CN1193040C

CN1193040C - 具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

Info

Publication number: CN1193040C
Application number: CNB001157442A
Authority: CN
Inventors: 顾健人; 杨胜利
Original assignee: Shanghai Cancer Institute
Current assignee: Shanghai Cancer Institute
Priority date: 2000-05-18
Filing date: 2000-05-18
Publication date: 2005-03-16
Anticipated expiration: 2020-05-18
Also published as: CN1324819A

Abstract

本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

背景技术

人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组；SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞：(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

具体实施方式

本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP3895蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：2的蛋白质，但与SEQ ID NO：3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP3993蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：5的蛋白质，但与SEQ ID NO：6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO：2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。

编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。

上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。

可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失：(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。

在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，coldSpring Harbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。

本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。

具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。

在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。

本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。

本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。

可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。

本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。

药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。

本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。

本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。

与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。

抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。

多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。

能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。

具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。

检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。

简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。

将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes：a Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。

本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用

PP3895，PP3993，PP4052，PP4068，PP4135，PP4189，PP2500是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×10⁶cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H₂O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃24～48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2～3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。

cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况

cDNA克隆名称	CDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)
cDNA克隆名称	CDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)			PP3895	3	9	0	33	34	38
PP3993	17	8	12	35	24	32	PP3895	3	9	0	33	34	38
PP3993	17	8	12	35	24	32	PP4052	0	1	0	16	20	18
PP4068	0	1	1	27	30	23	PP4052	0	1	0	16	20	18
PP4068	0	1	1	27	30	23	PP4135	14	12	10	27	30	23
PP4189	6	5	9	27	30	23	PP4135	14	12	10	27	30	23
PP4189	6	5	9	27	30	23	PP2500	0	2	0	28	30	27

对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序。如仍未获得全长cDNA序列，则设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO：1、4、7、10、13、16、19)。

实施例2：从胎盘cDNA中通过PCR获得基因克隆：

取3、6、10月龄的人胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptH(GIBCO BRL)反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按90℃3′1个循环。94℃30秒，60℃30秒72℃1分钟，共35个循环，72℃10′1个循环进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，获得重组蛋白。

基因特异引物序列

克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)
克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)	PP3895	GGTTTACTGACACCCCCACCCCA	GCGCCCGGCCTCTTTTTATCCTT
PP3993	ACTTGCATTTGCCCTGACACCCA	GTTCTGCTTGGCCGAGCTGTTGA	PP3895	GGTTTACTGACACCCCCACCCCA	GCGCCCGGCCTCTTTTTATCCTT
PP3993	ACTTGCATTTGCCCTGACACCCA	GTTCTGCTTGGCCGAGCTGTTGA	PP4052	GTGTATGCTGCCCCCTTTCTGGG	ACAGGATGGTAGTGGCGATGGCA
PP4068	CTGGGCCCAAGGACAAAGCTCAC	ATCATGGGGCATGCACAGCATCT	PP4052	GTGTATGCTGCCCCCTTTCTGGG	ACAGGATGGTAGTGGCGATGGCA
PP4068	CTGGGCCCAAGGACAAAGCTCAC	ATCATGGGGCATGCACAGCATCT	PP4135	TGCCCCTAACCACTGAGACAGCA	CAACTGCACATTTTGCTCATGTA
PP4189	TCAAGGTTGCTCTCCAGCTCAAGG	GTTATTAGGCCCACCACTAAGAG	PP4135	TGCCCCTAACCACTGAGACAGCA	CAACTGCACATTTTGCTCATGTA
PP4189	TCAAGGTTGCTCTCCAGCTCAAGG	GTTATTAGGCCCACCACTAAGAG	PP2500	CTTGCTGCTCTTCTCGTTCCCGA	GCAGGGTCCTGGAACTTCTTGGC

