CN1177864C

CN1177864C - 在肝癌组织中具有表达差异的新的人蛋白及其编码序列

Info

Publication number: CN1177864C
Application number: CNB001166166A
Authority: CN
Inventors: 顾健人; 杨胜利
Original assignee: Shanghai Cancer Institute
Current assignee: Shanghai Cancer Institute
Priority date: 2000-06-20
Filing date: 2000-06-20
Publication date: 2004-12-01
Anticipated expiration: 2020-06-20
Also published as: CN1329064A

Abstract

本发明公开了一类新的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于检测癌症如肝癌的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂。本发明还公开了编码这类新的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

在肝癌组织中具有表达差异的新的人蛋白及其编码序列

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

背景技术

人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗和检测。因此，本领域迫切需要开发研究在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一类新的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：30的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽的制备方法，该方法包括(a)在适合表达在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的针对本发明的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽的抗体以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有表达差异的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白或多肽”是指在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化在肝癌组织中具有表达差异的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP367蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：2的蛋白质，但与SEQ ID NO：3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP1597蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ IDNO：5的蛋白质，但与SEQ ID NO：6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他在肝癌组织中具有表达差异的蛋白，可依此类推。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ ID NO：2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。

编码在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。

上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。

可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。

在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

在第(4)种方法中，检测在肝癌组织中具有表达差异的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al. Science 1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或本发明蛋白的编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法，能用于构建含在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.Molecular Cloning，a LaboratoryManual，cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：用于肝癌的检测，和用于筛选针对在肝癌组织中具有表达差异的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。由于本发明的PP367，PP1597，PP1729，PP3476，PP3731，PP3856，PP3958，PP3971，PP4519，PP5241蛋白，在肝癌组织中的表达远高于其至正常肝组织中的表达，因此本发明蛋白可作为肝癌检测中待检测对象。以PP367蛋白为例，当用抗PP367的抗体检测样品时，如果发现PP367蛋白的表达量高于阴性对照(正常肝组织样品)，那么就表明受检测的样品中存在癌变。

本发明还提供了一种检测肝组织样品是否发生癌变的方法，它包括步骤：(1)用抗本发明蛋白(PP367，PP1597，PP1729，PP3476，PP3731，PP3856，PP3958，PP3971，PP4519，PP5241)的抗体与待检测样品接触，以形成抗原-抗体复合物；(2)检测该抗原-抗体复合物的存在与否，该复合物的存在表示该受检测的肝组织发生了癌变。将本发明方法与其他检测肝癌的方法相结合，可以更准确地检测肝癌。

本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的膜制剂与标记的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。

在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的拮抗剂可以与在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。

在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将在肝癌组织中具有表达差异的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响在肝癌组织中具有表达差异的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。

本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。

本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。

可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。

本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物如TNF等结合使用。

药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。针对本发明蛋白的拮抗剂以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的有效成分的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的表达异常所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白，以抑制内源性的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白活性。例如，一种变异的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗在肝癌组织中具有表达差异的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将在肝癌组织中具有表达差异的蛋白基因转移至细胞内。构建携带所需蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组的本发明蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。

本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。

本发明还提供了针对在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

抗在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白。

与在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的产生或活性。

抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白阳性的细胞(如肝癌细胞)。

多克隆抗体的生产可用在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler andMilstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.Pat No.4946778)也可用于生产抗在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白的单链抗体。

能与在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白水平，可以用作解释在肝癌组织中具有表达差异的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断诸如肝癌之类的疾病。

在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的多聚核苷酸可用于在肝癌组织中具有表达差异的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的多聚核苷酸可用于检测在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的表达与否或在疾病状态下在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的异常表达。如在肝癌组织中具有表达差异的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用在肝癌组织中具有表达差异的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测在肝癌组织中具有表达差异的蛋白的转录产物。

检测在肝癌组织中具有表达差异的蛋白基因的突变也可用于诊断在肝癌组织中具有表达差异的蛋白相关的疾病。在肝癌组织中具有表达差异的蛋白突变的形式包括与正常野生型在肝癌组织中具有表达差异的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。

简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。

将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes：a Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。

本发明的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

此外，由于本发明的在肝癌组织中具有表达差异的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

具体实施方式

实施例1：cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用

PP367，PP1597，PP1729，PP3476，PP3731，PP3856，PP3958，PP3971，PP4519，PP5241是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL10-Gold感受细胞，获得了1×10⁶cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。

实施例2：原位杂交表达差异的筛选

一、杂交探针的制备

原位杂交DNA处理

DNA 10μl

10×Buf 2μl

BamH I 1μl

H₂O 7μl

→37℃2小时

→加1 lvol酚/氯仿＝1∶1

→Vortex，离心13,000rpm×5分钟

→取上清，加2μl 3M NaAC

加40μl无水乙醇

→-20℃0/N

→取出离心13,000rpm×10分钟

→取沉淀+100μl 70％酒精

→离心13,000rpm×5分钟

→取沉淀，加10μl DEPC，H₂O溶解

→取1μl电泳定量

*所有实验材料及试剂用0.1％DEPC H₂O处理

用已酶切为线性的质粒DNA为模板，在T₇RNA聚合酶的催化下，用ATP、CTP、GTP地戈辛标记的UTP体外转录，制备地戈辛标记的mRNA探针：

→2μl线性质粒DNA

→2μl DIG RNA标记混合物

(10mM ATP、CTP、GTP，6.5mMUTP，3.5mM DIGUTP)

购自Boehringer公司

→2μl 10×转录缓冲液

→2μl T₇ RNA聚合酶(购自Boehriger公司)

→1μl RNase抑制剂(购自Boehriger公司)

加DEPC H₂O至总体积20μl

混匀，稍离心一下，37℃反应2小时，取出后加2μl 0.2M EDTA终止反应，取1μl电泳鉴定，于-70℃保存备用。

二、切片制备

1.清洁载玻片，硫酸洗涤液浸泡，蒸馏水洗，180℃干烤3h.；

2.2％APES(丙酮)浸泡40sec，丙酮洗10sec，过DEPC水，晾干；硅化

3.新鲜组织(正常肝，肝癌及癌旁配对组织各2例)，OCT包埋，液氮速冻，-70℃保存；

4.冰冻组织以恒冷切片机制作6μm厚冰冻切片，附贴于硅化的载玻片，37℃干燥1～2小时后行下述操作，或-20℃密封保存，1周内使用。

三、杂交前处理

4％PFA(在DEPC-PBS pH 7.4) 37℃ 1h 前固定

↓

PBS RT 5min×2

↓

PBS(含0.3％体积比TritonX-100) 37℃ 15min

↓

PBS RT 5min×2

↓

2μg/ml Proteinase K在TE缓冲液 37℃ 10min 消化

↓

0.2％Glycin在PBS中 RT 5min×2

↓

4％PFA在PBS RT 15min 后固定

↓

PBS RT 3min×2

↓

0.1M三乙醇胺(TEA)/0.25％乙酸酐 RT 5min×2 乙酰化

↓

PBS RT 5min×2

↓

四、预杂交

预杂交液50℃2h (预杂交液：50％甲酰胺，5×SSC，0.02％SDS，

↓ 5×Danhard’s，0.1mg/ml tRNA)

五、杂交

杂交液50℃ 16-18h过夜(含2μg/ml DIG标记RNA探针)

↓

六、杂交后处理

50％甲酰胺2×SSC 50℃ 脱去盖膜脱膜、洗片

↓

2×SSC清洗37℃ 5min×3

↓

20μg/ml RNase A在RNase缓冲液 37℃ 30min RNA酶后处理

↓ (RNase缓冲液：0.01M Tris，1mMEDTA，0.2MNaCl，pH8.0)

RNase缓冲液37℃ 15min×2

↓

2×SSC 37℃ 10min×2

↓

1×SSC(含0.02％SDS) 37℃ 10min×2

↓

0.1×SSC 37℃ 10min×2

↓

缓冲液I 37℃ 5min×2(缓冲液I：0.1MTris-HCl pH7.6，0.15MNaCl)

↓

0.5％抗体阻断液，在缓冲液1中(含0.2％Tween 20)20min 封闭

↓

抗-DIG-AP(用抗体阻断液稀释抗体成1∶500)2h 抗体

↓

缓冲液I RT 5min×4

↓

缓冲液II RT 10min(缓冲液II：0.1Mtris，0.1MNaCl，50mMMgCl₂，pH9.5)

↓

NBT/BCIP(1∶50在缓冲液II)RT 0.5-1.5h(湿盒、避光)

↓

缓冲液III RT 5min×2

↓ (缓冲液III：10mMTris-HCl pH8.0，1mMEDTA)

蒸馏水 5min×4

↓

1％甲基绿复染10～15min，

↓

蒸馏水充分洗，晾干，封固

通过上述杂交筛选，发现cDNA克隆PP367，PP1597，PP1729，PP3476，PP3731，PP3856，PP3958，PP3971，PP4519，PP5241在肝与肝癌中有表达差异，结果如下表所示：

表1肝与肝癌表达差异克隆

ID	正常肝				病例A						病例B
	正常肝				病例A						病例B							N	胆	内	单	梭	L	胆	内	单	梭	K	内	单	梭	L	胆	内	单	梭	K	内	单	梭	比较-A	比较-B
	367	0				A1		+	B2			B1	+	+	B1	+	N＜L＜K	N	胆	内	单	梭	L	胆	内	单	梭	K	内	单	梭	L	胆	内	单	梭	K	内	单	梭	比较-A	比较-B	N＜L＝K
1597	367	0				A1		+	B2			B1	+	+	B1	+	N＜L＜K	A1					B2					B2				A1					B2				N＜L＝K	N＝L＜K	N＜L＝K
1597	1729	A1				B3			B3			B2			B3		N＜L＝K	A1					B2					B2				A1					B2				N＜L＝K	N＝L＜K	N＜L＜K
3476	1729	A1				B3			B3			B2			B3		N＜L＝K	0	+		+		A1	+		+		B1		+		C1	+		+		C1		+		N＜L＜K	N＜L＝K	N＜L＜K
3476	3731	0				A1		+	B1			B1		+	B1		N＜L＜K	0	+		+		A1	+		+		B1		+		C1	+		+		C1		+		N＜L＜K	N＜L＝K	N＜L＝K
3856	3731	0				A1		+	B1			B1		+	B1		N＜L＜K	A1	+		+		B1	+		+		C1		+		C1	+		+		C1		+		N＜L＜K	N＜L＝K	N＜L＝K
3856	3958	B1	+	+		C1	+	+	C1	+		C1	+	+	C1	+	N＜L＝K	A1	+		+		B1	+		+		C1		+		C1	+		+		C1		+		N＜L＜K	N＜L＝K	N＜L＝K
3971	3958	B1	+	+		C1	+	+	C1	+		C1	+	+	C1	+	N＜L＝K	A1	+		+		B1	+		+		C1		+		C1	+		+		C1		+		N＜L＜K	N＜L＝K	N＜L＝K
3971	4519	A1	+	+		B1	+	+	C1	+		C1	+	+	C1	+	N＜L＜K	A1	+		+		B1	+		+		C1		+		C1	+		+		C1		+		N＜L＜K	N＜L＝K	N＜L＝K
5241	4519	A1	+	+		B1	+	+	C1	+		C1	+	+	C1	+	N＜L＜K	A1	+		+		A1					B2				B1	+		+		C2				N＝L＜K	N＜L＜K	N＜L＝K

N：肝细胞 L：癌旁肝细胞 K：癌细胞胆：胆管细胞内：内皮细胞单：单核细胞

梭：梭形细胞 A、B、C：信号面积大小，依次递增 1、2、3：信号强度大小，依次递增

对上述cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序。如仍未获得全长cDNA序列，则设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO：1、4、7、10、13、16、19、22、25、28)。

实施例3：从胎盘cDNA中PCR获得基因克隆：

取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL)，反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表2所示)，按97℃3’1个循环。94℃30″60℃30″72℃1′，35个循环，72℃10′1个循环进行PCR扩增，获得各个基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例2测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，从而获得重组蛋白。

表2基因特异引物序列

克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)
克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)	PP367	AGGGGGACAACAGCATGAGGACC	GGTGACAGAGCCAGCAGTCACCA
PP1597	GCATGAGCCACTGCACTTAGCCC	GTGTCAACTCAGGGTTAAATGCC	PP367	AGGGGGACAACAGCATGAGGACC	GGTGACAGAGCCAGCAGTCACCA
PP1597	GCATGAGCCACTGCACTTAGCCC	GTGTCAACTCAGGGTTAAATGCC	PP1729	CGTGGGCCTCATCTTCGTGGTCT	GGGTTCACGCCATTGCCATTCTC
PP3476	CAAAGGAGACATCACCCGGGACC	GAGCAAGGACCCAAGCACAGCCT	PP1729	CGTGGGCCTCATCTTCGTGGTCT	GGGTTCACGCCATTGCCATTCTC
PP3476	CAAAGGAGACATCACCCGGGACC	GAGCAAGGACCCAAGCACAGCCT	PP3731	TCTCTCCCAGACTCCAGTCGCCC	CAGAGTGCCATCAGGACAGGGGA
PP3856	GGCCTCCTGGACACCTACAGCGT	ACTGCCCCGCACACAGACTGTTC	PP3731	TCTCTCCCAGACTCCAGTCGCCC	CAGAGTGCCATCAGGACAGGGGA
PP3856	GGCCTCCTGGACACCTACAGCGT	ACTGCCCCGCACACAGACTGTTC	PP3958	CCCGTGTGGGGGCTGTAGAGAAG	GTGCCCATCACCACACCCAGCTA
PP3971	ACGTGGTGAAGCGGCTGTTCAAG	ACAACCACAGCCAGGAGCAGCC	PP3958	CCCGTGTGGGGGCTGTAGAGAAG	GTGCCCATCACCACACCCAGCTA
PP3971	ACGTGGTGAAGCGGCTGTTCAAG	ACAACCACAGCCAGGAGCAGCC	PP4519	AGCAGGAGGCAGAGCTGTGGGAT	TGTTTCTGTAACAGCGGCCACGC
PP5241	GGCACGGGGTGGATCACTTGAG	TGAGATGCAGTTTTGCTCTTGTTGCCT	PP4519	AGCAGGAGGCAGAGCTGTGGGAT	TGTTTCTGTAACAGCGGCCACGC

实施例3：cDNA克隆序列分析

1.PP367蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：1)长度：1883bp

1 CTGAGACCCA CTGGCCTCTG GGAAGAGCAT AGGAGAGGGG GACAACAGCA

51 TGAGGACCAT ATGTTTGCCA TCTTGCTGAA GGAATTTCAG CCAACATAAT

101 AAGACATGAA AATGGCATTC GAGGTGTATT AGACAGACAA GGGGATGTTA

151 GTGTTTGCAG GAGACTTGGT CTGCCTCAGT GATGTCAGTC AGCAGTGATT

201 GTGATTCCCC AGGGGACACT CGGCAGCATC TGGAGACATT TTAGTTTAAA

251 CTTCCCCAGT GATCTGTGAT GTACAGGAGA CACTTTCGGT TGTCACACTG

301 GGGGAGGAGG CTGCATGTCA CTGGCATCTG TTGGGTGACA CCTACAATGC

351 ACAGGACAAC CACAACAAAT AATTCAGGCC CAAATGTTGC TGGTGCTGAG

401 GGTGAGGTCC TAGTGTTAGT AACAGGAGGA AAACCCAGCA GTCTGGAGGA

451 GAGACCTCTT CCCAGGGCAG CCCAGGGGCC ATCAGGAGGG TTCATCTCAT

501 GCATTAGAGG TCTTGGGAAG AATGAGGCTT CCTTTCCTCC ATCAAAGCAA

551 GCAAATCCTT TAAAAGCTGC ATCTCCAAGG GCTGCTCCGG GCTCATAGCA

601 AGCAACGTCG GAGCCCAGAG GCAAGGCTGT GCTACTCAGC TGCCCTCTGG

651 GGTCACAAAG GCTTCACTTG GCTTCTAAGA GCTGATGAGG CCTCTCGCAA

701 GGGACCCTGT GTGCATGGGC TGACCCTGAA ACTTCCCAGC CTCTCTTCTT

751 CTCAGAGCAC CCTCAGGTGG CCTCTCGGGG GTTACCCCTC ATTGATACCA

801 TGTCTCCTCG TGTTTTTGTC CAGACTCCAA TTCCAGGGTT TCAGAACCGC

851 ATCGCAGCAT CTTTCCTGAA ATGCACTCAG ACTCAGCCAG CAAAGACGTG

901 CCTGGCCGCA TCCTGCTGGA TATAGACAAT GATACCGAGA GCACTGCCCT

951 GTGAAGAAAG CCCTTTCCCA GCCCTCCACC ACTTCCACCC TGGCGAGTGG

1001 AGCAGGGGCA GGCGAACCTC TTTCTTTGCA GACCGAACAG TGAAAAGCTT

1051 TCAGTGGAGG ACAAAGGAGG GCCTCACTGT GCGGGACCTG GCCTTCTGCA

1101 CGGCCCAAGG AGAACCTGGA GGCCACCACT AAAGCTGAAT GACCTGTGTC

1151 TTGAAGAAGT TGGCTTTCTT TACATGGGAA GGAAATCATG CCAAAAAAAT

1201 CCAAAACAAA GAAGTACCTG GAGTGGAGAG AGTATTCCTG CTGAAACGCG

1251 CATAGGAAGC TTTTGTCCCT GCTGTTAATG CGGGCAGCAC CTACAGCAAC

1301 TTGGAATGAG TAAGAAGCAG TGCGTTAACT ATCTATTTAA TAAAATGCGC

1351 TCATTATGCA AGTCGCCTAC TCTCTGCTAC CTGGACGTTC ATTCTTATGT

1401 ATTAGGAGGG AGGCTGCGCT CCTTCAGACT TGCTGCAGTG AGCTGAGATT

1451 GCACGACTGC ACTCCAGCCT GGGCAAAAGA GCAAGACCCC ATCTCAAAAA

1501 AAAAATTTTT TTTTTTAATG TTAGCTACTG TGATGAAGTC TCTTTCTGAA

1551 AACTGGTTCT GTACAGGTTG CCGTAATTCT TTCTACTTTT TGTGTGTAAA

1601 CAAAGTCATT GTTTCTTTCA GGGACTGATT CATGTAGGAA TAGAGAGGGG

1651 CTGGGGAAAC CAGATGGGGC AGGTGGGCGG CAGAGTAAGG GATTTCCTTT

1701 ATGCCCCAAA ACACATTTTT TCCCATGGAT GGTGACTGCT GGCTCTGTCA

1751 CCTCATCAAA CTGGATGTGA CCCATGCCGC CTCGTTGGAT TGTCGGAATG

1801 TAGACAGAAA TGTACTGTTC TTTTTTTTTT TTAAACAATG TAATTGCTAC

1851 TTGATAAGGA CCGAAAAAAA AAAAAAAAAA AAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：2) 长度：109个氨基酸

1 MYRRHFRLSH WGRRLHVTGI CWVTPTMHRT TTTNNSGPNV AGAEGEVLVL VTGGKPSSLE

61 ERPLPRAAQG PSGGFISCIR GLGKNEASFP PSKQANPLKA ASPRAAPGS

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：3)

