CZ288436B6 - Peptidyl derivatives, their therapeutic use as inhibitors of metalloproteinases and pharmaceutical preparation in which they are comprised - Google Patents

Description

Peptidylové deriváty, jejich terapeutické použití jako inhibitorů metaloproteinas a farmaceutický prostředek je obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká nové třídy peptidylových derivátů, jejich použití v medicíně a farmaceutických prostředků j e obsahuj ící.

Dosavadní stav techniky

V normálních tkáních je syntéza buněčné pojivové tkáně vyrovnávána degradací mimobuněčné matrice, přičemž jsou tyto dva protichůdné jevy v dynamické rovnováze. Degradace matrice je vyvolávána působením proteinas, vyvíjených z rezidentních buněk pojivové tkáně a poškozených zánětlivých buněk, a k aktivování je částečně zapotřebí alespoň tří skupin metaloproteinas. Jsou to kolagenázy (intersticiální kolagenáza, MMP-1, PMN kolagenáza, MMP-8, kolagenáza-3, MMP13), želetinázy (želetináza A, MMP-2, 72kDa-želetináza, Typ IV kolagenázy, želetináza B, MMP-9, 92Da-želetináza, Typ IV kolagenázy) a stromelysiny (proteoglykanasa, MMP-3, stromelysin-1, transin, stromelysin-2, MMP:10, stromelysin-3, MMP:1). Běžně jsou tyto katabolické enzymy plně regulovány na úroveň své syntézy a sekrece a také na úroveň své mimobuněčné aktivity, později působením specifických inhibitorů, jako je TIMP (tkáňové inhibitoiy metaloproteinasy), které tvoří s metaloproteinasamy inaktivní komplexy a obvyklejší proteinasové inhibitory jako a2~makroglobuliny.

Rychlé, nekontrolované odbourávání pojivové tkáně metaloproteinasou katalyzovanou resorpcí mimobuněčné matrice patří mezi iysy mnohých patologických stavů, jako revmatická artritida, osteoartritida, septická artritida, rohovková, epidermální nebo gastrická ulcerace, nádorová metastáza nebo invaze, periodontální onemocnění, proteinurie, koronární trombóza spojená s prasknutím aterosklerotického plátu a kostní onemocnění. Inhibitory zde uvedené mohou být také použity při prevenci patologických změn, jež následují po traumatických poraněních, jež mohou vést k trvalé invaliditě. Tyto sloučeniny mohou být také prospěšné jako prostředek pro regulaci porodnosti prevencí ovulace nebo implantace. Lze očekávat, že patogeneze takovýchto onemocnění je možno podobně modifikovat nějakým prospěšným způsobem tak, že se podávají metaloproteinasové inhibitory a pro tento účel mohou být navrženy četné sloučeniny /pro obecné posouzení viz R. C. Wahl a kol., Ann. Rep. Med. Chem. 25: 175-184, Academie Press lne., San Diego (1990)/.

Je popsáno mnoho peptidů jako sloučenin, které inhibují metaloproteinasy. Většina významnějších z nich se uvádí v souvislosti s na angiotenzin konvertujícím enzymem (ACE), kdy taková činidla působí blokování konverze dekapeptidu angiotenzinu I na angiotenzin H, silně účinnou presorovou látku. Sloučeniny tohoto typu jsou popsány v EP-A-0012401. Rovněž příbuzné merkaptoamidové peptidylové deriváty prokazují ACE inhibitorovou aktivitu in vitro a in vivo (Η. N. Weller a kol., (1984), Biochem. Biophys. Res. Comm., 125. (1):82-89).

TNFalfa je cytokin, který je produkován zpočátku jako 28kD prekurzor. Vyvíjí se jako aktivní, 17kD forma (D-M. Jue a kol., (1990) Biochemistry, 29:8371-8377), která může zprostředkovat velké množství škodlivých vlivů in vivo. Když se podává zvířatům nebo lidem, působí záněty, horečku, kardiovaskulárně, působí krvácení, srážení krve a akutní fázové odezvy, podobně jako ty, jež lze pozorovat při akutních infekcích a šokových stavech. Chronické podávání ale může způsobit kachexii (sešlost) a anorexii. Akumulace přebytečného TNFalfa může být letální (smrtelná). Důležité je sledovat u modelových studií zvířat, jak působí blokování TNFalfa u specifických protilátek, což může být užitečné při akutních infekcích, šokových stavech, štěpu proti hostiteli a autoimunitních onemocněních. TNFalfa je také autokrinní růstový faktor pro

-1 CZ 288436 B6 některé myelomy a lymfomy a může působit inhibici normální hematopoézy u pacientů s těmito nádory.

Při předcházení produkci nebo působení TNFalfa lze tedy předvídat silnou terapeutickou strategii vzhledem k mnohým zánětlivým, imunologickým nebo maligním onemocněním. Mezi ně patří, aniž by tím byla daná oblast omezena, septický šok, hemodynamický šok a syndrom sepse (Mathison a kol., (1988) J. Clin. Invest. 81:1925-1937, Miethke a kol., (1992), J. Exp. Med. 175:91-98). post-ischemické reperfůzní poškození, malárie (Grau a kol., (1989) Immunol. Rev. 112:49-70), mykobakteriální infekce (Bames a kol., (1992) Infect. Imm. 60:1441-6), meningitida, psoriáza, městnavé srdeční selhání, fibrózní onemocnění, kachexie, odhojení štěpu, rakovina, autoimunitní onemocnění, zánět kloubů, roztroušená skleróza, poškození radiací, toxicita následující po podávání imunosupresivních monoklonálních protilátek jako OKT3 nebo CAMPATH-1 a hyperoxické alveolámí poškození.

Běžné klinické anti-TNFalfa postupy zahrnují použití kortikosteroidů jako dexamethasonu a použití cyklosporinu-A nebo FK506, jež nejsou specifickými inhibitory cytokinové genové transkripce. Fosfodiasterázové inhibitory jako pentoxyfilin se neukazují jako více specifické inhibitory RNFalfa genové transkripce (Endres S. (1991) Immunol. 72:56-60, Schandene a kol., (1992) Immunol. 76:30-34, Alegre ML a kol., (1991), Transplantion 52:674-679. Biacno a kol., (1991) Blood 78:1205-1221). U talidomidu byla prokázána také inhibice produkce TNFalfa leukocyty (Sampajo a kol., (1991), J. Exp. Med. 173:699-703). Při experimentech bylo ukázáno, že anti-TNFalfa monoklonální protilátky, rozpustné TNF receptory a rozpustné TNF receptory/imunoadhesiny prokazují specificky inhibiční vlivy na působení TNFalfa (Bagby a kol., (1991) J. Infect. Dis. 163:83-88, Charpentier a kol., (1991) Presse-med. 20:2009-2011, Silva a kol., (1990) J. Infect. Dis. 162:421-427, Franks a kol., (1991) Infect. Immun. 59:26092614, Tracey a kol., (1987) Nátuře 330:662-664. Fischer a kol., (1992) PNAS USA v tisku, Lesslauer a kol., (1991) Eur. J. Immunol. 21.:2883-2886, Ashkenazi a kol., (1991) PNAS USA 88:10535-10539).

Nedávno bylo prokázáno, že vlivy TNF jsou zprostředkovány dvěma peptidy, TNFalfa a TNFbeta. Ačkoli má každý z těchto peptidů pouze 30 % homologů, aktivují stejné receptory a jsou kódovány bezprostředně sousedícími geny. V tomto textu znamená termín faktor nádorového odumírání TNF faktor nádorového odumírání alfa a peptidy mající vysoký stupeň sekvence homologů, nebo významně podobné fyziologické účinky, TNFalfa, například TNFbeta. Jeden z předmětů tohoto vynálezu je poskytnutí sloučenin, které významně inhibují vyvíjení THF z buněk, a tedy mohou být použity při léčení onemocnění způsobených THF. Do oblasti použití patří například, aniž by se tím použití jakkoli omezovalo, léčení zánětů, horečnatých onemocnění, kardiovaskulárních onemocnění, krvácení, srážení a akutní fázové odezvy, kachexie a anorexie, akutní infekce, šokové stavy, štěp proti hostiteli a autoimunitní onemocnění.

Sloučeniny, které mají vlastnosti umožňující inhibovat působení metaloproteinas, obsažené v odbourávané pojivové tkáni jako je kolagenáza, stromelysin a želetináza, přičemž se projevuje inhibice vyvíjení TNF jak in vitro tak in vivo (AJH Gearing a kol., (1994), Nátuře, 370:555-557. GM McGeehan a kol., (1994), Nátuře, 370:558-561: MH Crimin a kol., W093/20047). Všechny tyto uvedené inhibitory obsahují vazebnou skupinu kyseliny hydroxamové a zinku.

Dalším předmětem tohoto vynálezu je tedy použití sloučenin, které kromě inhibování vyvíjení TNF, také inhibují působení MMP a proto mohou být použity při léčení pacientů, jež trpí stavy zprostředkovanými TNF a/nebo MMP.

Zkušení odborníci vdané oblasti si uvědomují významný podíl homologů mezi kolagenázou lidské vazivové buňky, stromelysinem a želetinázou vedoucí k možnosti, aby sloučenina, jež inhibuje jeden enzym, mohla do stejného stupně inhibovat i všechny ostatní.

-2CZ 288436 B6

Sloučeniny, jež inhibují kolagenázu, mají strukturální části příbuzné s těmi, jež jsou obsaženy v U.S. 4,511,504, vydaném 16. dubna 1985, U.S. 4,568,666, vydaném 4. února 1986.

Sloučeniny podobné struktury jsou nárokovány pro inhibování stromelysinu (proteoglykanasa) jsou obsaženy v U.S. 4,771,037, vydaném 13. září 1988.

Žadatelé se domnívají, že inhibitory stromelysinu a kolagenázy mají použití při prevenci před poškozením chrupavky kloubní spojeného se septickou artritidou. Bakteriální infekce kloubů mohou vyvolat zánětlivou odezvu, jež se může stát trvalou a tedy je třeba pro úplné potlačení infekční látky použít strukturální složky. U pokusných zvířat byla použita bakteriální činidla k vyvolání artritické odezvy s projevy proteolytických účinků. Viz J. P. Čase a kol., (1989), J. Clin. Invest., 84.1731-40, R. J. Williams a kol., (1990), Arth. Rheum., 33:533—41.

Žadatelé se domnívají, že inhibitory stromelysinu, kolagenázy a želetinázy budou užitečné pro regulování nádorové metastázy, popřípadě ve spojení s běžnou chemoterapií a/nebo ozařováním. Viz L. M. Matrisian a kol., (1986), Proč. Nati., Acad. Sci., USA, 83:9413-7, S. M. Wilhelm a kol., (1987), Ibid. 84:6725-29, Z. Werb a kol., (1989), J. Cell Biol., 109:872-889, L. A. Liotta a kol., (1983), Lab. Invest. 49:636-649. R. Reich a kol., in Metastasis, Ciba Foundation Symposium, Wiley, Chicester, 1988, str. 193-210.

Vylučované proteinasy jako je stromelysin, kolagenáza a želetináza, hrají důležitou roli v procesech při pohybu buněk během metastatické nádorové invaze. Je ovšem také evidentní, že matrice metaloproteinas jsou přílišně exprimovány do určitých linií metastatických nádorových buněk. V této souvislosti enzym vykonává funkci pronikat spodní základní částí membrán a umožňuje nádorové buňce uniknout z místa primární tvorby nádoru a vstoupit do oběhu. Po přilnutí ke stěně krevní cévy používá nádorová buňka stejné metaloproteinasy k proniknutí spodní základní částí membrán a prostupuje jinými tkáněmi, což vede k nádorovým metastázám. Inhibice tohoto procesu by mohla být použita k prevenci metastáz a ke zlepšení účinnosti běžné léčby s chemoterapií a/nebo ozařováním. Tyto inhibitory lze také použít ke kontrolování a regulaci periodontálních onemocnění, jako je zánět dásní. Jak aktivitu kolagenázy, tak stromelysinu lze oddělit od vazivových buněk odvozených od zanícené dásně (V. J. Uitto a kol., (1981), J. Periodontal Res., 16:417-424). Hladina enzymů byla korelovány na intenzitu onemocnění dásně, C. M. Overall a kol., (1987), J. Periodontal Res., 22:81-88.

Proteolytické procesy byly také pozorovány při ulceraci rohovky následující po popálení zásaditou látkou (S. I. Brown a kol., (1969), Arch. Opthalmol., 81.:370-373). Peptidy obsahující merkaptoskupinu zabraňují izolaci kolagenázy od rohovky králíka popálené zásaditou látkou (F. R. Bums a kol., (1989), Invest. Opthalmol, 30:1569-1575). Při léčení očí popálených zásaditou látkou nebo očí prokazujících ulceraci rohovky jako výsledek infekce, mohou být inhibitory těchto metaloendoproteinas ve spojení s citrátem sodným nebo askorbatem sodným a/nebo bakteriostatiky, účinné při zabránění vývoje rozkladu rohovky.

Stromelysin byl zahrnut do degradace strukturálních složek glomerulámí základní části membrány (glomerular basement membrane = GMB) ledviny, přičemž hlavní funkce spočívá v omezení cesty plazmových proteinů do moče (W. H. Baricos a kol., (1989), Biochem. J., 254:609-612). Proteinurie, výsledek glomerulámího onemocnění, je přebytek bílkovin v moči způsobený zvýšenou propustností GMB do plazmových proteinů. Důvody, vedoucí ke zvýšené propustnosti GMB nejsou známé, ale proteinasy včetně stromelysinu mohou hrát při glomerulámích onemocněních důležitou roli. Inhibice tohoto enzymu může zmírnit proteinurii spojenou s nesprávnou funkcí ledvin.

Navrhuje se, aby inhibice aktivity stromelysinu mohla působit preventivně na praskání aterosklerotického povlaku, vedoucí ke koronární trombóze. Natržení nebo prasknutí aterosklerotického povlaku je nejběžnější případ začátku koronární trombózy. Destabilizaci a degradaci matrice pojivové tkáně v okolí těchto povlaků proteolytickými enzymy nebo cytokiny

-3CZ 288436 B6 uvolňovanými infiltrací zánětlivých buněk je tedy možno pokládat za příčinu rozštěpení povlaku. Natržení těchto povlaků může způsobit akutní trombolytické případy jako rychlé vytékání krve z krevní cévy. Byly zjištěny údaje o tom, že byly lokalizovány vysoké koncentrace stromelysinu RNA v jednotlivých buňkách v aterosklerotických povlacích odstraněných ze srdce při transplantaci pacientů při operaci (A. M. Henney a kol., (1991), Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88:8154-8158). Inhibice stromelysinu těmito sloučeninami může pomoci při prevenci nebo zdržení degradace matrice pojivové tkáně, jež stabilizuje aterosklerotické povlaky, tím i k prevenci v případech vedoucích k akutní koronární trombóze.

Je také možné se domnívat, že specifické inhibitory stromelysinu a kolagenázy by byly užitečné jako činidla k regulaci porodnosti. Je zřejmé, že exprese metaloproteinas, včetně stromelysinu a kolagenázy, je pozorována u neoplodněných vajíček a zygot a při dalších stadiích rýhování (štěpení) a zvětšování u stadia blastocysty při vývoji plodu a s endodermické diferenciaci (C. A. Brenner a kol., (1989), Genes and Develop., 3:848-59). Analogicky k nádorové invazi mohou blastocyty vytlačovat metaloproteinasy, aby pronikly mimobuněčnou matricí děložní stěny během implantace. Inhibice stromelysinu a kolagenázy během těchto procesů raného vývoje by pravděpodobně bránila normálnímu embryonálnímu vývoji a/nebo implantaci v děloze. Takový zákrok by znamenal založení nového způsobu regulace porodnosti. Kromě toho je zřejmé, že při ovulaci je důležitá kolagenáza. V tom případě musí pokrytí kolagenu apikální oblasti folikulu pronikat tak, aby vajíčko mohlo uniknout. Během tohoto procesuje nutné stanovovat kolagenázu a jakýkoli inhibitor by měl prokazovat účinnost při zabránění ovulaci (J. F. Woessner a kol., (1989), Steroids, 54:491-499). Během ovulace může hrát také určitou roli aktivita stromelysinu (C. K. L. Too a kol., (1984), Endocrin., 115:1043-1050).

Aktivita kolagenázy a stromelysinu byla také pozorována u dystrofické bulózní epidermolýzy (A. Kronberger a kol., (1982), J. Invest. Dermatol., 79:208-211, D. Sawamura a kol., (1991), Biochem. Biophys. Res. Commun., 184:1003-8). Inhibice metaloproteinas by měla omezovat rychlou destrukci pojivových složek v kůži.

Kromě mimobuněčné matrice obsahující strukturální složky, může stromelysin degradovat jiné in vivo spodní vrstvy včetně inhibitorů ai-proteinasového inhibitoru a může ovlivňovat aktivity jiných proteinas jako je elastáza (P. G. Winyard a kol., (1991), FEBS Letts., 279.1:91-94). Inhibici matrice mohou metaloproteinasy potenciovat antiproteinasovou aktivitu těchto endogenních inhibitorů.

Z nedávných publikací je zřejmé, že bylo identifikováno několik nových enzymů čeledě MMP, z nichž některé mohou být při onemocněních důležité. Kolagenáza 3, jedinečný enzym u buněk karcinomu, prsu, může mít důležitost u rakoviny prsu (JMP Freije a kol., (1994), J. Biol. Chem., 269(24):16766-16773). zatímco jiný člen čeledě MMP prokázal, že jejich klíčovým enzymem při aktivaci želatinázy A (H. Sáto a kol., (1994). Nátuře, 370:61-65). Želatináza A je důležitý enzym při růstu nádorové metastázy (jak je definováno výše).

Degradace beta-Amyloidu Prekurzoru Proteinu (APP) ukázala, že se generují amyloidní povlaky, hlavní složka senilních povlaků, nalezených u pacientů s Alzheimerovou nemocí (Alzheimers Disease - AD). Ve dvou nedávných publikacích byly identifikovány metaloproteinasové enzymy, které štěpí APP u amyloidních povlaků (CR Abraham a kol., (1994), Biochemistry, 33:192-199. G. Huber a kol., (1994), Biochem. Biophys. Res. Comm., 201(1):45-53).

Jak je zřejmé pro odborníky v dané oblasti techniky, vedou významné podíly homologů mezi těmito novými enzymy a jinými MMP k možnosti, že sloučeniny, které inhibují jeden enzym, mohou do určitého stupně inhibovat tyto nové enzymy. Proto inhibitory, obsažené v tomto vynálezu, mohou být užitečné při nemocích, kdy jsou implikovány tyto nové enzymy.

-4CZ 288436 B6

Podstata vynálezu

Tento vynález obsahuje nové merkaptoalkylpeptidylové sloučeniny obecného vzorce I, které jsou užitečné jako inhibitory matrice metaloproteinas a/nebo TNFalfa zprostředkovaných onemocnění včetně degenerativních onemocnění (jak je výše definováno) a určitých karcinomů.

