Pd na aktivním uhlíku s vodíkem za atmosférického tlaku při 25-30°C po dobu 2 h. Filtrací a odstraněním rozpouštědla v rotační odparce Bylo získáno 100 g (260 mmol) žlutého oleje, který byl převeden do 1600 ml acetonu a zahříván s refluxem. Zahřívací lázeň byla odstraněna a byl rychle přidán roztok 27 g (273 mmol) cyklohexylaminu v acetonu přes kapací nálevku. Požadovaná sůl vykrystalizovala při ochlazení reakční směsi na teplotu místnosti.

-47 ©· ·· ·'♦ ·* .♦*.··.

« · · 4 * 4 · * ? · * * · · 4 4 4 4 4 4 4 4 • * · 4 · · 4 4 _S · 4 9

9 99 9 9 4· ·4 *4 ·Pevná látka byla odfiltrována, promyta 200 ml acetonu a konečné čištění bylo provedeno ještě jednou rekrystalizací z acetonu. Sušením zbytku ve vakuové odparce při přibližně 30°C Bylo získáno 70,2 g požadované soli ve formě bílého prášku.

Cyklohexylamoniová sůl N-Boc-N-(terc.butyloxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycinu byla připravena analogicky z cyklohexylglycinu jako prekurzoru. Deriváty N-Boc-N-(terc. butyloxykarbonylmethylen)-(D)-cykloheptylglycinu a N-Boc-N(terc. buty loxy karbonyl methy len )-(D)-cyklopentylgly činu byly připraveny z odpovídajících sloučenin cykloheptyl- a cyklopentylglycinu.

Cyklohexylamoniová sůl N-Boc-N-(terc.buty loxy karbony lethylen)(D)-cyklohexylalaninu:

a) terč.butyl 3-brompropionát

V protiproudu dusíku při -30°C bylo přidáno 16,64 g (109 mmol) brompropionové kyseliny, 150 ml kondenzovaného 2-methylpropenu a 2 ml koncentrované kyseliny sírové do skleněné nádoby autoklávu, autokláv byl pevně uzavřen a směs byla míchána po dobu 72 hodin při teplotě místnosti. Pro další zpracování byla reakční nádoba znovu ochlazena na -30°C a reakční roztok byl nalit opatrně do 200 ml ledového nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Přebytek 2-methylpropenu byl odpařen s mícháním, zbytek byl extrahován třikrát, pokaždé s 50 ml dichlormethanu a kombinované organické fáze byly vysušeny síranem sodným, filtrovány pro odstranění desikantu a koncentrovány s vývěvou. Olejovitý zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií

·· ·· ► · · » · ··· • · • · • ·

-48 (mobilní fáze n-hexan, později n-hexan/diethylether 9:1). Bylo tak získáno 18,9 g požadované sloučeniny.

b) Benzylester N-(terc. butyl oxy karbony lethylen)-(D)-cyklohexylalaninu

49,4 g (189 mmol) benzylesteru (D)-cyklohexylalaninu bylo rozpuštěno v 250 ml acetonitrilu, na roztok se působilo 31,6 g (151 mmol) terč.butyl brompropionátu při teplotě místnosti a směs byla refluxována po dobu 5 dnů. Směs byla filtrována pro odstranění vzniklé sraženiny, která byla promyta opakovaně acetonitrilm, filtrát byl koncentrován pod vakuovou vodní pumpou, zbytek byl převeden do 350 ml dichlormethanu a organická fáze byla extrahována 5% kyselinou citrónovou a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze byla vysušena síranem sodným, filtrována pro odstranění desikantu a koncentrována. Olejovitý zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (mobilní fáze dichlormethan, další dichlormethan/metanol 95:5). Byl tak získán poněkud znečištěný olej, který byl využit přímo v další reakci.

c) Benzylester N-Boc-N-(terc.butyloxykarbonylethylen)-(D)cyklohexylalaninu

Olej získaný ve výše popsané syntéze (30 g, max. 70 mmol) byl rozpuštěn v 150 ml acetonitrilu a na roztok bylo působeno 28 ml (160 mmol) diisopropylethy lamin a 19,2 g (88 mmol) di terč.butyl dikarbonátu a směs byla míchána po dobu 3 dny při teplotě místnosti. Reakční byla směs koncentrována s vývěvou v rotační odparce,

4 »ί * · »

-49 » ·»· κ ·· zbytek byl převeden do n-hexanu, směs byla promyta 5krát s použitím pokaždé 3 ml 5% roztoku kyseliny citrónové, kombinované organické fáze byly vysušeny síranem sodným, filtrovány pro odstranění _i desikantu a koncentrovány a zbytek byl podroben separaci kolonovou chromatografií (mobilní fáze hexan/ethylacetát 95:5). Výsledkem bylo 32,66 g (64 mmol) požadovaného produktu.

d) Cyklohexylamoniová sůl N-Boc-N-(terc.butyloxykarbonylethylen)-(D)-cyklohexylalaninu ·

32,66 g (64 mmol) benzylesteru N-Boc-N(terc. bu ty loxy karbonyl ethy len)(D)-cyklohexylal ani nu bylo rozpuštěno v 325 ml čistého etanolu a hydrogenováho vodíkem po dobu 14 hodin za atmosférickéhoo tlaku při 25-30°C v přítomnosti 3 g 10% čistého Pd na aktivním uhlí. - Filtrací roztoku přes Celíte®, promytím etanolem a odstraněním rozpouštědla v rotační odparce Bylo získáno 26,7 g žlutého oleje, který byl převeden do acetonu a zahříván s refluxem. Vyhřívací lázeň byla odstraněna a přes kapací nálevku byl rychle přidán roztok 7g (70 mmol) cyklohexylaminu v acetonu. Požadovaná sůl vykrystalizovala ochlazením reakční směsi na teplotu místnosti. Pevná látka byla odfiltrována, promyta 25 ml acetonu a pro konečné čištění, rekrystalizována ještě jednou z acetonuu. Sušením zbytku ve vakuové odparce při 30°C Bylo získáno 26,6 g (54 mmol) požadované sůl ve formě bílého prášku.

4«

N-Boc-N-(terc.butyloxy karbony I methy len)-(D )-cyklohexyl alany I3,4-dehydroprolin:

a) N-Boc-Pyr-OH (5 g, 23,45 mmol) byl rozpuštěn v MeOH (50 ml), a byl přidán HCI v dioxanu (4N, 30 ml). Směs byla následně zahřívána pod refluxem po dobu 12 hodin. Odstraněním rozpouštědla v rotační odparce byl získán H-Pyr-OMe produktuu jako výsledný produkt. Výtěžek: 3,84 g (100%).

b) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-OH (8 g, 20,75 mmol) byl rozpuštěn v dičhlormethanuu (75 ml) a při -10°C byl přidán ethyldiisopropylamin (15,5 ml, 89,24 mmol). Poté byla směs míchána po 5 minut při uvedené teplotě a po kapkách byl přidán roztok H-Pyr-OMe produktuu (3,4 g, 20,75 mmol) v dichlormethanu (25 ml). Následně byl přidán po kapkách roztok anhydridu kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu (50%, 20 ml, 26,96 mmol) a směs byla míchána po dobu 2 h při teplotách od -10 do 0°C. Vsázka byla zředěna dichlormethanem a promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 80 ml), 5% roztokem kyseliny citrónové (2 x,15 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (1 x 20 ml). Organická fáze byla vysušena síranem sodným a bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Surový produkt byl vyčištěn prostřednictvím mžikové chromatografie (silikagel, dichlormethan/metanol = 95/5). Výtěžek: 6,2 g (60%).

c) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OMe (5,5 g, 11,12 mmol) byl rozpuštěn v dioxanu (40 ml), pak byl přidán vodný roztok hydroxidu sodného (1N, 22,2 ml, 22,24

0'0 •' · 0 0 .0 0 * • * ··· · .0 · ·'!

0 0 0 0 0 0 '0 ·

00 0 0 · · · • 0 0,0 0 0 0 0 mmol) a směs byla míchána po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Dioxan byl odstraněn v rotační odparce a vodná fáze byla promyta ethylacetátem a okyselena na pH 1-2 roztokem hydrogensíranu draselného (20%). Vodná fáze byla extrahována dichlormethanem a kombinované organické fáze byly vysušeny síranem sodným. Výtěžek: 5 g (94%), bezbarvé pěny. Rekrystalizací z n-hexanu nasyceného vodou byla získána odpovídající karboxylová kyselina jako bezbarvé krystaly (teplota tání - 158-160°C).

N-Boc-N-(terč. butyl oxy karbony lmethylen)-(D )-cyklohexylg lycyl3,4-dehydroprolin:

Tato sloučenina byla syntetizována analogicky z NBoc-N-(terč. butyl oxy karbonyl methyl en)-(D)-cyklohexylglyci nu a methylesteru 3,4-dehydroprolinu.

N-Boc-N-(terč. butyloxy karbony lmethy len)-(D)cyklohexylalanylprolin:

a) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-OH (20 g, 51,88 mmol) byl rozpuštěn v suchém methylenchloridu (100 ml). Po ochlazení na teplotu -5°C, byl po kapkách přidán Nethyldiisopropylamin (90 ml, 518,88 mmol) a míchání pokračovalo po 5 minut. H-Pro-OBn x HCl (12,54 g, 51,88 mmol) byl následně přidán při -5°C a směs byla míchána po dobu 5 minut. Poté byl přidán po kapkách v průběhu 30 minut 50% roztok anhydridu kyseliny propanfosfonové kyseliny v ethylacetátu (45,1 ml, 62,26 mmol), zředěný methylenchloridem (45 ml). Poté byla směs míchána po

- 52 dobur 1 hodiny při 0-5°C, potom byla pomalu přenesena do teplotě místnosti a míchána po dobu 12 hodin při pokojové teplotě. Vsázka byla zředěna methylenchloridem a promyta postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 5% roztokem kyseliny citrónové a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným, bylo rozpouštědlo oddestilováno ve vakuu. Výtěžek: 28,9 g (světle žlutý olej, 97%).

b) Produkt získaný jak bylo popsáno v a) (28,5 g, 49,76 mmol) byl rozpuštěn v metanolu (650 ml), bylo přidáno 10% čistého Pd na uhlí (1,8 g) a směs byla hydrogenována při teplotě místnosti a ve vodíkové atmosféře pod tlakem 100 kPa. Katalyzátor byl následně odstraněn filtrací přes filtr Celíte® a filtrát byl koncentrován ve vakuu. Výtěžek: 22,2 g (bezbarvé pěny, 92%).

N-Boc-N-(terč. buty loxy karbony Imethylen)-(D)cyklohexylglycylprolin:

Tato sloučenina byla připravena analogicky z N-Boc-N(terc.butyloxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycinu a prolin methylesteru.

D srukturní bloky:

Sloučeniny využité jako D srukturní bloky, (L)-prolin, (L)-pipekolinová kyselina a (L)-azetidinkarboxylová kyselina jsou obchodně dostupné buď jako volné aminokyseliny, jako Boc

- 53 • · ’· · · · • · · · · ··· • · · · ·· ···· ·· ·· ·· ·· chráněné sloučeniny nebo jako odpovídající methylestery. Pokud byly (L)-3,4-dehydroprolin nebo (D,L)-4,5-dehydropipekolinová kyselina nebo odpovídající chráněné deriváty využity jako D srukturní bloky, byly připravené sloučeniny hydrogenovány v posledním kroku, čímž byly vyrobeny odpovídající deriváty prolinu. (L)-3,4-dehydroprolin (H-Pyr-OH) je komerčně dostupný, (D,L)-4,5-dehydropipekolinová kyselina (H-(D,L)-Dep-OH) může být připravena postupy popsanými v A. Burgstahler, C.E. Aiman J. Org. Chem. 25 (1960), 489 nebo C. Herdeis, W. Engel Arch.

pharm 326 (1993), 297.

E srukturní bloky byly syntetizovány následujícím způsobem:

5-Aminomethyl-2-kyanothiofen:

Tento srukturní blok byl syntetizován postupem popsaným v WO 95/23609.

4-aminomethyl-2-kyanothiofen:

a) 2-brom-4-formylthiofen g (320 mmol) 3-formylthiofenu bylo rozpuštěno v 600 ml methylenchloridu, roztok byl ochlazen na 5°C, pak bylo přidáno po malých částech 100 g (750 mmol) chloridu hlinitého a reakční směs byla následně refluxována. Roztok 59 g (19 ml, 360 mmol) bromu v 40 ml methylenchloridu byl přidán po kapkách v průběhu 45 minut a směs byla ponechána reagovat pod refluxem po dobu 4 hodin. Po ochlazení byl reakční roztok zalit 600 g ledové vody a extrahován methylenchloridem, organická fáze byla promyta nasyceným roztokem

- 54 • · 0 0 0 0 0 · 0 · * '0 0 · 0 « 000 ·« «· 0^!l .

• «·· · 0 ·· · ·· 0· · .0 0 0 0 0 0 0 0 « « • 00« «0 00' 00 ·* ·· hydrogenuhličitanu sodného, vysušena síranem hořečnatým a koncentrována v rotační odparce ve vakuu. Bylo získáno 64,5 g surového produktu, který byl vyčištěn kolonovou chromatografií (silikagel, methylenchlorid/petrolether). Celkově Bylo získáno 56,5 g poněkud znečištěného produktu.

b) 2-kyano-4-formylthíofen

7,6 g (85 mmol) kyanidu měďného bylo přidáno do roztoku 13,53 g (70,82 mmol) 2-brom-4-formylthiofenu v 25 ml DMF a reakční směs byla refluxována po dobu 3,5 hodin, během této doby se původně světle zelená suspenze změnila na tmavý roztok. Po přidání vody byla reakční směs opakovaně extrahována ethylacetátem, organické fáze byly spojeny, promyty nasyceným roztokem chloridu sodného, vysušeny síranem sodným a koncentrovány za poněkud sníženého tlaku. Čištěním zbytku (7 g) etherem Bylo získáno 1,6 g čistého produktu. Matečný louh společně se surovými produkty z ostatních vsázek byl vyčištěn chromatografií. (silikagel, soustava methylenchlorid/petrolether 1:1). Celkově reagovalo 56,5 g 2-brom-4-formylthiofenu za vzniku 2-kyano-4-formylthiofenu, čímž vzniklo 12,6 g čistého produktu (výtěžek 31%).

c) 2-kyano-4-hydroxymethylthiofen

3,47 g (91,8 mmol) borohydridu sodného bylo přidáno po částech do suspenze 12,6 g (91,8 mmol) 2-kyano-4formylthiofenu v 200 ml etanolu a mícháno při teplotě místnosti po dobu 2 hodin, během nichž se reakční směs pomalu změnila v čirý roztok. Po zakoncentrování

- 55 ·· ·♦ • · · · ·· ·· ·· ·’··· • '· «

ve vakuu byl zbytek převeden do ethylacetátu, promyt postupně nasyceným roztokem chloridu sodného, 5% kyselinou citrónovou a nasyceným roztokem chloridu sodného a organická fáze byla vysušena s použitím síranu sodného a koncentrována ve vakuu. Bylo získáno

11,7 g převážně čistého produktu (výtěžek 91,5%).

d) 4-brommethyl-2-kyanothiofen

11,7 g (84,07 mmol) 2-kyano-4-hydroxymethylthiofenu společně s 24,1 g (91,87 mmol) trifenylfosfinu bylo rozpuštěno v 100 ml THF při teplotě místnosti a postupně po částech bylo s chlazením (ledová lázeň) přidáno 30,47 g (91,87 mmol) tetrabrommethanu. Po míchání po dobu 3 hodin při teplotě místnosti byla směs koncentrována ve vakuu a vyčištěna chromatografií na silikagelu (soustava methylenchlorid/petrolether). Bylo získáno 18,8 g krystalického světle žlutého produktu, který stále obsahoval petrolether.

e) 4-N, N-bis(terč.butoxykarbonyl)aminomethyl-2-kyanothiofen

18,81 g 4-brommethyl-2-kyanothiofenu (surový produkt, maximálně 84,07 mmol) bylo rozpuštěno v 160 ml THF, roztok byl ochlazen ‘na 5°C a po částech bylo postupně přidáno 3,07 g (102,4 mmol) 80% suspenze hydridu sodného. Poté bylo po kapkách přidáno 22,25 g (102,4 mmol) di-terc.butyl iminodikarboxylátu, rozpuštěného v 160 ml THF a směs byla potom při 5°C míchána přes noc při teplotě místnosti. Jelikož TLC odhalila, že reakce nebyla dokončena, vsázka byla zahřívána po dobu 4,5 hodin při 30-35°C. Po ochlazení na teplotu 0-5°C, bylo

pomalu po kapkách přidáno 33 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, THF byl oddestilován ve vakuu, zbytek byl extrahován opakovaně ethylacetátem a ethylacetátové fáze byly promytyy nasyceným roztokem chloridu sodného, vysušeny síranem sodným a odpařeny v rotační odparce. Červený viskózní zbytek (34,61 g) byl využit jako surový produkt v následné reakci.

f) 4-aminomethyl-2-kyanothiofen hydrochlorid

34,61 g 4-N,N-bis(terc.butoxykarbonyl)aminomethyl-2kyano-thiofenu (surový produkt, maximálně 84,07 mmol) bylo rozpuštěno v 600 ml ethylacetátu a roztok byl ochlazen na 0-5°C, nasycen plynným HCI a byl zahříván na teplotu místnosti. Po 3 hodinách byla výsledná suspenze odpařena v rotační odparce, produkt byl destilován společně s methylenchloridem, zbytek byl extrahován promícháním s etherem a vysušen ve vakuu. Bylo získáno 13,85 g produktu ve formě světlého prášku. Výtěžek po dvou krocích: 94,3%.

2-aminomethyl-4-kyanothiofen:

a) 4-kyanothiofen-2-karbaldehyd

49,3 g (258,05 mmol) 4’bromthiofen-2-karbaldehydu a

27,8 g (310,41 mmol) kyanidu měďného bylo suspendováno v 130 ml absolutního DMF a suspenze byla refluxována po dobu 8 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu v rotační odparce při 40°C, zbytek byl suspendován v ethylacetátu a suspenze byla převedena do Soxlethova aparátu. Zbytek byl extrahován přes noc, žlutý roztok byl vysušen síranem sodným a odpařen ve . '.V • · • ··· * « w w v w w — ww— - — — '· · · · · · · '· · · ·'··· ·· *· ·· ·* ·.· vakuu v rotační odparce a výsledná žlutá pevná látka byla rekrystalizována z etheru. Bylo získáno 25,3 g produktu (80% teoretického výtěžku).

b) 4-kyanothiofen-2-karbaldehydoxim

11,6 g (84,6 mmol) 4-kyanothiofen-2-karbaldehydu bylo rozpuštěno v 140 ml metanolu a bylo přidáno 12,3 g (116,1 mmol) uhličitanu sodného. Poté bylo postupně po částech s chlazením přidáno 6,5 (93,5 mmol) hydroxylamin hydrochloridu při 15°C a směs byla míchána po dobu 2 hodin při 10°C. Poté, co bylo přidáno 80 ml vody, byla reakční směs extrahována pětkrát s použitím pokaždé 50 ml diethyletheru, organická fáze byla vysušena síranem sodným a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Bylo získáno 12,5 g požadovaného produktu jako žlutý krystalický prášek (96% teoretického výtěžku).

c) 2-aminomethyl-4-kyanothiofen hydrochlorid

11,22 g (171,64 mmol) jemného zinkového prášku bylo opatrně přidáno v několika malých dávkách do roztoku 4,65 g (30,60 mmol) 4-kýanothiofen-2-karbaldehydoximu v 50 ml trifluoroctové kyseliny ochlazené na 0-5°C tak, aby teplota nepřesáhla 15°C. Po míchání po dobu 3 hodin při teplotě místnosti byl přebytek zinku dekantován, většina trifluoroctové kyseliny byla odstraněna ve vakuu (olejové čerpadlo), zbývající olej byl ochlazen na 0°C a byla přidána postupně po částech směs 150 ml 3N vodného roztoku hydroxidu sodného a 2 I methylenchloridu, předem ochlazeného na 0°C. Poté, co • ·

- 58 byly odfiltrovány nerozpuštěné látky, organická fáze byla odstraněna, vodná fáze byla extrahována osmkrát s použitím 20 ml methylenchloridu, spojené organické fáze byly vysušeny síranem sodným a poté bylo přidáno s chlazením ledem 20 ml 6M kyseliny chlorovodíkové v metanolu. Během tohoto procesu se produkt vysrážel ve formě hydrogenchloridu jako bílá pevná látka, suspenze byla ochlazena přes noc na 4°C, čímž se krystalizace dokončila. Bylo získáno 2,2 g produktu jako bezbarvé jehličky (50% teoretického výtěžku).

5-aminomethyl-3,4-dimethylthiofen-2-karboxamid hydrochlorid:

g (105,42 mmol) 5-kyano-3,4-dimethylthiofen-2karboxamidu bylo suspendováno v 760 ml metanolu a v 110 ml roztoku 2N kyseliny chlorovodíkové, potom bylo přidáno 9,5 g Pd na uhlí (10%) a směs byla hydrogenována při teplotě místnosti. Poté, co prošlo 4,7 I vodíku (4 h), metanol byl oddestilován ve vakuua vodná fáze byla extrahována třikrát ethylacetátem a následně vysušena vymražením. Bylo získáno 16,3 g požadovaného produktu jako bílá pevná látka (70,4% teoretického výtěžku).

