CN1193041C

CN1193041C - 具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

Info

Publication number: CN1193041C
Application number: CNB001157450A
Authority: CN
Inventors: 顾健人; 杨胜利
Original assignee: Shanghai Cancer Institute
Current assignee: Shanghai Cancer Institute
Priority date: 2000-05-18
Filing date: 2000-05-18
Publication date: 2005-03-16
Anticipated expiration: 2020-05-18
Also published as: CN1324820A

Abstract

本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

背景技术

人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：26。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

具体实施方式

本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP4277蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：2的蛋白质，但与SEQ ID NO：3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP4377蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：5的蛋白质，但与SEQ ID NO：6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ ID NO：2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。

编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。

上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。

可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。

在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，cold SpringHarbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。

本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。

具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。

在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。

本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。

本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。

可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。

本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物如TNF等结合使用。

药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。

本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。

本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。

与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。

抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。

多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。

能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的-人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。

具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。

检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。

简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。

将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes：a Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。

本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用

PP4277，PP4377，PP4522，PP4583，PP4664，PP4748，PP4762，PP5242，PP5656是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×10⁶cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H₂O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃ 24~48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2~3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。

cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况

cDNA克隆名称	CDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)
cDNA克隆名称	CDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)			PP4277	0	0	4	45	37	30
PP4377	1	16	4	33	12	16	PP4277	0	0	4	45	37	30
PP4377	1	16	4	33	12	16	PP4522	0	0	0	23	21	14
PP4583	0	0	0	23	21	14	PP4522	0	0	0	23	21	14
PP4583	0	0	0	23	21	14	PP4664	7	6	1	32	34	29
PP4748	0	2	1	21	14	18	PP4664	7	6	1	32	34	29
PP4748	0	2	1	21	14	18	PP4762	4	11	0	32	29	43
PP5242	3	4	3	16	13	9	PP4762	4	11	0	32	29	43
PP5242	3	4	3	16	13	9	PP5656	0	0	0	35	39	32

对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序。如仍未获得全长cDNA序列，则设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO：1、4、7、10、13、16、19、22、24)。

实施例2：从胎盘cDNA中PCR获得基因克隆：

取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL)，反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按97℃3’1个循环。94℃30″60℃30″72℃1′，35个循环，72℃10′1个循环进行PCR扩增，获得各个基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，从而获得重组蛋白。

基因特异引物序列

克隆名称

特异引物1(5′→3′)

特异引物2(5′→3′)

PP4277	TCACGGTCCCACTCAAGTCCTGC	TCTGGACACAGAACGAGCAGCCC
PP4277	TCACGGTCCCACTCAAGTCCTGC	TCTGGACACAGAACGAGCAGCCC	PP4377	GGCCCTGGGTTCACCTGATTGAG	GAGCCCTCCTCCTAGGGCTGGAA
PP4522	TCCCTGTCCCTGCTTCTCTTCGG	AAGCAGAGGGCGAAAGCTGCAAG	PP4377	GGCCCTGGGTTCACCTGATTGAG	GAGCCCTCCTCCTAGGGCTGGAA
PP4522	TCCCTGTCCCTGCTTCTCTTCGG	AAGCAGAGGGCGAAAGCTGCAAG	PP4583	GCGCGTCACCAGAGTCGTTTCTC	GGTCTTTCCACTTCGGGCTTCTG
PP4664	CAACGCGGACTTCATCATCCCTG	CCACCTGATGCAGGCCAACCATA	PP4583	GCGCGTCACCAGAGTCGTTTCTC	GGTCTTTCCACTTCGGGCTTCTG
PP4664	CAACGCGGACTTCATCATCCCTG	CCACCTGATGCAGGCCAACCATA	PP4748	CGACGCGCTGTCTGGAGTCGTAG	TCTGCTGACATGAGGACCTGGGG
PP4762	TGAATTGGCGCTATGTCTGGGGA	TCAAGCACTTGGCTTCTGCTGCC	PP4748	CGACGCGCTGTCTGGAGTCGTAG	TCTGCTGACATGAGGACCTGGGG
PP4762	TGAATTGGCGCTATGTCTGGGGA	TCAAGCACTTGGCTTCTGCTGCC	PP5242	GGCTGGGTCCCACCAGTGACAAG	CGACCTGCAGACGGGACATGACT
PP5656	AGAGCTCTTTGTGTGCCCCAGCC	AAGACCCCACCCCACAGATGCTC	PP5242	GGCTGGGTCCCACCAGTGACAAG	CGACCTGCAGACGGGACATGACT

实施例3：cDNA克隆序列分析

1.PP4277蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：1)长度：1915bp

CACTAAGGCG CAAGGCAGCT GCACATCCAC GGCCAGCCTC GTTGTCTTCA GGGATTTGTT 60

CAAAGTTCAT TCTGAATTGT AAGGTAACCA CTGCAGAACA CGAGCCTTTC CTGGGTATGT 120

GTGGTTATTT CTGCCCTTCA CGGTCCCACT CAAGTCCTGC CTCCCTCAGG GAGACCTCCC 180

AGACCTCACC AAGCCGTGGG CACGTGGACC AGAAGCCGTG GACCCCAGAG GCTCATTTAG 240

GGATCTGCTT TCTGAACCCA GGTCCTAACA TCTGCACTGC AGCGAGCATT TCTGGTGCCT 300

CAAGTGAGTC ACTCCAACTT CCAGCTCACT GAGAGGCGAT GGAGCACTGA GTGCCAGCAT 360

CTTCCAGCAC CAGAGGAGCT GACTCTGAAT AGACAGCTCG GCAGCGGCCT CAGCACAGAG 420

CAGGGGAGCC ACCAGCCACA GGCAGCCACT GAGCCCTTGG CATGTAACCC GGTAACCCAT 480

GCAACAGAAG ACCTGAGCGT CCAGTGTTGC TAGCTTGAAG TAACTTCAGT GGTGTTCCCC 540

AGCGTTTTTC TCATCCCCCT CCCTTCCCTT CCCCTACAGC TTTCTTCCTC TTTCCCCTCC 600

TTCTGAGTCT TTTGTCCCCA GTCCTGGGAA CCTTTTTTCT GACTTGGTGT TTTCTCCTGA 660

ATGCCTCCTT CCTGGCCCCC TAATCAGAAA TGCAGAAGCC ACCTGCCCCA CACAGGGGGC 720

CGCTTTCCCT GCATCTGGCA CTCACCAGGA CAGTCATAGA ACTGGCCTTG GGTGCTTGGG 780

GAGAGTGGAG AGGTCTGGGG GGCATCCACT GGCCTCAGCC TCAGAGCTTC TCATCAGTAA 840

CCCAGGAGGC AAAGGCCCAG CTCGAGATTA GCCCAGGCCA CTGTATCTGT GCCAAGACCT 900

ACAGCTGTCC CTGCAGGGCG TGCATCTCCT GCAGCCCAGG CTATCACAAT GGTGTCCCTT 960

TTGGTGGGGA TGTGAGGCCT GCTGCCTGCC TGGGAAGAAG CTGACAGGAT TGTTGGTGCT 1020

GTGGGGAGAA GCTGGTGTAA CTGAGACCCA TGAGGGAGGC CCTTTGTGGG TCTGTGGCTG 1080

GGAGGAGCTC TGGGGAAGAT GGGCCTTGAG AAATCCCAGC TTAGCACCTT TGACAGTTGC 1140

TCCACTGAGT CACCCTAGAC TGCAATCTCA CAGATGTTCT AACCACCCTC TCCCTGGGGA 1200

GCCCTTGGGG GTGCTGCAAG CCCAGTCCTC ACTCACTGGC TTTGTGCTTC TCTTCCCGAC 1260

TTCCTTTTTT TGCTCCTGTT GAGAAATGTG GGTCCAGGGC TGCGTGCTCC AGTGTGCGGA 1320

AGGAAGGGCA GCGTGCTCTT TGGACTGAGC TGGCTCAAGG GAAGCTGGGT CTGAGGGGAG 1380

ACTGACCTCG ACCCTTCTTA AATGAAACAC CTTTTCCCTG CGTCTCAGTC ACCAGTTACC 1440

TGGCCTGATC ACTGTGTGCC ACACCCCATC ACATCCATCC CCACAAGAAT GCCAGGAGGA 1500

GGGGTCATTG GCCTTTTTGC CAGCACAAAC CTCTGGAGGC CAGCTCCCAA GACCCGCCAG 1560

GCACACCTGC CAGAGTGCCT TAACTTGGGA TGTCTGCAAA CCTCTGTCCA TGGCCGAACC 1620

CACCCCACTG CCTGTTACTG TAAATAAAGG TCTATTAGCA TGCCACCATG CCCCTCCTCC 1680

GATGCATACA GTGCCCAGCT CAGCACCTGG TGCAAAGTAA GCACAATCTG GCTTCCAGCC 1740

ATCACTGCTG TTGCTACTAT CACAAATATT AGGCCCCTTC TAGAATGCAA AGATAACCCA 1800

GGGCTGCTCG TTCTGTGTCC AGATCACAGA GTTTTTCTTT TTATCCTTAT CAACTTTATT 1860

GAGGGATAAT TTACAGGCAA TAAATCATAT CCATTTAAAA AAAAAAAAAA AAAAA 1915

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：2)长度：104个氨基酸

1 MQKPPAPHRG PLSLHLALTR TVIELALGAW GEWRGLGGIH WPQPQSFSSV TQEAKAQLEI

61 SPGHCICAKT YSCPCRACIS CSPGYHNGVP FGGDVRPAAC LGRS

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：3)

