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CN1772295A - 半胱胺及其衍生物在制备提高疫苗抗体效价药物中的应用 - Google Patents

半胱胺及其衍生物在制备提高疫苗抗体效价药物中的应用 Download PDF

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CN1772295A
CN1772295A CNA2005101055411A CN200510105541A CN1772295A CN 1772295 A CN1772295 A CN 1772295A CN A2005101055411 A CNA2005101055411 A CN A2005101055411A CN 200510105541 A CN200510105541 A CN 200510105541A CN 1772295 A CN1772295 A CN 1772295A
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Abstract

本发明提供了半胱胺及其衍生物的一种新用途，即在制备提高人用或兽用疫苗抗体效价和提高机体免疫应答反应及抗病力中的药剂中的应用。所述应用是将半胱胺及其衍生物单独应用，或者将其制备成药物组合物。可以将该组合物与用于某种动物的合适基础饲料生产最终饲料，采用该最终饲料喂养该种动物；或采用该组合物制成适用于人服用的药剂。还可以将半胱胺或其衍生物单独或者连同稳定剂、代谢增强剂溶于水制备注射剂，直接或与矿物油乳化后作为佐剂预先或注射疫苗时注入人和动物机体内。

Description

半胱胺及其衍生物在制备提高疫苗抗体效价药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体来说涉及含有半胱胺及其衍生物在制备提高人用或兽用疫苗的抗体效价、提高机体免疫应答反应及抗病力中的药剂中的应用。本发明还涉及此用途的药物组合物及注射剂。
背景技术
传染病是人和动物普遍存在的、危害极大的疾病，有许多传染病是人畜共患的。近年来，由于几种动物传染病的出现，严重地威胁到人类的健康。因此控制动物传染病的发生就是为了更好地保证人类的健康。根据科学研究表明，人和动物疾病发生的生理、病理过程是一样的，所以对其预防和治疗原则也是一样的，即可以通过相同的途径来达到预期目的。
疫苗是控制和消灭传染病的有力武器，随着科学的发展，疫苗的研究日新月异，但是随着疫苗种类、技术水平、应用范围的进展，出现的问题越来越多，科研任务随之加重。为了达到较好的免疫效果，在制备疫苗时不可避免地要用到佐剂。佐剂是指与抗原一起或预先注入机体后，能增强机体对该抗原特异性免疫应答或改变免疫应答类型的物质。常用的免疫佐剂有氢氧化铝、卡介苗、短小棒状杆菌、细菌内毒素、多聚肌甘酸、双链多聚腺甘酸、尿甘酸以及多种由氨基酸和代谢增强剂如D-核糖组成的组合物佐剂。近年来，随着分子生物学的快速发展，多肽疫苗、亚单位疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗不断涌现，无论在数量上还是质量上，对疫苗佐剂的要求都越来越高。人们在不断地积极寻找新型佐剂，但大多尚处于实验研究阶段。而且，由于疫苗作用的充分发挥与多方面的因素有关，所以如何提高疫苗抗体的效价成为关键，即不仅仅可以从研究开发新的佐剂着手，还可以利用有效的生理活性物质来改善机体的免疫反应和抗体生成能力。
根据现代神经-内分泌-免疫网络的生理概念，对机体的内分泌、特别是各种细胞因子、生长因子的内分泌进行合理的调节来改善动物的免疫反应效果和类型是非常有效的。基于单个细胞因子、生长因子使用的疗法根据现代经验是复杂的，它们是细胞因子受体的自身调节机制的相关结果，而且继而免疫体系的效率降低了。人们还知道，经外源性细胞因子激活免疫体系不是有充分价值的，而且它的天然成分是丢失的。因此，希望制备一种能提高疫苗抗体效价的免疫刺激物质，它能活化在生理水平上的体系，意味着在天然调节相关和控制的范围之内。
半胱胺是自然界广泛存在的一种非常活跃的物质，它具有广泛的生理调节作用。例如它是动物体内生长抑素(SS)的耗竭剂，可以通过消耗SS而提高可以促进动物生长的生长激素(GH)水平，起到类似外源GH的作用，促进动物的生长和泌乳。半胱胺已经在医药领域以及促进动物生长、改善肉质和提高奶牛泌乳中作为添加剂直接应用或制作成预混合饲料应用。US专利No.4,711,897公开了动物喂养方式和包括半胱胺的饲料组合物。然而，尚未有关于半胱胺及其衍生物提高人用和兽用疫苗的抗体效价、提高机体免疫应答反应及抗病力的报道。
发明内容
(一)、要解决的技术问题