5-aminomethylisoxazol-3-karboxamid:

a) Ethyl 5-chlormethylisoxazol-3-karboxylát

21,2 g (210 mmol) triethylaminu bylo přidáno po kapkách za současného míchání do smési 30 g (198 mmol) ethyl 2-chlor-2-hydroxyiminoacetátu a 150 ml of propargylchloridu, ochlazené na 10-15°C. Míchání pokračovalo po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti, poté

- 59 • φφφ · · · φ · φ φ • Φ · · φφφφ · · · φ • φφφφ· φφ ··· · φ φ • · Φ··· φφφφ • ΦΦΦ φφ ·· φφ φφ ΦΦ byla přidána voda, směs byla extrahována etherem a organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a odpařena ve vakuu v rotační odparce. Zbytek byl destilován ve vakuu při tlaku 0,5 torr, produkt destiloval při teplotě 116-122°C.

b) 5-chlormethylisoxazol-3-karboxylová kyselina g (250 mmol) hydroxidu draselného bylo přidáno do 47,3 g (250 mmol) ethyl 5-chlormethylisoxazol-3karboxylátu v 150 ml etanolu a reakční směs byla míchána po dobu 6 hodin při 60-70°C. Po ochlazení byla směs koncentrována ve vakuu, zbytek byl převeden do vody a extrahován etherem, vodná fáze byla okyselena kyselinou chlorovodíkovou a potom opakovaně extrahována etherem, etherová fáze byla vysušena síranem sodným a koncentrována ve vakuu (olejové čerpadlo, 50°C). Bylo získáno 31 g požadovaného produktu (77% teoretického výtěžku).

c) Chlorid 5-chlormethylisoxazol-3-karboxylové kyseliny

120 g (743 mmol) 5-chlormethylisoxazol-3-karboxylové kyseliny společně s 500 ml thionylchloridu a 2 kapky pyridinu byly refluxovány po dobu 10 hodin, koncentrovány ve vakuu a potom destilovány při 20 torr. Produkt destiloval při 125-133°C. Bylo získáno 78 g (58% teoretického výtěžku).

d) 5-chlormethylisoxazol-3-karboxamid

- 60 444 · · • · 4444 44 «4 · 4 4 β

444 4 4 4 4

444 44 4

4 4 4 4 4 4

4« 44 *· »4

Amoniak procházel po dobu 1 hodiny při 10-15°C roztokem 10 g (55,56 mmol) chloridu 5chlormethylisoxazol-3-karboxylové kyseliny v 100 ml methylenchloridu a potom se pokračovalo v míchání po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Poté, co se roztok ochladil na 0°C, sraženina byla odfiltrována s odsáváním a promyta trochou chladného methylenchloridu a zbytek byl extrahován dvakrát vodou za současného míchání pio odstranění amonných solí. Sušením ve vakuu Bylo získáno 6,58 g čistého produktu jako světlý prášek (74% teoretického výtěžku)

d) 5-aminomethylisoxazol-3-karboxamid hydrochlorid

2,44 g (15,2 mmol) 5-chlormethylisoxazol-3-karboxamidu bylo přidáno do směsi 100 ml koncentrovaného roztoku amoniaku a 72 ml metanolu a reakční roztok byl zahříván na 40 °C a konstantně sycen po celou dobu reakce plynným amoniakem. Po 6 hodinách prekursor zreagoval. Metanol byl odstraněn ve vakuu a vodná fáze byla extrahována dvakrát s použitím methylenchloridu a následně odpařena do sucha v rotační odparce ve vakuu za mírných podmínek. Zbytek, kterou byla bílá pevná látka, byl využit v kopulačních reakcích jako surový produkt.

2-Aminomethyloxazol-4-thiokarboxamid a 2aminomethylthiazol-4-thiokarboxamid byly připraveny podle postupu G. Videnov, D. Kaier, C. Rempter a G. Jung Angew. Chemie (1996) 108, 1604, z tam popsaných N-Boc chráněných sloučenin bylo chránění odstraněno s použitím etherické kyseliny chlorovodíkové v methylenchloridu.

4-Aminomethylthiazol-2-thiokarboxamid:

a) Diamid kyseliny monothiošťavelové

Diamid kyseliny monothiošťavelové byl· připraven s použitím ethyl thiooxamidatu jako vstupní suroviny podle postupu W. Walter, K.-D. Bode Liebigs Ann. Chem. 660 (1962),74-84.

b) 2-karbamoyl-4-chlormethylthiazol g (96 mmol) ethyl thiooxamidatu bylo převedeno do 170 ml n-butanolu, bylo přidáno 26 g (204 mmol) 1,3dichloracetonu a směs byla zahřívána po dobu 90 minut při 112°C v dusíkové atmosféře. Reakční směs byla potom koncentrována ve vakuu a zbytek byl extrahován mícháním s n-hexanem (120 ml). Bylo získáno 10 g čistého produktu.

c) 4-Boc-aminomethyl-2-karbamoylthiazol.

g (56,6 mmol) 2-karbamoyl-4-chlormethylthiazolu bylo přidáno do amoniakem nasyceného roztoku 350 ml metanolu a 80 ml 25% vodného roztoku amoniaku. Reakční směs byla zahřívána po dobu 6 hodin při 4042°C za současného sycení amoniakem, potom byla koncentrována ve vakuu a destilována společně s metanolem a zbytek byl následně extrahován promícháním s etherem a potom s acetonem. Bylo izolováno 7,6 g surového produktu, který stále obsahoval malé množství chloridu amonného. Pro odstranění tohoto

- 62 0000 00 sekundárního produktu se nechal , surový produKt reagovat s (Boc)₂O ve vodném roztoku dioxanu a chráněná sloučenina byla vyčištěna kolonovou chromatografií. Bylo získáno 4,95 g čistého produktu.

d) 4-Boc-aminomethyl-2-kyanothiazol

4,95 g (19,24 mmol) 4-Boc-aminomethyl-2karbamoylthiazolu bylo přidáno do 90 ml methylenchloridu a 16,7 ml (97,44 mmol) diisopropylethylaminu, směs byla ochlazen na 0°C, po kapkách byl při teplotě od 0 do 5°C přidán roztok 6,35 ml anhydridů trifluoroctové kyseliny v 10 ml methylenchloridu a směs byla potom zahřívána na teplotu místnosti (kontrola TLC). Poté bylo přidáno 25 ml vody, směs byla míchána po dobu 30 minut při teplotě místnosti a pH bylo upraveno na hodnotu 2,5 pomocí 10% roztoku kyseliny citrónové a organická fáze byla opakovaně promyta, vysušena s použitím síranu hořečnatého a koncentrována ve vakuu. Bylo získáno 5,4 g vazkého, světle hnědého surového produktu, který bvl využit v dalším kroku bez dalšího čištění.

e). 4-Boc-Am i n omet hyl-2-thi okarbamoyl thiazol

Surový produkt získaný z bodu d) (max. 19,24 mmol) byl rozpuštěn v 65 ml pyridinu a 5 ml triethylaminu, nasycen sirovodíkem a poté se nechal stát při teplotě místnosti přes víkend. Reakční směs byla potom odpařena ve vakuu v rotační odparce, zbytek byl převeden do směsi etheru a ethylacetátu a směs byla promyta 10% roztokem kyseliny citrónové a vodou, vysušena síranem

CO 4 4· ♦ · ···. ·

Ο W % · » 4 4 4 44 4 *4 • 4 ·4 · · · 4 ···« ·· ·· ·0 hořečnatým a odpařena ve vakuu v rotační odparce. Bylo získáno 6,0 g jako světle žlutá pevná pěna.

e) 4-aminomethyl-2-thiokarbamoylthiazol hydrochlorid

Produkt získaný z předchozího experimentu byl převeden do 100 ml methylenchloridu, bylo přidáno 30 ml přibližně 5-molárního roztoku etherické kyseliny chlorovodíkové a směs byla míchán přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs byla potom odpařena do sucha ve vakuu v rotační odparce, společně opakovaně destilována s etherem a následně extrahována promícháním s methylenchloridem. Bylo získáno 4,15 g požadovaného produktu jako světle žlutá amorfní látka.

4-amidino-2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol x HOAc

a) α-acetylglycin methylester hydrochlorid

Terc.butylát draselný (17,8 g, 157,9 mmol) byl přidán do THF (120 ml) a pak byl přidán roztok methylesteru Ndifenylmethvlidengiycinu (40 g, 157,9 mmol) v THF (60 ml) při -70°C. Poté, co byl nažloutlý roztok míchán po dobu 30 minut při uvedené teplotě, byl po kapkách při telotě -70°C přidán roztok acetylchloridu (12,4 g, 157,9 mmol) v THF (70 ml). Poté, co byla směs míchána při této teplotě po 1,75 hodin, bylo přidáno 3N HCl (160 ml) a nažloutlá suspenze byla míchána po dobu dalších 10 minut při teplotě místnosti. THF byl odstraněn při teplotě místnosti na rotační odparce a zbývající vodná fáze byla promyta 3x diethyletherem. Vodná fáze byla vysušena vymražením a zbytek byl extrahován promícháním s

metanolem. Metanolický roztok produktu byl koncentrován na rotační odparce při 35°C. Výtěžek: 26,4 g (157,9 mmol, kvantitativně, nažloutlá pevná látka).

b) BOC-Gly-(a-acetyl-Gly)-OMe

HOC-Gly-OH (24,05 g, 137,27 mmol) byl přidán do THF (400 ml) a byl přidán triethylamin (13,87 g, 137,19 mmol). Bezbarvý roztok byl ochlazen na -20°C a při uvedené teplotě byl po kapkách přidán roztok isobutylchlorformiátu (18,75 g, 137,28 mmol) v THF (20 ml). Bezbarvá suspenze byla míchána po dobu dalších 30 minut při -20°C a potom byl po částech přidán aacetylglycinmethylester hydrochlorid (23,0 g, 137,3 mmol). Směs byla míchána po dobu 30 minut při -20°C a pak byl přidán po kapkách v průběhu 45 minut roztoktriethylaminu (13,87 g, 137,19 mmol) v THF (20 ml). Směs pak byla míchána po dobu 4 hodin při -20°C, míchání pokračovalo po dalších 12 hodin při pokojové teplotě. Zbytek byl odfiltrován s odsáváním, promyt THF a kombinované THF fáze byly koncentrovány na rotační odparce.

Výtěžek: 44,1 g (světle hnědý olej).

¹H NMR (270 MHz, CDCI₃) δ 1,45 (s, 9H), 2,40 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,90 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 5,25 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,30 (sbr, 1H).

c) Methyl 2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol-4-karboxylát

BOC-Gly-(a-acetyl-Gly)-OMe (39,8 g, 138,2 mmol) byl přidán do THF (400 ml), po dávkách při teplotě místnosti bylo přidáno Lawessonovo činidlo (96,6 g, 238,8 mmol).

i

0' 0 ·'* β c · · · ·

ΟΟ » 999 9· · · (·«» ·>· <

• »

000

Nažloutlý roztok byl potom refluxován po dobu 1,5 hodin. THF byl odstraněn na rotační odparce. Zbytek (červenohnědý olej) byl extrahován promícháním s dieťhyléterem (600 ml). Éterová fáze byla dekantována od nerozpuštěného nahnědlého oleje a promyta postupně 5% kyselinou citrónovou (2x), nasyceným roztokem NaHCO₃ (9x) a vodou (2x). Po vysušení (MgSO4) bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Výtěžek: 22,0 g (77 mmol, 56%, nahnědlá pevná látka).

¹H NMR (270 MHz, CDCI₃) δ = 1,50 (s, 9H), 2,75 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,55 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 5,45 (t, J = 6,5

Hz, 1H). (Hlavní rotamer na Boc skupině).

d) 2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol-4-karboxylová kyselina

Methyl 2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol-4karboxylát (22,0 g, 77 mmol) byl rozpuštěn v etanolu (100 ml) a byl přidán roztok LiOH (2,2 g, 92 mmol) ve vodě (50 ml). Směs byla míchána po dobu 30 minut při teplotě místnosti a potom byl etanol odstraněn na rotační odparce a zbylý roztok zředěn vodou (70 ml). Vodná fáze byla promyta ethylacetátem (3x) a pH bylo upraveno na hodnotu 2 roztokem 20% NaHSO₄ a během tohoto procesu se odseparoval světle hnědý olej. Vodná fáze byla extrahována dichlormethanem a kombinované organické extrakty byly vysušeny (MgSO₄) a koncentrovány ve vakuu. Světle hnědý zbytek byl extrahován promícháním v diisopropyléteru. Zbylá bezbarvá sraženina byla odfiltrována s odsáváním a promyta diisopropyléterem. Výtěžek: 6,9 g (25,4 mmol, 33%, bezbarvá pevná látka).

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de) δ= 1,40 (s, 9H), 2,65 (s, 3H), 4,30 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 7,80 (t, J = 6,5 Hz, 1H).

e) 2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol-4-karboxamid

2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol-4-karboxylová kyselina (6,8 g, 25 mmol) byla rozpuštěna v THF (100 ml) a byl přidán triethylamin (2,53 g, 25 mmol). Směs byla ochlazena na -20°C, byl přidán po kapkách roztok isobutyl chlorformiátu (3,41 g, 25 mmol) v THF (10 ml). Směs byla míchána po dobu 30 minut při -20°C a potom byl do světle hnědé suspenze zaváděn plynný amoniak po dobu 45 minut. Směs byla potom zahřívána na teplotu místnosti. Zbytek byl odfiltrován s odsáváním a extrahován THF, filtráty byly koncentrovány. Výtěžek: 6,9 g (25 mmol, kvantitativně).

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de) δ= 1,40 (s, 9H), 2,65 (s, 3H), 4,30 (m, 2H), 7,40 (sbr, 1H),. 7,50 (sbr, TH), 7,80 (t, J = 6,5 Hz, 1H).

f) 4-kyano-2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol

2-(N-Boc-Aminomethyl)-5-methylthiazol-4-karboxamid (6,8 g, 25 mmol) byl přidán do dichlormethanu (120 ml). Po ochlazení směsi na 0°C, byl přidán po kapkách diisopropylethylamin (15,84 g, 122,8 mmol). Potom byl přidán v průběhu 30 minut při -5°C po kapkách roztok anhydridu kyseliny trifluoroctové (8,25 g, 39,3 mmol) v dichlormethanu (20 ml). Směs byla míchána po dobu 30 minut při 0°C a současně zahřívána na teplotu místnosti, potom míchání pokračovalo dalších 12 hodin. Směs byla zředěna dichlormethanem (100 ml) a promyta 20% • · · · ^w 99 ,R7 _ ·ί · ·-····

Ό / · ···♦>· ·· • · kyselinou citrónovou, nasyceným roztokem NaHCO₃ a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla vysušena (MgSO₄) a koncentrována ve vakuu. Výtěžek: 6,3 g (25 mmol, kvantitativně).

g) 4-amidino-2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol x CH₃COOH

4-kyano-2-(N-Boc-aminomethyl)-5-methylthiazol (5,5 g, 21,74 mmol) byl rozpuštěn v metanolu (15 ml) a pak byl přidán N-acetylcystein (4,1 g, 25,12 mmol). Směs byla potom zahřívána na 60°C a za současného probublávání amoniakem po dobu 22 hodin. Vsázka byla zředěna metanolem a nechala se projít acetátovým měničem iontů. Metanol byl odstraněn v rotační odparce a zbytek extrahován promícháním acetonem. Bezbarvý zbytek byl odfiltrován s odsáváním a vysušen ve vakuu. Výtěžek: 4,75 g (14,4 mmol, 66%, bezbarvá pevná látka).

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 1,40 (s, 9H), 1,80 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 4,35 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 7,90 (t, J = 6,5 Hz, 1H).

2-aminomethyl-5-amidino-4-methylthiazol x 2 HCI

a) N-BOC-glycin thioamid

N-BOC-glycinonitril (12,0 g, 76,8 mmol) a diethylamin (0,16 ml, 2,1 mmol) byly rozpuštěny v toluenu (100 ml). Roztok byl ochlazen na -10°C, nasycen sirovodíkem a následně míchán přes noc při teplotě místnosti. Vzniklá sraženina byla odfiltrována s odsáváním a promyta toluenem. Produkt byl vysušen ve vakuu při 45°C.

·· · ·· ♦· 9 ti ti . · · ti •

ti

Výtěžek: 13,2 g (69,4 mmol, 90,3%, nažloutlá pevná látka).

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆) δ = 1,40 (s, 9H), 3,80 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,05 (t, J = 7 Hz, 1H), 9,0 (sbr, 1H), 9,65 (sbr, 1H).

b) Methyl 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methyithiazol-5-karboxylát

N-BOC-glycin thioamid (10,0 g, 52,6 mmol) byl přidán do metanolu (70 ml) a byl přidán methyl 2-chloracetoacetát (7,9 g, 52,6 mmol). Směs byla zahřívána po dobu 2 hodin při 60°C a následně míchána po dobu 48 hodin při teplotě místnosti. Metanol byl odstraněn na rotační odparce a zbytek byl extrahován promícháním se směsí aceton/diethyléter. Zbylá sraženina byla odfiltrována s odsáváním a filtrát byl koncentrován. Pevná látka získaná z filtrátu byla požadovaným produktem (vyčištěn TLC a HPLC). Výtěžek: 8,7 g (30,4 mmol, 57,8%).

ESI-MS: 287 (M + H + ).

c) 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol-5-karboxylová kyselina

Methyl 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthi azol-5karboxylát (2,8 g, 9,74 mmol) byl rozpuštěn v 1,4-dioxanu (30 ml) a byl přidán 1N roztok hydroxidu sodného (19 ml). Směs byla míchána po dobu 4 hodin při teplotě místnosti a 1,4-dioxan byl odstraněn na rotační odparce. Směs byla zředěna vodou a promyta ethylacetátem. Vodná fáze byla okyselena 20% roztokem hydrogensíranu draselného a sraženina získaná během tohoto procesu byla odfiltrována s odsáváním a promyta vodou. Takto

λ · · · • · «··· ·* získaný produkt byl vysušen ve vakuové odparce při 40°C. Výtěžek: 2,5 g.

d) 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol-5-karboxamid

2-(N-BOC-Aminomethyl)-4-methylthiazol-5-karboxylová kyselina (12,6 g, 46,27 mmol) byla rozpuštěna v dichlormethanu (460 ml) a dimethylformamidu (0,4 ml). Směs byla ochlazena na 0°C a po kapkách v průběhu 30 minut byl přidán roztok oxalylchloridu (6,46 g, 50,90 mmol) v dichlormethanu (40 ml). Směs byla míchána po dobu 2 hodin při 0°C, potom ochlazena na -20°C a při této teplotě se nechala probublávat amoniakem, dokud nebyla reakce dokončena. Směs byla následně zahřívána na teplotu místnosti a promyta vodou. Sraženina vzniklá během tohoto procesu byla odfiltrována s odsáváním. Organická fáze byla promyta 5% roztokem kyseliny citrónové, vysušena (MgSO4) a koncentrována na rotační odparce. Výsledná pevná látka byla spojena se sraženinou, která byla předtím získána filtrací, vysušena při 50°C ve vakuové sušárně. Výtěžek: 9,8 g (36,12 mmol, 78%).

e) 2-(N-BOC-aminomethyl)-5-kyano-4-methylthiazol

2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol-5-karboxamid (11,13 g, 41,02 mmol) byl suspendován v dichlormethanu (75 ml) a ochlazen na 0°C. Při uvedené teplotě byl nejprve přidán ethyldiisopropylamin (17,86 ml, 102,55 mmol) a potom pomalu roztok anhydridu kyseliny trifluoroctové (6,56 ml, 47,17 mmol) v dichlormethanu (20 ml). Po míchání po dobu 1 hodiny byla směs zředěna

• · dichlormethanem a promyta 5% roztokem kyseliny citrónové. Po vysušení (MgSO.*) bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce a surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií.

Výtěžek: 6,5 g (25,66 mmol, 63%).

f) 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol-5-thíoamid

2-(N-BOC-aminomethyl)-5-kyano-4-methylthiazol (7,5 g, 29,61 mmol) byl rozpuštěn v pyridinu (30 ml) a byl přidán triethylamin (27 ml). Roztok byl nasycen sirovodíkem při 0°C a pak se nechal stát po dobu 48 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo následně odstraněno na rotační odparce a zbytek byl převeden do ethylacetátu, promyt 20% roztokem hydrogensíranu draselného a vysušen síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odstraněno na rotační odparce a surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu a vysrážen petroléterem. Produkt, který se vysrážel, byl odfiltrován s odsáváním, vysušen ve vakuové sušárně při 40°C. Výtěžek: 7,1 g (24,7 mmol, 83%).

g) 5-amidino-2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol x HOAc

2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol-5-thioamid (7,1 g, 24,70 mmol) byl rozpuštěn v dichlormethanu (40 ml) a byl přidán jodmethan (17,5 g, 123,52 mmol). Směs byla míchána po dobu 56 hodin při teplotě místnosti, rozpouštědlo bylo odstraněno na rotační odparce. Zbytek byl rozpuštěn v 10% metanolického roztoku amoniumacetátu (29 ml) a mícháno při 40°C dokud nebyla reakce ukončena. Rozpouštědlo bylo odstraněno • Φ

φ φ '*> * φ φ φ • φ φ na rotační odparce, zbytek byl extrahován promícháním s dichlormethanem a výsledná pevná látka byla odfiltrována s odsáváním a promyta dichlormethanem.

. Zbytek byl rozpuštěn v metanolu a přeměněn na odpovídající acetát pomocí iontoměniče syceného acetátem. Rzpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce a výsledný červeno-hnědý olej byl extrahován promícháním s dichlormethanem. Byl získán produkt jako bezbarvá pevná látka, která byla vysušena ve vakuu při 40°C. Výtěžek: 5,3 g (16,04 mmol, 65%).

h) 5-amidino-2-aminomethyl-4-methylthiazol x 2 HCl

5-amidino-2-(N-BOC-aminomethyl)-4-methylthiazol x HOAc (1,6 g, 4,84 mmol) byl suspendován v dichlormethanu (20 ml), při teplotě místnosti byla přidána 4M kyselina chlorovodíková v 1,4-dioxanu (4,84 ml, 19,37 mmol) a směs byla míchána po dobu 3 hodin při uvedené teplotě. Produkt byl odfiltrován, promyt dichlormethanem vysušen ve vakuu při 40°C. Výtěžek: 0,73 g (3,00 mmol, 62%).