克隆号：PP4277

起始编码子：690 ATG 终止编码子：1004 TGA

蛋白质分子量：11076

1 CA CTA AGG CGC AAG GCA GCT GCA CAT CCA CGG CCA GCC TCG TTG TCT 47

48 TCA GGG ATT TGT TCA AAG TTC ATT CTG AAT TGT AAG GTA ACC ACT GCA 95

96 GAA CAC GAG CCT TTC CTG GGT ATG TGT GGT TAT TTC TGC CCT TCA CGG 143

144 TCC CAC TCA AGT CCT GCC TCC CTC AGG GAG ACC TCC CAG ACC TCA CCA 191

192 AGC CGT GGG CAC GTG GAC CAG AAG CCG TGG ACC CCA GAG GCT CAT TTA 239

240 GGG ATC TGC TTT CTG AAC CCA GGT CCT AAC ATC TGC ACT GCA GCG AGC 287

288 ATT TCT GGT GCC TCA AGT GAG TCA CTC CAA CTT CCA GCT CAC TGA GAG 335

336 GCG ATG GAG CAC TGA GTG CCA GCA TCT TCC AGC ACC AGA GGA GCT GAC 383

384 TCT GAA TAG ACA GCT CGG CAG CGG CCT CAG CAC AGA GCA GGG GAG CCA 431

432 CCA GCC ACA GGC AGC CAC TGA GCC CTT GGC ATG TAA CCC GGT AAC CCA 479

480 TGC AAC AGA AGA CCT GAG CGT CCA GTG TTG CTA GCT TGA AGT AAC TTC 527

528 AGT GGT GTT CCC CAG CGT TTT TCT CAT CCC CCT CCC TTC CCT TCC CCT 575

576 ACA GCT TTC TTC CTC TTT CCC CTC CTT CTG AGT CTT TTG TCC CCA GTC 623

624 CTG GGA ACC TTT TTT CTG ACT TGG TGT TTT CTC CTG AAT GCC TCC TTC 671

672 CTG GCC CCC TAA TCA GAA ATG CAG AAG CCA CCT GCC CCA CAC AGG GGG 719

1 Met Gln Lys Pro Pro Ala Pro His Arg Gly 10

720 CCG CTT TCC CTG CAT CTG GCA CTC ACC AGG ACA GTC ATA GAA CTG GCC 767

11 Pro Leu Ser Leu His Leu Ala Leu Thr Arg Thr Val Ile Glu Leu Ala 26

768 TTG GGT GCT TGG GGA GAG TGG AGA GGT CTG GGG GGC ATC CAC TGG CCT 815

27 Leu Gly Ala Trp Gly Glu Trp Arg Gly Leu Gly Gly Ile His Trp Pro 42

816 CAG CCT CAG AGC TTC TCA TCA GTA ACC CAG GAG GCA AAG GCC CAG CTC 863

43 Gln Pro Gln Ser Phe Ser Ser Val Thr Gln Glu Ala Lys Ala Gln Leu 58

864 GAG ATT AGC CCA GGC CAC TGT ATC TGT GCC AAG ACC TAC AGC TGT CCC 911

59 Glu Ile Ser Pro Gly His Cys Ile Cys Ala Lys Thr Tyr Ser Cys Pro 74

912 TGC AGG GCG TGC ATC TCC TGC AGC CCA GGC TAT CAC AAT GGT GTC CCT 959

75 Cys Arg Ala Cys Ile Ser Cys Ser Pro Gly Tyr His Asn Gly Val Pro 90

960 TTT GGT GGG GAT GTG AGG CCT GCT GCC TGC CTG GGA AGA AGC TGA CAG 1007

91 Phe Gly Gly Asp Val Arg Pro Ala Ala Cys Leu Gly Arg Ser *** 105

1008 GAT TGT TGG TGC TGT GGG GAG AAG CTG GTG TAA CTG AGA CCC ATG AGG 1055

1056 GAG GCC CTT TGT GGG TCT GTG GCT GGG AGG AGC TCT GGG GAA GAT GGG 1103

1104 CCT TGA GAA ATC CCA GCT TAG CAC CTT TGA CAG TTG CTC CAC TGA GTC 1151

1152 ACC CTA GAC TGC AAT CTC ACA GAT GTT CTA ACC ACC CTC TCC CTG GGG 1199

1200 AGC CCT TGG GGG TGC TGC AAG CCC AGT CCT CAC TCA CTG GCT TTG TGC 1247

1248 TTC TCT TCC CGA CTT CCT TTT TTT GCT CCT GTT GAG AAA TGT GGG TCC 1295

1296 AGG GCT GCG TGC TCC AGT GTG CGG AAG GAA GGG CAG CGT GCT CTT TGG 1343

1344 ACT GAG CTG GCT CAA GGG AAG CTG GGT CTG AGG GGA GAC TGA CCT CGA 1391

1392 CCC TTC TTA AAT GAA ACA CCT TTT CCC TGC GTC TCA GTC ACC AGT TAC 1439

1440 CTG GCC TGA TCA CTG TGT GCC ACA CCC CAT CAC ATC CAT CCC CAC AAG 1487

1488 AAT GCC AGG AGG AGG GGT CAT TGG CCT TTT TGC CAG CAC AAA CCT CTG 1535

1536 GAG GCC AGC TCC CAA GAC CCG CCA GGC ACA CCT GCC AGA GTG CCT TAA 1583

1584 CTT GGG ATG TCT GCA AAC CTC TGT CCA TGG CCG AAC CCA CCC CAC TGC 1631

1632 CTG TTA CTG TAA ATA AAG GTC TAT TAG CAT GCC ACC ATG CCC CTC CTC 1679

1680 CGA TGC ATA CAG TGC CCA GCT CAG CAC CTG GTG CAA AGT AAG CAC AAT 1727

1728 CTG GCT TCC AGC CAT CAC TGC TGT TGC TAC TAT CAC AAA TAT TAG GCC 1775

1776 CCT TCT AGA ATG CAA AGA TAA CCC AGG GCT GCT CGT TCT GTG TCC AGA 1823

1824 TCA CAG AGT TTT TCT TTT TAT CCT TAT CAA CTT TAT TGA GGG ATA ATT 1871

1872 TAC AGG CAA TAA ATC ATA TCC ATT TAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 1915

2.PP4377蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：4)长度：2132bp

GGACGAGACT TGATGGAGCC ACCTATACAG TGCTGTTCAT TGGCACAGGA GACGGCTGGC 60

TGCTCAAGGC TGTGAGCCTG GGGCCCTGGG TTCACCTGAT TGAGGAGCTG CAGCTGTTTG 120

ACCAGGAGCC CATGAGAAGC CTGGTGCTAT CTCAGAGCAA GAAGCTGCTC TTTGCCGGCT 180

CCCGCTCTCA GCTGGTGCAG CTGCCCGTGG CCGACTGCAT GAAGTATCGC TCCTGTGCAG 240

ACTGTGTCCT CGCCCGGGAC CCCTATTGCG CCTGGAGCGT CAACACCAGC CGCTGTGTGC 300

CATGGGTGGC CACTCTGGAT CTCTACTGAT CCAGCATGTG ATGACCTCGG ACACTTCAGG 360

CATCTGCAAC CTCCGTGGCA GTAAGAAAGT CAGGCCCACT CCCAAAAACA TCACGGTGGT 420

GGCGGGCACA GACCTGGTGC TGCCCTGCCA CCTCTCCTCC AACTTGGCCC ATGCCCGCTG 480

GACCTTTGGG GGCCGGGACC TGCCTGCGGA ACAGCCCGGG TCCTTCCTCT ACGATGCCCG 540

GCTCCAGGCC TGGTTGTGAT GGCTGCCCAG CCCCGCCATG CCGGGGCCTA CCACTGCTTT 600

TCAGAGGAGC AGGGGGCGCG GCTGGCTGCT GAAGGCTACC TTGTGGCTGT CGTGGCAGGC 660

CCTGTCGGTG ACCTTGGAGG CCCGGCCCCC CCTGGAAAAC CTGGGGCTGG TGTGGCTGGC 720

GGTGGTGGCC CTGGGGGCTG TGTGCCTGGT GCTGCTGCTG CTGGTGCTGT CATTGCGCCG 780

GCGGCTGCGG GAAGAGCTGG AGAAAGGGGC CAAGCTACTG AGAGGACCTT GGTGTACCCC 840

CTGGAGCTGC CCAAGGAGCC CACCAGTCCC CCCTTCCGCC CTGTCCTGAA CCAGATGAGA 900

AACTTTGGGA TCCTGTCGTT ACTACTATTC AGATGGCTCC CTTAAGATAG TACCTGGGCA 960

TGCCCGGTGC CAGCCCGGTG GGGGGCCCCC TTCGCCACCT CCAGGCATCC CAGGCCAGCC 1020

TCTGCCTTCT CCAACTCGGC TTCACCTGGG GGGTGGGCGG AACTCAAATG CCAATGGTTA 1080

CGTGCGCTTA CAACTAGGAG GGGAGGACCG GGGAGGGCTC GGGCACCCCC TGCCTGAGCT 1140

CGCGGATGAA CTGAGACGCA AACTGCAGCA ACGCCAGCCA CTGCCCGACT CCAACCCCGA 1200

GGAGTCATCA GTATGAGGGG AACCCCCACC GCGTCGGCGG GAAGCGTGGG AGGTGTAGCT 1260

CCTACTTTTG CACAGGCACC AGCTACCTCA GGGACATGGC ACGGGCACCT GCTCTGTCTG 1320

GGACAGATAC TGCCCAGCAC CCACCCGGCC ATGAGGACCT GCTCTGCTCA GCACGGGCAC 1380

TGACCTTGGT GTGGCTCACC AGGGCACCAG CCTCGCAGAA GGCATCTTCC TCCTCTCTGT 1440

GAATCACAGA CACGCGGGAC CCCAGCCGCC AAAACTTTTC AAGGCAGAAG TTTCAAGATG 1500

TGTGTTTGTC TGTATTTGCA CATGTGTTTG TGTGTGTGTG TATGTGTGTG TCCACGCGCG 1560

TGCGCGCTTG TGGCATAGCC TTCCTGTTTC TGTCAAGTCT TCCCTTGGCC TGGGTCCTCC 1620

TGGTGAGTCA TTGGAGCTAT GAAGGGGAAG GGGTCGTATC ACTTTGTCTC TCCTACCCCC 1680

ACTGCCCCGA GTGTCGGGCA GCGATGTACA TATGGAGGTG GGGTGGACAG GGTGCTGTGC 1740

CCCTTCAGAG GGAGTGCAGG GCTTGGGGTG GGCCTAGTCC TGCTCCTAGG GCTGTGAATG 1800

TTTTCAGGGT GGGGGGAGGG AGATGGAGCC TCCTGTGTGT TTGGGGGGAA GGGTGGGTGG 1860

GGCCTCCCAC TTGGCCCCGG GGTTCAGTGG TATTTTATAC TTGCCTTCTT CCTGTACAGG 1920

GCTGGGAAAA GCTGTGTGAA GGGAGAGAAG GGAAAGGGTG GGCCTGCTGT GGACAATGGC 1980

ATACTCTCTT CCAGCCCTAG GAGGAGGGCT CCTAACAGTG TAACTTATTG TGTCCCCGCG 2040

TATTTATTTG TTGTAAATAT TTGAGTATTT TTATATTGCC AAATAAAATG GGAAAAAAAA 2100

AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 2132

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：5)长度：152个氨基酸

1 MCVSTRVRAC GIAFLFLSSL PLAWVLLVSH WSYEGEGVVS LCLSYPHCPE CRAAMYIWRW

61 GGQGAVPLQR ECRAWGGPSP APRAVNVFRV GGGRWSLLCV WGEGWVGPPT WPRGSVVFYT

121 CLLPVQGWEK LCEGREGKGW ACCGQWHTLF QP

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：6)