实施例3：cDNA克隆序列分析

1.PP3895蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：1)长度：1972bp

1 GGTTTAGTGA CACCCCCACC CCACCCCATC TGCATATTTT TTCACCACCC

51 CTCCCTTCTG TATATGATGC TTCTGTAGCT CTGTAACGCC CCCTACATTT

101 ACCTTCCTTA TATCTCCCCC GTCTTCCTCT CCATAGATCT CCTCCCATTT

151 CCCCTTCCAT GGTCCCCATC TTCCTTCTGA AATGTCTACT CCTTCATGTT

201 CCTTTATGTA TGTCTTCCAA TCTTTCCTTC CATAGCTCTC ATCACCTTCA

251 TATATTTCTT CCATCTTTCT CCTCCCACCT GCCTCGCCCT CTGTATATAC

301 CCCCACTCTC CCCCTTTTAT ATCTTCTCCA TCTCCCCCCA TATCTTTCCT

351 CTATGTCCAC ATCTGTGTAT TCCCCCCAAC TTCCCCTCCA TATATCTTTT

401 TTTACTCCCC TTTTCCTCCC TGTATCCTCT GTGTTCCCCC CATCTTGCTC

451 TACATCATTC TTCCCAAGAT CTTTACGTCT CCCATCTTGA TCTCTCCATC

501 TCCACTTTCT CCTAACATTT TCATTTCCGT TCCTTAGTGT CTCTAGAGAG

551 ATCATTCTTG ATAGCCTCAG CTCTTTCTCT GTGTTTTTCA GGTTTGTATT

601 CTGCTCTGCT CTACCTCTCC TCCTTGCCCC TTTTCTCTCC CAGGATGTCT

651 CTCCTTTCCA AATCCTTTTT GTACCTGAAT ACCTTTTGCC CCACCCTGGG

701 CTCTCATTTC CATCTCAGAC CTTAGCCTGG GATCTAAAGG GCTGACAGTG

751 TCCCTTTCTT CATGCAGATG ACAGTCGTCT AGAGGAGCTC AAAGCCACTC

801 TGCCCAGCCC AGACAAGCTC CCTGGATTCA AGATGTACCC CATTGACTTT

851 GAGAAGGTAT GGGGTGGGGC TCAGGACAGG GAAGGAGGAT GGGCAAAGCA

901 TAGACAGGCT GGAGAAAACA GAAGTATCTG GAGCCAGCCC CGGGCCTTTG

951 TGGGGATCAG ATTGTGGGCC TGCCATATGG CTCTGAATGA GTAGGTGTTC

1001 CCAGCCATCC CTTTGTGATC TGGGAGAGTC CAGCAGGCAA TTGCAGTGGA

1051 GGATACACAT CTTCTTTATC TGATCCTCTC CCCACTGCCT TCACACCCTC

1101 CCCACTCATA ACAGGATGAT GACAGCAACT TTCATATGGA TTTCATCGTG

1151 GCTGCATCCA ACCTCCGGGC AGAAAACTAT GACATTCCTT CTGCAGACCG

1201 GCACAAGAGC AAGCTGATTG CAGGGAAGAT CATCCCAGCC ATTGCCACGA

1251 CCACAGCAGC CGTGGTTGGC CTTGTGTGTC TGGAGCTGTA CAAGGTTGTG

1301 CAGGGGCACC GACAGCTTGA CTCCTACAAG AATGGTTTCC TCAACTTGGC

1351 CCTGCCTTTC TTTGGTTTCT CTGAACCCCT TGCCGCACCA CGTCACCAGG

1401 TGGGGGCCTG CATCCGAAGC AGGGTTTGGG TGGGGTGTAT CTGTGTAGAT

1451 CTGGTTCTGA TTCACGTCAT ACCCTGTCAC CAGGGGAGGG TTTCTGTCTG

1501 TGTACCTACC CTTTTTGTGT ATCCTTTTTC ACTTATTCAT TAATCACATT

1551 ATTTGAGTAC GTGCGAAAAG ATGGGATATT TGAATTGTGC CCTGGGAGAT

1601 TATTAGTAAC TACACAATAA TGGCAGCCAA AATTTATTGG ACGCTTCCTA

1651 CACTTAAGTG CTTTGCTTGC TTCATTAATG AATTCACTCA AATATTTATT

1701 GAGCACCTTT TGTGGGCAGG GACTCTTCTA AGTTATGTTC CTCAAGTAGA

1751 TTATATAAAT AACCTATTAA ATGATTTTGG AATCAAAAAA GGATAAAAAG

1801 AGGCCGGGCG CGGTGGCTTA CGCCTGTAAT CCCAGCACTT TGGGAGGCCG

1851 AGGCACGTGG TTCACCTGAA GTCAGGAGTT TGAGACCAGC CTGGCCAACA

1901 TGATGAAACC CTGTCTCTAC TAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1951 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：2)长度：135个氨基酸

1 MDFIVAASNL RAENYDIPSA DRHKSKLIAG KIIPAIATTT AAVVGLVCLE LYKVVQGHRQ

61 LDSYKNGFLN LALPFFGFSE PLAAPRHQVG ACIRSRVWVG CICVDLVLIH VIPCHQGRVS

121 VCVPTLFVYP FSLIH

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：3)