2-aminomethyl-5-amidino-4-trifluormethylthiazol x 2 HCl

a) Ethyl 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-trifluormethylthi azol-5karboxylát

N-BOC-glycin thioamid (5,0 g, 26,28 mmol) byl rozpuštěn v acetonuitrilu (60 ml) a po kapkách byl přidán při 510°C roztok ethyl 2-chlor-4,4,4-trifluoracetoacetátu (6,38 g, 26,28 mmol). Směs pak byla míchána po dobu dalších minut při 5 °C a po dobu 12 hodin při teplotě

• 9 místnosti. Vsázka byl potom ochlazena na 0 °C a po kapkách byl přidán triethylamin (12 ml, 86,77 mmol). Směs byla míchána po dobu 20 minut při 0 °C, během této doby se žlutá suspenze změnila na čirý červenohnědý roztok. Potom byl pomalu přidán po kapkách při 0°C thionylchlorid (2,1 ml, 28,89 mmol). Směs byía míchána po dobu 20 minut při 0°C, potom byla ponechána, aby se v průběhu dalších hodin zahřála na teplotu místnosti. Rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce a zbytek byl převeden do vody (100 ml) a extrahován opakovaně ethylacetátem. Kombinované organické fáze byly vysušeny (Na2AO₄) a koncentrovány. Surový produkt byl vyčištěn chromatografií (silikagel MeOHíDCM = 2:98). Výtěžek: 2,2 g (6,4 mmol, 24,5%).

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de) δ = 1,30 (t, J = 6,5 Hz, 3H), 1,45 (s, 9H), 4,35 (q, J = 6,5 Hz, 2H), 4,45 (d, J = 6,5

Hz, 2H), 7,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H).

b) 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-trifluormethylthiazol-5karboxamid

Ethyl 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-trif!uormethy!thiazo!-5karboxylát (15 g, 42,33 mol) byl rozpuštěn v metanolu. Roztokem se nechal při teplotě místnosti procházet amoniak tak dlouho, až se všechen ester přeměnil na karboxamid. Rozpouštědlo bylo odstraněno na rotační odparce a surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií. Výtěžek: 4,6 g (14,14 mmol, 33%).

c) 2-(N-BOC-aminomethyl)-5-kyano-4-trifluormethylthiazol

4« *·

2-(N-BOC-Aminomethyl)-4-trifluormethylthiazol-5karboxamid (4,6 g, 14,14 mmol) byl rozpuštěn v dichlormethanu (30 ml) a ochlazen na -5°C. Při této teplotě byl přidán ethyldiisopropylamin (4,6 g, 35,35 mmol) a roztok anhydridu trifluoroctové kyseliny (3,4 g, 16,26 mmol) v dichlormethanu (10 ml). Potom byla směs míchána další 2 hodiny při 0°C. Byla promyta •postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného and 5% roztoku kyseliny citrónové. Po vysušení (MgSO₄) bylo rozpouštědlo odstraněno na rotační odparce. Surový produkt byl extrahován mícháním se soustavou diethyléter/petroléter. Supernatant byl oddělen od oleje a koncentrován na rotační odparce. Výtěžek: 1,9 g (6,18 mmol, 44%).

d) 2-(N-BOC-aminomethyl)-4-trifluormethylthiazol-5-thioamid

2-(N-BOC-aminomethyl)-5-kyano-4-trifluormethylthiazol (4,6 g, 14,97 mmol) byl rozpuštěn v pyridinu (20 ml), byl přidán triethylamin (24 ml) a roztok byl nasycen s sirovodíkem. Po dvou dnech při teplotě místnosti bylo rozpouštědlo odstraněno na rotační odparce. Surový produkt byl převeden do ethylacetátu a promyt postupně 20 % roztokem hydrogensíranu sodného a vodou. Po vysušení (MgSO₄) bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií. Výtěžek: 2,5 g (7,32 mmol, 49%).

e) 5-amidino-2-(N-BOC-amínomethyl)-4-trifluormethylthiazol

2-(N-HOC-aminomethyl)-4-trifluormethylthiazol-5-thioamid (2,5 g, 7,32 mmol) byl rozpuštěn v dichlor··

methanu (10 ml) a byl přidán jodmethan (10,4 g, 73,24 mmol). Potom byla směs míchána 48 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo odstraněno na rotační odparce a zbytek byl převeden do metanolu (5 ml) a byl přidán 10% roztok amoniumacetátu v metanolu (8,5 ml, 10,98 mmol). Směs byla míchána po dobu 4 dny při teplotě místnosti, potom se roztok surového produktu nechal projít acetátovým iontoměničem a rozpouštědlo bylo odstraněno na rotační odparce. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií. Výtěžek: 0,8 g (2,08 mmol, 28%).

f) 5-amidino-2-aminomethyl-4-trifluormethylthiazol x 2 HCI

5-am i dino-2-(N-BOC-aminomethyl)-4-trifluormethyl thiazol (0,8 g, 2,08 mmol) byl rozpuštěn v dichlormethanu a byl přidán 4M roztok kyseliny chlorovodíkové v 1,4-dioxanu (2,1 ml, 4,2 mmol). Směs byla míchána po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti, pak bylo rozpouštědlo odstraněno na rotační odparce. Takto získaný surový produkt byl využit v dalších reakcích bez dalšího čištění. Výtěžek: 0,6 g (2,0 mmol, 97%).

ESI-MS: 225 (M + H+)

5-aminomethyl-3-methylthiofen-2-karbonitril

a) 5-formyl-3-methylthiofen-2-karbonitri|·.

112 ml (179 mmol) 1,6-molárního roztoku n-butyllithia v n-hexanu bylo přidáno v průběhu 20 minut do roztoku

25,1 ml (179 mmol) diisopropylamin v 400 ml tetrahydrofuranu ochlazeném na -78°C. Roztok se nechal

stát, až jeho teplota dosáhla -35°C, pak byl znovu ochlazen na -78°C a při této teplotě byl pomalu po kapkách přidán roztok 20,0 g (162 mmol) 2-kyano-3methylthiofenu v 80 ml tetrahydrofuranu. Během tohoto procesu se barva roztoku změnila na temnou červeň. Míchání pokračovalo 45 minut, přičemž bylo pomalu po kapkách přidáno 63 ml (811 mmol) dimethylformamidu a směs byla míchána po dobu dalších 30 minut. Pro zpracování byl při -70°C přidán roztok 27 g kyseliny citrónové v 160 ml vody. Byla směs koncentrována v rotační odparce, bylo přidáno 540 ml roztoku nasyceného chloridu sodného a vsázka byla extrahována třikrát s použitím pokaždé 250 ml diethyléteru. Spojené organické extrakty byly vysušeny síranem hořečnatým. Po odfiltrování desikantu bylo rozpouštědlo oddestilováno s vývěvou a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluentem byla soustava hexan/ethylacetát 4/1). Získalo se 23 g (94%) vyráběné součeniny.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-ds): δ = 2,4 (s, 3H), 8,0 (s, 1 H), 9,8 (s, 1H).

f)· 5-hydroxymethyl-3-methy!thiofen-2-karbonÍÍril:

5,75 g (152 mmol) borobydridu sodného bylo přidáno po dávkách při teplotě místnosti do roztoku 23 g (152 mmol) 5-formyl-3-methylthiofen-2-karbonitrilu v 300 ml absolutního etanolu. Reakční směs byla míchána po dobu 5 minut, koncentrována s vývěvou, převedena do ethylacetátu a extrahována 5% roztokem kyseliny citrónové a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým, desikant byl odfiltrován a rozpouštědlo bylo

oddestilováno s vývěvou při teplotě místnosti. Získalo se tak 24 g vyráběné sloučeniny jako tmavě červeného oleje, který stále obsahoval rozpouštědlo a byl využit v následujících reakcích bez dalšího čištění.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 2,4 (s, 3H), 4,7 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,0 (s, 1H).

c) 5-brommethyl-3-methylthiofen-2-karbonitril:

g (167 mmol) trifenylfosfinu bylo přidáno do roztoku 24 g (152 mmol) 5-hydroxymethyl-3methylthiofen-2karbonitrilu v 180 ml tetrahydrofuranu. Potom byl přidán roztok 55 g (167 mmol) tetrabrommethanu v 100 ml tetrahydrofuranu. Směs byla míchána po dobu 90 minut při teplotě místnosti. Reakční směs byla koncentrována na rotační odparce s vývěvou a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent hexan:ethylacetát 8:2). Bylo získáno 34 g požadované sloučeniny, která stále obsahovala malé množství rozpouštědla.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-ds): δ = 2,4 (s, 3H), 5,0 (s, 2H), 7,3 (s, 1H).

d) 5-N, N-bis( terč. butoxykarbonyl )aminomethyl-3-methyl thi ofen-2karbonitri I:

5,0 g (167 mmol) hydridu sodného (80% suspenze v minerálním oleji) bylo přidáno po dávkách do roztoku 33,8 g (152 mmol) 5-brommethyl-3-methyíthiofen-2karbonitríl v 255 ml tetrahydrofuranu, ochlazeném na 0°C. Potom byl přidán po kapkách roztok 36,4 g (167 mmol) di-terc.butyl iminodikarboxylátu v 255 ml tetrahydrofuranu, tak aby teplota během tohoto procesu

-77 • 9·· 9 · · · · 9 9 9 · 9 · nestoupla nad 5°C. Směs se nechala ohřát na teplotu místnosti a byla míchána přes noc. Pro dokončení reakce byla směs zahřívána další 3 hodiny při 35°C a potom byla ponechána, aby ochladla na teplotu místnosti a pomalu bylo přidáno 510 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Rozpouštědlo bylo oddestilováno s vývěvou, zbytek byl extrahován opakovaně ethylacetátem a kombinované organické fáze byly promyty nasyceným roztokem chloridu sodného, vysušeny síranem hořečnatým a koncentrovány na rotační odparce. Bylo získáno 57,6 g olejovitého zbytku, který stále obsahoval di-terc.butyl iminodikarboxylát a byl využit v následující reakci jako surový produkt.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 1,45 (s, 18H), 2,35 (s, 3H), 4,85 (s, 2H), 7,05 (s, 1H).

e) 5-aminomethyl-3-methylthiofen-2-karbonitril hydrochlorid:

52,6 g 5-N, N-bis(terc.butoxykarbonyl)aminomethyl-3methylthiofen-2-karbonitrilu (surový produkt z bodu d), ne více než 139 mmol) bylo rozpuštěno v 950 ml ethylacetátu a roztok byl ochlazen na 0°C. Roztok byl nasycen plynným chlorovodíkem. Během tohoto procesu byla odseparována v průběhu 10 minut bílá sraženina. Směs byla. míchána po dobu dvou hodin při teplotě místnosti a po dobu jedné hodiny při 30°C, výsledná suspenze byl následně' koncentrována na rotační odparce, zbytek byl extrahován promícháním diethyléterem, rozpouštědlo bylo odfiltrováno a zbytek pevné látky byl vysušen při teplotě místnosti ve vakuu. Bylo získáno 24,7 g (94 %) požadované sloučeniny jako bílý prášek.

• 0 • 000 ·

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 2,4 (s, 3H), 4,25 (s, 2H), 7,3 (s, 1 H), 8,8-9,0 (bs, 3H).

¹³CNMR (DMSO-de): 15,0 (CH₃), 36,4 (CH₂), 104,8 (C-2), 113,8 (CN), 131,5 (C-4), 142,8 (C-5), 149,6 (C-3).

5-aminomethyl-3-chlorthiofen-2-karbonitril hydroehlorid

Tato sloučenina byla syntetizována stejným způsobem, jak bylo popsáno pro 5-aminomethyl-3-methylthiofen-2karbonitril, přičemž byl použitý 3-chlor-2-kyanothiofen připraven dehydratací 3-chlorthiofen-2-karboxamidu anhydridm kyseliny trifluoroctové.

5-Aminomethyl-4-methylthiofen-3-thiokarboxamid

a) Ethyl 2-amino-3-kyano-4-methy.lthiofen-5-karboxylát

Ethyl 2-amino-3-kyano-4-methylthiofen-5-karboxy lát byl syntetizován jak bylo popsáno v Organikum [Organic Chemistry), 19. vydání, Dt. Verlag der Wissenschaften, Leipzig, Heidelberg, Berlin, 1993, kapitola 6, str. 374375, přičemž bylo výchozí látkou 130 g (1,0 mol) ethylacetoacetátu, 66 g (1,0 mol) malononitrilu, 32 g (1,0 mol) síry a 80 g (0,92 mol) morfolinu.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de): δ = 1,25 (t, 3Hj, 2,3 (s,

3H), 4,2 (q, 2H), 7,9 (bs, 2H).

b) Ethyl 4-kyano-3-methylthiofen-2-karboxylát

Roztok 20,5 g (97,5 mmol) ethyl 2-amino-3-kyano-4methylthiofen-5-karboxylátu v 600 ml směsi 1:1 acetonitrilu a dimethylformamidu byl ochlazen na 5°C a

9 ···· ·· bylo přidáno po kapkách 15,7 g (146 mmol) terč.butyl nitritu, během tohoto procesu došlo k zvýšení teploty reakční směsi a prudkému vývoji plynu. Směs byla míchána po dobu sedm hodin při teplotě místnosti a koncentrována na rotační odparce ve vysokém vakuu, zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent dichlormethan). Bylo získáno 9,1 g (48%) požadované sloučeniny jako žlutý olej.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): o = 1,3 (t, 3H), 2,55 (s,

3H), 4,3 (q, 2H), 8,8 (s, 1H).

c) 5-hydroxymethyl-4-meíhylthiofen-3-karbonitril:

2,44 g (64 mmol) hydridu hlinitolithného bylo přidány po dávkách při 0°C do roztoku 25,1 g (129 mmol) ethyl 3kyano-4-methylthiofen-5-karboxylátu v 400 ml tetrahydrofuranu. Směs byla míchána po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, přebytek redukčního činidla byl odstraněn přidáním 0,5 N kyseliny chlorovodíkové a reakční směs byla koncentrována s vývěvou, zředěna vodou a extrahována třikrát ethylacetátem. Spojené organické fáze byly potom promyty roztokem 0,5 N kyseliny chlorovodíkové a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze byla vysušena síranem byl odfiltrován a rozpouštědlo vývěvou při teplotě místnosti.

Zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent dichlormethan/metanol 95:5). Bylo získáno 16,1 g (83%) požadované sloučeniny jako lehce žlutý olej.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 2,2 (s, 3H), 4,6 (d, 2H), 5,7 (m, 1H), 8,35 (s, 1H).

hořečnatým, desikant bylo oddestilováno s

-80 .·· 0

000

0 0 0 00 00 0»

0 0 0 0· 0·

d) 5-brommethyl-4-methylthiofen-3-karbonitril:

g (115 mmol) trifenylfosfinu bylo přidáno při 5°C do roztoku 16 g (104 mmol) 5-hydroxymethyl-4methylthiofen3-karbonitrilu v 300 ml tetrahydrofuranu. Potom byl přidán roztok 38 g (115 mmol) tetrabrommethanu v 100 ml tetrahydrofuranu. Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs byla koncentrována na rotační odparce s vývěvou a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent petroléterdichlormethan 1:1). Bylo získáno 17 g (76%) požadované sloučeniny jako žlutý olej.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 2,25 (s, 3H), 5,0 (s, 2H), 8,5 (s, 1H).

d) 5-N, N-bis( terč. butoxykarbonyl)aminomethyl-4-methylthiófen-3karbonitril:

3,5 g (103 mmol) hydridu sodného (bez oleje) bylo přidáno po dávkách do roztoku 17,2 g (79,5 mmol) 5brommethyl-4-methylthiofen-3-karbonitrilu v 250 ml tetrahydrofuranu, ochlazeného na 0°C. Potom byl přidán po kapkách roztok 22,5 g (103 mmol) di-terc.butyl iminodikarboxylátu v 100 ml tetrahydrofuranu, během tohoto procesu teplota nestoupla nad 5°C. Směs byla ponechána, aby se ohřála na teplotu místnosti a byla míchána po dobu 2 hodin. Pomalu bylo přidáno 400 ml roztoku nasyceného chloridu amonného. Rozpouštědlo bylo oddestilováno s vývěvou a zbytek byl zředěn trochou vody a extrahován třikrát ethylacetátem. Spojené organické fáze byly promyty nasyceným roztokem chloridu amonného a nasyceným roztokem

Ρ·

4« ·· • 9 ·

4 4 44 • « • s>

. Ο* »4 · • · 4

4444

4 4 4

4« 4 4

4 4 » «4 chloridu sodného, vysušeny síranem hořečnatým a koncentrovány na rotační odparce. Bylo získáno 28 g oleje, který stále obsahoval di-terc.butyl iminodikarboxylát a byl využit v následující reakci jako surový produkt.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 1,4 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 2,3 (s, 3Hj, 4,8 (s, 2H), 8,4 (s, 1H).

f) 5-N, N-bis(terc. butoxykarbonylj amino methy l-4-methylth i ofen-3thiokarboxamid

Surový produkt získaný v bodu e) (ne více než 79 mmol) byl rozpuštěn v 280 ml pyridinu a 140 ml triethylaminu a roztok byl nasycen sirovodíkem při teplotě místnosti. Původně žlutá barva roztoku se postupně změnila ra zelenou. Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Pro dokončení reakce se nechal směsí procházet sirovodík dalších 15 minut a míchání pokračovalo dvě hodiny při teplotě místnosti. Přebytek sirovodíku byl odstraněn s pomocí proudu dusíku v promývačce. Potom byla reakční směs koncentrována na rotační odparce a koncentrát by! převeden do ethylacetátu, promyt opakovaně 20% roztokem hydrogensíranu sodného, vysušen síranem hořečnatým a koncentrován na rotační odparce. Bylo získáno 27 g světle žluté pevné pěny, která byla využita v následujících reakcích bez dalšího čištění.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 1,4 (s, 18H), 2,15 (3,

3H), 4,8 (s, 2H), 7,5 (s, 1H), 9,3 (bs, 1H), 9,75 (bs, 1H) .

g) 5-aminomethyl-4-methylthiofen-3-thiokarboxamid hydrochlorid

-82 27 g 5-N, N-bis(terc.butoxykarbonyl)-aminomethyl-4methylthiofen-3-thiokarboxamidi; (surový produkt z bodu f), ne více než 70 mmol) bylo rozpuštěno v 400 ml ethylacetátu a roztok byl ochlazen na 0°C. Roztok byl nasycen plynným chlorovodíkem a během tohoto procesu se odseparovala v průběhu 10 minut bílá sraženina. Směs byla míchána po dobu dvou hodin při teplotě místnosti, sraženina byla odfiltrována a promyta ethylacetátem a pevný zbytek byl vysušen ve vakuu při teplotě místnosti. Bylo získáno 13,6 g (87%) požadované sloučeniny jako bílý prášek. EI-MS: M+= 186.

5-aminomethýl-4-chlorthiofen-3-thiokarboxamid

a) 5-formyl-4-chlorthiofen-3-karbonitril:

g (325 mmol) terč.butyl nitritu .bylo přidáno po kapkách při teplotě místnosti do roztoku 53,0 g (250 mmol) 2-amino-4-chlor-5-formylthiofen-3-karbónitrilu (syntéza této sloučeniny je popsána v patentu DB 3738910) v 600 ml 1:1 směsi acetonitrilu a dimethylformamidu, Během tohoto procesu teplota reakční směsi stoupla z 20°C na 37°C a nastal silný vývoj plynu. Směs byla ochlazena na 25°C a míchána po dobu 7 hodin při teplotě místnosti, černý roztok byl koncentrován na rotační odparce za vysokého vakua, zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent dichlormethan). Bylo získáno 29 g (68%) požadované sloučeniny jako žlutý olej.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de): δ = 9,1 (s, 1H), 10,0 (s,

1H).

b) 5-Hydroxymethyl-4-chlorthiofen-3-karbonitril:

6,3 g (166 mmol) borohydridu sodného bylo přidáno po dávkách při 5°C do roztoku 28,5 g ( 166 mmo! ) 5formyl-4-chlorthiofen-3-karbonitrilu v 400 ml absolutního metanolu. Teplota reakční směsi zvolna stoupala a barva se měnila na temnou červeň. Byl pozorován silný vývoj plynu. Po 10 minutách byla reakční směs koncentrována s vývěvou, převedena do 200 ml ethylacetátu, extrahována 200 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové a promyta dvakrát, pokaždé 250 ml vody a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým, desikant byl Odfiltrován a bylo rozpouštědlo oddestilováno s vývěvou při teplotě místnosti. Bylo získáno 22 g (76%) požadované sloučeniny jako temně červený olej, který byl využit v následujících reakcích bez‘dalšího čištění.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 4,65 (bs, 1H), 5,95 (t, 2H), 8,6 (s, 1H).

c) 5-brommethyl-4-chlorthiofen-3-.karbonitril:

36,1 g (137 mmol) trifenylfosfinu bylo přidáno při 5°C do roztoku 21,7 g (125 mmol) '5-hydroxymethyl-4chlorthiofen-3-karbonitrilu v 250 ml tetrahydrofuranu. Potom byl přidán roztok 45,6 g (137 mmol) tetrabrommethanu v 100 ml tetrahydrofuranu. Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Sraženina byla odfiltrována, filtrát byl koncentrován na rotační odparce s vývěvou a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent petroléter:dichlormethan 1:1). Bylo získáno 26,0 g (88%) požadované sloučeniny jako olej.

