CN1899297A - 密脉鹅掌柴提取物及在制药中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种密脉鹅掌柴有效部位提取物，其制备方法及在制药中的应用，该提取物是从密脉鹅掌柴提取的有效部位，主要含有活性成分5－40％咖啡酰酸类、15－55％槲皮素配糖体、15－45％齐墩果酸配糖体。本发明同时提供有效部位的制备方法。该提取物可单独或与其它药用许可的辅料配合后制成口服或注射剂型，用于活血化淤、改善微循环、抗急性心肌缺血、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风后遗症、急慢性脑缺血、脑梗塞、脑血栓的预防与治疗。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的有效部位提取物，以及所述的有效部位提取物的制备方法和在制药领域中的用途。
背景技术
密脉鹅掌柴Schefflera venulosa Wight et Arn.为一种五加科鹅掌柴属植物。常绿小乔木，高5-7米，掌状复叶，小叶5-7片，椭圆形，长5-10厘米，宽2.5-4厘米，先端短渐尖，基部圆形至微心形，全缘，小叶柄长2-4厘米。圆锥花序长约15厘米；花白色，芳香，花梗明显。浆果球形，成熟时暗紫色。收载于《云南药品标准1974年版》。具有止痛消肿，舒筋活络的功效，用于风湿骨痛，头痛。分布于云南中部、西南部、东南部、南部及西北部，贵州、湖南西部等。中国有鹅掌柴属植物37种，常作为药用的有十余种。该属植物大部分未进行过化学成分研究或研究得不够系统，有效成分也不明确。以汉桃叶作为处方药物的成方制剂包括2个药典品种(收载于1977年版药典)和2个部颁标准品种，以七叶莲(S.arboricola)作为处方药物的成方制剂包括6个部颁标准品种，以鸭脚木皮作为处方药物的成方制剂包括4个部颁标准品种，均用于祛风除湿、舒经活络、强身壮骨、消肿止痛。现有的同属其它种的药物制剂主要为粗提物制备的制剂，化学成分研究不系统，起到疗效的成分也不明确。
发明内容
本发明的目的即是通过对密脉鹅掌柴(Schefflera venulosa Wight etArn.)的研究提供一种成分明确、质量可控、安全有效的药用提取物及制剂，并提供该提取物在制药中的新用途。
本发明的发明思路基于：在深入研究密脉鹅掌柴化学成分和活性成分过程中，发现密脉鹅掌柴中含有咖啡酰酸类、槲皮素配糖体、齐墩果酸配糖体，是其重要活性成分。因此，提供了一种成分明确的有效部位提取物，其特征在于该提取物活性成分含有5-40％主要为绿原酸、异绿原酸C、茉莉素的咖啡酰酸类；15-55％主要为芦丁、槲皮素-7-O-glc、槲皮素-3-O-glc、槲皮素-3-O-glc(6-1)xly、槲皮素-3-O-glcUA的槲皮素配糖体、15-45％齐墩果酸配糖体。化学结构示意图见附图1。附图2是本发明提取物的HPLC图谱，直观地反映了本提取物的化学组成概况。
本发明有效部位提取物可通过如下技术方案来制备：
工艺路线如附图3所示，取密脉鹅掌柴的全株或根、茎、叶，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取2-4次，合并提取液，减压浓缩，浓缩液加酸调pH值至3-5，上大孔吸附树脂层析，先用水洗脱，再用55-70％乙醇洗脱，收集55-70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，残留物干燥即得。
本技术的一个重要特征是应用大孔吸附树脂层析进行粗提物的精制，以除去糖、蛋白质、氨基酸等杂质，提高了活性成分的含量。
本提取物与现有的同属其它种的药物制剂有显著区别，现有的同属其它种的药物制剂主要为粗提物制备的制剂，化学成分研究不系统，有效成分也不明确。本发明提取物有效成分全面，化学组成清晰，并且质量可控，具有较好的药效和更广的适应症群。
本发明提供了有效部位提取物的含量测定方法，应用HPLC法控制咖啡酰酸类主要成分绿原酸的含量、槲皮素配糖体水解产物槲皮素的含量及齐墩果酸配糖体水解产物齐墩果酸的含量；UV法控制槲皮素配糖体及齐墩果酸配糖体含量，含量测定方法如下：
绿原酸 高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以乙晴—0.4％磷酸溶液(13∶87)为流动相；检测波长为327nm。理论塔板数按绿原酸峰计算不得低于2500。