Prvním aspektem tohoto vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I

kde:

R* je Cj_β alkyl, C2-6 alkenyl, C]_g alkyl aryl, aryl, Cj_6 alkyl heteroaryl, heteroaryl nebo -Ci_6 alkyl-AR⁹ kde A znamená O, NR⁹ nebo S(O)_m kde m = 0 až 2, a R⁹ je H, C]_4 alkyl, aryl, heteroaryl, -Cm alkyl-aryl nebo -Cm alkyl-heteroaryl, jestliže A = NR⁹, skupiny R⁹ mohou být stejné nebo odlišné,

R² je H nebo Cm alkyl,

R³ je /Alk/nR⁶ kde Alk je Ci_6 alkyl nebo C2_6 alkenyl a n je nula nebo 1,

X je NR⁴R⁵ kde buď R⁴ je vodík, nebo Cm alkyl popřípadě substituovaný aminoskupinou (NH2), ary lem, alkylaminoskupinou, chráněnou aminoskupinou, di(Cj_6 alkyl)amino, mono(Ci_6 alkyl)amino, CO₂H, chráněným karboxylem, karbamoylem, mono(Ci_6 alkyl)karbamoylem nebo di(C]_6 alkyl)karbamoylem, a

R⁵ je vodík, nebo alkyl, nebo NR⁴R⁵ tvoří kruh jako pyrrolidino, piperidino nebo morfolino,

R⁷ je vodík nebo R¹⁰CO kde R¹⁰ je Cm alkyl-C]^ alkyl-aryl, -Cm alkyl-heteroaryl, cyklo(C₃_6)alkyl, -Cm alkyI-cykIo(C3_6)alkyl, C₂_6 alkenyl, -C₂_6 alkenyl-aryl, aryl nebo heteroaryl,

R⁸ je aryl (substituovaný Rⁿ), heteroaryl (popřípadě substituovaný R¹¹), Cm alkyl-R¹¹, -Cm alkyl-aryl (substituovaný R¹¹), -Cm alkyl-heteroaryl (popřípadě substituovaný R¹¹), cyklo(C3_6)alkyl (popřípadě substituovaný R¹¹), cyklo(C3_6)alkenyl (popřípadě substituovaný R¹¹), -Cm alkyl-cyklo(C₃_e)alkyl (popřípadě substituovaný R^ir) nebo jakákoli z těchto tří skupin

-5CZ 288436 B6 nebo

Co-élkyi o

C^aJkyi

kde p je 1 nebo 2 a B a C jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří O, S, C(R⁹)₂ a NR⁹,

R⁶ je AR⁹, cyklo(C3_6)alkyl, cyklo(C36)alkenyl, CM alkyl, -Ci_6 alkoxy-aryl, benzyloxyaryl, aryl, heteroaryl, -Ci_3 alkyl-heteroaryl, -Ci_3 alkyl-aryl, -Cm alkyl-COOR⁹ Ci_6 alkyl-NHR, CONHR, NHCO2R, NHSO2R nebo NHCOR, přičemž R je definováno jako je tomu uR¹⁰,

R¹¹ je SO2R¹³, SR⁷, SR⁹, COR¹³, N(R⁹)2, NR⁹R¹², OR⁹, sukcinimido nebo ftalimido,

R¹² je H nebo COR⁹, CO2R⁹ (kde R⁹ není H), CONHR⁹ nebo SO2R (kde R⁹ není H), a

R¹³ je OH, OC]_4 alkyl, Ο-Cm alkyl-aryl, N(R⁹)₂ (kde substituenty R⁹ jsou stejné nebo odlišné), Cm alkyl, aryl, heteroaryl, -Ci_4 alkyl-aryl nebo -Cm alkyl-heteroaryl, tyto sloučeniny jsou ve formě soli, ve formě netvořící sůl, ve formě solvatované nebo hydratované.

Mezi výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu patří takové, jež obsahují nezávisle nebo v nějaké kombinaci:

R¹ je C]-6 alkyl nebo Cm alkyl-AR⁹ kde Aje S(O)_m, NR⁹, nebo O a m = 0, 1 nebo 2, a R⁹ je H, Cm alkyl nebo aryl

R² je H nebo Cm alkyl

R³ je /Alk/nR⁶ kde n = 0 nebo 1, Alk je Cw alkyl a R⁶ je Cm alkyl, Ci_₃ alkylaryl, Ci_₃ alkylheteroaryl nebo AR⁹,

R⁴ je H, R⁵ je H nebo C₁₆ alkyl,

NR⁴R⁵ může tvořit pětičlenný až sedmičlenný kruh jako pyrrolidin, piperidin nebo morfolin,

R⁷ je H nebo R¹⁰CO kde R¹⁰ je CM alkyl, R⁸ je CM alkylR¹ ’, Cm alkenylR¹', Cyklo(C36)alkylR¹¹, R¹¹ je COR¹³, NR⁹R¹², N(R⁹)2, sukcinimido nebo ftalimido, R¹² je COR⁹, CO2R⁹ (kde R⁹ není H), nebo SO₂R⁹ (kde R⁹ není H), aR¹³ je OH, OCm alkyl nebo N(R⁹)₂.

-6CZ 288436 B6

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mají hodnoty indexu IC₅₀ nižší než 50 mM oproti MMP enzymům a/nebo nižší než 50 mM při celkovém stanovení buněčné TNF inhibice.

Je zajímavé, že sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou obsahovat jeden nebo více asymetricky substituovaných atomů uhlíku, například ty, jež jsou označeny hvězdičkou v obecném vzorci I. Přítomnost jednoho nebo více těchto asymetrických center ve sloučenině obecného vzorce I mohou poskytovat ve zvýšené míře stereoizomery, a v každém případě se v tomto vynálezu rozumí, že jsou zahrnuty všechny takové izomery, včetně enantiomerů a diastereomerů, a směsi obsahující jejich racemické směsi. Ve vzorcích, jež jsou zde uvedeny, je znak (vlnka) použit pro potenciální asymetrické centrum pro označení ~ možnosti konfigurace R- a S-, znak < (menší než) a.... reprezentuje jednotnou konfiguraci na asymetrickém centru.

V této přihlášce jak samotný, tak v kombinaci, znamená termín „C]_6 alkyl“ přímý nebo rozvětvený řetězec alkylové části mající od jednoho do šesti atomů uhlíku, přičemž je například zahrnut methyl, ethyl, propyl, izopropyl, butyl, terc.butyl, pentyl, hexyl a podobně.

Termín „Ci_4 alkyl“ znamená přímý nebo rozvětvený řetězec alkylové části mající od jednoho do čtyř atomů uhlíku, přičemž je zahrnut například methyl, ethyl, propyl, izopropyl, butyl, terc.butyl a podobně.

Termín „C₂_6 alkenyl“ znamená přímý nebo rozvětvený řetězec alkylové části mající dva až šest atomů uhlíku a mající kromě toho jednu dvojnou vazbu, kde buď E, nebo Z jsou stereochemicky aplikovatelné, přičemž je zde zahrnut například vinyl, 1-propenyl, 1- a 2-butenyl, 2-methyl-2propenyl atd.

Termín „cyklofC^jalkyl“ znamená nasycenou alicyklickou část mající od třech do šesti atomů uhlíku a patří sem například cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a podobně.

Termín „cyklo(C₃_6)alkenyl“ se týká alicyklické části mající od tří do šesti atomů uhlíku a mající navíc jednu dvojnou vazbu. Sem patří například cyklopentenyl nebo cyklohexenyl.

Termín „aryl“ znamená popřípadě substituovanou fenylovou nebo nafiylovou skupinu se substituentem (substituenty) jež je vybrán ze skupiny zahrnující například halogen, trifluormethyl, Ci_6 alkyl, alkoxy, fenyl a podobně. Termín „halogen“ znamená fluor, chlor, brom nebo jod.

Termíny „chráněná amino“ a „chráněná karboxy“ znamenají aminoskupiny a karboxylové skupiny, které jsou chráněné způsobem, známým pro zkušené odborníky v dané oblasti techniky. Například aminoskupina může být chráněna benzyloxykarbonylem, terc.butoxykarbonylem, acetylem nebo podobnými skupinami, nebo ve formě ftalimidové nebo podobné skupiny. Karboxylová skupina může být chráněna ve formě snadno štěpitelného esteru jako methylester, ethylester, benzylester nebo terc.butyl ester.

Termín „alkoxy“ znamená alkoxyskupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující nejvýše šest atomů uhlíku, jako je methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxyskupina, butoxyskupina, terc.butoxyskupina apod.

Termín „C<m alkyl“ znamená vazbu nebo přímý nebo rozvětvený řetězec alkylové části mající do čtyř atomů uhlíku, přičemž je zahrnut například methyl, ethyl, propyl, izopropyl apod.

Termín „heteroaryl“ znamená aromatické kruhové systémy o pěti až deseti atomech, z nichž alespoň jeden je vybrán ze skupiny, tvořené kyslíkem, dusíkem nebo sírou.

Mezi soli sloučenin obecného vzorce (I) patří farmaceuticky přijatelné soli, například adiční soli kyselin, odvozené od anorganických nebo organických kyselin, jako jsou hydrochloridy,

-7CZ 288436 B6 hydrobromidy, yj-toluensulfonaty, fosfáty, sulfáty, perchloráty, acetáty, trifluoracetáty, propionaty, citráty, malonaty, sukcinaty, laktaty, oxalaty, vinany a benzoáty.

Soli se mohou také tvořit se zásaditými látkami. Mezi takové soli odvozené od organických zásaditých látek například patří soli alkalických kovů jako jsou soli hořčíku nebo vápníku, a organické aminové soli jako jsou morfolinové, piperidinové, dimethylaminové nebo diethylaminové soli.

Když je „chráněná karboxy“ skupina ve sloučeninách podle tohoto vynálezu esterifikována karboxylovou skupinou, může to být metabolicky labilní ester obecného vzorce CO₂R¹⁴, kde R¹⁴ může být ethylová, benzylová, fenethylová, fenylpropylová, alfa-naftylová nebo beta-naftylová, 2,4-dimethylfenylová, 4-terc.butylfenylová, 2,2,2-trifluorethylová, l-(benzyloxy)benzylová, 1(benzyloxy)ethylová, 2-methyl-l-propionyloxypropylová, 2,4,6-trimethylbenzyloxymethylová nebo pivaloyloxymethylová skupina.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být připraveny jakýmkoli vhodným způsobem, známým v dané oblasti techniky a/nebo následujícími způsoby, které tvoří část tohoto vynálezu.

Podle druhého aspektu tohoto vynálezu se poskytuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I jak je definováno výše. Je oceňováno, že se požaduje jednotlivý stereoizomer sloučeniny obecného vzorce I, zde popsaný syntetický způsob lze použít s určitou homochirální výchozí látkou a/nebo mohou být izomery rozpuštěny ze směsí za použití konvenčních separačních způsobů (například HPLC).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být připraveny následujícím způsobem. V popisu a ve výše uvedených obecných vzorcích jsou skupiny R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹, R , R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, A, B, C a X takové, jak bylo výše definováno, kromě případů, kdy je uvedeno jinak. Je oceňováno, že funkční skupiny jako jsou aminové, hydroxylové a karboxylové skupiny, přítomné v rozmanitých sloučeninách popsaných níže, a které jsou žádané, mohou být v chráněné formě před začátkem reakce. Vhodnými chránícími skupinami pro tuto funkci jsou ty, které jsou známé odborníkům v dané oblasti techniky. Pro specifické detaily lze odkázat na monografii „Protective Groups in Organic Synthesis“, Wiley Interscience, T. W. Greene, PGM Wuts.

Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce (I) sestává z těchto kroků: odstranění ochrany (například hydrolýzou) sloučeniny obecného vzorce II:

kde R⁷ znamená vhodnou chránící skupinu (například terc.butylovou nebo acetanovou).

Je oceňováno, když je požadován jednotlivý stereoizomer obecného vzorce I, pokud se může získat konvenčními rozpouštěcími způsoby jako je vysoce účinná kapalná chromatografie. Pokud se vyžaduje, mohou být použity přiměřené homochirální výchozí látky pro kopulační reakci k získání určitého stereoizomeru obecného vzorce I. Na příkladech je to uvedeno níže.

Meziprodukty obecného vzorce II mohou být připraveny interakcí kyseliny obecného vzorce ΠΙ

-8CZ 288436 B6 (ΙΠ)

ΌΗ kde R⁷ a R⁸ mají význam tak, jak je výše definováno, nebo jejich aktivní deriváty, s aminem obecného vzorce (IV)

Mezi aktivní deriváty kyselin obecného vzorce III patří například anhydridy kyselin nebo halogenidy kyselin, jako jsou chloridy kyselin.

Kopulační reakce může být provedena za použití standardních podmínek pro aminační reakce tohoto typu. Reakce se tedy může provádět v rozpouštědle, například v inertním organickém rozpouštědle jako je ether, například cyklický ether jako je tetrahydrofuran, amid, například substituovaný amid jako je dimethylformamid, nebo halogenovaný uhlovodík, jako je dichlormethan, při nízké teplotě například -30 °C až k teplotě okolí, například od -20 °C do 0 °C, popřípadě za přítomnosti zásadité látky, například organické zásadité látky jako je amin, například triethylamin nebo cyklický amin jako je N-methylmorfolin. Když se použije kyselina obecného vzorce (ΠΙ), reakce může být dodatečně vedena za přítomnosti kondenzačního činidla, například diimidu jako je Ν,Ν-dicyklohexylkarbodiimid, s výhodou za přítomnosti triazolu jako je 1-hydroxybenzotriazol. Alternativně se může tato kyselina nechat reagovat s chlorformiatem, například ethylchlorformiatem, před reakcí s aminem obecného vzorce IV.

Amin obecného vzorce IV může být připraven kopulací kyseliny obecného vzorce V nebo jejího aktivního derivátu

R

s aminem obecného vzorce (VI)

a poté následuje odstranění chránící skupiny.

Mezi deriváty kyselin obecného vzorce V patří například anhydridy kyselin nebo halogenidy kyselin jako chloridy kyselin jako je uvedeno na začátku tohoto popisu.

Aminokyseliny a jejich deriváty jsou znázorněny obecnými vzorci V a VI lze získat v chirální nebo racemické formě. V chirální formě se použije asymetrických stavebních bloků pro chirální syntézu sloučenin obecného vzorce I. Mnohé z těchto derivátů mohou být snadno získány z komerčně dostupných výchozích látek za použití způsobů, známých odborníkům v dané oblasti

-9CZ 288436 B6 techniky. (Viz „The practise of Peptide Synthesis“, M. Bodanszk a kol., Springer Verlag, New York, 1984, P. L. Durette, WO92/21360).

Dalším rozšířením tohoto vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce II jež mohou být připraveny nukleofílní substitucí sloučenin obecného vzorce VII

(Vil) kde R¹⁵ znamená vhodnou odstupující skupinu (například halogen jako je bromid, nebo alkylsulfonylester jako je methansulfonat) a thiolem obecného vzorce VIII

R⁷SH (VIII) kde R⁷ znamená vhodnou chránící skupinu (například terc.butyl nebo acetát), za použití standardních podmínek, známých odborníkům v dané oblasti techniky jak je například uvedeno vW090/05719. Thioly obecného vzorce VIII mohou být získány z komerčně dostupných výchozích látek za použití způsobů známých odborníkům v dané oblasti techniky. Mnohé thioly obecného vzorce VIII jsou rovněž komerčně dostupné.

Sloučeniny obecného vzorce VII mohou být připraveny kopulací kyseliny obecného vzorce IX

kde R¹⁵ a R⁸ mají význam tak, jak je definováno výše (nebo jejich vhodné chráněné verze) nebo jejich aktivní deriváty, s aminem obecného vzorce IV za použití podobných kopulačních podmínek, jako jsou popsány při přípravě sloučenin obecného vzorce II.

Karboxylové kyseliny se strukturou, znázorněnou v obecných vzorcích III a IX mohou být získány v chirální nebo racemické formě. Mnohé z těchto derivátů mohou být snadno získány z komerčně dostupných látek za použití způsobů, známých odborníkům v dané oblasti techniky (viz W090/05719).

Dalším rozšířením tohoto vynálezu jsou meziprodukty obecného vzorce X

(X) kde R¹, R⁷ a R⁸ mají význam tak, jak je výše definováno, nebo jejich aktivní deriváty, s aminem obecného vzorce VI dříve popsaným způsobem.

-10CZ 288436 B6

Kyseliny obecného vzorce X mohou být připraveny kopulací kyseliny obecného vzorce III nebo jejího aktivního derivátu s aminem obecného vzorce VI, kde X=OH nebo její vhodný chráněný derivát následuje po odstranění chránících skupin.

Mezi aktivní deriváty kyselin obecného vzorce V patří například anhydridy kyselin nebo halogenidy kyselin jako jsou chloridy kyselin jak je uvedeno na začátku tohoto popisu.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být také připraveny interkonverzí jiných sloučenin obecného vzorce I. Tedy například sloučenina obecného vzorce I, kde R¹ je Ci_6 alkylová skupina, může být připravena hydrogenací (za použití palladia na aktivním uhlí ve vhodném rozpouštědle, jako je alkohol - například ethanol) sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ je C₂_6 alkenylová skupina. Další příklad by mohl zahrnovat sloučeninu obecného vzorce I, kde R⁷ je skupina R¹⁰CO, jež může být připravena acylací (za použití chloridu vhodné kyseliny R^l0COCl, za přítomnosti zásadité látky jako je triethylamin ve vhodném rozpouštědle jako jsou chlorovaná rozpouštědla - například dichlormethan) sloučeniny obecného vzorce I kde R⁷ je vodík.

Získané směsi finálních produktů nebo meziproduktů mohou být separovány na základě rozdílných fyzikálně chemických vlastností známými způsoby na čisté finální produkty nebo meziprodukty, například pomocí chromatografie, destilace, fřakční krystalizace nebo utvořením solí, pokud je to možné nebo žádané podle daných podmínek.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu prokazují in vitro inhibiční aktivity vzhledem k stromelysinu, kolegenase a želetináze. Sloučeniny podle tohoto vynálezu také prokazují in vitro inhibici vývoje TNFalfa. Aktivita a selektivita těchto sloučenin může být určena za použití vhodného enzymatického inhibičního testu, například jak je popsáno ve zde uvedeném Příkladu A.

Tento vynález se také týká způsobu léčení pacientů (včetně lidí a/nebo živočichů - savců, chovaných na mléko, maso nebo pro průmysl nebo jako domácí zvířata) jež se mají chránit před potížemi nebo onemocněními, jež mohou být připisovány matricím metaloproteinas a/nebo TNFalfa, jak bylo dříve popsáno, a specifičtěji pak způsobu léčení včetně podávání metaloproteinasových inhibitorů obecného vzorce I jako aktivních složek.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být dále použity mezi jinými látkami při léčení osteoartritidy a revmatické artritidy, a při onemocněních a indikacích, jež souvisí s nadměrnou expresí těchto matric metaloproteinas, jak bylo nalezeno u určitých metastatických nádorových buněk.

Jak bylo uvedeno výše, sloučeniny obecného vzorce I jsou užitečné v humánní nebo veterinární medicíně pokud jsou aktivní jako inhibitory TNFalfa a MMPs. Podle jiného aspektu se tento vynález týká:

způsobu zvládnutí (čímž se míní léčení nebo ochrana) nemocí nebo potíží zprostředkovaných TNFalfa a/nebo MMPs u savců, zejména u lidí, přičemž způsob zahrnuje podávání savcům účinné množství sloučeniny obecného vzorce I jak je výše uveden, nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí, a sloučeniny obecného vzorce I pro použití v humánní nebo veterinární medicíně, zejména ke zvládnutí (čímž se míní léčení nebo ochrana) onemocnění nebo potíží zprostředkovaných TNFalfa a/nebo MMs, a použití sloučeniny obecného vzorce I pro přípravu činidla pro zvládnutí (čímž se míní léčení nebo ochrana) nemocí nebo potíží zprostředkovaných TNFalfa a/nebo MMPs.

Onemocnění nebo potíže uvedené výše zahrnují záněty, horečku, kardiovaskulární vlivy, krvácení, koagulace a akutní fázové odezvy, kachexii a anorexii, akutní infekce, šokové stavy, štěp proti hostiteli a autoimunitní onemocnění, patří mezi ně poškození tkáně jako je kostní resorpce, zánětlivá onemocnění, dermatologické potíže, růst nádorů, angiogeneze a invaze sekundárními metastázami, zejména reumatoidní artritida, osteoartritida, záněty závěsného

-11CZ 288436 B6 aparátu, záněty dásní, ulcerace rohovky, růst nádorů, angiogeneze a invaze sekundárními metastázami.

K léčení revmatické artritidy, osteoartritidy, a u nemocí a příznaků, souvisejících s nadměrnou expresí matrice metaloproteinas jak bylo zjištěno u určitých metastatických nádorových buněk nebo jiných onemocnění zprostředkovaných matricí metaloproteinas nebo zvýšenou produkcí TNFalfa, mohou být sloučeniny obecného vzorce I podávány orálně, lokálně, parenterálně, inhalací sprejů nebo rektálně v dávkové jednotce formulací obsahujících netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky nebo masťové základy. Termín “parenterální“ ve významu, jak je zde použit, zahrnuje podkožní injekce, intravenózní, vnitrosvalové, intrastemální injekce nebo infuzní způsoby. Kromě léčení teplokrevných živočichů jako jsou myši, krysy, koně, skot, ovce, psi, kočky atd., jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu účinné při léčení lidí.