克隆号：PP367

起始编码子：269ATG 终止编码子：598TAG

蛋白质分子量：11599

1 C TGA GAC CCA CTG GCC TCT GGG AAG AGC ATA GGA GAG GGG GAC AAC 46

47 AGC ATG AGG ACC ATA TGT TTG CCA TCT TGC TGA AGG AAT TTC AGC CAA 94

95 CAT AAT AAG ACA TGA AAA TGG CAT TCG AGG TGT ATT AGA CAG ACA AGG 142

143 GGA TGT TAG TGT TTG CAG GAG ACT TGG TCT GCC TCA GTG ATG TCA GTC 190

191 AGC AGT GAT TGT GAT TCC CCA GGG GAC ACT CGG CAG CAT CTG GAG ACA 238

239 TTT TAG TTT AAA CTT CCC CAG TGA TCT GTG ATG TAC AGG AGA CAC TTT 286

1 Met Tyr Arg Arg His Phe 6

287 CGG TTG TCA CAC TGG GGG AGG AGG CTG CAT GTC ACT GGC ATC TGT TGG 334

7 Arg Leu Ser His Trp Gly Arg Arg Leu His Val Thr Gly Ile Cys Trp 22

335 GTG ACA CCT ACA ATG CAC AGG ACA ACC ACA ACA AAT AAT TCA GGC CCA 382

23 Val Thr Pro Thr Met His Arg Thr Thr Thr Thr Asn Asn Ser Gly Pro 38

383 AAT GTT GCT GGT GCT GAG GGT GAG GTC CTA GTG TTA GTA ACA GGA GGA 430

39 Asn Val Ala Gly Ala Glu Gly Glu Val Leu Val Leu Val Thr Gly Gly 54

431 AAA CCC AGC AGT CTG GAG GAG AGA CCT CTT CCC AGG GCA GCC CAG GGG 478

55 Lys Pro Ser Ser Leu Glu Glu Arg Pro Leu Pro Arg Ala Ala Gln Gly 70

479 CCA TCA GGA GGG TTC ATC TCA TGC ATT AGA GGT CTT GGG AAG AAT GAG 526

71 Pro Ser Gly Gly Phe Ile Ser Cys Ile Arg Gly Leu Gly Lys Ash Glu 86

527 GCT TCC TTT CCT CCA TCA AAG CAA GCA AAT CCT TTA AAA GCT GCA TCT 574

87 Ala Ser Phe Pro Pro Ser Lys Gln Ala Asn Pro Leu Lys Ala Ala Ser 102

575 CCA AGG GCT GCT CCG GGC TCA TAG CAA GCA ACG TCG GAG CCC AGA GGC 622

103 Pro Arg Ala Ala Pro Gly Ser *** 110

623 AAG GCT GTG CTA CTC AGC TGC CCT CTG GGG TCA CAA AGG CTT CAC TTG 670

671 GCT TCT AAG AGC TGA TGA GGC CTC TCG CAA GGG ACC CTG TGT GCA TGG 718

719 GCT GAC CCT GAA ACT TCC CAG CCT CTC TTC TTC TCA GAG CAC CCT CAG 766

767 GTG GCC TCT CGG GGG TTA CCC CTC ATT GAT ACC ATG TCT CCT CGT GTT 814

815 TTT GTC CAG ACT CCA ATT CCA GGG TTT CAG AAC CGC ATC GCA GCA TCT 862

863 TTC CTG AAA TGC ACT CAG ACT CAG CCA GCA AAG ACG TGC CTG GCC GCA 910

911 TCC TGC TGG ATA TAG ACA ATG ATA CCG AGA GCA CTG CCC TGT GAA GAA 958

959 AGC CCT TTC CCA GCC CTC CAC CAC TTC CAC CCT GGC GAG TGG AGC AGG 1006

1007 GGC AGG CGA ACC TCT TTC TTT GCA GAC CGA ACA GTG AAA AGC TTT CAG 1054

1055 TGG AGG ACA AAG GAG GGC CTC ACT GTG CGG GAC CTG GCC TTC TGC ACG 1102

1103 GCC CAA GGA GAA CCT GGA GGC CAC CAC TAA AGC TGA ATG ACC TGT GTC 1150

1151 TTG AAG AAG TTG GCT TTC TTT ACA TGG GAA GGA AAT CAT GCC AAA AAA 1198

1199 ATC CAA AAC AAA GAA GTA CCT GGA GTG GAG AGA GTA TTC CTG CTG AAA 1246

1247 CGC GCA TAG GAA GCT TTT GTC CCT GCT GTT AAT GCG GGC AGC ACC TAC 1294

1295 AGC AAC TTG GAA TGA GTA AGA AGC AGT GCG TTA ACT ATC TAT TTA ATA 1342

1343 AAA TGC GCT CAT TAT GCA AGT CGC CTA CTC TCT GCT ACC TGG ACG TTG 1390

1391 ATT CTT ATG TAT TAG GAG GGA GGC TGC GCT CCT TCA GAC TTG CTG CAG 1438

1439 TGA GCT GAG ATT GCA CGA CTG CAC TCC AGC CTG GGC AAA AGA GCA AGA 1486

1487 CCC CAT CTC AAA AAA AAA ATT TTT TTT TTT AAT GTT AGC TAC TGT GAT 1534

1535 GAA GTC TCT TTC TGA AAA CTG GTT CTG TAC AGG TTG CCG TAA TTC TTT 1582

1583 CTA CTT TTT GTG TGT AAA CAA AGT CAT TGT TTC TTT CAG GGA CTG ATT 1630

1631 CAT GTA GGA ATA GAG AGG GGC TGG GGA AAC CAG ATG GGG CAG GTG GGC 1678

1679 GGC AGA GTA AGG GAT TTC CTT TAT GCC CCA AAA CAC ATT TTT TCC CAT 1726

1727 GGA TGG TGA CTG CTG GCT CTG TCA CCT CAT CAA ACT GGA TGT GAC CCA 1774

1775 TGC CGC CTC GTT GGA TTG TCG GAA TGT AGA CAG AAA TGT ACT GTT CTT 1822

1823 TTT TTT TTT TAA ACA ATG TAA TTG CTA CTT GAT AAG GAC CGA AAA AAA 1870

1871 AAA AAA AAA AAA A 1883

2.PP1597蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：4)长度：1412bp

1 TAGGGATTAC AGGCATGAGC CACTGCACTT AGCCCAATAA AGTTGATTTT

51 TAAAAAAAAA ACATAACAGC TCCCTCCCCC TCCCCCATCC CCCTCCCCCT

101 CCCCCTCACC CGCTCCCTCT TTCTTTCTTC GGTCTCCTTC TGTTGCCAAG

151 GCTGGACTGT ACTGCCGTGG TCTCGGCTCG CTGCAGCCTC CCTGCCCCGG

201 GCTCCCCTGG TTCTCCTGCC TTGGCCTGCC GAGTGCCTGG GATTGCGGGC

251 ACGCGCCGCC ACGCCTGACT GGTTTTTGTA TATTTGGAGG AGACACGGTT

301 TCGCCCTGTT GACTGGGCTG GTCTCTGGCT CCTGACCTCG AGTGGTCTGC

351 CCGCCTCGGC CTCCTGGGGT ACTGGGATTG CAGACGGAGC TCGGTCACTC

401 AGTGCTCAGT GTTGCCCAGG CTGGAATGCA GTGGCGTGAT CTCGGCTCGC

451 TGCAACCTCC ACCTTCCAGC CGCCTGCCTT GGCCTCCCAA AGTGCTAAGA

501 TTACAGCCTC TGCCCGGCCG CCCCGTCTGG GAAGCGAGGA GCACCTCTGC

551 CTGGCCGCCC CGTCTGGGAA GCGAGGAGCC CCTCTGCCCG GCTGCCACCC

601 TGTCTGGGAG GCGAGGAGCG CCTCTGCCCT GCCGCCACCC CGTCTGGGAG

651 GTGAGGAGCG CTTCTGCCCG GCCACCACCC CGTCTGGGAG GTGAGGAGCG

701 CCTCTGCCTG GCCGCCACCC TGTCTGGGAT GTGAGGAGCA CCTCTGCCCG

751 GCCGCCACCC CATCTGGGAG GAGTGCCTCT ACCCGGGCGC CCCGTCTGTG

801 AAGTGGGCGC CTCTGCCCAG CCACCCCGTC TGGGAGGTGA GGGGCGTCTC

851 TGCCCGGCTC CCCCGTCTGG GAGGTGGGGA GCACCTCTGC CTGGCCGCCC

901 TTCATCTGGG AGGTGGGGGG CGCCTCTGCC CGGACACCCC GTCTGGGAGG

951 TGGGGGGCGT TTCTGCCCGG CTGCCCCATC AGGGAGGTGG GGGGCGCCTC

1001 TGCCCGGCTG CCCATCGTTT GGGATGTGAG GGGCGCCTCT GCCCAGCCAC

1051 CACCCCTTCT GGGAGGTGAG GAGCGCCTCT GCCAGGCCGC CCCGCCTGGG

1101 AAGTGTACCC AACAGCTCCG AAAAGACAGC GACCATCGAG AAAGGGCCAT

1151 GATGACGATG GCGGTTTTGT CGAAAAAAAA AGGGGGAAAT GTGGGGAAAA

1201 GAAAGAGAGA TCAGATTGTT ACTGTGTCTG TGTAGAAAGA AGTAGACATA

1251 GGAGACCCCA TTTTGTTCTG TACTAAGAAA AATTCTTCTG CCTTGGGATG

1301 CTGTTAATCT ATAACCTTAC CCCCAACCCC GTACTCTCTG AAACATGTGC

1351 TGTGTCAACT CAGGGTTAAA TGCCAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1401 AAAAAAAAAA AA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：5) 长度：102个氨基酸

1 MQWRDLGSLQ PPPSSRLPWP PKVLRLQPLP GRPVWEARST SAWPPRLGSE EPLCPAATLS

61 GRRGAPLPCR HPVWEVRSAS ARPPPRLGGE ERLCLAATLS GM

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：6)