对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含绿原酸0.04mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 精密称取本品5mg于25ml容量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算绿原酸的含量。
槲皮素 高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以乙晴—0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为254nm。理论塔板数按槲皮素峰计算不得低于2500。
对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的槲皮素对照品，加甲醇制成每1ml含槲皮素0.03mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 精密称取本品150mg，加甲醇20ml、25％盐酸5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算槲皮素的含量。
齐墩果酸 高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以乙睛—水(84∶16)为流动相；检测波长为203nm。理论塔板数按齐墩果酸峰计算不得低于2500。
对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含齐墩果酸0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 精密称取本品100mg，加10％硫酸溶液60ml，置水浴中加热回流4小时，取出，放冷，滤过，残渣用水洗至中性，并于60℃烘干。精密加入氯仿50ml，称定重量超声提取30分钟后取出放冷，用氯仿补足原重，精密量取供试液25ml蒸干，残渣加甲醇溶解，移入5ml量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算齐墩果酸的含量。
槲皮素配糖体 分光光度法测定。
芦丁对照品溶液制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含芦丁0.2mg的溶液，作为对照品溶液。
标准曲线制备：精密吸取芦丁对照液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别置25ml量瓶中，加5％亚硝酸钠试液1.0ml，摇匀后放置6min，加10％硝酸铝溶液1.0ml摇匀，放置6min，加4％NaOH液10ml，振摇，加水至刻度，摇匀后放置15min，以第一瓶作为空白，在360-650nm范围内扫描，确定最佳检测波长，在此波长处测定各标品吸收度，得回归方程。
样品测定：精密称取样品约10mg于10ml容量瓶中，加90％甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取上述溶液1ml，置25ml量瓶中，按标准曲线绘制项下进行操作，测定吸收度，根据吸收度从回归方程求出相当于芦丁对照液的浓度，并求出各供试品中总的槲皮素配糖体的含量。
齐墩果酸配糖体 分光光度法测定。
齐墩果酸对照品溶液制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含齐墩果酸0.4mg的溶液，作为对照品溶液。
标准曲线制备：精密吸取齐墩果酸对照液0、10、20、30、40、60ml，分别置具塞试管中，挥干，加入5％香草醛-冰乙酸液0.2ml，高氯酸0.8ml加塞摇匀，于70℃水浴中加热20min，取出，冷却至室温后，加乙酸乙酯至5ml，摇匀，以第一瓶作为空白，在400-650nm范围内扫描，确定最佳检测波长，在此波长处测定各标品吸收度，得回归方程。
样品测定：精密称取样品约10mg于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取上述溶液20μl，按标准曲线绘制项下进行操作，测定吸收度，根据吸收度从回归方程求出相当于齐墩果酸对照液的浓度，并求出各供试品中总的齐墩果酸配糖体的含量。
本发明涉及密脉鹅掌柴有效部位提取物作为制备改善微循环的药中的应用。
本发明涉及密脉鹅掌柴有效部位提取物作为制备抗急性心肌缺血的药中的应用。
本发明涉及密脉鹅掌柴有效部位提取物作为制备用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风后遗症的药中的应用。