Farmaceutický prostředek obsahující tuto aktivní látku, může být ve formě, která je vhodná k orálnímu použití, například jako tablety, pastilky, pilulky, vodné nebo olejové suspenze, disperzibilní prášky nebo granule, emulze, tvrdé nebo měkké oplatky s práškem nebo sirupy či elixíry. Prostředky určené k orálnímu podávání mohou být připraveny způsoby, známými v dané oblasti techniky pro přípravu farmaceutických prostředků a takovéto prostředky mohou obsahovat jedno nebo více činidel, vybraných ze skupiny sestávající ze sladidel, barviv, vonných látek a konzervačních činidel pro poskytnutí přípravků příjemné chuti, vůně a atraktivního vzhledu. Tablety obsahují aktivní složku v příměsi snetoxickými farmaceuticky přijatelnými masťovými základy (vehikuly), jež jsou vhodné pro výrobu tablet. Těmito vehikuly mohou být například inertní ředidla, jako je karbonát vápenatý, karbonát sodný, laktóza, fosfát vápenatý nebo fosfát sodný, granulační a disintegrační činidla, například kukuřičný škrob nebo kyselina alginová, pojivá, například škrob, želatina nebo akáciová klovatina a maziva, například stearát hořečnatý, kyselina stearová nebo talek. Tablety nemusí být potahované nebo mohou být potahované známými způsoby pro vytrvalý účinek a pro absorbování gastrointestinálním traktem a tím poskytují trvalé působení po dlouhou dobu. Například je možno použít dobu opožděného (načasovaného) účinku látky jako je glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát. Mohou být také potahovány způsoby, popsanými v US patentech 4 256 108, 4 166 452 a 4 265 874 pro tvoření osmotických terapeutických tablet pro regulované vyvíjení.

Formulace pro orální použití mohou být též reprezentovány tvrdými želatinovými tobolkami, kde je aktivní složka smíchána s inertním ředidlem, například s karbonátem vápenatým, fosfátem vápenatým nebo kaolinem, nebo to mohou být měkké želatinové tobolky, kde je aktivní složka smíchána s vodným nebo olejovým prostředkem, například to může být arašídový olej, kapalný parafín nebo olivový olej.

Vodné suspenze obsahují aktivní látku v příměsi s masťovými základy pro přípravu vodných suspenzí. Tyto masťové základy jsou suspenzační Činidla, například natriumkarboxymethylcelulóza, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, natriumalginat, polyvinylpyrrolidon, tragantová klovatina a akáciová klovatina, dispergační nebo vlhčící činidla mohou být v přírodě se vyskytující fosfátidy, například lecitin nebo kondenzační produkty alkylenoxidů s mastnými kyselinami, například polyoxyethylenstearát nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s alkoholy majícími dlouhý alifatický řetězec, například heptadekaethylenoxyacetanol nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s parciálními estery odvozenými od mastných kyselin a hexitol jako polyoxyethylen s parciálními estery odvozenými od mastných kyselin a anhydridů hexitolu, například polyoxyethylensorbitanmonooleát. Vodné suspenze mohou také obsahovat jedno nebo více konzervačních prostředků, například ethyl nebo n-propyl, p-hydroxybenzoat, jedno nebo více barviv, jednu nebo více chuťových aromatických látek a jedno nebo více sladidel jako je sacharóza nebo sacharin.

Olejové suspenze mohou být formulovány suspenzováním aktivní látky v rostlinném oleji, například to může být arašídový olej, olivový olej, sezamový olej nebo kokosový olej, nebo v minerálním oleji jako je kapalný parafín. Olejové suspenze mohou obsahovat zahušťovací

-12CZ 288436 B6 činidlo, například včelí vosk, pevný parafín nebo cetylalkohol. Sladidla mohou být táž, jak je uvedeno výše a u prostředků k orálnímu podávání mohou být přidávány chuťové a aromatické látky. Tyto prostředky mohou být konzervovány navíc antioxidanty jako je kyselina askorbová.

Disperzibilní prášky a granule vhodné k přípravě vodných suspenzí přidáním vody mají aktivní složku v příměsi s dispergačním nebo vlhčícím prostředkem, suspenzačním činidlem a jednou nebo více konzervačními látkami. Jsou uvedeny příklady vhodných dispergačních nebo vlhčících činidel a suspenzační prostředky, dále mohou být také přítomna sladidla, vonné a chuťové aromatické látky a barviva.

Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu mohou být také ve formě emulzí oleje ve vodě. Olejovou fází může být rostlinný olej, například olivový olej nebo arašídový olej nebo minerální olej, například kapalný parafín nebo jejich směsi. Vhodnými emulzifíkačními činidly mohou být v přírodě se vyskytující klovatiny, například akáciová nebo tragacanthová klovatina, v přírodě se vyskytující fosfátidy, například sója, lecitin a estery nebo parciální estery odvozené od mastných kyselin a hexitolové anhydridy, například sorbitanmonooleát a kondenzační produkty uvedených parciálních esterů s ethylenoxidem, například polyoxyethylensorbitanmonooleát. Tyto emulze také mohou obsahovat sladidla a aromatické chuťové látky, event. barviva.

Sirupy a elixíry mohou být formulovány se sladidly, například s glycerolem, propylenglykolem, sorbitolem nebo sacharózou. Tyto formulace mohou také obsahovat uklidňující látku, konzervační a chuťové aromatické prostředky. Farmaceutické prostředky mohou být ve formě sterilních vodných nebo oleagenních suspenzí k použití jako injekce. Takováto suspenze může být formulována podle používaných způsobů v dané oblasti techniky za použití vhodných dispergačních nebo vlhčících látek a suspenzačních prostředků, jak bylo uvedeno výše. Tyto sterilní injektabilní prostředky mohou být též ve sterilních roztocích nebo suspenzích vnetoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle, například jako roztok v 1,3— butandiolu. Mezi přijatelné masťové základy a roztoky, jež mohou být použity, patří voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Kromě toho se běžně používají jako prostředí roztoku nebo suspenze sterilní netuhnoucí oleje. Pro tento účel je možno použít například syntetické mono- nebo diglyceridy. Kromě toho nalezly v použití pro prostředky do injekcí mastné kyseliny jako je kyselina olejová.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být také podávány ve formě čípků pro rektální podávání léků. Tyto prostředky mohou být připraveny smícháním léku s vhodným nedráždivým masťovým základem, který je v pevném stavu při obyčejné teplotě místnosti, ale při rektální teplotě je v kapalném stavu, takže při roztávání v rektu se z něj bude uvolňovat lék. Takovými látkami jsou například kakaové máslo a polyethylenglykoly.

Pro místní použití se používají krémy, masti, želé, roztoky nebo suspenze atd., obsahující sloučeniny obecného vzorce I. (Pro uvedený účel zahrnuje tato aplikace při zevním podávání umytí úst a vykloktání).

Velikost dávky se pohybuje od 0,05 mg do 140 mg na kilogram váhy člověka na den, přičemž se podává při výše uvedených příznacích (od 2,5 mg do 7 g na pacienta na den). Například zánět může být účinně léčen podáváním od 0,01 mg do 50 mg sloučeniny na kilogram váhy člověka na den (od 0,5 mg do 3,5 g na pacienta na den).

Množství aktivní složky, jež může být kombinována s nosičem tak, aby se utvořila jednotlivá dávka, je velmi závislé na léčeném pacientovi a na stupni onemocnění a druhu dávkování. Například formulace, určená k orálnímu podávání u lidí může obsahovat od 5 do 95 procent aktivní složky z celkové hmotnosti daného prostředku. Jednotlivé dávkové formy obecně obsahují od 1 do 500 mg aktivní složky.

-13CZ 288436 B6

Rozumí se ovšem, že specifická velikost dávky pro jednotlivé pacienty závisí na různých faktorech včetně aktivity použité specifické látky, věku, tělesné váze, celkovém zdravotním stavu, pohlaví, dietě jež se podává ve stejné době, způsobu podávání, rychlosti uvolňování (exkrece), kombinaci léků a stupni léčeného onemocnění při dané terapii.

Následující Příklady 1 až 79 ilustrují tento vynález a přípravu zde uvedených látek (pomocí čerstvých meziproduktů, jak je uvedeno). Příklad 1 až G ilustruje způsoby testování. V Příkladech jsou použity následující zkratky:

io RT

DCC EDC TNFalfa LPS 15 ELISA teplota místnosti dicyklohexylkarbodiimid hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu nádorový nekrotický faktor alfa lipopolysacharid ELISA-test

Příklady mají blíže ilustrovat tento vynález, avšak nijak neomezují jeho obsah ani rozsah vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Meziprodukt 1 (&S)-2-brom-4-methoxykarbonylbutanová kyselina

Roztok kyseliny d-methyl-D_jL-glutamové (6,0 g) (příprava podle Hanby a kol., J. Chem. Soc.

(1950), 51:3239) a bromid draselný (15,5 g) ve vodné kyselině sírové (1,25M, 100 m se zpracovává při teplotě 0 °C přikapáváním nitritu sodného (4,0 g) po dobu jedné hodiny. Roztok 30 se ochladí z teploty varu na RT a míchá se po dobu dvou hodin, poté se extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené extrakty se suší (MgSO₄) a po odpaření za velmi nízkého tlaku (vakuum) se získá sloučenina, uvedená v titulu ve formě bezbarvého oleje (4,5 g).

TLC R_f 0,14 (25 % EtOAc-hexany)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 2

Kyselina (JČS)-2-brom-5-methoxykarbonylpentanová

Z kyseliny (JčS)-2-amino-5-methoxykarbonylpentanové (1,8 g) (příprava je založena na esterifikaci podle způsobu, jež uvádí Hanby a kol., Chem. Soc. (1950), 51:3239) se připraví látka ve formě světlehnědého oleje (1,95 g).

TLC R_f 0,30 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 3

Kyselina (7ČS)-2-brom-6-methoxykarbonylhexanová

Z kyseliny (R5)-2-amino-6-methoxykarbonylhexanové (3,93 g) (příprava je založena na esterifikaci podle způsobu, jež uvádí Hanby a kol., Chem. Soc. (1950), 5Í:3239) se připraví látka ve formě bezbarvého oleje (4,39 g).

TLC Rf 0,26 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

-14CZ 288436 B6

Meziprodukt 4

Kyselina (AS)-2-acetylmerkapto-3-methoxykarbonylpropionová

Roztok thioacetátu draselného (1,48 g) v methanolu (2 ml) se přidá k roztoku monomethylmaleatu (1,64 g) (připraveného podle způsobu uvedeného vJ. Am. Chem. Soc. (1986), 108:3) a směs se po celou noc míchá při RT. Rozpouštědlo se odstraní odpařením a zbytek se rozdělí mezi vodu (30 ml) a dichlormethan (30 ml), vodná vrstva se okyselí 2N vodnou kyselinou chlorovodíkovou na pH 3. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se suší (MgSO₄) a po odpaření za velmi nízkého tlaku (vakuum) se získá hnědý olej. Purifíkací pomocí kolonové chromatografie (eluování 10% methanolem v dichlormethanu) se získá sloučenina, uvedená v titulu ve formě bezbarvého oleje (0,48 g).

TLC R_f 0,30 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 5

Kyselina (AS)-2-acetylmerkapto-4—methoxykarbonylbutanová

Thiolacetát draselný (2,0 g) se přidá k roztoku meziproduktu 1 (3 g) v ethanolu (30 ml) a směs se míchá při RT po celou noc. Roztok se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (30 ml) a vodu (30 ml). Organická vrstva se pak promyje nasyceným roztokem solanky (30 ml), suší (MgSO₄) a odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu ve formě bezbarvého oleje (1,83 g).

TLC R_f 0,46 (EtOAc)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 6

Kyselina (7čS)-2-acetylmerkapto-5-methoxykarbonylpentanová

Z meziproduktu 2 (1,89 g) ve formě žlutého oleje (0,87 g).

TLC R_f 0,30 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 7

Kyselina (&S)-2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanová

Z meziproduktu 3 (4,3 g) ve formě žlutého oleje (1,95 g).

TLC R_f 0,23 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 8 (RS\-{ 1,1 -dimethylethyl)-2,4-dibrombutyrat

Brom (31,3 ml, 0,54 mol) se přikapává po dobu čtyř hodin a při teplotě 100 °C k dobře míchanému 4-brombutyrylchloridu (100 g, 0,54 mol). Získaný chlorid kyseliny se ochladí a pak se přikapává při teplotě 0 °C k míchanému roztoku terc.butanolu (240 ml) a triethylaminu (64 ml, 0,461 mol) v bezvodém dichlormethanu (600 ml). Přidá se kyselina chlorovodíková (2M) a

-15CZ 288436 B6 vrstvy se oddělí. Organický podíl se pak promyje postupně 10% roztokem disiřičitanu sodného (2 x 500 ml), vodou (500 ml) a solankou (500 ml), suší se (MgSO₄) a po odpaření za velmi nízkého tlaku (vakuum) se získá sloučenina, uvedená v titulu (120 g, 86%) ve formě hnědé kapaliny.

*H NMR (250MHz, CDC1₃), Ref., TMS) 1,50 (9H, s), 2,45 (2H, q), 3,55 (2H, t) a 4,40 (1H, dd)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 9 (&S)-(1, l-dimethylethyl)-2,5-dibrompentanoat

Z 5-bromvalerylchloridu (75 g, 0,37 mol) ve formě hnědého oleje (81 g, 68 %).

Ή NMR (250MHz, CDC1₃), Ref., TMS) 1,50 (9H, s), 1,8-2,3 (4H, m), 3,45 (2H, t) a 4,18 (1H, dd)

Meziprodukt 10 (RS)-{ 1, l-dimethylethyl)-2,6-dibromhexanoat

Z 6-bromhexanoylchloridu (100 g, 0,47 mol) ve formě hnědého oleje (133 g, 87 %).

*H NMR (250MHz, CDC1₃), Ref., TMS) 1,50 (9H, s), 1,6-2,1 (6H, m), 3,4 (2H, t) a 4,1 (1H, dd)

Meziprodukt 11

1,1 -dimethylethyl)-2,4-bis-(acetylmerkapto)butyrat

Thiolacetát draselný (1,51 g, 13,2 mol) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 8 (2 g, 6,6 mol) v methanolu (25 ml) a směs se míchá při RT po celou noc. Směs se pak zředí dichlormethanem (100 ml), promyje se solankou (2x50 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum) na žlutý olej. Purifikací pomocí kolonové chromatografie (eluování 30% dichlormethanem v hexanu) se získá sloučenina v titulu (1,1 g, 57 %) ve formě bezbarvého oleje.

TLC R_f 0,57 (CH₂C1₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 12 (&S)-( 1, l-dimethylethyl)-2,5-bis-(acetylmerkapto)pentanoat

Z meziproduktu 9 (2 g, 6,32 mmol) ve formě bezbarvého oleje (1,12 g, 57 %).

TLC R_f 0,57 (CH₂C1₂)

Meziprodukt 13 (RS)-{ 1, l-dimethylethyl)-2,6-bis-(acetylmerkapto)hexanoat

Z meziproduktu 10 (2 g, 6,32 mmol) ve formě bezbarvého oleje (1,09 g, 57 %).

TLC R_f 0,57 (CH₂C1₂)

-16CZ 288436 B6

Meziprodukt 14

Kyselina (725)-2,3-bis-(acetylmerkapto)propionová

Roztok kyseliny thioloctové (1,12 g) ve vodném lN-hydroxidu draselném (14,7 ml) se přikapává k roztoku kyseliny 2,3-dibrompropionové (1,71 g) ve vodném ΙΝ-hydroxidu draselném (7,35 ml) a směs se míchá po dobu pěti hodin při RT. Hodnota pH se upraví na 8 až 9 přidáním dalšího vodného ΙΝ-hydroxidu draselného a směs se míchá další dvě hodiny, poté se okyselí na pH 1 až 2 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem (2 x 25 ml). Spojené extrakty se suší (Na₂SO₄) a po odpaření se získá žlutý olej. Produkt ze dvou reakcí se spojí a purifikuje se pomocí kolonové chromatografie eluování pomocí 4% kyseliny octové v toluenu), čímž se získá sloučenina, uvedená v titulu jako bezbarvý olej (0,422 g).

TLC R_f 0,15 (5 % AcOH v toluenu)

Meziprodukt 15

Kyselina (725)-2,4-bis-(acetylmerkapto)butyrová

Roztok meziproduktu 11 (1,1 g, 3,7 mmol) v dichlormethanu (50 ml) se zpracuje kyselinou trifluoroctovou (2,9 ml, 37 mmol) a směs se míchá při RT po celou noc. Přidá se voda (50 ml) a směs se extrahuje dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické extrakty se pak promyjí vodou (50 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSO₄) a extrahují se za velmi nízkého tlaku, čímž se získá produkt (870 mg, 98 %) ve formě světležlutého oleje.

TLC R_f 0,12 (25 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 16

Kyselina (725)-2,5-bis-(acetylmerkapto)pentanová

Z meziproduktu 12 (1,1 g, 3,6 mmol) ve formě světležlutého oleje (906 g, 100 %).

TLC Rf 0,12 (25 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 17

Kyselina (725)-2,6-bis-(acetylmerkapto)hexanová

Z meziproduktu 13 (1,1 g, 3,6 mmol) ve formě světležlutého oleje (895 mg, 98 %).

TLC R_f 0,12 (25 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 18

Kyselina 4-ftalimidobutanová

N-karboethoxyftalimid (10,96 g) se v jedné dávce přidá k intenzívně míchanému roztoku kyseliny 4-aminobutanové (5,16 g) a uhličitanu sodného (5,35 g) ve vodě (150 ml) při RT. Směs se míchá, dokud se v podstatě veškerá pevná látka nerozpustí (30 minut), poté se filtruje. Filtrát se okyselí na pH 1 pomocí 6N vodné kyseliny chlorovodíkové (cca 22 ml) a bílá sraženina se shromáždí filtrací a promyje se vodou (150 ml). Pevná látka se suší na vzduchu, poté se odpaří za

-17CZ 288436 B6 velmi nízkého tlaku (vakuum) a získá se sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvé pevné látky (7,35 g), (1,95 g).

Ή NMR (250MHz, CDC1₃, Ref., TMS) d 2,03 (2H, pent.), 2,42 (2H, t), 7,65-7,77 (2H, m), 7,817,90 (2H, m)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 19

Kyselina 5-ftalimidopentanová

Z kyseliny 5-aminopentanové (5,0 g) ve formě bezbarvé pevné látky (6,8 g).

*H NMR (250MHz, CDC1₃, Ref., TMS) d 1,6-1,8 (4H, m), 2,20 (2H, t), 3,85 (2H, t), 7,85-7,95 (2H,m), 10,2 (1H, brs)

Meziprodukt 20

Kyselina 6-ftalimidohexanová

Z kyseliny 6-aminohexanové (5,0 g) ve formě bezbarvé pevné látky (5,8 g).

'HNMR(60MHz, CDC1₃, Ref., TMS) 1,5-2,4 (6H, m), 2,3 (2H, t), 3,8 (2H, t), 7,8-8,1 (1H, br s)

Meziprodukt 21

Kyselina 2-(3-ftalimidofenyl)octová

Z kyseliny 2-(3-aminofenyl)octové (3,0 g) ve formě ne zcela bílé pevné látky (4,0 g, 72 %).

TLC R_f 0,36 (7,5 % MeOH-0,5 % AcOH-CH₂C1₂)

Meziprodukt 22

Kyselina cis-3-aminocyklopent-4,5-enekarboxylová

Roztok racemického laktamu (50 g, 0,458 mol) v 2N kyselině chlorovodíkové (100 ml) se vaří pod zpětným chladičem po dobu jedné hodiny. Směs se pak odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek krystaluje z acetonu, přičemž se získá sůl - hydrochlorid - sloučeniny, uvedené v titulu (73 g, 97 %) ve formě bílé pevné látky.

Tento hydrochlorid (20 g, 0,122 mol) se rozpustí ve vodě (300 ml) a míchaný roztok se upravuje amberlitovou (IRA-67) iontoměničovou pryskyřicí tak, aby se dosáhlo pH 7. Tato pryskyřice se pak odstraní filtrací, rozpouštědlo se odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek krystaluje z acetonu, takže se získá sloučenina, uvedená v titulu (13,7 g, 88%) ve formě bílé pevné látky.