ý

-84 • 9 • ·» 9 <

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ= 4,95 (s, 2H), 8,8 (s, 1H).

d) 5-N, N-bis( terč. butoxy karbonyl jam i nomethyl-4-chl orthiofen-3karbonitril:

6,9 g (159 mmol) hydridu sodíku (bez obsahu oleje) bylo přidáno po dávkách do roztoku 25,0 g (106 mmol) 5brommethyl-4-chiorthiofen-3-karbonitrilu v 300 ml tetrahydrofuranu, ochlazeného na 0°C. Potom byl přidán po kapkách roztok 34,4 g (159 mmol) di-terc.butyliminodikarboxylátu v 100 ml tetrahydrofuranu, během tohoto procesu teplota nestoupla nad 5°C. Směs byla ponechána se ohřát na teplotu místnosti a byla míchána po dobu dvou hodin. Pak bylo pomalu přidáno 300 ml roztoku nasyceného chloridu amonného. Rozpouštědlo bylo oddestilováno s vývěvou a zbytek byl zředěn trochou vody a extrahován třikrát ethylacetátem. Kombinované organické fáze byly promyty nasyceným roztokem chloridu amonného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysušeny síranem hořečnatým a koncentrovány na rotační odparce. Bylo získáno 51,3 g oleje, který stále obsahoval di-terc.butyl iminodikarboxylát a zbytky rozpouštědla a byl využit v následující reakci jako surový produkt.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 1,4 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 4,8 (s, 2H), 8,65 (s, 1 H).

e) 5-N, N-bis (terč. butoxy karbony l)am i no methyl-4-methyl th i ofen-3thiokarboxamid

-85 • · « · · * .· » · · ·· ' • · · · 9 · · Φ Φ · Φ · *» ·

Trocha surového produktu získaného v bodu d) (39,4 g, ne více než 106 mmol) byla rozpuštěna v 400 ml pyridinu a 40 ml triethylaminu a roztok byl nasycen sirovodíkem • při teplotě místnosti. Původně žlutá barva roztoku se změnila na zelenou. Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Přebytek sirovodíku odstraněn pomocí proudu dusíku v promývačce. Reakční směs byla potom nalita do ledově chladného 20% roztoku hydrogensíranu sodného a extrahována třikrát ethylacetátem. Organická fáze byla potom promyta opakovaně 20% roztokem hydrogensíranu sodného, vysušena síranem hořečnatým a koncentrována na rotační odparce. Bylo získáno 49,0 g zbytku obsahujícího rozpouštědlo, který byl využit v následující reakci bez dalšího čištění.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-ds): δ = 1,4, 1,45 (s, 18H), 4,8 (s, 2H), 7,75 (s, TH), 9,4 (bs, 1H), 10,0 (bs, 1H).

f) 5-aminomethyl-4-chlorthiofen-3-thiokarboxamid hydrochlorid

38,0 g surového produktu z bodu e), ne více než 93 mmol, bylo rozpuštěno v 400 ml ethylacetátu a ochlazeno na 0°C. Roztok byl nasycen plynným chlorovodíkem, během tohoto procesu byla po 10 minutách odseparována bílá sraženina. Jelikož reakce stále nebyla ukončena, bylo přidáno 200 ml ethylacetátu a směs byla nasycena opět plynným chlorovodíkem a míchána přes noc při teplotě místnosti. Sraženina byla odfiltrována, promyta petroléterem a vysušena ve vakuu při teplotě místnosti. Bylo získáno 21,1 g požadované sloučeniny jako bílý prášek, který byl kontaminován chloridem amonným. EI-MS: M + = 206.

Ά.

-86 ··

5-aminomethyl-T-methyl-1 H-[1,2,4]-triazol-3-karboxamid

a) Ethyl aminothioxoacetát

Roztokem 29,1 g (294 mmol) ethyl kyanoformiátu a 0,4 g (0,57 ml, 5,1 mmol) diethylaminu v 20 ml benzenu se nechal procházet při 0°C sirovodík až do nasycení, během tohoto procesu roztok změnil barvu na oranžovou. Směs byla míchána přes víkend při teplotě místnosti, reakční směs byla ochlazena na 0°C a vzniklá sraženina (29,1 g) byla odfiltrována a promyta chladným benzenem. Matečný louh byl koncentrován a znovu ochlazen na 0°C. Směs byla odfiltrována, zbytek byl promyt petroléterem, bylo získáno 5,7 g požadované sloučeniny jako světlá nažloutlá pevná látka (Rf = 0,7, dichlormethan/methanol 9:1). Celkový výtěžek: 89%.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de): δ = 1,25 (t, J = 7 Hz, 3H), 4,2 (q, J = 7 Hz, 2H) 9,9 (bs, 1 Η, NH), 10,4 (bs, 1H, NH).

b) Ethyl methyloxamidrazonkarboxylát

Roztok 11,93 g (13,6 ml, 259 mmol) methylhydrazinu v 100 ml etanolu byl přidán při teplotě místnosti po kapkách do roztoku 34,5 g (259 mmol) ethyl aminothioxoacetátu v 400 ml etanolu, během tohoto procesu se teplota reakční směsi poněkud zvýšila. Směs byla míchána po dobu tří hodin při teplotě místnosti a koncentrována a zbytek byl využit v reakci c) bez dalšího čištění.

c) Ethyl amino[(2-terc.butoxykarbonylaminoacetyl)methyl]hydrazonoacetát

-87 • ··· . » » · · · β ··«· ···· ·· ·« ··

Aktivace Boc-Gly-OH a reakce s b):

37,7 g (51,7 ml, 373 mmol) triethylaminu bylo přidáno při teplotě místnosti do roztoku 54,46 g (311 mmol) Bocglycinu v 400 ml tetrahydrofuranu. Směs byla ochlazena na -5°C a pomalu po kapkách byl v průběhu 40 minut přidán roztok 40,47 g (35,5 ml, 311 mmol) ethyl chlorformiátu v 100 ml tetrahydrofuranu. Směs byla míchána po dobu 30 minut při -5°C; výsledná sraženina byla odfiltrována a promyta malým množstvím tetrahydrofuranu a filtrát se nechal rovnou reagovat roztokem z bodu b) (259 mmol) v 300 ml tetrahydrofuranu, který byl přidáván pomalu po kapkách při teplotě místnosti. Směs byla míchána přes noc a koncentrována do sucha na rotační odparce za sníženého tlaku a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (silikagel, dichlormethan/metanol 95:5, Rf = 0,26). Bylo získáno 15,7 g oleje, který byl převeden do diethyléteru a sraženina byla odfiltrována (8,5 g, 11%).

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ = 1,25 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 2,9 (s, 3H), 3,6 (d, J = 5 Hz, 2H), 4,3 (q, J = 7 H₂, 2H) 6,6 (t, J = 5 Hz 1 H), 7,3 (bs, 2H).

d) Ethyl 5-aminomethyl-1-methyl-1H-[1,2,4]-triazol-3-karboxylát

7,0 g (23,2 mmol) ethyl amino[(2-terc. butoxykarbonylaminoacetyl)methyl]hydrazonoacetátu bylo suspendováno v 30 ml xylenu a suspenze byla ponořena po dobu 10 minut do lázně se silikonovým olejem, která byla předem zahřívána na 180°C. Potom bylo rozpouštědlo oddestilováno přímo z reakční směsi a

• « zbytek byl míchán po dobu dalších 10 minut při 180°C. Zbytky rozpouštědla byly odstraněny při 50°C za vysokého vakua. Bylo získáno 6,8 g (> 95%) tmavého oleje, který byl využit v následující reakci bez dalšího čištění. Vzorek byl zfiltrován přes silikagel a analyzován NMR spektroskopií.

¹H NMR (270 MHz, DMS0-d₆): δ = 1,25 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 3,9 (s, 3H), 4,2-4,4 (m, 4H), 7,5 (t, J = 5 Hz, 1H).

e) 5-aminomethyl-1 -methyl-1 H-[1,2.4]-triazol-3-karboxamid

Plynný amoniak se nechal procházet po dobu 20 minut při -10°C roztokem 6,8 g (ne více než 23,2 mmol) ethyl 5aminomethyl-1 -methyl-1 H-[1.2.4]-triazol-3-karboxy látu v 200 ml etanolu. Míchání pokračovalo jednu hodinu při 0°C a přes noc při teplotě místnosti. Jelikož reakce stále nebyla ukončena, byla probublávání plynem opakováno ještě dvakrát (stejně, jak již bylo popsáno) a směs byla míchána přes noc při 0°C. Směs byla koncentrována na rotační odparce a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (dichlormethan + 5-10 % metanolu, Rf = 0,3 v soustavě dichlormethan/metanol 9:1). Bylo získáno 4,71 g jako bezbarvý olej.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-d₆): δ= 1,4 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 4,3 (d, J = 5 Hz, 3H), 7,4 (bs, 1H), 7,6 (bs, 1H), 7,65 (bs, J = 5 H₂, 1H).

f) 5-aminomethyl-1 -methyl-1 H-[1.2.4]-triazol-3-karboxam:d hydrochlorid

► ·» • ·

-89 ·· ·'·

Chlorovodík se nechal procházet při 5°C až do nasycení roztokem 4,7 g (ne více než 18,4 mmol) 5-aminomethyl1-methyl-1 H-[1,2,4]-triazol-3-karboxamidu v 600 ml ethylacetátu, během tohoto procesu vznikla bílá sraženina. Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a koncentrována na rotační odparce, byl přidán diethyléter, směs byla koncentrována a znovu převedena^: do diethyléteru a sraženina byla odfiltrována a vysušena. Bylo získáno 3,7 g bílé pevné látky, která stále obsahovala chlorid amonný.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de): δ = 3,95 (s,3H), 4,3 (bs, 2H), 7,6 (bs, 1 H), 7,75 (bs, 1H), 8,7-8,9 (m, 2H).

5-aminomethyl-3-kyanofuran hydrochlorid:

a) 5-N, N-bis (terč. butoxy karbonyl Jam i no methyl-3-kyanof uran

Roztok 20,5 g (0,11 mol) 5-brommethyl-3-kyanofuranu (Z. M. Pevzner, V. M. Ignatjev, Β. I. lonin, Russ, J. of Gen. Chem. 1994, 64, 2, 125-128) v 50 ml tetrahydrofuranu, ochlazený na 0°C, byl přidán s mícháním v průběhu 30 minut při 0°C do suspenze 4,8 g (0,12 mol) hydridu sodíku (60% disperze v minerálním oleji) v 30 ml tetrahydrofuranu. Následně byl po kapkách přidán roztok 26,2 g (121 mmol) di-terc.butyliminodikarboxylátu v 50 ml tetrahydrofuranu, během tohoto procesu teplota nepřesáhla 5°C. Směs byla míchána po dobu třech hodin při 5-10°C, pak byla ponechána, aby se ohřála na teplotu místnosti a byla míchána přes noc. Potom bylo pomalu přidáno 150 ml roztoku nasyceného chloridu amonného. Rozpouštědlo bylo oddestilováno s vývěvou, zbytek byl

- tJU - . ··· ti . · ti < · ti · · · • ti ti ti ;· · · '·' ti · «··· titi titi titi '♦* ·'· extrahován čtyřikrát s použitím pokaždé 60 ml ethylacetátu a kombinované organické fáze byly promyty dvakrát s použitím nasyceného roztoku chloridu sodného, vysušeny síranem hořečnatým a koncentrovány v rotační odparce. Po sušení po dobu tří hodin při teplotě místnosti ve vakuu (1 mm Hg) bylo získáno 33,2 g tmavého sirupu, který stále obsahoval diterc.butyliminodikarboxylát, a byl využit jako surový produkt v další reakci.

¹H NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 1,40, 1,45 (s, 18H), 4,70 (s, 2H), 6,70 (s, 1H), 8,6 (s, 1 H).

b) 5-aminomethyl-3-kyanofuran hydrochlorid

12,89 g 5-N,N-bis(terc.butoxykarbonyl)aminomethyl-3kyanofuranu (surový produkt z bodu a) bylo rozpuštěno v 80 ml ethylacetátu a ochlazeno na -10°C. Směs byla nasycena plynným chlorovodíkem a po 15 minutách byla odseparována bílá sraženina. Směs byla ponechána ohřát na teplotu místnosti a byla míchána po dobu dvou hodin, vzniklá suspenze byla následně koncentrována v rotační odparce, zbytek (7 g) byl extrahován mícháním s diethyléterem. Rozpouštědlo bylo odstraněno filtrací a pevný zbytek byl vysušen ve vakuu při teplotě místnosti. Bylo získáno 5 g (79%) požadované sloučeniny jako světle okrový prášek.

¹H NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 4,15 (bs, 2H), 7,0 (s, 1H), 8,6-8,9 (m, 4H).

5-am i nomethy 1-1 -methyl pyrol-2-karboni trii:

a) 5-kyano-1 -methylpyrol-2-karbaldehyd

1-methyIpyrol byl přeměněn na 2-kyano-1-methylpyrol reakcí chlorsulfonylisokyanátu a dimethylformamidu v acetonitrilu (viz např. C.E. Loader et al. Can. J. Chem. (1981),59,2673-6).

Do THF (100 ml) byl přidán v dusíkové atmosféře diisopropylamín (17,5 ml, 124,38 mmol). Po kapkách byl přidán při -78°C roztok N-butylIithia v hexanu (15%, 75,9 ml, 124,38 mmol). Směs byla následně'míchána pó dobu 45 minut při -20°C a pak znovu ochlazena na -78°C. Při uvedené teplotě byl přidán po kapkách roztok 1methylpyrol-2-karbonitrilu (12 g, 113,07 mmol) v THF (50 ml). Po míchání po dobu 45 minut při -78°C byl přidán po kapkách DMF (43,9 ml, 546,46 mmol) a směs byla míchána při této teplotě po dalších 2 hodin. Po přidání monohydrátu kyseliny citrónové (20,56 g) byla směs zahřívána na teplotu místnosti a byla přidána voda (112 ml). THF byl odstraněn v rotační odparce a vodná fáze byla nasycena chloridem sodným a extrahována diethyléterem (3 x 200 ml). Kombinované organické fáze byly promyty nasyceným roztokem chloridu sodného a vysušeny odstraněno vyčištěn síranem sodným. Rozpouštědlo bylo v rotační odparce a surový produkt byl mžikovou chromatografií (silikagel, dichlormethan). Výtěžek: 8,25 g (54%).

¹H NMR (CDCI₃) δ = 4,1 (s, 3H), 6,8 (d, 1H), 6,9 (d, 1H), 9,7 (s, 1H).

b) 5-Hydroxymethyl-1 -methylpyrol-2-karbonitril

-92 odstraněno vyčištěn

Produkt získaný podle bodu a) (8,2 g, 61,1 mmol) byl rozpuštěn v etanolu (200 ml) a při -10°C byl přidán borohydrid sodný (2,31 g, 61,13 mmol). Po míchání po dobu 1,5 hodin při 0-5°C bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce a do zbytku byla přidána ledová voda a 20% roztok hydrogensíranu sodného. Vodná fáze byla extrahována ethylacetátem. Kombinované organické fáze byly promyty nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a vodou až do dosažení neutrální reakce a pak byly vysušeny síranem sodným. Rozpouštědlo bylo v rotační odparce a surový produkt byl mžikovou chromatografií (silikagel, dichlormethan/metanol = 97,5/2,5). Výtěžek: 7,6 g (91%).

1H NMR (CDCl₃) δ = 1,9 (t, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,6 (d, 2H), 6,1 (d, 1H), 6,7 (d, 1H).

c) 5-azidomethyl-1-methyIpyrol-2-karbonitrii

Produkt získaný podle bodu b) (7,5 g, 55,08 mmol) byl rozpuštěn v DMF (220 ml) a při 0°C byl přidán trifenylfosfin (43,34 g, 165,25 mmol). Po míchání po dobu 5 minut při uvedené teplotě by! přidán tetrabrommethan (54,8 g, 165,25 mmol). Směs byla následně míchána po dobu 30 minut při 0°C a 1,5 hodiny při teplotě místnosti. Po ochlazení na teplotu 0°C bylo přidáno azid sodíku (4,37 g, 67,21 mmol). Směs byla následně míchána po dobu 4,5 hodin při teplotě místnosti. Po kapkách při 0°C byl přidán nasycený roztok chloridu sodného a vsázka byla zředěna ethylacetátem. Organická fáze byla odstraněna a vodná fáze byla extrahována diethyl éterem. Kombinované organické fáze byly promyty vodou a vysušeny síranem sodným. Rozpouštědlo bylo

odstraněno v rotační odparce a surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií (silikagel, ethyl acetát/hexan = 1/20). Výtěžek: 5,6 g (63%).

1H NMR (CDCls) δ = 3,75 (s, 3H), 4,35 (s, 2H), 6,2 (d, 1H), 6,7 (d, 1H).

d) 5-aminomethy 1-1 -methylpyrol-2-karbonitril

Produkt získaný podle bodu c) (4,71 g, 29,25 mmol) byl rozpuštěn v metanolu (100 ml) a bylo přidáno paladium na uhlí (10%, 1 g). Směs byla následně hydrogenována vodíkem za tlaku 100 kPa po dobu 4 hodin. Katalyzátor byl odstraněn filtrací přes Celíte® a filtrát byl odpařen v rotační odparce. Zbytek byl extrahován promícháním s dichlormethanem/diethyléter=1 /1. Produkt byl odfiltrován s odsáváním, vysušen při 35°C ve vakuové sušárně. Výtěžek: 2,7 g (68%).

1H NMR (CDCls) δ = 3,75 (s, 3H), 3,85 (s, 2H), 6,05 (d, 1H), 6,7 (d, 1H).

4-Aminomethyl-1 -methylpyrol-2-karbonitril:

a) 5-kyano-1 -methylpyrol-3-karbaIdehyd

Chlorid hlinitý (24,24 g, 180,86 mmol) byl rozpuštěn v nitromethan/dichlormethanu (1/1, 320 ml), roztok byl ochlazen na -20°C a byl přidán 1 -methylpyrol-2karbonitril (8 g, 75,36 mmol). Potom byl přidáň po kapkách α,α-dichlordimethyléter (10,4 g, 90,43 mmol) rozpuštěný v dichlormethanu (42 ml). Po míchání po dobu 4 h při O°C byla směs nalita na led (200 g). Vodná fáze byla extrahována diethyléterem. Kombinované organické * *

-94 fáze byly promývány nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného až dosáhly neutrální reakce. Po vysušení síranem sodným bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Surový produkt byl využit v následující reakci bez dalšího čištění. Výtěžek: 9,2 g (91%).

1H NMR (CDCb) δ = 3,8 (s,3H); 7,2 (s,1H); 7,4 (s, 1H); 9,85 (s,1H).

b) Analogicky k syntéze 5-aminomethyl-1 -methyipyrol-2karbonitrilu byl vyroben 4-aminomethyl-1 -methylpyrol-2karbonitril s využitím 5-kyano-1 -methylpyrol-3karbaldehydu jako výchozí látky. 4-azidomethyl-1 methylpyrol-2-karbonitril byl však výhodně redukován v Staudingerově reakci (viz S. Nagarajan et al. J. Org. Chem. 1987, 52, 5044-6).

1H NMR (DMSO-de) δ = 3,77 (s, 3H), 3,84 (sbr, 2H), 7,00 (sbr, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 8,05 (sbr, 2H).

5-am i nomethy 1-1 -methyl pyrol-3-karbonitril:

a) 4-kyano-1-methylpyrol-2-karbaldehyd

1-methylpyrol-2-karbaldehyd (10 g, 91,6 mmol) byl rozpuštěn v acetonitrilu (100 ml) a ochlazen na -45°C. V průběhu 40 minut byl přidán po kapkách chlorsulfonyl isokyanát (38,9 g, 274,9 mmol) v acetonitrilu (40 ml). Směs byla následně míchána po dobu 12 hodin při teplotě místnosti. Po přidání dimethylformamidu (35 ml) po kapkách byla směs zahřívána na 50°C po dobu 1 hodiny. Po ochlazení na teplotu místnosti byla reakční

-95 směs nalita na led (200 ml) a 2N roztok hydroxidu sodného (286 ml). Vzniklá sraženina byla odfiltrována s odsáváním. Filtrát byl extrahován diethyléterem. Spojené éterové fáze byly promývány až do neutrální reakce zředěným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a vysušeny síranem sodným. Rozpouštědlo bylo oddestilováno ve vývěvě a zbytek byl spojen s dříve získanou sraženinou. Rekrystalizací petroléteru byl získán 4-kyano-1 -methylpyrol-2-karbaldehyd (4,3 g) (viz například C.E. Loader et al. Can. J. Chem. (1981), 59, 2673-6)

1-H NMR (CDCIs) δ = 4,0 (s,3H); 7,2 (s,1 H); 7,3 (s, 1H); 9,6 (s,1H).

13-C NMR (CDCb) δ = 37,4; 94,1; 114,7; 125,8; 132,2; 135,8; 179,7.

b) Analogicky k syntéze 5-aminómethyl-1 -methylpyrol-2karbonitrilu byl připraven 5-aminomethyl-1 -methylpyrol-3karbonitril s použitím 4-kyano-1-methylpyrol-2karbaldehydu jako výchozí látky.

1H NMR (DMSO-ds) δ = 3,6 (s, 3H), 3,8 (s, 2H), 4,2 (sbr, 2H), 6,4 (s, 1 H), 7,6 (s, 1 H).