克隆号：PP4377

起始编码子：1542 ATG 终止编码子：2000 TAG

蛋白质分子量：16914

1 GG ACG AGA CTT GAT GGA GCC ACC TAT ACA GTG CTG TTC ATT GGC ACA 47

48 GGA GAC GGC TGG CTG CTC AAG GCT GTG AGC CTG GGG CCC TGG GTT CAC 95

96 CTG ATT GAG GAG CTG CAG CTG TTT GAC CAG GAG CCC ATG AGA AGC CTG 143

144 GTG CTA TCT CAG AGC AAG AAG CTG CTC TTT GCC GGC TCC CGC TCT CAG 191

192 CTG GTG CAG CTG CCC GTG GCC GAC TGC ATG AAG TAT CGC TCC TGT GCA 239

240 GAC TGT GTC CTC GCC CGG GAC CCC TAT TGC GCC TGG AGC GTC AAC ACC 287

288 AGC CGC TGT GTG CCA TGG GTG GCC ACT CTG GAT CTC TAC TGA TCC AGC 335

336 ATG TGA TGA CCT CGG ACA CTT CAG GCA TCT GCA ACC TCC GTG GCA GTA 383

384 AGA AAG TCA GGC CCA CTC CCA AAA ACA TCA CGG TGG TGG CGG GCA CAG 431

432 ACC TGG TGC TGC CCT GCC ACC TCT CCT CCA ACT TGG CCC ATG CCC GCT 479

480 GGA CCT TTG GGG GCC GGG ACC TGC CTG CGG AAC AGC CCG GGT CCT TCC 527

528 TCT ACG ATG CCC GGC TCC AGG CCT GGT TGT GAT GGC TGC CCA GCC CCG 575

576 CCA TGC CGG GGC CTA CCA CTG CTT TTC AGA GGA GCA GGG GGC GCG GCT 623

624 GGC TGC TGA AGG CTA CCT TGT GGC TGT CGT GGC AGG CCC TGT CGG TGA 671

672 CCT TGG AGG CCC GGC CCC CCC TGG AAA ACC TGG GGC TGG TGT GGC TGG 719

720 CGG TGG TGG CCC TGG GGG CTG TGT GCC TGG TGC TGC TGC TGC TGG TGC 767

768 TGT CAT TGC GCC GGC GGC TGC GGG AAG AGC TGG AGA AAG GGG CCA AGC 815

816 TAC TGA GAG GAC CTT GGT GTA CCC CCT GGA GCT GCC CAA GGA GCC CAC 863

864 CAG TCC CCC CTT CCG CCC TGT CCT GAA CCA GAT GAG AAA CTT TGG GAT 911

912 CCT GTC GTT ACT ACT ATT CAG ATG GCT CCC TTA AGA TAG TAC CTG GGC 959

960 ATG CCC GGT GCC AGC CCG GTG GGG GGC CCC CTT CGC CAC CTC CAG GCA 1007

1008 TCC CAG GCC AGC CTC TGC CTT CTC CAA CTC GGC TTC ACC TGG GGG GTG 1055

1056 GGC GGA ACT CAA ATG CCA ATG GTT ACG TGC GCT TAC AAC TAG GAG GGG 1103

1104 AGG ACC GGG GAG GGC TCG GGC ACC CCC TGC CTG AGC TCG CGG ATG AAC 1151

1152 TGA GAC GCA AAC TGC AGC AAC GCC AGC CAC TGC CCG ACT CCA ACC CCG 1199

1200 AGG AGT CAT CAG TAT GAG GGG AAC CCC CAC CGC GTC GGC GGG AAG CGT 1247

1248 GGG AGG TGT AGC TCC TAC TTT TGC ACA GGC ACC AGC TAC CTC AGG GAC 1295

1296 ATG GCA CGG GCA CCT GCT CTG TCT GGG ACA GAT ACT GCC CAG CAC CCA 1343

1344 CCC GGC CAT GAG GAC CTG CTC TGC TCA GCA CGG GCA CTG ACC TTG GTG 1391

1392 TGG CTC ACC AGG GCA CCA GCC TCG CAG AAG GCA TCT TCC TCC TCT CTG 1439

1440 TGA ATC ACA GAC ACG CGG GAC CCC AGC CGC CAA AAC TTT TCA AGG CAG 1487

1488 AAG TTT CAA GAT GTG TGT TTG TCT GTA TTT GCA CAT GTG TTT GTG TGT 1535

1536 GTG TGT ATG TGT GTG TCC ACG CGC GTG CGC GCT TGT GGC ATA GCC TTC 1583

1 Met Cys Val Ser Thr Arg Val Arg Ala Cys Gly Ile Ala Phe 14

1584 CTG TTT CTG TCA AGT CTT CCC TTG GCC TGG GTC CTC CTG GTG AGT CAT 1631

15 Leu Phe Leu Ser Ser Leu Pro Leu Ala Trp Val Leu Leu Val Ser His 30

1632 TGG AGC TAT GAA GGG GAA GGG GTC GTA TCA CTT TGT CTC TCC TAC CCC 1679

31 Trp Ser Tyr Glu Gly Glu Gly Val Val Ser Leu Cys Leu Ser Tyr Pro 46

1680 CAC TGC CCC GAG TGT CGG GCA GCG ATG TAC ATA TGG AGG TGG GGT GGA 1727

47 His Cys Pro Glu Cys Arg Ala Ala Met Tyr Ile Trp Arg Trp Gly Gly 62

1728 CAG GGT GCT GTG CCC CTT CAG AGG GAG TGC AGG GCT TGG GGT GGG CCT 1775

63 Gln Gly Ala Val Pro Leu Gln Arg Glu Cys Arg Ala Trp Gly Gly Pro 78

1776 AGT CCT GCT CCT AGG GCT GTG AAT GTT TTC AGG GTG GGG GGA GGG AGA 1823

79 Ser Pro Ala Pro Arg Ala Val Asn Val Phe Arg Val Gly Gly Gly Arg 94

1824 TGG AGC CTC CTG TGT GTT TGG GGG GAA GGG TGG GTG GGG CCT CCC ACT 1871

95 Trp Ser Leu Leu Cys Val Trp Gly Glu Gly Trp Val Gly Pro Pro Thr 110

1872 TGG CCC CGG GGT TCA GTG GTA TTT TAT ACT TGC CTT CTT CCT GTA CAG 1919

111 Trp Pro Arg Gly Ser Val Val Phe Tyr Thr Cys Leu Leu Pro Val Gln 126

1920 GGC TGG GAA AAG CTG TGT GAA GGG AGA GAA GGG AAA GGG TGG GCC TGC 1967

127 Gly Trp Glu Lys Leu Cys Glu Gly Arg Glu Gly Lys Gly Trp Ala Cys 142

1968 TGT GGA CAA TGG CAT ACT CTC TTC CAG CCC TAG GAG GAG GGC TCC TAA 2015

143 Cys Gly Gln Trp His Thr Leu Phe Gln Pro *** 153

2016 CAG TGT AAC TTA TTG TGT CCC CGC GTA TTT ATT TGT TGT AAA TAT TTG 2063

2064 AGT ATT TTT ATA TTG CCA AAT AAA ATG GGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2111

2112 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2132

3.PP4522蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：7)长度：2035bp

GGCACCTCGA GTTTTTTTTT TTTTTATTCC CAGGACATCA AGGAGACTTT CAATAGGTGT 60

GTTCCCAGTC TTTGCCCTTC GTGACCCAGT GGCATCTGGT TCCCTGTCCC TGCTTCTCTT 120

CGGTATCCCT CTCCTCTCCT TCCTTCCCCA GGACCTGAGT TTCCATCTCC TGGACCCTCC 180

TCTCCTTCCC CTCAGCTTTT GCTTTTCCCT CTGGGAATAT CGTGGTCCCA CCCCCTGCCC 240

GGTCCCCTTC CTCCAGGTGT GAAGAGGTAC AGCTGCAGCC CCCAGAGGTC TGGTCCCCTG 300

ACCCGTGCCA ACCCCATAGC CATGACTTCC TGACAGATGC CATCGTGAGG AAAATGAGCC 360

GGATGTTCTG TCAGGCTGCG AGAGTGGACC TGACGCTGGA CCCTGACACG GCTCACCCGG 420

CCCTGATGCT GTCCCCTGAC CGCCGGGGGG TCCGCCTGGC AGAGCGGCGG CAGGAGGTTG 480

CTGACCATCC CAAGCGCTTC TCGGCCGACT GCTGCGTACT GGGGGCCCAG GGCTTCCGCT 540

CCGGCCGGCA CTACTGGGAG GTAGAGGTGG GCGGGCGGCG GGGCTGGGCG GTGGGTGCTG 600

CCCGTGAATC AACCCATCAT AAGGAAAAGG TGGGCCCTGG GGGTTCCTCC GTGGGCAGCG 660

GGGATGCCAG CTCCTCGCGC CATCACCATC GCCGCCGCCG GCTCCACCTG CCCCAGCAGC 720

CCCTGCTCCA GCGGGAAGTG TGGTGCGTGG GCACCAACGG CAAACGCTAT CAGGCCCAGA 780

GCTCCACAGA ACAGACGCTG CTGAGCCCCA GTGAGAAACC AAGGCGCTTT GGTGTGTACC 840

TGGACTATGA AGCTGGGCGC CTGGGCTTCT ACAACGCAGA GACTCTAGCC CACGTGCACA 900

CCTTCTCGGC TGCCTTCCTG GGCGAGCGTG TCTTTCCTTT CTTCCGGGTG CTCTCCAAGG 960

GCACCCGCAT CAAGCTCTGC CCTTGATTAT CCTGCCACCC GCAGGGGCCC CTCTGTCAGC 1020

ACTTGGGGGG TGGGTGGTGG AGGGTGGCCC GTAAGTTTGA GGGCTCAAAG GCTCTTCCCA 1080

CTGCTTGTTA CTGTGTTGCT TCCCACTCCC CCTTGACCCC AGGCCCCTGC TTCTCCCTCT 1140

AGGAGCCTAA AGAACCCTCC TGGCCTCCAG CTCAGCCTTC TCTCACCTAC TATGTCTGTC 1200

CAACAGGTCT GCATGGGTCC CTGATAATGA GAACAGCTGC CTGGTCTTCT CTCCCAGTCT 1260

GCCTAGCCCA GCCCTGGGAC TGGAATTTGA GTAGGGGATG AGGGGAAATT GTAATTTCAT 1320

TCCTTAACTT CCTTTTCCCC ACCCCTGCTC TTCAACCTCT TTATCAGTTC TGAGGCTGGA 1380

GGGTTTGGGC AAGGCAACAT CCCCATTCCA ATTCCATTTT CTGATGCAGA TTTTAGCTGA 1440

GGGATTTGGA AGCCATTTGG GGAGGCAGGC TGGGCCAAAG GGTAGAGCTG GGTAATAAAT 1500

GTCTATTCTC CTGGGGAGGA GGGATTCTAA ACTTTCCTTC CGTCCTCAAT TTCTACCTCC 1560

ATAGACCGGC CAGAATTTAG CTTCACTTGA GAGAGATCTG GAATGGTCGC CATGATTGAA 1620

ACCACGCACC ATTACATCAT CATTACATTA ATTACATCAA CATAAATTAT TTCTTCCCCC 1680

TTCCCTTTTC CAGCACTCAA CCAAGGAGCA AAGCTCATCC CACCCCACAC CCCTCCCAGG 1740

TCTGCTCACT GCCAGGCTCC TCTCCCCTTT GTTCAGTGGA GCTGGCTTTT CTCCCAGCCC 1800

CTTTCCATGC CTTTCACTCC ATTTGGCAAG CTCTGAGGGG GAGCCTGGGG ACGGGTTTGG 1860

GTCCCCAGGA GGAGAGCCTT GGGTATAATC TATTTTTCTA GGAGCCTCTT GCCTTGTCAC 1920

TTGCAGCTTT CGCCCTCTGC TTTGATGGCT GAGGTGAACT CATGTTCTTT GGGAAAAGGG 1980

AAGGCGTGCT GTGGAAATAA AATGTTTATT TGCTTCTAAA AAAAAAAAAA AAAAA 2035

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：8)长度：210个氨基酸

1 MSRMFCQAAR VDLTLDPDTA HPALMLSPDR RGVRLAERRQ EVADHPKRFS ADCCVLGAQG

61 FRSGRHYWEV EVGGRRGWAV GAARESTHHK EKVGPGGSSV GSGDASSSRH HHRRRRLHLP

121 QQPLLQREVW CVGTNGKRYQ AQSSTEQTLL SPSEKPRRFG VYLDYEAGRL GFYNAETLAH

181 VHTFSAAFLG ERVFPFFRVL SKGTRIKLCP

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：9)

克隆号：PP4522

起始编码子：354 ATG 终止编码子：986 TGA

蛋白质分子量：23607

1 GG CAC CTC GAG TTT TTT TTT TTT TTA TTC CCA GGA CAT CAA GGA GAC 47

48 TTT CAA TAG GTG TGT TCC CAG TCT TTG CCC TTC GTG ACC CAG TGG CAT 95

96 CTG GTT CCC TGT CCC TGC TTC TCT TCG GTA TCC CTC TCC TCT CCT TCC 143

144 TTC CCC AGG ACC TGA GTT TCC ATC TCC TGG ACC CTC CTC TCC TTC CCC 191

192 TCA GCT TTT GCT TTT CCC TCT GGG AAT ATC GTG GTC CCA CCC CCT GCC 239

240 CGG TCC CCT TCC TCC AGG TGT GAA GAG GTA CAG CTG CAG CCC CCA GAG 287

288 GTC TGG TCC CCT GAC CCG TGC CAA CCC CAT AGC CAT GAC TTC CTG ACA 335

336 GAT GCC ATC GTG AGG AAA ATG AGC CGG ATG TTC TGT CAG GCT GCG AGA 383

1 Met Ser Arg Met Phe Cys Gln Ala Ala Arg 10

384 GTG GAC CTG ACG CTG GAC CCT GAC ACG GCT CAC CCG GCC CTG ATG CTG 431

11 Val Asp Leu Thr Leu Asp Pro Asp Thr Ala His Pro Ala Leu Met Leu 26

432 TCC CCT GAC CGC CGG GGG GTC CGC CTG GCA GAG CGG CGG CAG GAG GTT 479

27 Ser Pro Asp Arg Arg Gly Val Arg Leu Ala Glu Arg Arg Gln Glu Val 42

480 GCT GAC CAT CCC AAG CGC TTC TCG GCC GAC TGC TGC GTA CTG GGG GCC 527

43 Ala Asp His Pro Lys Arg Phe Ser Ala Asp Cys Cys Val Leu Gly Ala 58

528 CAG GGC TTC CGC TCC GGC CGG CAC TAC TGG GAG GTA GAG GTG GGC GGG 575

59 Gln Gly Phe Arg Ser Gly Arg His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly Gly 74

576 CGG CGG GGC TGG GCG GTG GGT GCT GCC CGT GAA TCA ACC CAT CAT AAG 623

75 Arg Arg Gly Trp Ala Val Gly Ala Ala Arg Glu Ser Thr His His Lys 90

624 GAA AAG GTG GGC CCT GGG GGT TCC TCC GTG GGC AGC GGG GAT GCC AGC 671

91 Glu Lys Val Gly Pro Gly Gly Ser Ser Val Gly Ser Gly Asp Ala Ser 106

672 TCC TCG CGC CAT CAC CAT CGC CGC CGC CGG CTC CAC CTG CCC CAG CAG 719

107 Ser Ser Arg His His His Arg Arg Arg Arg Leu His Leu Pro Gln Gln 122

720 CCC CTG CTC CAG CGG GAA GTG TGG TGC GTG GGC ACC AAC GGC AAA CGC 767

123 Pro Leu Leu Gln Arg Glu Val Trp Cys Val Gly Thr Asn Gly Lys Arg 138

768 TAT CAG GCC CAG AGC TCC ACA GAA CAG ACG CTG CTG AGC CCC AGT GAG 815

139 Tyr Gln Ala Gln Ser Ser Thr Glu Gln Thr Leu Leu Ser Pro Ser Glu 154

816 AAA CCA AGG CGC TTT GGT GTG TAC CTG GAC TAT GAA GCT GGG CGC CTG 863

155 Lys Pro Arg Arg Phe Gly Val Tyr Leu Asp Tyr Glu Ala Gly Arg Leu 170

864 GGC TTC TAC AAC GCA GAG ACT CTA GCC CAC GTG CAC ACC TTC TCG GCT 911

171 Gly Phe Tyr Asn Ala Glu Thr Leu Ala His Val His Thr Phe Ser Ala 186

912 GCC TTC CTG GGC GAG CGT GTC TTT CCT TTC TTC CGG GTG CTC TCC AAG 959

187 Ala Phe Leu Gly Glu Arg Val Phe Pro Phe Phe Arg Val Leu Ser Lys 202

960 GGC ACC CGC ATC AAG CTC TGC CCT TGA TTA TCC TGC CAC CCG CAG GGG 1007

203 Gly Thr Arg Ile Lys Leu Cys Pro *** 211

1008 CCC CTC TGT CAG CAC TTG GGG GGT GGG TGG TGG AGG GTG GCC CGT AAG 1055

1056 TTT GAG GGC TCA AAG GCT CTT CCC ACT GCT TGT TAC TGT GTT GCT TCC 1103

1104 CAC TCC CCC TTG ACC CCA GGC CCC TGC TTC TCC CTC TAG GAG CCT AAA 1151

1152 GAA CCC TCC TGG CCT CCA GCT CAG CCT TCT CTC ACC TAC TAT GTC TGT 1199

1200 CCA ACA GGT CTG CAT GGG TCC CTG ATA ATG AGA ACA GCT GCC TGG TCT 1247

1248 TCT CTC CCA GTC TGC CTA GCC CAG CCC TGG GAC TGG AAT TTG AGT AGG 1295

1296 GGA TGA GGG GAA ATT GTA ATT TCA TTC CTT AAC TTC CTT TTC CCC ACC 1343

1344 CCT GCT CTT CAA CCT CTT TAT CAG TTC TGA GGC TGG AGG GTT TGG GCA 1391

1392 AGG CAA CAT CCC CAT TCC AAT TCC ATT TTC TGA TGC AGA TTT TAG CTG 1439

1440 AGG GAT TTG GAA GCC ATT TGG GGA GGC AGG CTG GGC CAA AGG GTA GAG 1487

1488 CTG GGT AAT AAA TGT CTA TTC TCC TGG GGA GGA GGG ATT CTA AAC TTT 1535

1536 CCT TCC GTC CTC AAT TTC TAC CTC CAT AGA CCG GCC AGA ATT TAG CTT 1583

1584 CAC TTG AGA GAG ATC TGG AAT GGT CGC CAT GAT TGA AAC CAC GCA CCA 1631

1632 TTA CAT CAT CAT TAC ATT AAT TAC ATC AAC ATA AAT TAT TTC TTC CCC 1679

1680 CTT CCC TTT TCC AGC ACT CAA CCA AGG AGC AAA GCT CAT CCC ACC CCA 1727

1728 CAC CCC TCC CAG GTC TGC TCA CTG CCA GGC TCC TCT CCC CTT TGT TCA 1775

1776 GTG GAG CTG GCT TTT CTC CCA GCC CCT TTC CAT GCC TTT CAC TCC ATT 1823

1824 TGG CAA GCT CTG AGG GGG AGC CTG GGG ACG GGT TTG GGT CCC CAG GAG 1871

1872 GAG AGC CTT GGG TAT AAT CTA TTT TTC TAG GAG CCT CTT GCC TTG TCA 1919

1920 CTT GCA GCT TTC GCC CTC TGC TTT GAT GGC TGA GGT GAA CTC ATG TTC 1967

1968 TTT GGG AAA AGG GAA GGC GTG CTG TGG AAA TAA AAT GTT TAT TTG CTT 2015

2016 CTA AAA AAA AAA AAA AAA AA 2035

4.PP4583蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：10)长度：2142bp

CCGAAACGGG GAAGTTGTCT TGTGTGGAGA GGTTAGTAGA GCAGCGCGCG CGTCACCAGA 60

GTCGTTTCTC TTCGGAGTCT TAGGTGATCG AGGGTGTGCC CAGGGGGCGG GACTTGTTTG 120

CGCCTCCCGT TCCCTCCCAA TTTCCAAACG TGTCACCCCG GCGCCGACGG CCCTGTGCAG 180

GGGAAGCAGA TGGAGTTCAA GCTGGAGGCT CATCGCATCG TCAGCATCTC TCTGGGCAAG 240

ATCTACAACT CGCGGGTCCA GCGCGGCGGC ATCAAGCTGC ATAAGAACCT CCTGGTCTCG 300

CTGGTGCTGC GCAGCGCCCG CCAAGTCTAC CTGAGCGACC CGTGCCCCGG CCTCTACCTG 360

GCCGGTCCCG CTGGGACCCC GGCGCCGCCA CCGCAGCAGC AGCCCGGGGA GCCGGCGGCC 420

GGGCCACCCG CCGGCTGGGG AGAGCCGCCC CCGCCCGCCG CTCATGCCTC TTGGCCGGAG 480

ACCGAGCCGC AGCCGGAGCG CTCCTCCGTC TCAGACGCGC CGCGGGTAGG GGACGAGGTG 540

CCGGTGGCCA CGGTGACTGG AGTCGGGGAC GTTTTTCAGG GCGGAGAGGC GGACGCGACG 600

GAAGCTGCCT GGAGCCGCGT GGAGGGGCCG CGCCAGGCGG CGGCCAGAGA AGCCGAGGGT 660

ACCGCCGGAG GCTGGGGCGT CTTCCCCGAG GTATCTCGTG CCGCGCGCCG CCCCTGCGGC 720

TGCCCCCTAG GCGGGGAGGA CCCGCCGGGT ACACCGGCCG CGACCCCCGG CGCTGCCTGC 780

TGCTGCGCGC CGCGACCAGC GGAGGACGAG CCCCCCGCGC CGCCCGCGGT GTGCCCCAGG 840

AAGCGCTGCG CGGCGGGGGT GGGCGGCGGC CCAGCGGGCT GCCCGGCGCC CGGCTCGACC 900

CCGCTCAAGA AGCCCCGCCG GAACTTAGAG CAGCCGCCGA GTGGAGGAGA GGACGACGAC 960

GCGGAGGAGA TGGAGACCGG GAACGTGGCT AACCTCATCA GCATCTTCGG TTCCAGTTTC 1020

TCGGGACTCC TACGGAAAAG CCCCGGGGGC GGCAGAGAGG AAGAGGAGGG AGAGGAGAGC 1080

GGTCCGGAAG CCGCCGAGCC CGGGCAGATC TGCTGCGATA AGCCGGTGCT GAGAGACATG 1140

AACCCCTGGA GCACAGCCAT CGTGGCCTTC TGAGCCCTTG GCCCCCCTGC GGGGAGGAGG 1200

TGGAGCAGCG GGCGTCCCCG AAGTGAGGGC CAGGCCCTTC CCGGCTGCGA GGACGCCCAG 1260

AGACCGCGGG CGCTGAGCGC GTTGGGCAGA CTGGTTGCCT CTGGGCATCG CAAACTGCCC 1320

CCGGGCGCAT CTGGCTTATC TGGAGACCTG GGAGCTTGAG GCTCATTGGA AGAGGACGAT 1380

CGTTAACTTT TGTGTTTGTG TATGTCTGTG TATGTAAGTT TGTCTTGTGG CATTAAGACT 1440

ATTTTGCTCT TCTGGAATGC ACCACTCCTT CCCCAGGGTT TAAGAGATTG GGGGCAGACA 1500

GGGACTTTCC TCTGCCGGCT GCGTGGAGAA GGAAGCGGCT AAAAGGTTTG GGCCGGGGAG 1560

TTCCCCATTC GTTCTCCGGG GAGGGAGGGA CTTTACACCT ACCCCTCACC GGAAAGCTAG 1620

ACCCGCTTCA GGGCCAGGAG TGGCGTTTCC GCACAGGATT TCCTAAGACG AGAGGGATTT 1680

AGCCAAGAGC ACAGACTTGG ATTCCTTCTG TCCCTCCCCA CCTTTCTCTC CCAATGAAGA 1740

AACGTTTATA TCCTGTGATT ACTCTAGGAA AGGGGCGTAT TAACGGTCCT TTGCTTCCCC 1800

GCAGGGGAGA AAAAGCTTGA CGAACTTCAC AGAAGAGTTC AAGCTTGGAA ATAATGGAGT 1860

TTATAGAGAA AAGATATATT TTTAAAAGCT CTAGGTCAGA AGTACTACAC AGTGCTTTTA 1920

AAAAGTGTTT AATGAGAGTT TACAGACAGA AGCCCGAAGT GGAAAGACCT TATGGTTTTG 1980

TAGATATGGT GACTCCAGTC TTTGTTGTAT AAAGGTTGGG GGAGCTGATA AGGTTTTTGT 2040

ACAGTATTTT CTCCTTCGTT GTATTGATTT TTGTATAAAA ATGTAACTTC TACGTGTCTA 2100

ACACGTATTA AATATTTTGA AGCAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 2142