克隆号：PP3895

起始编码子：1136 ATG 终止编码子：1543 TAA

蛋白质分子量：14799

1 G GTT TAC TGA CAC CCC CAC CCC ACC CCA TCT GCA TAT TTT TTC ACC 46

47 ACC CCT CCC TTC TGT ATA TGA TGC TTC TGT AGC TCT GTA ACG CCC CCT 94

95 ACA TTT ACC TTC CTT ATA TCT CCC CCG TCT TCC TCT CCA TAG ATC TCC 142

143 TCC CAT TTC CCC TTC CAT GGT CCC CAT CTT CCT TCT GAA ATG TCT ACT 190

191 CCT TCA TGT TCC TTT ATG TAT GTC TTC CAA TCT TTC CTT CCA TAG CTC 238

239 TCA TCA CCT TCA TAT ATT TCT TCC ATC TTT CTC CTC CCA CCT GCC TCG 286

287 CCC TCT GTA TAT ACC CCC ACT CTC CCC CTT TTA TAT CTT CTC CAT CTC 334

335 CCC CCA TAT CTT TCC TCT ATG TCC ACA TCT GTG TAT TCC CCC CAA CTT 382

383 CCC CTC CAT ATA TCT TTT TTT ACT CCC CTT TTC CTC CCT GTA TCC TCT 430

431 GTG TTC CCC CCA TCT TGC TCT ACA TCA TTC TTC CCA AGA TCT TTA CGT 478

479 CTC CCA TCT TGA TCT CTC CAT CTC CAC TTT CTC CTA ACA TTT TCA TTT 526

527 CCG TTC CTT AGT GTC TCT AGA GAG ATC ATT CTT GAT AGC CTC AGC TCT 574

575 TTC TCT GTG TTT TTC AGG TTT GTA TTC TGC TCT GCT CTA CCT CTC CTC 622

623 CTT GCC CCT TTT CTC TCC CAG GAT GTC TCT CCT TTC CAA ATC CTT TTT 670

671 GTA CCT GAA TAC CTT TTG CCC CAC CCT GGG CTC TCA TTT CCA TCT CAG 718

719 ACC TTA GCC TGG GAT CTA AAG GGC TGA CAG TGT CCC TTT CTT CAT GCA 766

767 GAT GAC AGT CGT CTA GAG GAG CTC AAA GCC ACT CTG CCC AGC CCA GAC 814

815 AAG CTC CCT GGA TTC AAG ATG TAC CCC ATT GAC TTT GAG AAG GTA TGG 862

863 GGT GGG GCT CAG GAC AGG GAA GGA GGA TGG GCA AAG CAT AGA CAG GCT 910

911 GGA GAA AAC AGA AGT ATC TGG AGC CAG CCC CGG GCC TTT GTG GGG ATC 958

959 AGA TTG TGG GCC TGC CAT ATG GCT CTG AAT GAG TAG GTG TTC CCA GCC 1006

1007 ATC CCT TTG TGA TCT GGG AGA GTC CAG CAG GCA ATT GCA GTG GAG GAT 1054

1055 ACA CAT CTT CTT TAT CTG ATC CTC TCC CCA CTG CCT TCA CAC CCT CCC 1102

1103 CAC TCA TAA CAG GAT GAT GAC AGC AAC TTT CAT ATG GAT TTC ATC GTG 1150

1 Met Asp Phe Ile Val 5

1151 GCT GCA TCC AAC CTC CGG GCA GAA AAC TAT GAC ATT CCT TCT GCA GAC 1198

6 Ala Ala Ser Asn Leu Arg Ala Glu Asn Tyr Asp Ile Pro Ser Ala Asp 21

1199 CGG CAC AAG AGC AAG CTG ATT GCA GGG AAG ATC ATC CCA GCC ATT GCC 1246

22 Arg His Lys Ser Lys Leu Ile Ala Gly Lys Ile Ile Pro Ala Ile Ala 37

1247 ACG ACC ACA GCA GCC GTG GTT GGC CTT GTG TGT CTG GAG CTG TAC AAG 1294

38 Thr Thr Thr Ala Ala Val Val Gly Leu Val Cys Leu Glu Leu Tyr Lys 53

1295 GTT GTG CAG GGG CAC CGA CAG CTT GAC TCC TAC AAG AAT GGT TTC CTC 1342

54 Val Val Gln Gly His Arg Gln Leu Asp Ser Tyr Lys Asn Gly Phe Leu 69

1343 AAC TTG GCC CTG CCT TTC TTT GGT TTC TCT GAA CCC CTT GCC GCA CCA 1390

70 Asn Leu Ala Leu Pro Phe Phe Gly Phe Ser Glu Pro Leu Ala Ala Pro 85

1391 CGT CAC CAG GTG GGG GCC TGC ATC CGA AGC AGG GTT TGG GTG GGG TGT 1438

86 Arg His Gln Val Gly Ala Cys Ile Arg Ser Arg Val Trp Val Gly Cys 101

1439 ATC TGT GTA GAT CTG GTT CTG ATT CAC GTC ATA CCC TGT CAC CAG GGG 1486

102 Ile Cys Val Asp Leu Val Leu Ile His Val Ile Pro Cys His Gln Gly 117

1487 AGG GTT TCT GTC TGT GTA CCT ACC CTT TTT GTG TAT CCT TTT TCA CTT 1534

118 Arg Val Ser Val Cys Val Pro Thr Leu Phe Val Tyr Pro Phe Ser Leu 133

1535 ATT CAT TAA TCA CAT TAT TTG AGT ACG TGC GAA AAG ATG GGA TAT TTG 1582

134 Ile His *** 136

1583 AAT TGT GCC CTG GGA GAT TAT TAG TAA CTA CAC AAT AAT GGC AGC CAA 1630

1631 AAT TTA TTG GAC GCT TCC TAC ACT TAA GTG CTT TGC TTG CTT CAT TAA 1678

1679 TGA ATT CAC TCA AAT ATT TAT TGA GCA CCT TTT GTG GGC AGG GAC TCT 1726

