CN1695604A - 防治神经退行疾病、注意力缺陷多动症和抑郁症的药物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及静远灵的组合，该组合物静远灵包括丹参素或其钠盐和阿魏酸或其钠盐与可药用的载体。本发明涉及静远灵作为预防和治疗各种神经退行性疾病(特别是老年痴呆)、儿童注意力缺陷多动症和抑郁症药物。丹参素，分子式C₅H₁₀O₅，相对分子量162.14。阿魏酸，分子式C₁₀H₁₀O₄，相对分子量194.18。丹参素钠和阿魏酸钠较稳定。静远灵对谷氨酸和β－淀粉样蛋白诱导的原代鼠神经细胞和PC12细胞损伤，对谷氨酸或/和β－淀粉样蛋白、脑缺血诱导的成年小鼠的脑损伤，以及对小鼠妊娠末期口腹MSG导致的发育中胎脑的损伤，都有明显的保护作用；临床初步观察表明，静远灵对老年性痴呆、儿童注意力缺陷多动症和抑郁症病人的病情有明显的稳定和改善作用。

Description

防治神经退行疾病、注意力缺陷多动症和抑郁症的药物

发明背景

神经退行性疾病包括老年性痴呆(阿尔茨海默氏病)、帕金森氏病、Huntington氏病等。随着人口的老龄化，神经退行性疾病，特别是老年性痴呆的发病率日渐升高，已经发展成为人类公共卫生的重大难题之一。

预防和治疗老年性痴呆的药物有胆碱能前体物质，胆碱酯酶抑制剂、胆碱能激动剂、儿茶酚胺类药物、5-羟色胺能药物、多种类型的神经递质、神经肽类、雅片类拮抗剂(如纳络酮)、抗氧化剂和神经保护剂、神经营养物、激素(如他克林、雌激素)、代谢增强药、生物膜调节剂、抗炎药、解毒剂、抗淀粉样蛋白药物等，中药有效成分如石杉碱甲、银杏叶提取物、儿茶酸、芹菜甲素、人参皂苷、绞股兰皂苷等。但迄今为止，尚没有任何药物、任何疗法取得满意的疗效。因此，寻找新的有效预防和治疗老年性痴呆的疗法或药物是一项迫切的任务。

儿童注意力缺陷多动症(attention deficit hyperactivity disorder，ADHD)以多动、注意力不集中、参与事件能力差为主要症状，并伴有冲动任性、情绪不稳定和各种行为障碍(如逃学、说谎、偷窃、打架)等表现，但智力基本正常为其特点。患儿亦常出现不同程度的人格缺陷、社会适应能力下降和学习困难。14岁以下儿童的患病率为7％～9％，半数患儿小于4岁起病，男∶女为4～6∶1。鉴于ADHD对儿童身心健康成长的严重危害，已经引起教育、医务工作者、心理学家等社会各界的普遍关注。

ADHD的病因尚不清楚，目前也无好的预防措施。至于ADHD的治疗，临床常用的有利太林(Retalin)又称哌醋甲酯(methylphenidate)、地昔帕明(去甲丙咪嗪)、苯丙胺、苯异妥英(pemolin)又称匹莫林、三环类抗抑郁药如丙咪嗪等药物。然而，上述药物的疗效殊不令人满意，更重要的是它们都有不同程度的毒副作用，如广泛使用的地昔帕明，就有中毒致死的病例，而利太林则被美国食品和药物管理局(FDA)列为与鸦片、可待因、吗啡等同的二类限制药品，三环类抗抑郁药可导致心电图改变，苯异妥因的副作用有失眠、厌食、体重下降等。利太利、苯丙胺的不良反应则是应激性升高、抽搐、厌食、腹痛和失眠。总之，目前还没有预防和治疗ADHD的安全、有效可靠的药物，开发防治ADHD的新药也是医药界的一项迫切任务。

抑郁症(depression)的特征性症状是：悲观心境，自身感觉很坏；睡眠障碍，失眠或早醒；食欲很差，动力不足；缺乏活力，兴趣和愉快感消失；自责自罪，消极想死；体重下降；性欲降低。抑郁症常有便秘和各种疼痛申诉，焦虑、恐怖、疑惑或强迫症状很普遍，抑郁性的先占观念尤为常见。抑郁症可分为原发性抑郁症(双相或单相抑郁症)和继发性抑郁症(继发于其他精神疾病或躯体疾病)。

抑郁症正成为全球第五大疾病，预计到2020年，将跃升为第二大疾病，并将成为致命疾病。世界卫生组织已将抑郁症、癌症及艾滋病并列为21世纪的三大疾病及卫生教育预防重点工作。镇静剂或安眠药，副作用大，容易造成药物依赖，治疗效果也不好，不适用于抑郁症。目前流行的抗抑郁症药物，包括有名的Prozac(氟西汀)、Celexa(西普兰)和Effexor(怡诺思)，都得在服用几周后才开始见效，而且有副作用，其中包括降低性功能。此外，这些药对大约三分之一的病人不起作用。血清素调节剂属新一代抗抑郁药，效果较好且副作用小，但国内尚未生产。从祖国医药中独辟蹊径，或许能找到防治抑郁症的新药。