Meziprodukt 23

Kyselina cw-3-ftalimidocyklopent-4,5-enekarboxylová

Z meziproduktu 22 hydrochloridu (22,3 g, 0,136 mol) ve formě bílé pevné látky (13,7 g, 39 %).

TLC R_f 0,37 (1 % AcOH-5 % MeOH-CH₂Cl₂)

-18CZ 288436 B6

Meziprodukt 24

7ra«s-methyl-3-ftalimidocyklopent-4,5-enekarboxylat

Meziprodukt 23 (23,2 g, 0,183 mol) a ftalanhydrid (27,03 g, 0,183 mol) se spolu rozetře na prášek a taví při teplotě 190 °C pod dusíkovou atmosférou za stálého míchání. Směs se pak ochladí na RT a zbytek se zpracuje s ethylacetátem (120 ml). Přidá se aktivní uhlí (1,0 g) a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 30 minut, filtruje se přes celit a filtrát se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá meziprodukt ftalimido-kyselina, 1:1 směs cist trans izomerů jako světležlutá pevná látka (45,7 g, 97 %).

Roztok této kyseliny v methanolu (300 ml) se zpracuje s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 ml) a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 30 minut, poté následuje ochlazení na RT a za velmi nízkého tlaku (vakuum) se odpaří rozpouštědlo. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (400 ml) a roztok se promyje 8% hydrogenuhličitanem sodným (2 x 100 ml) vodou (100 ml) a solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum) za získání ftalimidoesteru jako směs 1:1 cis!trans izomerů. Separací za použití kolonové chromatografíe (eluování 60 % ether-pentan) se získá sloučenina, uvedená v titulu (9,72 g, 20 %) ve formě bílé pevné látky.

TLC Rf 0,46 (40 % pentan-ether)

Meziprodukt 25

Kyselina /ra«s-3-ftalimidocyklopent-4,5-enekarboxylová

Roztok meziproduktu 24 (9,72 g, 35,8 mmol) ve směsi 0,5N kyseliny chlorovodíkové (100 ml) a ledové kyseliny octové (100 ml) se vaří pod zpětným chladičem po dobu 30 minut. Směs se zředí vodou (200 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 100 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá surový produkt, který se krystaluje z etheru (7,56 g, 82 %) ve formě bílé pevné látky.

TLC R_f 0,48 (1 % AcOH-5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 26

Kyselina cw-3-ftalimidocyklopentankarboxylová

Meziprodukt 23 (15,1 g, 58,7 mmol) se hydrogenuje při RT a atmosférickém tlaku nad 5 % palladiem na aktivním uhlí (2 g) v ethylacetátu (700 ml) přes noc. Katalyzátor se pak odstraní filtrací přes celit a filtrát se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (15 g, 98 %) ve formě bílé pevné látky.

TLC Rf 0,37 (1 % AcOH-0,5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 27

Kyselina Zrans-3-ftalimidocyklopentankarboxylová

Z meziproduktu 25 (7,55 g, 29,3 mmol) ve formě bílé pevné látky (7,04 g, 93 %).

TLC Rf 0,47 (1 % AcOH-5 % MeOH-CH₂Cl₂)

-19CZ 288436 B6

Meziprodukt 28

Kyselina cis-( 1, l-dimethyl)-3-ftalimidocyklopentyloctová

Roztok meziproduktu 26 (5,09 g, 19,6 mmol) vbezvodém dichlormethanu (60 ml) se zpracuje s oxalylchloridem (3,4 ml, 39,3 mmol), poté dimethylformamidem (1 kapka). Směs se míchá při RT po dobu dvou hodin a pak se dopaří rozpouštědlo za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá meziprodukt ve formě chloridu kyseliny.

Zbytek se rozpustí v tetrahydrofuranu (30 ml), poté se zpracuje s roztokem diazomethanu v etheru (200 ml, 80 mmol) při teplotě 0 °C. Směs se míchá při RT po celou noc a pak se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá diazoketon ve formě žluté pevné látky. Tento diazoketon se rozpustí v terc.butanolu (100 ml) a vaří se pod zpětným chladičem, a po malých dávkách se přidává roztok benzoátu stříbrného (438 mg, 1,9 mmol) v triethanolaminu (5 ml) po dobu dvou hodin. Tato směs se pak vaří pod zpětným chladičem po další hodinu a pak se ochladí na RT, filtruje se přes celit a filtrát se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá žlutá pevná látka. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (75 ml) a roztok se postupně promývá 8% hydrogenuhličitanem sodným (50 ml), vodou (50 ml) a solankou, suší (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá surový produkt. Purifíkací pomocí kolonové chromatografie (eluování 50 % ether - pentan) se získá sloučenina, uvedená v titulu (3,8 g, 60 %) jako pevná bílá látka).

TLC Rf 0,52 (50 % pentan - ether)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 29

Trans-( 1, l-dimethylethyl)-3-ftalimidocyklopentylacetát

Z meziproduktu 27 (1,41 g, 5,44 mmol) ve formě bílé pevné látky (1,22 g, 70 %).

TLC Rf 0,58 (50 % pentan-ether)

Meziprodukt 30

Kyselina cís-3-ftalimidocyklopentyloctová

Roztok meziproduktu 28 (1,78 g, 5,4 mmol) v dichlormethanu (20 ml) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou (2,1 ml, 27 mmol) a směs se míchá při RT po celou noc. Roztok a přebytek kyseliny trifluoroctové se odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (1,41 g, 86 %) ve formě pevné bílé látky.

TLC Rf 0,32 (30 % pentan - ether)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 31

Kyselina Zra«5-3-ftalimidocyklopentyloctová

Z meziproduktu 29 (1,18 g, 3,58 mmol) ve formě bílé pevné látky (4,0 g, 72 %).

TLC Rf 0,41 (30 % pentan - ether)

-20CZ 288436 B6

Meziprodukt 32

Kyselina (AS)-2-brom-5-ftalimidopentanová

Meziprodukt 19 (5,0 g, 20,2 mmol) a thionylchlorid (10 ml) se spolu zahřívají při teplotě 65 °C po dobu 30 minut. Přidá se N-bromsukcinimid (5,4 g) a další thionylchlorid a 48% vodná HBr (1 kapka). Roztok se zahřívá na teplotu 65 °C po dobu 10 minut pak na 70 °C po dobu 2 hodiny a 15 minut. Přidá se další N-bromsukcinimid (850 mg) a směs se zahřívá na 70 °C po dobu 2 hodin. Přebytek thionylchloridu se odstraní odpařením za sníženého tlaku a olejový zbytek se zředí bezvodým tetrahydrofuranem (200 ml) a vodou (200 ml). Směs se pak zpracuje s pevným hydrogenuhličitanem sodným při pH7 až 8, pak se míchá po celou noc při RT. Přebytek tetrahydrofuranu se pak odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek se promyje dichlormethanem (3 x 300 ml). Vodný podíl se potom okyselí na pH 1 pomocí 6M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se dichlormethanem (4 x 200 ml). Spojené extrakty se poté promyjí vodou (2 x 400 ml) a solankou (400 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá produkt (4,7 g, 71 %) ve formě světle žlutohnědé pevné látky.

TLC R_f 0,47 (EtOAc)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 33

Kyselina (RS)-2-brom-2-(3-ftalimidofenyl)octová

Z meziproduktu 21 ve formě bezbarvé pevné látky (588 mg, 75 %).

TLC R_f 0,19 (5 % MeOH-0,1 % AcOH-CH₂C1₂)

Meziprodukt 34

Kyselina czs-a-brom-3-ftalimidocyklopentyloctová

Z meziproduktu 30 (1,41 g, 5,16 mmol) ve formě žlutohnědé pěny (1,59 g, 87 %).

TLC Rf 0,46 (2 % MeOH-ether)

Meziprodukt 35

Kyselina /rans-a-brom-ftalimidocyklopentyloctová

Z meziproduktu 31 (815 mg, 2,98 mmol) ve formě žlutohnědé pěny (805 mg, 77 %).

TLC R_f 0,48 (2 % MeOH-ether)

Meziprodukt 36

Kyselina (7?S)-2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanová

Roztok meziproduktu 33 (3,0 g, 9,2 mmol) v methanolu se zpracuje s thiolacetátem draselným (1,05 g, 9,2 mmol) a směs se míchá po celou noc při RT. Směs se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), zbytek se rozpustí v dichlormethanu (100 ml), poté se roztok promyje vodou (2 x 50 ml), suší (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá produkt (2,4 g, 81 %) ve formě světležluté pěny.

TLC Rf 0,43 (EtOAc)

-21CZ 288436 B6

Podobně se připraví:

Meziprodukt 37

Kyselina (&S)-2-acetylmerkapto-2-(3-ftalimidofenyl)octová

Z meziproduktu 33 ve formě bezbarvé pevné látky (722 mg, 100 %).

TLC R_f 0,15 (5 % MeOH-0,1 % AcOH-CH₂C1₂)

Meziprodukt 38

Kyselina c«-a-(acetylmerkapto)-3-ftalimidocyklopentyloctová

Z meziproduktu 34 (2,01 mg, 5,71 mmol) ve formě hnědé pěny (1,44 g, 73 %). TLC Rf 0,42 (ether)

Meziprodukt 39

Kyselina traHs-a-(acetylmerkapto)-3-ftalimidocyklopentyloctová

Z meziproduktu 35 (774 mg, 2,2 mmol) ve formě béžové pěny (329 mg, 43 %). TLC Rf 0,45 (ether)

Meziprodukt 40 (7?S)-N-/2-brom-4-(3-ftalimidobutanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Meziprodukt 18 (2,33 g) a thionylchlorid (2,92 ml) se spolu zahřívají při teplotě 65 °C po dobu 30 minut. Přidá se N-sukcinimid (2,51 g) a dále thionylchlorid a 48% vodná HBr (1 kapka). Roztok se zahřívá na 60 °C po dobu 10 minut a pak na 70 °C po dobu 2 hodin 15 minut. Dále se přidá N-bromsukcinimid (850 mg) a směs se zahřívá na 70 °C po dobu 2 hodiny. Přebytek thionylchloridu se odstraní odpařením za sníženého tlaku (vakuum) a olejový zbytek se zředí bezvodým dichlormethanem (10 ml). Podíl supematantu (4,0 ml) se přidá k roztoku _L-leucyl-Lfenylalaninu N-methylamidu (500 mg) a triethylamin (0,24 ml) vbezvodém dichlormethanu (10 ml) při 0 °C a tato směs se míchá po celou noc při RT. Směs se zředí dichlormethanem a promyje se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml), IN vodnou kyselinou chlorovodíkovou (50 ml) a nasycenou solankou (50 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá hnědá pevná látka. Tato látka se čistí kolonovou chromatografií (4x18 cm, eluování 2 % methanol-dichlormethan), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu ve formě žlutavé pevné látky (530 mg). TLC R_f 0,44 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 41 (AS)-N-/2-brom-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalaninN-methylamid

Z meziproduktu 19 (4,0 g) a _L-leucyl-L~fenylalanin N-methylamidu (1,18 g) ve formě růžové pevné látky (1,2 g).

TLC R_f 0,34 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

-22CZ 288436 B6

Meziprodukt 42 (J?iS)-N-/2-brom-6-ftalimidohexanoyl/-L-leucyl-L-fenyIalaninN-inethylamid

Z meziproduktu 20 (4,0 g) a _L-leucyl~L-fenylalanin N-methylamidu (1,18 g) ve formě téměř bezbarvé pevné látky (1,0 g).

TLC R_f 0,52 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 43

Kyselina (JčS)-2-/( 1,2-dimethylethyl)merkapto/-5-ftalimidopentanová

K míchanému roztoku terc.butoxidu (22,4 g, 0,1 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (215 ml) se přidá terc.butylthiol (11,3 ml, 0,1 mol) a směs se míchá při RT po dobu 20 minut. Poté se přidá roztok meziproduktu 13 (32,6 g, 0,1 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (80 ml) a směs se míchá při RT po celou noc. Přidá se voda (300 ml), směs se okyselí na pH 1 IN kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se dichlormethanem (3 x 200 ml). Spojené extrakty se pak suší (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá žlutý olej. Purifikuje se pomocí kolonové chromatografie (eluování 5% až 15% dichlormethanem v ethylacetátu), poté se krystaluje z dichlormethanu/hexanu za získání sloučeniny, uvedené v titulu (22 g, 66 %) ve formě bledě žlutého oleje.

TLF R_f 0,148 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 44 (AS)-N-/2-/( 1, l-dimethyl)merkapto/-5-ftalimidopentanoyl/-_L-leucyl-₁,-fenylalanin N-methylamid

Roztok meziproduktu 43 (8,06 g, 24 mmol) a _L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamidu (7,0 g,

24.9 mmol) v dichlormethanu (250 ml) se zpracuje s N-hydroxybenzthiazolem (3,9 g,

28.9 mmol), poté s EDC (5,06 g, 26,4 mmol) a směs se míchá při RT po celou noc. Směs se promyje IN kyselinou chlorovodíkovou (300 ml) a vodný podíl se reextrahuje dichlormethanem (2 x 100 ml). Spojené extrakty se postupně promývají IN kyselinou chlorovodíkovou (300 ml), 8% hydrogenuhličitanem sodným (300 ml), vodou (300 ml) a solankou (300 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá světle žlutá pevná látka. Purifikací kolonovou chromatografií (eluování 5 % methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina, uvedená v titulu (12,8 g, 88 %) ve formě ne zcela bílé pevné látky.

TLC R_f 0,55 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 45 (7ČS)-N-(2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-aminopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin Nmethylamid

Roztok meziproduktu 44 (2,56 g, 4,2 mmol) ve směsi tetrahydrofuranu (10 ml) a ethanolu (50 ml) se zpracuje s hydrátem hydrazinu (10 ml) a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 2 hodiny. Po ochlazení na RT se přidá voda (30 ml), rozpouštědlo se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), zbytek se okyselí na pH 1 IN kyselinou chlorovodíkovou a promyje se dichlormethanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva se pak upraví na pH 14 pomocí 2M hydroxidu sodného a extrahuje se dichlormethanem (2 x 100 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá světle žlutá

-23CZ 288436 B6 pevná látka. Purifíkací kolonovou chromatografíí (eluování 10% až 25% methanolem v dichlormethanu) se získá sloučenina, uvedená v titulu (9,2 g, 91 %) ve formě ne zcela bílé pevné látky. TLC R_f 0,23 (30 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 46 (AS)-N-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-(acetylamino)pentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Acetylchlorid (0,5 ml, 7 mmol) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 45 (1,14 g, 2,38 mmol) a triethylaminu (2 ml, 14,4 mmol) vbezvodém dichlormethanu (45 ml) a směs se potom míchá po celou noc při RT. Tato směs se zředí dichlormethanem (75 ml) a postupně se promývá IN kyselinou chlorovodíkovou (100 ml), 8% hydrogenuhličitanem sodným (100 ml) a solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá světle žlutá pevná látka. Purifíkací kolonovou chromatografíí (eluování 5% methanolem v dichlormethanu) se získá sloučenina, uvedená v titulu (1,2 g, 95%) ve formě ne zcela bílé pevné látky.

TLC Rf 0,31 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 47 (J?S)-N-/2-/( 1,1 -dimethylethyl)merkapto/-5-(benzoylamino)pentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (2,86 g, 5,97 mmol) a benzoylchloridu (0,84 ml, 7,2 mmol) ve formě téměř bílé pevné látky (0,84 ml, 99 %).

TLC R_f 0,41 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 48 (Λ$)-Ν-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-sukcinimidopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 45 (1,14 g, 2,38 mmol) a sukcinanhydridu (0,33 g, 3,3 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (0,33 g, 40 %).

TLC R_f 0,58 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 49 (7?5)-N-/2-/(l,l-dimethylethyl)merkapto/-5-(methansulfonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (2,03 g, 4,24 mmol) a methansulfonyl chloridu (0,35 g, 4,6 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (1,78 g, 77 %).

TLC Rf 0,46 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

-24CZ 288436 B6

Meziprodukt 50 (R5)-N-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-benzensulfonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (2,03 g, 4,24 mmol) a benzensulfonyl chloridu (0,59 g, 4,6 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (2,18 g, 85 %).

TLC R_f 0,54 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 51 (RS)-N-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-(methoxykarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (200 mg, 0,43 mmol) a methylchlorformiatu (0,03 ml, 0,41 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (196 mg, 89 %).

TLC R_f 0,32 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 52 (AS)-N-/2-/(l,l-dimethylethyl)merkapto/-5-(benzyloxykarbonyl)aminopentanoyl/-_L-leucyl-_Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (200 mg, 0,43 mmol) a benzylchlorformiatu (0,06 ml, 0,41 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (230 mg, 93 %).

TLC Rf 0,44 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 53 (&S)-N-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-(4-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (2,03 g, 4,42 mmol) a isonikotinoyl chloridu (834 mg, 4,66 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (1,81 g 77 %).

TLC R_f 0,22 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 54 (&S)-N-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-(3-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-_Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (200 mg, 0,42 mmol) a nikotinoyl chloridu (83 mg, 0,47 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (130 mg, 56 %).

TLC R_f 0,26 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 55 (ÁÓ)-N-/2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-5-(2-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl-L-leucyl-_Lfenylalanin N-methylamid

-25CZ 288436 B6

Z meziproduktu 45 (200 mg, 0,42 mmol) a pikolinoyl chloridu (83 mg, 0,47 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (145 mg, 62 %).

TLC Rf 0,21 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 56 (7?S)-N-/2-7( 1,1 -dimethylethyl)merkapto/-5-(2-pyrazinylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucyIL-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 45 (200 mg, 0,42 mmol) a pyrazinoyl chloridu (85 mg, 0,47 mmol) ve formě ne zcela bílé pevné látky (145 mg, 62 %).

TLC R_f 0,18 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 57 (7řS)-N-/2-/(2-mtrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(acetyl)aminopentanoyl/-_L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

2-nitrofenyl chlorid (3,26 g, 6,26 mmol) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 46 (1,23 g, 6,49 mmol) v ledové kyselině octové (75 ml) a směs se míchá při RT po celou noc. Rozpouštědlo se odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek se purifíkuje kolonovou chromatografíí (eluování 5% methanolem v dichlormethanu), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (3,74 g, 97 %) ve formě žluté pevné látky.

TLC R_f 0,34 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 58 (7čS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(benzoylamino)pentanoyl/-L-leucyl-_L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 47 (1,08 g, 5,67 mmol) ve formě žluté pevné látky (3,43 g, 99 %).

TLC Rf 0,54 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 59 (AS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-sukcinimidopentanoyl/-L-leucyl-_L-fenylalanin

N-methylamid

Z meziproduktu 48 (618 mg, 1,1 mmol) ve formě žluté pevné látky (665 mg, 92 %).

TLC Rf 0,25 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 60 (7čS)-N-/2-7(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(methansulfonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 49 (1,78 g, 3,27 mmol) ve formě žluté pevné látky (1,84 g, 88 %).

TLC Rf 0,32 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

-26CZ 288436 B6

Meziprodukt 61 (AS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(benzensulfonyl)aminopentanoyl/-_L-leucyl-_Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 50 (2,25 g, 3,71 mmol) ve formě žluté pevné látky (1,6 g, 68 %).

TLC R_f 0,37 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 62 (7?ó)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(methoxykarbonyl)aminopentanoyl/-_L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 51 (196 mg, 0,31 mmol) ve formě žluté pevné látky (86 mg, 38 %).

TLC Rf 0,25 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 63 (7ČS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(benzyloxykarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucylL-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 52 (229 mg, 0,32 mmol) ve formě žluté pevné látky (155 mg, 60 %).

TLC Rf 0,37 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 64 (JčS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(4-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucylL-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 53 (1,92 g, 3,29 mmol) ve formě žluté pevné látky (1,66 g, 74 %).

TLC R_f 0,29 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 65 (7?S)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(3-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucylL-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 54 (190 mg, 0,33 mmol) ve formě žluté pevné látky (85 mg, 38 %).

TLC R_f 0,24 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 66 (jR5)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(2-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucylL-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 55 (210 mg, 0,36 mmol) ve formě žluté pevné látky (120 mg, 54 %).