1727 TCT AAG TTA TGT TCC TCA AGT AGA TTA TAT AAA TAA CCT ATT AAA TGA 1774

1775 TTT TGG AAT CAA AAA AGG ATA AAA AGA GGC CGG GCG CGG TGG CTT ACG 1822

1823 CCT GTA ATC CCA GCA CTT TGG GAG GCC GAG GCA CGT GGT TCA CCT GAA 1870

1871 GTC AGG AGT TTG AGA CCA GCC TGG CCA ACA TGA TGA AAC CCT GTC TCT 1918

1919 ACT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1966

1967 AAA AAA 1972

2.PP3993蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：4)长度：2064bp

1 TTCAGACAAA CCTCAGGTAA GATGGGACTG GGCTTCCCCG CCACTGCGCA

51 GCAGCTCCCG CCCTCCTGGG TGCTGTCCCA GGGGTGAAAG GAAGAGGTGG

101 GGAGGTACAG CTGGGAGTGT GGGGGATGGG GAAGGATGGG GAGGGAACGG

151 GCCCGTGGAC AACTTGCATT TGCCCTGACA CCCACCCTCC CTGCAGCTCT

201 ACACCCTCAC CGTGATCGGC CCAGGACCGC CAGATTGCCA GCCAGCCCAG

251 ATCTCTCGCC GTTACTCGGA CTTTGAGCGG CTGCACCGAA ACCTGCAGCG

301 GCAATTCCGG GGCCCAATGG CTGCCATCTC CTTCCCCCGT AAGCGGCTGC

351 GCCGGAATTT TACTGCAGAG ACCATTGCCC GCCGTAGCCG GGCCTTTGAG

401 CAGTTTTTGG GTCACCTGCA GGCAGTGCCT GAGCTGCGCC ATGCCCCGGA

451 CCTGCAGGAC TTCTTCGTGC TGCCGGAGCT GCGGCGGGCA CAGAGCCTCA

501 CCTGTACTGG CCTCTATCGT GAGGCTCTGG CACTCTGGGC CAATGCCTGG

551 CAGCTGCAAG CCCAGCTGGG CACCCCCTCT GGCCCAGACC GCCCCCTGCT

601 GACCCTGGCT GGGCTGGCCG TGTGCCACCA GGAGCTGGAA GACCCTGGAG

651 AGGCCCGGGC ATGCTGTGAG AAGGCCCTGC AGCTGCTTGG GGACAAGAGC

701 CTCCACCCTT TGCTGGCACC CTTTCTGGAG GCCCATGTCC GGCTCTCCTG

751 GCGCCTGGGC CTGGACAAAC GTCAATCAGA GGCTCGGCTC CAAGCCCTGC

801 AGGAGGCAGG CCTTACCCCC ACACCACCCC CCAGTCTCAA AGAATTGCTC

851 ATCAAGGAGG TGCTGGACTA ACCCTTGCCT AGATTTAAGG CCACTGTGAG

901 GAGAGGGGTT GCCCCAGAAG GCAGGGGAAG GACCTGATGA GAACAGAATA

951 GCTGGGAGGC TGCAGAGGGT GCTGGGAGCC CCTAGAAGTT CCAAAAGAGA

1001 ATGTGAAGCA GATCAAGGAA ACTTCTGTTG AGCTAGGCTC AGGGTGAGCT

1051 TTGGCTGGGG TTGCCCTTGT GTAGTACAGG GAAGTCTGAC ACAGCCTCTC

1101 CAGCCTATAA ACAGCCGGGG GGCTGTGGCA CAGGTTGGGG CAATGTTCCC

1151 TTGTTGGTGG GCCCCCAAGC TGGCAAGGCC TCTTGGCTGA AGGCCAGGGA

1201 CTCTGCCCCT GGAGTCCTGG AGTTAAGGGA TGAAGGCAAG GCTGCAGGTC

1251 TGGCCCAGGG GAATTAAAAG CCAGCCACTC CAGTGGTATC AGTCTCTTTA

1301 TTGGATGTGA GGGCCAAAAG GGACTGTAAC TCCTGTCTCA GGAATGGGGA

1351 TAGATGGGAG GTTCTTGAAG CCCCAGGCGA AGCTGGTACC TCTGGCTACA

1401 GCTTGCTCTC TGAGACCTGG GGCTTCACTC GGATCACGCC CTCCTGGGCA

1451 CAGGTCACAG CTAGGACTCC ATCCTGACGC CACAGCCGCC CATGGACCAG

1501 CCCCCGAGAG CCACCTGTGG GTGAGGTGAA GGGTGATGAT GGCCTGCTTC

1551 AGAACAGCCA AATACACTTT TTTTTTTTTT CCTGAAACAG AGTCCCACTA

1601 AGTTGCCAGG CTGGTCTCAA GCCGCCTGGG TTCAAGGGAT CCTCCCGCCT

1651 CAGCCTCCTG AGCAGCTGGG ATTACAGGCG CACATCACCA TGCCCAACCT

1701 CCAAGTGGAC TTCTTGCAAA GGGTCTGGCC CAGGGCAGGG CTGCCCCACA

1751 CAAGGGTGCA CTGAGTGTCG TGGCTGCTCC AAATGCCCCT TCATGAGCTT

1801 ATTATGGACC GTCATTGAGG GGTAACTCCT CCCACAGGAA CCCCAGTTGA

1851 CAGTTTAAAA GCACTTTTAC ACCTCTCCTC GCTTCCTCAA AAAGATCACA

1901 GAGGGAGGAG CTCTGAGAAC AGTCTCCTTC AACAGCTCGG CCAAGCAGAA

1951 CTGCTGTACC TCTGACCACT TGTGTTAGGA AAACTATCGG CTCCCTGTAT

2001 AATAAATCAA GCCAGGTCCT CCCCAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

2051 AAAAAAAAAA AAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：5)长度：184个氨基酸

1 MAAISFPRKR LRRNFTAETI ARRSRAFEQF LGHLQAVPEL RHAPDLQDFF VLPELRRAQS

61 LTCTGLYREA LALWANAWQL QAQLGTPSGP DRPLLTLAGL AVCHQELEDP GEARACCEKA

121 LQLLGDKSLH PLLAPFLEAH VRLSWRLGLD KRQSEARLQA LQEAGLTPTP PPSLKELLIK

181 EVLD

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：6)