1.丹参素及其钠盐

丹参素(Danshensu)，D-(+)β-(3，4-二羟基苯基)乳酸，3-(3，4-dihydroxyphenyl-2-hydroxy-Propanoic acid，结构式如图1，分子式C5H10O5，相对分子量162.14。丹参素苯环上的两个羟基是功能基，可清除自由基，抑制氧化反应和自由基反应。丹参素为白色长针状结晶，熔点84-86℃。其钠盐丹参素钠为白色针状结晶，熔点255～258℃。丹参素钠较稳定，丹参素转化为丹参素钠后制备时纯度容易提高。丹参素及其钠盐易溶于水。

丹参素的制备：1、常采用水煮醇沉法自唇形科植物丹参(Salviamiltiorrhiza Bge.)中提取分离；2、化学合成：先用乙烯酮类化合物乙酰化的方法合成1-(3，4-二羟基苯基)乳酸，而后采用Clemmensen还原法将α-酮酸还原为α-羟基酸而制备；3、丹参素衍生物的合成：丹参素为酚酸，易氧化，不稳定，故采用合成丹参素衍生物的方法克服之。用相应的芳香醛和乙酰甘氨酸反应得到噁唑酮，继而经酸催化开环，水解得到取代苯基丙酮酸，再经Clemmensen还原法得到相应取代苯基乳酸。

作为一种活血化瘀中药的有效成分，中国学者已对丹参素的药理作用进行了广泛深入的研究，其主要成果归纳如下。

丹参素及其钠盐显著增加离体豚鼠的冠状血流量，舒张离体猪冠状动脉，对抗吗啡及心得安的缩血管作用，对抗或显著保护由垂体后叶素引起的大鼠S-T段缺血性心电变化，明显缩小狗心肌梗塞的范围和改善左心室功能，促进缺血性心肌损伤细胞的修复，改善心脏及外周微循环障碍；丹参素及其钠盐抑制ADP诱导的兔血小板聚集，使血小板粘附性降低，降低血液粘度，抑制血小板的合成，显示抗血栓形成和抗凝血作用；丹参素及其钠盐激活纤溶，促进纤维蛋白(原)降解，抑制由氯化钾激发的红细胞的钙内流，稳定红细胞膜，具有抗溶血作用；丹参素及其钠盐可抑制环核苷酸磷酸二酯酶的活力，提高脑内环核苷酸的水平，产生中枢镇静作用，使小鼠安静、自主活动减少，与巴比妥类及非巴比妥类合用可增强其催眠效果，可对抗苯丙胺的精神运动性兴奋作用；丹参素能直接刺激肝细胞增殖，且其作用显示一定的量效依赖关系；丹参素及其钠盐对D-半乳糖胺引起的肝细胞损伤及自由基毒性作用研究表明，它们具有稳定细胞膜、清除自由基的作用。

丹参素的药代动力学：血浆中丹参素回收率平均为76.470±2.427)％(cv＝3.174％，n＝20)；血药浓度-时间(lgc-t)曲线显示，丹参素的药代动力学为单室模型，其清除速率常数和生物半衰期为kel＝(0.0456±0.0141)/min；t_1/2＝(16.580±5.768)min。用HPLC法对丹参素在家兔体内组织分布进行的研究表明，静脉注射丹参素在各组织分布的平均值为：肾14.15μg·g^-1，肝17.69μg·g^-1，肺19.73μg·g^-1，心12.30μg·g^-1，脑5.15μg·g^-1，脾4.66μg·g^-1。

丹参素及其钠盐已经作为复方丹参制剂或丹参制剂中的主要成分广泛应用于心、脑血管疾病的防治。

1.阿魏酸及其钠盐

阿魏酸，化学名3-(4-hydroxyl-3-methoxyeny)-2-Propenoicacid，，分子式C₁₀H₁₀O₄，相对分子量194.18，结构式如图2。阿魏酸苯环上的羟基是功能基，可请除自由基，抑制氧化反应和自由基反应。

阿魏酸的理化性质：顺式为黄色油状物，反式为斜方针状结晶(水)，熔点174℃。溶于热水、乙醇及醋酸乙酯，易溶于乙醚，微溶于石油醚及苯。阿魏酸的钠盐较稳定。

阿魏酸的制备：1)从植物，如阿魏、川芎、石松、木贼、稻根等的细胞壁中提取；2)从阿魏酸与一些小分子物质的结合物中获得，如从γ-谷维素的硷性水解产物分离；3)通过组织培养获得，如对糖甜菜、玉米进行细胞悬浮培养，即能获得水溶性的阿魏酸葡萄糖，阿魏酸蔗糖酯等；4)阿魏酸的化学合成多以香兰醛和丙二酸为原料，以无水吡啶为溶剂，哌啶作催化剂，通过缩合反应获得。

作为一种中药活血化瘀的有效成分，中国学者已对阿魏酸的药理作用进行了广泛深入的研究，归纳起来如下。

1)抗氧化  阿魏酸不仅能猝灭自由基，而且能调节人体生理机理，抑制产生自由基产生的酶，促进请除自由基酶的产生，增强其活性。

2)对心肌缺血的保护作用  阿魏酸能增加冠脉流量，保护缺血心肌。由于对α-受体有阻断作用，因而能抑制主动脉平滑肌收缩，对抗甲氯胺、肾上腺素的升压作用。

3)抗血小板聚集作用  大鼠口服阿魏酸钠600mg/kg后2h，以胶原诱导的血小板聚集性及血小板TXA样物质活性均受显著抑制，抑制率为46％及47％。

4)降血脂、抗动脉粥样硬化作用  抑制肝脏合成胆固醇，与生物膜磷脂结合保护膜脂质，清除、拮抗自由基对组织的损伤。

5)抗病毒、抗菌作用  阿魏酸对感冒病毒、呼吸道合胞体病毒(RSV)和艾滋病病毒都有显著抑制作用；阿魏酸抑制细菌的N-乙酰转移酶，对多种细菌，如志贺氏痢疾杆菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等有较强的抑制作用。