克隆号：PP1597

起始编码子：426ATG 终止编码子：734TAG

蛋白质分子量：11186

1 TA GGG ATT ACA GGC ATG AGC CAC TGC ACT TAG CCC AAT AAA GTT GAT 47

48 TTT TAA AAA AAA AAC ATA ACA GCT CCC TCC CCC TCC CCC ATC CCC CTC 95

96 CCC CTC CCC CTC ACC CGC TCC CTC TTT CTT TCT TCG GTC TCC TTC TGT 143

144 TGC CAA GGC TGG ACT GTA CTG CCG TGG TCT CGG CTC GCT GCA GCC TCC 191

192 CTG CCC CGG GCT CCC CTG GTT CTC CTG CCT TGG CCT GCC GAG TGC CTG 239

240 GGA TTG CGG GCA CGC GCC GCC ACG CCT GAC TGG TTT TTG TAT ATT TGG 287

288 AGG AGA CAC GGT TTC GCC CTG TTG ACT GGG CTG GTC TCT GGC TCC TGA 335

336 CCT CGA GTG GTC TGC CCG CCT CGG CCT CCT GGG GTA CTG GGA TTG CAG 383

384 ACG GAG CTC GGT CAC TCA GTG CTC AGT GTT GCC CAG GCT GGA ATG CAG 431

1 Met Gln 2

432 TGG CGT GAT CTC GGC TCG CTG CAA CCT CCA CCT TCC AGC CGC CTG CCT 479

3 Trp Arg Asp Leu Gly Ser Leu Gln Pro Pro Pro Ser Ser Arg Leu Pro 18

480 TGG CCT CCC AAA GTG CTA AGA TTA CAG CCT CTG CCC GGC CGC CCC GTC 527

19 Trp Pro Pro Lys Val Leu Arg Leu Gln Pro Leu Pro Gly Arg Pro Val 34

528 TGG GAA GCG AGG AGC ACC TCT GCC TGG CCG CCC CGT CTG GGA AGC GAG 575

35 Trp Glu Ala Arg Ser Thr Ser Ala Trp Pro Pro Arg Leu Gly Ser Glu 50

576 GAG CCC GTC TGC CCG GCT GCC ACC CTG TCT GGG AGG CGA GGA GCG CCT 623

51 Glu Pro Leu Cys Pro Ala Ala Thr Leu Ser Gly Arg Arg Gly Ala Pro 66

624 CTG CCC TGC CGC CAC CCC GTC TGG GAG GTG AGG AGC GCT TCT GCC CGG 671

67 Leu Pro Cys Arg His Pro Val Trp Glu Val Arg Ser Ala Ser Ala Arg 82

672 CCA CCA CCC CGT CTG GGA GGT GAG GAG CGC CTC TGC CTG GCC GCC ACC 719

83 Pro Pro Pro Arg Leu Gly Gly Glu Glu Arg Leu Cys Leu Ala Ala Thr 98

720 CTG TCT GGG ATG TGA GGA GCA CCT CTG CCC GGC CGC CAC CCC ATC TGG 767

99 Leu Ser Gly Met *** 103

768 GAG GAG TGC CTC TAC CCG GCC GCC CCG TCT GTG AAG TGG GCG CCT CTG 815

816 CCC AGC CAC CCC GTC TGG GAG GTG AGG GGC GTC TCT GCC CGG CTC CCC 863

864 CGT CTG GGA GGT GGG GAG CAC CTC TGC CTG GCC GCC CTT CAT CTG GGA 911

912 GGT GGG GGG CGC CTC TGC CCG GAC ACC CCG TCT GGG AGG TGG GGG GCG 959

960 TTT CTG CCC GGC TGC CCC ATC AGG GAG GTG GGG GGC GCC TCT GCC CGG 1007

1008 CTG CCC ATC GTT TGG GAT GTG AGG GGC GCC TCT GCC CAG CCA CCA CCC 1055

1056 CTT CTG GGA GGT GAG GAG CGC CTC TGC CAG GCC GCC CCG CCT GGG AAG 1103

1104 TGT ACC CAA CAG CTC CGA AAA GAC AGC GAC CAT CGA GAA AGG GCC ATG 1151

1152 ATG ACG ATG GCG GTT TTG TCG AAA AAA AAA GGG GGA AAT GTG GGG AAA 1199

1200 AGA AAG AGA GAT CAG ATT GTT ACT GTG TCT GTG TAG AAA GAA GTA GAC 1247

1248 ATA GGA GAC CCC ATT TTG TTC TGT ACT AAG AAA AAT TCT TCT GCC TTG 1295

1296 GGA TGC TGT TAA TCT ATA ACC TTA CCC CCA ACC CCG TAC TCT CTG AAA 1343

1344 CAT GTG CTG TGT CAA CTC AGG GTT AAA TGC CAA AAA AAA AAA AAA AAA 1391

1392 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1412

3.PP1729蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：7)长度：1880bp

1 GTCACACGGG CTGGCAGGCC GCCCTGGTGT CCACCATCAT CATGGTGCCC

51 GTGGGCCTCA TCTTCGTGGT CTTCACCATC CACTTCTACC GCTCCCTGGT

101 GCGCCACAAA ACGGAGCGCC ACAACCGCGA GATCGAGGAG CTCCACAAGC

151 TCAAGGTCCA GCTGGACGGG CATGAGCGCA GCCTGCAGGT CTTGTGAGGG

201 GCCGAGGGCC GGGGCTGGGA GCGGCCCTGT GCCCGGGAGT CCGCAGAGGC

251 GGGGATTTGT CAGATGCAGA CATTTTGCAA GGCTGCCGGG TAGTTCAAGA

301 CCAAAGTTTT CCTCTTGTCT TAATACCATA AGGACTGGAT GACTTCTCCT

351 GAGATAGAAC CGTTTGGTTC AATGAGGGAC TGTGTTGCTA AGAGCGTTGG

401 GGGCAAAGCC AGGCTGGTTC CTTGGCCTCG GGGTTTCCTG GGTCGGGGAC

451 ACGGTGAAGA GGCTCCAGCG GGACCTGCCC ATCAGTCCTG GGCCAGGAGG

501 GGCTCCAAGC AGCACCCAGC GGTCCGGGGG AGTCTCAGAC CCGGCATGCG

551 TGGCTGGCAG ACCTGGGAGA GCCAGGGCAG GGTTTTGCGT TCAGAGAAGG

601 ATTGCCCCAG AGACCCGTGG TTGACTTCAT GGGTGCTGAG TGGCCCGTGT

651 GACAGTGATG ACACGAAGGC TTCGGCGTTT GAGTGGGTGC AGGTGCACGC

701 CAGGGCTTGG TGCTTCCCTG CCTGGCCCTG GAGGGAAGCT GGGTGGCCTG

751 GCTTCAGGGG AAGACAGGAG CCAGGACACA CGTCAGCCCA GCAGGTGTGG

801 GGGGTGCTGC AGCCCTCGGC AGTGGGGTCA GGCCCTGGGG GATGTTTCCA

851 ATGGTGGGCA GCCTGGCCAG GCCGGAGAAG ACATGTTCAC GGGCATCTAT

901 CAGATGCCCC CTTGAGGAGG CTGAGTTATT TGAGGGCTGC TGCAAAGTAC

951 GCTAGGCTCA AATTCTCTTT TCCCAGCCAG AGCCCTGGCC ACACGGACTC

1001 AGAGGGGCCA CCGGGGTGGG GAAAGGACCC CTCCCCGACC CCCCGCAGCC

1051 ACTGGCCTCC AGCTCTCGGC CACAGAATGG CCTCTAAGGC TGACTCAGCC

1101 GCTCCCTTGG GCTGTGGCAG CAGGAGGCGG GGGCTCTGGC TCAGGCCCCG

1151 GAGCCTGTGC AGCTTGCCCA TGGCCCTAGG CAGCGAGGGG ACAGCCTGGG

1201 GGACTTCCTG CCTAGGCAAG GTCATTGGCC GGGCCTGGCC TGTGGATAGT

1251 GGGGCCAGGG GCCGGCCCAG GCCAAATGAG TGCCCTCCTT GTTATGACAC

1301 CAAGTGACTA CAAGGGAGGC AAGACCCCTC CAGGCCTCTC AGCCGACACT

1351 GGGTCCCACC ACACACAGTG ACTGTGCCGT GCAGTGCAGG TTCTGGCCTT

1401 TTCCTTGAAG GCATCTGGTA GACCCGAAGC CACGCTCTCG GGCCGCACAT

1451 GCACGCCGCA GCACCAGCTG CCCTGAGCTG CTTGTACAAC CAAACACCTT

1501 TCCCCTCTTC TCCAGCTGTA ACCTGGAGAG TCAGCCATGC CTTGTCTTTT

1551 GTTCTCATAA ATAGTCACTG GGGCCGGGCG CAGTGACTCA CGCCTGTAAT

1601 CCCAGCACTT TGGGAGGCCT AGGTGGGCGG ATCACTTGAG GTCAGGAGTT

1651 CGAGACCAGC CTGGCCAACA TGGTGAAACC CTGTCTCTAC TAAAAAAATA

1701 CAGAAAATTA GCTGGGCGTG GTGGCGGGCG CCTGTAGCCC CAGCTACTTG

1751 GGAGGCTGAG GCGGGAGAAT GGCAATGGCG TGAACCCGGG AGGCAGAGCT

1801 TGCAGTGAGC TGAGATGGCG CCACTGCACT CCAGCCTGGG CGACAGAGCC

1851 AGACTCAATC TCAAAAAAAA AAAAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：8) 长度：322个氨基酸

1 MTSPEIEPFG SMRDCVAKSV GGKARLVPWP RGFLGRGHGE EAPAGPAHQS WARRGSKQHP

161 AVRGSLRPGM RGWQTWESQG RVLRSEKDCP RDPWLTSWVL SGPCDSDDTK ASAFEWVQVH

121 ARAWCFPAWP WREAGWPGFR GRQEPGHTSA QQVWGVLQPS AVGSGPGGCF QWWAAWPGRR

181 RHVHGHLSDA PLRRLSYLRA AAKYARLKFS FPSQSPGHTD SEGPPGWGKD PSPTPRSHWP

241 PALGHRMASK ADSAAPLGCG SRRRGLWLRP RSLCSLPMAL GSEGTAWGTS CLGKVIGRAW

301 PVDSGARGRP RPNECPPCYD TK

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：9)

克隆号：PP1729

起始编码子：339ATG 终止编码子：1307TGA

蛋白质分子量：35347

1 GT CAC ACG GGC TGG CAG GCC GCC CTG GTG TCC ACC ATC ATC ATG GTG 47

48 CCC GTG GGC CTC ATC TTC GTG GTC TTC ACC ATC CAC TTC TAC CGC TCC 95

96 CTG GTG CGC CAC AAA ACG GAG CGC CAC AAC CGC GAG ATC GAG GAG CTC 143

144 CAC AAG CTC AAG GTC CAG CTG GAC GGG CAT GAG CGC AGC CTG CAG GTC 191

192 TTG TGA GGG GCC GAG GGC CGG GGC TGG GAG CGG CCC TGT GCC CGG GAG 239

240 TCC GCA GAG GCG GGG ATT TGT CAG ATG CAG ACA TTT TGC AAG GCT GCC 287

288 GGG TAG TTC AAG ACC AAA GTT TTC CTC TTG TCT TAA TAC CAT AAG GAC 335

336 TGG ATG ACT TCT CCT GAG ATA GAA CCC TTT GGT TCA ATG AGG GAC TGT 383

1 Met Thr Ser Pro Glu Ile Glu Pro Phe Gly Ser Met Arg Asp Cys 15

384 GTT GCT AAG AGC GTT GGG GGC AAA GCC AGG CTG GTT CCT TGG CCT CGG 431

16 Val Ala Lys Ser Val Gly Gly Lys Ala Arg Leu Val Pro Trp Pro Arg 31

432 GGT TTC CTG GGT CGG GGA CAC GGT GAA GAG GCT CCA GCG GGA CCT GCC 479

32 Gly Phe Leu Gly Arg Gly His Gly Glu Glu Ala Pro Ala Gly Pro Ala 47

480 CAT CAG TCC TGG GCC AGG AGG GGC TCC AAG CAG CAC CCA GCG GTC CGG 527

48 His Gln Ser Trp Ala Arg Arg Gly Ser Lys Gln His Pro Ala Val Arg 63

528 GGG AGT CTC AGA CCC GGC ATG CGT GGC TGG CAG ACC TGG GAG AGC CAG 575

64 Gly Ser Leu Arg Pro Gly Met Arg Gly Trp Gln Thr Trp Glu Ser Gln 79

576 GGC AGG GTT TTG CGT TCA GAG AAG GAT TGC CCC AGA GAC CCG TGG TTG 623

80 Gly Arg Val Leu Arg Ser Glu Lys Asp Cys Pro Arg Asp Pro Trp Leu 95

624 ACT TCA TGG GTG CTG AGT GGC CCG TGT GAC AGT GAT GAC ACG AAG GCT 671

96 Thr Ser Trp Val Leu Ser Gly Pro Cys Asp Ser Asp Asp Thr Lys Ala 111

672 TCG GCG TTT GAG TGG GTG CAG GTG CAC GCC AGG GCT TGG TGC TTC CCT 719

112 Ser Ala Phe Glu Trp Val Gln Val His Ala Arg Ala Trp Cys Phe Pro 127

720 GCC TGG CCC TGG AGG GAA GCT GGG TGG CCT GGC TTC AGG GGA AGA CAG 767

128 Ala Trp Pro Trp Arg Glu Ala Gly Trp Pro Gly Phe Arg Gly Arg Gln 143

768 GAG CCA GGA CAC ACG TCA GCC CAG CAG GTG TGG GGG GTG CTG CAG CCC 815

144 Glu Pro Gly His Thr Ser Ala Gln Gln Val Trp Gly Val Leu Gln Pro 159

816 TCG GCA GTG GGG TCA GGC CCT GGG GGA TGT TTC CAA TGG TGG GCA GCC 863

160 Ser Ala Val Gly Ser Gly Pro Gly Gly Cys Phe Gln Trp Trp Ala Ala 175

864 TGG CCA GGC CGG AGA AGA CAT GTT CAC GGG CAT CTA TCA GAT GCC CCC 911

176 Trp Pro Gly Arg Arg Arg His Val His Gly His Leu Ser Asp Ala Pro 191

912 TTG AGG AGG CTG AGT TAT TTG AGG GCT GCT GCA AAG TAC GCT AGG CTC 959

192 Leu Arg Arg Leu Ser Tyr Leu Arg Ala Ala Ala Lys Tyr Ala Arg Leu 207

960 AAA TTC TCT TTT CCC AGC CAG AGC CCT GGC CAC ACG GAC TCA GAG GGG 1007

208 Lys Phe Ser Phe Pro Ser Gln Ser Pro Gly His Thr Asp Ser Glu Gly 223

1008 CCA CCG GGG TGG GGA AAG GAC CCC TCC CCG ACC CCC CGC AGC CAC TGG 1055

224 Pro Pro Gly Trp Gly Lys Asp Pro Ser Pro Thr Pro Arg Ser His Trp 239

1056 CCT CCA GCT CTC GGC CAC AGA ATG GCC TCT AAG GCT GAC TCA GCC GCT 1103

240 Pro Pro Ala Leu Gly His Arg Met Ala Ser Lys Ala Asp Ser Ala Ala 255

1104 CCC TTG GGC TGT GGC AGC AGG AGG CGG GGG CTC TGG CTC AGG CCC CGG 1151

256 Pro Leu Gly Cys Gly Ser Arg Arg Arg Gly Leu Trp Leu Arg Pro Arg 271

1152 AGC CTG TGC AGC TTG CCC ATG GCC CTA GGC AGC GAG GGG ACA GCC TGG 1199

272 Ser Leu Cys Ser Leu Pro Met Ala Leu Gly Ser Glu Gly Thr Ala Trp 287

1200 GGG ACT TCC TGC CTA GGC AAG GTC ATT GGC CGG GCC TGG CCT GTG GAT 1247

288 Gly Thr Ser Cys Leu Gly Lys Val Ile Gly Arg Ala Trp Pro Val Asp 303

1248 AGT GGG GCC AGG GGC CGG CCC AGG CCA AAT GAG TGC CCT CCT TGT TAT 1295

304 Ser Gly Ala Arg Gly Arg Pro Arg Pro Ash Glu Cys Pro Pro Cys Tyr 319

1296 GAC ACC AAG TGA CTA CAA GGG AGG CAA GAC CCC TCC AGG CCT CTC AGC 1343

320 Asp Thr Lys *** 323

1344 CGA CAC TGG GTC CCA CCA CAC ACA GTG ACT GTG CCG TGC AGT GCA GGT 1391

1392 TCT GGC CTT TTC CTT GAA GGC ATC TGG TAG ACC CGA AGC CAC GCT CTC 1439

1440 GGG CCG CAC ATG CAC GCC GCA GCA CCA GCT GCC CTG AGC TGC TTG TAC 1487

1488 AAC CAA ACA CCT TTC CCC TCT TCT CCA GCT GTA ACC TGG AGA GTC AGC 1535

1536 CAT GCC TTG TCT TTT GTT CTC ATA AAT AGT CAC TGG GGC CGG GCG CAG 1583

1584 TGA CTC ACG CCT GTA ATC CCA GCA CTT TGG GAG GCC TAG GTG GGC GGA 1631

1632 TCA CTT GAG GTC AGG AGT TCG AGA CCA GCC TGG CCA ACA TGG TGA AAC 1679

1680 CCT GTC TCT ACT AAA AAA ATA CAG AAA ATT AGC TGG GCG TGG TGG CGG 1727

1728 GCG CCT GTA GCC CCA GCT ACT TGG GAG GCT GAG GCG GGA GAA TGG CAA 1775

1776 TGG CGT GAA CCC GGG AGG CAG AGC TTG CAG TGA GCT GAG ATG GCG CCA 1823

1824 CTG CAC TCC AGC CTG GGC GAC AGA GCC AGA CTC AAT CTC AAA AAA AAA 1871

1872 AAA AAA AAA 1880

D.Blastp

Query＝PP1729(322个氨基酸)

＞SW：HMBP_DROME P22809 drosophila melanogaster(fruit fly).homeobox

protein bagpipe(nk-3).7/1998

长度＝382个氨基酸

分值＝31.7bits(70)，预计值＝6.9

相同性＝24/99(24％)，相似性＝37/99(37％)，缺口＝6/99(6％)