克隆号：PP3993

起始编码子：317 ATG 终止编码子：871 TAA

蛋白质分子量：20611

1 T TCA GAC AAA CCT CAG GTA AGA TGG GAC TGG GCT TCC CCG CCA CTG 46

47 CGC AGC AGC TCC CGC CCT CCT GGG TGC TGT CCC AGG GGT GAA AGG AAG 94

95 AGG TGG GGA GGT ACA GCT GGG AGT GTG GGG GAT GGG GAA GGA TGG GGA 142

143 GGG AAC GGG CCC GTG GAC AAC TTG CAT TTG CCC TGA CAC CCA CCC TCC 190

191 CTG CAG CTC TAC ACC CTC ACC GTG ATC GGC CCA GGA CCG CCA GAT TGC 238

239 CAG CCA GCC CAG ATC TCT CGC CGT TAC TCG GAC TTT GAG CGG CTG CAC 286

287 CGA AAC CTG CAG CGG CAA TTC CGG GGC CCA ATG GCT GCC ATC TCC TTC 334

1 Met Ala Ala Ile Ser Phe 6

335 CCC CGT AAG CGG CTG CGC CGG AAT TTT ACT GCA GAG ACC ATT GCC CGC 382

7 Pro Arg Lys Arg Leu Arg Arg Asn Phe Thr Ala Glu Thr Ile Ala Arg 22

383 CGT AGC CGG GCC TTT GAG CAG TTT TTG GGT CAC CTG CAG GCA GTG CCT 430

23 Arg Ser Arg Ala Phe Glu Gln Phe Leu Gly His Leu Gln Ala Val Pro 38

431 GAG CTG CGC CAT GCC CCG GAC CTG CAG GAC TTC TTC GTG CTG CCG GAG 478

39 Glu Leu Arg His Ala Pro Asp Leu Gln Asp Phe Phe Val Leu Pro Glu 54

479 CTG CGG CGG GCA CAG AGC CTC ACC TGT ACT GGC CTC TAT CGT GAG GCT 526

55 Leu Arg Arg Ala Gln Ser Leu Thr Cys Thr Gly Leu Tyr Arg Glu Ala 70

527 CTG GCA CTC TGG GCC AAT GCC TGG CAG CTG CAA GCC CAG CTG GGC ACC 574

71 Leu Ala Leu Trp Ala Asn Ala Trp Gln Leu Gln Ala Gln Leu Gly Thr 86

575 CCC TCT GGC CCA GAC CGC CCC CTG CTG ACC CTG GCT GGG CTG GCC GTG 622

87 Pro Ser Gly Pro Asp Arg Pro Leu Leu Thr Leu Ala Gly Leu Ala Val 102

623 TGC CAC CAG GAG CTG GAA GAC CCT GGA GAG GCC CGG GCA TGC TGT GAG 670

103 Cys His Gln Glu Leu Glu Asp Pro Gly Glu Ala Arg Ala Cys Cys Glu 118

671 AAG GCC CTG CAG CTG CTT GGG GAC AAG AGC CTC CAC CCT TTG CTG GCA 718

119 Lys Ala Leu Gln Leu Leu Gly Asp Lys Ser Leu His Pro Leu Leu Ala 134

719 CCC TTT CTG GAG GCC CAT GTC CGG CTC TCC TGG CGC CTG GGC CTG GAC 766

135 Pro Phe Leu Glu Ala His Val Arg Leu Ser Trp Arg Leu Gly Leu Asp 150

767 AAA CGT CAA TCA GAG GCT CGG CTC CAA GCC CTG CAG GAG GCA GGC CTT 814

151 Lys Arg Gln Ser Glu Ala Arg Leu Gln Ala Leu Gln Glu Ala Gly Leu 166

815 ACC CCC ACA CCA CCC CCC AGT CTC AAA GAA TTG CTC ATC AAG GAG GTG 862

167 Thr Pro Thr Pro Pro Pro Ser Leu Lys Glu Leu Leu Ile Lys Glu Val 182

863 CTG GAC TAA CCC TTG CCT AGA TTT AAG GCC ACT GTG AGG AGA GGG GTT 910

183 Leu Asp *** 185

911 GCC CCA GAA GGC AGG GGA AGG ACC TGA TGA GAA CAG AAT AGC TGG GAG 958

959 GCT GCA GAG GGT GCT GGG AGC CCC TAG AAG TTC CAA AAG AGA ATG TGA 1006

1007 AGC AGA TCA AGG AAA CTT CTG TTG AGC TAG GCT CAG GGT GAG CTT TGG 1054

1055 CTG GGG TTG CCC TTG TGT AGT ACA GGG AAG TCT GAC ACA GCC TCT CCA 1102

1103 GCC TAT AAA CAG CCG GGG GGC TGT GGC ACA GGT TGG GGC AAT GTT CCC 1150

1151 TTG TTG GTG GGC CCC CAA GCT GGC AAG GCC TCT TGG CTG AAG GCC AGG 1198

1199 GAC TCT GCC CCT GGA GTC CTG GAG TTA AGG GAT GAA GGC AAG GCT GCA 1246

1247 GGT CTG GCC CAG GGG AAT TAA AAG CCA GCC ACT CCA GTG GTA TCA GTC 1294

1295 TCT TTA TTG GAT GTG AGG GCC AAA AGG GAC TGT AAC TCC TGT CTC AGG 1342

1343 AAT GGG GAT AGA TGG GAG GTT CTT GAA GCC CCA GGC GAA GCT GGT ACC 1390

1391 TCT GGC TAC AGC TTG CTC TCT GAG ACC TGG GGC TTC ACT CGG ATC ACG 1438

1439 CCC TCC TGG GCA CAG GTC ACA GCT AGG ACT CCA TCC TGA CGC CAC AGC 1486

1487 CGC CCA TGG ACC AGC CCC CGA GAG CCA CCT GTG GGT GAG GTG AAG GGT 1534

1535 GAT GAT GGC CTG CTT CAG AAC AGC CAA ATA CAC TTT TTT TTT TTT TCC 1582