6)抗突变和防癌作用  偶氮甲烷(AOM)人工诱发F334鼠产生结肠癌，加喂500mg/kg阿魏酸的鼠病灶数下降27％。阿魏酸及其衍生物还能抑制结肠癌、直肠癌和舌癌。阿魏酸的抗癌活性可能与它的抗氧化、清除自由基以及激活谷胱苷肽转硫酶、醌还原酶的活性有关。

7)抗过敏、抗早孕、抗痉挛作用。

8)增强肾血流量、显示具有肾髓质扩血管性前列腺素样作用。

9)活化淋巴细胞、促进淋巴细胞增殖。

毒理学大鼠灌胃给药600mg/kg，每天一次，连续给药3个月，血液学和血液化学指标检测结果均属正常，主要脏器病理学组织学检查未发现药物引起的病理变化。药代动力学  静脉给药，血浆蛋白结合率为20.6％，大鼠分布半衰期(t1/2α)为3分钟，消除半衰期(t1/2β)为(11.46±3.2)分钟，分布迅速，可通过血-脑脊液屏障，主要经肾脏排泄，体内不易蓄积。

阿魏酸在临床上已经用于治疗脑血栓形成、冠心病、脉管炎，偏头痛、预防缺血性脑血管病、急性肾功能衰竭等。在食品工业中，阿魏酸也已作为防腐保鲜剂、食品交联剂、运动食品添加剂被广泛使用。

发明概要

本发明涉及静远灵作为预防和治疗各种神经退行性疾病(特别是老年性痴呆)、儿童注意力缺陷多动症和抑郁症药物的药物组合物，该药物组合物包括丹参素或其钠盐和阿魏酸或其钠盐与可药用的载体。

本发明涉及如权利1要求所定义的药物组合物静远灵的制备方法，该方法涉及丹参素或其钠盐和阿魏酸或其钠盐与可药用的载体混合或溶解。

静远灵的有效成分丹参素或其钠盐(A)和阿魏酸或其钠盐(B)可以任何比例混合，其混合比例大约A∶B＝0.1∶9.9或9.9∶0.1，优选约A∶B＝1.5∶8.5或8.5∶1.5，更优约A∶B＝3∶7或7∶3，最佳约A∶B＝4∶6或6∶4。

丹参素或其钠盐和阿魏酸或其钠盐可与任何可药用的载体混合或溶解，如经皮肤、粘膜、胃肠内和胃肠外给药的可药用载体。该药物以常规药用制剂的形式使用，如固体形式的片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、拴剂等，或半固体形式的油膏、软膏等，或结晶性粉末状针剂和液体形式的针剂、悬浮剂、糖浆剂、乳剂及搽剂，该药物中使用可药用的赋形剂和添加剂，这些可药用的赋形剂和添加剂包括无毒的可相容的填料、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、矫味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂、稳定剂，如乳糖、柠檬酸、硬脂酸、硬脂酸镁石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因及抗坏血酸等。该药物可按各种制剂的常规工艺制备。

本发明涉及静远灵作为预防各种神经退行性疾病(特别是老年性痴呆)和抑郁症的药物，可作为食品添加剂加入到食品中。本发明涉及静远灵作为治疗各种神经退行性疾病(如老年性痴呆)和抑郁症等的药物。所制成的各种口服药物中丹参素钠加阿魏酸钠的剂量为每日每kg体重大约0.01-100mg，优选约0.05-50mg，更优约0.1-20mg，最佳约1-10mg。每日分2-4次服用，10-30天为一疗程，一般用药3-10个疗程，每个疗程间隔5-30天。所制成的注射用药物，可供肌肉注射、静脉注射及静脉点滴，其中丹参素钠加阿魏酸钠的剂量为每日每kg体重0.01-50mg，优选约0.05-25mg/kg，更优约0.1-20mg，最佳约1-10mg。每日分1-3次使用，10-30天为一疗程，一般用药3-10个疗程，每个疗程间隔5-30天。然而，精确的剂量及持续时间应由医生确定，主要取决于病人的年龄、体重、病情及反应等。

本发明涉及静远灵作为预防ADHD的药物，可作为食品添加剂加入到食品中。本发明涉及静远灵作为治疗ADHD的药物。所制成的各种口服药物中丹参素钠加阿魏酸钠的剂量为每日每kg体重大约0.01-100mg，优选约0.05-50mg，更优约0.1-20mg，最佳约1-5mg。每日分2-4次服用，10-30天为一疗程，一般用药3-10个疗程，每个疗程间隔5-30天。所制成的注射用药物，可供肌肉注射、静脉注射及静脉点滴，其中丹参素钠加阿魏酸钠的剂量为每日每kg体重0.01-50mg，优选约0.05-25mg/kg，更优约0.1-10mg，最佳约1-5mg。每日分1-3次使用，10-30天为一疗程，一般用药3-10个疗程，每个疗程间隔5-30天。然而，精确的剂量及持续时间应由医生确定，主要取决于病人的年龄、体重、病情及反应等。