Query：157 LQPSAVGSGPGGCFQWWAAWPGRRRHVHGHLSDAPLRRLSYLRAAAKYARLKFSFPSQ-- 214

+QPSA P Q++AA H H + Y++ Y + P

Sbjct：84 IQPSA--RQPSNYLQYYAAAMDNNNHHHQATGTSNSSAADYMQRKLAYFGSTLAAPLDMR 141

Query：215 --SPGHTDSEGPPGWGKDPSPTPRSHWPPALGHRMASKA 251

+ +D + PP PS +P SH L + S+A

Sbjct：142 RCTSNDSDCDSPPPLSSSPSESPLSHDGSGLSRKKRSRA 180

4.PP3476蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：10) 长度：2756bp

1 TATCTTGTTT GACTGTCCAT GAAAATCTCA ACTTTATGGC CATTGGTTTC

51 ACAGATGGCA GTGTTACATT GAACAAAGGA GACATCACCC GGGACCGGCA

101 TAGCAAGACC CAGATTTTGC ACAAGGGCAA CTATCCTGTA ACTGGATTGG

151 CCTTTCGCCA AGCAGGAAAG ACCACTCACT TGTTTGTTGT GACAACAGAG

201 AACGTCCAGT CCTATATAGT TTCTGGAAAA GACTACCCTC GCGTGGAGTT

251 GGACACCCAT GGTTGTGGCC TGCGCTGCTC AGCCCTAAGT GACCCTTCTC

301 AGGACCTGCA GTTCATTGTG GCCGGGGATG AGTGTGTCTA CTTGTACCAG

351 CCTGATGAAC GTGGGCCCTG CTTCGCCTTT GAGGGCCATA AGCTCATTGC

401 CCACTGGTTT AGAGGCTACC TTATCATTGT CTCCCGTGAC CGGAAGGTTT

451 CTCCCAAGTC AGAGTTTACC AGCAGGGATT CACAGAGCTC CGACAAGCAG

501 ATTCTAAACA TCTATGACCT GTGCAACAAG TTCATAGCCT ATAGCACCGT

551 CTTTGAGGAT GTAGTGGATG TGCTTGCTGA GTGGGGCTCC CTGTACGTGC

601 TGACGCGGGA TGGGCGGGTC CACGCACTGC AGGAGAAGGA CACACAGACC

651 AAACTGGAGA TGCTGTTTAA GAAGAACCTA TTTGAGATGG CGATTAACCT

701 TGCCAAGAGC CAGCATCTGG ACAGTGATGG GCTGGCCCAG ATTTTCATGC

751 AGTATGGAGA CCATCTCTAC AGCAAGGGCA ACCACGATGG GGCTGTCCAG

801 CAATATATCC GAACCATTGG AAAGTTGGAG CCATCCTATG TGATCCGCAA

851 GTTTCTGGAT GCCCAGCGCA TTCACAACCT GACTGCTACC TGCAGACCCT

901 GCACCGACAA TCCCTGGCCA ATGCCGACCA TACCACCCTG CTCCTCAACT

951 GCTATACCAA GCTCAAGGAC AGCTCGAAGC TGGAGGAGTT CATCAAGAAA

1001 AAGAGTGAGA GTGAAGTCCA CTTTGATGTG GAGACAGCCA TCAAGGTCCT

1051 CCGGCAGGCT GGCTACTACT CCCATGCCCT GTATCTGGCG GAGAACCATG

1101 CACATCATGA GTGGTACCTG AAGATCCAGC TAGAAGACAT TAAGAATTAT

1151 CAGGAAGCCC TTCGATACAT CGGCAAGCTG CCTTTTGAGC AGGCAGAGAG

1201 CAACATGAAG CGCTACGGCA AGATCCTCAT GCACCACATA CCAGAGCAGA

1251 CAACTCAGTT GCTGAAGGGA CTTTGTACTG ATTATCGGCC CAGCCTCGAA

1301 GGCCGCAGCG ATAGGGAGGC CCCAGGCTGC AGGGCCAACT CTGAGGAGTT

1351 CATCCCCATC TTTGCCAATA ACCCGCGAGA GCTGAAAGCC TTCCTAGAGC

1401 ACATGAGTGA AGTGCAGCCA GACTCACCCC AGGGGATCTA CGACACACTC

1451 CTTGAGCTGC GACTGCAGAA CTGGGCCCAC GAGAAGGATC CACAGGTCAA

1501 AGAGAAGCTT CACGCAGAGG CCATTTCCCT GCTGAAGAGT GGTCGCTTCT

1551 GCGACGTCTT TGACAAGGCC CTGGTCCTGT GCCAGATGCA CGACTTCCAG

1601 GATGGTGTCC TTTACCTTTA TGAGCAGGGG AAGCTGTTCC AGCAGATCAT

1651 GCACTACCAC ATGCAGCACG AGCAGTACCG GCAGGTCATC AGCGTGTGTG

1701 AGCGCCATGG GGAGCAGGAC CCCTCCTTGT GGGAGCAGGC CCTCAGCTAC

1751 TTCGCTCGCA AGGAGGAGGA CTGCAAGGAG TATGTGGCAG CTGTCCTCAA

1801 GCATATCGAG AACAAGAACC TCATGCCACC TCTTCTAGTG GTGCAGACCC

1851 TGGCCCACAA CTCCACAGCC ACACTCTCCG TCATCAGGGA CTACCTGGTC

1901 CAAAAACTAC AGAAACAGAG CCAGCAGATT GCACAGGATG AGCTGCGGGT

1951 GCGGCGGTAC CGAGAGGAGA CCACCCGTAT CCGCCAGGAG ATCCAAGAGC

2001 TCAAGGCCAG TCCTAAGATT TTCCAAAAGA CCAAGTGCAG CATCTGTAAC

2051 AGTGCCTTGG AGTTGCCCTC AGTCCACTTC CTGTGTGGCC ACTCCTTCCA

2101 CCAACACTGC TTTGAGAGTT ACTCGGAAAG TGATGCTGAC TGCCCCACCT

2151 GCCTCCCTGA AAACCGGAAG GTCATGGATA TGATCCGGGC CCAGGAACAG

2201 AAACGAGATC TCCATGATCA ATTCCAGCAT CAGCTCAAGT GCTCCAATGA

2251 CAGCTTTTCT GTGATTGCTG ACTACTTTGG CAGAGGTGTT TTCAACAAAT

2301 TGACTCTGCT GACCGACCCT CCCACAGCCA GACTGACCTC AGCCTGGAGG

2351 CTGGGCTGCA ACGCGACCTA CTCATGCACT CCAGGAGGGG CACTTAAGCA

2401 GCCTGGAGGA AGATGTGGGC AACAGTGGAG GACCAAGAGA ACAGACACAA

2451 TGGGACCTGG GCGGGCGTTA CACAGAAGGC TGGCTGACAT GCCCAGGGCT

2501 CCACTCTCAT CTAATGTCAC AGCCCTCAGA ACTAAAGCGG ACTTTCTTTC

2551 CCTGCCTTCT TATTTAGTCA GCTTGCCATC CCTCCTCTTC ACTAGCAGTG

2601 TAGATCATTC CAGATCAGTG GGGGAGGGCA CCTCAGCAAC CTCTGAGTGT

2651 GGACAATAGC TGCTTTCTTC TCTATCCAAG AGCACCAGGC TGTGCTTGGG

2701 TCCTTGCTCT CAGAGTCTAT AAATAAAAGA ATATAATGAA AAAAAAAAAA

2751 AAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：11) 长度：484个氨基酸

1 MKRYGKILMH HIPEQTTQLL KGLCTDYRPS LEGRSDREAP GCRANSEEFI PIFANNPREL

61 KAFLEHMSEV QPDSPQGIYD TLLELRLQNW AHEKDPQVKE KLHAEAISLL KSGRFCDVFD

121 KALVLCQMHD FQDGVLYLYE QGKLFQQIMH YHMQHEQYRQ VISVCERHGE QDPSLWEQAL

181 SYFARKEEDC KEYVAAVLKH IENKNLMPPL LVVQTLAHNS TATLSVIRDY LVQKLQKQSQ

241 QIAQDELRVR RYREETTRIR QEIQELKASP KIFQKTKCSI CNSALELPSV HFLCGHSFHQ

301 HCFESYSESD ADCPTCLPEN RKVMDMIRAQ EQKRDLHDQF QHQLKCSNDS FSVIADYFGR

361 GVFNKLTLLT DPPTARLTSA WRLGCNATYS CTPGGALKQP GGRCGQQWRT KRTDTMGPGR

421 ALHRRLADMP RAPLSSNVTA LRTKADFLSL PSYLVSLPSL LFTSSVDHSR SVGEGTSATS

481 ECGQ

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：12)

克隆号：PP3476

起始编码子：1205ATG 终止编码子：2659TAG

蛋白质分子量：55359

1 T ATC TTG TTT GAC TGT CCA TGA AAA TCT CAA CTT TAT GGC CAT TGG 46

47 TTT CAC AGA TGG CAG TGT TAC ATT GAA CAA AGG AGA CAT CAC CCG GGA 94

95 CCG GCA TAG CAA GAC CCA GAT TTT GCA CAA GGG CAA CTA TCC TGT AAC 142

143 TGG ATT GGC CTT TCG CCA AGC AGG AAA GAC CAC TCA CTT GTT TGT TGT 190

191 GAC AAC AGA GAA CGT CCA GTC CTA TAT AGT TTC TGG AAA AGA CTA CCC 238

239 TCG CGT GGA GTT GGA CAC CCA TGG TTG TGG CCT GCG CTG CTC AGC CCT 286

287 AAG TGA CCC TTC TCA GGA CCT GCA GTT CAT TGT GGC CGG GGA TGA GTG 334

335 TGT CTA CTT GTA CCA GCC TGA TGA ACG TGG GCC CTG CTT CGC CTT TGA 382

383 GGG CCA TAA GCT CAT TGC CCA CTG GTT TAG AGG CTA CCT TAT CAT TGT 430

431 CTC CCG TGA CCG GAA GGT TTC TCC CAA GTC AGA GTT TAC CAG CAG GGA 478

479 TTC ACA GAG CTC CGA CAA GCA GAT TCT AAA CAT CTA TGA CCT GTG CAA 526

527 CAA GTT CAT AGC CTA TAG CAC CGT CTT TGA GGA TGT AGT GGA TGT GCT 574

575 TGC TGA GTG GGG CTC CCT GTA CGT GCT GAC GCG GGA TGG GCG GGT CCA 622

623 CGC ACT GCA GGA GAA GGA CAC ACA GAC CAA ACT GGA GAT GCT GTT TAA 670

671 GAA GAA CCT ATT TGA GAT GGC GAT TAA CCT TGC CAA GAG CCA GCA TCT 718

719 GGA CAG TGA TGG GCT GGC CCA GAT TTT CAT GCA GTA TGG AGA CCA TCT 766

767 CTA CAG CAA GGG CAA CCA CGA TGG GGC TGT CCA GCA ATA TAT CCG AAC 814

815 CAT TGG AAA GTT GGA GCC ATC CTA TGT GAT CCG CAA GTT TCT GGA TGC 862

863 CCA GCG CAT TCA CAA CCT GAC TGC TAC CTG CAG ACC CTG CAC CGA CAA 910

911 TCC CTG GCC AAT GCC GAC CAT ACC ACC CTG CTC CTC AAC TGC TAT ACC 958

959 AAG CTC AAG GAC AGC TCG AAG CTG GAG GAG TTC ATC AAG AAA AAG AGT 1006

1007 GAG AGT GAA GTC CAC TTT GAT GTG GAG ACA GCC ATC AAG GTC CTC CGG 1054

1055 CAG GCT GGC TAC TAC TCC CAT GCC CTG TAT CTG GCG GAG AAC CAT GCA 1102

1103 CAT CAT GAG TGG TAC CTG AAG ATC CAG CTA GAA GAC ATT AAG AAT TAT 1150

1151 CAG GAA GCC CTT CGA TAC ATC GGC AAG CTG CCT TTT GAG CAG GCA GAG 1198

1199 AGC AAC ATG AAG CGC TAC GGC AAG ATC CTC ATG CAC CAC ATA CCA GAG 1246

1 Met Lys Arg Tyr Gly Lys Ile Leu Met His His Ile Pro Glu 14

1247 CAG ACA ACT CAG TTG CTG AAG GGA CTT TGT ACT GAT TAT CGG CCC AGC 1294

15 Gln Thr Thr Gln Leu Leu Lys Gly Leu Cys Thr Asp Tyr Arg Pro Ser 30

1295 CTC GAA GGC CGC AGC GAT AGG GAG GCC CCA GGC TGC AGG GCC AAC TCT 1342

31 Leu Glu Gly Arg Ser Asp Arg Glu Ala Pro Gly Cys Arg Ala Asn Ser 46

1343 GAG GAG TTC ATC CCC ATC TTT GCC AAT AAC CCG CGA GAG CTG AAA GCC 1390

47 Glu Glu Phe Ile Pro Ile Phe Ala Asn Asn Pro Arg Glu Leu Lys Ala 62

1391 TTC CTA GAG CAC ATG AGT GAA GTG CAG CCA GAC TCA CCC CAG GGG ATC 1438

63 Phe Leu Glu His Met Ser Glu Val Gln Pro Asp Ser Pro Gln Gly Ile 78

1439 TAC GAC ACA CTC CTT GAG CTG CGA CTG CAG AAC TGG GCC CAC GAG AAG 1486

79 Tyr Asp Thr Leu Leu Glu Leu Arg Leu Gln Asn Trp Ala His Glu Lys 94

1487 GAT CCA CAG GTC AAA GAG AAG CTT CAC GCA GAG GCC ATT TCC CTG CTG 1534

95 Asp Pro Gln Val Lys Glu Lys Leu His Ala Glu Ala Ile Ser Leu Leu 110

1535 AAG AGT GGT CGC TTC TGC GAC GTC TTT GAC AAG GCC CTG GTC CTG TGC 1582

111 Lys Ser Gly Arg Phe Cys Asp Val Phe Asp Lys Ala Leu Val Leu Cys 126

1583 CAG ATG CAC GAC TTC CAG GAT GGT GTC CTT TAC CTT TAT GAG CAG GGG 1630

127 Gln Met His Asp Phe Gln Asp Gly Val Leu Tyr Leu Tyr Glu Gln Gly 142

1631 AAG CTG TTC CAG CAG ATC ATG CAC TAC CAC ATG CAG CAC GAG CAG TAC 1678

143 Lys Leu Phe Gln Gln Ile Met His Tyr His Met Gln His Glu Gln Tyr 158

1679 CGG CAG GTC ATC AGC GTG TGT GAG CGC CAT GGG GAG CAG GAC CCC TCC 1726

159 Arg Gln Val Ile Ser Val Cys Glu Arg His Gly Glu Gln Asp Pro Ser 174

1727 TTG TGG GAG CAG GCC CTC AGC TAC TTC GCT CGC AAG GAG GAG GAC TGC 1774

175 Leu Trp Glu Gln Ala Leu Ser Tyr Phe Ala Arg Lys Glu Glu Asp Cys 190

1775 AAG GAG TAT GTG GCA GCT GTC CTC AAG CAT ATC GAG AAC AAG AAC CTC 1822

191 Lys Glu Tyr Val Ala Ala Val Leu Lys His Ile Glu Asn Lys Asn Leu 206

1823 ATG CCA CCT CTT CTA GTG GTG CAG ACC CTG GCC CAC AAC TCC ACA GCC 1870

207 Met Pro Pro Leu Leu Val Val Gln Thr Leu Ala His Asn Ser Thr Ala 222

1871 ACA CTC TCC GTC ATC AGG GAC TAC CTG GTC CAA AAA CTA CAG AAA CAG 1918

223 Thr Leu Ser Val Ile Arg Asp Tyr Leu Val Gln Lys Leu Gln Lys Gln 238

1919 AGC CAG CAG ATT GCA CAG GAT GAG CTG CGG GTG CGG CGG TAC CGA GAG 1966

239 Ser Gln Gln Ile Ala Gln Asp Glu Leu Arg Val Arg Arg Tyr Arg Glu 254

1967 GAG ACC ACC CGT ATC CGC CAG GAG ATC CAA GAG CTC AAG GCC AGT CCT 2014

255 Glu Thr Thr Arg Ile Arg Gln Glu Ile Gln Glu Leu Lys Ala Ser Pro 270

2015 AAG ATT TTC CAA AAG ACC AAG TGC AGC ATC TGT AAC AGT GCC TTG GAG 2062

271 Lys Ile Phe Gln Lys Thr Lys Cys Ser Ile Cys Asn Ser Ala Leu Glu 286

2063 TTG CCC TCA GTC CAC TTC CTG TGT GGC CAC TCC TTC CAC CAA CAC TGC 2110

287 Leu Pro Ser Val His Phe Leu Cys Gly His Ser Phe His Gln His Cys 302

2111 TTT GAG AGT TAC TCG GAA AGT GAT GCT GAC TGC CCC ACC TGC CTC CCT 2158

303 Phe Glu Ser Tyr Ser Glu Ser Asp Ala Asp Cys Pro Thr Cys Leu Pro 318

2159 GAA AAC CGG AAG GTC ATG GAT ATG ATC CGG GCC CAG GAA CAG AAA CGA 2206

319 Glu Asn Arg Lys Val Met Asp Met Ile Arg Ala Gln Glu Gln Lys Arg 334

2207 GAT CTC CAT GAT CAA TTC CAG CAT CAG CTC AAG TGC TCC AAT GAC AGC 2254

335 Asp Leu His Asp Gln Phe Gln His Gln Leu Lys Cys Ser Asn Asp Ser 350

2255 TTT TCT GTG ATT GCT GAC TAC TTT GGC AGA GGT GTT TTC AAC AAA TTG 2302

351 Phe Ser Val Ile Ala Asp Tyr Phe Gly Arg Gly Val Phe Asn Lys Leu 366

2303 ACT CTG CTG ACC GAC CCT CCC ACA GCC AGA CTG ACC TCA GCC TGG AGG 2350

367 Thr Leu Leu Thr Asp Pro Pro Thr Ala Arg Leu Thr Ser Ala Trp Arg 382

2351 CTG GGC TGC AAC GCG ACC TAC TCA TGC ACT CCA GGA GGG GCA CTT AAG 2398

383 Leu Gly Cys Asn Ala Thr Tyr Ser Cys Thr Pro Gly Gly Ala Leu Lys 398

2399 CAG CCT GGA GGA AGA TGT GGG CAA CAG TGG AGG ACC AAG AGA ACA GAC 2446

399 Gln Pro Gly Gly Arg Cys Gly Gln Gln Trp Arg Thr Lys Arg Thr Asp 414

2447 ACA ATG GGA CCT GGG CGG GCG TTA CAC AGA AGG CTG GCT GAC ATG CCC 2494

415 Thr Met Gly Pro Gly Arg Ala Leu His Arg Arg Leu Ala Asp Met Pro 430

2495 AGG GCT CCA CTC TCA TCT AAT GTC ACA GCC CTC AGA ACT AAA GCG GAC 2542

431 Arg Ala Pro Leu Ser Ser Asn Val Thr Ala Leu Arg Thr Lys Ala Asp 446

2543 TTT CTT TCC CTG CCT TCT TAT TTA GTC AGC TTG CCA TCC CTC CTC TTC 2590

447 Phe Leu Ser Leu Pro Ser Tyr Leu Val Ser Leu Pro Ser Leu Leu Phe 462

2591 ACT AGC AGT GTA GAT CAT TCC AGA TCA GTG GGG GAG GGC ACC TCA GCA 2638

463 Thr Ser Ser Val Asp His Ser Arg Ser Val Gly Glu Gly Thr Ser Ala 478

2639 ACC TCT GAG TGT GGA CAA TAG CTG CTT TCT TCT CTA TCC AAG AGC ACC 2686

479 Thr Ser Glu Cys Gly Gln *** 485

2687 AGG CTG TGC TTG GGT CCT TGC TCT CAG AGT CTA TAA ATA AAA GAA TAT 2734

2735 AAT GAA AAA AAA AAA AAA AAA A 2756

D.Blastp结果

Query＝PP3476(484个氨基酸)

＞SW：YRM2_CAEEL Q09600 caenorhabditis elegans.hypothetical 108.5 kd

protein r06f6.2 in chromosome ii.2/1996

长度＝950个氨基酸

分值＝111bits(276)，预计值＝7e-24

相同性＝71/258(27％)，相似性＝121/258(46％)，缺口＝36/258(13％)