TLC Rf 0,21 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

-27CZ 288436 B6

Meziprodukt 67 (AS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-(2-pyrazinylkarbonyl)aminopentanoyl/-Lleucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 56 (300 mg, 0,51 mmol) ve formě žluté pevné látky (110 mg, 42 %).

TLC R_f 0,18 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 68 (RS)-N-/2-/(2-nitrofenylsulfanyl)merkapto/-5-aminopentanoyl/-L-leucyl-_L-fenylalaninNmethylamid

TLC R_f 0,16 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 69 (Áj-N-ífenylmethoxyjkarbonyl-XiS-methylj-L-cystein

Benzylchloroformiat (11,1 ml, 65 mmol) se přikapává k míchanému roztoku (S-methyl)-Lcysteinu (10 g, 75 mmol) v 2M vodném hydroxidu sodném (50 ml) a směs se míchá při RT po dobu 4 hodiny. Hodnota pH směsi se pak upraví na 14 pomocí dalšího 2M hydroxidu sodného a roztok se promyje ethylacetátem (4 x 50 ml). Vodná fáze se okyselí na pH 3 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a pak se extrahuje ethylacetátem (4 x 70 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá produkt ve formě světle žlutého oleje (16,8 g, 84 %).

TLC Rf 0,21 (10 % MeOH-CHCh)

Meziprodukt 70 (7ř)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl)-(S-methyl)cystein

Di-terc.butyldikarbonát (8,88 g, 40,7 mmol) se přidá k míchanému roztoku S-methyl-v-cysteinu (5 g, 37 mmol) a hydrogenuhličitanu sodného (7,8 g, 92,5 mmol) ve směsi vody (150 ml) a dioxanu (100 ml) při teplotě 0 °C. Směs se pak ohřeje na RT a míchá se po celou noc, pak se zředí vodou (100 ml), okyselí se na pH3 za použití IN kyseliny chlorovodíkové a poté se extrahuje ethylacetátem (3 x 100 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvého oleje (6,64 g, 76 %).

TLC Rf 0,55 (10 % MeOH-H₂O)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 71 (ó)-N-( 1, l-dimethoxy)karbonyl)-propylglycin

Z (Sj-norvalinu (5 g, 42,7 mmol) ve formě bezbarvého oleje (6,3 g, 68 %).

TLC Rf 0,50 (MeOH-H₂O)

-28CZ 288436 B6

Meziprodukt 72 (S)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbony l)-(O-methy l)serin

Hydrid sodný (60% disperze, 4,3 g, 0,107 mol) se po částech při teplotě 0 °C přidává k míchanému roztoku (S)-N-(l,l-dimethylethoxy)karbonylserinu (10 g, 48,7 mmol) v bezvodém DMF (250 ml). Po částech se přidává roztok jodmethanu (6,1 ml, 0,1 mol) v bezvodém DMF (10 ml). Směs se zahřeje na RT a míchá se po celou noc, poté se zředí IN kyselinou chlorovodíkovou na pH 3 a roztok se koncentruje za velmi nízkého tlaku (vakuum) na 200 ml. Směs se zředí vodou (200 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 100 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpařením za velmi nízkého tlaku (vakuum) se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě žlutého oleje (7,48 g, 70 %).

TLC R_f 0,39 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 73 (&S)-N-benzoyl-/b-(4-pyridyl)/alanin methylester

a) Hydrochlorid kyseliny 2-(4-pyridyl)-l-(N-benzoyl)aminoethylen-l-karboxylové

4-pyridylkarboxaIdehyd (85 g, 0,79 mol) se přidá k míchané a ledem chlazené suspenzi octanu sodného (16 g, 0,195 mol) a kyseliny hippurové (150 g, 0,84 mol) v acetanhydridu (360 ml, 3,8 mol) a následuje exotermická reakce a dosažení vnitřní teploty 30 až 40 °C. Směs se ochladí na RT a pak se nalije do vody (1500 ml). Výsledná pevná látka se odstraní filtrací a promyje se vodou (2 x 500 ml), přičemž se získá meziprodukt azlakton (74 g, 37 %) ve formě hnědé pevné látky. Azlakton (70 g, 0,28 mol) se rozpustí v koncentrované kyselině chlorovodíkové (210 ml), rychle se utvoří sraženina, která se odstraní filtrací, promyje se acetonem (2 x 500 ml) a suší se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá produkt (71 g, 78 %) ve formě světle zelené pevné látky.

b) Hydrochlorid (JČS)-N-benzoyl-/b-(4-pyridyl)/alaninu

Olefín hydrochlorid (70 g, 0,23 mol) se hydrogenuje při RT a za atmosférického tlaku nad 5% palladiem na aktivním uhlí (7 g) ve vodě (700 ml) po celou noc. Katalyzátor se pak odstraní filtrací přes celit a rozpouštědlo se koncentruje na objem 100 ml. Přidá se aceton (1000 ml) a výsledná sraženina se odstraní filtrací a suší se za sníženého tlaku (vakuum), přičemž se získá produkt (53 g, 75 %) ve formě ne zcela bílé látky.

c) (7ČS)-N-benzoyl-/b-(4-pyridyl)/alanin methylester

Thionylchlorid (15 ml, 0,21 mol) se přidá k ledem chlazenému roztoku kyseliny (53 g, 0,17 mol) v methanolu (200 ml). Směs se pak zahřeje na RT po 30 minut, rozpouštědlo se odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a získá se ne zcela bílí polotuhá látka. Zbytek se suspenzuje v 8% hydrogenuhličitanu sodném (500 ml) a produkt se extrahuje do ethylacetátu (4 x 400 ml). Spojené organické extrakty se pak promyjí solankou (1000 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (46 g, 94 %) ve formě ne zcela bílé pevné látky.

C₁₆Hi₆N₂O₃ /284,3/, ZMH* 285/

Podobně se připraví:

-29CZ 288436 B6

Meziprodukt 74 (&S)-N-benzoyl-/b-(3-pyridyl)/alanin methylester

Ve třech stupních se připraví z pyridin-3-karboxaldehydu ve formě bílé pevné látky. C₁₆H_I6N₂O₃ /284,3/, /MH¹· 285/

Meziprodukt 75 (&S)-N-benzoyl-methoxyalanin methylester

Ve třech stupních se připraví z 2-methoxybenzaldehydu ve formě bílé pevné látky.

Ci₇H₁₉N₂O₄/301,3/,/MH 302/

Meziprodukt 76 (S)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-/b-(4-pyridyl)/alanin

Meziprodukt 73 (27 g, 0,104 mol) se rozpustí v horkém acetonu (50 ml) a ke vzniklému roztoku se přidá 0,03M dihydrogenfosforečnan draselný (500 ml) při pH 7,2. K intenzívně míchanému roztoku se přidá alkalasa (1 ml) a pH se udržuje na 7,2 přidáváním 1M hydroxidu sodného (20 ml) po dobu 30 minut. Nerozpuštěný ester se odfiltruje a filtrát se promyje ethylacetátem (4 x 250 ml). Rozpouštědlo se pak odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), zbytek se rozpustí v 6N kyselině chlorovodíkové (100 ml) a vaří se pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení na RT se sražená kyselina benzoová odstraní filtrací a filtrát se promyje ethylacetátem (2x 100 ml). Vodný podíl se poté odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá opticky čistá aminokyselina ve formě své soli dihydrochloridu (9,49 g, 81 %).

Tato dihydrochloridová sůl se rozpustí ve vodě (150 ml) a zpracuje se s iontoměničovou pryskyřicí Amberlite IRA-67 na pH 8. Pryskyřice se odstraní filtrací přes celit a roztok se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá volná aminokyselina ve formě bílé pevné látky (6,7 g, 100%).

Přidá se di-terc.butylkarbonát (13 g, 69 mmol) k míchané suspenzi uvedené aminokyseliny ve směsi terc.butanolu (100 ml) a vody (50 ml), dosáhne se pH 8,5 přidáním 1M hydroxidu sodného (55 ml), doba je 40 minut. Přidá se voda (50 ml), směs se promyje heptanem (2 x 100 ml) a pak se okyselí na pH 3,5 přidáním pevného hydrogensulfátu draselného. Směs se pak odpaří do sucha a zbytek se jemně rozetře a působí se na něj methanolem (3 x 150 ml), čímž se extrahuje produkt. Odpařením rozpouštědla za velmi nízkého tlaku (vakuum) se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bílé pevné látky, která krystaluje z vodného ethanolu na opticky čistou látku (3,27 g, 61 %).

/a/_D+24,3° (c = 1, kyselina trifluoroctová)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 77 (S)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-/b-(3-pyridyl)/alanin

Z meziproduktu 74 ve formě bílé pevné látky. /a/_D+16,l° (c = 1, kyselina trifluoroctová)

-30CZ 288436 B6

Meziprodukt 78 (0)-Ν-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-2-methoxyfenylalanin

Z meziproduktu 75 ve formě bílé pevné látky (11,1 g, 97 %).

/a/n-15,2⁰ (c = 1, MeOH)

Meziprodukt 79 (7ČS)-N-acetyl-/b-(2-pyridyl)/alanin

Roztok methoxidu sodného (65,8 g, 1,22 mol) v methanolu (300 ml) se po částech zpracuje s diethylacetamidomalonatem (132,3 g, 0,61 mol), teplota se udržuje na 45 °C. Směs se pak vaří pod zpětným chladičem po dobu 15 minut. Poté se směs ochladí na 50 °C a pomalu se zpracovává se suspenzí hydrochloridu 2-chlormethylpyridinu (100 g, 0,61 mol), vzniklá růžová suspenze se pak vaří pod zpětným chladičem po dalších 6 hodin. Přidá se voda (500 ml), pak 10M hydroxid sodný (122 ml, 1,22 mol) a pH se upraví na 11 a směs se zahřívá na 70 °C po celou noc. Směs se pak ochladí na RT a za sníženého tlaku (vakuum) se odstraní methanol. Vodný zbytek se promyje ethylacetátem (2 x 500 ml), poté se okyselí na pH 5 a dále se promývá ethylacetátem (2 x 500 ml) a po odpaření za velmi nízkého tlaku (vakuum) se získá polotuhá látka. Zbytek se jemně rozmělní a působí se na něj horkým ethanolem (500 ml), poté se pomocí filtrace odstraní chlorid sodný. Filtrát se odpaří ze velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek krystaluje ze směsi methanolu a ethylacetátu, čímž se získá sloučenina, uvedená v titulu (70 g, 66 %) ve formě žluté pevné látky.

TLC R_f 0,5 /n-BuOH-AcOH-pyridin-H₂O (15-3-10-12)/

Podobně se připraví:

Meziprodukt 80 (&S)-N-acetyl-/b-(4-thiazolyl)/alanin

Z 4-(chlormethyl)thiazolu ve formě bílé pěny (6,7 g, 73 %).

TLC R_f 0,37 /1 % AcOH-pyridin-H₂O (15-3-10-12)/

Meziprodukt 81 (5)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-/b-(2-pyridyl)/alanin

Suspenze meziproduktu 79 (65 g, 0,31 mol) ve vodném dihydrogenorthofosfátu draselného (10 mM, 650 ml) se zahřívá na teplotu 40 °C a pH výsledné směsi (pH 4) se upraví na pH 8 pomocí 10M hydroxidu sodného (10 ml) za vzniku roztoku. Přidá se acylasa 30.000 (1,3 g) a směs se inkubuje při 40 °C po celou noc. Výsledná suspenze se ochladí na RT, pevný podíl se odstraní filtrací, pak se filtrát okyselí na pH 1 pomocí 2N kyseliny chlorovodíkové a promyje se ethylacetátem (2 x 300 ml). Vodný podíl se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum) a získá se polotuhá látka, která se jemně rozmělní a působí se na ni horkým methanolem (300 ml) a pevné podíly se odstraní filtrací. K ochlazenému roztoku se přidá 5M hydroxid sodný, takže pH je 10, následuje přidání di-terc.butylkarbonátu (28,6 g, 0,131 mol), směs se udržuje na pH 10 přidáváním 5M hydroxidu sodného (44 ml) po dobu 6 hodin. Methanol se pak odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum), vodný zbytek se promyje etherem (2 x 500 ml) a pak se okyselí na pH pomocí 1M hydrogensulfátu draselného. Směs se extrahuje ethylacetátem (4x500 ml),

-31CZ 288436 B6 spojené extrakty se promyjí solankou (500 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá surový produkt, který se krystaluje z ethylacetátu jako bílá pevná látka (11,6 g, 23%).

/a/_D-16,0° (c=l,MeOH)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 82 (Sj-N-ý 1,1 -dimethylethoxy)karbonyl-/b-(4-thiazolyl/alanin

Z meziproduktu 80, ve formě bílé pevné látky (lig, 94%). HPLC (Chirex (D)-penicillamin, 2mM CuSO₄,0,7 ml/min, RT = 3,25 min, 99 % ee.

Meziprodukt 83 (S)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl)/b-(2-pyridyl)/alanin N-methylamid

DCC (4,07 g, 19,7 mmol) se přidá k ledem chlazenému roztoku meziproduktu 81 (5,0 g, 18,8 mmol) a N-hydroxysukcinimidu (2,27 g, 19,7 mmol) vbezvodém tetrahydrofuranu (200 ml). Po míchání při RT po dobu 3 hodiny se směs zpracuje s 40% (hmotnost/objem) vodným methylaminem (6,8 ml, 79 mmol) a míchá se další 2 hodiny. Pevná sraženina se odstraní filtrací, filtrát se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (100 ml). Roztok se promyje postupně vodou (2x 100 ml), 8% hydrogenuhličitanem sodným (2 x 100 ml) a solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá surový produkt. Purifikací kolonovou chromatografii eluováním 2 až 5% methanolem/dichlormethanem se získá sloučenina, uvedená v titulu (2,7 g, 51%), ve formě červené pěny.

TLC R_f 0,38 (3 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 84 (S)-N-( 1,1 -dimethylethoxy)karbonyl)-L-/b-(4-thiazolyl)alanin N-methylamid

Z meziproduktu 82 ve formě bílé pevné látky (3,0 g, 64 %).

TLC R_f 0,46 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 85 (/?)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonylpenicillamin N-methylamid

Roztok (R)-N-(l,l-dimethylethoxy)karbonylpenicillaminu (14 g, 56,1 mmol), N-hydroxybenzotriazolu (7,6 g, 56,1 mmol), methylaminohydrochloridu (18,9 g, 280 mmol), N-methylmorfolinu (34 ml, 308 mmol), 4-dimethylaminopyridinu (685 mg, 5,6 mmol) a EDC (11,8 g, 62 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (300 ml) se míchá po celou noc při RT. Směs se pak nalije do 30 % (hmotnost/objem) kyseliny citrónové (750 ml) a extrahuje se etherem (3 x 500 ml). Spojené extrakty se pak promyjí 8% hydrogenuhličitanem sodným (2 x 500 ml) a solankou (500 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (12,3 g, 83 %).

TLC Rf 0,47 (50 % hexan-EtOAc)

-32CZ 288436 B6

Podobně se připraví:

Meziprodukt 86

N-methylamid kyseliny (l,l-dimethylethoxy)karbonyl-5-methyl-L-glutamové

Z kyseliny (l,l-dimethylethoxy)karbonyl-5-methyl-L-glutamové ve formě bílé pevné látky (5,4 g, 94%).

TLC R_f 0,21 (2 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 87 (Ó)-Nd-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-Nd-(ben2yloxy)karbonylomithin N-methylamid

Z (S)-Nd-(l,l-dimethylethoxy)karbonyl-N(r-(benzyloxy)karbonylomithinu (11,5 g, 31,4 mmol) ve formě bílé pevné látky (11,0 g, 94 %).

TLC R_f 0,65 (3 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 88 (S)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-2-methoxyfenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 78 (500 mg, 1,69 mmol) ve formě bílé pevné látky (380 mg, 73 %).

TLC Rf 0,55 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 89 (S)-N-(l,l-<limethylethoxy)karbonyl-b-(3-pyridyl)alanin N-methylamid

Z meziproduktu 77 (2,0 g, 7,5 mmol) ve formě bílé pevné látky (1,0 g, 48 %).

TLC Rf 0,42 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 90 (5)-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-b-(4-pyridyl)alanin N-methylamid

Z meziproduktu 76 (2,0 g, 7,5 mmol) ve formě bílé pevné látky (1,7 g, 81 %).

TLC Rf 0,38 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 91 (R)-N-( 1,1 -dimethy lethoxy)karbony l-(S-methy l)penicillamin N-methylamid

Roztok jodmethanu (0,59 ml, 9,55 mmol) v methanolu (5 ml) se přikapává při teplotě 0 °C k míchanému roztoku meziproduktu 85 (500 mg, 1,51 mmol) ve směsi 2M hydroxidu sodného (5 ml) a methanolu (15 ml). Směs se míchá při RT po celou noc, poté se methanol odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum), zbytek se zředí vodou (50 ml) a extrahuje se etherem (3 x 50 ml).

-33CZ 288436 B6

Spojené extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvého oleje (540 Mg, 99 %).

TLC Rf 0,47 (50 % hexan-EtOAc)

Meziprodukt 92 (7?)—N—(1,1 -dimethylethoxy)karbonyl-2,2-dimethyl-2-methan sulfonylalanin N-methylamid

Suspenze Oxonu (1,02 g, 1,66 mmol) ve vodě (5 ml) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 91 (153 mg, 0,55 mmol) v methanolu (5 ml) při teplotě 0 °C, směs se pak ohřeje na RT a míchá se po dobu 4 hodiny. Směs se pak zředí vodou (50 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (50 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvého oleje (101 mg, 59 %).

TLC Rf 0,35 (50 % hexan-EtOAc)

Meziprodukt 93 (72)-N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-2,2-dimethyl-2-methan sulfinylalanin N-methylamid

Roztok kyseliny 3-chlorperbenzoové (670 mg, 2,89 mmol) v dichlormethanu (25 ml) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 91 (800 mg, 2,89 mmol) v dichlormethanu (25 ml) při teplotě 0 °C, směs se pak ohřeje na RT a míchá po celou noc. Směs se postupně promývá 10% (hmotnost/objem) sulfítem sodným (2 x 50 ml), 8% hydrogenuhličitanem sodným (2 x 50 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSO₄) a po odpaření za velmi nízkého tlaku (vakuum), se získá surový produkt ve formě bezbarvého oleje. Purifikací kolonovou chromatografií (eluování 10% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvého oleje (470 mg, 55 %).

TLC Rf 0,05 (50 % hexan-EtOAc)

Meziprodukt 94 (72)-2,2-dimethansulfinylalanin N-methylamid hydrochlorid

Roztok meziproduktu 93 (470 mg, 1,61 mmol) ve směsi dioxanu (25 ml) a 2M kyseliny chlorovodíkové (25 ml) se míchá při RT po celou noc. Rozpouštědlo se odpaří do sucha za velmi nízkého tlaku (vakuum) a suší se vymrazováním po celou noc, čímž se získá sloučenina, uvedená v titulu (370 mg, 100 %) ve formě bezbarvé látky klovatinového charakteru.

TLC Rf 0,06 (1 % NEtj-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 95 (72)-2,2-dimethylsulfonylalanin N-methylamid hydrochlorid

Z meziproduktu 92 (300 mg, 0,97 mmol) ve formě bezbarvé pěny (210 mg, 100 %).

TLC R_f 0,10 (1 % NEtj-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

-34CZ 288436 B6

Meziprodukt 96 (7?}-penicillamin N-methylamid hydrochlorid

Z meziproduktu 85 (300 mg, 1,14 mmol) ve formě bezbarvé pěny (230 mg, 100 %).

TLC R_f 0,13 (1 % NEtj-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 97 (S)-b-(3-pyridyl)alanin N-methylamid dihydrochlorid

Z meziproduktu 89 (1,2 g, 4,29 mmol) ve formě bílé pevné látky (1,1 g, 100 %). TLC R_f 0,05 (1 % NEt₃-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 98 (5)-b-(4-pyridyl)alanin N-methylamid dihydrochlorid

Z meziproduktu 90 (1,6 g, 5,73 mmol) ve formě žluté pevné látky (1,45 g, 100 %).

TLC R_f 0,08 (1 % NEtj-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 99 (5)-b-(2-pyridyl)alanin N-methylamid dihydrochlorid

Z meziproduktu 83 (1,4 g, 5,01 mmol) ve formě bílé pevné láky (1,27 g, 100 %).