下面列举实验研究及临床初步观察的结果，作为静远灵可用于制备预防和治疗神经退行性疾病(特别是老年性痴呆)、ADHD和抑郁症药物的证据。

1.静远灵可用于制备预防和治疗神经退行性疾病(特别是老年性痴呆)药物的证据

1.1丹参素钠加阿魏酸钠对谷氨酸单钠(MSG)诱导的海马神经元损伤的保护作用。

材料和方法

药物：MSG、丹参素钠和阿魏酸钠；丹阿溶液：称取等量丹参素钠、阿魏酸钠，无菌蒸馏水溶解，-20℃冰箱保存备用。

海马神经元的培养基：种植液为Dulbecco’s modified Eagle’smedium(DMEM)，补充胎牛血清10％、马血清10％、谷氨酰胺1％。饲养液为为DMEM，补充马血清10％，N-2 1％，B-27 2％，谷氨酰胺1％。

海马神经元的分离和培养：取当天新生Wistar大鼠，剥离海马，剪成1-2mm组织块，用含0.25％胰蛋白酶的解剖液在37℃消化30分钟，吹打，使之均匀分散，制成细胞悬液。加入适量种植液，将细胞按1×10⁵/ml的密度接种在事先涂有多聚赖氨酸的35mm培养皿中，置于36℃10％CO₂的培养箱中培养。24h后将种植液换为2mL饲养液。以后每3日半量换液1次。为抑制非神经元过度增殖，在培养的第3日向培养基中加入阿糖胞苷3μg·mL^-1。

谷氨酸对神经元的毒性和丹参素钠加阿魏酸钠的保护作用：将对数生长期细胞消化后，制成细胞悬液接种于96孔培养板，每孔90μl(含2×10⁴细胞).培养24h，前后隔1h加入不同浓度的丹阿溶液和MSG溶液10μl，对照组加入同体积饲养液，每组设4个平行孔。充分混匀后，继续培养24、48、72h，MTT法、荧光显微术(PI-Hoechst双染法)、吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色、流式细胞术、DNA断裂片段分析术等判断细胞存活及细胞凋亡情况。

结果：丹参素钠加阿魏酸钠能部分、大部甚至几乎全部抵消MSG对神经元的毒性损伤及其诱导的细胞凋亡作用，丹参素钠加阿魏酸钠的此种保护作用取决于剂量及其作用时间。

1.2丹参素钠加阿魏酸钠对β-淀粉样蛋白诱导的大鼠PC12细胞损伤的保护作用。

材料和方法

药物：MSG；β-淀粉样蛋白(Aβ)，Aβ25-35，Aβ贮备液：以0.1％三氟乙酸配制成10mg/ml的溶液保存；丹参素钠和阿魏酸钠，丹阿溶液：称取等量丹参素钠、阿魏酸钠，无菌蒸馏水溶解，-20℃冰箱保存备用。

PC12细胞株：起源于大鼠嗜铭细胞瘤，可分化为交感神经样细胞，在形态、生理、生化方面接近于神经元。PC12细胞具有神经分泌细胞和神经元的性质，广泛用于神经元死亡方式及神经毒方面的研究。

PC12细胞的培养：用RPMI-CM培养基常规培养。RPMI-CM为补充以10％胎牛血清，5％马血清，1％谷氨酰胺的RPMI-1640。以含100ng/ml神经生长因子(mNGF 2.5s)的RPMI-CA培养6天，PC12细胞即分化为具有神经元表型的细胞。加入β-淀粉样蛋白(Aβ)的全长(Aβ1-40)及其氨基酸残基25-35之间的细胞毒序列Aβ25-35。

Aβ25-35对神经元的毒性和丹参素钠加阿魏酸钠的保护作用：分化的PC12细胞制成细胞悬液接种于96孔板，以不同浓度的Aβ1-40或Aβ25-35和丹阿溶液作用不同时间，MTT法、荧光显微术(PI-Hochest双染法)、流式细胞术、DNA断裂片断分析术等判断细胞存活及细胞凋亡情况。

结果：丹参素钠加阿魏酸钠能部分、大部分甚至几乎全部抵消Aβ25-35对分化的PC12细胞的损伤，丹参素钠加阿魏酸钠的此种保护作用依赖于其作用时间及剂量。

1.3丹参素钠加阿魏酸钠对MSG诱导的成年小鼠脑损伤的保护作用

材料

动物：昆明种小鼠，雌雄各半，8周龄。

药物：MSG，丹参素钠和阿魏酸钠，丹阿溶液：称取等量丹参素钠、阿魏酸钠，无菌蒸馏水溶解，-20℃冰箱保存备用。

仪器：Y-迷宫，DMS-Z型Morris水迷宫仪，XDB-Z小鼠洞板实验仪，ZIL-Z小鼠自主活动程序自动控制仪，上述仪器均购自中国医学科学院药物研究所。

方法：小鼠随机分为正常对照组、MSG组、药物(丹阿溶液)对照组、实验组(MSG加丹阿溶液)，每组14只动物。MSG组按MSG 2mg/g体重灌胃，药物对照组按20mg/kg体重腹腔注射丹阿溶液，实验组在按MSG 2mg/g体重灌胃的同时按20mg/kg体重腹腔注射丹阿溶液，上述处理每天1次，共计10天。末次注射后12h从每组随机取4只动物，腹腔注射戊巴比妥钠(0.06mg/kg体重)麻醉，用10％福尔马林溶液作心脏灌流牺牲小鼠。断头取脑，置相同浓度福尔马林溶液中固定1周。石蜡包埋，作10m连续切片，每100m取1片。焦油紫染色，光镜检查。各组剩下的小鼠于末次注射后的第1日、第31日、第61日和第91日分别进行4次行为学检查，检查小鼠的学习记忆能力，自主活动及其类型，探究行为，爬绳能力等。