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：11)长度：327个氨基酸

1 MEFKLEAHRI VSISLGKIYN SRVQRGGIKL HKNLLVSLVL RSARQVYLSD PCPGLYLAGP

61 AGTPAPPPQQ QPGEPAAGPP AGWGEPPPPA AHASWPETEP QPERSSVSDA PRVGDEVPVA

121 TVTGVGDVFQ GGEADATEAA WSRVEGPRQA AAREAEGTAG GWGVFPEVSR AARRPCGCPL

181 GGEDPPGTPA ATPGAACCCA PRPAEDEPPA PPAVCPRKRC AAGVGGGPAG CPAPGSTPLK

241 KPRRNLEQPP SGGEDDDAEE METGNVANLI SIFGSSFSGL LRKSPGGGRE EEEGEESGPE

301 AAEPGQICCD KPVLRDMNPW STAIVAF

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：12)

克隆号：PP4583

起始编码子：190 ATG 终止编码子：1173 TGA

蛋白质分子量：33612

1 CCG AAA CGG GGA AGT TGT CTT GTG TGG AGA GGT TAG TAG AGC AGC GCG 48

49 CGC GTC ACC AGA GTC GTT TCT CTT CGG AGT CTT AGG TGA TCG AGG GTG 96

97 TGC CCA GGG GGC GGG ACT TGT TTG CGC CTC CCG TTC CCT CCC AAT TTC 144

145 CAA ACG TGT CAC CCC GGC GCC GAC GGC CCT GTG CAG GGG AAG CAG ATG 192

1 Met 1

193 GAG TTC AAG CTG GAG GCT CAT CGC ATC GTC AGC ATC TCT CTG GGC AAG 240

2 Glu Phe Lys Leu Glu Ala His Arg Ile Val Ser Ile Ser Leu Gly Lys 17

241 ATC TAC AAC TCG CGG GTC CAG CGC GGC GGC ATC AAG CTG CAT AAG AAC 288

18 Ile Tyr Asn Ser Arg Val Gln Arg Gly Gly Ile Lys Leu His Lys Asn 33

289 CTC CTG GTC TCG CTG GTG CTG CGC AGC GCC CGC CAA GTC TAC CTG AGC 336

34 Leu Leu Val Ser Leu Val Leu Arg Ser Ala Arg Gln Val Tyr Leu Ser 49

337 GAC CCG TGC CCC GGC CTC TAC CTG GCC GGT CCC GCT GGG ACC CCG GCG 384

50 Asp Pro Cys Pro Gly Leu Tyr Leu Ala Gly Pro Ala Gly Thr Pro Ala 65

385 CCG CCA CCG CAG CAG CAG CCC GGG GAG CCG GCG GCC GGG CCA CCC GCC 432

66 Pro Pro Pro Gln Gln Gln Pro Gly Glu Pro Ala Ala Gly Pro Pro Ala 81

433 GGC TGG GGA GAG CCG CCC CCG CCC GCC GCT CAT GCC TCT TGG CCG GAG 480

82 Gly Trp Gly Glu Pro Pro Pro Pro Ala Ala His Ala Ser Trp Pro Glu 97

481 ACC GAG CCG CAG CCG GAG CGC TCC TCC GTC TCA GAC GCG CCG CGG GTA 528

98 Thr Glu Pro Gln Pro Glu Arg Ser Ser Val Ser Asp Ala Pro Arg Val 113

529 GGG GAC GAG GTG CCG GTG GCC ACG GTG ACT GGA GTC GGG GAC GTT TTT 576

114 Gly Asp Glu Val Pro Val Ala Thr Val Thr Gly Val Gly Asp Val Phe 129

577 CAG GGC GGA GAG GCG GAC GCG ACG GAA GCT GCC TGG AGC CGC GTG GAG 624

130 Gln Gly Gly Glu Ala Asp Ala Thr Glu Ala Ala Trp Ser Arg Val Glu 145

625 GGG CCG CGC CAG GCG GCG GCC AGA GAA GCC GAG GGT ACC GCC GGA GGC 672

146 Gly Pro Arg Gln Ala Ala Ala Arg Glu Ala Glu Gly Thr Ala Gly Gly 161

673 TGG GGC GTC TTC CCC GAG GTA TCT CGT GCC GCG CGC CGC CCC TGC GGC 720

162 Trp Gly Val Phe Pro Glu Val Ser Arg Ala Ala Arg Arg Pro Cys Gly 177

721 TGC CCC CTA GGC GGG GAG GAC CCG CCG GGT ACA CCG GCC GCG ACC CCC 768

178 Cys Pro Leu Gly Gly Glu Asp Pro Pro Gly Thr Pro Ala Ala Thr Pro 193

769 GGC GCT GCC TGC TGC TGC GCG CCG CGA CCA GCG GAG GAC GAG CCC CCC 816

194 Gly Ala Ala Cys Cys Cys Ala Pro Arg Pro Ala Glu Asp Glu Pro Pro 209

817 GCG CCG CCC GCG GTG TGC CCC AGG AAG CGC TGC GCG GCG GGG GTG GGC 864

210 Ala Pro Pro Ala Val Cys Pro Arg Lys Arg Cys Ala Ala Gly Val Gly 225

865 GGC GGC CCA GCG GGC TGC CCG GCG CCC GGC TCG ACC CCG CTC AAG AAG 912

226 Gly Gly Pro Ala Gly Cys Pro Ala Pro Gly Ser Thr Pro Leu Lys Lys 241

913 CCC CGC CGG AAC TTA GAG CAG CCG CCG AGT GGA GGA GAG GAC GAC GAC 960

242 Pro Arg Arg Asn Leu Glu Gln Pro Pro Ser Gly Gly Glu Asp Asp Asp 257

961 GCG GAG GAG ATG GAG ACC GGG AAC GTG GCT AAC CTC ATC AGC ATC TTC 1008

258 Ala Glu Glu Met Glu Thr Gly Asn Val Ala Asn Leu Ile Ser Ile Phe 273

1009 GGT TCC AGT TTC TCG GGA CTC CTA CGG AAA AGC CCC GGG GGC GGC AGA 1056

274 Gly Ser Ser Phe Ser Gly Leu Leu Arg Lys Ser Pro Gly Gly Gly Arg 289

1057 GAG GAA GAG GAG GGA GAG GAG AGC GGT CCG GAA GCC GCC GAG CCC GGG 1104

290 Glu Glu Glu Glu Gly Glu Glu Ser Gly Pro Glu Ala Ala Glu Pro Gly 305

1105 GAG ATC TGC TGC GAT AAG CCG GTG CTG AGA GAC ATG AAC CCC TGG AGC 1152

306 Gln Ile Cys Cys Asp Lys Pro Val Leu Arg Asp Met Asn Pro Trp Ser 321

1153 ACA GCC ATC GTG GCC TTC TGA GCC CTT GGC CCC CCT GCG GGG AGG AGG 1200

322 Thr Ala Ile Val Ala Phe *** 328

1201 TGG AGC AGC GGG CGT CCC CGA AGT GAG GGC CAG GCC CTT CCC GGC TGC 1248

1249 GAG GAC GCC CAG AGA CCG CGG GCG CTG AGC GCG TTG GGC AGA CTG GTT 1296

1297 GCC TCT GGG CAT CGC AAA CTG CCC CCG GGC GCA TCT GGC TTA TCT GGA 1344

1345 GAC CTG GGA GCT TGA GGC TCA TTG GAA GAG GAC GAT CGT TAA CTT TTG 1392

1393 TGT TTG TGT ATG TCT GTG TAT GTA AGT TTG TCT TGT GGC ATT AAG ACT 1440

1441 ATT TTG CTC TTC TGG AAT GCA CCA CTC CTT CCC CAG GGT TTA AGA GAT 1488

1489 TGG GGG CAG ACA GGG ACT TTC CTC TGC CGG CTG CGT GGA GAA GGA AGC 1536

1537 GGC TAA AAG GTT TGG GCC GGG GAG TTC CCC ATT CGT TCT CCG GGG AGG 1584

1585 GAG GGA CTT TAC ACC TAC CCC TCA CCG GAA AGC TAG ACC CGC TTC AGG 1632

1633 GCC AGG AGT GGC GTT TCC GCA CAG GAT TTC CTA AGA CGA GAG GGA TTT 1680

1681 AGC CAA GAG CAC AGA CTT GGA TTC CTT CTG TCC CTC CCC ACC TTT CTC 1728

1729 TCC CAA TGA AGA AAC GTT TAT ATC CTG TGA TTA CTC TAG GAA AGG GGC 1776

1777 GTA TTA ACG GTC CTT TGC TTC CCC GCA GGG GAG AAA AAG CTT GAC GAA 1824

1825 CTT CAC AGA AGA GTT CAA GCT TGG AAA TAA TGG AGT TTA TAG AGA AAA 1872

1873 GAT ATA TTT TTA AAA GCT CTA GGT CAG AAG TAC TAC ACA GTG CTT TTA 1920

1921 AAA AGT GTT TAA TGA GAG TTT ACA GAC AGA AGC CCG AAG TGG AAA GAC 1968

1969 CTT ATG GTT TTG TAG ATA TGG TGA CTC CAG TCT TTG TTG TAT AAA GGT 2016

2017 TGG GGG AGC TGA TAA GGT TTT TGT ACA GTA TTT TCT CCT TCG TTG TAT 2064

2065 TGA TTT TTG TAT AAA AAT GTA ACT TCT ACG TGT CTA ACA CGT ATT AAA 2112

2113 TAT TTT GAA GCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2142

5.PP4664蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：13)长度：2158bp

GCCATCCCTA AGCAGACCCC AGTCCAATAC CTGCTCCCTG AGGCCAAGGC CCAGGACTCA 60

GACAAGATCT GCGTGGTCAT CGACCTGGAC GAGACCCTGG TGCACAGCTC CTTCAAGCCA 120

GTGAACAACG CGGACTTCAT CATCCCTGTG GAGATTGATG GGGTGGTCCA CCAGGTCTAC 180

GTGTTGAAGC GTCCTCATGT GGATGAGTTC CTGCAGCGAA TGGGCGAGCT CTTTGAATGT 240

GTGCTGTTCA CTGCTAGCCT CGCCAAGTAC GCAGACCCAG TAGCTGACCT GCTGGACAAA 300

TGGGGGGCCT TCCGGGCCCG GCTGTTTCGA GAGTCCTGCG TCTTCCACCG GGGGAACTAC 360

GTGAAGGACC TGAGCCGGTT GGGTCGAGAC CTGCGGCGGG TGCTCATCCT GGACAATTCA 420

CCTGCCTCCT ATGTCTTCCA TCCAGACAAT GCTGTACCGG TGGCCTCGTG GTTTGACAAC 480

ATGAGTGACA CAGAGCTCCA CGACCTCCTC CCCTTCTTCG AGCAACTCAG CCGTGTGGAC 540

GACGTGTACT CAGTGCTCAG GCAGCCACGG CCAGGGAGCT AGTGAGGGTG ATGGGGCCAG 600

GACCTGCCCC TGACCAATGA TACCCACACC TCCTCCCAGG AAGACTGCCC AGGCCTTTGT 660

TAGGAAAACC CATGGGCCGC CGCCACACTC AGTGCCATGG GGAAGCGGGC GTCTCCCCCA 720

CCAGCCCCAC CAGGCGGTGT AGGGGCAGCA GGCTGCACTG AGGACCGTGA GCTCCAGGCC 780

CCGTGTCAGT GCCTTCAAAC CTCCTCCCCT ATTCTCAGGG GACCTGGGGG GCCCTGCCTG 840

CTGCTCCCTT TTTCTGTCTC TGTCCATGCT GCCATGTTTC TCTGCTGCCA AATTGGGCCC 900

CTTGGCCCCT TCCGGTTCTG CTTCCTGGGG GCAGGGTTCC TGCCTTGGAC CCCCAGTCTG 960

GGAACGGTGG ACATCAAGTG CCTTGCATAG AGCCCCCTCT TCCCCGCCCA GCTTTCCCAG 1020

GGGCACAGCT CTAGGCTGGG AGGGGAGAAC CAGCCCCTCC CCCTGCCCCA CCTCCTCCCT 1080

TGGGACTGAG AGGGCCCCTA CCAACCTTTG CCTCTGCCTT GGAGGGAGGG GAGGTCTGTT 1140

ACCACTGGGG AAGGCAGCAG GAGTCTGTCC TTCAGGCCCC ACAGTGCAGC TTCTCCAGGG 1200

CCGACAGCTG AGGGCTGCTC CCTGCATCAT CCAAGCAATG ACCTCAGACT TCTGCCTTAA 1260

CCAGCCCCGG GGCTTGGCTC CCCCAGCTCT GAGCGTGGGG GCATAGGCAG GACCCCCCTT 1320

GTGGTGCCAT ATAAATATGT ACATGTGTAT ATAGATTTTT AGGGGAAGGA GAGAGGGAAG 1380

GGTCAGGGTA GAGACACCCC TCCCTTGCCC CTTTCCTGGG CCCAGAAGTT GGGGGGAGGG 1440

AGGGAAAGGA TTTTTACATT TTTTAAACTG CTATTTTCTG AATGGAACAA GCTGGGCCAA 1500

GGGGCCCAGG CCCTGTCCTC TGTCCCTCAC ACCCCTTTGC TCCGTTCATT CATTCAAAAA 1560

AACATTTCTT GAGCACCTTC TGTGCCCAGC ATATGCTAGG CCCACCAGCT AAGTGTGTGT 1620

GGGGGGTCTC TACGCCAGCT CATCAGTGCC TCCTTGCCCA TCCTTCACCG GTGCCTTTGG 1680

GGGATCTGTA GGAGGTGGGA CCTTCTGTGG GGTTTGGGGA TCTCCAGGAA GCCCGACCAA 1740

GCTGTCCCCT TCCCCTGTGC CAACCCATCT CCTACAGCCC CCTGCCTGAT CCCCTGCTGG 1800

CTGGGGGCAG CTCCCAGGAT ATCCTGCCTT CCAACTGTTT CTGAAGCCCC TCCTCCTAAC 1860

ATGGCGATTC CGGAGGTCAA GGCCTTGGGC TCTCCCCAGG GTCTAACGGT TAAGGGGACC 1920

CACATACCAG TGCCAAGGGG GATGTCAAGT GGTGATGTCG TTGTGCTCCC CTCCCCCAGA 1980

GCGGGTGGGC GGGGGGTGAA TATGGTTGGC CTGCATCAGG TGGCCTTCCC ATTTAAGTGC 2040

CTTCTCTGTG ACTGAGAGCC CTAGTGTGAT GAGAACTAAA GAGAAAGCCA GACCCCTAAA 2100

AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA 2158

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：14)长度：146个氨基酸

1 MLPCFSAAKL GPLAPSGSAS WGQGSCLGPP VWERWTSSAL HRAPSSPPSF PRGTALGWEG

61 RTSPSPCPTS SLGTERAPTN LCLCLGGRGG LLPLGKAAGV CPSGPTVQLL QGRQLRAAPC

121 IIQAMTSDFC LNQPRGLAPP ALSVGA

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：15)