5-aminomethyl-3-kyano-1,2.4-oxadiazol hydroehlorid:

a) N-Boc-5-aminomethyl-3-kyano-1,2.4-oxadiazol

Ethyl N-Boc-5-amínomethyl-1,2.4-oxadiazol-2-karboxylát (S. Borg et al. J. Org. Chem. 1995, 60, 3112-20) byl rozpuštěn v metanolu (50 ml). Roztokem se nechal procházet amoniak při teplotě od -10°C do teploty místnosti až byla reakce ukončena. Rozpouštědlo bylo

-96 • φ · · · φ · φφφφ φφφ φ φ φφφ φ φ φ φ odstraněno v rotační odparce. Výsledný surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu (70 ml) a při -5°C byl přidán diisopropylethylamin (2,9 mi, 16,55 mmol). Anhydrid kyseliny trifluoroctové (1,06 ml, 7,61 mmol), rozpuštěný v dichlormethanu (10 ml) byl následně přidán po kapkách. Po míchání po dobu 1,5 hodin při 0°Cbyla vsázka zředěna s dichlormethanem, promyta 2x nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného , 2x 5% roztokem kyseliny citrónové a 1x nasyceným roztokem chloridu sodného a potom vysušena síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce a surový produkt byl vyčištěn chromatografií (silikagel, dichlormethan:metanol = 97,5:2,5). Výtěžek: 1,2 g (80%).

b) 5-Aminomethyl-3-kyano-1,2,4-oxadiazol hydrochlorid

Produkt získaný podle bodu a) (0,9 g, 4,0 mmol) byl rozpuštěn v dichlormethanu (45 ml) a při pokojové teplotě byla přidána 4M kyselině chlorovodíkové v dioxanu (3,9 ml, 15,61 mmol). Po míchání po dobu 16 hodin při pokojové teplotě bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Výtěžek: 645 mg (100%).

1-H NMR (DMSO-de) δ = 4,6 (s, 2H), 9,2 (s, 3H).

-methyl-5-aminomethylpyrazol-3-karboxamid:

a) Methyl 1 -methyl-5-amidopyrazol-3-karboxylát

Chlorid kyseliny 1 -methyl-3-methoxykarbonylpyrazol-5karboxylové (připravené z 3,7 g, 20,09 mmol, 1-methyl-3methoxykarbonyl-3-karboxylové kyseliny, J. Org. Chem.

φ · • * • ·

-97 • · • · · ·

1989, 54, 428) byl rozpuštěn v toluenu a roztok byl ochlazen na -10°C. Potom se nechal procházet amoniak při teplotách od -10°C do 0°C až byla reakce skončena. Rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce. Zbytek byl převeden do etanolu. Po míchání po dobu 15 minut byl etanol odstraněn v rotační odparce a zbytek byl rozpuštěn v horné vodě a vysrážen ochlazením roztoku na 0°C. Sraženina byla odfiltrována s odsáváním, promyta acetonem a vysušena ve vakuu při 45°C. Výtěžek: 1,5 g (41%).

b) Methyl 1-methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxylát

Produkt získaný podle bodu a) (1,5 g, 8,19 mmol) byl převeden do dichlormethanu (20 ml). Při -10°C byl přidán diisopropylethyl- amin (3,85 mi, 22,11 mmol). V průběhu 45. minut byl při této teplotě po kapkách přidán roztok anhydridu kyseliny trifluoroctové (1,3 ml, 9,44 mmol) v dichlormethanu (5 ml). Míchání poté pokračovalo po dobu 1 hodiny při 0°C. Vsázka byla zředěna dichlormethanem a promyta 2x nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 2x 5% roztokem kyseliny citrónové a 1x nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Výtěžek: 1,35 g (100%).

c) 1 -methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxamid

Produkt získaný podle bodu b) (1,35 g, 8,19 mmol) byl přidán do metanolu (50 ml) a ochlazen na -10°C. V průběhu 8 hodin se pak nechal procházet amoniak. Po míchání po dobu 12 hodin při teplotě- místnosti reakce

-98 • ··» • · • · · · · • · · · • ····· · · ··· · · · • 0 · · · · ···· >·»· ·· ·· ·· ·· ·· prekurzoru skončila. Vysrážený produkt byl odfiltrován s odsáváním, promyt studeným metanolem a vysušen ve vakuu. Výtěžek: 1,22 g (100%).

1-H NMR (DMSO-de) δ = 4,0 (s, 3H), 7,4 (s, 1H), 7,5 (s,

H), 7,8 (s, 1 H).

d) 1 -methyl-5-aminomethylpyrazol-3-karboxamid

Produkt získaný podle bodu e) (0,4 g, 2,66 mmol) byl rozpuštěn v kyselině octové (30 ml) a bylo přidáno 10% pal ad i a na uhlí (78 mg). Směs byla následně hydrogenována při teplotě místnosti za atmosférického tlaku až do skončení reakce. Katalyzátor byl odstraněn filtrací přes Celíte® a rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce. Výtěžek: 0,4 g (100%), FAB-MS (M + H + ): 155.

-methyl-3-aminomethyl-pyrazol-5-karboxamid

a) Methyl 1-methyl-3-amidopyrazol-5-karboxylát

1-Methyl-5-methoxykarbonylpyrazol-3-karbonyl chlorid (syntetizovaný z 4,17 g, 22,6 mmol, 1-methyl-5methoxykarbonyl-3-karboxylové kyseliny, J. Org. Chem. 1989, 54, 428) byl rozpuštěn v toluenu a roztok byl ochlazen na -10°C. Při teplotách od -10°C do O°C se potom nechal procházet amoniak až do ukončení reakce. Rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce. Zbytek byl převeden do etanolu. Směs byla míchána po dobu 15 minut, etanol byl odstraněn v rotační odparce a zbytek byl rozpuštěn v horké vodě a vysrážen ochlazením na 0°C. Sraženina byla odfiltrována s odsáváním, promyta

-99 • · ·<

acetonem a vysušena ve vakuu při 45°C. Výtěžek: 3,36 g (18,4 mmol, 81%).

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de) δ = 3,85 (s, 3H),‘4,15 (s, 3H), 7,20 (s, 1 H), 7,4 (sbr, 1 H), 7,7 (sbr, 1H).

b) Methyl 1-methyl-3-kyanopyrazol-5-karboxylát

Produkt získaný v a) (3,36 g, 18,4 mmol) se nechal reagovat postupem podobným dříve popsané syntéze methyl 1-methyl-kyanopyrazol-3-karboxylátu. Výtěžek: 2,59 g (15,7 mmol, 85%).

¹H NMR (250 MHz, DMSO-de) δ = 3,90 (s, 3H), 4,15 (s, 3H), 7,60 (s, 1H).

c) 1 -methyl-3-kyanopyrazol-5-karboxamid

Produkt získaný v b) (2,56 g, 15,5 mmol) se nechal reagovat postupem podobným dříve popsané syntéze 1methyl-5-kyanopyrazol-3-karboxamidu. Výtěžek: 2,3 g (15,3 mmol, 99%).

¹H NMR (250 MHz, DMSO-de) δ = 4,15 (s, 3H), 7,45 (s, 1H), 7,70 (sbr, 1H), 8,15 (sbr, 1H).

d) 1 -methyl-3-aminomethylpyrazol-5-karboxamid x HCI

Produkt získaný v c) (1,0 g, 6,7 mmol) se nechal reagovat postupem podobným dříve popsané syntéze 1methyl-5-aminomethylpyrazol-3-karboxamid. Výtěžek: 1,5 g (5,6 mmol, 83%.

¹H NMR (270 MHz, DMSO-de) δ = 4,00 (q, J = 6,5 H₂, 2H), 4,10 (s, 3H), 6,90 (s, 1H), 7,60 (sbr, 1H), 8,05 (sbr, 1 H), 8,25 (sbr, 3H).

Produkt může být převeden na odpovídající hydrochlorid opakovaným působením HCI v 1,4-dioxanu a následným koncentrováním směsi.

Příklad 1: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylp roly l-[2-(4-amidino)thiazolyl methyl jam i d hydrochlorid

a) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-CS.NH₂)thiaz

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH (2,0 g, 4,14 mmol), 2-H₂N-CH₂-thiaz-4-CSNH₂ (1,0 g, 4,56 mmol) a diisopropylethylamin (5,5 ml, 32,53 mmol) byly rozpuštěny v 25 ml methylenchloridu, roztok byl ochlazen na 0°C a bylo přidáno po kapkách 4,8 ml (6,21 mmol) 50% roztoku anhydridů kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu. Reakční směs byla míchána po dobu 1 hodiny při 0°C a po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti a následně koncentrována ve vakuu. Zbytek byl převeden do vody, směs byla extrahována opakovaně éterem a organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a koncentrována ve vakuu. Z důvodu přítomnosti nečistot byl produkt vyčištěn chromatografií na silikagelu. Vyčištěné frakce byly krystalizovány z éteru. Bylo získáno celkem 1,9 g požadovaného produktu.

b) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4C(SCH3)NH)-thiaz hydrojodid:

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4CSNH₂)-thiaz (1,7 g, 2,67 mmol) společně s 3,7 ml methyljodidu v 30 ml methylenchloridu byly míchány

-101 -

'· Λ ·· přes noc při teplotě místnosti, následně koncentrovány ve vakuu za mírných podmínek a využity v následné reakci ve formě surového produktu (2,08 g, max 2,67 mmmol).

c) N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-C(NH₂)NH)thiaz hydroacetát:

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4C(SCH₃)NH)thiaz hydrojodid (2,08 g, max 2,67 mmol) byl rozpuštěn v 20 ml acetonitrilu, bylo přidáno 0,6 g (8,01 mmol) amoniumacetátu a směs byla míchána po dobu 1,5 hodin při 40-50°C. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu v rotační odparce a zbytek byl převeden do methylenchloridu, nerozpustný přebytek amoniumacetátu byl odstraněn filtrací, roztok methylenchloridu byl koncentrován, zbytek byl převeden do éteru a požadovaný produkt byl vysrážen n-hexanem jako amorfní pevná látka. Surový produkt (2,1 g) byl rozpuštěn v 20 ml metanolu a převeden na odpovídající acetát pomocí acetátového iontoměniče (3,7 g, Fluka, >Product No. 0Q4Q2).

c) HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz d i hydro chlorid

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4C(NH₂)NH)-thiaz x CH₃COOH (2,0 g, max 2,67 mmol) byly zahřívány po dobu 4 hodin při 40-50°C ve směsi 10 ml dioxanu a 20 ml 5N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, směs byla potom opakovaně extrahována methylenchloridem a vodná fáze byla mírně koncentrována ve vakuu a potom vysušena vymražením.

-102• · · · · · ·*·· ···· · · · · · · '· · ··

Bylo získáno 1,4 g HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NHCH₂-2-(4am)-thiaz dihydrochloridu jako bílá amorfní pevná látka. FAB-MS (M + H+): 465

Příklad 2: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroacetát:

a) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-4-(2-CN)-thiof

S výchozími látkami N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-ChaPro-OH (6,35 g, 13,17 mmol) a 4-H₂N-CH₂-thiof-2-CN (2,3 g, 13,17 mmol) byla provedena kopulace obdobně příkladu 1, čímž byl získán N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)Cha-Pro-NH-CH₂-4-(2-CN)-thiof. Po čištění chromatografií bylo získáno 6,95 g požadovaného produktu.

b) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH,CH₂-4-(2-CSNH₂)thiof

N-(t-Bu0₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-4-(2-CN)thiof (6,95 g, 11,53 mmol) byl rozpuštěn v 40 m! pyridinu a 7 ml triethylaminu, roztok byl nasycen sirovodíkem při 0-5°C (zelený roztok) a ponechán stát při teplotě místnosti přes víkend. Po zakoncentrování ve vakuu při 35°C/35 mbar byl žlutý olejovitý zbytek převeden do 200 ml éteru a promyt čtyřikrát pokaždé s 20 ml 20% roztoku hydrogensíranu sodného, dvakrát pokaždé s 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml vody a organická fáze byla vysušena síranem sodným a koncentrována ve vakuu. Bylo získáno 6,74 g jako žlutá pevná pěna.

• · · 4 · • ·

-103-

c) N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(P)-Cha-Pro-NH-CH₂-4-(2-C(SCH₃)NH)thiof hydrojodid

Surový produkt N-(t-BuO₂C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-ProNHCH₂-4-(2-CSNH₂)-thiof (6,74 g, 10,58 mmol) byl přidán do 65 ml methylenchloridu, pak bylo přidáno 9,01 g (4,0 ml, 63,5 mmol) methyljodidu a směs byla nechána stát přes noc při teplotě místnosti. Potom byla koncentrována ve vakuu za mírných podmínek, vzniklo 8,36 g žluté pevné pěny.

d) N-(t-BuO2C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-C(NH2)NH)thiof hydrojodid

Surový produkt N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NHCH₂-4-(2-C(SCH₃)NH)-thiof hydrojodid (8,36 g, max 10,58 mmol) společně s 16,3 g (21,16 mmol) 10% roztok . amoniumacetátu v metanolu byl míchán přes noc při teplotě místnosti. Jelikož prekursor zcela nezreagoval, bylo přidáno dalších 1,63g 10% roztoku amoniumacetátu a směs byla opět míchána přes noc. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu v rotační odparce byl zbytek převeden do methylenchloridu, nerozpuštěný přebytek amoniumacetátu byl odstraněn filtrací a kapalina byla znovu koncentrována ve vakuu, vzniklo 7,12 g požadovaného produktu jako žlutá pevná pěna.

e) HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiof hydroacetát

Surový produkt N-(t-BuO₂C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NHCH₂-4-(2-C(NH₂)NH)-thiof hydrojodid, získaný • · • ♦·*

-104· · · · « • · e · • ···«.'· _ • ’· · · · · · ··* ···· ·· ·· ·· ·· ·· v předchozím experimentu byl rozpuštěn v 100 ml methylenchloridu, bylo přidáno 24,5 ml éterického roztoku kyseliny chlorovodíkové (přibližně. 5 N) a směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Výsledná suspenze byla koncentrována ve vakuu a společně destilována dvakrát methylenchloridem a zbytek byl převeden na acetátovou sůl pomocí acetátového iontoměniče (Fluka, Product No. 00402), přičemž bylo získáno 4,92 g sloučeniny. Z toho bylo 2,5 g vyčištěno pomocí MPLC (RP-18, acetonitril/voda) a frakce byly vysušeny vymražením. Bylo získáno 1,23 g cílové látky jako amorfní bílá pevná látka.

FAB-MS ( M + H + ): 464

Příklad 3:

N-(hydroxy karbony I methy len )-(D)-cyklohexylalanylpipekol i nová kyselina [5-(2-amidino)thienylmethy!]amid hydroacetát:

a) H-Pic-NH-CH₂-5-(2-CN)-thiof

Boc-Pic-OH (10,1 g, 44,05 mmol) a 5-H₂N-CH₂-thiof-2-CN hydrochlorid (8,54 g, 48,88 mmol) byly rozpuštěny v dichlormethanu (150 ml) a ethyl diisopropylaminu (53,2 ml, 311,08 mmol) a při 0°C byl přidán 50% roztok anhydridu kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu (46 ml, 217 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 1 hodiny při 0°C a 1 hodinu při teplotě místnosti, pak byla zředěna s dichlormethanem a promyta 20% roztokem hydrogensíranu sodného (4x), roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x) a nasyceným roztokem chloridu sodného (1x). Po vysušení síranem sodným a odstranění desikantu filtrací bylo rozpouštědlo

-1 05 • · · · ·« ·· ·· ·· • · · · · · · «.···♦ • · · · · «·«. · · · · ··· · · · · ··· * · « • · · · · · ···· ···· ·· «· ·« ·«oddestilováno pod vývěvou. Pro odstranění Boc skupiny se na zbytek (18,41 g) působilo 200 ml isopropanolu a 50 ml 6,8 N roztoku hydrochloridu kyseliny isopropanolové a směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Směs byla potom odpařena do sucha a společně destilována dvakrát s dichlormethanem a zbytek byl extrahován promícháním éterem. Bylo získáno 12,7 g požadovaného produktu jako světle hnědý prášek.

b) HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NH-CH₂-5-(2-am)-thiof hydroacetát

Tato sloučenina byla připravena kopulací dvou srukturních bloků N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-OH a H-Pic-N H-CH₂-5-(2-CN)-thiof analogicky příkladu ,2a). Reakce, kterou byl získán HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pic-NHCH₂-5-(2-am)-thiof hydroacetát jako konečný· produkt, byla vedena analogicky, jak je uvedeno v příkladu 2b) až

d), FAB-MS (M + H+): 478

Příklad 4: N-(hyd roxy karbonyl methy len)-(D)-cyki ohexylglycylprolyl-[2-(4-amidino)thienylmethyl]amid hydrochlorid

a) HOOC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thiof d i hydrochlorid

Tato sloučenina byla připravena v několika krocích analogicky příkladům 2 a 3 s Boc-Pyr-OH, 4-H₂N-CH₂thiof-2-CN x HCI a N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-OH jako výchozími látkami.

b) HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-4-(2-am)-thiof dihydrochlorid

-1061,1 g (2,11 mmol) HOOC-CH₂-(D)-Chg-Pyr-NH-CH₂-4-(2am)thiof dihydrochlorid bylo rozpuštěno ve směsi 30 ml vody a 10 ml ledové kyseliny octové, bylo přidáno 0,5 g 10% paladia na aktivním uhlí a směs byla hydrogenováno po 8 hodin při teplotě místnosti za poněkud zvýšeného tlaku. Po výměně katalyzátoru pokračovala hydrogenace 8 hodin, pak byl katalyzátor odfiltrován s odsáváním, směs byla filtrována přes Celíte® a vodno-organická fáze byla následně vysušena vymražením. Bylo získáno 0,86 g požadovaného produktu jako bílá amorfní pevná látka.

FAB-MS (M + H + ): 450

Jako alternativa k popsanému postupu může být využit Boc-prolin namísto Boc-(L)-3,4-dehydroprolinu, což znamená, že může být vynechán hydrogenační krok.

Příklad 5: N-(hydroxy kar bony I methyl en)-(D)-cy klohexylglycylprolyl-[2-(4-amid i no)thiazolyl methyl] amid

Tato sloučenina může být připravena analogicky příkladu 1 s N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-OH a 2-H₂NCH₂-thiaz-4-CSNH₂ jako výchozími látkami.

Příklad 6: N-(hydroxykarbonyÍmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[4-(2-amidino)-thienylmethyl]amid:

Tato sloučenina může být připravena analogicky příkladu 2 s N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH a 4-H₂Nfc ·

-107• fcfcfc

CH2-thiof-2-CN jako výchozími látkami nebo analogicky příkladu 4 hydrogenací HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thiof.

Příklad 7: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(2-amidino-3,4-di methyl )thienylmethyl]amid:

S požitím sloučenin 5-H2N-CH2-(3,4-Me₂)-thiof-2CONH2 a N-(t-Bu02C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH jako výchozích látek může být uvedená sloučenina přeměněna analogicky příkladu 2a) na sloučeninu N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-ProNH-CH2-5-(2-CONH₂-3,4-Me2)thiof. Po dehydrataci amidu anhydridem kyseliny trifluoroctové a dodání nitrilové funkční skupiny pomocí diisopropylethylaminu v methylenchloridu, je možno amidinovou funkční skupinu analogicky příkladu 2 a potom odstranit ochranné skupiny.

Příklad 8a: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cykloheptylglycyl prolyl-[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroacetát:

Příklad 8 b: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(L)-cykloheptylglycyl prolyl-[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroacetát

S použitím sloučenin 4-H₂N-CH2-thiof-2-CN, Boc-PyrOH a N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D,L)-Cheg-OH jako výchozích látek, mohou být požadované sloučeniny připraveny analogicky příkladu 3, hydrogenovány v posledním kroku analogicky příkladu 4 a potom separovány pomocí MPLC (RP 18, acetonitril/voda). Pokud je v syntéze využita kromě sloučeniny Boc-Pyr-aH také Boc-Pro-OH, je možné hydrogenační krok vynechat.

• · a · · a

-108• ·

Příklad 9a: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklopentylglycyl prolyl-[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroacetát:

Pr íklad 9 b: N-( hydroxy karbonyl methy len)-(L)-cyklopentylglycyl prolyl-[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroacetát

S použitím sloučenin 4-H₂N-CH₂-thiof-2-CN, Boc-PyrOH a N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D,L)-Cpg-OH jako výchozích látek mohou být požadované sloučeniny připraveny analogicky příkladu 3, hydrogenovány v posledním kroku analogicky příkladu 4 a potom separovány pomocí MPLC (RP 18, acetonitril/voda). Pokud je v syntéze využita kromě sloučeniny Boc-Pyr-aH také Boc-ProOH, je možné hydrogenační krok vynechat

Příklad 10: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexy lalanylprolyl-[4-(2-amidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být připravena analogicky příkladu 1 se N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH a 4-H₂NCH₂-thiaz-2-CSNH₂ jako výchozími látkami.

Příklad 11: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[4-(2-amidi no)thiazolylm ethyl jamid

Tato sloučenina může být připravena analogicky příkladu 1 se N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-0H a 4-H₂NCH₂-thiaz-2-CSNH₂ jako výchozími látkami.

Příklad 12: N-(hydroxy karbonýl methyl en)-(D)-cykl ohexylalanylprolyl 5-(3-amidino)isoxazolylmethyl]amid:

-109• · • · · ·

S použitím sloučenin N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-ChaPro-OH a 5-H₂N-CH₂-isox-3-CONH₂ jako výchozích látek, může být uvedená sloučenina převedena analogicky příkladu 2a) na N(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(3-CONH₂)-isox. Po dehydrataci amidu za vzniku nitrilové funkční skupiny s použitím anhydridu kyseliny, trifluoroctové a diisopropylethylamin v methylenchloridu, může být Vytvořena amidinová funční skupina analogicky příkladu 20 reakcí s amoniakem a acetylcysteinem a následným odstraněním chránících skupin.