1583 TGA AAC AGA GTC CCA CTA AGT TGC CAG GCT GGT CTC AAG CCG CCT GGG 1630

1631 TTC AAG GGA TCC TCC CGC CTC AGC CTC CTG AGC AGC TGG GAT TAC AGG 1678

1679 CGC ACA TCA CCA TGC CCA ACC TCC AAG TGG ACT TCT TGC AAA GGG TCT 1726

1727 GGC CCA GGG CAG GGC TGC CCC ACA CAA GGG TGC ACT GAG TGT CGT GGC 1774

1775 TGC TCC AAA TGC CCC TTC ATG AGC TTA TTA TGG ACC GTC ATT GAG GGG 1822

1823 TAA CTC CTC CCA CAG GAA CCC CAG TTG ACA GTT TAA AAG CAC TTT TAC 1870

1871 ACC TCT CCT CGC TTC CTC AAA AAG ATC ACA GAG GGA GGA GCT CTG AGA 1918

1919 ACA GTC TCC TTC AAC AGC TCG GCC AAG CAG AAC TGC TGT ACC TCT GAC 1966

1967 CAC TTG TGT TAG GAA AAC TAT CGG CTC CCT GTA TAA TAA ATC AAG CCA 2014

2015 GGT CCT CCC CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2062

2063 AA 2064

3.PP4052蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：7)长度：1794bp

1 CTAAGAGAGC TTGGAAAGGG ATAGAGAAGT CTGACCCAAA TTTGCGGAGC

51 GACTGAGTGT ATGCTGCCCC CTTTCTGGGC CTTGGCTTCT TCCTCAATCA

101 TCTAGGCACA GTCCTATGAC TGCCTGTTTT TGAGGATGTG GGAAGGGTCT

151 GCAAATACAG TGCTTTCCCA TTGACACACG CTGGTGAGGA TGCAGGCTCC

201 CTGGCACCAG CAGTGAGGGC TCAGATTGCA AGAGTAAAAA CTTCCATCAC

251 TGGGAAGAGA AGTCTGCAGG GGACTGGAGG TGATCTGAAG ATTCTGAAAT

301 AACTCTTCCT CTCTCTGCAG AGAAGGATGG TGCTTCATCC TGTTTAGGTA

351 AGGGTGATAG CCAAGTGTGT TCAGGGTGGC TGCACCAACC CACCCTGAGT

401 CCATGTGGCT CAAGACTGCT GCTCAGGTGG GGTCAGCTGA GTGGGTAGGA

451 AGTCGGGAGG CACTGCCTAG CAGGTTTCAA CTTTAGTCTG GAGGCTGCAT

501 CTGTCTCCTC TAAACACAGT GGTTCTCATT GGTTATACCC CAAAATCACA

551 CCAGGAAACT TTAAAACTAG TGACGACTGA GTCCCGTCTC CAGAAACTCT

601 GACTTAATTG TGGGGGTGTG GCCTGGACAT CAGGATTTGT AATAACTCCT

651 CAGGTGATTC TCATGTAGTC AAGGTTGAGA ACCACTGCTT TAACTTTCTC

701 CAAATCCTAA TTACTTCTAG TGTGGCCTGA GGACTGCACT TTGAATGGCA

751 AGGGCCAAAT AACCAAGTTT TTGTTTTTTT CCAGGAAGTG GAGAAGAATT

801 TGGGGTTGGG ACTAGACTGG GGGTGAGCTG GGGAGATGGA AGATGGAAGT

851 GGGGTCAGTG GGAGGCAATG ATGGTAGGTA TCTTGGAAGA AGGATGCTTA

901 ATTTTAACAC GGAAAGACTG GAAGAAGGGA AGATACAAAG AGGTGGTCTC

951 CAGAAGACAG TCAGACAAAT AACAGAGCCT TAGAAATAAA ACCTTTTGGG

1001 CTGGGTGGCC CAGGTTCTCA ATTGCTGCCT CTACAGGAAA GTCTTTGGGT

1051 TCGGAGGATT CCAGAAACAT GAAGGAGAAG TTGGAGGACA TGGAGAGTGT

1101 CCTCAAGGAC CTGACAGAGG AGAAGAGAAA AGATGTGCTA AACTCCCTCG

1151 CTAAGTGCCT CGGCAAGGAG GATATTCGGC AGGATCTAGA GCAAAGAGTA

1201 TCTGAGGTCC TGATTTCCGG GGAGCTACAC ATGGAGGACC CAGACAAGCC

1251 TCTCCTAAGC AGCCTTTTTA ATGCTGCTGG GGTCTTGGTA GAAGCGCGTG

1301 CAAAAGCCAT TCTGGACTTC CTGGATGCCC TGCTAGAGCT GTCTGAAGAG

1351 CAGCAGTTTG TGGCTGAGGC CCTGGAGAAG GGGACCCTTC CTCTGTTGAA

1401 GGACCAGGTG AAATCTGTCA TGGAGCAGAA CTGGGATGAG CTGGCCAGCA

1451 GTCCTCCTGA CATGGACTAT GACCCTGAGG CACGAATTCT CTGTGCGCTG

1501 TATGTTGTTG TCTCTATCCT GCTGGAGCTG GCTGAGGGGC CTACCTCTGT

1551 CTCTTCCTAA CTACAAAAGC CCTTTCTCCC CACAAGCCTC TGGGTTTTCC

1601 CTTTACCAGT CTGTCCTCAC TGCCATCGCC ACTACCATCC TGTCACCAGT

1651 GGGACCTCTT TAAAACAAGC AGCCAACCAT TCTTTGATGT ATCCCATTCG

1701 CTCCATGTTA ACATCCAAAA CCAGCCTGGA TTTCATACAT GGACTTCTGA

1751 TTAAAAGTGG CAGGTTGTGC ATGTTAAAAA AAAAAAAAAA AAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：8)长度：163个氨基酸

1 MKEKLEDMES VLKDLTEEKR KDVLNSLAKC LGKEDIRQDL EQRVSEVLIS GELHMEDPDK

61 PLLSSLFNAA GVLVEARAKA ILDFLDALLE LSEEQQFVAE ALEKGTLPLL KDQVKSVMEQ

121 NWDELASSPP DMDYDPEARI LCALYVVVSI LLELAEGPTS VSS

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：9)