克隆号：PP4664

起始编码子：866 ATG 终止编码子：1306 TAG

蛋白质分子量：14815

1 G CCA TCC CTA AGC AGA CCC CAG TCC AAT ACC TGC TCC CTG AGG CCA 46

47 AGG CCC AGG ACT CAG ACA AGA TCT GCG TGG TCA TCG ACC TGG ACG AGA 94

95 CCC TGG TGC ACA GCT CCT TCA AGC CAG TGA ACA ACG CGG ACT TCA TCA 142

143 TCC CTG TGG AGA TTG ATG GGG TGG TCC ACC AGG TCT ACG TGT TGA AGC 190

191 GTC CTC ATG TGG ATG AGT TCC TGC AGC GAA TGG GCG AGC TCT TTG AAT 238

239 GTG TGC TGT TCA CTG CTA GCC TCG CCA AGT ACG CAG ACC CAG TAG CTG 286

287 ACC TGC TGG ACA AAT GGG GGG CCT TCC GGG CCC GGC TGT TTC GAG AGT 334

335 CCT GCG TCT TCC ACC GGG GGA ACT ACG TGA AGG ACC TGA GCC GGT TGG 382

383 GTC GAG ACC TGC GGC GGG TGC TCA TCC TGG ACA ATT CAC CTG CCT CCT 430

431 ATG TCT TCC ATC CAG ACA ATG CTG TAC CGG TGG CCT CGT GGT TTG ACA 478

479 ACA TGA GTG ACA CAG AGC TCC ACG ACC TCC TCC CCT TCT TCG AGC AAC 526

527 TCA GCC GTG TGG ACG ACG TGT ACT CAG TGC TCA GGC AGC CAC GGC CAG 574

575 GGA GCT AGT GAG GGT GAT GGG GCC AGG ACC TGC CCC TGA CCA ATG ATA 622

623 CCC ACA CCT CCT CCC AGG AAG ACT GCC CAG GCC TTT GTT AGG AAA ACC 670

671 CAT GGG CCG CCG CCA CAC TCA GTG CCA TGG GGA AGC GGG CGT CTC CCC 718

719 CAC CAG CCC CAC CAG GCG GTG TAG GGG CAG CAG GCT GCA CTG AGG ACC 766

767 GTG AGC TCC AGG CCC CGT GTC AGT GCC TTC AAA CCT CCT CCC CTA TTC 814

815 TCA GGG GAC CTG GGG GGC CCT GCC TGC TGC TCC CTT TTT CTG TCT CTG 862

863 TCC ATG CTG CCA TGT TTC TCT GCT GCC AAA TTG GGC CCC TTG GCC CCT 910

1 Met Leu Pro Cys Phe Ser Ala Ala Lys Leu Gly Pro Leu Ala Pro 15

911 TCC GGT TCT GCT TCC TGG GGG CAG GGT TCC TGC CTT GGA CCC CCA GTC 958

16 Ser Gly Ser Ala Ser Trp Gly Gln Gly Ser Cys Leu Gly Pro Pro Val 31

959 TGG GAA CGG TGG ACA TCA AGT GCC TTG CAT AGA GCC CCC TCT TCC CCG 1006

32 Trp Glu Arg Trp Thr Ser Ser Ala Leu His Arg Ala Pro Ser Ser Pro 47

1007 CCC AGC TTT CCC AGG GGC ACA GCT CTA GGC TGG GAG GGG AGA ACC AGC 1054

48 Pro Ser Phe Pro Arg Gly Thr Ala Leu Gly Trp Glu Gly Arg Thr Ser 63

1055 CCC TCC CCC TGC CCC ACC TCC TCC CTT GGG ACT GAG AGG GCC CCT ACC 1102

64 Pro Ser Pro Cys Pro Thr Ser Ser Leu Gly Thr Glu Arg Ala Pro Thr 79

1103 AAC CTT TGC CTC TGC CTT GGA GGG AGG GGA GGT CTG TTA CCA CTG GGG 1150

80 Asn Leu Cys Leu Cys Leu Gly Gly Arg Gly Gly Leu Leu Pro Leu Gly 95

1151 AAG GCA GCA GGA GTC TGT CCT TCA GGC CCC ACA GTG CAG CTT CTC CAG 1198

96 Lys Ala Ala Gly Val Cys Pro Ser Gly Pro Thr Val Gln Leu Leu Gln 111

1199 GGC CGA CAG CTG AGG GCT GCT CCC TGC ATC ATC CAA GCA ATG ACC TCA 1246

112 Gly Arg Gln Leu Arg Ala Ala Pro Cys Ile Ile Gln Ala Met Thr Ser 127

1247 GAC TTC TGC CTT AAC CAG CCC CGG GGC TTG GCT CCC CCA GCT CTG AGC 1294

128 Asp Phe Cys Leu Asn Gln Pro Arg Gly Leu Ala Pro Pro Ala Leu Ser 143

1295 GTG GGG GCA TAG GCA GGA CCC CCC TTG TGG TGC CAT ATA AAT ATG TAC 1342

144 Val Gly Ala *** 147

1343 ATG TGT ATA TAG ATT TTT AGG GGA AGG AGA GAG GGA AGG GTC AGG GTA 1390

1391 GAG ACA CCC CTC CCT TGC CCC TTT CCT GGG CCC AGA AGT TGG GGG GAG 1438

1439 GGA GGG AAA GGA TTT TTA CAT TTT TTA AAC TGC TAT TTT CTG AAT GGA 1486

1487 ACA AGC TGG GCC AAG GGG CCC AGG CCC TGT CCT CTG TCC CTC ACA CCC 1534

1535 CTT TGC TCC GTT CAT TCA TTC AAA AAA ACA TTT CTT GAG CAC CTT CTG 1582

1583 TGC CCA GCA TAT GCT AGG CCC ACC AGC TAA GTG TGT GTG GGG GGT CTC 1630

1631 TAC GCC AGC TCA TCA GTG CCT CCT TGC CCA TCC TTC ACC GGT GCC TTT 1678

1679 GGG GGA TCT GTA GGA GGT GGG ACC TTC TGT GGG GTT TGG GGA TCT CCA 1726

1727 GGA AGC CCG ACC AAG CTG TCC CCT TCC CCT GTG CCA ACC CAT CTC CTA 1774

1775 CAG CCC CCT GCC TGA TCC CCT GCT GGC TGG GGG CAG CTC CCA GGA TAT 1822

1823 CCT GCC TTC CAA CTG TTT CTG AAG CCC CTC CTC CTA ACA TGG CGA TTC 1870

1871 CGG AGG TCA AGG CCT TGG GCT CTC CCC AGG GTC TAA CGG TTA AGG GGA 1918

1919 CCC ACA TAC CAG TGC CAA GGG GGA TGT CAA GTG GTG ATG TCG TTG TGC 1966

1967 TCC CCT CCC CCA GAG CGG GTG GGC GGG GGG TGA ATA TGG TTG GCC TGC 2014

2015 ATC AGG TGG CCT TCC CAT TTA AGT GCC TTC TCT GTG ACT GAG AGC CCT 2062

2063 AGT GTG ATG AGA ACT AAA GAG AAA GCC AGA CCC CTA AAA AAA AAA AAA 2110

2111 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2158

6.PP4748蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：16)长度：1337bp

GAACAGCGGG GGCACACGGG GCGCTGCCGA AGTGCAAGGC CACGGCCAGA GCTCGAGCCC 60

GACGCGCTGT CTGGAGTCGT AGGTTGGCGC CGTTTGGGGT CGGGGTCTGA GGCTTGGGCG 120

CTGCCTGGGC CGAGCGGAGA TCGGGGTTTG CCTCCCGTCC CCGCTCAGGA CCCTGACGTG 180

GCTGAAGCGG CCCCGGGAGC ATGAGCGGGC AGCGCGTGGA CGTCAAGGTG GTGATGCTGG 240

GCAAGGAGTA CGTGGGCAAG ACTAGCCTGG TGGAGCGCTA CGTGCACGAC CGCTTTCTGG 300

TGGGGCCTTA TCAGAACACC ATCGGGGCCG CCTTCGTGGC CAAGGTGATG TCGGTCGGAG 360

ACCGGACTGT GACATTAGGT ATTTGGGACA CAGCAGGCTC TGAGCGCTAT GAGGCCATGA 420

GTAGAATCTA CTATCGGGGT GCCAAGGCTG CCATCGTCTG CTATGACCTC ACAGACAGCA 480

GCAGCTTTGA GCGAGCAAAG TTCTGGGTGA AGGAACTGCG CAGCCTAGAG GAGGGCTGCC 540

AAATCTACTT ATGTGGCACC AAGAGTGACC TGCTGGAAGA AGACCGGAGG CGTCGACGTG 600

TGGACTTCCA CGACGTCCAG GACTATGCAG ACAGTAGCTG CTCCTCAGCC CTTTGGGGGG 660

TGGGGGTGTG TGGCTGTCTG GGTGGATCAA AGAAAATAGG GACTGCCTTG GCTGCCAGGG 720

CAAGGTGCTC TAGGAGGTCT TCCTGGCCTC CTTGAACTGT GGGGTCCAGG AGACTCCCTG 780

AACTGCTAGC CCTCCCTTTT GTCTGTTTAT CTAATTCTCA GGTATGAGGC TTTAGTCACT 840

TCTCTTTACA GATATCAAAG CTCAGCTCTT TGAAACATCC AGCAAGACAG GCCAGAGTGT 900

GGACGAGCTC TTCCAGAAAG TGGCAGAGGA TTACGTCAGT GTGGCTGCCT TCCAGGTGAT 960

GACAGAGGAC AAGGGCGTGG ATCTGGGCCA GAAGCCAAAC CCCTACTTCT ACAGCTGTTG 1020

TCATCACTGA GTCAGCACTC ACCTGGCCTG GGGGAATTAA AGGAATTCCC CGTAAGGGCT 1080

GGACCCAGCT CCTTTCTGGG CTTGGGTAGT CAAATGTCTG AGCTACCCCA GGTCCTCATG 1140

TCAGCAGAGT GGCGCCTGCC TGTGCTGGCC CATGGAACGG AGACAGCATT GGGCTGACTG 1200

TGGGCATGAG GAGGGATAAG GCTGATTTGG ACCCCAGGCT TCTGCCCTGG ACAGCACTTG 1260

TGTCTGCAGA TTATTTAAGT GGCTTTTGAT CTGTAAATAA AATCAGTGCA CTGTGCATCA 1320

AAAAAAAAAA AAAAAAA 1337

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：17)长度：184个氨基酸

1 MSGQRVDVKV VMLGKEYVGK TSLVERYVHD RFLVGPYQNT IGAAFVAKVM SVGDRTVTLG

61 IWDTAGSERY EAMSRIYYRG AKAAIVCYDL TDSSSFERAK FWVKELRSLE EGCQIYLCGT

121 KSDLLEEDRR RRRVDFHDVQ DYADSSCSSA LWGVGVCGCL GGSKKIGTAL AARARCSRRS

181 SWPP

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：18)

克隆号：PP4748

起始编码子：201 ATG 终止编码子：755 TGA

蛋白质分子量：20517

1 GA ACA GCG GGG GCA CAC GGG GCG CTG CCG AAG TGC AAG GCC ACG GCC 47

48 AGA GCT CGA GCC CGA CGC GCT GTC TGG AGT CGT AGG TTG GCG CCG TTT 95

96 GGG GTC GGG GTC TGA GGC TTG GGC GCT GCC TGG GCC GAG CGG AGA TCG 143

144 GGG TTT GCC TCC CGT CCC CGC TCA GGA CCC TGA CGT GGC TGA AGC GGC 191

192 CCC GGG AGC ATG AGC GGG CAG CGC GTG GAC GTC AAG GTG GTG ATG CTG 239

1 Met Ser Gly Gln Arg Val Asp Val Lys Val Val Met Leu 13

240 GGC AAG GAG TAC GTG GGC AAG ACT AGC CTG GTG GAG CGC TAC GTG CAC 287

14 Gly Lys Glu Tyr Val Gly Lys Thr Ser Leu Val Glu Arg Tyr Val His 29

288 GAC CGC TTT CTG GTG GGG CCT TAT CAG AAC ACC ATC GGG GCC GCC TTC 335

30 Asp Arg Phe Leu Val Gly Pro Tyr Gln Asn Thr Ile Gly Ala Ala Phe 45

336 GTG GCC AAG GTG ATG TCG GTC GGA GAC CGG ACT GTG ACA TTA GGT ATT 383

46 Val Ala Lys Val Met Ser Val Gly Asp Arg Thr Val Thr Leu Gly Ile 61

384 TGG GAC ACA GCA GGC TCT GAG CGC TAT GAG GCC ATG AGT AGA ATC TAC 431

62 Trp Asp Thr Ala Gly Ser Glu Arg Tyr Glu Ala Met Ser Arg Ile Tyr 77

432 TAT CGG GGT GCC AAG GCT GCC ATC GTC TGC TAT GAC CTC ACA GAC AGC 479

78 Tyr Arg Gly Ala Lys Ala Ala Ile Val Cys Tyr Asp Leu Thr Asp Ser 93

480 AGC AGC TTT GAG CGA GCA AAG TTC TGG GTG AAG GAA CTG CGC AGC CTA 527

94 Ser Ser Phe Glu Arg Ala Lys Phe Trp Val Lys Glu Leu Arg Ser Leu 109

528 GAG GAG GGC TGC CAA ATC TAC TTA TGT GGC ACC AAG AGT GAC CTG CTG 575

110 Glu Glu Gly Cys Gln Ile Tyr Leu Cys Gly Thr Lys Ser Asp Leu Leu 125

576 GAA GAA GAC CGG AGG CGT CGA CGT GTG GAC TTC CAC GAC GTC CAG GAC 623

126 Glu Glu Asp Arg Arg Arg Arg Arg Val Asp Phe His Asp Val Gln Asp 141

624 TAT GCA GAC AGT AGC TGC TCC TCA GCC CTT TGG GGG GTG GGG GTG TGT 671

142 Tyr Ala Asp Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Trp Gly Val Gly Val Cys 157

672 GGC TGT CTG GGT GGA TCA AAG AAA ATA GGG ACT GCC TTG GCT GCC AGG 719

158 Gly Cys Leu Gly Gly Ser Lys Lys Ile Gly Thr Ala Leu Ala Ala Arg 173

720 GCA AGG TGC TCT AGG AGG TCT TCC TGG CCT CCT TGA ACT GTG GGG TCC 767

174 Ala Arg Cys Ser Arg Arg Ser Ser Trp Pro Pro *** 185

768 AGG AGA CTC CCT GAA CTG CTA GCC CTC CCT TTT GTC TGT TTA TCT AAT 815

816 TCT CAG GTA TGA GGC TTT AGT CAC TTC TCT TTA CAG ATA TCA AAG CTC 863

864 AGC TCT TTG AAA CAT CCA GCA AGA CAG GCC AGA GTG TGG ACG AGC TCT 911

912 TCC AGA AAG TGG CAG AGG ATT ACG TCA GTG TGG CTG CCT TCC AGG TGA 959

960 TGA CAG AGG ACA AGG GCG TGG ATC TGG GCC AGA AGC CAA ACC CCT ACT 1007

1008 TCT ACA GCT GTT GTC ATC ACT GAG TCA GCA CTC ACC TGG CCT GGG GGA 1055

1056 ATT AAA GGA ATT CCC CGT AAG GGC TGG ACC CAG CTC CTT TCT GGG CTT 1103

1104 GGG TAG TCA AAT GTC TGA GCT ACC CCA GGT CCT CAT GTC AGC AGA GTG 1151

1152 GCG CCT GCC TGT GCT GGC CCA TGG AAC GGA GAC AGC ATT GGG CTG ACT 1199

1200 GTG GGC ATG AGG AGG GAT AAG GCT GAT TTG GAC CCC AGG CTT CTG CCC 1247

1248 TGG ACA GCA CTT GTG TCT GCA GAT TAT TTA AGT GGC TTT TGA TCT GTA 1295

1296 AAT AAA ATC AGT GCA CTG TGC ATC AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1337

D.Blastp结果

Query＝PP4748蛋白(184个氨基酸)