Příklad 13: N-[5-(3-am idino)thieny] methy l]-1 -[N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycyl]azetidin-2-karboxamid

a) N-[5-(3-kyano)thienylmethyl]-1 -[ N-t-butoxykar bonyl )-(D)-cyklohexylglycyl]azetidin-2-karboxamid

5.9 g (45,8 mmol) diisopropylethylaminu a 11,5 ml (14,9 mmol) 50% roztoku anhydridu kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu bylo přidáno po kapkách při -5°C do roztoku

3.9 g (11,5 mmol) 1 -[N-(t-butoxykarbonyl)-(D)cyklohexylglycyl]azetidin-2-kárboxylové kyseliny (WO 9429336) a 2 g (11,5 mmol) 5-aminom ethyl-3kyanothiofen hydrochloridu v 40 ml methylenchloridu. Míchání pokračovalo po dobu 2 hodin, během tohoto procesu teplota přesáhla 10°C. Organická fáze byla promyta vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a 5% roztokem kyseliny citrónové, vysušena síranem sodným a odpařena do sucha. Čištění zbytku kolonovou chromatografií (silikagel, eluent: ethylacetát) poskytlo

4,5 g (85% teoretického výtěžku) bílého, amorfního prášku,

-110FAB-MS: 461 (M + H + ).

b) N-[5-(3-kyano)thienyl methy 1)-1 -[N-(t-butoxykarbonylmethylen)(D)-cyklohexylglycyl]azetidin-2-karboxamid

4,5 g (3,8 mmol) výše uvedené sloučeniny bylo rozpuštěno v 70 ml isopropanolu, bylo přidáno 12,3 ml 4N kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a směs byla nechána stát přes noc při teplotě místnosti. Po oddestilování rozpouštědla byl zbytek ₍ rozpuštěn v methylenchloridu a směs byla extrahována 3x vodou. Spojené vodné extrakty byly převedeny do alkalické oblasti roztokem 1N hydroxidu sodného, oddělená olejovitá báze byla 3x extrahována methylenchloridem a rozpouštědlo byl potom oddestilováno. Zůstalo 2,9 g (8 mmol) oleje. Ten byl rozpuštěn v 50 ml methylenchloridu a 10 ml acetonitrilu a směs byla po přidání 2,1 g (16 mmol) diisopropylethylamin a 1,5 g (7,6 mmol) t-butyl brom-acetátu nechána stát po dobu 24 hodin při teplotě místnosti.

Organická fáze byla promyta pokaždé 2x 5% roztokem kyseliny citrónové, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a vysušena síranem sodným a pak bylo rozpouštědlo oddestilováno. Bylo získáno 3,3 g (92% teoretického výtěžku) světlého nažloutlého oleje.

FAB-MS: 475 (M + H + ).

c) N-[5-(3-amidino)thienylmethyl]-1 -[N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycyl]azetidin-2-karboxamid

Uvedený produkt byl převeden na amidin analogicky příkladu 2. Výsledný surový amidin obsahoval podstatné

-111množství sekundárních produktů a musel být vyčištěn kolonovou chromatografií (silikagel, eluent: methylenchlorid:metanol:kyselina octová = 24:6:1,5).

Bylo izolováno 0,9 g bílého, amorfního prášku. Ochranné Boc skupiny a t-butyl esterová skupina byly odstraněny tak, že se prášek nechl stát po dobu 12 hodin v 3N kyseliny chlorovodíkové. Po konečném odstranění kyseliny chlorovodíkové distilací s přidáváním toluenu byl hydrochloridový zbytek převeden na betaine chromatografií v silikagelové koloně metanol/25% amoniak (50/2,5) jako získáno 0,45 g bílého amorfního prášku, FAB-MS: 463 (M + H + ).

se soustavou eluentem. Bylo

Příklad 14: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl prolyl-[5-(3-amidino)furylmethyl]amid hydroacetát

a) Prolyl-[5-(3-kyano)furylmethyl]amid hydrochlorid

3,05 g (14 mmol) Boc-Pro-OH a 6,11 g (47,3 mmol) ethyldiisopropylaminu bylo přidáno při teplotě místnosti do suspenze 2,5 g (15,8 mmol) 5-aminomethyl-3kyanofuranu hydrochloridu v 50 ml dichlormethanu. Po kapkách bylo přidáno při 5°C s mírným chlazením 15,8 ml (74,5 mmol) 50% roztoku anhydridu kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu. Po míchání po dobu 30 minut při teplotě místnosti byla směs zředěna ethylacetátem a promyta třikrát 5% roztokem kyseliny citrónové, třikrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným a odstranění desikantu filtrací bylo rozpouštědlo .•V·.·'· i

-112βββ e β oddestilováno s vývěvou. Bylo získáno 4,3 g (86%) světle žlutého oleje, který byl přímo použit v další reakci.

Olej získaný podle bodu a) (4,3 g, 13,5 mmol) byl rozpuštěn v 40 ml ethylacetátu, čímž se odstranila Boc skupina a byl nasycen chlorovodíkem při 0°C. Reakční směs byla míchána přes noc a odpařena do sucha v rotační odparce. Bylo získáno 3,4 g (99%) požadované sloučeniny.

b) N-(terc.butoxy kar bony I methy len)-(N-Boc)-(D )-cyklohexyla lany lprolyl-[5-(3-kyano)fu ryl methyl Jam iú

2,58 g (6,7 mmol) t-BuO₂C-CH₂-Boc-(D)-Cha-OH a 1,7 g (6,7 mmol) prolyl-[5-(3-kyano)furylmethyl]amid hydrochloridu bylo suspendováno v 20 ml dichlormethanu a bylo přidáno 3,45 g (26,8 mmol) ethyldiisopropylaminu. Reakční směs byla ochlazena na přibližně 5°C a pak bylo přidáno po kapkách 6,7 ml 50% roztoku anhydridů kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu, během tohoto procesu se roztok změnil na čirý. Po míchání přes noc při teplotě místnosti byla směs zředěna ethylacetátem a potom promyta třikrát 20% roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným byl desikant odstraněn a rozpouštědlo bylo potom oddestilováno s vývěvou. Bylo získáno 3,7 g požadovaného produktu ve formě oleje.

c) N-(terc.butoxykarbonyImethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexyl a lany lprolyl-[5-(3-am i dothiokarbonyl)f uryl methyl jamid

-1134 · • · · 4 4

4 4444 4

004 44 4 0 4

4 4 4 , 4 4 4 4 4

Produkt získaný podle bodu b) byl rozpuštěn v. pyridinu (30 ml) a triethylaminu (15 ml). Reakční směs byla nasycena sirovodíkem při teplotě místnosti a míchána přes noc při teplotě místnosti. Přebytek sirovodíku byl odstraněn dusíkem a reakční směs byla nalita na 300 ml ledově chladného 5% roztoku hydrogensíranu sodného. Směs byla extrahována třikrát ethylacetátem a kombinované organické fáze byly promyty ještě jednou 5% roztokem hydrogensíranu sodného. Po vysušení síranem sodným bylo rozpouštědlo oddestilováno s vývěvou. Výsledný surový produkt (3,3 g) byl využit v dalším kroku bez dalšího čištění.

d) N-(terc. bu toxy kar bonyl methyl en)-(N-Boc)-( D)-cyklohexyl a lany Iproly l-[5-(3-S-methyliminoth i okarbonyl)f uryl methy l]am i d hydrojodid

Surový produkt získaný podle bodu c) byl rozpuštěn v 50 ml acetonu a bylo přidáno 8,3 g (58,7 mmol) methyljodidu. Po míchání přes noc při teplotě místnosti bylo rozpouštědlo oddestilováno s vývěvou. Zbytek byl rozpuštěn v troše ethylacetátu a roztok byl přidán po kapkách do diisopropyléteru, během tohoto procesu vznikla sraženina, který byla odfiltrována s odsáváním a promyta diisopropyléterem. Sušením při teplotě místnosti ve vakuu bylo získáno 3,3 g pevné pěny.

e) N-(terč. bu toxykarbonyl methyl en)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-amidino)furylmethyl]amid hydroacetát;

-1140 · 0000 ·· • 0 * · · · · 0 0 0 00 « e β es* 0e 0

0 · 0 0 00 0 00 00 00 00

Surový produkt získaný podle bodu d) (3,3 g, 4,3 mmol) byl rozpuštěn v 40 ml acetonitrilu, bylo přidáno 0,99 g (12,9 mmol) amoniumacetátu a směs byla míchána po dobu dvou hodin při 40°C. Rozpouštědlo bylo potom oddestilováno s vývěvou, zbytek byl převeden do diethyléteru, soli byly odfiltrovány s odsáváním a filtrát byl koncentrován. Surový produkt byl vyčištěn HPLC s reverzní fází (acetonitril/voda a pufrování kyselinou octovou). Bylo získáno 991 mg žluté pevné pěny.

f) N-( hydroxykarbony I methyle n)-(D)-cy kl o hexyl ala ny I p roly I-[5-(3-amidino)furylmethyl]amid hydroacetát ml 1 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové bylo přidáno do produkt získaného podle bodu e) (991 mg, 1,68 mmol); Po míchání po dobu tří hodin při 45°C byla směs zředěna vodou a výsledná směs byla vysušena vymražením. Výsledný surový produkt byl rozpuštěn v metanolu a převeden na sůl kyseliny octové na iontoměniči (Fluka, Product No. 00402). Bylo získáno 484 mg požadovaného produktu.

♦ FAB-MS (M + H + ): 446

Příklad 15: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[5-(3-amidino)furylmethyl]amid hydroacetát:

FAB-MS (M+H+): 434

Tato sloučenina může být připravena analogicky příkladu 14, přičemž se v bodu b) využije N(terc. butoxy karbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylglycin namísto N-(terc.butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)cyklohexylalanin.

-115-

Příklad 16: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)cyklohexylalanylprolyl-[5-(2-amidino-1 methyl )pyrrolylmethyl]amid:

a) N-Boc-N-(terč.butyloxykarbonyl methylen)-(D)cyklohexylalanylprolin (2,5 g, 5,18 mmol) byl rozpuštěn v suchém methylenchloridu (30 ml), ochlazen na -10°C a při této teplotě byl přidán N-ethyldiisopropylamin (3,9 ml, 22,27 mmol). Po míchání po dobu 5 minut byl přidán roztok 5-aminomethyl-1 -methylpyrol-2-karbonitrilu (0,7 g, 5,18 mmol) v methylenchloridu (15 ml). Potom byl, přidán po kapkách v průběhu 20 minut 50% roztok anhydridů kyseliny propanfosfonové v ethylacetátu (4,6 ml, 6,21 mmol). Po míchání po dobu 90 minut při teplotě od -10°C do 0°C, směs byla zředěna methylenchloridem a promyta 2x nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (pokaždé 15 ml), 2x 5% roztokem kyseliny citrónové (pokaždé 15 ml) and 1x nasyceným roztokem chloridu sodného (15 ml). Po vysušení síranem sodným byla směs koncentrována ve vakuu a surový produkt byl vyčištěn chromatografií (silikagel, methylenchlorid:metanol = 95:5). Výtěžek: 2,3 g (74%).

b)

Produkt získaný podle bodu a) (2,3 g, 3,83 mmol) byl rozpuštěn ve směsi suchého methylenchloridu a metanolu (1:1, 50 ml), hydrochlorid (664 mg, byl přidán hydroxylamin 9,56 mmol) a Nethyldiisopropylamin (4 ml, 23,0 mmol) a směs byla míchána po dobu 7 hodin při 40°C a potom 48 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo oddéstilováno ve vakuu, do zbytku byla přidána voda a směs byla

-116• · • ··· okyselena na pH 5 kyselinou octovou. Vodný roztok byl extrahován methylenchloridem (2x) a ethylacetátem (1x). Kombinované organické fáze byly vysušeny síranem sodným a rozpouštědlo bylo oddestilováno ve vakuu. Surový produkt byl vyčištěn chromatografií (silikagel, methylenchlorid: metanol = 95:5). Výtěžek:

1,6 g (bílá pěna, 66%), FAB-MS (M + H + ): 633.

1. Produkt získaný podle bodu b) (1,6 g, 2,53 mmol) byl rozpuštěn v suchém metanolu (35 ml), byla přidána kyselina octová (0,3 ml, 5,06 mmol) a Raneyův nikl (84 mg) a směs byla hydrogenována při 50°C za tlaku vodíku 100 kPa (2,5 hodin). Po ochlazení byl katalyzátor odstraněn filtrací přes Celíte® a filtrát byl koncentrován ve vakuu. Výtěžek: 1,7 g (bílá pěna, 99%), FAB-MS (M + H + ): 617.

c) Produkt získaný podle bodu c) (1,7 g, 2,50 mmol) byl rozpuštěn v suchém methylenchloridu (50 ml). Roztok byl ochlazen na 0°C á nasyceným suchým plynným HCI. Po míchání po dobu 2 hodin bylo rozpouštědlo oddestilováno ve vakuu a surový produkt byl vyčištěn chromatografií (RP 18, acetonitrihvoda = 1:9 s přidáváním 0,1% octové kyseliny). Výtěžek: 760 mg (57%), teplota tání: 184-185 °C, FAB-MS (M + H + ); 461.

Příklad 17: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[2-(4-amidino-1-methyl)pyrolmethyl)amid byl připraven analogicky příkladu 16, FAB-MS (M + H+); 461.

JU·,.,

-117• 4 · ·

Příklad 18: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[4-(2-amidino-1 -methyl)pyrrolylmethyl)amid může být připraven analogicky příkladu 16.

Příklad 19: N-(terc.butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[2-(4-amido)oxazolylmethyl]amid hydrochlorid může být připraven analogicky příkladu 1 s výchozími látkami N(t-BuO2C-CH₂-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH a 2-aminomethyl-4-thiokarboxamidoxazolem.

Příklad 20: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-amidino-1 -methyl)pyrazolylmethyl]amid hydrochlorid:

a) N-(terc.Butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-amido-1 -methyl)pyrazolylmethyl]amid

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha Pro-OH (1,25 g, 2,59 mmol) byl převeden do dichlormethanu (30 ml). Po kapkách byl při -10°C přidán diisopropylethylamin (1,95 ml, 11,16 mmol). Následně byl přidán roztok 1-methyl-5aminomethylpyrázol-3-karboxamidu (0,4 g, 2,59 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml). Po míchání po dobu 5 minut byl přidán po kapkách v průběhu 5 minut 50% roztok anhydridu ethylacetátu kyseliny propanfosfonové (2,36 ml, 3,11 mmol), stejně jako dichlormethan (5 ml). Po míchání po dobu 45 minut při 0° C byla směs zahřívána při pokojové teplotě po dobu 12 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce, zbytek byl převeden do dichlormethanu a směs byla promyta 2x nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 2x 5% roztokem kyseliny citrónové and 1x nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným bylo rozpouštědlo

-118• · ί* odstraněno v rotační odparce. Surový produkt byl vyčištěn chromatografií (RP-18, acetonitril, voda). Výtěžek: 220 mg (14%).

FAB-MS (M+H*); 619.

b) N-(terc.butoxykarbonylmethylen)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-kyano-1 -methyl )pyrazolyl methy l]am i d

Produkt získaný podle bodu a) (220 mg, 0,36 mmol) byl rozpuštěn v dichlormethanu (15 ml) a při -10°C byl přidán diisopropylethylamin (0,17 ml, 0,96 mmol). Po míchání po dobu 5 minut byl přidán po kapkách roztok anhydridu kyseliny trifluoroctové (0,057 > ml, 0,41 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Po 1 hodině při 0°C byla směs zředěna dichlormethanem a promyta 2x nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 2x 5% roztokem kyseliny citrónové a 1x nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce. Výtěžek: 180 mg (84%)..

c) N-(terč. butoxy karbonyl methy len)-(N-Boc)-(D)-cyklohexylalanyl prolyl-[5-(3-amidino-1 -methyl)pyrazolylmethyl]amid hydroacetát

Produkt získaný podle bodu b) (180 mg, 0,3 mmol) byl rozpuštěn v metanolu (1 ml) a byl přidán acetylcystein (52,8 mg, 0,32 mmol). Potom se nechal směsí při 35°C procházet amoniak, až byla reakce ukončena. Rozpouštědlo bylo odstraněno v rotační odparce a surový produkt byl převeden na acetát s použitím iontoměniče (acetát na polymerním podkladu, Fluka 00402). Surový produkt byl vyčištěn chromatografií (RP-18, acetonitril, voda). Výtěžek: 50 mg (16%), FAB-MS (M + H+): 618.

-119• ··· ····

d) N-(hy droxy karbonyl methy len)-(D )-cyklohexyl alanylproly l-[5-(3amidino-1-methyl)pyrazolylmethyl]amid hydrochlorid

Produkt získaný podle bodu c) (50 mg, 0,081 mmol) byl rozpuštěn v dichlormethanu (5 ml) a bylo přidáno 5M kyseliny chlorovodíkové v diethyléteru (0,147 ml). Po míchání po dobu 12 hodin při pokojové teplotě bylo rozpouštědlo odstraněno v rotační odparce a produkt byl převeden do vody a lyofilizován. Výtěžek: 40 mg (92%), FAB-MS (M+H+): 462.

Příklad 21: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-amidino)-1,2,4-oxadiazolylmethyl]amid hydrochlorid

Tato sloučenina může být připravena analogicky příkladu 20 s použitím t-BuO₂C-CH₂-(Boc)-(D)-Cha-Pro-OH a 5amino-3-kyano-1,2,4-oxadiazolu jako výchozích látek.

Příklad 22: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[5-(2-amidino-3-methyl)thienylmethyl]amid:

Tato sloučenina byla syntetizována z výchozích látek sloučenin N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc(D)-Chg-Pro-OH a 5aminomethyl-3-methylthiofen-2-karbonitril hydrochloridu pomocí postupů, které jsou popsány v příkladech 2a)-e).

FAB-MS (M + H + ): 464

Příklad 23: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(2-amidino-3-methyl)thienylmethyl]amid:

Tato sloučenina byla syntetizována z výchozích látek N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH a 5-aminomethyl-3

-1200 0 0 0 0 · 0 0 0 0 0 0 0 · · 0 0 · · · ·· · • ··· · · ·· 0 · 0 ·· ·

methylthiofen-2-karbonitril hydrochloridu pomocí postupů, které jsou popsány v příkladech 2a)-e).

FAB-MS (M + H + ): 478.

Příklad 24: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl prolyl-[5-(3-am i dino-1 -methyl )triazylmethyl]amid:

Tato sloučenina byla syntetizována z výchozích látek N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OH a 5-aminomethyl-1methyl-1 H-[1,2,4]triazol-3-karboxamidu. Nejdříve byly užity postupy podobné těm, které je popsány v příkladech 20a)-d) a byl tak získán N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyldehydroprolyl-[5-(3-am i dino-1 -methy I )t ri azy I methy Ijamid. Tato sloučenina byla převedena na požadovanou sloučeninu postupem použitým v v příkladu 4b). FAB-MS (M + H + ): 463

Příklad 25: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[5-(3-amidino-1 - methyl )t ri azy I met hyl jamid:

Tato sloučenina byla syntetizována z výchozích látek N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-Pyr-OH a 5-aminométhyl-1methyl-1 H-[1,2,4]triazol-3-karboxamidu. Nejdříve byly užity pcstupy popsané v příkladech 20a)-d) a byl tak získán N(hy droxykarbonyl met hyl en)-(D)-cyklohexyl gly cyldehydropro lyl-[5(3-amidino-1-methyl)triazylmethyl]amid. Tato sloučenina byla převedena na požadovanou sloučeninu postupem, který je použit v příkladu 4b).

FAB-MS (M + H + ): 449

Příklad 26: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-amidino-4-chlor)thienylmethyl]amid:

-121 • ···

Tato sloučenina byla syntetizována z výchozích látek N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH a 5-aminomethyl-4chlorthiofen-3-thiokarboxamid hydrochloridu postupy, které byly použity v příkladech 1 a)-d).

ESI-MS (M + H + ): 498

Příklad 27: N-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(3-amidino-4-chlor)thienylmethyl]amid:

Tato sloučenina byla syntetizována' tak, že se nechal až do nasycení procházet chlorovodík roztokem 100 mg (0,186 mmol) N-(hydroxykarbonyl methy len)-(D)-cykl ohexylal any Ip roly l-[5(3-amidino-4-methyl)thienyl]methylamidu (viz výše uvedený příklad 26) v 10 ml etanolu, ochlazeným na 0’C, a míchání pokračovalo pět hodin při teplotě místnosti. Směs byla koncentrována a destilována třikrát pokaždé s malým množstvím toluenu za účelem odstranění zbytku chlorovodíku: Zbytek (89 mg, 85%) byl rozpuštěn v etanolu a převeden na odpovídající acetát pomocí acetátového iontoměniče (Fluka, Product No. 00402).

FAB-MS (M + H+): 506

Příklad 28: N-( hy droxy karbonyl methylen)-(D)-cyklohexy lalanylprolyl-1 [5-(3-amidino-4-methyl)thienylmethyl]amid:

Tato sloučenina byla syntetizována z výchozích látek N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH a 5-aminomethyl-4methylthiofen-3-thiokarboxamid hydrochloridu postupy, které byly užity v příkladu 1a)-d).

ESI-MS (M + H + ): 478

f.