结果：行为检查结果显示，正常对照组与药物对照组小鼠的学习记忆和爬绳能力，自主活动及探究行为4次检查均明显无差别；MSG组小鼠的学习记忆、爬绳能力及探究行为，前3次检查，较之对照组都显著降低，差异非常显著(P＜0.05)，第4次(即第91日)检查有一定提高，但差异仍显著(P＜0.05)，与之相反，MSG小鼠的自主活动前3次检查都明显增加，差异非常显著(P＜0.01)，第4次(即91日)检查则接近正常(P＞0.05)。值得注意的是，4次行为检查结果都显示，实验组(MSG+丹阿溶液)小鼠的各种行为学检查指标与正常对照小鼠无明显差别(P＞0.05)。形态学检查结果显示，药物对照组小鼠海马区神经细胞形态与正常对照组无明显差别，MSG组小鼠海马区神经细胞则明显变性，坏死，而MSG+丹阿溶液处理的实验组小鼠海马区细胞形态与正常组小鼠的接近，无明显差别。

1.4丹参素钠加阿魏酸钠对Aβ25-35诱导的小鼠脑损伤的保护作用

材料

动物：昆明种雄性小鼠，28±2克。

药物：MSG；Aβ25-35(Sigma公司)，1mg加生理盐水1ml溶解；丹参素钠和阿魏酸钠，丹阿溶液：称取等量丹参素钠、阿魏酸钠，无菌蒸馏水溶解，-20℃冰箱保存备用。

仪器：DM5-Z型Morris水迷宫仪，中国医学科学院药物研究所制造。

方法：Aβ25-35在37℃孵化箱中老化96小时，使之成为毒性凝胶态Aβ。动物随机分为4组：假手术组，模型组(Aβ25-35组)、三种剂量(10mg/kg，20mg/kg，30mg/kg)丹参素钠加阿魏酸钠组。假手术组小鼠侧脑室注射生理盐水3μl，其他四组小鼠侧脑室注射凝聚态Aβ25-353μl。丹参素钠加阿魏酸钠组在Aβ25-35注射后1h开始每日腹腔注射不同剂量的丹阿溶液，连续给药20天，假手术组和模型组每天腹腔注射等量生理盐水。小鼠侧脑室注射Aβ25-35后第16天开始对小鼠进行Morris水迷宫测试，连续5天，每天训练两个时限。实验时温度保持在24-25℃。Morris水迷宫中加入奶粉2斤，用热水冲开，再用水加至高过安全平台1cm，务使奶水中不能见到安全平台，并使水温保持在22℃。

结果：用Morris水迷宫测定小鼠定向学习记忆能力，即寻找安全台的潜伏期。结果发现，在1-4天训练期，给药组与假手术组，模型组间无明显差异，第5天后表现出的差异即相当明显。丹阿溶液腹腔注射对Aβ25-35对小鼠脑的损伤呈现明显的保护作用，且这种保护作用呈剂量依赖性。

表1丹参素钠加阿魏酸钠对Aβ25-35诱导的小鼠定向学习记忆损害的保护作用

组别	剂量(mg/kg×days)	动物数(只)	潜伏期(秒，平均值±SE)	P*
					对照Aβ25-35丹阿溶液	102030	1212121212	51.8±4.083.4±8.867.2±5.952.4±4.950.9±6.2	＜0.05＜0.01＜0.01

*与Aβ25-35组比较

1.5丹参素钠加阿魏酸钠对MSG+Aβ诱导的成年小鼠脑损伤的保护作用

材料和方法

动物：昆明种小鼠，雌雄各半，8周龄。

药物：MSG；Aβ25-35(Sigma公司)，1mg加生理盐水1ml溶解；丹参素钠和阿魏酸钠，丹阿溶液：称取等量丹参素钠、阿魏酸钠，无菌蒸馏水溶解，-20℃冰箱保存备用。

仪器：DM5-Z型Morris水迷宫仪，中国医学科学院药物研究所制造。方法：动物随机分为4组：假手术组，Aβ+MSG组，Aβ+MSG+丹阿溶液(20mg/kg)组，Aβ+MSG+丹阿溶液(0.06mg/kg)组。假手术组小鼠侧脑室注射生理盐水3μl，其他4组小鼠侧脑注射凝聚态Aβ25-353μl，Aβ+MSG组则在Aβ25-35注射后8小时灌胃给予MSG溶液，Aβ+MSG+丹阿溶液组则在MSG给予后1h腹腔注射丹阿溶液(10mg/kg、30mg/kg)。Aβ25-35仅给药1次，MSG、丹阿溶液共给药8天，每日1次。Aβ25-35给药后第9天开始对小鼠进行Morris水迷宫测试，条件同4。