本发明的目的在于利用半胱胺生理调节的作用，提供一种半胱胺及其衍生物在制备提高人用和兽用疫苗的抗体效价和提高机体免疫应答反应及抗病力中的药剂中的应用，从而提供“活化在生理水平之上”的提高疫苗抗体效价的生理调节和/或免疫刺激组合物，它们区别于直接的外源性细胞因子和生长因子及其它合成的疫苗佐剂。
(二)、技术方案
为达到上述目的，本发明提供了半胱胺或其衍生物在制备用于提高疫苗的抗体效价和提高机体免疫应答反应及抗病力的药物组合物中的应用。本发明同时提供了一种提高疫苗的抗体效价和提高机体免疫应答反应及抗病力的药物组合物及注射剂。
本发明是基于如下根据：第一，半胱胺的性质非常活泼，是非常容易氧化和变质的物质，不易在常温和自然环境下存放和使用，如果要在动物中应用必须进行稳定化处理。第二，众所周知，且在技术背景中所提到的有关半胱胺的专利文献中，都有对半胱胺可以调节动物机体内分泌的特性进行了说明，半胱胺可以提高GH水平，从而促进动物的生长和泌乳。然而，由于内分泌和免疫之间网络的存在，半胱胺也可以间接地调节胰岛素样生长因子(IGF)、β-内啡肽(β-END)、肿瘤坏死因子(TNF)、细胞因子如白介素-2、6(IL-2、IL-6)。第三，上述IGF、β-END、TNF和IL-2、IL-6都与免疫相关，且IL-2可以直接作为疫苗佐剂应用。本发明从上述根据中得到启示：我们完全有可能用半胱胺制备出一种“活化在生理水平之上”的提高疫苗抗体效价的生理调节和/或免疫刺激组合物，直接添加在饲料中应用和/或作为佐剂应用。
本发明所述的应用，是将半胱胺及其衍生物单独作为饲料添加剂与用于某种动物的合适基础饲料生产最终饲料，采用该最终饲料喂养该种动物；或制成适用于人服用的药剂；或者将其单独制备成注射剂直接或与矿物油乳化后作为佐剂预先或注射疫苗时注入人和动物机体内。
或者，是将半胱胺及其衍生物和医药上可被接受的载体配制成药物组合物，本发明的药物组合物含有如下两种主要成分：按重量百分比计1～95％半胱胺或其衍生物和1～80％的医药上可接受的稳定剂。其中半胱胺的衍生物包括其盐类、辅酶A、牛磺酸、胱胺、泛硫乙胺等，它的盐包括盐酸半胱胺或其它药用酸加成盐。在本发明中术语“稳定剂”与术语“包含化合物宿主材料”具有同样的意义，因此两者可以相互交换使用。上述两种主要成分的配比优选为半胱胺1～75％和稳定剂1～60％，更优选为半胱胺1～40％和稳定剂10～40％。或者，由于使用的稳定剂与包含化合物宿主材料表示同一组分，它们都代表环糊精和/或它的衍生物，将其统一为一个术语，权利要求书也如此。
半胱胺的化学结构式是HS-CH2-CH2-NH2。以下提及的术语“半胱胺”表示半胱胺及其盐类化合物。半胱胺及其盐是本技术领域的技术人员熟知的。
半胱胺盐的化学通式是C2H7NS.X，其中X可以是盐酸盐、磷酸盐、酒石酸氢盐、水杨酸盐等。使用的半胱胺优选地具有药用标准，其中碳、氢、氮和硫的含量分别约为31.14重量％、9.15重量％、18.16重量％和41.56重量％。
所述包含化合物宿主材料可选自环糊精和/或它的衍生物，它们选自甲基β-环糊精(M-β-CD)、羟丙基(hydropropyl)β-环糊精(HP-β-CD)、羟乙基(hydroethyl)β-环糊精(HP-β-CD)、聚环糊精、乙基β-环糊精(E-β-CD)和/或支化环糊精。环糊精的化学通式是(C6O5H9)n.(C6O5H9)2。
值得注意的是由于它的分子内径是约6～8埃，该内径使得它特别合适作为制备含半胱胺组合物的包含化合物宿主材料，该制备包括使用包含工艺，因此优选使用环糊精的β-CD形式。以下提及的“环糊精”表示环糊精和/或它的衍生物。可以使用具有稳定和保护半胱胺免于降解的任何环糊精衍生物。例如，可以使用上述任何一组环糊精或其衍生物。使用的包含化合物宿主材料的实际含量依赖于用于制备含半胱胺的组合物的半胱胺实际含量。
上述组合物还可以含有如下成分：医药上可被接受的填充剂、粘合剂或包被载体。
所述填充剂可以选自粉状纤维素、淀粉、二氧化硅和/或硫酸钙(如CaSO4.2H2O)等。其含量范围以该组合物总重量计为1～90％，如果在含半胱胺的组合物中填料的含量超过90％，会因此降低主要活性成分的含量，和在改进由与其混合的饲料喂养的动物时，含半胱胺的组合物效果较差。
上述粘合剂的含量为5～50％，优选为10～40％，更优选为15～35％。实际含量会依赖于使用的半胱胺，包含化合物宿主材料和其它成分的实际数量。粘合剂可以选自羟丙基淀粉、微生物藻酸盐、微结晶纤维素和淀粉。如果组合物中粘合剂的含量小于5％，生产的组合物颗粒会缺乏要求的硬度，组合物的制造变得非常困难。然而如果粘合剂的含量大于50％，获得的组合物会具有过度的硬度，这会导致组合物难以被肠道吸收。