Query：120 DKALVLCQMHDFQDGVLYLYEQGKLFQQIMHYHMQHEQYRQVISVCERHGEQDPSLWEQA 179

D AL + Q+ D + ++ + +++M YH + +I +C+

Sbjct：643 DAALQMAQLFDCTPVIEHILMRCHKSKELMMYHQKKRDLEAIIRLCQS------------ 690

Query：180 LSYFARKEEDCKEYVAAVLKHIENKNLMPPLLVVQTLAHNSTATLSVIRDYLVXXXXXXX 239

KEE IE + PL+V++ LA N T+S +RDY++

Sbjct：691 ----CSKEE------------IEASEQIHPLVVLELLAKNEHLTISSVRDYIIAWLRKQQ 734

Query：240 XXXXXDELRVRRYREETTRIRQEIQELKASPKIFQKTKCSICNSALELPSVHFLCGHSFH 299

D ++ + + ++ LK + +I Q TKCS C++ L+LP+VHFLC H++H

Sbjct：735 IIIEEDRNTIKENNKAMGELDGTVESLKFNAQIMQVTKCSACDTPLQLPTVHFLCKHAYH 794

Query：300 QHCFESYSESDAD-CPTCLPENRKVMDMIRAQEQKRDLHDQFQHQLKCSNDSFSVIADYF 358

HCFESY+ +D CP C + D R +E + +FQ +L +++ +IA Y

Sbjct：795 VHCFESYNMDGSDKCPAC----QTTRDTTRDEEIS---YHKFQKELAEASNGMELIAMYL 847

Query：359 GRGVFNKLTLLTDPPTAR 376

RG+F++ T T A+

Sbjct：848 QRGLFDEKTKKTKKSEAK 865

＞SW：END1_YEAST P12868 saccharomyces cerevisiae(baker′s yeast).

vacuolar biogenesis protein end1(pep5 protein).7/1998

长度＝1029个氨基酸

分值＝83.9bits(204)，预计值＝2e-15

相同性＝59/229(25％)，相似性＝101/229(43％)，缺口＝19/229(8％)

Query：155 HEQYRQVISVCERHGEQDPSLWEQALSYFARKEEDCKEYVA------AVLKHIENKNLMP 208

+E+ + E++G ++P L + ALSYF + KE VL+ I MP

Sbjct：795 NEEPSTCLKFLEKYGTEEPKLLQVALSYFVSNKLIFKEMGGNEVLKEKVLRPIIEGERMP 854

Query：209 PLLVVQTLAHNSTATLSVIRDYLVXXXXXXXXXXXXDELRVRRY----REETTRIRQEIQ 264

L +++ L+ + A +I+D ++ +E + Y +E+ +++ I

Sbjct：855 LLDIIKALSRTNVAHFGLIQDIIIDHVKTEDTEIKRNEKLIESYDKELKEKNKKLKNTIN 914

Query：265 ELKASPKIFQKTKCSICNSALELPSVHFLCGHSFHQHCF---ESYSESDA---DCPTCLP 318

+ + C +C L++P V F CGH +HQHC E ES+ CP CL

Sbjct：915 SDQPLHVPLKNQTCFMCRLTLDIPVVFFKCGHIYHQHCLNEEEDTLESERKLFKCPKCLV 974

Query：319 ENRKVMDMIRAQE---QKRDLHDQFQHQLKCSNDSFSVIADYFGRGVFN 364

+ + AQ +K DL + + + S D F VI ++ GRG +

Sbjct：975 DLETSNKLFEAQHEVVEKNDLLNFALNSEEGSRDRFKVITEFLGRGAIS 1023

＞SP_IN：076248 076248 drosophila melanogaster(fruit fly).light

protein.11/1998

长度＝841个氨基酸

分值＝44.9bits(104)，预计值＝0.001

相同性＝39/222(17％)，相似性＝90/222(39％)，缺口＝27/222(12％)

Query：107 ISLLKSGRFCDVFDKALVLCQMHDFQDGVLYL------YEQGKLFQQIMHYHMQHEQYRQ 160

+ LK + D+ +ALV+C+ +F ++YL E + I+H +

Sbjct：626 LPFLKRSKDYDI-QEALVICKQENFYPEIVYLLGCMGGVEASEALNIIIH---RIRDIEM 681

Query：161 VISVCERHGEQDPSLWEQALSYFARKEEDCKEYVAAVLKHIENKNLMPPLLVVQTLAHNS 220

I C+ H + D LW ++ F++ E + + ++ + ++ + + Q + +

Sbjct：682 AIEFCKEHDDSD--LWNALINEFSKHPEIVTKVLDGIVDYFSPAVVVGKIKMGQNIPNLR 739

Query：221 TATLSVIRDYLVXXXXXXXXXXXXDELRVRRYREETTRIRQEIQELKASPKIFQKTKCSI 280

+ + ++R Y ++++ Y E + I + + ++ + CS+

Sbjct：740 QSLIKMLRHY----NLQGEILSSAQQIQLNDYFEIHSEI---VTTQRRGQQVSYEQLCSL 792

Query：281 CNSALELPSVHFL------CGHSFHQHCFESYSESDADCPTC 316

C+ + + H CGH +H+ C + E +C C

Sbjct：793 CHRPVLMAGTHLYCIIRLECGHVYHKPCIQ--GELLKNCNEC 832

5.PP3731蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：13) 长度：1946bp

1 TGGCCGCCTC TGCTCCTCCC GACCGCAGCC CCTACCTCTC TCCCAGACTC

51 CAGTCGCCCG TGCCCACCGC TGCCCACGTG GCCTCTTTCC AGGCAGCAGC

101 CAGGGCTTCT GGCACGTCGG GCGCCAGCAC TGTCGCTTGT GGCCACGGCC

151 CGCAGAGCTT CAGTCCCTTG AGCTCCTCCT CCAGAGCAGG GCCGAGGGTC

201 TCGCCCCAGC CCGACTGGCT GTGCCTGCAG ATGATGCTGG TCACGCAGCT

251 TTTCGTTTCC CGGAACGCAG GTGGGATAGC AGTGCCCTTT TCTGGCAGTG

301 CGGCATTCTC TCTGGCAGTC ATTCCGCCCG GAGAGGCTCA TCTTGGGCGG

351 TTCTGGGCGA CAGCTGTGTG GCTGCACAGT GGCCAGTGAG AGGCATCTGG

401 GAAGGTGGCC CTTGTGTAGG GAGTCACTCT CCTTCCGTCA CGGTCACACC

451 TCATGAAATG GTTAGATTCT TCCAAGTGCC TTCTACGCCC CTGGCAGATT

501 TTCTAGAATT TGCCGTCCCA GAAGCTTGAG AAGTGTCCAG TGCCACCCGA

551 CAGCAGAAGC CGGGATGCCG CTGAGACGCC AGCGCTTCTG AGTCCCTCTC

601 ACTGCCTGCC TTCTGGTGGA GAGAAGGCTG TCCTGCGGGC TTATGCCCTC

651 CCCACGCTCC TCGCACCGTT CACGCCATTG TGCAGCACAG CTGTTAGGAC

701 CAAATTCATC TTCCCCGCAA GGACGAGTCA GGCCCAGTGT TGCACTGGTC

751 CTGCTGTCTG GCTTCTGCTG CGGAACTTCC TCACCTTCCA GGCAGGGCCC

801 AGGAGCCACA GGAGCGTGGG CGGGGCAGGG TCTGCCCTCT GTGCTTCCGA

851 CTCGCCGCTT GTGAGCTGGA GGGACAGTCA CCTCGACCTG GTGGGCTGGG

901 TGGGCCTGGC TGTGCTGTGG GCTGTGCCTC ACTCCTGCAA GTGGGCACTC

951 AGCGGGGTTG GGGTCACGAG GCTGAGGTCG GCTTAAAGCA GGAGTGGGCA

1001 GTTGGCACGT CATGTTTCTC CTGCATCAGG GCTGTGGCAG GAATGCCGGG

1051 TGACTACCGT AGACACTTGT CAAGGCTGAG GTTCAGAGAA AGGTGTGGGG

1101 TATCCCGGAG GTCACCACAG TGTGCCAGGA GGTTCAGGTT GGCCTTCCAG

1151 AGCCCGGCCT GTGTGAAATC CCCACGAGCA CAGAGGACAG AACGAAACAT

1201 GGTGTTGTTT TGAGACAGGG TGTTACTGTG TCACCCAGGC TGGAGTAGAG

1251 TGGTGCCACA TTTTTTGTAG AGACGGGGTG TCCCTGTGTA GCCCAGGCTG

1301 GTCTTGAACT CCTGGGTACA AGCAGTCCTC CCTCGTGGGC CTCCCAAAGT

1351 GCTGGGATTA CAGGCGTGGG CTCCCGTGAC CAGCCTGGAA CGTGCTGATG

1401 AGCCTCTTTT TCTCCTGAAA CCCCGGTGGG AACAGATGGT GGATGCTTCC

1451 AAAAGCATCG AAGCTGTCCA TGAGGACATC CGCGTGCTCT CTGAGGACGC

1501 CATCCGCACT GCCACAGAGA AGCCGCTGGG GGAGCTATGG AAGTGACCCA

1551 AGGCTGCCAC TGGAGACGCC TCTCCCTGCA GTCCCCCGAG AGGTGGGAGA

1601 CTCGCGGAAG GCCCTGTCCC CAGCGGAGTC CAGACCCCAC AACTTCAGGA

1651 GCTCTTTCCC GGCAGCAGAG ATCTGCAGGC TGCCTCTTCT GCCCCGGAGC

1701 TGGGGTGCAC TGGGGACCCC CGTGGTGGGG ACCTTGGCAG TGTGGACATG

1751 AGCAGAGCGA TGGAGCAGTC TCCTGCCCTC TCCCCTGTCC TGATGGCACT

1801 CTGTTGTATT TTCTTACTGA AGTTCAGTGA TAACTCTGAG CAGTTTCATT

1851 GTGATCACTG TAAATGGTAA TCAGTTGGAA TTCTCCTAAA TGTCTTCCAG

1901 ACACTAGTAA AAAACGACCT GAAAATTGAA AAAAAAAAAA AAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：14) 长度：102个氨基酸

1 MLPKASKLSM RTSACSLRTP SALPQRSRWG SYGSDPRLPL ETPLPAVPRE VGDSRKALSP

61 AESRPHNFRS SFPAAEICRL PLLPRSWGAL GTPVVGTLAV WT

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：15)