结果：结果发现丹参素钠加阿魏酸钠可保护MSG+Aβ25-35对小鼠脑的损伤，且该作用呈剂量依赖关系。

1.6丹参素钠加阿魏酸钠对脑缺血小鼠学习记忆和记忆获得功能的影响

动物：昆明种小鼠，28±2g。

药品：丹参素钠和阿魏酸钠，丹阿溶液：称取等量丹参素钠、阿魏酸钠，无菌蒸馏水溶解，-20℃冰箱保存备用。

仪器：程控小鼠避暗实验仪。

方法：小鼠随机分为假手术组，手术组，实验(手术+给药)组。在小鼠清醒状态下阻断双侧颈总动脉5分钟(造成全脑缺血！)，在阻断颈总动脉前5分钟实验组按20mg/kg腹腔注射丹阿溶液，手术组和假手术组则腹腔注射同体积生理盐水，以后每日注射1次，共注射10次。末次注射后饲养24小时进行第一次训练。训练时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动记时器。动物穿过洞口进入暗室受到电击(AC，36V)，记时自动停止。取出小鼠，记录每鼠从明室进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24小时后重作测验，记录进入暗室的动物数，潜伏期和5分钟内的电击数。

结果：假手术组的学习和记忆获得功能与正常无明显差异；手术组的记忆获得功能障碍非常明显，表现为潜伏期短，错误次数多；实验(手术+丹阿溶液)组小鼠潜伏期延长，错误次数减少，接近假手术组。

1.7静远灵治疗老年性痴呆的临床初步观察

药物：静远灵片(50mg/片)。

诊断标准：按照美国精神疾病诊断和统计手册第IV版(DSM-IV)(1994)诊断标准确诊病例，根据国际疾病分类第十版，简易精神状态检查和CDR量表作出痴呆(轻、中和重)严重程度的诊断。

观察对象：汉族，男16人，女14人，年龄55-75岁，轻度痴呆24人，中度痴呆6人。

试验方法：按双盲法进行试验。上述确诊病人按病情配对分为2组，一组服安慰剂，另一组服用静远灵片(50mg/片)，每次1片，每日3次，连续1月，停药1周后再继续下一疗程。所有病人均治疗3个疗程，整个观察治疗过程持续6月。治疗前后按长谷川量表进行认知功能检查，按日常生活功能水平量表(ADL)进行生活能力检查，按Hamilton抑郁量表检查抑郁量。

结果：服药组除个别病人(2/15)的病情停留在原水平外，其余(13/15)病人的病情都有不同程度的好转：认识功能检查得分增加，生活能力增强，睡眠改善。未发现不良药物反应。服安慰剂组病人病情未见改善迹象。

典型病例介绍：王××，男，65岁，近记忆障碍，表现为辅助记忆障碍，间隔5分钟后不能复述3个词或三件物品名称，远记忆不受影响。认知功能损害还表现为找词困难，一分钟内能说出的动物名称数少于十个。身体生活自理能力和工具性日常生活自理能力评分为1级(完全可以由自己完成)。Hamilton抑郁量检量(5级4分法)：抑郁情绪(轻度，在访谈时自发陈述)；入睡困难(上床半小时不能入睡)、入睡不深(睡眠浅，多恶梦)、半夜多次醒来、早醒等多种睡眠障碍；对活动、工作兴趣减低；检查中发现轻度阻滞(思想和言语缓何慢，注意力难以集中，主动性减退)；问及时才诉述精神焦虑，出现口干、腹胀、尿频等躯体性焦虑症状；上述认知功能障碍明显干扰了其职业和社交活动；上述损害不能用其他的精神和情感性疾病(如抑郁症、精神分裂症等)来解释。郭××在确诊后即开始口服静远灵片(50mg/片)，每次1片，日服3次。1周后睡眠改善，上床后半小时内能入睡，睡眠深，半夜不醒或只上一次厕所，无早醒；半月后精神焦虑及躯体焦虑症状(口干、腹胀、尿频)等消失；丹参素钠治疗4个疗程，即6个月后检查，近记忆障碍有改善，间隔5分钟能复述3个词或3件物品名称，找词困难减轻，一分钟能说出动物名称12-15个。对活动、工作的兴趣恢复；注意力集中，主动性恢复，惟思想和言语仍较缓慢。一年后检查病情稳定。

2.静远灵可用于制备预防和治疗儿童注意力缺陷多动症药物的证据

2.1丹参素钠加阿魏酸钠对小鼠妊娠末期口腹MSG导致的发育中胎脑损伤的保护作用

取8周龄昆明种小鼠40只，2雌1雄随机配对同箱饲养。待母鼠妊娠晚期，胎鼠中枢神经系统基本发育分化完全，即妊娠17-21日，一次性灌胃给予母鼠MSG(2.0mg/g体重)，实验组同时腹腔注射丹阿溶液(20mg/Kg体重)所产仔鼠进行下述实验，对照组采用同体积生理盐水灌胃并腹腔注射的同批孕鼠所产仔鼠。实验方法可参考文献(YuTingxi，Zhao Yan，Shi Wenchun，Ma Rundi，Yu Lijian，Effects ofmaternal oral admini strat ion of monosodium glutamate at a latestage of pregnancy on developing mouse fetal brain，BrainRes，747：195-206，1997).