>SP_IN：P91857 P91857 caenorhabditis elegans.f26h9.6 protein.11/1999

长度＝208个氨基酸

分值＝108bits(266)，预计值＝3e-23

相同性＝60/140(42％)，相似性＝88/140(62％)，缺口＝8/140(5％)

Query：9 KVVMLGKEYVGKTSLVERYVHDRFLVGPYQ-NTIGAAFVAKVMSVGDRTVTLGIWDTAGS 67

K+V+LG+ VGK+SLV R+V +F YQ +TIGAAF+ + + + D T+ IWDTAG

Sbjct：21 KLVLLGESAVGKSSLVLRFVKGQF--HEYQESTIGAAFLTQTVCLDDATIKFEIWDTAGQ 78

Query：68 ERYEAMSRIYYRGAKAAIVCYDLTDSSSFERAKFWVKEL-RSLEEGCQIYLCGTKSXXXX 126

ERY +++ +YYRGA+AAIV YD+T+ SF++AK WVKEL R +L G K+

Sbjct：79 ERYHSLAPMYYRGAQAAIVVYDITNQESFQKAKNWVKELQRQASPNIVMALAGNKA---- 134

Query：127 XXXXXXXVDFHDVQDYADSS 146

V++ + YA+ +

Sbjct：135 DYANKRTVEYEEANAYAEDN 154

7.PP4762蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：19)长度：2417bp

GTTTCTGGCG CGAACTTCCG CCGTTCCGAA GTTGCACGGT GAATTGGCGC TATGTCTGGG 60

GACAGCAGCG GCCGCGGGCC AGAGGGCCGG GGCCGGGGCC GCGACCCGCA TCGGGATCGC 120

ACCCGCTCCC GCTCCCGCTC GCGGTCCCCT TTGTCGCCCA GGTCCCGCCG CGGCTCTGCG 180

CGGGAGCGCA GAGAGGCCCC AGAGCGCCCG AGCCTGGAGG ACACAGAGCC GTCGGATTCC 240

GGGGACGAGA TGATGGACCC GGCCAGCTTG GAGGCGGAGG CCGACCAAGG CCTGTGCCGC 300

CAGATCCGCC ATCAGTACCG GGCGCTCATC AACTCCGTCC AACGTAAGGC GGCGCCTCCG 360

GGCGGCGCGG GCCCGGACGG GCCGCTGTCC CCGCCCTGCG CCGGGCGCGG GGGGAGGGCA 420

CCGGAGGCAG GTGCCGGGCG GAGGCCCGGC GCGGCGTTAG TAGAGACGCG CCGGGTGCCA 480

GCCCCTCGCC GCACCTTAAA TTGTTGACAA AGTGCTCCCA CTTTGTGGCT GGAGCCGTAC 540

GACCTTGGCG CGGGTCCCCG AGTGGCGGGC TGGAAAAGCT GGAGGCCAGA GCCGTTCGCG 600

GACTCGCCCG AGCCCAGCCA GCCAGTGGGG AGAGGCAGGA CGCGGACTCC GCGTGCTTTG 660

ATTGCGCCCG GCAGTCCTCG GCGTGGGCTC CCGGCCTCGC AGCGGCACGC TGAGCTGCAG 720

CGGCACGCGA GAGCTGTCAA ATGCACGTTC TCGGACCCCA CCCGGACCCG CGGAATTCGA 780

ATCTCTGGGT GGGTCCGCGC AACTGTGGAG TGGCCCTCCA GGTGATGGTG TGTATTGCTT 840

GCAAAGTTTG AGAACCACTC AGTTATGGAG CACTCAGAGG CTGCAGCCGG AGTCCAGCCC 900

TTTGGGTTAA GGTTAGAGGG AGCTAGGGTT TCCTTTTAAA ATTCATGCTG CATAAAGGGT 960

AGGGTGGCCT TTCTCCTTTT CCGGGTCATT TTGGTTAAAA AGATAAAGAT GTTCGAAGTA 1020

ATTACTCAGA GCGCAGGGGC CGGGGCTTGG CTTTACTGTT GCAGGTGATA ACCTTGTCAA 1080

CTGCTTATTA GTGAATGCTG AACAAATTTC CCAAAGTTTG TATTTTTAAA AATAGAAAAC 1140

CGTGAGACAT ACTGAATGCC GGTGACAAAT TAACAGAGGT CCTTGAAGAG GCTAACACTC 1200

TGTTTAATGA AGTGTCCCGA GCAAGAGAAG CAGTCCTGGA TGCCCACTTT CTTGTTTTGG 1260

CTTCAGATTT GGGCAAAGAG AAAGCAAAGC AGCTGCGCTC AGACCTGAGC TCCTTTGACA 1320

TGTTAAGATA TGTTGAAACT CTACTCACAC ATATGGGTGT AAATCCGCTA GAAGCTGAAG 1380

AACTCATCCG TGATGAAGAT AGTCCTGATT TTGAATTCAT AGTCTATGAC TCCTGGAAGA 1440

TAACAGGCAG AACAGCAGAA AACACCTTTA ATAAAACCCA TACATTCCAC TTTCTGTTGG 1500

GTTCAATATA CGGAGAGTGC CCTGTGCCAA AGCCACGAGT TGATCGTCCA AGAAAAGTTC 1560

CTGTGATACA AGAGGAGAGG GCAATGCCTG CCCAGTTAAG AAGAATGGAA GAATCTCATC 1620

AAGAAGCAAC AGAGAAAGAA GTAGAAAGAA TCTTGGGATT GTTGCAGACA TATTTTCGAG 1680

AAGATCGAGA CAGTCTCACT CTTTCGCCCA GACTGGAATG CAGTGGCACC ATCTCAACTC 1740

ACTGCAACCT CCACCTCCTG GATTCAAGCA ATTCTCCTGC CTCAGCCTCC TGAGTAGCTG 1800

GGATTACAGG CGCACGCGCC ACCACATCTG GCTAATTTTT TTTCTGTATT TTTAGTAGAG 1860

ACATTGTTTC GCCATGTTGG CCAAGCTAGT CTTGAACCCC TGACCTCAGG TGATCTGCCA 1920

GCATCGGCCT CCCAAAGTGC TGGGATTACA GGTCTGATAC CCCAATGTCC TTCTTTGACT 1980

TTGTGGTTGA TCCTCATTCT TTCCCCCGTA CAGTGGAAAA CATCTTTCAT GTTTCCTTCA 2040

TTATACGGGA TGGTTTTGCA AGAATAAGAC TTGACCAAGA CCGACTGCCA GTAATAGAGC 2100

CTGTTAGTAT TAATGAAGAA AATGAGGGAT TTGAACATAA CACACAAGTT AGAAATCAAG 2160

GAATTATAGC TTTGAGTTAC CGTGACTGGG AGGAGATTGT GAAGACCTTT GAGATTTCAG 2220

AGCCTGTGAT TACTCCAAGT CAGAGGCAGC AGAAGCCAAG TGCTTGATGC TAGCTGAAGG 2280

ACTCAAATGG ATAGTGAAGT CCAAAACGGA AAGCGGCATG TATTGTACAT ATTGTATGAT 2340

TCAACATTTT TAAAGGCAGA TTGTTTTTAG TAAAATGTAG CTTTTGATAG TTAAAAAAAA 2400

AAAAAAAAAA AAAAAAA 2417

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：20)长度：157个氨基酸

1 MLRYVETLLT HMGVNPLEAE ELIRDEDSPD FEFIVYDSWK ITGRTAENTF NKTHTFHFLL

61 GSIYGECPVP KPRVDRPRKV PVIQEERAMP AQLRRMEESH QEATEKEVER ILGLLQTYFR

121 EDRDSLTLSP RLECSGTIST HCNLHLLDSS NSPASAS

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：21)