上述包被载体的含量为1～20％，优选为1～15％，更优选为2～10％。实际含量会依赖于使用的半胱胺，包含化合物宿主材料和其它成分的实际数量。包被载体在组合物中可显示为多层结构，并且优选在PH值1.5～3.5下保持不溶解。包被载体在一些实施方案中优选为固体载体，该固体载体是在动物肠内可被酶解代谢的包衣。包衣材料优选肠溶包衣材料，它允许在碱性环境的肠中被溶解。包衣材料可以选自下列物质：邻苯二甲酸醋酸纤维素、类邻苯二甲酸醋酸淀粉、邻苯二甲酸甲基纤维素、邻苯二甲酸的葡萄糖或果糖类衍生物、丙烯酸类和甲基丙烯酸类共聚物、聚甲基乙烯基醚、马来酸酐共聚物的部分酯化物质，虫胶或甲醛明胶(formogelatine)。如果包衣材料的含量小于1％，组合物的颗粒可能不完全由用作保护层的包衣材料覆盖。含半胱胺的组合物可因此在由肠吸收入动物血流之前降解。另一方面，如果包衣材料的含量超过20％，组合物中的活性成分不能有效地从组合物释放。因此，达不到提高疫苗效价或机体免疫力的希望调节。
该组合物还可以含有0.05～0.3％调味剂和矫臭气味剂，它们可以是食用香料、甜味剂、味精类或食盐等。
可将该组合物制成适用于人服用的药剂如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服剂、滴鼻剂、喷雾剂或其他医药学上可接受的剂型。
还可以将该组合物与用于动物的合适基础饲料生产最终饲料，采用该最终饲料喂养该动物。
在最终的饲料中该组合物的含量为50～1000ppm组合物。或者，饲料基本包括10～500ppm半胱胺或其衍生物。
用于本发明的半胱胺的组合物形式为小颗粒的形式，每个颗粒的优选直径基本为0.28～0.90mm。采用本技术领域的技术人员已知的微囊化方法制备这些颗粒。可以使用的一种物质是以上描述的包含化合物宿主材料(它可主要包括环糊精)。包含化合物宿主材料是用作分子胶囊以包合半胱胺分子的大分子物质，因此将组合物中的半胱胺保护和与光、热量、周围的空气和水分隔绝。从而保持半胱胺的稳定性。用于微囊化方法的包合化合物宿主材料优选为含有6～12个葡萄糖分子的环状多糖化合物，在Bacillus属杆菌存在下产生的环糊精糖苷转移酶和淀粉作用制备该环状多糖化合物。使用急性、亚急性和慢性毒性试验的各种研究显示该大分子物质是非毒性的。在微囊化方法之后，可以采用上述包衣材料的至少一层和优选多层途敷每个颗粒。
以下提供用于本发明的含半胱胺的组合物制备方法的更详细描述。
在内衬聚四氟乙烯和装配有聚四氟乙烯涂敷搅拌器的带夹套反应器中，加入3500～5000g的75％的盐酸半胱胺乙醇溶液并用氮气保护。使用的半胱胺的纯度，熔点和燃烧残余物优选分别是98％或以上，66～70℃和0.05％或以下。然后在氮气保护下将1100～1700g β-环糊精加入到反应器中，β-环糊精的质量是根据食品添加剂的要求，干基纯度大于98％，干燥失重小于10.0％，燃烧残余物小于0.2％，重金属的含量小于10ppm，砷含量小于2ppm。然后将混合物在40℃下加热3小时。停止加热后继续搅拌两小时，然后在40～50℃的温度下真空干燥产物之后，将由此获得的产物研磨和过40目筛。可能与组合物成分接触的所有设备部件应当优选由不锈钢制成。
然后在罐类型混合器中，在干燥环境氮气保护下加入4000～5000g(按干基重量计)上述所得的经过包含的半胱胺、3000～4300g填料，和1300～1700g粘合剂。充分混合上述成分，可以加入适量的无水乙醇。获得的混合物为具有适当硬度的软材料，其硬度以手掌轻握成形为球、轻触使球形混合物破碎为宜。在氮气保护下用成粒机对混合物就行造粒，将获得的小颗粒立即引入流化床干燥器，在40～50℃的温度下在基本真空环境中干燥。
然后采用如下配方制备肠包衣材料：邻苯二甲酸醋酸纤维素8.0g、邻苯二甲酸二乙酯2.4ml，乙酸乙酯33.0ml和乙酸异丙酯33.6ml。在氮气保护下将上述肠包衣材料至少一层但优选多层均匀地涂敷上述获得的颗粒。肠包衣材料仅可以在碱性环境中溶解，这可防止该组合物在动物胃中的时候半胱胺会刺激动物的胃粘膜。
然后在真空干燥器中在40～50℃的温度下使含半胱胺的组合物颗粒完全干燥除去所有的溶剂，并将获得的颗粒冷却到室温，与适量的调味剂和气味剂混合。
上述得到的组合物表现为具有平滑表面的小颗粒状(或微粒)，颗粒的直径优选为0.28～0.90mm，并具有良好的流动性能，容易与各种动物饲料共混。本发明的组合物也具有优异的稳定性，将所得组合物采用密闭塑料袋包装和在冷、暗和干燥位置贮存一年之后，它们的性能基本保持不变。因此，它们满足食品添加剂的要求。
本发明还提供了另一种用于注射到机体内以提高疫苗的抗体效价和提高机体免疫应答反应及抗病力的注射剂，该注射剂总含有0.25～75％的半胱胺、或其衍生物(包括其盐类、辅酶A、牛磺酸、胱胺、泛硫乙胺)及其前体物质(包括胱胺酸、半胱胺酸等)。还可以含有下列成分中的一种或几种：维生素C(稳定剂)0.1～5％、水溶性维生素E(稳定剂)0.1～5％、甘露寡糖(代谢增强剂)1～7.5％、D-核糖(代谢增强剂)0.2～7.5％。
将上述组合物溶于0.1～100倍体积的(w/v)的生理盐水中，即得本发明注射剂，可将其直接或与矿物油乳化后作为佐剂预先或注射疫苗时注入机体内。每次注射到机体的量为0.1～100ml，注射次数为1～10次。
(三)、有益效果