TLC Rf 0,13 (1 % NEt₃-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 100 (5)-b-(4-thiazolyl)alanin N-methylamid hydrochlorid

Z meziproduktu 84 (1,0 g, 3,5 mmol) ve formě bílé pevné látky (370 mg, 94 %).

TLC R_f 0,21 (1 % NEt₃-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 101 (ÓTT^-methyljpenicillinamin N-methylamid trifluoracetát

Z meziproduktu 91 (200 mg, 0,72 mmol) v dichlormethanu (4 ml) obsahujícím kyselinu trifluoroctovou (2 ml) se míchá při RT po celou noc. Rozpouštědlo se odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a pokud je nějaký přebytek kyseliny trifluoroctové, odstraní se azeotropickou destilací s heptanem (3 x 20 ml), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (196 mg, 94 %) ve formě bezbarvé pěny.

TLC Rf 0,32 (1 % NEt₃-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

-35CZ 288436 B6

Meziprodukt 102 (5)-b-(methoxyfenyl)alanin N-methylamid trifluoracetát

Z meziproduktu 88 (200 mg, 0,65 mmol) ve formě světle žluté pěny (209 mg, 100 %). TLC R_f 0,25 (1 % NEty-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 103

N-methylamid trifluoracetát kyseliny (S)-5-methyl-glutamové

Z meziproduktu 86 (707 mg, 2,58 mmol) ve formě bílé pevné látky (782 mg, 98 %).

TLC R_f 0,37 (1 % NEtj-10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 104 (S)-Nd-( 1, l-dimethylethoxy)karbonylomithin N-methylamid

Meziprodukt 87 (lig, 29 mmol) se hydrogenuje při RT a atmosférickém tlaku nad 10% palladiem na aktivním uhlí (1 g) v ethanolu po celou noc. Katalyzátor se odstraní filtrací přes hyflo a filtrát se odstraní odpařením za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (2,6 g, 36 %) ve formě bezbarvého oleje.

TLC R_f 0,37 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 105

N-(fenylmethoxy)karbonyl-(S)-methyl)-L-cysteinyl-L-fenylalanin N-methylamid

EDC (10,5 g, 55 mmol) se přidá k míchanému roztoku _L-fenylalanin N-methylamidu (8,9 g, 50 mmol) meziprodukt 69 (13,8 g, 50 mmol) a N-hydroxybenzotriazolu (8,1 g, 60 mmol) a v bezvodém tetrahydrofuranu (100 ml). Směs se míchá při RT po celou noc. Pak se směs zpracuje s 1M kyselinou chlorovodíkovou (300 ml) a pak se extrahuje ethylacetátem (4x200 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 8% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 200 ml), vodou (200 ml) a solankou (200 ml), suší se (MgSO₄) a pak se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá produkt ve formě bílé pevné látky (16,5 g, 75 %).

TLC Rf 0,47 (10 % MeOH-CHClj)

Meziprodukt 106

N-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-(iS)-propylglycinyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 71 (5 g, 23 mmol) a _L-fenylalanin N-methylamidu (4,1 g, 23 mmol) ve formě bílé pevné látky (7,72 g, 89 %).

TLC Rf 0,48 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 107

N-(l,l-dimethylethoxy)karbonyl-(5)-L-leucyl-L-terc.leucin N-methylamid

-36CZ 288436 B6

ZN-(l,l-dimethylethoxy)karbonyl-L-leucyl-L-terc.leucmu (13,07 g, 56 mmol) a _L-terc.leucinu N-methylamidu (8,11 g, 56 mmol) ve formě bílé pevné látky (15,77 g, 79 %).

TLC R_f 0,25 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 108

N-( 1, l-dimethylethoxyjkarbonyl-íó^^-methyljcysteinyl-L-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 70 (6,64 g, 28 mmol) a _L~terc.leucinu N-methylamidu (4,07 g, 28 mmol) ve formě bílé pevné látky (4,26 g, 42 %).

TLC R_f 0,45 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 109

N-fLl-dimethylethoxyjkarbonyl-fSj-fO-rnethyljserinyl-L-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 72 (7,48 g, 34 mmol) a L-terc.leucinu N-methylamidu (4,92 g, 34 mmol) ve formě bílé pevné látky (4,26 g, 42 %).

TLC R_f 0,40 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 110

N-( 1, l-fenylmethoxy)karbonyl-L-valinyl-Nd-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-L-omithín Nmethylamid

Z meziproduktu 104 (2,6 g, 10,6 mmol) a N-(fenylmethoxy)karbonyl-L-valinu (2,82 g,

11,2 mmol) ve formě bílé pevné látky (3,0 g, 61 %).

TLC Rf 0,32 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 111 (S-methylj-L-cysteinyl-L-fenylalanin N-methylamid

Roztok meziproduktu 105 (2,0 g, 4,65 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se zpracuje s 25% kyselinou bromovodíkovou v kyselině octové (18,6 ml) a směs se míchá při RT po dobu 1 hodiny. Přidá se voda (10 ml) a směs se promyje dichlormethanem (3x15 ml). Hodnota pH vodné fáze se pak upraví na 14 pomocí 5M hydroxidu sodného a pak se extrahuje dichlormethanem (4x30 ml). Spojené organické extrakty se poté promyjí solankou (30 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá produkt ve formě bílé pevné látky (1,22 g, 88 %).

TLC Rf 0,31 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 112 _Lvalinyl-Nd-( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl-L-omithin N-methylamid

Meziprodukt 110 (3,0 g, 6,5 mmol) se hydrogenuje při RT a atmosférickém tlaku nad 10% palladiu na aktivním uhlí (300 mg) v ethanolu (100 ml) po celou noc. Katalyzátor se odstraní filtrací přes hyflo a filtrát se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), čímž se získá sloučenina, uvedená v titulu (2,2 g, 99 %) ve formě bílé pevné látky.

-37CZ 288436 B6

TLC R_f 0,26 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 113 (ó)-propylglycinal-L-fenylalaninN-methylamid

Roztok meziproduktu 106 (5,36 g, 14,2 mmol) ve směsi dioxanu (250 ml) a 2M kyseliny chlorovodíkové (250 ml) se míchá při RT po celou noc. Rozpouštědlo se odpaří do sucha za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá bílá pevná látka. Zbytek se rozpustí ve vodě (200 m), promyje dichlormethanem (3 x 100 ml), poté se upraví pH na 10 pomocí 2M hydroxidu sodného a extrahuje se dichlormethanem (4 x 100 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bílé pevné látky (1,45 g, 37 %).

TLC Rf 0,29 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 114 (5)-(S-methyl)cysteinyl-L-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 108 ve formě bílé pevné látky (3,5 g, 97 %). TLC Rf 0,45 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 115 (SHO-methyOserinyl-L-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 109 ve formě bílé pevné látky (2,7 g, 98 %).

TLC R_f 0,40 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 116

L-leucyl-L-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 107 ve formě bílé pevné látky (11,2 g, 99 %).

TLC Rf 0,57 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 117

Kyselina (7?)-(2)-brom-5-ftalimidopentanová

Roztok _D-omithinu hydrochloridu (35 g, 0,208 mmol) ve vodě (350 ml) se zpracuje se síranem měďnatým (16,6 g, 0,104 mol). 5M hydroxid draselný (40 ml) se přidá tak, aby pH bylo 3, poté se přidá N-karboethoxyftalimid (45,5 g, 0,208 mol) a pH dosáhne 9 až 10 přidáním 5M hydroxidu draselného (55 ml). Po dvou hodinách se přidá 48% kyselina bromovodíková, pH nabude hodnoty 0,4 (77 ml) a získaná sraženina se odstraní filtrací. Filtrát se ochladí na méně než 5 °C, pak se zpracuje s další kyselinou bromovodíkovou (152 ml) a bromidem draselným (59 g, 0,5 mol). Směs se pak zpracuje přikapáváním po dobu 45 minut roztokem nitritu sodného (28,6 g, 0,41 mol) ve vodě (275 ml), a dosáhne se teploty nižší než 5 °C. Směs se pak míchá při

-38CZ 288436 B6 teplotě nižší než 5 °C po celou noc. Výsledná sraženina se pak odstraní filtrací, rozpustí se v ethylacetátu (400 ml) a roztok se promyje vodou (2 x 200 ml) a solankou (200 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (40,6 g, 47 %) ve formě pevné látky krémové barvy.

TLC R_f 0,80 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Meziprodukt 118

Kyselina (>S)-2-brom-5-ftalimidopentanová

ZL-omithinu hydrochloridu (20 g, 0,118 mmol) ve formě pevné látky krémové barvy (22 g, 57 %).

TLC Rf 0,80 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Meziprodukt 119

Kyselina (>S)-2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanová

Připraví se podle dříve popsaného způsobu z meziproduktu 117 (39,9 g, 0,11 mmol) ve formě světle oranžového oleje (35,6 g, 99 %).

TLC Rf 0,24 (50 % heptan-EtOAc)

Meziprodukt 120

Kyselina (7?)-2-merkapto-5-ftalimidopentanová

Připraví se podle dříve popsaného způsobu z meziproduktu 118 (20 g, 56 mmol) ve formě světle oranžového oleje (17,7 g, 99 %).

TLC Rf 0,24 (50 % heptan-EtOAc)

Meziprodukt 121 (7?>S)-2-(acetylmerkapto)-5-ftalimidopentanoyl-L-leucin 1,1-dimethylethylester

EDC (3,64 g, 19 mmol) se přidá k míchané směsi _L-leucin 1,1-dimethylethylesteru (3,93 g, 17,6 mmol), N-hydroxybenztriazolu (2,62 g, 19,4 mmol), triethylaminu (2,51 ml, 18 mmol) a meziproduktu 15 (5,94 g, 18,5 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (200 ml). Směs se míchá po celou noc, pak se rozpouštědlo odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek se rozdělí mezi vodu (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Vodný podíl se pak extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml), spojené extrakty se promyjí vodou (2 x 100 ml) a solankou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum na bezbarvý olej. Purifikací kolonovou chromatografií eluováním směsí hexan/ethylacetát (2:1), se získá sloučenina, uvedená v titulu (6,6 g, 77 %) ve formě bílé pevné látky, jež je v poměru 1:1 směsí diastereoizomerů.

TLC Rf 0,42 (EtOAc/hexan (1:1))

Meziprodukt 122 (AS)-2-(acetylmerkapto)-5-ftalimidopentanoyl-L~leucin

-39CZ 288436 B6

Kyselina trifluoroctová (9,0 ml, 115 mmol) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 121 (3,0 g, 6,1 mmol) v bezvodém dichlormethanu (40 ml) a směs se míchá při RT po celou noc. Směs se koncentruje za velmi nízkého tlaku (vakuum) a přebytek kyseliny trifluoroctové se odstraní azeotropicky s heptanem, přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (2,48 g, 94 %) ve formě bezbarvé pěny, jako směs diastereoizomerů v poměru 1:1.

TLC Rf 0,42 (EtOAc/hexan (3:2))

Meziprodukt 123

Kyselina (RS)-2-(acetylmerkapto)-sukcinimidobutanová

Připraví se podle dříve popsaného způsobu z meziproduktu 36.

TLC Rf 0,3 8 (HOAc/EtOAc/hexan (0,1:1:1))

Meziprodukt 124 (<S^L-methyl}-_L-cysteinyl-L-tryptofan N-methylamid

Připraví se podle dříve popsaného způsobu z meziproduktu 111.

TLC Rf 0,45 (EtOAc/hexan (1:1))

Meziprodukt 125

Kyselina (RS)-2-/( 1, l-dimethylethyl)merkapto/-3-ftalimidopropananová

Připraví se podle dříve popsaného způsobu z meziproduktu 43.

TLC R_f 0,48 (HOAc/EtOAc/hexan (0,1:1:1))

Příklad 1 (AS)-N-/2,3-bis-acetylmerkaptopropanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

EDC (198 mg) se přidá k roztoku meziproduktu 14 (209 mg), _L-leucyl-L-fenylalaninu Nmethylamidu a N-hydroxybenzotriazolu hydrátu (153 mg) v bezvodém THF (10 ml) při teplotě 0 °C, a směs se míchá při takové teplotě, aby TLC analýza (5 % MeOH-CH₂Cl₂) indikovala úplnou spotřebu výchozích látek (72 hodin). Rozpouštědlo se pak odstraní odpařením a zbytek se rozdělí mezi IN kyselinu chlorovodíkovou (35 ml) a ethylacetát (50 ml). Organické vrstvy se oddělí, promyjí se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x200 ml) a solankou (2 x 20 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá surový produkt. Purifikací pomocí kolonové chromatografíe (eluování 2% až 5% směsí methanol - dichlormethan) se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvé pevné látky (264 mg).

TLC R_f 0,25 (2 % MeOH-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

-40CZ 288436 B6

Příklad 2 (J?ó)-N-/(2,4-bis-acetylmerkapto)butanoyl/-_L-leucyl-L-fenyIalanin N-methylamid

Z meziproduktu 15 (870 mg, 3,7 mmol) a _Lleucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (1,07 g, 3,7 mmol), ve formě bílé pevné látky (1,4 g, 74 %).

C24H35N5S2 /509,7/, /MH⁺=510/

Příklad 3 (AÓ)-N-/(2,5-bis-acetylmerkapto)pentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 16 (906 mg, 3,6 mmol) a _L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (1,06 g, 3?6 mmol), ve formě bílé pevné látky (1,5 g, 79 %).

C₂₅4H₃7N₅S₂ /523,7/, ΖΜΗ*=524/

Příklad 4 (AS)-N-/(2,6-bis-acetylmerkapto)hexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 17 (895 mg, 3,4 mmol) a _L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (991 mg, 3,4 mmol), ve formě bílé pevné látky (1,4 g, 74 %).

C₂₆H₃₉N₅S₂ /537,75/, /MlT=538/

Příklad 5 (Á5)-N-/2,4-acetylmerkapto-3-methoxykarbonylpropanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 4 (0,26 g) ve formě bezbarvé pevné látky (0,33 g).

C₂₃H₃₃N₃O₆S /479,6/, /MH⁺=480/

Příklad 6 (JČS)-N-/2-acetylmerkapto-4-methoxykarbonylbutanoyl/-L-leucyl-_L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 5 (0,40 g) ve formě bezbarvé pevné látky (0,67 g).

C₂₄H₃₅N₃O₆S /493,6/, /MH =494/

Příklad 7 (JčS)-N-/2-acetylmerkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 6 (0,9 g) ve formě bezbarvé pevné látky (1,1 g).

C₂₅H₃₇N₃O₆S /509,7/, /MH*=510/

-41CZ 288436 B6

Příklad 8 (7ČS)-N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 7 (0,9 g) ve formě bezbarvé pevné látky (1,0 g).

C₂₆H₃₉N₃O₆S /521,6/, /MH⁺=522/

Příklad 9 (7áS)-N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-tiyptofan N-methylamid

Z meziproduktu 36 (730) a _L-leucyl-L-tryptofan N-methylamidu (700 mg), ve formě světle žluté pěny (1,0 g, 74 %).

C₃₃H₃₉N₅O₆S /633,7/, /MH⁺=534/

Příklad 10 (&S)-N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-_L-tryptofan N-methylamid

Z meziproduktu 7 (375 mg) a _L-leucyl-L-tiyptofan N-methylamidu (500 mg), ve formě světle žluté pěny (440 mg, 52 %).

C₂₈H₄₀N₄O₆S /560,7/, /MH⁺=561/

Příklad 11 (JčS)-N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-valinyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 36 (232 mg) a _L-valinyl-L-fenylalanin N-methylamidu (200 mg), ve formě bílé pevné látky (230 mg, 55 %).

C₃₀H₃₆N₄O₆S /580,7/, /MH*®581/

Příklad 12 (AS)-N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-_L-valinyl-_L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 7 (179 mg) a L-valinyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (200 mg), ve formě bílé pevné látky (200 mg, 56 %).

C₂₅H₃₇N₃O₆S /507,6/, /MIT=5O8/

Příklad 13 (&S)-N-/2-acetylmerkapto-2-(3-ftalimidofenyl)acetyl/-L-leucyl-_L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 37 (690 mg) a _L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (489 mg), ve formě bílé pevné látky (927 mg, 88 %).

C₃₄H₃₆N₄O₆S /628,8/, /MH⁺=629/

-42CZ 288436 B6

Příklad 14

N-/2-(acetylmerkapto)-2-/3-cís-ftalimidocyklopentyl/acetyl/-L-leucyl-_L-fenylalaninNmethylamid

Z meziproduktu 38 (140 mg, 0,4 mmol) a _L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (117 mg, 0,4 mmol), ve formě světle hnědé pěny (197 mg, 79%), jako směs čtyř očekávaných diastereoizomerů v poměru 1:1:1:1.

C33H40N4O6S /620,8/, /MH⁺=621/

Příklad 14

N-/2-(acetylmerkapto)-2-/3-Zrař7s-ftalimidocyklopentenyl/acetyl/-L-leucyl-_L-fenylalaninNmethylamid

Z meziproduktu 39 (235 mg, 0,7 mmol) a _L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (197 mg, 0,7 mmol), ve formě hnědé pěny (358 mg, 85 %), jako směs čtyř očekávaných diastereomerů. C₃₃H4oN40₆S /620,8/, /MH*=621/

Příklad 15 (S)-N-/2-(acetylmerkapto)-2-/3-Zrafls-ftalimidocyklopentyl/acetyl/-L-leucyl-_L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 39 (235 mg, 0,7 mmol) a L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (197 mg, 0,7 mmol), ve formě hnědé pěny (358 mg, 85 %), jako směs čtyř očekávaných diastereoizomerů. C3₃H4oN40₆S /620,8/, /MH =621/

Příklad 16 (5)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(»S)-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 119 (13,8 g, 43 mmol) a meziproduktu 116 (ll,2g, 44 mmol), ve formě bílé pevné látky (11,4 g, 48 %).

C₂₈H4oN40₆S /560,7/, /MH*=561/

Příklad 17 (5)-N-/2-(acetylmerkapto}-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 119 (10 g, 31 mmol) a L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (9,0 g, 31 mmol), ve formě bílé pevné látky (10,5 g, 57 %).

C₃iH₃₈N₄O₆S /594,7/, /Mlť=595/

Příklad 18 (7?)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 120 (1,0 g, 3,1 mmol) a L-leucyl-L-fenylalaninu N-methylamidu (900 mg, 3,1 mmol), ve formě bílé pevné látky (885 mg, 48 %).

-43CZ 288436 B6

C₃iH₃₈N₄O₆S /594,7/, /MH⁺=595/

Příklad 19 (5)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-_L-tryptofan N-methylamid

Z meziproduktu 119 (411 mg, 1,28 mmol) a _L-leucyl-L-tryptofanu N-methylamidu (423 mg, 1,28 mmol), ve formě bílé pevné látky (330 mg, 41 %).

C₃iH₃₉N₅O₆S (633,7/, ZMH*=634/

Příklad 20 (7?S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimidopentanoyl/-(»S)-methyl)-L-cysteinyl-L-fenylalaninNmethylamid

Z meziproduktu 36 (326 mg, 1 mmol) a meziproduktu 114 (350 mg, 1 mmol), ve formě bílé pevné látky (380 mg, 64 %).

C₂₉H₃₄N₄O₆S₂ /598,7/, /MH⁺=599/

Příklad 21 (&S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-(.Sy-propylglycinyl-L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 113 (145 mg, 0,52 mmol) a meziproduktu 36 (168 mg, 0,52 mmol), ve formě bílé pevné látky (160 mg, 53 %).

C₃₀H₃₆N₄O₆S /580,7/, /MH⁺=581/

Příklad 22 (&S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-valinyl-Nd-( 1, l-dimethylenoxy)karbonyl-L-omithin N-methylamid

Z meziproduktu 112 (508 mg, 1,47 mmol) a meziproduktu 36 (491 mg, 1,53 mmol), ve formě bílé pevné látky (687 mg, 72 %).