2.1.1自主活动试验(open field test)

方法：动物中枢神经系统兴奋时，自主活动加强，抑制时则自主活动减少，观察动物自主活动是评价中枢神经系统兴奋的一项重要指标。在特定的实验装置内(本实验采用中国医学科学院药物研究所制造的ZZ主动记录仪)，借助光电计数仪，测量一定时间内动物的活动状况，通过摄像机的应用和新开发的计算机软件自动处理分析动物的活动。实验在恒温、隔音和暗环境中进行。

结果：在16-90日龄期间，MSG组仔鼠的兴奋状态明显升高，MSG加丹参素钠和阿魏酸钠组与对照组接近，而单纯参素钠和阿魏酸钠组的兴奋状态最低。这说明，MSG、丹参素钠和阿魏酸钠在妊娠末端对母鼠应用后的影响可及下一代仔鼠，MSG升高仔鼠的兴奋水平，丹参素钠加阿魏酸钠则抵消MSG的作用。

2.1.2惊厥诱发实验

方法：10日龄仔鼠单独皮下给予吗啡(morphine，MOR，10mg/kg或5mg/kg体重)，或先皮下给予MOR(10mg/kg或5mg/kg体重)，15分钟后皮下加给MSG(2.5mg/g或1.25mg/g体重)或等体积的溶剂。然后将动物放入有机玻璃箱(30×23×15cm)中观察2-3小时。每组7-13只动物。如果动物出现阵挛、紧张、自行翻倒或呼吸停止，则被判断为发生惊厥。倘仅使用MOR在15分钟内就引起动物惊厥，则不再给予MSG。

结果：妊娠晚期经口给予MSG降低10日龄仔鼠的惊厥阈；妊娠晚期经口给予MSG，同时腹腔注射丹阿溶液几乎全部抵消MSG降低10日龄仔鼠惊厥阈的作用。

2.1.3学习记忆实验

方法：将60日龄仔鼠放进Y迷宫，给予电击，能立即逃避至灯光安全区作为正确反应。连续训练动物6日，每日20次，记录每日的正确反应次数。结果用Student’s t检验法进行统计分析。

结果：小鼠妊娠晚期经口给予MSG对仔鼠的Y-迷宫学习能力和记忆保持造成明显剂量相关的损伤。与对照组相仔鼠比，给予MSG(2.0mg/g)母鼠所产仔鼠在训练的第1至4日学习能力降低明显(P＜0.01)，5、6日没有显著性差异(0.05＜P＜0.1)，而给予MSG加丹阿溶液母鼠所产仔鼠与对照组仔鼠相比，整个6日中都没有显著性差异(P＞0.05)。

2.1.4爬绳实验

方法：绳长2米，距地面1米，将20日龄仔鼠置于绳的中点，观察其行为，记录其到达绳端，即爬行1米所需时间。

结果：MSG组仔鼠或者不能抓牢绳而掉下地，或者紧紧抓住绳而不能在绳上爬行；而给予MSG，同时腹腔注射丹阿溶液组仔鼠则能自如地爬绳。

2.1.5体重测定

方法：仔鼠自由取食标准鼠料，产后60日内每10日测体重一次，产后第90日再测一次。记录每月每鼠消耗食物的克数。资料显示为平均体重。

结果：MSG组母鼠所产仔鼠体重增长在接近30天时超过对照组仔鼠，30-90日期间的体重增长明显较对照组快，而给予MSG，同时腹腔注射丹阿溶液组仔鼠的体重增长与对照组无明显差异。

2.2静远灵治疗儿童注意力缺陷多动症的临床初步观察

2.2.1观察对象：汉族，男10人，女10人，7-12岁的小学生。

2.2.2试验方法：按双盲法进行试验。照美国DSM-IV(1991)标准，ADHD的临床表现可分为注意力项和多动项两类，ADHD的确诊必须至少具备这2项中的各4种表现或某一项中的8种表现(表2)。

                    表2ADHD诊断依据

注意力项	多动项
		易受外来影响而激动无监督时难于有始有终完成任务难于持久性集中注意力(作业、游戏)听不进别人在说什么经常丢失生活及学校用品在学校课堂注意力分散，成绩不佳不能组织达到一定目的的活动一事未完又做另一事	在教室常常离开座位常未加思考即开始行动集体活动常不按次序常在问题尚未说完时即抢答难于安静的玩耍做出过分行动如爬高、乱跑，参与危险活动坐立不安，动手动脚，常干扰别人说话过多

上述确诊为ADHD的患儿被分为2组，每组男女各5名，一组服安慰剂，另一组服丹参素钠胶囊(25mg/粒)，每次1粒，每日3次，连续1月。停药1周后再继续下一疗程。结果：丹参素钠组服药后7-10天，儿童多动—冲动即缓解，治疗2个疗程后情况明显改善，10例中8例(8/10)多动项下的障碍减少为3种以下，10例中5例(5/10)注意项下的障碍减少为4种以下。不难看出，丹参素钠对注意力缺陷的改善效果较差。未发现任何药物不良反应。服安慰剂组病人病情未见改善迹象。