克隆号：PP3731

起始编码子：1443ATG 终止编码子：1751TGA

蛋白质分子量：11049

1 TG GCC GCC TCT GCT CCT CCC GAC CGC AGC CCC TAC CTC TCT CCC AGA 47

48 CTC CAG TCG CCC GTG CCC ACC GCT GCC CAC GTG GCC TCT TTC CAG GCA 95

96 GCA GCC AGG GCT TCT GGC ACG TCG GGC GCC AGC ACT GTC GCT TGT GGC 143

144 CAC GGC CCG CAG AGC TTC AGT CCC TTG AGC TCC TCC TCC AGA GCA GGG 191

192 CCG AGG GTC TCG CCC CAG CCC GAC TGG CTG TGC CTG CAG ATG ATG CTG 239

240 GTC ACG CAG CTT TTC GTT TCC CGG AAC GCA GGT GGG ATA GCA GTG CCC 287

288 TTT TCT GGC AGT GCG GCA TTC TCT CTG GCA GTC ATT CCG CCC GGA GAG 335

336 GCT CAT CTT GGG CGG TTC TGG GCG ACA GCT GTG TGG CTG CAC AGT GGC 383

384 GAG TGA GAG GCA TCT GGG AAG GTG GCC CTT GTG TAG GGA GTC ACT CTC 431

432 CTT CCG TCA CGG TCA CAC CTC ATG AAA TGG TTA GAT TCT TCC AAG TGC 479

480 CTT CTA CGC CCC TGG CAG ATT TTC TAG AAT TTG CCG TCC CAG AAG CTT 527

528 GAG AAG TGT CCA GTG CCA CCC GAC AGC AGA AGC CGG GAT GCC GCT GAG 575

576 ACG CCA GCG CTT CTG AGT CCC TCT CAC TGC CTG CCT TCT GGT GGA GAG 623

624 AAG GCT GTC CTG CGG GCT TAT GCC CTC CCC ACG CTC CTC GCA CCG TTC 671

672 ACG CCA TTG TGC AGC ACA GCT GTT AGG ACC AAA TTC ATC TTC CCC GCA 719

720 AGG ACG AGT CAG GCC CAG TGT TGC ACT GGT CCT GCT GTC TGG CTT CTG 767

768 CTG CGG AAC TTC CTC ACC TTC CAG GCA GGG CCC AGG AGC CAC AGG AGC 815

816 GTG GGC GGG GCA GGG TCT GCC CTC TGT GCT TCC GAC TCG CCG CTT GTG 863

864 AGC TGG AGG GAC AGT CAC CTC GAC CTG GTG GGC TGG GTG GGC CTG GCT 911

912 GTG CTG TGG GCT GTG CCT CAC TCC TGC AAG TGG GCA CTC AGC GGG GTT 959

960 GGG GTC ACG AGG CTG AGG TCG GCT TAA AGC AGG AGT GGG CAG TTG GCA 1007

1008 CGT CAT GTT TCT CCT GCA TCA GGG CTG TGG CAG GAA TGC CGG GTG ACT 1055

1056 ACC GTA GAC ACT TGT CAA GGC TGA GGT TCA GAG AAA GGT GTG GGG TAT 1103

1104 CCC GGA GGT CAC CAC AGT GTG CCA GGA GGT TCA GGT TGG CCT TCC AGA 1151

1152 GCC CGG CCT GTG TGA AAT CCC CAC GAG CAC AGA GGA CAG AAC GAA ACA 1199

1200 TGG TGT TGT TTT GAG ACA GGG TGT TAC TGT GTC ACC CAG GCT GGA GTA 1247

1248 GAG TGG TGC CAC ATT TTT TGT AGA GAC GGG GTG TCC CTG TGT AGC CCA 1295

1296 GGC TGG TCT TGA ACT CCT GGG TAC AAG CAG TCC TCC CTC GTG GGC CTC 1343

1344 CCA AAG TGC TGG GAT TAC AGG CGT GGG CTC CCG TGA CCA GCC TGG AAC 1391

1392 GTG CTG ATG AGC CTC TTT TTC TCC TGA AAC CCC GGT GGG AAC AGA TGG 1439

1440 TGG ATG CTT CCA AAA GCA TCG AAG CTG TCC ATG AGG ACA TCC GCG TGC 1487

1 Met Leu Pro Lys Ala Ser Lys Leu Ser Met Arg Thr Ser Ala Cys 15

1488 TCT CTG AGG ACG CCA TCC GCA CTG CCA CAG AGA AGC CGC TGG GGG AGC 1535

16 Ser Leu Arg Thr Pro Ser Ala Leu Pro Gln Arg Ser Arg Trp Gly Ser 31

1536 TAT GGA AGT GAC CCA AGG CTG CCA CTG GAG ACG CCT CTC CCT GCA GTC 1583

32 Tyr Gly Ser Asp Pro Arg Leu Pro Leu Glu Thr Pro Leu Pro Ala Val 47

1584 CCC CGA GAG GTG GGA GAC TCG CGG AAG GCC CTG TCC CCA GCG GAG TCC 1631

48 Pro Arg Glu Val Gly Asp Ser Arg Lys Ala Leu Ser Pro Ala Glu Ser 63

1632 AGA CCC CAC AAC TTC AGG AGC TCT TTC CCG GCA GCA GAG ATC TGC AGG 1679

64 Arg Pro His Asn Phe Arg Ser Ser Phe Pro Ala Ala Glu Ile Cys Arg 79

1680 CTG CCT CTT CTG CCC CGG AGC TGG GGT GCA CTG GGG ACC CCC GTG GTG 1727

80 Leu Pro Leu Leu Pro Arg Ser Trp Gly Ala Leu Gly Thr Pro Val Val 95

1728 GGG ACC TTG GCA GTG TGG ACA TGA GCA GAG CGA TGG AGC AGT CTC CTG 1775

96 Gly Thr Leu Ala Val Trp Thr *** 103

1776 CCC TCT CCC CTG TCC TGA TGG CAC TCT GTT GTA TTT TCT TAC TGA AGT 1823

1824 TCA GTG ATA ACT CTG AGC AGT TTC ATT GTG ATC ACT GTA AAT GGT AAT 1871

1872 CAG TTG GAA TTC TCC TAA ATG TCT TCC AGA CAC TAG TAA AAA ACG ACC 1919

1920 TGA AAA TTG AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1946

6.PP3856蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：16)长度：1198bp

1 GCCGCATCCA GGCGAGCGGG CAGCCTTTGT GGCCTATGCC TTGGCTTTTC

51 CCCGGGCCTT CCAGGGCCTC CTGGACACCT ACAGCGTGTG GAGGAGTGGT

101 CTCCCCAACT TCCTAGCAGT CGCCCTGGCC CTGGGAGAGC TGGGCTACCG

151 GGCAGTGGGC GTGAGGCTGG ACAGTGGTGA CCTGCTACAG CAGGCTCAGG

201 AGATCCGCAA GGTCTTCCGA GCTGCTGCAG CCCAGTGAGT TTCCCGGGGA

251 GGAGGTGTGC CTGGTGGGAG ATCCCCGGGG TTTGGGAATG GGCAGGGAAG

301 GACAGTGAGG TACTCTGCTG AAGTTTCAGC GGTGATACTG TAGGCCGTGG

351 CAGGGAAGTA AGTGGTGGGG CTCCCTAGGA GCTCCCAAGC AGAAGGTGAG

401 CACAGGTGTC CTTGACTGAG GCGGGGCGGG GAGCAGGGGG ACACCAGGGT

451 GAATCAGGAA GACCCGAGGG GTGGCCCCCA CCCTTTCTCC ACCCACGCGG

501 CAGGTTCCAG GTGCCCTGGC TGGAGTCAGT CCTCATCGTA GTCAGCAACA

551 ACATTGACGA GGAGGCGCTG GCCCGACTGG CCCAGGAGGG CAGTGAGGTG

601 AATGTCATTG GCATTGGCAC CAGTGTGGTC ACCTGCCCCC AACAGCCTTC

651 CCTGGGTGGT GTCTATAAGC TGGTGGCCGT GGGGGGCCAG CCACGAATGA

701 AGCTGACCGA GGACCCCGAG AAGCAGACGT TGCCTGGGAG CAAGGCTGCT

751 TTCCGGCTCC TGGGCTCTGA CGGGTCTCCA CTCATGGACA TGCTGCAGTT

801 AGCAGAAGAG CCAGTGCCAC AGGCTGGGCA GGAGCTGAGG GTGTGGCCTC

851 CAGGGGCCCA GGAGCCCTGC ACCGTGAGGC CAGCCCAGGT GGAGCCACTA

901 CTGCGGCTCT GCCTCCAGCA GGGACAGCTG TGTGAGCCGC TCCCATCCCT

951 GGCAGAGTAT AGAGCCTTGG CCCAGCTGTC CCTGAGCCGA CTCAGCCCTG

1001 AGCACAGGCG GCTGCGGAGC CCTGCCCAGT ACCAGGTGGT GCTGTCCGAA

1051 AGGCTGCAGG CCCTGGTGAA CAGTCTGTGT GCGGGGCAGT CCCCCTGAGA

1101 CTCGGAGCGG GGCTGACTGG AAACAACACG AATCACTCAC TTTTCCCCAA

1151 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：17) 长度：133个氨基酸

1 MKLTEDPEKQ TLPGSKAAFR LLGSDGSPLM DMLQLAEEPV PQAGQELRVW PPGAQEPCTV

61 RPAQVEPLLR LCLQQGQLCE PLPSLAEYRA LAQLSLSRLS PEHRRLRSPA QYQVVLSERL

121 QALVNSLCAG QSP

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：18)

克隆号：PP3856

起始编码子：697ATG 终止编码子：1098TGA

蛋白质分子量：14620

1 GCC GCA TCC AGG CGA GCG GGC AGC CTT TGT GGC CTA TGC CTT GGC TTT 48

49 TCC CCG GGC CTT CCA GGG CCT CCI GGA CAC CTA CAG CGT GTG GAG GAG 96

97 TGG TCT CCC CAA CTT CCT AGC AGT CGC CCT GGC CCT GGG AGA GCT GGG 144

145 CTA CCG GGC AGT GGG CGT GAG GCT GGA CAG TGG TGA CCT GCT ACA GCA 192

193 GGC TCA GGA GAT CCG CAA GGT CTT CCG AGC TGC TGC AGC CCA GTG AGT 240

241 TTC CCG GGG AGG AGG TGT GCC TGG TGG GAG ATC CCC GGG GTT TGG GAA 288

289 TGG GCA GGG AAG GAC AGT GAG GTA CTC TGC TGA AGT TTC AGC GGT GAT 336

337 ACT GTA GGC CGT GGC AGG GAA GTA AGT GGT GGG GCT CCC TAG GAG CTC 384

385 CCA AGC AGA AGG TGA GCA CAG GTG TCC TTG ACT GAG GCG GGG CGG GGA 432

433 GCA GGG GGA CAC CAG GGT GAA TCA GGA AGA CCC GAG GGG TGG CCC CCA 480

481 CCC TTT CTC CAC CCA CCC GGC AGG TTC CAG GTG CCC TGG CTG GAG TCA 528

529 GTC CTC ATC GTA GTC AGC AAC AAC ATT GAC GAG GAG GCG CTG GCC CGA 576

577 CTG GCC CAG GAG GGC AGT GAG GTG AAT GTC ATT GGC ATT GGC ACC AGT 624

625 GTG GTC ACC TGC CCC CAA CAG CCT TCC CTG GGT GGT GTC TAT AAG CTG 672

673 GTG GCC GTG GGG GGC CAG CCA CGA ATG AAG CTG ACC GAG GAC CCC GAG 720

1 Met Lys Leu Thr Glu Asp Pro Glu 8

721 AAG CAG ACG TTG CCT GGG AGC AAG GCT GCT TTC CGG CTC CTG GGC TCT 768

9 Lys Gln Thr Leu Pro Gly Ser Lys Ala Ala Phe Arg Leu Leu Gly Ser 24

769 GAC GGG TCT CCA CTC ATG GAC ATG CTG CAG TTA GCA GAA GAG CCA GTG 816

25 Asp Gly Ser Pro Leu Met Asp Met Leu Gln Leu Ala Glu Glu Pro Val 40

817 CCA CAG GCT GGG CAG GAG CTG AGG GTG TGG CCT CCA GGG GCC CAG GAG 864

41 Pro Gln Ala Gly Gln Glu Leu Arg Val Trp Pro Pro Gly Ala Gln Glu 56

865 CCC TGC ACC GTG AGG CCA GCC CAG GTG GAG CCA CTA CTG CGG CTC TGC 912

57 Pro Cys Thr Val Arg Pro Ala Gln Val Glu Pro Leu Leu Arg Leu Cys 72

913 CTC CAG CAG GGA CAG CTG TGT GAG CCG CTC CCA TCC CTG GCA GAG TAT 960

73 Leu Gln Gln Gly Gln Leu Cys Glu Pro Leu Pro Ser Leu Ala Glu Tyr 88

961 AGA GCC TTG GCC CAG CTG TCC CTG AGC CGA CTC AGC CCT GAG CAC AGG 1008

89 Arg Ala Leu Ala Gln Leu Ser Leu Ser Arg Leu Ser Pro Glu His Arg 104

1009 CGG CTG CGG AGC CCT GCC CAG TAC CAG GTG GTG CTG TCC GAA AGG CTG 1056

105 Arg Leu Arg Ser Pro Ala Gln Tyr Gln Val Val Leu Ser Glu Arg Leu 120

1057 CAG GCC CTG GTG AAC AGT CTG TGT GCG GGG CAG TCC CCC TGA GAC TCG 1104

121 Gln Ala Leu Val Asn Ser Leu Cys Ala Gly Gln Ser Pro *** 134

1105 GAG CGG GGC TGA CTG GAA ACA ACA CGA ATC ACT CAC TTT TCC CCA AAA 1152

1153 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 1198

7.PP3958蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：19) 长度：1643bp

1 GAAAGTTTTA AGCCCTTTTA GAAACCTAAT CATCACCAGT GGAGGTGATC

51 TTGAGAAGGG GTGAGCATCC CGAGAATGGC CACGATTCAG AATGAGCCAG

101 TCCCGTGTGG GGGCTGTAGA GAAGCGTGAT CAGAGCATAG TGTCCCTGGA

151 TGGATGGGCT ATGGAGGCTT TCCCTGCCTC TTTCTAGGCC CGCCTTTCTT

201 CCTCCCAACT CTTGACTCTG CAGCTCTTGG GGTGAAGCCT TATTCCTGAT

251 GCTCCAGACG ATCACCATCT GCTTCCTGGT CATGCACTAC AGAGGACAGA

301 CTGTGAAAGG TGCTGGGGAC TTACCCAAGA GCAGGCTGTG TGGTTCCTGG

351 GAACCCTGCT GGGAACTCAG GTCTGGGAAA GCCAAATGAT GTGGAGAGAT

401 TGACAAGGAC TCCTGTCTCC CCACCCCTAG GTGTCGCTTT CCTCGCTTGC

451 TACGGCCTGG TCCTGCTGGT GCTTCTCTCA CCTCTGACGC CCTTGACTGT

501 AGTCACCCTG CTCCAGGCCT CCAATGTGCC TGCTGTGGTG GTGGGGAGGG

551 TGGGTACCAG GAGCAAGGGA CAAGATGTTG TGGGGGCAGG GTCGGGGGGA

601 AGAGTAGAAG ATCAAAGTGT GGGGGTGTTG TACTTGGGGG AGCATGGGAA

651 GAGCTCAGGT GACAGAGCCA AAGGTCTCAA CTCCTCCCCT AGCTTCTCCA

701 GGCAGCCACC AACTACCACA ACGGGCACAC AGGCCAGCTC TCAGCCATCA

751 CAGTCTTCCT GCTGTTTGGG GGCTCCCTGG CCCGAATCTT CACTTCCATT

801 CAGGAAACCG GAGATCCCCT GATGGCTGGG ACCTTTGTGG TCTCCTCTCT

851 CTGCAACGGC CTCATCGCCG CCCAGCTGCT CTTCTACTGG AATGCAAAGC

901 CTCCCCACAA GCAGAAAAAG GCGCAGTAGA GCCAGCTACT GGAGTCATTC

951 CGTTTCCACT CATTCACCCA ACCTCAGGGT TCTCCCCATC TGAGCCAGCC

1001 TGCTGGTGTG ACTTACTCAT CCTCCATTCC TCTGCACTTG CAGACTTTCT

1051 GAGCCAGGGT TTTCTTTTAG TGGAAACAAA TGGTTGATGG ATCCAGATCC

1101 TTAGAAAAGG AGAGGATGGG GGTAGAGTCT CCCAAGCCAA AATTTTGACA

1151 TTTGAGTGCT TTCGTAAGCC CTGTACATGT ACTATTAATT CAGTCTGTAA

1201 TGCTGGAGCT AGTGGCATTG ACTGGGACCA TGGTCTACAG CATCACTAAC

1251 AACTTCCCAT TCAGGTGAGG GGCCCACCCT TCCACCCCAA GGGTAATACC

1301 CACAACTCTA ATGGGGATTA AGGTGAAGGA GGTTACAAGG CAGCAAAGTG

1351 GCCGGGCCCA GTGGCTTGCA CCTGTAACCC CAGCACTTTG GGAGGCCGAG

1401 GCGGGTGGAT CACCTGAGGT CAGGAGTTCG AACTGGCCAA CATGGTGAAA

1451 CCCCGTCTCT ACTAAAAATA CAAAATTAGC TGGGTGTGGT GATGGGCACC

1501 TGTAATCCCA GCTACTTGGG AGGCTGAGGC AGGAGAATCA CTTGAACCTG

1551 GGAGGCAGAG GTTGCAGTGA GCCAAGATTG CGCCACTGCA CTCCAGCCTG

1601 GGCAACAAGA GCGAAACTCA GTCTTAAAAA AAAAAAAAAA AAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：20) 长度：147个氨基酸

1 MGRAQVTEPK VSTPPLASPG SHQLPQRAHR PALSHHSLPA VWGLPGPNLH FHSGNRRSPD

61 GWDLCGLLSL QRPHRRPAAL LLECKASPQA EKGAVEPATG VIPFPLIHPT SGFSPSEPAC

121 WCDLLILHSS ALADFLSQGF LLVETNG

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：21)