克隆号： PP4052

起始编码子：1069 ATG 终止编码子：1560 TAA

蛋白质分子量：18158

1 CTA AGA GAG CTT GGA AAG GGA TAG AGA AGT CTG ACC CAA ATT TGC GGA 48

49 GCG ACT GAG TGT ATG CTG CCC CCT TTC TGG GCC TTG GCT TCT TCC TCA 96

97 ATC ATC TAG GCA CAG TCC TAT GAC TGC CTG TTT TTG AGG ATG TGG GAA 144

145 GGG TCT GCA AAT ACA GTG CTT TCC CAT TGA CAC ACG CTG GTG AGG ATG 192

193 CAG GCT CCC TGG CAC CAG CAG TGA GGG CTC AGA TTG CAA GAG TAA AAA 240

241 CTT CCA TCA CTG GGA AGA GAA GTC TGC AGG GGA CTG GAG GTG ATC TGA 288

289 AGA TTC TGA AAT AAC TCT TCC TCT CTC TGC AGA GAA GGA TGG TGC TTC 336

337 ATC CTG TTT AGG TAA GGG TGA TAG CCA AGT GTG TTC AGG GTG GCT GCA 384

385 CCA ACC CAC CCT GAG TCC ATG TGG CTC AAG ACT GCT GCT CAG GTG GGG 432

433 TCA GCT GAG TGG GTA GGA AGT CGG GAG GCA CTG CCT AGC AGG TTT CAA 480

481 CTT TAG TCT GGA GGC TGC ATC TGT CTC CTC TAA ACA CAG TGG TTC TCA 528

529 TTG GTT ATA CCC CAA AAT CAC ACC AGG AAA CTT TAA AAC TAG TGA CGA 576

577 CTG AGT CCC GTC TCC AGA AAC TCT GAC TTA ATT GTG GGG GTG TGG CCT 624

625 GGA CAT CAG GAT TTG TAA TAA CTC CTC AGG TGA TTC TCA TGT AGT CAA 672

673 GGT TGA GAA CCA CTG CTT TAA CTT TCT CCA AAT CCT AAT TAC TTC TAG 720

721 TGT GGC CTG AGG ACT GCA CTT TGA ATG GCA AGG GCC AAA TAA CCA AGT 768

769 TTT TGT TTT TTT CCA GGA AGT GGA GAA GAA TTT GGG GTT GGG ACT AGA 816

817 CTG GGG GTG AGC TGG GGA GAT GGA AGA TGG AAG TGG GGT CAG TGG GAG 864

865 GCA ATG ATG GTA GGT ATC TTG GAA GAA GGA TGC TTA ATT TTA ACA CGG 912

913 AAA GAC TGG AAG AAG GGA AGA TAC AAA GAG GTG GTC TCC AGA AGA CAG 960

961 TCA GAC AAA TAA CAG AGC CTT AGA AAT AAA ACC TTT TGG GCT GGG TGG 1008

1009 CCC AGG TTC TCA ATT GCT GCC TCT ACA GGA AAG TCT TTG GGT TCG GAG 1056

1057 GAT TCC AGA AAC ATG AAG GAG AAG TTG GAG GAC ATG GAG AGT GTC CTC 1104

1 Met Lys Glu Lys Leu Glu Asp Met Glu Ser Val Leu 12

1105 AAG GAC CTG ACA GAG GAG AAG AGA AAA GAT GTG CTA AAC TCC CTC GCT 1152

13 Lys Asp Leu Thr Glu Glu Lys Arg Lys Asp Val Leu Asn Ser Leu Ala 28

1153 AAG TGC CTC GGC AAG GAG GAT ATT CGG CAG GAT CTA GAG CAA AGA GTA 1200

29 Lys Cys Leu Gly Lys Glu Asp Ile Arg Gln Asp Leu Glu Gln Arg Val 44

1201 TCT GAG GTC CTG ATT TCC GGG GAG CTA CAC ATG GAG GAC CCA GAC AAG 1248

45 Ser Glu Val Leu Ile Ser Gly Glu Leu His Met Glu Asp Pro Asp Lys 60

1249 CCT CTC CTA AGC AGC CTT TTT AAT GCT GCT GGG GTC TTG GTA GAA GCG 1296

61 Pro Leu Leu Ser Ser Leu Phe Asn Ala Ala Gly Val Leu Val Glu Ala 76

1297 CGT GCA AAA GCC ATT CTG GAC TTC CTG GAT GCC CTG CTA GAG CTG TCT 1344

77 Arg Ala Lys Ala Ile Leu Asp Phe Leu Asp Ala Leu Leu Glu Leu Ser 92

1345 GAA GAG CAG CAG TTT GTG GCT GAG GCC CTG GAG AAG GGG ACC CTT CCT 1392

93 Glu Glu Gln Gln Phe Val Ala Glu Ala Leu Glu Lys Gly Thr Leu Pro 108

1393 CTG TTG AAG GAC CAG GTG AAA TCT GTC ATG GAG CAG AAC TGG GAT GAG 1440

109 Leu Leu Lys Asp Gln Val Lys Ser Val Met Glu Gln Asn Trp Asp Glu 124

1441 CTG GCC AGC AGT CCT CCT GAC ATG GAC TAT GAC CCT GAG GCA CGA ATT 1488

125 Leu Ala Ser Ser Pro Pro Asp Met Asp Tyr Asp Pro Glu Ala Arg Ile 140

1489 CTC TGT GCG CTG TAT GTT GTT GTC TCT ATC CTG CTG GAG CTG GCT GAG 1536

141 Leu Cys Ala Leu Tyr Val Val Val Ser Ile Leu Leu Glu Leu Ala Glu 156

1537 GGG CCT ACC TCT GTC TCT TCC TAA CTA CAA AAG CCC TTT CTC CCC ACA 1584

157 Gly Pro Thr Ser Val Ser Ser *** 164

1585 AGC CTC TGG GTT TTC CCT TTA CCA GTC TGT CCT CAC TGC CAT CGC CAC 1632

1633 TAC CAT CCT GTC ACC AGT GGG ACC TCT TTA AAA CAA GCA GCC AAC CAT 1680

1681 TCT TTG ATG TAT CCC ATT CGC TCC ATG TTA ACA TCC AAA ACC AGC CTG 1728

1729 GAT TTC ATA CAT GGA CTT CTG ATT AAA AGT GGC AGG TTG TGC ATG TTA 1776

1777 AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1794

4.PP4068蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：10)长度：1949bp

1 GGAAGGCAAA GGTAGAGCAA CTGGATCTCT GGCTCTCCAC ATAGCTTCTG

51 ATCTCAGACC TTACTAAAAT GCTTTCTGGG CCCAAGGACA AAGCTCACAT

101 GAACAAATGA TTTTGAGTCA TGAATGAAAA ATCTTGCTCT TTCCATAGTA

151 AAGAAGAATT AAGAGATGGA CAGGGTGAAA GATTGTCTGC TGGATATTCT