3.静远灵可用于制备预防和治疗抑郁症药物的证据

3.1小鼠悬尾实验

方法：雄性小鼠，体重18-25mg。台式平衡记录仪。小鼠悬尾平衡架(类似天平支架，每端下垂一10cm长的自由平行移动悬棒，分别用于粘连小鼠尾和挂砝码，砝码重20g，在悬挂动物的一端配有游码)。实验前一周将小鼠分笼饲养，室温20±1℃，自由饮食，自然光照。小鼠随机分组，每组10只，给药(MSG，丹阿溶液)后，待作用达高峰(一般口服给药后1h，腹腔注射后30min)前6min，将单只小鼠放入小鼠自主活动记录仪，适应1min后，记录5min的活动数，作为自主活动的指标。

测定完自主活动后，立即用粘膏条将小鼠尾在距尾尖2cm处粘一侧悬棒的下端，另一侧悬挂砝码，调整两侧平衡，记录时支架的动物端用线向上连接于100g张力换能器，用支架上的游码使动物端加重5g再重新平衡(作为前负荷)，换能器连接到3066型台式平衡记录仪，调整纸速和电压强弱，适应1min后记录5min的结果，将不动状态换算成时间(s)。

结果：组间比较发现丹参素钠加阿魏酸钠几乎全部抵消MSG的作用。

1.2强迫大鼠游泳实验

方法：雄性大鼠，体重180～200g，实验前一天单笼饲养。透明有机玻璃(高40cm，直径18cm)缸中水深18cm，水温25±2℃。将动物分组，实验分两天进行，第一天单只大鼠放进水中让其游15min，取出在32℃温室烤干，归笼。给药(MSG，丹阿溶液)两次即归笼前和第二天游泳前。经过24h，给药后再将大鼠放入缸中游泳5min，记录5min内累加不动状态时间。

结果：组间比较发现丹参素钠加阿魏酸钠几乎全部抵消MSG的作用。

3.3静远灵治疗抑郁症的临床初步观察

药物：静远灵片(50mg/片)

诊断标准：至少两周持续情绪低落，对大部分活动丧失兴趣，失眠，没有食欲，常想到死亡或自杀等。量化标准采用Hamilton列出的17个抑郁症状(1960年)。

表3Hamilton列出的17个抑郁症状(1960年)

1、抑郁心境     9、激越2、罪恶感       10、焦虑—心理的3、自杀         11、焦虑—身体的4、入睡困难     12、身体状态—肠胃道5、睡中易醒     13、身体状态—一般的6、早醒         14、性症状—无性欲7、工作和兴趣   15、疑病8、迟钝         16、无自知力17、体重减轻

观察对象：汉族，男8人，女6人，年龄40-50岁。

试验方法：按双盲法进行试验。上述确诊病人按性别病情配对分为两组，一组服安慰剂，一组服静远灵片(500mg/片)，每次1片，每日3次，连续1日。治疗前后按表中所列17个抑郁症状对比问讯检查。

结果：服药组病人(6/7)，(除个别(1/7)病人外，病情普遍好转，失眠、抑郁、焦虑和食欲差等明显改善，对工作的兴趣恢复。未见明显不良反应。服安慰剂组无效。

典型病例介绍：乔××，男，46岁，私营企业主。10多年来工作压力大，应酬多，饮食睡眠都不规律，近日来情绪明显低落，心境悲观，入睡困难，常焦虑不安，几无性欲，对工作和生活都觉得没意思，体重明显减轻，有过自杀的念头。采用静远灵治疗，1每次1片，每日3次。用药1周后睡眠改善，上床后半小时即能入睡，睡中不醒或仅小便1次，食欲好转。用药一月后各种抑郁症状消失。

                          实施例

下面的配方举例说明了本发明的剂型。

                        实施例1：片剂

NO          组分                       用量

                                    mg/片        mg/片

1   丹参素钠25                      25           50

2   阿魏酸钠                        25           50

3   乳糖USP                         122          123

4   玉米淀粉，食品级，呈            30           40

    10％的纯水浆状物

5   玉米淀粉，食品级                95           130

6   硬脂酸镁                        3            7

                               合计 300          400

制造方法

在适当的混合机中混合第1项和第2项组分15分钟，第3组分与混合物粒化。如果需要，通过一个初筛研磨潮湿的颗粒，并使之干燥。如果需要，将干燥的颗粒过筛，并与第4项混合10-15分钟。加入第5项混合1-3分钟。在适当的压片机中将混合物压成适当的尺寸和重量。

                    实施例2：胶囊剂

NO                         组分             用量

                           mg/粒            mg/粒

1   丹参素钠                25               50

3   阿魏酸钠                25               50

3   乳糖USP                 106              120

4   玉米淀粉，食品级        40               73

5   硬脂酸镁NF              4                7

                      合计  200              300

制造方法

将第1、2和第3项在适当的混合机中混合10-15分钟，加入第4项混合1-3分钟。在适当的包囊机上将该混合物装入适当的胶囊中。

                       实施例3：注射液

丹参素钠                                50g或250g

阿魏酸钠                                50g或250g

葡萄糖                                  400g或250g

注射用水                                加至10000ml

              附图的简要说明

图1：丹参素(A)和丹参素钠(B)。

图2：阿魏酸(A)和阿魏酸钠(B)。

Claims (2)

1.静远灵的组合，该组合物静远灵包括丹参素或其钠盐和阿魏酸或其钠盐与可药用的载体。

2.静远灵作为预防和治疗各种神经退行性疾病(特别是老年痴呆)、儿童注意力缺陷多动症和抑郁症的药物。

Images