本发明涉及密脉鹅掌柴有效部位提取物作为制备用于治疗急慢性脑缺血、脑梗塞、脑血栓的药中的应用。
本发明的优点在于：
1、本发明提供了植物密脉鹅掌柴可作为药物组分的有效部位提取物，该提取物可以单独使用，也可以与其他植物提取物混合使用。
2、本发明对已知植物密脉鹅掌柴发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。
3、本发明的密脉鹅掌柴有效部位提取物安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
4、本发明的密脉鹅掌柴有效部位提取物配制成的药物可作为多种剂型，如：口服胶囊、片剂、滴丸、颗粒剂、口服液、软胶囊、针剂等。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用密脉鹅掌柴有效部位提取物的药理试验及结果来说明其在制药中的新用途。
一、毒性试验
结果表明
密脉鹅掌柴有效部位提取物对ICR小鼠经灌胃途径急性毒性的LD50为19.48±2.73g/kg，95％的可信限为16.94～22.40g/kg。
二、抑制血小板聚集作用试验
用离体家兔血小板聚集实验考察密脉鹅掌柴有效部位提取物对血小板最大聚集的抑制作用。结果表明密脉鹅掌柴有效部位提取物对血小板聚集均产生浓度相关性的抑制作用。
三、小鼠耳廓微循环试验
通过小鼠耳廓正常微循环及盐酸肾上腺素所致小鼠实验性微循环障碍模型观察密脉鹅掌柴提取物对小鼠耳廓微循环有无影响。结果表明密脉鹅掌柴有效部位提取物具有明显改善微循环的作用。
四、大鼠急性心肌缺血作用试验
采用大鼠冠脉前降支结扎法造成的急性心肌缺血模型，观察密脉鹅掌柴有效部位提取物的抗心肌缺血作用。结果表明大鼠冠脉前降支结扎后，II导心电图ST段明显抬高，呈现明显的缺血性损伤表现，大鼠口服密脉鹅掌柴有效部位提取物后ST段显著降低；大鼠冠脉前降支结扎24小时后，血清AST、LDH、CK-MB均显著升高，大鼠口服密脉鹅掌柴有效部位提取物后可使LDH、CK-MB水平显著降低；大鼠冠脉前降支结扎24小时后，心肌组织出现明显的缺血坏死病变区域，其梗死区体积约为129.8mm3，约占危险区体积的86.4％，约占左室总体积的34.5％。大鼠口服给予密脉鹅掌有效部位柴提取物后，可使梗死区/危险区体积百分比、梗死区/左室体积百分比显著下降。
五、对大脑中动脉阻断(MCAO)所致大鼠脑缺血模型的影响
用FeCl3造成大鼠局灶性脑缺血，给模型大鼠口服密脉鹅掌柴有效部位提取物高、中、低剂量，每天1次，连续5天，可明显改善大鼠行为障碍，缩小脑梗死范围。
六、对麻醉犬脑血流量的影响
麻醉犬十二指肠给予密脉鹅掌柴有效部位提取物高、中、低剂量，结果为可剂量依赖性降低椎动脉阻力，扩张椎动脉。高剂量还明显增加脑血流量。
七、对麻醉开胸犬血流动力学的影响
麻醉开胸犬给予密脉鹅掌柴有效部位提取物高、中、低剂量，对各项血流动力学指标无明显影响；可降低血压、总外周阻力及冠脉阻力，增加心脏泵血功能，对其它血流动力学参数无明显影响。
八、对高粘血症大鼠血液黏度的影响
大鼠口服给予密脉鹅掌柴有效部位提取物高、中、低剂量，每天1次，连续5天，能明显降低高分子右旋糖苷引起的高黏度血症大鼠的全血黏度，可能与红细胞聚集抑制有关。
附图说明
附图1为本发明的密脉鹅掌柴8个化学成分的结构图
附图2为本发明提取物的HPLC图谱及主要成分
附图3为本发明以密脉鹅掌柴为原料制备本发明提取物的工艺流程
下面以更具体的实施例对本发明有效部位提取物及其制剂的制备方法加以说明。
实施例1：提取物制备
取密脉鹅掌柴干燥全株1000克，粉碎成粗粉，加入10倍量75％乙醇回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次2小时，过滤，滤液回收乙醇后，加酸调pH值至3-5，过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用55-70％乙醇洗脱，取醇洗脱部分，浓缩干燥，粉碎，即得黄棕色粉状提取物。
实施例2：片剂制备
取本发明提取物100g、淀粉80g、糊精5g混合均匀，加入10％淀粉浆制软材，用14目尼龙上网制粒，60-70℃通风干燥，16目筛整粒，加硬脂酸镁1.5g、羧甲基淀粉钠5g混匀，压制成1000片，包衣即得。每片含提取物100mg。成人口服每日2-5次，每次1-10片。
实施例3：胶囊制备
取本发明提取物100g，加入淀粉78g、硬脂酸镁2g混匀，直接用全自动胶囊填充机填充成1000粒，抛光即得。每粒含提取物100mg。成人口服每日2-5次，每次1-10粒。