克隆号：PP4762

起始编码子：1320 ATG 终止编码子：1793 TGA

蛋白质分子量：18060

1 GT TTC TGG CGC GAA CTT CCG CCG TTC CGA AGT TGC ACG GTG AAT TGG 47

48 CGC TAT GTC TGG GGA CAG CAG CGG CCG CGG GCC AGA GGG CCG GGG CCG 95

96 GGG CCG CGA CCC GCA TCG GGA TCG CAC CCG CTC CCG CTC CCG CTC GCG 143

144 GTC CCC TTT GTC GCC CAG GTC CCG CCG CGG CTC TGC GCG GGA GCG CAG 191

192 AGA GGC CCC AGA GCG CCC GAG CCT GGA GGA CAC AGA GCC GTC GGA TTC 239

240 CGG GGA CGA GAT GAT GGA CCC GGC CAG CTT GGA GGC GGA GGC CGA CCA 287

288 AGG CCT GTG CCG CCA GAT CCG CCA TCA GTA CCG GGC GCT CAT CAA CTC 335

336 CGT CCA ACG TAA GGC GGC GCC TCC GGG CGG CGC GGG CCC GGA CGG GCC 383

384 GCT GTC CCC GCC CTG CGC CGG GCG CGG GGG GAG GGC ACC GGA GGC AGG 431

432 TGC CGG GCG GAG GCC CGG CGC GGC GTT AGT AGA GAC GCG CCG GGT GCC 479

480 AGC CCC TCG CCG CAC CTT AAA TTG TTG ACA AAG TGC TCC CAC TTT GTG 527

528 GCT GGA GCC GTA CGA CCT TGG CGC GGG TCC CCG AGT GGC GGG CTG GAA 575

576 AAG CTG GAG GCC AGA GCC GTT CGC GGA CTC GCC CGA GCC CAG CCA GCC 623

624 AGT GGG GAG AGG CAG GAC GCG GAC TCC GCG TGC TTT GAT TGC GCC CGG 671

672 CAG TCC TCG GCG TGG GCT CCC GGC CTC GCA GCG GCA CGC TGA GCT GCA 719

720 GCG GCA CGC GAG AGC TGT CAA ATG CAC GTT CTC GGA CCC CAC CCG GAC 767

768 CCG CGG AAT TCG AAT CTC TGG GTG GGT CCG CGC AAC TGT GGA GTG GCC 815

816 CTC CAG GTG ATG GTG TGT ATT GCT TGC AAA GTT TGA GAA CCA CTC AGT 863

864 TAT GGA GCA CTC AGA GGC TGC AGC CGG AGT CCA GCC CTT TGG GTT AAG 911

912 GTT AGA GGG AGC TAG GGT TTC CTT TTA AAA TTC ATG CTG CAT AAA GGG 959

960 TAG GGT GGC CTT TCT CCT TTT CCG GGT CAT TTT GGT TAA AAA GAT AAA 1007

1008 GAT GTT CGA AGT AAT TAC TCA GAG CGC AGG GGC CGG GGC TTG GCT TTA 1055

1056 CTG TTG CAG GTG ATA ACC TTG TCA ACT GCT TAT TAG TGA ATG CTG AAC 1103

1104 AAA TTT CCC AAA GTT TGT ATT TTT AAA AAT AGA AAA CCG TGA GAC ATA 1151

1152 CTG AAT GCC GGT GAC AAA TTA ACA GAG GTC CTT GAA GAG GCT AAC ACT 1199

1200 CTG TTT AAT GAA GTG TCC CGA GCA AGA GAA GCA GTC CTG GAT GCC CAC 1247

1248 TTT CTT GTT TTG GCT TCA GAT TTG GGC AAA GAG AAA GCA AAG CAG CTG 1295

1296 CGC TCA GAC CTG AGC TCC TTT GAC ATG TTA AGA TAT GTT GAA ACT CTA 1343

1 Met Leu Arg Tyr Val Glu Thr Leu 8

1344 CTC ACA CAT ATG GGT GTA AAT CCG CTA GAA GCT GAA GAA CTC ATC CGT 1391

9 Leu Thr His Met Gly Val Asn Pro Leu Glu Ala Glu Glu Leu Ile Arg 24

1392 GAT GAA GAT AGT CCT GAT TTT GAA TTC ATA GTC TAT GAC TCC TGG AAG 1439

25 Asp Glu Asp Ser Pro Asp Phe Glu Phe Ile Val Tyr Asp Ser Trp Lys 40

1440 ATA ACA GGC AGA ACA GCA GAA AAC ACC TTT AAT AAA ACC CAT ACA TTC 1487

41 Ile Thr Gly Arg Thr Ala Glu Asn Thr Phe Asn Lys Thr His Thr Phe 56

1488 CAC TTT CTG TTG GGT TCA ATA TAC GGA GAG TGC CCT GTG CCA AAG CCA 1535

57 His Phe Leu Leu Gly Ser Ile Tyr Gly Glu Cys Pro Val Pro Lys Pro 72

1536 CGA GTT GAT CGT CCA AGA AAA GTT CCT GTG ATA CAA GAG GAG AGG GCA 1583

73 Arg Val Asp Arg Pro Arg Lys Val Pro Val Ile Gln Glu Glu Arg Ala 88

1584 ATG CCT GCC CAG TTA AGA AGA ATG GAA GAA TCT CAT CAA GAA GCA ACA 1631

89 Met Pro Ala Gln Leu Arg Arg Met Glu Glu Ser His Gln Glu Ala Thr 104

1632 GAG AAA GAA GTA GAA AGA ATC TTG GGA TTG TTG CAG ACA TAT TTT CGA 1679

105 Glu Lys Glu Val Glu Arg Ile Leu Gly Leu Leu Gln Thr Tyr Phe Arg 120

1680 GAA GAT CGA GAC AGT CTC ACT CTT TCG CCC AGA CTG GAA TGC AGT GGC 1727

121 Glu Asp Arg Asp Ser Leu Thr Leu Ser Pro Arg Leu Glu Cys Ser Gly 136

1728 ACC ATC TCA ACT CAC TGC AAC CTC CAC CTC CTG GAT TCA AGC AAT TCT 1775

137 Thr Ile Ser Thr His Cys Asn Leu His Leu Leu Asp Ser Ser Asn Ser 152

1776 CCT GCC TCA GCC TCC TGA GTA GCT GGG ATT ACA GGC GCA CGC GCC ACC 1823

153 Pro Ala Ser Ala Ser *** 158

1824 ACA TCT GGC TAA TTT TTT TTC TGT ATT TTT AGT AGA GAC ATT GTT TCG 1871

1872 CCA TGT TGG CCA AGC TAG TCT TGA ACC CCT GAC CTC AGG TGA TCT GCC 1919

1920 AGC ATC GGC CTC CCA AAG TGC TGG GAT TAC AGG TCT GAT ACC CCA ATG 1967

1968 TCC TTC TTT GAC TTT GTG GTT GAT CCT CAT TCT TTC CCC CGT ACA GTG 2015

2016 GAA AAC ATC TTT CAT GTT TCC TTC ATT ATA CGG GAT GGT TTT GCA AGA 2063

2064 ATA AGA CTT GAC CAA GAC CGA CTG CCA GTA ATA GAG CCT GTT AGT ATT 2111

2112 AAT GAA GAA AAT GAG GGA TTT GAA CAT AAC ACA CAA GTT AGA AAT CAA 2159

2160 GGA ATT ATA GCT TTG AGT TAC CGT GAC TGG GAG GAG ATT GTG AAG ACC 2207

2208 TTT GAG ATT TCA GAG CCT GTG ATT ACT CCA AGT CAG AGG CAG CAG AAG 2255

2256 CCA AGT GCT TGA TGC TAG CTG AAG GAC TCA AAT GGA TAG TGA AGT CCA 2303

2304 AAA CGG AAA GCG GCA TGT ATT GTA CAT ATT GTA TGA TTC AAC ATT TTT 2351

2352 AAA GGC AGA TTG TTT TTA GTA AAA TGT AGC TTT TGA TAG TTA AAA AAA 2399

2400 AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2417

8.PP5242蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：22)长度：1685bp

GCACCGCGGA GGACAGGGGC AGCTGGCGGG CAGCGGGTGA GGGGGTGGCG GGGACGCGAG 60

TGGCGGCCGC GGGGCCCCGG ACAAGGGTCC GCAGAGCTGC AGCCTTCGAG GGCCAGCCCT 120

CTCCGAGTCC GGGGCTGGGT CCCACCAGTG ACAAGGCGGC AGCCCCGCGC ACACCAAAGA 180

GAAGGCGGCT GTGGCGGCAG CGGCAGCCCC AGCCATGCTG TGTTATGTGA CGAGGCCGGA 240

CGCGGTGCTG ATGGAGGTGG AGGTGGAGGC GAAAGCCAAC GGCGAGGACT GCCTCAACCA 300

GGTGTGCAGG CGACTGGGAA TCATAGAAGT TGACTATTTT GGACTGCAGT TTACGGGTAG 360

CAAAGGTGAA AGTTTATGGC TAAACCTGAG AAACCGGATC TCCCAGCAGA TGGATGGGCT 420

AGCCCCTTAC AGGCTTAAAC TTAGAGTCAA GTTCTTCGTG GAGCCTCATC TCATCTTACA 480

GGAGCAGACT AGGCATATCT TTTTCTTGCA CATCAAGGAG GCCCTCTTGG CAGGCCACCT 540

CTTGTGTTCC CCAGAGCAGG CAGTGGAACT CAGTGCCCTC CTGGCCCAGA CCAAGTTTGG 600

AGACTACAAC CAGAACACTG CCAAGTATAA CTATGAGGAG CTCTGTGCCA AGGAGCTCTC 660

CTCTGCCACC TTGAACAGCA TTGTTGCAAA ACATAAGGAG TTGGAGGGGA CCAGCCAGGC 720

TTCAGCTGAA TACCAAGTTT TGCAGATTGT GTCGGCAATG GAAAACTATG GCATAGAATG 780

GCATTCTGTG CGGGATAGCG AAGGGCAGAA ACTGCTCATT GGGGTTGGAC CTGAAGGAAT 840

CTCAATTTGT AAAGATGACT TTAGCCCAAT TAATAGGATA GCTTATCCTG TGGTGCAGAT 900

GGCCACCCAG TCAGGAAAGA ATGTATATTT GACGGTCACC AAGGAATCTG GGAACAGCAT 960

CGTGCTCTTG TTTAAAATGA TCAGCACCAG GGCGGCCAGC GGGCTCTACC GAGCGATAAC 1020

AGAGACGCAC GCATTCTACA GGTGTGACAC AGTGACCAGC GCCGTGATGA TGCAGTATAG 1080

CCGTGACTTG AAGGGCCACT TGGCATCTCT GTTTCTGAAT GAAAACATTA ACCTTGGCAA 1140

GAAATATGTC TTTGATATTA AAAGAACATC AAAGGAGGTG TATGACCATG CCAGGAGGGC 1200

TCTGTACAAT GCTGGCGTTG TGGACCTCGT TTCAAGAAGC AACCAGAGCC CTTCACACTC 1260

GCCTCTGAAG TCCTCAGAAA GCAGCATGAA CTGCAGCAGC TGCGAGGGCC TCAGCTGCCA 1320

GCAGACCCGG GTGCTGCAGG AGAAGCTACG CAAGCTGAAG GAAGCCATGC TGTGCATGGT 1380

GTGCTGCGAG GAGGAGATCA ACTCCACCTT CTGTCCCTGT GGCCACACTG TGTGCTGTGA 1440

GAGCTGCGCC GCCCAGCTAC AGTCATGTCC CGTCTGCAGG TCGCGTGTGG AGCATGTCCA 1500

GCACGTCTAT CTGCCAACGC ACACCAGTCT TCTCAATCTG ACTGTAATCT AATCTGTTGT 1560

GCTTTTGTTG GACTTGGCAT GTTTCCATGA ACTGCACTAT TATAAACTAT TAAAATGATA 1620

GATTGTGGAG AAAGTAATTA TTCCAACACC CATCTGCCAT GCGATGTTAA AAAAAAAAAA 1680

AAAAA 1685

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：23)长度：445个氨基酸

1 MLCYVTRPDA VLMEVEVEAK ANGEDCLNQV CRRLGIIEVD YFGLQFTGSK GESLWLNLRN

61 RISQQMDGLA PYRLKLRVKF FVEPHLILQE QTRHIFFLHI KEALLAGHLL CSPEQAVELS

121 ALLAQTKFGD YNQNTAKYNY EELCAKELSS ATLNSIVAKH KELEGTSQAS AEYQVLQIVS

181 AMENYGIEWH SVRDSEGQKL LIGVGPEGIS ICKDDFSPIN RIAYPVVQMA TQSGKNVYLT

241 VTKESGNSIV LLFKMISTRA ASGLYRAITE THAFYRCDTV TSAVMMQYSR DLKGHLASLF

301 LNENINLGKK YVFDIKRTSK EVYDHARRAL YNAGVVDLVS RSNQSPSHSP LKSSESSMNC

361 SSCEGLSCQQ TRVLQEKLRK LKEAMLCMVC CEEEINSTFC PCGHTVCCES CAAQLQSCPV

421 CRSRVEHVQH VYLPTHTSLL NLTVI

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：24)

克隆号：PP5242

起始编码子：215 ATG 终止编码子：1552 TAA

蛋白质分子量：49881

1 G CAC CGC GGA GGA CAG GGG CAG CTG GCG GGC AGC GGG TGA GGG GGT 46

47 GGC GGG GAC GCG AGT GGC GGC CGC GGG GCC CCG GAC AAG GGT CCG CAG 94

95 AGC TGC AGC CTT CGA GGG CCA GCC CTC TCC GAG TCC GGG GCT GGG TCC 142

143 CAC CAG TGA CAA GGC GGC AGC CCC GCG CAC ACC AAA GAG AAG GCG GCT 190

191 GTG GCG GCA GCG GCA GCC CCA GCC ATG CTG TGT TAT GTG ACG AGG CCG 238

1 Met Leu Cys Tyr Val Thr Arg Pro 8

239 GAC GCG GTG CTG ATG GAG GTG GAG GTG GAG GCG AAA GCC AAC GGC GAG 286

9 Asp Ala Val Leu Met Glu Val Glu Val Glu Ala Lys Ala Asn Gly Glu 24

287 GAC TGC CTC AAC CAG GTG TGC AGG CGA CTG GGA ATC ATA GAA GTT GAC 334

25 Asp Cys Leu Asn Gln Val Cys Arg Arg Leu Gly Ile Ile Glu Val Asp 40

335 TAT TTT GGA CTG CAG TTT ACG GGT AGC AAA GGT GAA AGT TTA TGG CTA 382

41 Tyr Phe Gly Leu Gln Phe Thr Gly Ser Lys Gly Glu Ser Leu Trp Leu 56

383 AAC CTG AGA AAC CGG ATC TCC CAG CAG ATG GAT GGG CTA GCC CCT TAC 430

57 Asn Leu Arg Asn Arg Ile Ser Gln Gln Met Asp Gly Leu Ala Pro Tyr 72

431 AGG CTT AAA CTT AGA GTC AAG TTC TTC GTG GAG CCT CAT CTC ATC TTA 478

73 Arg Leu Lys Leu Arg Val Lys Phe Phe Val Glu Pro His Leu Ile Leu 88

479 CAG GAG CAG ACT AGG CAT ATC TTT TTC TTG CAC ATC AAG GAG GCC CTC 526

89 Gln Glu Gln Thr Arg His Ile Phe Phe Leu His Ile Lys Glu Ala Leu 104

527 TTG GCA GGC CAC CTC TTG TGT TCC CCA GAG CAG GCA GTG GAA CTC AGT 574

105 Leu Ala Gly His Leu Leu Cys Ser Pro Glu Gln Ala Val Glu Leu Ser 120

575 GCC CTC CTG GCC CAG ACC AAG TTT GGA GAC TAC AAC CAG AAC ACT GCC 622

121 Ala Leu Leu Ala Gln Thr Lys Phe Gly Asp Tyr Asn Gln Asn Thr Ala 136

623 AAG TAT AAC TAT GAG GAG CTC TGT GCC AAG GAG CTC TCC TCT GCC ACC 670

137 Lys Tyr Asn Tyr Glu Glu Leu Cys Ala Lys Glu Leu Ser Ser Ala Thr 152

671 TTG AAC AGC ATT GTT GCA AAA CAT AAG GAG TTG GAG GGG ACC AGC CAG 718

153 Leu Asn Ser Ile Val Ala Lys His Lys Glu Leu Glu Gly Thr Ser Gln 168

719 GCT TCA GCT GAA TAC CAA GTT TTG CAG ATT GTG TCG GCA ATG GAA AAC 766

169 Ala Ser Ala Glu Tyr Gln Val Leu Gln Ile Val Ser Ala Met Glu Asn 184

767 TAT GGC ATA GAA TGG CAT TCT GTG CGG GAT AGC GAA GGG CAG AAA CTG 814

185 Tyr Gly Ile Glu Trp His Ser Val Arg Asp Ser Glu Gly Gln Lys Leu 200

815 CTC ATT GGG GTT GGA CCT GAA GGA ATC TCA ATT TGT AAA GAT GAC TTT 862

201 Leu Ile Gly Val Gly Pro Glu Gly Ile Ser Ile Cys Lys Asp Asp Phe 216

863 AGC CCA ATT AAT AGG ATA GCT TAT CCT GTG GTG CAG ATG GCC ACC CAG 910

217 Ser Pro Ile Asn Arg Ile Ala Tyr Pro Val Val Gln Met Ala Thr Gln 232

911 TCA GGA AAG AAT GTA TAT TTG ACG GTC ACC AAG GAA TCT GGG AAC AGC 958

233 Ser Gly Lys Asn Val Tyr Leu Thr Val Thr Lys Glu Ser Gly Asn Ser 248

959 ATC GTG CTC TTG TTT AAA ATG ATC AGC ACC AGG GCG GCC AGC GGG CTC 1006

249 Ile Val Leu Leu Phe Lys Met Ile Ser Thr Arg Ala Ala Ser Gly Leu 264

1007 TAC CGA GCG ATA ACA GAG ACG CAC GCA TTC TAC AGG TGT GAC ACA GTG 1054

265 Tyr Arg Ala Ile Thr Glu Thr His Ala Phe Tyr Arg Cys Asp Thr Val 280

1055 ACC AGC GCC GTG ATG ATG CAG TAT AGC CGT GAC TTG AAG GGC CAC TTG 1102

281 Thr Ser Ala Val Met Met Gln Tyr Ser Arg Asp Leu Lys Gly His Leu 296

1103 GCA TCT CTG TTT CTG AAT GAA AAC ATT AAC CTT GGC AAG AAA TAT GTC 1150

297 Ala Ser Leu Phe Leu Asn Glu Asn Ile Asn Leu Gly Lys Lys Tyr Val 312

1151 TTT GAT ATT AAA AGA ACA TCA AAG GAG GTG TAT GAC CAT GCC AGG AGG 1198

313 Phe Asp Ile Lys Arg Thr Ser Lys Glu Val Tyr Asp His Ala Arg Arg 328

1199 GCT CTG TAC AAT GCT GGC GTT GTG GAC CTC GTT TCA AGA AGC AAC CAG 1246

329 Ala Leu Tyr Asn Ala Gly Val Val Asp Leu Val Ser Arg Ser Asn Gln 344

1247 AGC CCT TCA CAC TCG CCT CTG AAG TCC TCA GAA AGC AGC ATG AAC TGC 1294

345 Ser Pro Ser His Ser Pro Leu Lys Ser Ser Glu Ser Ser Met Asn Cys 360

1295 AGC AGC TGC GAG GGC CTC AGC TGC CAG CAG ACC CGG GTG CTG CAG GAG 1342

361 Ser Ser Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gln Gln Thr Arg Val Leu Gln Glu 376

1343 AAG CTA CGC AAG CTG AAG GAA GCC ATG CTG TGC ATG GTG TGC TGC GAG 1390

377 Lys Leu Arg Lys Leu Lys Glu Ala Met Leu Cys Met Val Cys Cys Glu 392

1391 GAG GAG ATC AAC TCC ACC TTC TGT CCC TGT GGC CAC ACT GTG TGC TGT 1438

393 Glu Glu Ile Asn Ser Thr Phe Cys Pro Cys Gly His Thr Val Cys Cys 408

1439 GAG AGC TGC GCC GCC CAG CTA CAG TCA TGT CCC GTC TGC AGG TCG CGT 1486

409 Glu Ser Cys Ala Ala Gln Leu Gln Ser Cys Pro Val Cys Arg Ser Arg 424

1487 GTG GAG CAT GTC CAG CAC GTC TAT CTG CCA ACG CAC ACC AGT CTT CTC 1534

425 Val Glu His Val Gln His Val Tyr Leu Pro Thr His Thr Ser Leu Leu 440

1535 AAT CTG ACT GTA ATC TAA TCT GTT GTG CTT TTG TTG GAC TTG GCA TGT 1582

441 Asn Leu Thr Val Ile *** 446

1583 TTC CAT GAA CTG CAC TAT TAT AAA CTA TTA AAA TGA TAG ATT GTG GAG 1630

1631 AAA GTA ATT ATT CCA ACA CCC ATC TGC CAT GCG ATG TTA AAA AAA AAA 1678

1679 AAA AAA A 1685

D.Blastp结果

Query＝PP5242蛋白(445个氨基酸)