L • ···

-122• · · ·

Příklad 29: N-(ethoxy karbonyl methylen)-(D)-cyklohexyl alanylprolyl-[5-(3-amidino-4-methyl)thienylmethyl]amid:

Tato sloučenina byla syntetizována tak, že se nechal až do nasycení procházet chlorovodík roztokem 100 mg (0,186 mmol) N-( hydroxy karbonyl methyl en)-(D)-cykl ohexylalanylp rol yl-[5(3-amidino-4-methyl)thienyl]methylamidu (viz výše uvedený příklad 28) v 10 ml etanolu, ochlazeným na 0°C, a míchání pokračovalo pět hodin při teplotě místnosti. Směs byla koncentrována a destilována třikrát, pokaždé s malým množstvím toluenu za účelem odstranění zbytku chlorovodíku. Zbytek (89 mg, 85%) byl rozpuštěn v etanolu a převeden na odpovídající acetát pomocí acetátového iontoměniče (Fluka, Product No. 00402).

FAB-MS (M + H + ): 506

Příklad 30: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[5-(2-amidino-3-chlor)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být připravena následujícím reakčním postupem: kopulací N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-ChaPro-OH s 5-H₂N-CH₂-(2-CN-3-CI)-thiof za vzniku N-(t-BuO₂CCH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(2-CN-3-CI)-thiof, vytvoření amidinu a následné odstranění chránících skupin postupy popsanými v příkladu 2.

Příklad 31: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[5-(2-amidino-3-chlor)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být připravena následujícím reakčním postupem: kopulací N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg

··· · ··· ··»· j z\ _Λ ··· ····· · · · t

- 1 / J - · ····· ·· ··· ·· · · · ···· · · · · ···· ·· ' ·· *· ·· ··

Pro-OH s 5-H₂N-CH₂-(2-CN-3-CI)-thiof za vzniku N-(t-BuO₂CCH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-5-(2-CN-3-CI)-thiof, vytvoření amidinu a následné odstranění chránících skupin postupy popsanými v příkladu 2.

Příklad 31: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylproly|-[5-(2-amidino-3-chlor)thienyrmethyl]amid

Tato sloučenina může být připravena následujícím reakčním postupem: kopulací N-(t-BuO2C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg Pro-OH s 5-H₂N-CH2-(2-CN-3-CI)-thiof za vzniku N-(t-BuO₂CCH₂)-N-’Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-CN-3-CI)-thiof, vytvoření amidinu a následné odstranění chránících skupin postupy popsanými v příkladu 2.

Příklad 32: N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO₂CCH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-4-(2-am)-thiof odstraněním chránících skupin a transesterifikaci (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 33: N-( methoxy karbonyl methyl en)-(D)-cykl ohexylglycylprolyl[4-(2-amidino)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO₂CCH₂)’N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiof odstraněním chránících skupin a transesterifikaci (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

• · c · • « • ···

-194- · *·· · · * · ··· ·· *

I A *Τ · ······«·· ···· ·# »· «· ·* ··

Příklad 34: 4-(2-amidino)thienylmethylamid N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO₂CCH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-am)-thiof odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 35: 2-(4-amidino)thienylmethylamid N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO2CCH₂)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-4-(2-am)-thiof odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 36: N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[2-(4-amidino)thiazolyl methy l]amid

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO₂CCH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-ann)-thiaz odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 37: N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycyl prolyl-[2-(4-amidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být systetižována z N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

125 Příklad 38: 2-(4-amidino)thiazolylmethylamid N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO₂CCH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 39: 2-(4-amidino)thiazolylmethylamid N-(methóxykarbonyl·· methylen)-(D)-cyklohexylglycylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být systetizována z N-(t-BuO₂CCH₂)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 40: N-(hy droxy karbony lmethylen)-(D )-cyklo hexyl alanylprolyl-[4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 41: N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[4-(2-hydroxyamid ino )thi enyl methyl Jam i d

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)~(Boc)-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s '· ·

- 126 • · hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 42: N-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (t-BuO₂C-CH₂-)(Boc)-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 43: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 44: N-( methoxy karbony Im ethy len)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

- 127 Příklad 45: N-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[4-(2-hydroxyamidino)thieny lmethyl jam id

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBu0₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCl v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 46: 4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cykiohexylglycylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBu0₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCl v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 47: [4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid N-(methoxykarbonyl methy len )-(D)-cyklohexylglycylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCl v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 48: [4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid N-(ethoxykar bonyl methy len)-(D)-cyklohexyl gly cylazetidin-2-karboxy lově kyseliny

.«hsL·

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 49: [4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid N-(hydroxykc.r bonyl methyle n)-(D)-cyklohexylalanylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBu0₂C-CH₂-)-(Boc)-T-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti)

Příklad 50: [4-(2-hydroxyamidino)thíenylmethyl]amid N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 51: [4-(2-hydroxyamidino)thienylmethyl]amid N-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylazetidin-2-karboxylové kyseliny

- 129., · » · · i «· * * í J J i . . ·»·· · .·· ®

.. »» *· »· ··

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-(2-CN)-4-thiof s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 52: N-(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl prolyl-[2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 53: N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakci (tBu0₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 54: N-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanylprolyl-[2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBu0₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

• ·

- 130 9 · ’ · ·

Φ· *· » * · <

• · 4 φ «ι · • · · · · • · · ♦ · · • 9 ·9

Příklad 55: N-(hydroxykarbonyl methylen)-(D)-cyklohexy Iglycylprolyl-[2-(4-hydroxyamid ino)thiazolyl methyl ]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 56: N-(methoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylprolyl-[2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (t-BuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teolota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 57: N'-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycyl· prolyl-[2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBu0₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Pro-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 58: [2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid N-(hydroxykarbonyl methy len)-(D)-cyklohexylglycylazetidin-2-karboxylově kyseliny • « • · • ·

- 131 -

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 59: [2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

N-(methoxy karbony Imethy len)-(D)-cyklohexylglycylazetid i n-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH2-)-(Boc)-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 60: [2-(4-hydroxyamidino)thiazolyrmethyl]amid N-(ethoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylglycylazetidin-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO2C-CH2-)-(Boc)-(D)-Chg-Aze-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teolota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 61: [2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid N-(hydroxy karbonyl methylen)-(D)-cyklohexylalanylazetidin-2-karboxy lově kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBu0₂C-CH2-)-(Boc)-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz

- 132 • ··« • · • · hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin (HCI v dichlormethanu při teplotě místnosti).

Příklad 62: [2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid

N-( methoxy karbony I methy lén)-(D)-cy klohexy lalanylazeti din-2-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Aze'-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz' ' s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v metanolu při teplotě místnosti).

Příklad 63: [2-(4-hydroxyamidino)thiazolylmethyl]amid N(ethoxy karbonyl methy len )-(D)-cy klohexy lalanylazetidin-2karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být syntetizována reakcí (tBuO₂C-CH₂-)-(Boc)-(D)-Cha-Aze-NH-CH₂-(4-CN)-2-thiaz s hydroxylamin hydrochloridem (metanol, diisopropylethylamin, teplota místnosti) a následným odstraněním chránících skupin a transesterifikací (HCI v etanolu při teplotě místnosti).

Příklad 64: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydrochlorid N(hydroxykarbonyl methy len )-(R)-cy klohexy lalanyl-(3S )-2,3,4,5tetrahydropyridazin-3-karboxylové kyseliny

a) N-Boc-N-(terc.butoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl(3 S )-2,3,4,5-tetrahy dropy ridazin-3-karboxylová kyselina

3,3 g (25,8 mmol) diisopropylethylaminu a 1,5 g

- 133 (12,3 mmol) dimethylaminopyridínu bylo přidáno při -5°C do roztoku 9,95 g (25,8 mmol) N-Boc-N(ter c. bu toxy kar bonyl met hylen)-(D)-cyklohexylalan inu, 7,4 g (25,8 mmol) (S)-4-benzyl-3-[(S)-2,3,4,5-tetrahydro-3pyridazinyl]-2-oxazolidinonu (Y. Nakamura, C. Shin, Chem. Lett. 1991, 1953) a 7,4 g (38,7 mmol) EDC hydrochloridu v 80 ml CH2CI2 a směs byla míchána po dobu 2 hodin při -5°C a po 12 hodin při teplotě místnosti. Reakční roztok byl zředěn 200 ml etheru, promyt 5% roztokem kyseliny citrónové, 5 % roztokem NaHCO₃ a vodou, směs byla vysušena, rozpouštědlo odstripováno a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (methylenchlorid/aceton, 50/2,5). Bylo získáno 4,0 g (24% teoretického výtěžku) nažloutlého oleje, FAB-MS (M+H+): 655. Olej byl rozpuštěn v 80 ml THF a 27 ml vody a potom bylo postupně po kapkách při 0°C přidáno 2,8 ml 30% H2O2 a 12,6 ml 1N NaOH a míchání pokračovalo po dobu 2,5 hodiny. Po přidání 15 g nasyceného vodného roztoku Na2S2O₃, byla směs extrahována etherem a alkalická fáze byla odstraněna a okyselena roztokem 1M KHSO4. Po opakované extrakci etherem, vysušení a odstranění rozpouštědla destilací bylo získáno 2,2 g bílého amorfního prášku.

b) [2-(4am)thieny!methyl]amid hydrochlorid HOOC-CH₂-(D)-Cha(3S)-2,3,4,5-tetrahydropyridazin-3-karboxylové kyseliny

0,7 g (1,4 mmol) výše uvedené kyseliny a 0,3 g 2aminomethyl-4-amidinothiofen dihydrochloridu bylo suspendováno v 4 ml DMF. Po přidání 0,145 g (1,44 mmol) N-methylmorfolinu při 0°C došlo k téměř úplnému rozpuštění a bylo přidáno 0,475 g (1,45 mmol) 0-

sa

- 134 [(ky a noeth oxy karbonylm ethy len)a min o]-N,N, Ν', N'tetramethyluroniumtetrafluorboratu (TOTU) a dále 0,14 g N-methylmorfolinu. Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při 0°C v dusíkové atmosféře a pak byla oddestilována většina DMF při teplotě lázně 35°C a tlaku přibližně 1 mbar. Zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (eluent: CFhCh/MeOH, 45/5, před koncem se přidalo 0,7 dílů 50% kyseliny octové). Bylo získáno 0,75 g jemně nažloutlého amorfního prášku.

Tento prášek byl rozpuštěn v 5 ml CH2CI2 a 10 ml kyseliny trifluoroctové a roztok Se nechal stát přes noc při teplotě místnosti. Po přidání 30 ml toluenu byla směs koncentrována ve vakuu a na zbytek bylo působeno etherem a potom byl konvertován na betain na silikagelové koloně (eluent: MeOH/25% strength NH₃, 50/2). Betain byl rozpuštěn v 20 ml vody, pH bylo upraveno na hodnotu 4,5 pomocí 1N HCl a byl lyofilizován. Bylo získáno 0,36 g amorfního prášku, FABMAS (M+H+): 476.

Příklad 65: [4-(2-amidinothienylmethyl]amid hydrochlorid N(hydroxy karbony lmethylen)-(R)-cyklohexylálanyl-(3S)-pyrazolidin3-karboxylové kyseliny 8,36 g (21,7 mmol) N-Boc-N-(terc.butoxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalaninu a 5 g (21,7 mmol)' methyl (3S)-1-terc.butoxykarbonylpyrazolin-3-karboxylátu (H. O. Kim, C. Lum, M.S. Lee (1997), THL 38(28), 4935) bylo rozpuštěno v 60 ml CH2CI2, s mícháním při -8°C bylo přidáno 6,1 g (31,8 mmol) EDC.HCl, a po dalších 20 minutách 4,0 g (31 mmol)

-135diisopropylethylaminu. Směs byla míchána po dobu 40 minut, pak bylo přidáno 0,8 g DMAP a směs se nechala stát 2 dny při teplotě místnosti. Po přidání 200 ml etheru byla směs promyta 5% kyselinou citrónovou, 5% roztokem NaHCC>3 a vodou, po vysušení byl oddestilován ether. Po čištění kolonovou chromatografií (eluent: CH₂CI₂/aceton, 50/2) bylo izolováno 8,2 g (63% teoretického výtěžku) bílého amorfního prášku.

Hydrolýza: 8,0 g (13,4 mmol) esteru bylo rozpuštěno v 60 ml dioxanu a při 10°C bylo přidáno 12 ml vody a 15 ml 1N NaOH. Po uplynutí 1,5 hodiny bylo pH upraveno na hodnotu 8 pomocí TN HCI, dioxan byl oddestilován a zbytek byl zředěn 250 ml vody a extrahován etherem. pH vodné fáze bylo upraveno r.a hodnotu 2,5 pomocí 1N roztoku KHSO4 a odseparovaná kyselina byla extrahována etherem. Po odstripování etheru zůstalo 7,7 g amorfní kyseliny. Vzorek byl rekrystalizován ze soustavy vodanasycený n-hexan, měl teplotu tání od 115 do 120°C a úhel rotace [a]D₂0 +112,4°C (CHCI3, c = 1).

Kopulace s 4-aminomethyl-2-amidinothiofen dihydrochloridem byla provedeno postupy, popsanými v příkladu 64 krok b). Po čištění kolonovou chromatografií (eluent: CH₂CI₂/MeOH/50% kyselina octová, 40/10/0,7) byly získány 4 g [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid acetátu N-Boc-N(terč. butoxykarbonylmethy len )-(R)-cyklohexy lalanyl-(3S)pyrazolidin-3-karboxylové kyseliny, přičemž se vycházelo z 4,15 g výše uvedené kyseliny.

Odstranění ochranné skupiny: Výše uvedená sloučenina byla rozpuštěna v 12 ml dioxanu, bylo přidáno 20 ml TN HCI a směs byla zahřívána po dobu 4,5 hodin při 75°C. Roztok byl zředěn 50 ml vody, pH- bylo upraveno na hodnotu 4 pomocí

- 136 iontoměniče (pryskyřice 3-A4, BioRad) a voda byla oddestilována. Zbytek byl rozpuštěn v isopropanolu a hydrochlorid byl vysrážen přidáváním etheru. Po čištění kolonovou chromatografií (eluent: CH₂CI₂/MeOH/50% kyselina octová, 35/15/7) byl zbytek rozpuštěn ve vodě, pH bylo upraveno na hodnotu 4 pomocí 1N HCI a vzorek byl lyofilizován. Bylo získáno 1,6 g amorfního hydrochloridu, FAB-MS (M + H+): 465.

V následujících příkladech byly použity postupy popsané v příkladu 65:

Příklad 66: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydrochlorid N(hy droxy kar bony I methyl en)-(R)-cykl ohexylalanyl-(3 R)-pyrazol id i n3-karboxylové kyseliny

Bílý amorfní prášek. FAB-MS (M + H + ): 465

Příklad 67: [4-(2-amidino)-thienylmethyl]amid hydrochlorid N(hydroxy kar bony I methyl en)-(R)-cyklohexylglycyl-(3R)-pyrazol i din3-karboxylové kyseliny

Bílý amorfní prášek. FAB-MS (M+H + ): 451

Příklad 68: [4-(2-amidino)-thienylmethyl]amid hydrochlorid N(hydroxy karbonyl methyl en)-(R)-cyklohexy Ig I ycy I-(3 S )-pyrazolidin3-karboxylové kyseliny

Bílý amorfní prášek. FAB-MS (M + H+): 451

Příklad 69: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydrochlorid N(hy droxy karbonyl methyl en)-(R)-cykl ohexylglycyl(-)-thiazol i din-2karboxylové kyseliny

Výchozí materiál: methyl (-)-thiazolidin-2-kárboxylát [R.L. Johnson, E.E. Smissman (1 978), J. Med. Chem. 21, 165]

Příklad 70: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid N-(hydroxykarbonylmethylen)-(R)-cyklohexylalanyl(-)-thiazolidin-2-karboxylové kyseliny

Bílý amorfní prášek. FAB-MS (M+H+): 482

Příklad 71: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroehlorid N(hydroxykarbony lmethylen )-(R)-cyklohexy lalanyl-(L)oktahydroindol-2-karboxylové kyseliny

Bílý amorfní prášek. FAB-MS (M+H+): 518

Příklad 72: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid hydroehlorid N(hydroxy kar bony lmethylen )-(R)-cyklohexyl gly cyl-(L)oktahydroindol-2-karboxylové kyseliny

Bílý amorfní prášek, FAB-MS (M+H + ): 504

Příklad 73: [2-(4-amidino)thienylmethyl]amid N(hydroxykarbonylmethylen)-(D)-cyklohexylalanyl-(45)-5,5d i methylthiazol idin-4-karboxylové kyseliny

Tato sloučenina může být připravena následujícími reakcemi: kopulací N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-OH s (5)-5,5Me₂-thz-4-OMe- [J. Samanen u.a. (1990), Int. J. Peptide Protein Res. 35, 501 (1990)] za vzniku N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha(2,2-Me₂-thz-4)-OMe, alkalickou hydrolýzou methylesteru,

Φ

- 138 • · · · · 0 0 e β 0 0 0 β ® 0 • 00000 00 • . · 0 0 0 · -W 0 0

0··· 00 00 00 00 00 kopulací výsledné kyseliny s H₂N-CH₂-(2-CN)-2-thiof za vzniku N-(t-BuO₂C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-(2,2-Me₂-thz-4)-NH-CH₂-2-(4-CN)-thiof, vytvořením amidinu a následným odstraněním chránících skupin postupy popsanými v v příkladu 2b-e. FAB-MS (M + H + ): 505; teplota tání 184-7°C (rozklad)

Příklad 74: [4-(2-amidino)thienylmethyl]amid N-(hydroxykarbonyImethylen)-(D)-cyklohexylglycyl-5,5-dimethylthiazolidin-4-karboxylová kyselina

Tato sloučenina může být připravena následujícími reakcemi: kopulací N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-OH s 5,5Me₂-thz-4-OMe- za vzniku N-(t-BuQ₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-(2,2Me₂-thz-4)-OMe, alkalickou hydrolýzou methylesteru, kopulací výsledné kyseliny s H₂N-CH₂-(2-CN)-4-thiof za vzniku

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Chg-(5,5-Me₂-thz-4)-NH-CH₂-4-(2CN)-thiof, vytvořením amidinu a následným odstraněním chránících skupin metodami popsanými v příklad 2b-e. FAB-MS (M+H+): 491, teplota tání 164-166^ÓC (rozklad)

Příklady 75-90

Následující sloučeniny mohou být syntetizovány z odpovídajících jednotek A-B-D- a E-F- s použitím postupů popsaných v příkladu 14 ve W098/06741:

75. HOOC-CH₂-(D)-(p-OMe-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiof

76. HOOC-CH₂-(D)-(p-OMe-m-CI-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiof

77. HOOC-CH₂-(D)-(p-OMe-Phe)-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-3-Me)-thiof

78. HOOC-CH₂-(D)-(p-CF₃-Phe)-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-3-Me)-thiof

79. HOOC-CH₂-(D)-(p-CI-m-CI-Phe)-Pro-NH-CH₂-5-(2-am-3-Me)thiof

• «

80. HOOC-CH₂-(D)-(p-CF₃-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiof

81. HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-Me)-thiaz

82. HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5.Me)-thiaz

83. HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-Me)-thiaz

84. HOOC-CH₂-(D)-(p-OI\/le-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

85. HOOC-CH₂-(D)-(p-CF₃-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

86. HOOC-CH₂-(D)-(p-CF₃-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am-5-Me)-thiaz

87. HOOC-CH₂-(D)-(p-iPr-m-Me-Phe)-Pro-NH-CH₂-2-(4-am)-thiaz

88. HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-m-CI-Phe)-Prp-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz

89. HOOC-CH2-(D)-(p-CI-m-CI-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz

90. HOOC-CH2-(D)-(p-CI-m-CI-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(5-am-4-Me) thiaz

Příklad 91

Následující sloučenina může být syntetizována z odpovídající E- jednotky a N-(t-Bu0₂C-TCH2)-N-Boc-(D)-Cha-ProOH postupem popsaným v příkladu 20.

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Pro-NH-CH₂-3-(5-am-1 -Me)-pyraz

Příklad 92

HOOC-CH₂-(D)-Cha-Thz-4 NH-CH₂-5-(2-am)-thioph byl syntetizován z Boc-Thz-4-OH, 5-H₂N-CH₂-thioph-2-CN a N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc(D)Cha-Pro-OH metodou podobnou té, která je popsána v příkladu 3.

Farmakologické testy

Příklad A

E

- 140 Chromogenový test na inhibitory kallikreinu

Činidla: Kallikrein z lidské plazmy (No. K 3126, Sigma,

Deisenhofen, Germany)

Substrát: Chromozym GK (No. 709875, Boehringer,

Mannheim, Germany)

Pufr: 20 mM Tris (HCI pH = 8.50)

Experimentální metodika:

Chromogenový test, kterým se stanoví aktivita kallikreinu se provádí na mikrodestičkách. K 93 pl pufru se přidají 2 μΙ roztoku směsi, do které je přidán DMSO a takto získaná směs o finální koncentraci kallikreinu 0.01 jednotek/ml. Inkubace se prováděla 10 minut při 20 až 25°C. Sám test se zahajuje přidáním 100 μΙ substrátu (500 pmol/l finalální koncentrace). Po další inkubaci, která trvala 30 minut, byla fotometrem změřena absorbce světla při 405 nm.

Příklad B

Doba potřebného působení na trombin

Činidla: Trombinové činidlo (Produkt No. 126 594, Boehringer, Mannheim, Germany)

Příprava citrátové plazmy:

dílů lidské žilní krve, získané z véna cephalica, se smísí s jedním dílem roztoku citronanu sodného (0.11 mol/l). Tato směs se pak odstředí. Plazma se dá skladovat při -20°C.

Experimentální metodika:

μΙ roztoku testované látky a 50 μΙ citrátované plazmy se inkubuje po dobu 2 minut při 37°C (CL8, balonový typ,

4 « · • 4 4 ·

- 141 4 4 · · 4 4 • 4 · · 4 · • ·4· · · · 4 • · 4 4 4 • •4 4 4 ♦·

4 4 4

44

Bender & Hobein, Munich, FRG). Následně se přidá 100 pl trombinového činidla (37°C). Stanovuje se doba, po které se vytvoří fibrinová sraženina.