克隆号：PP3958

起始编码子：644ATG 终止编码子：1087TGA

蛋白质分子量：15717

1 G AAA GTT TTA AGC CCT TTT AGA AAC CTA ATC ATC ACC AGT GGA GGT 46

47 GAT CTT GAG AAG GGG TGA GCA TCC CGA GAA TGG CCA CGA TTC AGA ATG 94

95 AGC CAG TCC CGT GTG GGG GCT GTA GAG AAG CGT GAT CAG AGC ATA GTG 142

143 TCC CTG GAT GGA TGG GCT ATG GAG GCT TTC CCT GCC TCT TTC TAG GCC 190

191 CGC CTT TCT TCC TCC CAA CTC TTG ACT CTG CAG CTC TTG GGG TGA AGC 238

239 CTT ATT CCT GAT GCT CCA GAC GAT CAC CAT CTG CTT CCT GGT CAT GCA 286

287 CTA CAG AGG ACA GAC TGT GAA AGG TGC TGG GGA CTT ACC CAA GAG CAG 334

335 GCT GTG TGG TTC CTG GGA ACC CTG CTG GGA ACT CAG GTC TGG GAA AGC 382

383 CAA ATG ATG TGG AGA GAT TGA CAA GGA CTC CTG TCT CCC CAC CCC TAG 430

431 GTG TCG CTT TCC TCG CTT GCT ACG GCC TGG TCC TGC TGG TGC TTC TCT 478

479 CAC CTC TGA CGC CCT TGA CTG TAG TCA CCC TGC TCC AGG CCT CCA ATG 526

527 TGC CTG CTG TGG TGG TGG GGA GGG TGG GTA CCA GGA GCA AGG GAC AAG 574

575 ATG TTG TGG GGG CAG GGT CGG GGG GAA GAG TAG AAG ATC AAA GTG TGG 622

623 GGG TGT TGT ACT TGG GGG AGC ATG GGA AGA GCT CAG GTG ACA GAG CCA 670

1 Met Gly Arg Ala Gln Val Thr Glu Pro 9

671 AAG GTC TCA ACT CCT CCC CTA GCT TCT CCA GGC AGC CAC CAA CTA CCA 718

10 Lys Val Ser Thr Pro Pro Leu Ala Ser Pro Gly Ser His Gln Leu Pro 25

719 CAA CGG GCA CAC AGG CCA GCT CTC AGC CAT CAC AGT CTT CCT GCT GTT 766

26 Gln Arg Ala His Arg Pro Ala Leu Ser His His Ser Leu Pro Ala Val 41

767 TGG GGG CTC CCT GGC CCG AAT CTT CAC TTC CAT TCA GGA AAC CGG AGA 814

42 Trp Gly Leu Pro Gly Pro Asn Leu His Phe His Ser Gly Asn Arg Arg 57

815 TCC CCT GAT GGC TGG GAC CTT TGT GGT CTC CTC TCT CTG CAA CGG CCT 862

58 Ser Pro Asp Gly Trp Asp Leu Cys Gly Leu Leu Ser Leu Gln Arg Pro 73

863 CAT CGC CGC CCA GCT GCT CTT CTA CTG GAA TGC AAA GCC TCC CCA CAA 910

74 His Arg Arg Pro Ala Ala Leu Leu Leu Glu Cys Lys Ala Ser Pro Gln 89

911 GCA GAA AAA GGC GCA GTA GAG CCA GCT ACT GGA GTC ATT CCG TTT CCA 958

90 Ala Glu Lys Gly Ala Val Glu Pro Ala Thr Gly Val Ile Pro Phe Pro 105

959 CTC ATT CAC CCA ACC TCA GGG TTC TCC CCA TCT GAG CCA GCC TGC TGG 1006

106 Leu Ile His Pro Thr Ser Gly Phe Ser Pro Ser Glu Pro Ala Cys Trp 121

1007 TGT GAC TTA CTC ATC CTC CAT TCC TCT GCA CTT GCA GAC TTT CTG AGC 1054

122 Cys Asp Leu Leu Ile Leu His Ser Ser Ala Leu Ala Asp Phe Leu Ser 137

1055 CAG GGT TTT CTT TTA GTG GAA ACA AAT GGT TGA TGG ATC CAG ATC CTT 1102

138 Gln Gly Phe Leu Leu Val Glu Thr Asn Gly *** 148

1103 AGA AAA GGA GAG GAT GGG GGT AGA GTC TCC CAA GCC AAA ATT TTG ACA 1150

1151 TTT GAG TGC TTT CGT AAG CCC TGT ACA TGT ACT ATT AAT TCA GTC TGT 1198

1199 AAT GCT GGA GCT AGT GGC ATT GAC TGG GAC CAT GGT CTA CAG CAT CAC 1246

1247 TAA CAA CTT CCC ATT CAG GTG AGG GGC CCA CCC TTC CAC CCC AAG GGT 1294

1295 AAT ACC CAC AAC TCT AAT GGG GAT TAA GGT GAA GGA GGT TAC AAG GCA 1342

1343 GCA AAG TGG CCG GGC CCA GTG GCT TGC ACC TGT AAC CCC AGC ACT TTG 1390

1391 GGA GGC CGA GGC GGG TGG ATC ACC TGA GGT CAG GAG TTC GAA CTG GCC 1438

1439 AAC ATG GTG AAA CCC CGT CTC TAC TAA AAA TAC AAA ATT AGC TGG GTG 1486

1487 TGG TGA TGG GCA CCT GTA ATC CCA GCT ACT TGG GAG GCT GAG GCA GGA 1534

1535 GAA TCA CTT GAA CCT GGG AGG CAG AGG TTG CAG TGA GCC AAG ATT GCG 1582

1583 CCA CTG CAC TCC AGC CTG GGC AAC AAG AGC GAA ACT CAG TCT TAA AAA 1630

1631 AAA AAA AAA AAA A 1643

8.PP3971蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：22) 长度：1588bp

1 TGGCTCAACA ATGCCTTCCA GGATGTGGAG TCAGAGAACG TCAACGTGGT

51 GAAGCGGCTG TTCAAGATCC AGAACCTCAA TGCCAGCACC GTCCGCACGG

101 TGATGGTGGC CGACTGCAGC CGCTTCGACA GCCCTGACCT GCTGCTGGAA

151 GCCGGTGACC CGCCACGTCC CCCTGCCGCA TCTTTGACCT GGGCAGCGAC

201 AACGAGGAGG TGGTGGCTGG CCCGGCCCCC GCCCACGCCA AGGAGGGCTT

251 GCGGCACTTT CTGGACCGCG TGCTGGAGGG GCGGGCGCAC AGCAGCTGTC

301 GGAGCGCATC TAGAGACCAA GGTGGCCGAG CTGCTGGCCC AGGGCACACC

351 AAGCCACCCG AGCGCAGTGC CACAGGCGCC AAGAGCAAGT ACCTCATCTT

401 CACCACTGGC TGCCTCACCT ACTCCCCACA CCAGATCGGC ATCAAGCAGA

451 TCCTGCCACA CCAGATGACC ACGGCAGGGC CCGTGCTGGG TGAGGGCCGG

501 GGCTCCGATG CCTTCTTCGA CGCGCTGGAC CACGTCATAG ACATACACGG

551 ACACATCATC GGCATGGGCC TGTCGCCCGA CAACAGGTAC CTGTACGTGA

601 ACAGCCGCGC CTGGCCCAAC GGTGCGGTGG TGGCCGACCC CATGCAGCCG

651 CCACCAATCG CGGAGGAGAT TGACCTGCTG GTGTTCGACC TCAAGACCAT

701 GCGGGAGGTG AGGCGGGCTC TGCGTGCGCA CCGCGCCTAC ACGCCCAACG

751 ACGAGTGCTT CTTCATCTTC CTGGACGTCA GCAGGGACTT CGTGGCCAGC

801 GGGGCGGAGG ACCGGCACGG CTACATCTGG GACCGCCACT ACAACATCTG

851 TCTGGCCAGG CTGCGGCACG AGGATGTGGT CAACTCAGTG GTCTTCAGTC

901 CCCAGGAGCA GGAGCTGCTG CTCACGGCCA GCGACGACGC CACCATCAAA

951 GCCTGGCGCT CCCCACGCAC CATGCGCGTC CTCCAGGCAC CTCGCCCACG

1001 GCCTCGCACC TTCTTCTCCT GGCTTGCCAG CCAGAGGCGC TTGAGGTGTG

1051 CTGGGTGCAC TGGAGCCACC GGGACCCCTT GAGGACATCG CCAGGCTCTG

1101 TGGCTTTTTC CCGAGCGGGA GAGGTGGAGA TGCTTATAGC AGTTACGCCT

1151 TAGGAAGGGG ACAACCAGGC CCCGCCACAC GCTCACACAC AAACCTGCTC

1201 ACGCAGCTGT GATGCTTGGC ACGGGGTGGC CAGTGCAGAT GGAGCCCAAG

1251 GCCCCCTCGG CCTCCTGGGC AACTTGGGGT ACACAGGATA CTGGGGGTGC

1301 CGCTCCTCAC TCAACCCCAG GCTAGGGGTA CACCTTGACC CAGCTGGCCT

1351 CGGCCCGGGG CACCTTCGGC TGGTCCTGTG GGGCCCTGGA CGGTGGCCCA

1401 GTGGTGGCAG GGGCTGCTCC TGGCTGTGGT TGTGCGCCCG GGGCTTGGGA

1451 GCGGCCGGTC ACGCTGCTGT GGGCCCGAGT GTGTTGCATG TCCACGCACC

1501 ACCCGTTCAG GGCCCTGAAT AAACAGTTGG CAACAGCAAA AAAAAAAAAA

1551 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：23) 长度：205个氨基酸

1 MTTAGPVLGE GRGSDAFFDA LDHVIDIHGH IIGMGLSPDN RYLYVNSRAW PNGAVVADPM

61 QPPPIAEEID LLVFDLKTMR EVRRALRAHR AYTPNDECFF IFLDVSRDFV ASGAEDRHGY

121 IWDRHYNICL ARLRHEDVVN SVVFSPQEQE LLLTASDDAT IKAWRSPRTM RVLQAPRPRP

181 RTFFSWLASQ RRLRCAGCTG ATGTP

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：24)

克隆号：PP3971

起始编码子：465ATG 终止编码子：1082TGA

蛋白质分子量：23135

1 TG GCT CAA CAA TGC CTT CCA GGA TGT GGA GTC AGA GAA CGT CAA CGT 47

48 GGT GAA GCG GCT GTT CAA GAT CCA GAA CCT CAA TGC CAG CAC CGT CCG 95

96 CAC GGT GAT GGT GGC CGA CTG CAG CCG CTT CGA CAG CCC TGA CCT GCT 143

144 GCT GGA AGC CGG TGA CCC GCC ACG TCC CCC TGC CGC ATC TTT GAC CTG 191

192 GGC AGC GAC AAC GAG GAG GTG GTG GCT GGC CCG GCC CCC GCC CAC GCC 239

240 AAG GAG GGC TTG CGG CAC TTT CTG GAC CGC GTG CTG GAG GGG CGG GCG 287

288 CAC AGC AGC TGT CGG AGC GCA TCT AGA GAC CAA GGT GGC CGA GCT GCT 335

336 GGC CCA GGG CAC ACC AAG CCA CCC GAG CGC AGT GCC ACA GGC GCC AAG 383

384 AGC AAG TAC CTC ATC TTC ACC ACT GGC TGC CTC ACC TAC TCC CCA CAC 431

432 CAG ATC GGC ATC AAG CAG ATC CTG CCA CAC CAG ATG ACC ACG GCA GGG 479

1 Met Thr Thr Ala Gly 5

480 CCC GTG CTG GGT GAG GGC CGG GGC TCC GAT GCC TTC TTC GAC GCG CTG 527

6 Pro Val Leu Gly Glu Gly Arg Gly Ser Asp Ala Phe Phe Asp Ala Leu 21

528 GAC CAC GTC ATA GAC ATA CAC GGA CAC ATC ATC GGC ATG GGC CTG TCG 575

22 Asp His Val Ile Asp Ile His Gly His Ile Ile Gly Met Gly Leu Ser 37

576 CCC GAC AAC AGG TAC CTG TAC GTG AAC AGC CGC GCC TGG CCC AAC GGT 623

38 Pro Asp Asn Arg Tyr Leu Tyr Val Asn Ser Arg Ala Trp Pro Asn Gly 53

624 GCG GTG GTG GCC GAC CCC ATG CAG CCG CCA CCA ATC GCG GAG GAG ATT 671

54 Ala Val Val Ala Asp Pro Met Gln Pro Pro Pro Ile Ala Glu Glu Ile 69

672 GAC CTG CTG GTG TTC GAC CTC AAG ACC ATG CGG GAG GTG AGG CGG GCT 719

70 Asp Leu Leu Val Phe Asp Leu Lys Thr Met Arg Glu Val Arg Arg Ala 85

720 CTG CGT GCG CAC CGC GCC TAC ACG CCC AAC GAC GAG TGC TTC TTC ATC 767

86 Leu Arg Ala His Arg Ala Tyr Thr Pro Asn Asp Glu Cys Phe Phe Ile 101

768 TTC CTG GAC GTC AGC AGG GAC TTC GTG GCC AGC GGG GCG GAG GAC CGG 815

102 Phe Leu Asp Val Ser Arg Asp Phe Val Ala Ser Gly Ala Glu Asp Arg 117

816 CAC GGC TAC ATC TGG GAC CGC CAC TAC AAC ATC TGT CTG GCC AGG CTG 863

118 His Gly Tyr Ile Trp Asp Arg His Tyr Asn Ile Cys Leu Ala Arg Leu 133

864 CGG CAC GAG GAT GTG GTC AAC TCA GTG GTC TTC AGT CCC CAG GAG CAG 911

134 Arg His Glu Asp Val Val Asn Ser Val Val Phe Ser Pro Gln Glu Gln 149

912 GAG CTG CTG CTC ACG GCC AGC GAC GAC GCC ACC ATC AAA GCC TGG CGC 959

150 Glu Leu Leu Leu Thr Ala Ser Asp Asp Ala Thr Ile Lys Ala Trp Arg 165

960 TCC CCA CGC ACC ATG CGC GTC CTC CAG GCA CCT CGC CCA CGG CCT CGC 1007

166 Ser Pro Arg Thr Met Arg Val Leu Gln Ala Pro Arg Pro Arg Pro Arg 181

1008 ACC TTC TTC TCC TGG CTT GCC AGC CAG AGG CGC TTG AGG TGT GCT GGG 1055

182 Thr Phe Phe Ser Trp Leu Ala Ser Gln Arg Arg Leu Arg Cys Ala Gly 197

1056 TGC ACT GGA GCC ACC GGG ACC CCT TGA GGA CAT CGC CAG GCT CTG TGG 1103

198 Cys Thr Gly Ala Thr Gly Thr Pro *** 206

1104 CTT TTT CCC GAG CGG GAG AGG TGG AGA TGC TTA TAG CAG TTA CGC CTT 1151

1152 AGG AAG GGG ACA ACC AGG CCC CGC CAC ACG CTC ACA CAC AAA CCT GCT 1199

1200 CAC GCA GCT GTG ATG CTT GGC ACG GGG TGG CCA GTG CAG ATG GAG CCC 1247

1248 AAG GCC CCC TCG GCC TCC TGG GCA ACT TGG GGT ACA CAG GAT ACT GGG 1295

1296 GGT GCC GCT CCT CAC TCA ACC CCA GGC TAG GGG TAC ACC TTG ACC CAG 1343

1344 CTG GCC TCG GCC CGG GGC ACC TTC GGC TGG TCC TGT GGG GCC CTG GAC 1391

1392 GGT GGC CCA GTG GTG GCA GGG GCT GCT CCT GGC TGT GGT TGT GCG CCC 1439

1440 GGG GCT TGG GAG CGG CCG GTC ACG CTG CTG TGG GCC CGA GTG TGT TGC 1487

1488 ATG TCC ACG CAC CAC CCG TTC AGG GCC CTG AAT AAA CAG TTG GCA ACA 1535

1536 GCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1583

1584 AAA AA 1588

9.PP4519蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：25) 长度：1353bp

1 GTGCCAGTCC ATCTGACATC AAAGCCAGTG TCTCTAATGG TGACACCACC

51 CTCCTCTGCA GCAGGAGGCA GAGCTGTGGG ATGAATGAGG TTCGCCAGGT

101 CTCCCTTACC TATCCTGGGT CCCCAGCTCC TTCTCACTCT CTTCCCTTGC

151 AGCCTCGAAG CGGAGGATCC CTGTGTCCCA GCCGGGCATG GCCGACCCCC

201 ACCAGCTTTT CGATGACACA AGTTCAGCCC AGAGCCGGGG CTATGGGGCC

251 CAGCGGGCAC CTGGTGGCCT GAGTTATCCT GCAGCCTCTC CCACGCCCCA

301 TGCAGCCTTC CTGGCTGACC CGGTGTCCAA CATGGCCATG GCCTATGGGA

351 GCAGCCTGGC CGCGCAGGGC AAGGAGCTGG TGGATAAGAA CATCGACCGC

401 TTCATCCCCA TCACCAAGCT CAAGTATTAC TTTGCTGTGG ACACCATGTA

451 TGTGGGCAGA AAGCTGGGCC TGCTGTTCTT CCCCTACCTA CACCAGGACT

501 GGGAAGTGCA GTACCAACAG GACACCCCGG TGGCCCCCCG CTTTGACGTC

551 AATGCCCCGG ACCTCTACAT TCCAGCAATG GCTTTCATCA CCTACGTTTT

601 GGTGGCTGGT CTTGCGCTGG GGACCCAGGA TAGGTTCTCC CCAGACCTCC

651 TGGGGCTGCA AGCGAGCTCA GCCCTGGCCT GGCTGACCCT GGAGGTGCTG

701 GCCATCCTGC TCAGCCTCTA TCTGGTCACT GTCAACACCG ACCTCACCAC

751 CATCGACCTG GTGGCCTTCT TGGGCTACAA ATATGTCGGG ATGATTGGCG

801 GGGTCCTCAT GGGCCTGCTC TTCGGGAAGA TTGGCTACTA CCTGGTGCTG

851 GGCTGGTGCT GCGTAGCCAT CTTTGTGTTC ATGATCCGGA CGCTGCGGCT

901 GAAGATCTTG GCAGACGCAG CAGCTGAGGG GGTCCCGGTG CGTGGGGCCC

951 GGAACCAGCT GCGCATGTAC CTGACCATGG CGGTGGCGGC GGCGCAGCCT

1001 ATGCTCATGT ACTGGCTCAC CTTCCACCTG GTGCGGTGAG CGCGCCCGCT

1051 GAACCTCCCG CTGCTGCTGC TGCTGCTGGG GGCCACTGTG GCCGCCGAAC

1101 TCATCTCCTG CCTGCAGGCC CCAAGGTCCA CCCTGTCTGG CCACAGGCAC

1151 CGCCTCCATC CCATGTCCCG CCCAGCCCCG CCCCCAACCC AAGGTGCTGA

1201 GAGATCTCCA GCTGCACAGG CCACCGCCCC AGGGCGTGGC CGCTGTTACA

1251 GAAACAATAA ACCCTGATGG GCATGGAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1301 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1351 AAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：26) 长度：283个氨基酸

1 MADPHQLFDD TSSAQSRGYG AQRAPGGLSY PAASPTPHAA FLADPVSNMA MAYGSSLAAQ

61 GKELVDKNID RFIPITKLKY YFAVDTMYVG RKLGLLFFPY LHQDWEVQYQ QDTPVAPRFD

121 VNAPDLYIPA MAFITYVLVA GLALGTQDRF SPDLLGLQAS SALAWLTLEV LAILLSLYLV

181 TVNTDLTTID LVAFLGYKYV GMIGGVLMGL LFGKIGYYLV LGWCCVAIFV FMIRTLRLKI

241 LADAAAEGVP VRGARNQLRM YLTMAVAAAQ PMLMYWLTFH LVR

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：27)