>SP_IN：Q24440 Q24440 drosophila melanogaster(fruit fly).(cdnal)

protein 4.1 homologue(coracle).11/1999

长度＝1698个氨基酸

分值＝125bits(312)，预计值＝4e-28

相同性＝82/284(28％)，相似性＝138/284(47％)，缺口＝8/284(2％)

Query：2 LCYVTRPDAVLMEVEVEAKANGEDCLNQVCRRLGIIEVDYFGLQFTGSKGESLWLNLRNR 61

L VT D L++V ++ KA G D +N +C L +IE DYFGL + WL+L

Sbjct：33 LARVTLLDGSLLDVSIDRKAIGRDVINSICAGLNLIEKDYFGLTYETPTDPRTWLDLEKP 92

Query：62 ISQQMDGLAPYRLKLRVKFF-VEPHLILQEQTRHIFFLHIKEALLAGHLLCSPEQAVELS 120

+S + + L VKF+ EP + ++ TR+ L ++ +L G L C+ L

Sbjct：93 VS-KFFRTDTWPLTFAVKFYPPEPSQLKEDITRYHLCLQVRNDILEGRLPCTFVTHALLG 151

Query：121 ALLAQTKFGDYNQN---TAKYNYEELCAKELSSATLNSIVAKHKELEGTSQASAEYQVLQ 177

+ L Q++ GDY+ T Y+ A ++ + ++ HK +G S A AE L+

Sbjct：152 SYLVQSEMGDYDAEEMPTRAYLKDFKIAPNQTAELEDKVMDLHKTHKGQSPAEAELHYLE 211

Query：178 IVSAMENYGIEWHSVRDSEGQKLLIGVGPEGISICKDDFSPINRIAYPVVQMATQSGKNV 237

+ YG++ H +DSEG +++GV G+ + +D INR A+P + + +

Sbjct：212 NAKKLAMYGVDLHPAKDSEGVDIMLGVCASGLLVYRDKLR-INRFAWPKILKISYKRHHF 270

Query：238 YLTVTKESGNS I--VLLFKMISTRAASGLYRAITETHAFYRCDT 279

Y+ + + FK+ + RAA L+++ E H F+R T

Sbjct：271 YIKIRPGEFEQYESTIGFKLANHRAAKKLWKSCVEHHTFFRLMT 314

9.PP5656蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：25)长度：1373bp

TTCCGCAATT TCTACCTGAC CTTCCTGGAG TACGATGGGA ACCTGCTGCG GAGAGAGCTC 60

TTTGTGTGCC CCAGCCAGCC CCCACCTGGT GCTGAGCAGT TGCAGCAGGC CCTGGCACAA 120

CTGGACGAGG AAGACCCCTG CTTTGAGTTC CGGCAGCAGC AGCTCACTGT GCACCGTGTG 180

CATGTCACTT TCCTGCCCCA TGAACCGCCA CCCCCCCGGC CTCACGATGT CACCCTTGTG 240

GCCCAGCTGT CCATGGACCG GCTGCAGATG TTGGAAGCCC TGTGCAGGCA CTGGCCTGGC 300

CCCATGAGCC TGGCCTTGTA CCTGACAGAC GCAGAAGCTC AGCAGTTCCT GATTTCGGTC 360

GAGGCCTCAC CAGTGCTTGC TGCCCGGCAG GACGTGGCCT ACCATGTGGT GTACCGTGAG 420

GGCCCCTATA CCCCGTCAAC CAGCTTCGCA ACGTGGCCTT GGCCAGGCCC TCACGCCTTA 480

CGTCTTCCTC AGTGACATTG ACTTCCTGCC TGCCTATTCT CTCTACGACT ACCTCAGGGC 540

CTCCATTGAG CAGCTGGGGC TGGGCAGCCG GCGCAAGGCA GCACTGGTGG TGCCGGCATT 600

CGAGACCCTG CGCTACCGCT TCAGCTTCCC CCATTCCAAG GTGGAGCTGT TGGCCTTGCT 660

GGATGCGGGC ACTCTCTACA CCTTCAGGTA CCACGAGTGG CCCCGAGGCC ACGCACCCAC 720

AGACTATGCC CGCTGGCGGG AGGCTCAGGC CCCGTACCGT GTGCAATGGG CGGCCAACTA 780

TGAACCCTAC GTGGTGGTGC CACGAGACTG TCCCCGCTAT GATCCTCGCT TTGTGGGCTT 840

CCGCTGGAAC AAAGTGGCCC ACATTGTGGA GCTGGATGCC CAGGAATATG AGCTCCTGGT 900

GCTGCCCGAG GCCTTCACCA TCCATCTGCC CCACGCTCCA AGCCTGGACA TCTCCGCTTC 960

CGCTCCAGCC CCACCTATCG TGACTGCCTC CAGGCCCTCA AGGACGAATT CCACCAGGAC 1020

TTGTCCCGCC ACCATGGGGC TGCTGCCCTC AAATACCTCC CAGCCCTGCA GCAGCCCCAG 1080

AGCCCTGCCC GAGGCTGAGG CTGGGCCGGC GCTGCCCCTC ATCTTAGCAT TGGGCAGACA 1140

CCAGGGCAAC CTGCCCTCCG CCATCCCTGC TATTTAAATT ATTTAAGGTC TCTGGGAAGG 1200

GCTGGGGCAG AGCATCTGTG GGGTGGGGTC TTCCCCTTGC TGCTATTGTA TGGCTGGGGA 1260

CTGGTCTCTC TCTGCCCCAG CCAGTTTGGG GCTGGTTCCC CCATCTTGAA TTGTTTATCC 1320

CTTTTTCATA ATTAAAGTTT TAAAACATAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAA 1373

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：26)长度：257个氨基酸

1 MWCTVRAPIP RQPASQRGLG QALTPYVFLS DIDFLPAYSL YDYLRASIEQ LGLGSRRKAA

61 LVVPAFETLR YRFSFPHSKV ELLALLDAGT LYTFRYHEWP RGHAPTDYAR WREAQAPYRV

121 QWAANYEPYV VVPRDCPRYD PRFVGFGWNK VAHIVELDAQ EYELLVLPEA FTIHLPHAPS

181 LDISASAPAP PIVTASRPSR TNSTRTCPAT MGLLPSNTSQ PCSSPRALPE AEAGPALPLI

241 LALGRHQGNL PSAIPAI

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：27)

克隆号：PP5656

起始编码子：404 ATG 终止编码子：1177 TAA

蛋白质分子量：28557

1 T TCC GCA ATT TCT ACC TGA CCT TCC TGG AGT ACG ATG GGA ACC TGC 46

47 TGC GGA GAG AGC TCT TTG TGT GCC CCA GCC AGC CCC CAC CTG GTG CTG 94

95 AGC AGT TGC AGC AGG CCC TGG CAC AAC TGG ACG AGG AAG ACC CCT GCT 142

143 TTG AGT TCC GGC AGC AGC AGC TCA CTG TGC ACC GTG TGC ATG TCA CTT 190

191 TCC TGC CCC ATG AAC CGC CAC CCC CCC GGC CTC ACG ATG TCA CCC TTG 238

239 TGG CCC AGC TGT CCA TGG ACC GGC TGC AGA TGT TGG AAG CCC TGT GCA 286

287 GGC ACT GGC CTG GCC CCA TGA GCC TGG CCT TGT ACC TGA CAG ACG CAG 334

335 AAG CTC AGC AGT TCC TGA TTT CGG TCG AGG CCT CAC CAG TGC TTG CTG 382

383 CCC GGC AGG ACG TGG CCT ACC ATG TGG TGT ACC GTG AGG GCC CCT ATA 430

1 Met Trp Cys Thr Val Arg Ala Pro Ile 9

431 CCC CGT CAA CCA GCT TCG CAA CGT GGC CTT GGC CAG GCC GTC ACG CCT 478

10 Pro Arg Gln Pro Ala Ser Gln Arg Gly Leu Gly Gln Ala Leu Thr Pro 25

479 TAC GTC TTC CTC AGT GAC ATT GAC TTC CTG CCT GCC TAT TCT CTC TAC 526

26 Tyr Val Phe Leu Ser Asp Ile Asp Phe Leu Pro Ala Tyr Ser Leu Tyr 41

527 GAC TAC CTC AGG GCC TCC ATT GAG CAG CTG GGG CTG GGC AGC CGG CGC 574

42 Asp Tyr Leu Arg Ala Ser Ile Glu Gln Leu Gly Leu Gly Ser Arg Arg 57

575 AAG GCA GCA CTG GTG GTG CCG GCA TTC GAG ACC CTG CGC TAC CGC TTC 622

58 Lys Ala Ala Leu Val Val Pro Ala Phe Glu Thr Leu Arg Tyr Arg Phe 73

623 AGC TTC CCC CAT TCC AAG GTG GAG CTG TTG GCC TTG CTG GAT GCG GGC 670

74 Ser Phe Pro His Ser Lys Val Glu Leu Leu Ala Leu Leu Asp Ala Gly 89

671 ACT CTC TAC ACC TTC AGG TAC CAC GAG TGG CCC CGA GGC CAC GCA CCC 718

90 Thr Leu Tyr Thr Phe Arg Tyr His Glu Trp Pro Arg Gly His Ala Pro 105

719 ACA GAC TAT GCC CGC TGG CGG GAG GCT CAG GCC CCG TAC CGT GTG CAA 766

106 Thr Asp Tyr Ala Arg Trp Arg Glu Ala Gln Ala Pro Tyr Arg Val Gln 121

767 TGG GCG GCC AAC TAT GAA CCC TAC GTG GTG GTG CCA CGA GAC TGT CCC 814

122 Trp Ala Ala Asn Tyr Glu Pro Tyr Val Val Val Pro Arg Asp Cys Pro 137

815 CGC TAT GAT CCT CGC TTT GTG GGC TTC GGC TGG AAC AAA GTG GCC CAC 862

138 Arg Tyr Asp Pro Arg Phe Val Gly Phe Gly Trp Asn Lys Val Ala His 153

863 ATT GTG GAG CTG GAT GCC CAG GAA TAT GAG CTC CTG GTG CTG CCC GAG 910

154 Ile Val Glu Leu Asp Ala Gln Glu Tyr Glu Leu Leu Val Leu Pro Glu 169

911 GCC TTC ACC ATC CAT CTG CCC CAC GCT CCA AGC CTG GAC ATC TCC GCT 958

170 Ala Phe Thr Ile His Leu Pro His Ala Pro Ser Leu Asp Ile Ser AIa 185

959 TCC GCT CCA GCC CCA CCT ATC GTG ACT GCC TCC AGG CCC TCA AGG ACG 1006

186 Ser Ala Pro Ala Pro Pro Ile Val Thr Ala Ser Arg Pro Ser Arg Thr 201

1007 AAT TCC ACC AGG ACT TGT CCC GCC ACC ATG GGG CTG CTG CCC TCA AAT 1054

202 Asn Ser Thr Arg Thr Cys Pro Ala Thr Met Gly Leu Leu Pro Ser Asn 217

1055 ACC TCC CAG CCC TGC AGC AGC CCC AGA GCC CTG CCC GAG GCT GAG GCT 1102

218 Thr Ser Gln Pro Cys Ser Ser Pro Arg Ala Leu Pro Glu Ala Glu Ala 233

1103 GGG CCG GCG CTG CCC CTC ATC TTA GCA TTG GGC AGA CAC CAG GGC AAC 1150

234 Gly Pro Ala Leu Pro Leu Ile Leu Ala Leu Gly Arg His Gln Gly Asn 249

1151 CTG CCC TCC GCC ATC CCT GCT ATT TAA ATT ATT TAA GGT CTC TGG GAA 1198

250 Leu Pro Ser Ala Ile Pro Ala Ile *** 258

1199 GGG CTG GGG CAG AGC ATC TGT GGG GTG GGG TCT TCC CCT TGC TGC TAT 1246

1247 TGT ATG GCT GGG GAC TGG TCT CTC TCT GCC CCA GCC AGT TTG GGG CTG 1294

1295 GTT CCC CCA TCT TGA ATT GTT TAT CCC TTT TTC ATA ATT AAA GTT TTA 1342

1343 AAA CAT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 1373

D.Blastp结果

Query＝PP5656蛋白(257个氨基酸)

>SP_IN：Q21389 Q21389 caenorhabditis elegans.k09c8.4 protein.11/1999

长度＝622个氨基酸

分值＝104bits(256)，预计值＝8e-22

相同性＝65/166(39％)，相似性＝93/166(55％)，缺口＝17/166(10％)

Query：26 YVFLSDIDFLPAYSLYDYLRASIEQLGLGSRRKAALVVPAFET----LRYRFSFPHSKVE 81

Y+ ++D+DF+ L DY I+Q G ++K LV+PA E LR S S+ +

Sbjct：427 YILMTDVDFVV---LGDY-GTIIDQTG-NLKQKEVLVIPALEMTYPQLRLNLSNFLSRKD 481

Query：82 LLA--LLDAGTLYTFRYHEWPRGHAPTDYARWREAQAPY----RVQWAANYEPYVVVPRD 135

L+ LL+ T+ TFR WP H PT+ ++W ++ Y V + NYEPY V+ ++

Sbjct：482 LVIEHLLNK-TIQTFRETIWPSSHVPTNISKWIKSNRTYMVAQNVNYEKNYEPYFVIKKE 540

Query：136 -CPRYDPRFVGFGWNKVAHIVELDAQEYELLVLPEAFTIHLPHAPS 180

CP YD RF GFGWNKV H+++L Y+ LV P +F IH H S

Sbjct：541 ECPFYDQRFGGFGWNKVTHVMQLKMMNYKFLVSPTSFMIHQNHNAS 586

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种分离的具有抑癌功能的人多肽，其特征在于，它含有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26，且所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQID NO：26。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它选自下组：

(a)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：26。

5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组：

SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQID NO：18、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27的编码区序列或全长序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；

(b)从培养物中分离出多肽，所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人多肽特异性结合的抗体，其中所述的人多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

10.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。