该技术方案是根据现有的常规疫苗佐剂使用方法而设计的，它可以在注射疫苗前或注射疫苗时使用。这样使用起来就比较方便，成本也会相应的降低，发挥作用也更加迅速。由于是单独使用(而不是与饲料一起使用)，它的使用剂量会受到更加严格的控制。
本发明是从生理的角度出发，根据现代神经-内分泌-免疫网络的机理，通过调节机体自身生理反应来提高机体对疫苗的反应性，而不是直接从外部添加的相类似作用的物质如细胞因子、激素等；是活化在生理水平之上的体系，是在天然调节相关和控制的范围之类。本身作为一种动物体内天然存在的物质，它不会给机体带来无法预计的副作用。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
在内衬聚四氟乙烯和装配有涂敷聚四氟乙烯搅拌器的夹套反应器中，在氮气保护下加入3500g的75％的盐酸半胱胺乙醇溶液，再加入1100gβ-环糊精，然后将混合物在40℃下加热搅拌3小时。停止加热后继续搅拌2小时，在45℃的温度下真空干燥产物，所得产物研磨和过40目筛。
在罐类型混合器中，在干燥环境保护下加入4000g(按干基重量计)上述所得的经过包含的半胱胺、2000g粉状纤维素，和1000g羟丙基淀粉以及1700g微晶纤维素。充分混合上述成分，加入适量的无水乙醇。获得的混合物为具有适当硬度的软材料。在氮气保护下用成粒机对混合物就行造粒，将获得的小颗粒立即引入流化床干燥器，在40～50℃的温度下在基本真空环境中干燥。
然后采用如下配方制备肠包衣材料：邻苯二甲酸醋酸纤维素8.0g、邻苯二甲酸二乙酯2.4ml，乙酸乙酯33.0ml和乙酸异丙酯33.6ml。在氮气保护下将上述肠包衣材料至少一层但优选多层均匀地涂敷上述获得的颗粒。肠包衣材料仅可以在碱性环境中溶解，这可防止该组合物在动物胃中的时候半胱胺会刺激动物的胃粘膜。
然后在基本真空的干燥器中在45℃的温度下完全干燥含半胱胺的组合物颗粒并除去所有溶剂。还可以将获得的颗粒冷却到室温，与适量的调味剂和矫臭剂(食用香料)混合。
上述得到的组合物表现为具有平滑表面的小颗粒状(或微粒)，颗粒的直径优选为0.40mm，并具有良好的流动性能。
将所得组合物采用密闭塑料袋包装和在冷、暗和干燥位置贮存一年之后，它们的主要活性成分-半胱胺或其衍生物含量基本不变、使用效果保持不变。
实施例2
在内衬聚四氟乙烯和装配有涂敷聚四氟乙烯搅拌器的夹套反应器中，在氮气保护下加入4000g的75％的半胱胺乙醇溶液，再加入1300g甲基β-环糊精，然后将混合物在40℃下加热搅拌3小时。停止加热后继续搅拌2小时，在45℃的温度下真空干燥产物，所得产物研磨和过40目筛。
在罐类型混合器中，在干燥环境保护下加入4000g(按干基重量计)上述所得的经过包含的半胱胺、3000g二氧化硅，和1300g微晶纤维素以及1700g微生物藻酸盐。充分混合上述成分，加入适量的无水乙醇。获得的混合物为具有适当硬度的软材料。在氮气保护下用成粒机对混合物就行造粒，将获得的小颗粒立即引入流化床干燥器，在40～50℃的温度下在基本真空环境中干燥。
然后采用如下配方制备肠包衣材料：邻苯二甲酸醋酸纤维素8.0g、邻苯二甲酸二乙酯2.4ml，乙酸乙酯33.0ml和乙酸异丙酯33.6ml。在氮气保护下将上述肠包衣材料至少一层但优选多层均匀地涂敷上述获得的颗粒。
然后在基本真空的干燥器中在45℃的温度下完全干燥含半胱胺的组合物颗粒并除去所有溶剂。还可以将获得的颗粒冷却到室温，与适量的调味剂和矫臭剂(食用香料)混合。
实施例3
称取下列物质：半胱胺300.0g、维生素C5.0g、甘露寡糖20.0g，将上述物质溶于300ml的生理盐水中，充分溶解混合均匀后保存在密闭的试塑料剂瓶中，即得本发明的注射剂。
实施例4
称取下列物质：半胱胺盐酸盐450.0g、牛磺酸50.0g、维生素C5.0g、水溶性维生素E10.0g、甘露寡糖10.0g、D-核糖15.0g，将上述物质溶于1000ml的生理盐水中，充分溶解混合均匀后保存在密闭的试塑料剂瓶中，即得本发明的注射剂。
实施例5提高免疫性能实验
小鼠灌服实施例1组合物(M)试验方案详见表1。
               表1.小鼠灌服M试验方案
  对照组(Al)   灌胃生理盐水液
  阳性对照(胸腺肽组，A2)   肠溶性胸腺肽0.40mg/kg
  试验1(低剂量M组，A3)   M：40mg/kg体重
  试验2(高剂量M组，A4)   M：80mg/kg体重
试验动物分组和接种：
洁净C57BL/6N雄性小鼠220只，共分为4组，每组6个重复，每个重复8只，饲养于洁净舍，余28只用于预试验。预试期7天，正试期30天。
每组选10只(每个重复3只)于试验结束前5日每只腹腔接种2％(2*10^8个/ml)绵羊红细胞0.5ml，试验结束眼睛取血致死，取脾脏测定抗体生成细胞。
试验结果：小鼠灌服M免疫器官相对重量详见表2；小鼠灌服M白细胞数、脾淋巴细胞转化率、抗体生成细胞和NK细胞杀伤率见表3；小鼠灌服M后30天血清IL-2，IL-6和IGF-1的含量详见表4。