Příklad C

Chromogenový test inhibitory trombinu

Činidla: Trombin z lidské plazmy (No. T-8885, Sigma, Deisenhofen, Germany)

Substrát: H-D-Phe-Pip-Arg-pNA.2HCI (S-2238, Chromogenix, Molndahl, Sweden)

Pufr: Tris 50 mmol/1, NaCl 154 mmol/1, pH 8.0

Experimentální metodika:

Chromogenní test se provádí na mikrotitrových destičkách. K 250 μΙ pufru s trombinem (finální koncentrace 0.1 NIH jednotek/ml) se přidá 10 μΙ roztoku testované látky v DMSO a takto získaná směs se inkubuje 5 minut při 20 až 28°C. Samotný test se zahájí přidáním 50 μΙ roztoku substrátu v pufru (finální koncentrace 100 pmol/l), směs se inkubuje 28°C a po 5 minutách se reakce ukončí 50 μΙ kyseliny citrónové (koncentrace 35%). Absorbce se měří při 405/630 nm.

Příklad D

Shlukování destiček v plazmě, bohaté na destičky

Činidla: Trombin lidské plazmy (No. T-8885, Sigma, Deisenhofen, Germany)

- 142 44 *· • 4 4 ·

4 · • ··· ·

•*·4 • · 4 4

4 4 4

44 '•4

4 4 4

4« 4

4 44

Příprava plazmy obohacené citrátem a destičkami:

Od zdravých jedinců, kterým nejsou aplikovány žádné léky, se odebere žilní krev z véna cephalica. Tato krev se smísí v poměru 9:1 s 0.13 molárním citronanem sodným. Plazma bohatá na krevní destičky (PRP) se připravuje odstředěním při 250 x g (10 minut při teplotě místnosti). Plazma chudá na krevní destičky (PPP) se připraví odstředěním při 3600 x g, které trvá 20 minut. PRP a PPP se dají uskladnit 3 hod při pokojové teplotě v uzavřených PE nádobách. Koncentrace destiček se měří pomocí hematocytometru a měla by se pohybovat mezi 2.5 a 2.8-10®/ml.

Experimentální metodika:

Shlukování destiček se měří turbidimetricky při 37°C (PAP 4, Biodata Corporation, Horsham, PA, USA). Před přidáním trombinu se inkubuje 215.6 pl PRP po dobu 3 minut s 2.2 μΙ testované látky a takto získaná směs se pak míchá další 2 minuty při 1000 ot/min. Použití finální koncentrace 0.15 NIH jednotek/ml, 2.2 pl trombinu v roztoku vede k maximálnímu agregačnímu účinku při 37°C/1000 ot/min. inhibiční účinek testovaných látek se stanoví srovnáváním rychlosti, s jakou se vytvoří trombinové agregáty (sklonu ke srážení) bez testované substance s rychlostí trombinové agregace s přísadou testované substance v několika různých koncentracích.

Claims (13)

1. ······ ·* ·» ** *· ρν ΐοοο-ύίζ

   PATENTOVÉNÁROKY

   1. Sloučenina vzorce I

   A-B-D-E-F I ve kterém A, B, D, E a F mají následující významy:

   A: R²

   I

   R¹- (CH₂)„- C -(CH₂)_n— kde ^r3 m je 0, 1 nebo 2, n je 0, 1 nebo 2,

   R¹ je HOOC-, Ci-6-alkyl-OOC-, aryl-Co-4-alkyl-OOC nebo -OH,

   R² je H-, Ci-4-alkyl-nebo R¹-(CH₂)m a R³ je H-nebo Ci-4-alkyl-,

   R^{6 B}' R⁴ (R⁷-C-R⁸)p

   I I

   -N- C -CO:-R⁵ kde

   R⁴ je H-, Ci-4-alkyl- nebo R¹-(CH2)_m- (kde R¹ a m mají shora uvedené významy), p je 0 nebo 1,

   R⁵ je H- nebo Ci_₄-alkyl-,

   R⁶ je H-, Ci_8-alkyl-, 2-thienyl-, 3-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2pyridyl-, 3-pyridyl-, 4-pyridyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří Ci-4-alkyl-, CF₃-, Ci-4-alkoxy-, HO-, BnO-, F- nebo CI-, nebo C₃-8-cykloalkyl, který může nést až čtyři shodné nebo různé Ci-4-alkyl- radikály a/nebo kde jedna nebo dvě C-C jednoduché vazby v kruhu mohou

   - 144 _ . , být nahrazeny C=C dvojnou vazbou a/nebo fenylový kruh může být nekondenzovaný, C₇-Ci₂-bicykloalkyl- nebo Cjο-tricykloalkyI- nebo

   R⁴ a R⁶ spolu mohou tvořit ethylenovou nebo propylenovou skupinu,

   R⁷ je H, Ci-e-alkyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří Ci_₄-alkyl-, CF₃-, Ci.₄alkoxy-, F- nebo CI-, nebo C₃.8-cykloalkyl-, který může nést až čtyři shodné nebo různé Ci.₄-alkyl radikály, a

   R® je H nebo Ci.₄-alkyl, kde R²⁰ je H, Ci.₄-aíkyl, Bn nebo BnO(CO)- a kde platí následující: jestliže D je II, III nebo XI, pak E má následující význam:

   RlO _R9 Rll Y—z kde

   a) v případě, že X = S, O, NH nebo NR¹², tak ··

   - 145 -.

   Y je -CR¹³=, -CH= a Zje-CR¹⁴= nebo

   Y je-CR¹³= a Z je -CH = nebo

   b) v případě, že X = NR¹², tak

   Y je -CH= a - · Z je -CH = nebo

   c) v případě, že X = S, O nebo NH,

   Y je -CR¹⁵= a Z je -N= nebo

   Y je-N= a Z je -CR¹⁵= nebo dj v případě, že X =-NR¹²-, tak

   Y je -N= a Z je -CR¹⁶ = , -N = nebo Y je -CR¹⁶ = a Z je N = a R⁹ je H-nebo Ci-3-aIkyl-, R¹⁰ je H- nebo Ci.₄-alkyl-, R¹¹ je H- nebo Ci.₄-alkyl-, R¹² je CH₃- nebo C2H5-, R¹³ je CI-, CF3- nebo Ci_₄-alkyl- R¹⁴ je CI-, CF₃- nebo Ci-₄-alkyl-

   -146-.

   • * 4 ··'·· ·· ··

   R¹⁵ je CF3-nebo Ci-4-alkyl-,

   R¹⁶ je H-, CF₃- nebo Ci_₄-alkyl- a κ ma význam uvedený shora, nebo, jestliže D je IV, VI, VII, Vlil význam:

   IX nebo X, pak E má následující kde

   X je 0, S nebo -NR¹⁷ a

   Y je N= a

   Z je-CR¹⁶= nebo-N = nebo

   Y je-CR¹⁶= a

   Z je-N= nebo

   Y je -CR¹⁸= a

   Z je-CR¹⁹= a

   f' 1 , κ , κ a R mají význam uvedený shora,

   R¹⁷ je H, CH₃-nebo C2H5-,

   R¹⁸ je H-, CI-, CF₃-nebo Ci-4-alkyl-,

   R¹⁹je H-, CI-, CF₃- nebo C₁.₄-alkyl-, nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, x nebo XI, E má následující významy:

   RlO n—c- nebo \\ ó R9 Rll Z

   147 v · 'i kde

   a) v případě, že X = S, tak

   Y je -CR¹⁸= a

   Z je -CR¹⁹= nebo

   Y je -CR¹⁶= a

   Z je -N = nebo

   b) v případě, že X = O nebo -NR¹²-, tak

   Y je -N = , -CR¹⁶= a

   Z je -N = , -CR¹⁸= nh₂ nebo její prodroga nebo její sůl s fyziologicky přijatelnou kyselinou.
2. 2. Sloučenina vzorce I podle nároku 1,’ kde A až E mají následující významy:

   A: ,

   HOOC-(CH₂)t- (t = 1, 2 nebo 3), (H00C-CH₂)₂-CH-, · HOOC-CH₂-CH(COOH)-, HOOC-CH(Ci.₄-alkyl)-, HOOC-C(Ci-4-alkyl)₂L C^e-alkyl-OOC-íChhjt-.

   B je R⁶

   R⁴ (R⁷-C-R⁸) co^;—

   1 /1 Q *·' ·· *’* ··

   - I 4 O ·« · · * * * * • · <

   >

   ► • · p je 0 nebo 1,

   R^je H-, Ci-4-alkyl- nebo HOOC-(CH₂)m- (m = 1, 2 nebo 3),

   R⁵ je H, methyl

   R⁶ je H-, Ci.₈-alkyl-, 2-thienyl-, 3-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2pyridyl-, 3-pyridyl-, 4-pyridyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH₃-O-, HO-, BnO-, F- nebo Ci-, nebo C₃.8-cykíoalkyl, který může nést až čtyři methyl radikály, bicyklo[2.2.2]oktyl-, bicyklo[2.2.1]heptyl-, adamantyl-, indanyl-, dekalinyl-,

   R⁷ je H, Ci-s-alkyl-, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH₃O-, F- nebo Cl—, nebo C₃.8-cykloalkyl-, který může nést až čtyři methyl radikály,

   R⁸ je H, Ci.4-alkyl, kde R²⁰ je H, CH₃, Bn nebo BnO(CO)- a

   - 149 kde platí následující:

   jestliže D je II, III nebo XI, pak E znamená:

   H kde Η h y-z

   a) v případě, že X = S, O nebo NR¹⁷, tak

   Y je -CR¹³= nebo -CH= a

   Z je-CR¹⁴= nebo

   Y je -CR¹³= a

   Z je -CH = nebo

   b) v případě, že X = NR¹², tak

   Y je -CH= a

   Z je -CH = , nebo

   c) v případě, že X = S, O nebo NH, tak

   Y je -CR¹⁵= a

   Z je N = nebo

   Y je N= a

   Z je-CR¹⁵= nebo

   d) v případě, že X = NR¹²,

   Y je N= a

   Z je -CR¹⁶=, -N = nebo

   Y je-CR¹⁶= a

   Zje-N = • 4' * · • · 4 9

   - 150 -Z’··; * • 449 · 4

   44 4 · «' 4 '4 4 4·

   4 4 4·

   4 ·4 * ·

   4 4 4 4 • ‘4 4 ·

   4 4 4 9

   4· ··

   R¹² je CH₃- nebo C2H5-,

   R¹³ je ČI-, CF₃- nebo Ci-4-alkyI-,

   R¹⁴ je CI-, CF₃-nebo Ci-4-alkyl-,

   R¹⁵ je CF₃-nebo Ci-4-alkyl’,

   R¹⁶ je H-, CF₃- nebo Ci-4-alkyl-,

   R¹⁷ je H, CH₃-nebo C2H5

   R²⁰ je jak je uvedeno shora, nebo jentliže D je IV, VI, VII, Vlil, IX nebo X, pak E znamená:

   H kde ^{H H Y—2}

   X je O, S nebo-NR¹⁷-a kde

   Y je -N= a

   Z je -CR¹⁶= nebo -N = nebo

   Y je -CR¹⁶= a

   Z je -N= nebo

   Y je -CR¹⁸= a

   Z je -CR¹⁹= a

   ,17 ,20

   -R¹⁶, R¹⁷, R²⁰ mají shora zmíněné významy,

   R¹⁸ je H-, CI-, CF₃- nebo Ci_4-alkyi- a

   R¹⁹ je H-, C1-, CF₃-nebo Ci-4-alkyl·, nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, X nebo XI, pak E má významy:

   B I

   Ν — ΟΙ

   Η H nebo ^x ·· φφφ

   -151 ···· ·· kde

   a) v případě, že X = S, tak

   Y je -CR¹⁸= a

   Z je -CR¹⁹= nebo

   Y je -CR¹⁶= a

   Z je -N = nebo

   b)- v případě, že X = O Y je -N= nebo -CR¹⁶= Z je -N= nebo -CR¹⁸= a R¹², R¹⁶, R¹⁸, R¹⁹ _a nebo' -NR¹², a

   R mají shora zmíněné významy,

   F:

   NH

   NH, nebo

   N-OH 'nh.

   a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami
3. 3. Sloučenina vzorce I podle jednoho z nároků 1 nebo 2, kde A, B, D, E a F mají následující významy:

   A: HOOC-CHz, HOOC-CH2-CH2, HOOC-CH(CH₃), HOOC-CH(C₂H₅)

   R^{6 B:} I

   R⁴ (R’-C-R’)_p — N—-C-—-COp je 0 nebo 1,

   R⁴ je H-, CH₃

   R⁵ je H-, CH₃-,

   R⁶ je Ci-8-alkyl-, Cs-s-cykloalkyl-, který může nést až čtyři methyl radikály, 2-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2-pyridyl-, 3-pyridyl-, 4-pyridyl, fenyl, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH₃O-, HO-, BnO-, F- nebo CI-, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1]heptyl, adamantyl, indanyl, dekaiinyl, zejména s důrazem na cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl,

   R⁷ je H, CH3-, R⁸ je H, CH3-, kde

   R²⁰ je H, BnO(CO)- a kde platí následující: jestliže D je II, lil nebo XI, pak E znamená:

   • · ·· kde

   X Y je je -S-a kde -CH = a z je nebo -cr¹³= Y je -CR¹³= a z je -CH = nebo Y je -CR¹⁵= a Z je nebo -N = Y je -N= a z a je -CR^1S= R¹³ je Cl·, CF₃- nebo CH₃, r15 je CF₃- nebo CH₃- a R²⁰ je jak je uvedeno shora

   nebo jestliže D je IV, VI, VII, Vlil, IX nebo X, pak E znamená:

   kde

   X je S, a kde

   Y je N= a

   Z je -CR¹⁶= nebo

   Y je -CR¹⁶= a

   Z je -N =

   0' 0

   0 0 0·

   0' '0

   - 154 - .·*

   0 .

   • 0 0 0 '0 0 '0 0'

   0 0 0 0 0 ·

   0 0 >0 0

   0 0 ·· nebo ’

   Y je -CR¹³= a

   Z je -CH = nebo

   Y je -CH= a

   Z je -CR¹³= nebo

   Y je -CH = a

   Z je -CH = a

   R¹·³, R²⁰ mají shora zmíněné významy a R¹⁶ je H-, CF₃- nebo CH₃ nebo jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, X nebo XI, pak E znamená:

   kde buď

   a) v případě, že X = S, Y je-CH = a

   Z je-CR¹⁸= nebo Y je-CR¹⁶= a Z je -N= nebo

   Y je -CR¹⁸= a

   Z je-CH = nebo

   b) v případě, že X = O nebo NCH₃ Y je -CH= a Z je -CR¹⁶= nebo

   Y je-CR¹⁶= a

   Z je -CH = nebo

   - 155 • ··« • ♦

   c) v případě, že X = -NR¹²Y je -N= a Zje-CR¹⁸=

   R¹² je CH₃-nebo C2H5-a

   R¹⁸ je H, CI-, CF₃-nebo CH₃-, a

   R¹⁶, R²⁰ mají shora zmíněné významy

   F:

   N-OH ——nebo ^NH2 \h₂ a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.
4. 4. Sloučenina vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde A, B, D, E a F mají následující významy:

   A: HOOC-CH2, HOOC-CH2-CH2, HOOC-CH(CH₃),'HOOC-CH(C₂H₅.) ^B:

   I r^,R,r‘”

   -N- C - COI

   R⁵ p je 0 nebo 1,

   R⁴ je H-,

   R⁵ je H-,

   R⁶ je C1-8 -alkyl-, 2-thienyl-, 3-indolyl-, 4-imidazolyl-, 2-pyridyl-, 3pyridyl-, 4-pyridyl-, C₅-8-cykloalkyl, který může nést až čtyři methyl radikály, fenyl-, který může nést až tři shodné nebo různé radikály ze souboru, do něhož patří CH₃-, CF₃-, CH₃O-, HO-, BnO-, F- nebo

   -156• · · · · * • · · · ····

   CI-, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1 jheptyl, adamantyl, indanyl, dekalinyl, se zvláštním důrazem na cyklopentyl-, cyklohexyl- a cykloheptyl-, kde platí následující:

   jestliže D je II, III nebo XI, pak E znamená:

   kde

   X je S a

   Y je -CR¹³= a

   Z je -CH = nebo

   Y je -CH= a

   Z je -CR¹³= nebo

   Y je -CR¹⁵= a

   Z je -N =

   H

   H H Y-z · · · • 0 ·

   - 157 0 '0' 0 · · « '·

   0 0,000 0 0 0 « 0

   0 0 0 ·0 ' 0 ’· ·« « 0000 00 00 00 '·« ·· nebo

   Υ je Ν= a

   Z je -CR^1S= a

   R¹³ je CI-, CF₃-nebo CH₃-a

   R¹⁵ je CF₃- nebo CH₃-, nebo jestliže D je IV, VI, VII, Vlil, IX nebo X; pak E znamená:

   H

   X je S a

   Y je -N = z je -cr¹⁶= nebo Y je -cr¹⁶= z ¹ je -N= nebo Y je -CH = z je nebo -cr¹³= Y je -cr¹³= z je nebo -CH = Y je -CH = z je -CH =

   a

   13 z

   R má shora zmíněný význam a R¹⁶ je H, CF₃- nebo CH₃-, nebo

   - 158 • · · • · · • ···!» • ···

   4444 ·· • · '·

   44 4 4 • 4 · * 4 4 ·»'♦

   4 4-4 4

   4 4 4 4

   4 4 44 jestliže D je II, III, IV, VI, VII, Vlil, IX, X nebo XI, pak E znamená kde

   a) v případě, že X = s, Y je -CH = a Z je -CR¹⁸= nebo Y je -CR¹⁸= a z je -CH= nebo. Y je -CR¹⁶= a z nebo je -N = b) v případě, že X = 0 nebo NCH₃ Y je -CH = a z . je -CR¹⁶= nebo Y je -CR¹⁶= a z je -CH= nebo c) v případě, že X = nch₃

   Y je -N = a

   Z je -CR¹⁶=

   R¹⁶ má shora zmíněné význam a R¹⁸je H, Cl- CF₃- nebo CH₃-, i·..

   -159 • · • ···

   F:

   NH

   N-OH

   NH, nebo

   NH, a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.
5. 5. Sloučenina, která obsahuje strukturní prvek

   NH

   NH, kde D a E mají významy, uvedené v kterémkoliv z nároků 1 až 4, a kde alespoň jeden z radikálů, vybraných ze souboru, do kterého patří atom vodíku, chránící skupina, nesubstituovaná nebo substituovaná přírodní nebo nepřírodní aminokyselina, nesubstituovaná nebo substituovaná karboxylová kyselina, nesubstituovaný nebo substituovaný alkylový radikál je navázán na ‘dusíkovém atomu strukturního bloku D.
6. 6. Sloučenina, která obsahuje strukturní prvek

   -—E

   NH kde E má význam uvedený v kterémkoliv z nároků 1 až 4 a kde alespoň jeden z radikálů, vybraných ze souboru, do kterého patří atom vodíku, chránící skupina, nesubstituovaná nebo substituovaná přírodní nebo nepřírodní aminokyselina, nesubstituovaná nebo substituovaná karboxylová kyselina, nesubstituovaný nebo substituovaný alkylový radikál je navázán na dusíkovém atomu skupiny NR⁹
7. 7. Sloučenina obsahující strukturní prvek vzorce

   kde Q je CH3 nebo Cl, T je NChh, O nebo S a W je NCH3 nebo S.
8. 8. Prostředek, obsahující kromě obvyklých adjuvantů a excipientů sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 a sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 5, 6 nebo 7.
9. 9. Použití sloučeniny vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 nebo sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 5, 6 a 7 pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení:

   •chorob, jejichž patogenetický mechanizmus je přímo nebo nepřímo odvozen od proteolytického účinku trombinu, • chorob, jejichž patogenetický mechanizmus je odvozen od trombinově-závislé aktivace receptorů a vedení signálů, • chorob spojených se stimulací nebo inhibicí exprese genů v tělních buňkách, • chorob odvozených od mitogenního účinku trombinu, • chorob odvozených z trombinově-závislé změny kontraktility a permeability epitelových buněk, • trombinově-závislé tromboembolické příhody, • roztroušené intravaskulámí koagulace, • reokluze a pro snížení reperfuzní doby na současné podávání trombolytik, • · • ···

   - 161 • · · · « · · · • · · · · · fcfc » • 9 9 9 ' · · · · ·* '99 99 99 projevů časné reokluze a restenózy po PTCA, • trombinově-závislé proliferace buněk hladkého svalstva, akumulace aktivního trombinu v CNS, • růstu nádorů a k prevenci adheze a metastáz nádorových buněk.
10. 10. Použití sloučeniny vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 nebo sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 5, 6 a 7 k výrobě farmaceutického prostředku pro léčení:

    • chorob, jejichž patogenetický mechanizmus je přímo nebo nepřímo odvozen od proteolytického účinku kininogenáz, zejména kallikreinu, zánětlivých chorob jako je astma, pankreatitis, rhinitis, arthritis, urticaria a dalších interních chorob, při kterých se uplatňuje kallikrein.
11. 11. Sloučenina vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro povlékání povrchů.
12. 12. Sloučenina vzorce Va nebo Vb

    A - B - D - E - CN Va,

    A - B - D - E - CSNH₂ Vb, kde A, B, D a E mají významy uvedené v kterémkoliv z nároků 1 až 4.
13. 13. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro výrobu prostředků, které jsou použitelné jako trombinové inhibitory.