C₃iH₄₅N₅O₈S /647,8/, /MH⁺=648/

Příklad 23 (&S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-valinyl-L-omithin N-methylamid trifluoracetát

Roztok z příkladu 22 (585 mg, 0,90 mmol) v dichlormethanu (20 ml) obsahující kyselinu trifluoroctovou (2 ml) se při RT míchá po celou noc. Rozpouštědlo se pak odstraní za velmi nízkého tlaku (vakuum) a přebytek kyseliny trifluoroctové se odstraní azeotropickou destilací s heptanem (3 x 20 ml), přičemž se získá sloučenina, uvedená v titulu (596 mg, 99 %)), ve formě ne zcela bílé pevné látky.

C₂6H_3gN₅O₆S /548,7/, /MH⁺=549/

-44CZ 288436 B6

Příklad 24 (&S)-N-V2-Áacetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-_L-valinyl-N_d-(acetyl-L-<)mithin)Nmethylamid

Acetylchlorid (0,024 ml, 0,34 mmol) se přidá k míchanému roztoku Příkladu 23 (205 mg, 0,31 mmol) a N-methylmorfolinu (0,134 ml, 0,31 mmol) vbezvodém dichlormethanu (20 ml). Směs se zahřeje na RT a míchá se po dobu 1 hodiny, pak se zředí dichlormethanem (20 ml) a postupně se promývá 2N hydrochloridem (20 ml), 8% hydrogenuhličitanem sodným (20 ml), vodou (20 ml) a solankou (20 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum) na bezbarvou pěnu. Purifikací kolonovou chromatografií (eluování 3% až 5% směsí methanoldichlormethan) se získá sloučenina, uvedená v titulu (30 mg, 17 %) ve formě bílé pevné látky. CzsHnNjChS /590,7/, /ΜΐΓ=591/

Příklad 25 (JiS)~N“/2-acetylmerkapto-4-ftalimidobutanoyl/-_L-leucyl-_L-fenylalaninN-methylamid

Roztok thioacetátu draselného (98 mg) v methanolu (2 ml) se přidá k suspenzi meziproduktu 40 (0,5 g) v methanolu (10 ml) a směs se míchá při RT po dobu 30 minut, poté se vaří pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu (50 ml) a dichlormethan (150 ml). Vrstvy se oddělí a organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání surového produktu. Purifikací kolonovou chromatografií (eluování 50% směsí ethylacetát - dichlormethan) se získá sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bílé pevné látky (270 mg).

TLC R_f 0,30 (50 % EtOAc-CH₂Cl₂)

Podobně se připraví:

Příklad 26 (AS)-N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-_L-leucyl-L-fenylalaninN-methylamid

Z meziproduktu 41 (0,50 g) ve formě téměř bezbarvé pevné látky (0,42 g).

TLC R_f 0,20 (50 % EtOAc-CH₂Cl₂)

Příklad 27 (&S)-N-/2-acetylthio-6-ftalimidohexanoyl-L-leucyl-L-fenylaIaninN-methylamid

Z meziproduktu 42 (0,50 g) ve formě světle žluté pevné látky (0,39 g).

TLC R_f 0,31 (50 % EtOAc-CH₂Cl₂)

Příklad 28 (J?S}-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-/beta-(4-thiazolyl)/alaninNmethylamid

EDC (107 mg, 0,56 mmol) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 122 (222 mg, 0,51 mmol), N-hydroxybenztriazolu (76 mg, 0,56 mmol), triethylaminu (75 ml, 0,53 mmol) a meziproduktu 100 (113 mg, 0,51 mmol) vbezvodém tetrahydrofuranu (30ml). Směs se míchá

-45CZ 288436 B6 při RT po celou noc, poté se odstraní rozpouštědlo za velmi nízkého tlaku (vakuum) a zbytek se rozdělí mezi vodu (20 ml) a ethylacetát (20 ml). Vodný podíl se pak extrahuje ethylacetátem (2 x 20 ml), spojené extrakty se promyjí vodou (2 x 50 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za velmi nízkého tlaku (vakuum) za získání světle žlutého oleje. Purifíkací kolonovou chromatografií (eluování směsí dichlormethan - methanol v poměru 98:2) se získá sloučenina, uvedená v titulu (170 mg, 55 %) ve formě bílé pevné látky.

C₂₈H₃₅N₅O₆S₂ /601,7/, /Μ1Γ-602/

Příklad 29 (J?S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-/beta-(2-pyridyl)/alaninNmethylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 99, ve formě bílé pevné látky (277 mg, 67 %). C₃₀H₃₇N₅O₆S /595,7/, /MH⁺=596/

Příklad 30 (&S)-N-/2-(acetylmerkapto}-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-7beta-(3-pyridyl)/alaninNmethylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 97, ve formě bílé pevné látky (50 mg, 12 %). C₃₀H₃₇N₅O₆S /595,7/, /ΜΤΓ=596/

Příklad 31 (7?S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-/beta-(4-pyridyl)/a!aninNmethylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 98, ve formě bílé pevné látky (310 mg, 77 %). C₃₀H₃₇N₅O₆S /595,7/, /MH⁺=596/

Příklad 32

N-methylamid kyseliny (RS)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-5-methyl-L-glutamové Z meziproduktu 122 a meziproduktu 103, ve formě bílé pevné látky (201 mg, 49 %).

C₂₈H₃₈N₄O₈S /590,3/, /MH*=591/

Příklad 33 (J?iS)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-[-leucyl-(5)“(2“methoxyfenyl)alanin Nmethylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 102, ve formě bílé pevné látky (150 mg, 37 %).

C₃₂H₄qN₄O₇S /524,8/, /MlT=625/

-46CZ 288436 B6

Příklad 34 (RSJ-N-^-facetylmerkaptoj-S-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-f/Q-penicillaminN-methylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 96, ve formě bílé pevné látky (230 mg, 35 %).

C₂₇H₃8N₄O₆S₂ /578,8/, /MH⁺=579/

Příklad 35 (&S)-N-/2-(acetylmerkapto}-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(J?)-(iS'-methyl)-penicillaminin

N-methylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 101, ve formě bílé pevné látky (400 mg, 35 %). C₂₈H₄₀N₄O₆S₂ /592,8/, /ΜΐΓ=593/

Příklad 36 (7ČS)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-_L-leucyl-(J?)-(2,2-dimethyl-2-methansulfonyl)alanin N-methylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 95, ve formě bílé pevné látky (380 mg, 66 %).

C₂₈H₄₀N₄O₈S₂ /624,8/, /MH⁺=625/

Příklad 37 (7čS)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(Jř)-(2,2-dimethyl-2-methansulfinyl)alanin N-methylamid

Z meziproduktu 122 a meziproduktu 94, ve formě bílé pevné látky (360 mg, 37 %).

C2SÍWÍ4O7S2 /608,8/, /MřT=609/

Příklad 38 (J?5)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(>S)-terc.leucin N-methylamid

Z meziproduktu 122 a hydrochloridu terc.leucinu N-methylamidu, ve formě bílé pevné látky (120 mg, 25 %).

CjsH^OeS/560,7/,/MIT=561/

Příklad 39 (JČS)-N-/2-merkapto-5-(acetyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

0,4M hydroxid sodný (0,82 ml) se přidá k míchanému roztoku meziproduktu 57 (203 mg, 0,328 mmol) a 2-merkaptoethanolu (0,23 ml, 3,28 mmol) v methanolu při teplotě 0 °C. Po 15 minutách se přidá kyselina octová (0,5 ml) a rozpouštědla se odpaří za velmi nízkého tlaku (vakuum), přičemž se získá žlutý olej. Přidá se ether (20 ml) a vzniklá sraženina se odstraní filtrací za získání surového thiolu. Purifikací kolonovou chromatografií (eluování 5% methanolem v dichlormethanu) se získá sloučenina, uvedená v titulu (86 mg, 56 %), ve formě bílé pevné látky (86 mg, 56 %), ve formě bílé pevné látky (86 mg, 56 %).

-47CZ 288436 B6

C₂₃H₃₆N₄O₄S /464,6/, /ΜίΓ=465/

Podobně se připraví:

Příklad 40 (J2S)-N-72-merkapto-5-(benzoyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 58 (400 mg, 0,59 mmol), ve formě bílé pevné látky (175 mg, 59 %). C₂₈H3₈H4O₄S /526,7/, /MIT=527/

Příklad 41 (&S)-N-T/2-inerkapto-5-(sukcinimido)pentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanm N-methylamid

Z meziproduktu 59 (600 mg, 0,91 mmol), ve formě bílé pevné látky (147 mg, 32 %). C₂₅H3₆N₄O5S /504,7/, /MH⁺=505/

Příklad 42 (RS)-N-/2-merkapto-5-(methansulfonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 60 (600 mg, 1,0 mmol), ve formě bílé pevné látky (262 mg, 57 %). C₂₂H3₆N₄O₅S₂ /500,7/, /MH⁺=501/

Příklad 43 (72S)-N-/2-merkapto-5-(benzensulfonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-v-fenylalanin N-methylamid

Z meziproduktu 61 (500 mg, 0,7 mmol), ve formě bílé pevné látky (221 mg, 56 %). C₂7H3₆N₄O_sS₂ /562,8/, /MH⁺=563/

Příklad 44 (7?S)-N-/2-merkapto-5-(4-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 64 (330 mg, 0,48 mmol), ve formě bílé pevné látky (115 mg, 22 %). C₂7H37N₅O₄S /527,7/, /MlT=528/

Příklad 45 (7?S)-N-/2-merkapto-5-(3-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-_L-leucyl-L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 65 (200 mg, 0,29 mmol), ve formě bílé pevné látky (34 mg, 22 %).

C₂₇H3₇N₅O₄S /527,7/, /MH*=528/

-48CZ 288436 B6

Příklad 46 (AS)-N-/2-merkapto-5-{2-pyridylkarbonyl)aminopentanoyl/-_L-leucyl-_L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 66 (150 mg, 0,22 mmol), ve formě bílé pevné látky (60 mg, 52 %).

C₂₇H₃₇N₅O₄S /527,7/, /MH*=528/

Příklad 47 (7iS)-N-/2-nierkapto-5-(2-pyrazinylkarbonyl)aminopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin Nmethylamid

Z meziproduktu 67 (100 mg, 0,15 mmol), ve formě bílé pevné látky (30 mg, 38 %).

C₂₆H₃₆N₆O₄S /528,7/, /MH*=529/

Příklad 48 (7iS)-N-/2-ínerkapto-5-ftalimido/pentanoyl-T.-leucyl-L-/beta-(4-thiazolyl)/alanin N-methylamid

Koncentrovaný hydroxid amonný (0,5 ml) se přidá k roztoku Příklad 28 (110 mg, 0,18 mmol) v methanolu (10 ml) při teplotě 0 °C a směs se míchá při této teplotě po dobu 3 hodiny. Směs se pak zředí vodou (10 ml), okyselí se 2N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se dichlormethanem (3 x 20 ml). Spojené extrakty se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpařují se, čímž se získá surový produkt. Purifikací kolonovou chromatografií (eluování 2% methanolem v dichlormethanu), přičemž se získá sloučenina uvedená v titulu ve formě bezbarvé pevné látky (71 mg, 71 %).

C₂₆H₃₃NjO₅S₂ /559,7/, /MH⁺=560/

Podobně se připraví:

Příklad 49 (&S')-N-72-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-L-/beta-(2--pyridyl)/alanin N-methylamid

Z Příkladu 29, ve formě bílé pevné látky (75 mg, 80 %).

C₂₈H₃₅N₅O₅S /553,7/, /ΜΗ*=554/

Příklad 50

N-methylamid kyseliny (&S)-N-/2-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl/-L-leucyl-5-methyl-L-glutainové

Z Příkladu 32, ve formě bílé pevné látky (68 mg, 78 %).

C₂₆H₃₆N₄O₇S /548,6/, /MH*=549/

-49CZ 288436 B6

Příklad 51 (7řS)-N-/2-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl/-L-leucyl-(/?)-(5-methyl)peniciUaminN-methylamid

Z příkladu 35, ve formě bílé pevné látky (160 mg, 70 %).

C₂₆H₃₈N₄O_sS₂ /550,8/, /MlT=551/

Příklad 52 (*S}-N-/2-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl/-L-leucyl-(ó)-terc.leucin N-methylamid

Z Příkladu 16, ve formě bílé pevné látky (8,12 g, 80 %).

C₂₆H₃₈N₄O₅S /518,7/, /MH^T=519/

Příklad 53 (S)-N-/2-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 17, ve formě bílé pevné látky (2,7 g, 67 %).

C₂₉H₃₆N₄O₅S /552,7/, /MH⁺=553/

Příklad 54 (JČS)-N-/2,3-dimerkaptopropanoyl/-_L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 1, ve formě bezbarvé pevné látky (76 mg).

Ci₉H₂₉N₃O₃S₂ /411,5/, /MIT=412/

Příklad 55 (&S)-N-/2-merkapto-3-methoxykarbonylpropanoyl/-L-leucyl-i-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 5 (0,16 g), ve formě bílé pevné látky (0,14 g).

C₂₁H₃iN₃O₅S₂ /437,5/, /MlT=438/

Příklad 56 (&S)-N-/2-merkapto-4-methoxykarbonylbutanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 6 (0,18 g), ve formě bezbarvé pevné látky (0,16 g).

C₂₂H₃₃N₃O₅S /451,5/, /MHM52/

Příklad 57 (7čS)-N-/2-merkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 7 (0,32 g), ve formě bezbarvé pevné látky (0,15 g).

TLC R_f 0,29 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

-50CZ 288436 B6

Příklad 58 (AS)-N-/2-merkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl-L-Ieucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 8 (0,31 g), ve formě bezbarvé pevné látky (0,22 g).

TLC R_f 0,30 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Příklad 59 (7?ó)-N-/2-merkapto-4—ftalimidobutanoyl/-_L-leucyl-_L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 25 (0,20 g), ve formě světle žluté pevné látky (0,12 g).

C₂₈H₃4N4O₅S /538,6/, /ΜΐΓ=540/

Příklad 60 (jRS)-N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/--L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 26 (0,2 g), ve formě bezbarvé pevné látky (0,18 g).

TLC Rf 0,41 (5 % MeOH-CH₂Cl₂)

Příklad 61 (JčS)-N-/2-merkapto-6-ftalimidohexanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Z Příkladu 27 (0,15 g) ve formě světle žluté pevné látky (0,12 g).

TLC Rf 0,25 (10 % MeOH-CH₂Cl₂)

Příklad 62 (/?6)-N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-_L-leucyl-L-tryptofan N-methylamid

Z Příkladu 9 (250 mg), ve formě světle žluté pěny (222 mg, 96 %).

C₃iH₃₇N₅O₅S /591,7/, /MLT=592/

Příklad 63 (2ČS)-N-/2-merkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-_L-tryptofan N-methylamid

Z Příkladu 10 (330 mg), ve formě bezbarvé pěny (300 mg, 98 %).

C₂₆H₃₈N₄O₅S /518,7/, /ΜΗ*=519/

Příklad 64 (Á5)-N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-_L-(ó’-methyl)cysteinyl-L“tryptofan N-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 119 a meziproduktu 124.

C₂₉H₃₂N₅O₅S₂/595,7/, /MH⁺=596/

-51CZ 288436 B6

Příklad 65 (7ČS)-N-/2-merkapto-3-ftalimidopropanoyl/-L-leucyl-_L-fenylalaninN-methylamid

Připraví se způsobem popsaným dříve pro Příklad 39 přes meziproduktu 43, z meziproduktu 125 a L-leucyl-v-fenylalaninu N-methylamidu.

C₂₇H₃₂N₄O₅S /524,6/, ZMH⁺=525/

Příklad 66 (7ČS)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-leucyl-L-fenylalaninN-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a _L-leucyl-Lfenylalanin N-methylamidu.

C₂₄H₃₄N₄O_sS /590,6/, /ΜΙΓ=491/

Příklad 67 (&S)-N-/2-merkapto-4~sukcinimidobutanoyl/-(S)-propylglycinyl-L-fenylalanin N-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a meziproduktu 114.

C₂₃H₃iN₄O₅S /475,6/, /MH⁺=476/

Příklad 68 (AS)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(>S^L-methyl)cysteinyl-L-terc.leucinN-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a meziproduktu 114.

C₁₉H₃₂N₄O₅S₂ /460,6/, /MH⁺=461/

Příklad 69 (&S)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(S^;-methyl)cysteinyl-L-tryptofan-N-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a meziproduktu 124.

C₂₄H₃iN₅O₅S₂ /533,7/, /MH*=534/

Příklad 70 (AS)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(S-methyl)cysteinyl-TL-fenylalanin N-methylamid

-52CZ 288436 B6

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a meziproduktu 111.

C₂₃H₃oN₄05S₂ /506,6/, /MH⁺=507/

Příklad 71 (2?S)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(O-methyl)-L-terc.leucin N-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a meziproduktu 115.

C_I9H₃₂N₄O₅S /444,5/, /MHM45/

Příklad 72 (l?S)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-leucyl-L-terc.leucin N-methylamid

Připraví se dříve popsaným způsobem pro Příklady 28 a 48, z meziproduktu 123 a meziproduktu 116.

C₂iH₃₆N₄O₅S /456,6/, /MH⁺=457/

Příklad 73 (&S}-N-/2-merkapto-5-(sukcmimido)pentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Připraví se hydrolýzou z Příkladu 10.

C₂₅H₃₆N₄O₅S /504,7/, /MH⁺=505/

Příklad 74 (J?)-N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-Ieucyl-L-tryptofan N-methylamid

Připraví se separací směsi diastereoizomerů v poměru 1:1 přítomných v Příkladu 10 pomocí kolonové chromatografie.

C₂₆H₃₈N₄O₅S /518,7/, /MHM19/

Příklad 75 (S)-N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-_L-leucyl-_L-tryptofan N-methylamid

Připraví se separací směsi diastereoizomerů v poměru 1:1 přítomných v Příkladu 10 pomocí kolonové chromatografie.

C₂6H₃₈N₄O₅S /518,7/, /MH⁺=519/

Příklad 76 (l?)-N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-tryptofan N-methylamid

Připraví se separací směsi diastereoizomerů v poměru 1:1 přítomných v Příkladu 9 pomocí kolonové chromatografie.

-53CZ 288436 B6

C31H37N5O5S2 /591,7/, /MH⁺=592/

Příklad 77 (/?)-N-/2-acetylmerkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-_L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Připraví se separací směsi diastereoizomerů v poměru 1:1 přítomných v Příkladu 7 pomocí kolonové chromatografie.

C₂₅H₃₆N₄O₅S /504,7/, /MH⁺=505/

Příklad 78 (7řS)-N-/2-merkapto-5-(methylamino)karbonylhexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Připraví se hydrolýzou z Příkladu 8.

C₂₄H₃8N₄O₄S /478,6/, /MH⁺=479/

Příklad 79 (&S)-N-/2-merkapto-6-(amino)karbonylhexanoyl/-_L-leucyl-L-fenylalanin N-methylamid

Připraví se hydrolýzou z Příkladu 8.

C₂3H₃₆N₄O4S /464,6/, ZMHM65/

Příklad A

Kolagenázová inhibiční aktivita

Účinnost sloučenin obecného vzorce I k působení jako inhibitory kolagenázy se určuje způsobem podle Cawstona a Baretta, (Anal. Biochem., 99:340-345, 1979), kdy se testuje lmM roztok inhibitoru nebo se po zředění inkubuje při teplotě 37 °C po dobu 16 hodin s kolagenem a kolagenázou (pufrováno pomocí 50 mM Tris, pH 7,6 obsahující 5 mM CaCl₂, 0,05 % Brij 35, 60 mM NaCl a 0,02 % NaN₃). Kolagen se acetyluje ³H nebo ¹⁴C-kolagenem připraveným způsobem podle Cawstona a Murphyho (Methods in Enzymology, 80:711, 1981). Volba značení radioaktivním izotopem nemění schopnost kolagenázy, pokud se týká degradace kolagenové spodní vrstvy. Vzorky se centrifugují, aby se usadil nespotřebovaný kolagen a podíl radioaktivního supematantu se odstraní pro stanovení pomocí scintilačního sčítače jako stanovení hydrolýzy. Kolagenázová aktivita za přítomnosti 1 mM inhibitoru, nebo pro zředěnou podobu, se porovnává s aktivitou porovnávacího vzorku bez inhibitoru a výsledek se udává jako koncentrace inhibitoru, jež působí 50% inhibici kolagenázy (IC₅₀).