    表2.小鼠灌服M后30天免疫器官相对重量单位：mg/100g
  器官   对照组   胸腺肽组   低剂量M组   高剂量M组
  胸腺   534±5.04   547±12.00   549±1.89   567±7.18
  脾脏   290±6.33   299±3.50   298±5.03   296±7.50
            表3单位：*10^9个/升，刺激指数(SI)，OD值和杀伤率(％)
  项目   对照组   胸腺肽组   低剂量M组   高剂量M组
  白细胞数   6.78±0.54   7.32±0.67   7.12±0.65   7.53±0.55
  脾淋巴细胞转化率   1.10±0.05   1.11±0.03   1.15±0.02   1.24±0.05
  抗体生成细胞   1.44±0.23   1.46±0.20   1.48±0.19   0.91±0.51
  NK细胞杀伤率   90.29±2.24   94.67±1.48   92.19±2.20   93.60±2.21
                         表4.单位：pg/ml，pg/ml，ng/ml
  项目   对照组   胸腺肽组   低剂量M组   高剂量M组
  IL-2   6.05±0.44   5.94±0.53   5.88±0.53   5.76±0.50
  IL-6   247.83±49.40   174.78±28.53   226.20±37.93   247.00±51.76
  IGF-1   307.67±14.71   327.27±10.59   340.68±11.40   416.57±7.11
由上述结果可见，小鼠灌服实施例1的组合物，可显著改善小鼠的免疫功能，特别是细胞免疫功能，具体表现为胸腺相对重量增加，脾淋巴细胞转化率提高。
实施例6提高免疫性能实验
试验选择健康的AA肉鸡出雏苗鸡288羽(经雌雄鉴别)，分两系列试验进行。日粮水平按饲养标准配制。
系列一：分为试验1组和对照2组，10羽/笼，8笼/组，80只/组，公母分饲，饲养49天；
系列二：分为试验1组和对照2组，8羽/笼，8笼/组，64只/组，公母分饲，饲养63天。
前1～20日龄时，试验1、2组均按200mg/kg体重添加本发明的组合物(实施例1所得)在小肉鸡料中。对照1、2组添加等量的无活性成分的载体混合物。21日龄后，试验1，2组按400mg/kg体重添加本发明的组合物(实施例1所得)，对照1、2组添加等量的无活性成分的载体混合物。
系列1于7日龄接种鸡新城疫II系疫苗，于14、21日龄每组宰杀8只(雌、雄各4只)，分别取血样，制备血清待测；于28、35、42、49日龄每组选取8只(雌、雄各4只)分别采集血样，制备血清待测，-20℃保存备用。
系列2于21日龄接种鸡新城疫IV系疫苗，于28、35、42、49、56、63日龄时每组选取8只(雌雄各4)分别采集血样，制备血清待测，-20℃保存备用。
其日粮配方如下：
营养标准：
项目(％)            前期料(1-20日龄)      中期料(21-42日龄)      后期料(43-63日龄)
代谢能(Mcal/Kg)     2.950                 3.050                    3.050
粗蛋白              21.92                 19.06                    17.63
亚油酸              1.52                  1.73                     1.70
钙                  1.00                  0.85                     0.85
有效磷              0.47                  0.42                     0.40
食盐                0.35                  0.35                     0.35
赖氨酸              1.14                  0.96                     0.90
蛋氨酸              0.54                  0.47                     0.44
蛋+胱               0.88                  0.78                     0.73
钠                  0.17                  0.14                     0.14