实施例4：滴丸制备
取本发明提取物12g，投入32g加热熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80-90℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入10-15℃的液状石蜡中，共制成1000粒，将形成的滴丸沥干并擦除液状石蜡，干燥即得。每粒含提取物12mg。成人口服每日2-5次，每次10-80粒。
实施例5：口服液制备
取本发明提取物20g，与蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸钠2g及蒸馏水300ml混合加热至85-90℃，搅拌使溶解，保温30min，滤过，滤液加水稀释至1000ml，搅匀，灌封(每支10ml)，灭菌即得。成人口服每日2-5次，每次1-5支。
实施例6：颗粒剂制备
取本发明提取物1份、糊精2份、蔗糖粉10份及乙醇适量，混匀，过10目筛制成颗粒，于60-70℃干燥，整粒，分装即得。每包重5g。成人口服每日2-5次，每次1-5包。
实施例7：注射液制备
取本发明提取物100g，加注射用水适量使溶解，加配制量的0.02％活性碳搅拌5-10min，滤过，滤液稀释至10L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调pH7.5-8.0，超滤，灌封成1000支(10ml/支)，100℃30min灭菌即得。成人静脉或肌肉注射给药，每日1-2次，每次1-5支。
实施例8：粉针剂制备
取本发明提取物100g，加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解，加配制量的0.02％活性碳搅拌5-10min，滤过，滤液加水稀释至1L左右，调pH6.5-7.8，超滤，喷雾干燥，干粉无菌分装即得。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250-500ml稀释后缓慢静脉滴注。成人每日1-2次，每次1-5支。
实施例9：冻干粉针制备
无菌条件下取本发明提取物100g，至于无菌容器内，加注射用水至约950ml，搅拌使溶解，调pH6.5-7.5，加注射用水至1000ml，然后加配制量的0.02％活性碳搅拌5-10min，用无菌抽滤漏斗过滤，再用灭菌垂熔漏斗精滤或超滤，滤液检验合格后分装于2ml安瓿中，低温冷冻干燥，无菌熔封即得。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250-500ml稀释后缓慢静脉滴注。成人每日1-2次，每次1-5支。
Claims (10)
1、一种密脉鹅掌柴有效部位提取物，其特征在于该提取物活性成分含有5-40％主要为绿原酸、异绿原酸C、茉莉素的咖啡酰酸类；15-55％主要为芦丁、槲皮素-7-O-glc、槲皮素-3-O-glc、槲皮素-3-O-glc(6-1)xly、槲皮素-3-O-glcUA的槲皮素配糖体、15-45％齐墩果酸配糖体。
2、按照权利要求1所述的有效部位提取物，其特征在于制备方法为取密脉鹅掌柴的全株或根、茎、叶，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取2-4次，合并提取液，减压浓缩，浓缩液加酸调pH值至3-5，上大孔吸附树脂层析，先用水洗脱，再用55-70％乙醇洗脱，收集55-70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，残留物干燥即得。
3、权利要求1所述有效部位提取物作为制备改善微循环的药中的应用。
4、权利要求1所述有效部位提取物作为制备抗急性心肌缺血的药中的应用。
5、权利要求1所述有效部位提取物作为制备用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风后遗症的药中的应用。
6、权利要求1所述有效部位提取物作为制备用于治疗急慢性脑缺血、脑梗塞、脑血栓的药中的应用。
7、含权利要求1有效部位提取物以及可用载体或赋形剂的制剂。
3、按照权利要求7的制剂，其中所述制剂为片剂或胶囊剂或滴丸或颗粒剂或口服液。
9、按照权利要求7的制剂，其中所述制剂为注射剂。
10、按照权利要求9的制剂，其中所述制剂为粉针和水针形式。
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