克隆号：PP4519

起始编码子：188ATG 终止编码子：1039TGA

蛋白质分子量：31173

1 G TGC CAG TCC ATC TGA CAT CAA AGC CAG TGT CTC TAA TGG TGA CAC 46

47 CAC CCT CCT CTG CAG CAG GAG GCA GAG CTG TGG GAT GAA TGA GGT TCG 94

95 CCA GGT CTC CCT TAC CTA TCC TGG GTC CCC AGC TCC TTC TCA CTC TCT 142

143 TCC CTT GCA GCC TCG AAG CGG AGG ATC CCT GTG TCC CAG CCG GGC ATG 190

1 Met 1

191 GCC GAC CCC CAC CAG CTT TTC GAT GAC ACA AGT TCA GCC CAG AGC CGG 238

2 Ala Asp Pro His Gln Leu Phe Asp Asp Thr Ser Ser Ala Gln Ser Arg 17

239 GGC TAT GGG GCC CAG CGG GCA CCT GGT GGC CTG AGT TAT CCT GCA GCC 286

18 Gly Tyr Gly Ala Gln Arg Ala Pro Gly Gly Leu Ser Tyr Pro Ala Ala 33

287 TCT CCC ACG CCC CAT GCA GCC TTC CTG GCT GAC CCG GTG TCC AAC ATG 334

34 Ser Pro Thr Pro His Ala Ala Phe Leu Ala Asp Pro Val Ser Asn Met 49

335 GCC ATG GCC TAT GGG AGC AGC CTG GCC GCG CAG GGC AAG GAG CTG GTG 382

50 Ala Met Ala Tyr Gly Ser Ser Leu Ala Ala Gln Gly Lys Glu Leu Val 65

383 GAT AAG AAC ATC GAC CGC TTC ATC CCC ATC ACC AAG CTC AAG TAT TAC 430

66 Asp Lys Asn Ile Asp Arg Phe Ile Pro Ile Thr Lys Leu Lys Tyr Tyr 81

431 TTT GCT GTG GAC ACC ATG TAT GTG GGC AGA AAG CTG GGC CTG CTG TTC 478

82 Phe Ala Val Asp Thr Met Tyr Val Gly Arg Lys Leu Gly Leu Leu Phe 97

479 TTC CCC TAC CTA CAC CAG GAC TGG GAA GTG CAG TAC CAA CAG GAC ACC 526

98 Phe Pro Tyr Leu His Gln Asp Trp Glu Val Gln Tyr Gln Gln Asp Thr 113

527 CCG GTG GCC CCC CGC TTT GAC GTC AAT GCC CCG GAC CTC TAC ATT CCA 574

114 Pro Val Ala Pro Arg Phe Asp Val Asn Ala Pro Asp Leu Tyr Ile Pro 129

575 GCA ATG GCT TTC ATC ACC TAC GTT TTG GTG GCT GGT CTT GCG CTG GGG 622

130 Ala Met Ala Phe Ile Thr Tyr Val Leu Val Ala Gly Leu Ala Leu Gly 145

623 ACC CAG GAT AGG TTC TCC CCA GAC CTC CTG GGG CTG CAA GCG AGC TCA 670

146 Thr Gln Asp Arg Phe Ser Pro Asp Leu Leu Gly Leu Gln Ala Ser Ser 161

671 GCC CTG GCC TGG CTG ACC CTG GAG GTG CTG GCC ATC CTG CTC AGC CTC 718

162 Ala Leu Ala Trp Leu Thr Leu Glu Val Leu Ala Ile Leu Leu Ser Leu 177

719 TAT CTG GTC ACT GTC AAC ACC GAC CTC ACC ACC ATC GAC CTG GTG GCC 766

178 Tyr Leu Val Thr Val Asn Thr Asp Leu Thr Thr Ile Asp Leu Val Ala 193

767 TTC TTG GGC TAC AAA TAT GTC GGG ATG ATT GGC GGG GTC CTC ATG GGC 814

194 Phe Leu Gly Tyr Lys Tyr Val Gly Met lle Gly Gly Val Leu Met Gly 209

815 CTG CTC TTC GGG AAG ATT GGC TAC TAC CTG GTG CTG GGC TGG TGC TGC 862

210 Leu Leu Phe Gly Lys Ile Gly Tyr Tyr Leu Val Leu Gly Trp Cys Cys 225

863 GTA GCC ATC TTT GTG TTC ATG ATC CGG ACG CTG CGG CTG AAG ATC TTG 910

226 Val Ala Ile Phe Val Phe Met Ile Arg Thr Leu Arg Leu Lys Ile Leu 241

911 GCA GAC GCA GCA GCT GAG GGG GTC CCG GTG CGT GGG GCC CGG AAC CAG 958

242 Ala Asp Ala Ala Ala Glu Gly Val Pro Val Arg Gly Ala Arg Asn Gln 257

959 CTG CGC ATG TAC CTG ACC ATG GCG GTG GCG GCG GCG CAG CCT ATG CTC 1006

258 Leu Arg Met Tyr Leu Thr Met Ala Val Ala Ala Ala Gln Pro Met Leu 273

1007 ATG TAC TGG CTC ACC TTC CAC CTG GTG CGG TGA GCG CGC CCG CTG AAC 1054

274 Met Tyr Trp Leu Thr Phe His Leu Val Arg *** 284

1055 CTC CCG CTG CTG CTG CTG CTG CTG GGG GCC ACT GTG GCC GCC GAA CTC 1102

1103 ATC TCC TGC CTG CAG GCC CCA AGG TCC ACC CTG TCT GGC CAC AGG CAC 1150

1151 CGC CTC CAT CCC ATG TCC CGC CCA GCC CCG CCC CCA ACC CAA GGT GCT 1198

1199 GAG AGA TCT CCA GCT GCA CAG GCC ACC GCC CCA GGG CGT GGC CGC TGT 1246

1247 TAC AGA AAC AAT AAA CCC TGA TGG GCA TGG AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1294

1295 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1342

1343 AAA AAA AAA AA 1353

D.Blastp结果

Query＝PP4519(283个氨基酸)

＞SP_IN：Q20913 Q20913 caenorhabditis elegans.f57a8.2 protein.1/1999

长度＝251个氨基酸

分值＝158bits(395)，预计值＝4e-38

相同性＝80/186(43％)，相似性＝113/186(60％)，缺口＝13/186(6％)

Query：15 QSRGYGAQRAPGGLSYPAASPTPHAAFLADPVSNMAMAYGSSLAAQGKELVDKNIDRFIP 74

Q+YG GG ++DP+ N A +G A Q KE + K + F

Sbjct：76 QQQSYGQNNGFGGFQ--------PQQLMSDPMLNAAKQFGGQFAEQQKEKLTKYLGTF-- 125

Query：75 ITKLKYYFAVDTMYVGRKLGLLFFPYLHQDWEVQYQQDTPVAP-RFDVNAPDLYIPAMAF 133

LKYYFAVD YVG+KLG+LFFP+ H+DW +++ AP R DVNAPDLYIP M+F

Sbjct：126 --NLKYYFAVDNAYVGKKLGILFFPFFHKDWSLKFAGSADPAPAREDVNAPDLYIPLMSF 183

Query：134 ITYVLVAGLALGTQDRFSPDLLGLQASSALAWLTLEVLAILLSLYLVTVNTDLTTIDLVA 193

+TY+LV+G LGTQ RFSP++LG+ S+AL W+ LE + I +S Y++ ++ L+ +A

Sbjct：184 LTYILVSGFVLGTQGRFSPEILGILTSNALIWVILENIVIFISKYILNISQSLSVWHSLA 243

Query：194 FLGYKY 199

+ YK+

Sbjct：244 YSTYKF 249

10.PP5241蛋白

A：核苷酸序(SEQ ID NO：28) 长度：1891bp

1 GGCACGGGGT GGATCACTTG AGGTCAGGAG TTCGAGACCA GCCTGACCAA

51 CACGATGAAA CCCTGTCTCT ACTGAAAATA CAAAAATTAG CTGGGTGTAG

101 TGGCAGGCAC CTGTAATCCC AGCTACTCAG GAGGCTGAGG CAGGAGAATT

151 GCTTGAACCC AGAAGGTTGC AGGGAGCCAA GATCACACCA CTGCACTCTG

201 TCTTAAAAAA AAATAATAAA TTAAAATAGA AAGTTAAAAC ATAGGAATAT

251 ATAAGCACAT ATTTCCTTAG CTATCAGAAA TGTGAGTGTG AAAAAGACAA

301 ATAATATGCT GGTGTCATAA TGAAAATAAT TTTAACCTTG CAGAGCCCCC

351 CAAGACCTTT AAAAACCTCT GGGCTGCGTG TCAGGATACA GTGGTCTCCA

401 AGCTAGGCAC AGTTCTTGCC TTTGTTGTAC TGGATGCTGT GGTGCTGTGG

451 AAGCCCATGG TGGGGGGTTG GGTCTAACAG ACTTGTGGCA TCAGGAAGGG

501 TACTTGGAGA GACAGACCTG AAGTGGAGAC TAGCCTGGGA CAACAGGTGT

551 AGTGGTGGAT GGAGCAGCAT GTGGGAGGCC CAGAGGCCTC ACCTGAAAAC

601 GTCAACGAAG CTCATAATGG CTGCGTGTTA ATATTGCATA TGCTGGGATG

651 ATACCAGCAG TTTGAGTTCT CTGGCTTCAG CGTGATATGA TTTTATCCAC

701 TTGTTTATTT TCAGAGGCAC ATGTAGCTGT TCTCAATTCC CTTCTCTGTA

751 TGACTTATAG GAAGCTAAAG GCTTCCTTGT GTTAGAGAGC TTCCTATTTC

801 AAGTGCTGAG CTGGGTTTGT CAAGCTTTGA AAATGCAGAC AGAGCCATGA

851 AACCTAAGGG GGACTCAGAG GAAGTGTCCA TGTGCAGGAG AGACAAGGCT

901 GAATTAAAAG GCATGATTAA TCACAAAAGA GTGGAAGAGT GATGCTTGAG

951 AGTTGAGGAC GTGAGTAAAA CAGAAGTAGA ACTGCTCATT TGATGTCATC

1001 ACGTTATCTC AAGATGAGCC CTCTTGGCCT CAGACAGTGG GTAGCATTAC

1051 ATTATATGTT AGCTCCGCGC CCCCACGCCC ACCCTCCTTC TTTGAAATGA

1101 TGTCTAAATT AGAGGTGTAA CTATCCCACC AGGTGCAACT TGAGCCTTCC

1151 TTTGCCCTCC TGTAGCTGTC GTGGGAGGGG GGCCTGCTTT CTTGGGCACA

1201 GACTGTTTGG TCAGCTGAGC CACAGAAATG AGGCCAGGCC TGTTTTGCTC

1251 TCTGTCTATG CTTGATTGCA AGGAACACTG ATGATATCAG AGGGCTTTCT

1301 TACCTCAAGC CCTTCTGGCT TAAGGACAAG GTTATTTCTT TCATTTCTGT

1351 CTGCAAACTG TGGTAGTGTA TTCGATTTCA AGGATTCTGG GATGAATTCT

1401 TCAATGATAA GAACCTGCTA TTATTGTCCC TGCTTTACAG CTCCAGGGAT

1451 TGGCAGCCTC ATTCTTCAAA AGTTGCACAC CTTTAGGGCC TTGGGAGGTA

1501 CAGGCACCAG CAAGGAGTCA GAAGGAATGA AAGCTGGAGA GATGCGGCCC

1551 ACACTGGAAA GACAGGAGGA AAGGAGAGAG AAAGCGCCTC GGCCAGGCAC

1601 AGTGGCTCAT GCCTGTAATC CCAGCACTTT GGGAGGCTGA GGCGGGAGAT

1651 CACCTGAGGT CAGGAGACTG AGACCAGCTT GACCAACATG GTGAAACCCC

1701 ATCTCTACTA AAAATACAAA ACTAGCCGGG CATGGTGGCG AGTGCCTGTA

1751 ATCTCCGCTA CTTAGGAGGC TGAGGCAGGA GAATTGCTTG AACCAGGAGG

1801 CGGAGGTTGC AGTGAGCTGA GATCGTGCCA TTGCACTCCA GCCTAGGCAA

1851 CAAGAGCAAA ACTGCATCTC AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：29)长度：119个氨基酸

1 MISEGFLTSS PSGLRTRLFL SFLSANCGSV FDFKDSGMNS SMIRTCYYCP CFTAPGIGSL

61 ILQKLHTFRA LGGTGTSKES EGMKAGEMRP TLERQEERRE KAPRPGTVAH ACNPSTLGG

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SFQ ID NO：30)

克隆号：PP5241

起始编码子：1281ATG 终止编码子：1640TGA

蛋白质分子量：12830

1 GG CAC GGG GTG GAT CAC TTG AGG TCA GGA GTT CGA GAC CAG CCT GAC 47

48 CAA CAC GAT GAA ACC CTG TCT CTA CTG AAA ATA CAA AAA TTA GCT GGG 95

96 TGT AGT GGC AGG CAC CTG TAA TCC CAG CTA CTC AGG AGG CTG AGG CAG 143

144 GAG AAT TGC TTG AAC CCA GAA GGT TGC AGG GAG CCA AGA TCA CAC CAC 191

192 TGC ACT CTG TCT TAA AAA AAA ATA ATA AAT TAA AAT AGA AAG TTA AAA 239

240 CAT AGG AAT ATA TAA GCA CAT ATT TCC TTA GCT ATC AGA AAT GTG AGT 287

288 GTG AAA AAG ACA AAT AAT ATG CTG GTG TCA TAA TGA AAA TAA TTT TAA 335

336 CCT TGC AGA GCC CCC CAA GAC CTT TAA AAA CCT CTG GGC TGC GTG TCA 383

384 GGA TAC AGT GGT CTC CAA GCT AGG CAC AGT TCT TGC CTT TGT TGT ACT 431

432 GGA TGC TGT GGT GCT GTG GAA GCC CAT GGT GGG GGG TTG GGT CTA ACA 479

480 GAC TTG TGG CAT CAG GAA GGG TAC TTG GAG AGA CAG ACC TGA AGT GGA 527

528 GAC TAG CCT GGG ACA ACA GGT GTA GTG GTG GAT GGA GCA GCA TGT GGG 575

576 AGG CCC AGA GGC CTC ACC TGA AAA CCT CAA CGA AGC TCA TAA TGG CTG 623

624 CGT GTT AAT ATT GCA TAT GCT GGG ATG ATA CCA GCA GTT TGA GTT CTC 671

672 TGG CTT CAG CGT GAT ATG ATT TTA TCC ACT TGT TTA TTT TCA GAG GCA 719

720 CAT GTA GCT GTT CTC AAT TCC CTT CTC TGT ATG ACT TAT AGG AAG CTA 767

768 AAG GCT TCC TTG TGT TAG AGA GCT TCC TAT TTC AAG TGC TGA GCT GGG 815

816 TTT GTC AAG CTT TGA AAA TGC AGA CAG AGC CAT GAA ACC TAA GGG GGA 863

864 CTC AGA GGA AGT GTC CAT GTG CAG GAG AGA CAA GGC TGA ATT AAA AGG 911

912 CAT GAT TAA TCA CAA AAG AGT GGA AGA GTG ATG CTT GAG AGT TGA GGA 959

960 CGT GAG TAA AAC AGA AGT AGA ACT GCT CAT TTG ATG TCA TCA CGT TAT 1007

1008 CTC AAG ATG AGC CCT CTT GGC CTC AGA CAG TGG GTA GCA TTA CAT TAT 1055

1056 ATG TTA GCT CCG CGC CCC CAC GCC CAC CCT CCT TCT TTG AAA TGA TGT 1103

1104 CTA AAT TAG AGG TGT AAC TAT CCC ACC AGG TGC AAC TTG AGC CTT CCT 1151

1152 TTG CCC TCC TGT AGC TGT CGT GGG AGG GGG GCC TGC TTT CTT GGG CAC 1199

1200 AGA CTG TTT GGT CAG CTG AGC CAC AGA AAT GAG GCC AGG CCT GTT TTG 1247

1248 CTC TCT GTC TAT GCT TGA TTG CAA GGA ACA CTG ATG ATA TCA GAG GGC 1295

1 Met Ile Ser Glu Gly 5

1296 TTT CTT ACC TCA AGC CCT TCT GGC TTA AGG ACA AGG TTA TTT CTT TCA 1343

6 Phe Leu Thr Ser Ser Pro Ser Gly Leu Arg Thr Arg Leu Phe Leu Ser 21

1344 TTT CTG TCT GCA AAC TGT GGT AGT GTA TTC GAT TTC AAG GAT TCT GGG 1391

22 Phe Leu Ser Ala Asn Cys Gly Ser Val Phe Asp Phe Lys Asp Ser Gly 37

1392 ATG AAT TCT TCA ATG ATA AGA ACC TGC TAT TAT TGT CCC TGC TTT ACA 1439

38 Met Asn Ser Ser Met Ile Arg Thr Cys Tyr Tyr Cys Pro Cys Phe Thr 53

1440 GCT CCA GGG ATT GGC AGC CTC ATT CTT CAA AAG TTG CAC ACC TTT AGG 1487

54 Ala Pro Gly Ile GIy Ser Leu Ile Leu Gln Lys Leu His Thr Phe Arg 69

1488 GCC TTG GGA GGT ACA GGC ACC AGC AAG GAG TCA GAA GGA ATG AAA GCT 1535

70 Ala Leu Gly Gly Thr Gly Thr Ser Lys Glu Ser Glu Gly Met Lys Ala 85

1536 GGA GAG ATG CGG CCC ACA CTG GAA AGA CAG GAG GAA AGG AGA GAG AAA 1583

86 Gly Glu Met Arg Pro Thr Leu Glu Arg Gln Glu Glu Arg Arg Glu Lys 101

1584 GCG CCT CGG CCA GGC ACA GTG GCT CAT GCC TGT AAT CCC AGC ACT TTG 1631

102 Ala Pro Arg Pro Gly Thr Val Ala His Ala Cys Asn Pro Ser Thr Leu 117

1632 GGA GGC TGA GGC GGG AGA TCA CCT GAG GTC AGG AGA CTG AGA CCA GCT 1679

118 Gly Gly *** 120

1680 TGA CCA ACA TGG TGA AAC CCC ATC TCT ACT AAA AAT ACA AAA CTA GCC 1727

1728 GGG CAT GGT GGC GAG TGC CTG TAA TCT CCG CTA CTT AGG AGG CTG AGG 1775

1776 CAG GAG AAT TGC TTG AAC CAG GAG GCG GAG GTT GCA GTG AGC TGA GAT 1823

1824 CGT GCC ATT GCA CTC CAG CCT AGG CAA CAA GAG CAA AAC TGC ATC TCA 1871

1872 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 1891

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它选自下组：

(a)编码在肝癌组织中具有表达差异的多肽的多核苷酸，所述的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组：

SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：30的编码区序列或全长序列。

4.一种载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的多核苷酸。

5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求4所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求1所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

6.如权利要求1所述的多核苷酸的用途，其特征在于，用于制备检测肝癌的试剂。