钾                  0.81                  0.78                     0.72
原料组成：
项目(％)            前期料(1-20日龄)      中期料(21-42日龄)        后期料(43-63日龄)
0280玉米            60.11                 63.5                     67.26
0102大豆粕          29.82                 29.2                     25.70
0045鱼粉(进)        3.90                  1.00                     1.50
0508植物油          2.05                  2.20                     1.76
0505磷酸氢钙        1.45                  1.60                     1.40
0504石粉            1.15                  1.00                     0.89
0506蛋氨酸          0.22                  0.20                     0.19
0511食盐            0.30                  0.30                     0.30
0507赖氨酸          -                     -                        -
预混料              1.00                  1.00                     1.00
合计                100.00                100.00                   100.00
每千克1％预混料中维生素、矿物质含量：
锰    10000mg      盐酸硫胺素260mg
锌    7500mg       核黄素960mg
铜    800mg        D-泛酸钙1300mg
铁    10000mg      烟酸8000mg
碘    45mg         胆碱66000mg
硒    44.7mg       VB122.7mg
VA    1100000IU    叶酸120mg
VD3    3360000IU    盐酸吡哆醇530mg
VE    3600IU       生物素24mg
VK3   260mg
实验结果：
表1：系列一14～49日龄免疫性能
  日龄   对照1组   试验1组
  14   3.000±0.189   4.625±0.706*
  21   3.875±0.441   10.375±0.495***
  28   5.125±0.372   6.875±0.818
  35   5.250±0.897   4.375±0.706
  42   6.500±0.433   6.750±0.153
  49   7.875±0.449   4.625±0.246***
表2：系列二21～63日龄免疫性能
  日龄   对照2组   试验2组
  21(免疫前)   4.375±0.625   4.000±0.378
  28   3.250±0.153   6.875±0.909**
  35   5.250±0.606   5.750±0.492
  42   7.875±1.007   6.000±0.901
  49   5.250±0.342   5.125±0.328
  56   5.125±0.328   7.500±0.559**
  63   6.375±0.246   7.375±0.749
由上述表格中数据可以看出：系列一试验中，AA肉鸡1日龄添加本发明的提高疫苗抗体效价的组合物，7日龄免疫，14日龄至21日龄免疫性能逐渐加强达峰值，28日龄虽然开始下降，但是仍显著高于对照组；系列二试验中，AA肉鸡1日龄添加本发明的提高疫苗抗体效价的组合物，21日龄免疫，免疫前采样1次至免疫后28日龄免疫性能加强，显著高于对照组。35～63日龄期间，两系列肉鸡血清抗体效价表现为显著性波动性变化，但总体平均水平均无显著性差异。
本试验资料表明，AA肉鸡日粮添加本发明的提高疫苗抗体效价的组合物，在免疫前期能够显著提高免疫性能。
实施例7提高免疫应答反应实验
试验动物与分组：选择1日龄的SPF鸡160羽(公母随机)随机分为4组，为对照组1组、对照2组、试验1组和试验2组，40只/组，每组再随机分成两小组(A、B)，A组标记翅号，B组不标记。