Příklad B

Stromelysinová inhibiční aktivita

Účinnost sloučenin obecného vzorce I k působení jako inhibitory stromelysinu se určuje způsobem podle Nagase a kol. (Methods in Enzymology Vol. 254, 1994), kdy se testuje 0,1 mM roztok inhibitoru nebo se po zředění inkubuje při teplotě 37 °C po dobu 16 hodin se

-54CZ 288436 B6 stromelysinem a ³H transferinem (pufrováno pomocí 50 mM Tris, pH7,6 obsahující 10 mM CaCl2, 150 M NaCl 0,05 % Brij 35 a 0,02 % NaN3). Transferin se karboxymethyluje pomocí ³H kyseliny jodoctové. Stromelysinová aktivita za přítomnosti 1 mM, nebo pro zředěnou podobu, se porovnává s aktivitou porovnávacího vzorku bez inhibitoru a výsledek se udává jako koncentrace inhibitoru, jež působí 50% inhibici stromelysinu (IC50)·

PříkladC

Želatinázová inhibiční aktivita

Účinnost sloučenin obecného vzorce I k působení jako inhibitory kolagenázy se určuje způsobem podle Harrise a Kranea (Biochem. Biophys, Acta, 258:566-576. 1972), kdy se testuje lmM roztok inhibitoru nebo se po zředění inkubuje při teplotě 37 °C po dobu 16 hodin s želatinázou a zahřívaným denaturovaným ³H nebo ¹⁴C-acetylovaným kolagenem (pufrováno pomocí 50 mM Tris, pH 7,6 obsahující 5 mM CaCl2, 0,05 % Brij 35 a 0,02 % NaN3). Uvedená ³H nebo ¹⁴C želatina se připraví denaturováním ³H nebo ¹⁴C kolagenu připraveného způsobem podle Cawstona a Murphyho (Methods in Enzymology, 80:711, 1981) inkubací při teplotě 60 °C po dobu 30 minut. Nespotřebovaná želatina se sráží přidáním kyseliny trichloroctové a centrifuguje se. Želatinázová aktivita za přítomnosti 1 mM inhibitoru, nebo pro zředěnou podobu, se porovnává s aktivitou porovnávacího vzorku bez inhibitoru a výsledek se udává jako koncentrace inhibitoru, jež působí 50% inhibici želatinázy (IC50).

Příklad D

Inhibice produkce TNFalfa

Účinnost sloučenin obecného vzorce I k působení jako inhibitory produkce TNFalfa se určuje následujícím způsobem. Testuje se lmM roztok inhibitoru nebo se po zředění inkubuje při teplotě 37 °C v atmosféře 5 % CO₂ s THP-1 buňkami (lidské monocyty) suspenzovanými v RPM1 1640 prostředí a 20 mikroM beta-merkaptoethanolu při hustotě buněk 1 x 10⁶/ml a stimuluje se s 5mikrogramů/ml finální koncentraci LPS. Po 18 hodinách se supematant analyzuje na hladinu TNFalfa za použití komerčně dostupného ELISA kitu (R and D Systems).

Aktivita za přítomnosti 1 mM inhibitoru, nebo pro zředěnou podobu, se porovnává s aktivitou porovnávacího vzorku bez inhibitoru a výsledek se udává jako koncentrace inhibitoru, jež působí 50% inhibici produkce TNFalfa.

Příklad E

Pomocný model artritické krysy

Sloučeniny obecného vzorce I se vyhodnocují na pomocném modelu artritické kiysy, přičemž je hodnocení založeno na způsobech podle Β. B. Newboulda (1963), Br. Pharmacol, 21, 127-136 a

C. M. Pearsona a F. D. Wooda (1959), Arthritis Rheum., 2., 440-459. Samečkové krys Wistar (180 až 200 g) se injektují na spodní straně ocasu Freundovým adjuvans. O dvanáct dnů později se z nich sestaví experimentální skupiny. Sloučeniny obecného vzorce I se dávkují buď orálně jako suspenze v 1 % methylcelulóze, nebo intraperitoneálně v 0,2 % karboxymethylcelulóze od 12. dne do konce experimentu 22. dne. Každý druhý den se měří objem zadních pacek a pro ucelení experimentu se celé zadní končetiny ozařují paprsky X. Výsledky se vyjadřují jako procento vzrůstu objemu končetiny vzhledem k 12. dnu.

-55CZ 288436 B6

Příklad F

Xenoimplantátový model karcinomu vaječníku myši

Účinnost sloučenin obecného vzorce I se vyhodnocují na xenoimplantátovém modelu karcinomu vaječníku myši, na nádoru, přičemž způsob je založen na postupu popsaném B. Daviesem a kol., (1993), Cancer Research, 53, 2087-2091. Tento model sestává z naočkování samiček nu/nu myší 1 x 10⁹ OVCAR3-icr buněk do pobřišniční dutiny. Sloučeniny obecného vzorce I se podávají orálně jako suspenze v 1 % methylcelulózy nebo intraperitoneálně jako suspenze ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku v 0,01 % Tween-20. Na závěr experimentu (4 až 5 týdnů) se počet peritoneálních buněk spočítá a zváží se usazený pevný nádor. U některých experimentů se vývin nádoru monitoruje měřením nádorových specifických antigenů.

Příklad G

Model prsního karcinomu krysy

Sloučeniny obecného vzorce I se vyhodnocují v HOSP.l modelu prsního karcinomu nádoru (S. Eccles a kol., (1995), Cancer Research, v tisku). Tento model sestává z intravenózního naočkování samiček CBH/cbi krys 2 x 10⁴ nádorových buněk do hrdelní žíly. Sloučeniny obecného vzorce I se podávají orálně jako suspenze v 1 % methylcelulóze nebo intraperitoneálně jako suspenze ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku v 0,001 % Tween-20. Na závěr experimentu (4 až 5 týdnů) se zvířata usmrtí, odstraní se plíce a počítají se jednotlivé nádory po fixaci 20 hodin v Methacamu.

Průmyslová využitelnost

Léčivé přípravky podle tohoto vynálezu jsou významné pro farmaceutický průmysl.

Claims (24)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Peptidylové deriváty obecného vzorce I kde:

   R¹ je C]_6 alkyl, C2_6 alkenyl, -Cm alkyl-aryl, aiyl, -Cm alkyl-heteroaryl, heteroaryl nebo -Cm alkyl-AR⁹ kde A znamená O, NR⁹ nebo S(O)m kde m = 0 až 2, a R⁹ je H, Cm alkyl, aryl, heteroaryl, -Cm alkyl-aryl nebo -Cm alkyl-heteroaryl, jestliže A = NR⁹, skupiny R⁹ mohou být stejné nebo odlišné, přičemž aryl je případně substituovaná fenylová nebo naftylová skupina se substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, trifluormethyl, Cm alkyl, CM^alkoxy a fenyl,

   -56CZ 288436 B6 heteroaryl je aromatický kruhový systém o 5 až 10 atomech, z nichž alespoň jeden je vybrán ze skupinu obsahující kyslík, dusík nebo síru,

   R² je H nebo C]_₆ alkyl,

   R³ je /Alk/nR⁶ kde Alk je Ci_6 alkyl nebo C2_6 alkenyl a n je 0 nebo 1,

   X je NR⁴R⁵ kde buď R⁴ je vodík, nebo C_w alkyl popřípadě substituovaný aminoskupinou, ary lem, alkylaminoskupinou, chráněnou aminoskupinou, di(Ci_6 alkyl)aminoskupinou, mono(C]_6 alkyl)aminoskupinou, CO₂H, chráněným karboxylěm, karbamoylem, mono(Ci_6 alkyl)karbamoylem nebo di(Ci_e alkyl)karbamoylem, a R⁵ je vodík nebo C_w alkyl, nebo NR⁴R⁵ tvoří kruh jako pyrrolidino, piperidino nebo morfolino, přičemž aryl znamená jak uvedeno výše, chráněná aminoskupina je aminoskupina chráněná skupinami vybranými ze skupiny obsahující benzyloxykarbonyl, terc.butoxykarbonyl, acetyl neboje ve formě ftalimidové, chráněný karboxyl je karboxyl chráněný ve formě snadno štěpitelného esteru vybraného ze skupiny obsahujícího methylester, ethylester, benzylester nebo terc.butylester,

   R⁷ je vodík nebo R^l0CO, kde R¹⁰ je Cm alkyl, -Cm alkyl-aryl, -Cm alkyl-heteroaryl, cyklo(C₃._₆)alkyl, -Cm alkyl-cyklo(C₃_₆)alkyl, C₂_6 alkenyl, -C₂_6 alkenyl-aryl, aryl nebo heteroaiyl, přičemž aryl, heteroaryl znamená jak uvedeno výše,

   R⁸ je aiyl nebo aryl substituovaný R¹¹, heteroaiyl nebo heteroaryl substituovaný R¹¹, Cm alkyl-R¹¹, -Cm alkyl-aryl nebo -Cm alkyl-aryl substituovaný R¹¹, -Cm alkylheteroaryl nebo -Cm alkyl-heteroaryl substituovaný R¹¹, cyklo(C3_6)alkyl nebo cyklo(C3_6)alkyl substituovaný Rⁿ, cyklo(C3_6)alkenyl nebo cyklo(C₃_«)alkenyl substituovaný R¹¹, -Cm alkyl-cyklo(C₃_6)alkyl nebo -Cm alkyl-cykloíC^jalkyl substituovaný R¹¹ nebo jakákoli z těchto tří skupin ^alkyl kde p jel nebo 2 a B a C jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří O, S, C(R⁹)₂ a NR⁹,

   -57CZ 288436 B6

   R⁶ je AR⁹, cyklo(C3_6)alkyl, cyklo(C3_6)alkenyl, C^6 alkyl, -Cm alkoxy-aryl, benzyloxyaryl, aryl, heteroaryl, -Cm alkyl-heteroaryl, -Cm alkyl-aryl, -Cm alkyl-COOR⁹ -C,_e alkyl-NHR, CONHR, NHCO2R, NHSO₂R nebo NHCOR, přičemž

   R je definováno jako R¹⁰, aryl a heteroaryl jsou definovány výše,

   R¹¹ je SO2R¹³, SR⁷, SR⁹, COR¹³, N(R⁹)2, NR⁹R¹², OR⁹, sukcinimido nebo ftalimido,

   R¹² je H nebo COR⁹, CO2R⁹, kde R⁹ není H, CONHR⁹ nebo SO2R⁹, kde R⁹ není H, a

   R¹³ je OH, OCm alkyl, Ο-Cm alkyl-aiyl, N(R⁹)₂, kde substituenty R⁹ jsou stejné nebo odlišné, Cm alkyl, aryl, heteroaryl, -Cm alkyl-aryl nebo -Cm alkyl-heteroaryl, přičemž aiyl a heteroaryl jsou uvedeny výše, přičemž tyto sloučeniny jsou ve formě volné báze, ve formě farmaceuticky přijatelné soli, ve formě solvatované nebo hydratované.
2. 2. Peptidylové deriváty podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R¹ je Cm alkyl nebo Cw alkyl-AR⁹, kde A je S(O)m, NR⁹ nebo O a m = 0,1 nebo 2 a R⁹ je H, C_M alkyl nebo aryl.
3. 3. Peptidylové deriváty podle nároku 1 nebo 2 obecného vzorce I, kde R³ je /Alk/_nR⁶ kde n = 0 nebo 1, Alk je C« alkyl a R⁶ je Cm alkyl, -Ci_3 alkyl-aiyl, -C]_3 alkyl-heteroaryl nebo AR⁹.
4. 4. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 3 obecného vzorce I, kde R⁴ je H.
5. 5. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 4 obecného vzorce I, kde X je pyrrolidino, piperidino nebo morfolinoskupina.
6. 6. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 5 obecného vzorce I, kde R⁷ je H nebo (C_M alkyl)karbonyl.
7. 7. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 6 obecného vzorce I, kde R⁸ je Cm alkyl-R¹¹ nebo cyklo(C3_6)alkyl-R^H, a R¹ je COR¹³, NR⁹R¹², N(R⁹)2, sukcinimido nebo ftalimido, R¹² je COR⁹, CO2R⁹ s podmínkou, že R⁹ není H, nebo SO2R⁹ s podmínkou, že R⁹ není H, a R¹³ je OH, OCm alkyl nebo N(R⁹)2.
8. 8. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 7 obecného vzorce I, kde R⁵ je H nebo C_M alkyl.
9. 9. Peptidylové deriváty podle nároku 8 obecného vzorce I, kde

   R¹ je Cm alkyl, C₂_^ alkenyl, aryl nebo Ci_6 alkyl AR a R je Cj_4 alkyl, aryl nebo heteroaryl,

   R⁷ je H nebo R¹⁰CO, kde R¹⁰ je Cm alkyl, -Cm alkylaiyl, cyklo(C₃^) alkyl, -CMalkylcyklo(C₃.₆)alkyl, Cm alkenyl nebo -C₂_6alkenylaryl,

   -58CZ 288436 B6

   R⁸ je aryl nebo aryl substituovaný Rⁿ, heteroaryl nebo heteroaryl substituovaný R¹¹ > C]_4 alkyl-R¹¹, -Ci_4 alkyl-aiyl nebo -Cw alkyl-aryl substituovaný Rⁿ, cyklo(C3^)alkyl nebo cyklo(C₃_6)alkyl substituovaný R¹¹, cyklo(C3_6)alkenyl nebo cyklo(C3_6)alkenyl substituovaný R¹¹, -Ci_4 alkyl-cyklo(C3_$)alkyl nebo -Ci_4 alkyl-cyklo(C₃_6)alkyl substituovaný R^u nebo jakákoli z těchto tří skupin

   R⁶ je cykloCC^jalkyl, cyklo(C₃_6)alkenyl, Cj_6 alkyl, benzyl, -Ci_6 alkoxybenzyl, benzyloxybenzyl 3-indolylmethyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, alkyl, benzyl, alkoxybenzyl, benzyloxybenzyl nebo 3-indolylmethyl,

   R¹¹ je SR⁷, SR⁹, COR¹³, N(R⁹)₂, NR⁹R¹², OR⁹, sukcinimido nebo ftalimido, a

   R¹³ je OH, O-C^alkyl, O-Ci_4alkylaiyl, N(R⁹)₂, Cj^ alkyl, aryl nebo -Ci_₄ alkyl-aiyl.
10. 10. Peptidylové deriváty podle nároku 1, kterými jsou

    N-/2,3-Z>ř5-acetylmerkaptopropanoyl/-L·-leucyl-L·-fenylalanin-N-methylamid

    N-/2-acetylmerkapto-3-methoxykarbonylpropanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-4-methoxykarbonylbutanoyl/-L-leucyl-L·-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-L·-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-4-ftalimidobutanoyl/~L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-6-ftalimidohexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2,3-Z>zs-merkaptopropanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

    N-/2-merkapto-4-methoxykarbonylbutanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

    N-/2-merkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

    N-/2-merkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-merkapto-4-ftalimidobutanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid a N-/2-merkapto-6-ftalimidohexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid.
11. 11. Peptidylové deriváty podle nároku 1, kterými jsou

    N-/2-acetylmerkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-L·-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-I^leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-valinyl-L·-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-L-tryptofan-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L·-valinyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-tryptofan-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-/beta-(4-thiazolyl)alanin-N-methylamid

    N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-/beta-(2-pyridyl)alanin-N-methylamid

    N-methylamid kyseliny N-/2-acetylmerkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-5-methyl-Lglutamové

    -59CZ 288436 B6

    N-/2-acetylmerkapto-6-ftalimidohexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-acetylmerkapto-2-(3-ftalimido)fenylacetyl/-L-leucyl-L·-fenylalanin-N-methylamid N-/2-merkapto-5-methoxykarbonylpentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid N-/2-merkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L·-leucyl-L·-fenylalanin-N-methylamid N-/2-merkapto-6-methoxykarbonylhexanoyl/-L-leucyl-L-tryptofan-N-methylamid N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

    N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L·-leucyl-L-tIyptofan-N-methylamid N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-I^/beta-(4-thiazolyl)/alanin--N-methylainid N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L-leucyl-L-/beta-(2-pyridyl)/alanin-N“methyIamid N-methylamid kyseliny N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-L·-leucyl-5-methyl-L·-glutamové

    N-/2-merkapto-6-ftalimidohexanoyl/-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid.
12. 12. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z nároků 1 až 9 obecného vzorce I, kde R¹ je -CH₂SCH₃.
13. 13. Peptidylové deriváty podle nároku 12, kterými jsou (RS)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimidopentanoyl/-(5)-methyl-_L-cysteinyl-_L-fenylalanin-Nmethylamid, (JčS)-N-/2-merkapto-5-ftalimidopentanoyl/-_L-(5'-methyl)cysteinyl-L-tryptofan-N-methylamid, (J?S)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(iS-methyl)cysteinyl-_L-terc.leucin-N-methylamid, (AS)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(5-methyl)cysteinyl-L-tryptofan-N-methylamid, (7iS)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(>S'-methyl)cysteinyl-T,-fenylalanin-N-methylamid.
14. 14. Peptidylové deriváty podle kteréhokoli z nároků 1 až 9 obecného vzorce I, kde R³ je terc.butyl.
15. 15. Peptidylové deriváty podle nároku 14, kterými jsou (S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(>S)-terc.leucin-N-methylamid, (J?S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(K)-penicillamin-N-methylamid, (RST-N-Zž-facetylmerkaptoXS-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-ílřj-CS-methylj-penicillamin-Nmethylamid, (AS)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-_L-leucyl-(J?)-(2,2-dimethyl-2-methansulfonyl)alanin-N-methylamid, (7?5)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(J?)-(2,2-dimethyl-2-methansulfinyl)alanin-N-methylamid, (J?S)-N-/2-(acetylmerkapto)-5-ftalimido/pentanoyl-L-leucyl-(5)-terc.leucin-N-methylamid, (RS)-N-/2-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl/-_L-leucyl-(R)-(SAnethyl)penicillamin-N-methylamid, (S)-N-/2-merkapto-5-ftalimido/pentanoyl/-L-leucyl-(<S)-terc.leucin-N-methylamid, (R5)-N-/2-merkapto-4-sukcinimidobutanoyl/-L-(ý-methyl)cysteinyl-L-fenylalanin-N-methylamid.
16. 16. Peptidové deriváty podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 15 ve formě jednoho enantiomeru nebo diastereoizomeru nebo směsi těchto izomerů.
17. 17. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje peptidylové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 16, a farmaceuticky přijatelné ředidlo nebo nosič.

    -60CZ 288436 B6
18. 18. Použití peptidylových derivátů podle kteréhokoli zriároků 1 až 16, pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci zdravotních poruch souvisejících s matricí metalloproteinas nebo zprostředkovaných TNFalfa.
19. 19. Použití podle nároku 18, kde zdravotní poruchy jsou vybrány ze skupiny obsahující nádory, záněty a zánětlivá onemocnění, degeneraci tkáně, periodontální nemoci, oftalmologické nemoci, kožní onemocnění, horečky, kardiovaskulární poruchy, krvácení koagulační a akutní fázové odezvy, kachexii a anorexii, akutní infekce, HIV infekce, šokové stavy, reakci proti štěpu hostitele, autoimunní nemoci, reperfuzní poškození, mengitidu a migrénu.
20. 20. Použití podle nároku 19, kde zdravotní poruchy jsou vybrány ze skupiny obsahující růst nádoru, angiogenezi, vývoj nádoru, metastázy, maligní ascity a malignantní výtok z pohrudnice.
21. 21. Použití podle nároku 19, kde zdravotní poruchy jsou vybrány ze skupiny obsahující reumatoidní artritidu, osteoartritidu, osteoporózu, astma, sklerózu, neurodegeneraci, Alzheimerovu nemoc, aterosklerózu, mrtvici, cévní onemocnění, Crohnovu nemoc a ulcerativní koliku.
22. 22. Použití podle nároku 19, kde zdravotní poruchy jsou vybrány ze skupiny obsahující rohovkovou ulceraci, retinopatii a problémy s překlenováním pooperačních stavů.
23. 23. Použití podle nároku 19, kde zdravotní poruchy jsou vybrány ze skupiny obsahující lupénku, atopickou dermatózu, chronické nádory a epidermální bulózu.
24. 24. Použití podle nároku 19, kde zdravotní poruchy jsou vybrány ze skupiny obsahující periodonitis a záněty dásní.