试验方案：对照1组和对照2组一直饲喂基础日粮，试验1组和试验2组从1日龄开始按200mg/kg体重添加本发明的组合物(实施例2所得)，直到21日龄；从22日龄开始按400mg/kg体重添加本发明的组合物(实施例2所得)，直到试验结束。
鸡新城疫弱毒疫苗(进口优质)接种方式：对照1组和试验1组在8日龄免疫接种鸡新城疫疫苗，滴鼻点眼，每只鸡1只份。对照2组和试验2组在8日龄免疫接种鸡新城疫弱毒疫苗(首免)，滴鼻点眼，每只鸡1只份；在22日龄时加强免疫(二免)，滴鼻点眼，每只鸡1只份。其它免疫按正常免疫程序执行。
各组鸡在1日龄采血一次，8日龄首次免疫，首免前采血一次，首免后1周内每3天采血一次，免疫一周后(17日龄)每周采血一次，分离血清后检测新城疫抗体效价。试验1组和对照1组试验期为54天。试验2组和对照2组免疫两次，试验2组和对照2组在22日龄二免后开始一周内每3天采血一次，31日龄后每周采血一次，试验2组和对照2组试验期为70天。每次轮流从A、B两组中随机抽取10只。检测新城疫抗体效价。抗体(HI)效价结果平均值见表3和表4。
表3试验1组及对照1组新城疫抗体(HI)检测平均值(XLog2)
日龄        试验1组       对照1组
  A   B   A   B
  1   1   1
  8   1   1
  11   1.3   1.3
  14   2.1   2.3
  17   3.6   3.9
  24   5.5   4.35
  31   4.1   4.8
  38   3.9   4.4
  45   4.2   3.7
  49   3.25   3.3
  54   3.4   2.7
表4：试验2组及对照2组新城疫抗体(HI)检测平均值(Xlog2)
日龄        试验2组        对照2组
  A   B   A   B
  1   1   1
  8   1   1
  11   1.1   1.1
  14   2.25   1.9
  17   3.6   3.5
  22   3.3   3.1
  25   4.55   4.0
  28   4.65   4.3
  31   5.0   4.7
  38   4.6   4.5
  45   3.7   3.8
  52   2.9   2.9
  59   2.9   2.4
  63   3.1   2.7
  70   3.1   2.7
由上述表格中数据可以看出：试验1组和对照1组新城疫(ND)抗体的平均水平虽没有显著差异，但试验1组最高点的水平(24日龄)和免疫后的基础水平(49日龄后，抗体水平维持一定的基础水平)显著高于对照组，说明本发明的提高疫苗抗体效价的组合物能促进试验鸡只的免疫应答反应，通过提高应答记忆和加快对病毒再次感染时的反应速度及加强免疫应答强度来实现的。从试验2组和对照2组的试验证实了这种可能性。在21日龄前，两组之间没有显著的差异，但22日龄加强免疫后，试验组抗体水平下降幅度显著低于对照组，而随后(22～38日龄)抗体水平又显著高于对照组。在52日龄后，两组抗体水平都达到稳定的基础水平，但试验组显著高于对照组。在整个试验阶段，试验组的平均水平显著高于对照组(P＜0.001)。
综合本发明的提高疫苗抗体效价的组合物对SPF鸡的生产性能影响和提高免疫应答反应来看，添加本发明的提高疫苗抗体效价的组合物可以显著提高SPF鸡的免疫应答反应，促进抗体的产生和维持。
实施例8生产特异性抗体的实施例3和例4的制品的活性
用C3H小鼠血清免疫7天后，通过卵蛋白，用ELISA测定特异性抗体。根据实施例3和4分别(设定试验1和试验2)重复给定制品，3次0.4mli.P.。结果见下表：
 组别   抗体(平均数±SE)   百分比(％)
 对照   563.4±32.6   100
 试验1组   985.5±42.5   174.9
 试验2组   992.3±35.2   176.1
从表中结果可以清楚地看出，根据实施例3和4的注射用组合物制品显著地促进了特异性抗体的产生。
实施例9提高免疫应答反应实验
选用SPF鸡，在8日龄进行鸡新城疫疫苗注射，在注射前，对照组注射0.5mL生理盐水；试验1组注射0.5ml实施例3制品；试验2组注射0.5ml实施例4制品。7天后，进行鸡新城疫疫苗抗体效价检测，结果如下：
 组别   8日龄抗体效价(Xlog2)  14日龄抗体效价(Xlog2)
 对照组   1.04±0.12  2.01±0.16
 试验1组   1.05±0.10  2.86±0.09**
 试验2组   1.10±0.15  2.94±0.14**
注：**表示与对照组相比差异显著。
上表结果表明，根据实施例3和4的注射用组合物制品显著地促提高了疫苗抗体的效价。

Claims (13)

1、半胱胺及其衍生物在制备提高人用或兽用疫苗抗体效价和提高机体免疫应答反应及抗病力的药剂中的应用，其特征在于，所述半胱胺衍生物选自其前体物质、半胱胺盐类、辅酶A、牛磺酸、胱胺和泛硫乙胺中的一种或几种。
2、如权利要求1所述的应用，是将半胱胺及其衍生物单独作为饲料添加剂与用于某种动物的合适基础饲料生产最终饲料，采用该最终饲料喂养该种动物；或制成适用于人服用的药剂；或者将其单独制备成注射剂直接或与矿物油乳化后作为佐剂预先或注射疫苗时注入人或动物机体内。
3、如权利要求1所述的应用，是将半胱胺及其衍生物和医药上可被接受的载体配制成药物组合物，该组合物含有按重量百分数计1～95％的半胱胺及其衍生物和1～80％的稳定剂，其中所述的稳定剂选自甲基β-环糊精、羟丙基β-环糊精、羟乙基β-环糊精、聚环糊精、乙基β-环糊精或支化环糊精中的一种或几种；该组合物的制剂形式为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服剂、滴鼻剂、喷雾剂或其他医药学上可接受的剂型。
4、如权利要求3所述的应用，其中所述药物组合物含有以重量百分数计1～75％的半胱胺及其衍生物和1～60％的稳定剂。
5、如权利要求3所述的应用，其中所述药物组合物含有以重量百分数计1～40％的半胱胺或其衍生物和1～40％的稳定剂。
6、如权利要求3所述的应用，其中所述药物组合物含有以重量百分数计30％的半胱胺或其衍生物和10％的稳定剂。
7、如权利要求3～6任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物组合物含有兽医药上可被接受的填充剂1～90％、粘合剂10～40％、包被载体1～15％、调味剂和气味剂0.05～0.3％中的一种或几种。
8、如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的填充剂选自粉状纤维素、淀粉、二氧化硅和硫酸钙等中的一种或几种。
9、如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的粘合剂选自羟丙基淀粉、微生物藻酸盐、微结晶纤维素和淀粉等中的一种或几种。
10、如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的包被载体是一层或多层在pH值1.5～3.5下不溶解的固体载体，其载体选自邻苯二甲酸醋酸纤维素、类邻苯二甲酸醋酸淀粉、邻苯二甲酸甲基纤维素、邻苯二甲酸的葡萄糖或果糖类衍生物、丙烯酸类和甲基丙烯酸类共聚物、聚甲基乙烯基醚、马来酸酐共聚物的部分酯化物质，虫胶或甲醛明胶中的一种或几种。
11、如权利要求3～6中任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物组合物应用于动物时，在制备的最终饲料中所占比例为50～1000ppm。
12、如权利要求1所述的应用，是将半胱胺及其衍生物和医药上可被接受的载体配制成注射剂，该注射剂含有0.25～75％的半胱胺或其衍生物，所述辅料选自下列成分中的一种或几种，维生素C 0.1～5％、水溶性维生素E 0.1～5％、甘露寡糖1～7.5％、D-核糖0.2～7.5％，余量为注射用生理盐水。
13、如权利要求11所述的应用，是将注射剂直接或与矿物油乳化后作为佐剂预先或注射疫苗时注入人和动物机体内，每次注射到机体内的量为0.1～100ml，注射次数为1～10次。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102827044A (zh) * 2012-09-06 2012-12-19 湖北广华生物有限公司 一种半胱胺螯合锌的制备方法
JP2013181003A (ja) * 2012-03-02 2013-09-12 Matsutani Chem Ind Ltd ＩｇＡ産生促進剤

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2398497A (en) * 2003-02-19 2004-08-25 Walcom Animal Science Composition for improving immunity of animals

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013181003A (ja) * 2012-03-02 2013-09-12 Matsutani Chem Ind Ltd ＩｇＡ産生促進剤
US9421219B2 (en) 2012-03-02 2016-08-23 Matsutani Chemical Industry Co., Ltd. Methods and compositions for preventing allergy and infection
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