201 CCATCATATG ACAAGGACAA GAGTGTTCTG GCTTTCAGAG GAATCCCTAT

251 CTCAGAGTTG AAGAACCATG GCATTCTCCA GGCTCTGACC ACAGAAGCTT

301 ATGAATGGGA GCCACGTGTT GTGAGTACAG AGGTGGTCAG AGCCCAAGAA

351 GAATGGGAAG CTGTGGACAC CATCCAGCCA GAGACAGGGA GCCAAGCTAG

401 CTCAGAGCAG CCTGGGCAGC TAATCTCCTT CGGTGAGGCC CTGCAGCACT

451 TCCAGACTGT GGACCTTTCC CCCTTCAAGA AAAGAATCCA GCCAACTATT

501 CGAAGGACTG GGCTCGCCGC CCTCCGACAC TACCTCTTCG GGCCTCCAAA

551 GCTCCACCAG CGCCTTCGGG AAGAAAGGGA CTTGGTCCTG ACCATTGCTC

601 AGTGAGCGAA TCCAGCCACA GACCTGAGAG GCGCAGGCTT CCTTGCCCTC

651 CTGCATCTGC TCTACCTGGT GATGGACTCA AAGACCTTGC CGATGGCGCA

701 GGAGATTTTC CGCCTGTCTC GTCACCACAT CCAGCAATTC CCTTTCTGTT

751 TGATGTCCGT GAACATCACC CACATTGCCA TCCAGGCCTT GAGAGAGGAG

801 TGTCTCTCCA GAGAGTGTAA TCGGCAGCAG AAGGTCATCC CCGTGGTGAA

851 CAGCTTCTAT GCCGCCACAT TCCTCCACCT CGCACATGTC TGGAGGACAC

901 AGCGGAAGAC CATCTCAGAC TCGGGCTTTG TCCTCAAAGA GTTGGAAGTA

951 TTGGCCAAGA AGAGCCCACG GCGGCTGCTC AAGACCCTGG AGCTGTACTT

1001 GGCCAGGGTG TCAAAGGGAC AGGCCTCCTT GTTGGGAGCA CAGAAGTGCT

1051 ATGGGCCAGA AGCCCCTCCC TTCAAGGATC TCACCTTCAC AGGTGAGAGT

1101 GACCTGCAGT CTCACTCATC CGAAGGCGTA TGGCTGATCT GACCTCCGAG

1151 ATGAATGGAG GCTTAAAGGC TGAGCTGCAG GGGCTTTCAG GGGGTCAGTG

1201 GAGCCATGTC AGGAGCCTGG CCAGGCCGCA CCCCTTGCTG TCTCAGCAGA

1251 TGGGATATAG GAAGCTCCTG GGCTTAGCTG TGGGAAGCCA AGTACCCTCA

1301 CCGGCATGGG ACATGAGGGG CAGCTAGACT TCACCCCCTT CCCGCAGACC

1351 TGCCTCCAGA GCAAGGAGAA TTCTGCCTTA ATCTGTTGGG CTCCAGTCTC

1401 CGGGTTGAAT TCCAGTGTAT CCCACTGGGA GTGAATGGAT CATGAGGTGG

1451 GATGGCCCCA TCTGGATGTT CTGCAGATCC CCACATGGGA GGAGATTCCC

1501 AAGTAGAGGC AGCCAGAATT CTGACTCCCT GGCAGCAGCA GGGCTTTCAG

1551 GCACCAGTGT CTGTGTTGTT AGAACTCAGA GGAAGAGGCA GGGGCAGCAG

1601 CCGACAGGGG GCAGCATGAC CCAAGCAAGG GGCCTGAGGC CTCAGTGGGG

1651 GTAGGGCAAG GAGGTACCTC ACAGGTGGGT GTGAGGCCCC CTCTGGAGTT

1701 TCTGGCCATT CACTTACCCA CTCTCTTCTC CCCCTGACCC CCGCTCCATT

1751 GTTTATGATG GAAAAACGGA CATTTGGCTA GGTGTCTCTC ACGGCTGCTC

1801 CATCCTAGCC CCCACAAGCT GGGGCTTCCT CCTGTAGATG CTGTGCATGC

1851 CCCATGATGA GTTTCTGGCC TAATTGAGGG AAGGAGGAAA TTCATACCAG

1901 CAGTTTTCAA ATAAAAGAAT TGTTCTAATT AAAAAAAAAA AAAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：11)长度：161个氨基酸

1 MNEKSCSFHS KEELRDGQGE RLSAGYSPSY DKDKSVLAFR GIPISELKNH GILQALTTEA

61 YEWEPRVVST EVVRAQEEWE AVDTIQPETG SQASSEQPGQ LISFGEALQH FQTVDLSPFK

121 KRIQPTIRRT GLAALRHYLF GPPKLHQRLR EERDLVLTIA Q

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：12)

克隆号：PP4068

起始编码子：120 ATG 终止编码子：605 TGA

蛋白质分子量：18261

1 GG AAG GCA AAG GTA GAG CAA CTG GAT CTC TGG CTC TCC ACA TAG CTT 47

48 CTG ATC TCA GAC CTT ACT AAA ATG CTT TCT GGG CCC AAG GAC AAA GCT 95

96 CAC ATG AAC AAA TGA TTT TGA GTC ATG AAT GAA AAA TCT TGC TCT TTC 143

1 Met Asn Glu Lys Ser Cys Ser Phe 8

144 CAT AGT AAA GAA GAA TTA AGA GAT GGA CAG GGT GAA AGA TTG TCT GCT 191

9 His Ser Lys Glu Glu Leu Arg Asp Gly Gln Gly Glu Arg Leu Ser Ala 24

192 GGA TAT TCT CCA TCA TAT GAC AAG GAC AAG AGT GTT CTG GCT TTC AGA 239

25 Gly Tyr Ser Pro Ser Tyr Asp Lys Asp Lys Ser Val Leu Ala Phe Arg 40

240 GGA ATC CCT ATC TCA GAG TTG AAG AAC CAT GGC ATT CTC CAG GCT CTG 287

41 Gly Ile Pro Ile Ser Glu Leu Lys Asn His Gly Ile Leu Gln Ala Leu 56

288 ACC ACA GAA GCT TAT GAA TGG GAG CCA CGT GTT GTG AGT ACA GAG GTG 335

57 Thr Thr Glu Ala Tyr Glu Trp Glu Pro Arg Val Val Ser Thr Glu Val 72

336 GTC AGA GCC CAA GAA GAA TGG GAA GCT GTG GAC ACC ATC CAG CCA GAG 383

73 Val Arg Ala Gln Glu Glu Trp Glu Ala Val Asp Thr Ile Gln Pro Glu 88

384 ACA GGG AGC CAA GCT AGC TCA GAG CAG CCT GGG CAG CTA ATC TCC TTC 431

89 Thr Gly Ser Gln Ala Ser Ser Glu Gln Pro Gly Gln Leu Ile Ser Phe 104

432 GGT GAG GCC CTG CAG CAC TTC CAG ACT GTG GAC CTT TCC CCC TTC AAG 479

105 Gly Glu Ala Leu Gln His Phe Gln Thr Val Asp Leu Ser Pro Phe Lys 120

480 AAA AGA ATC CAG CCA ACT ATT CGA AGG ACT GGG CTC GCC GCC CTC CGA 527

121 Lys Arg Ile Gln Pro Thr Ile Arg Arg Thr Gly Leu Ala Ala Leu Arg 136

528 CAC TAC CTC TTC GGG CCT CCA AAG CTC CAC CAG CGC CTT CGG GAA GAA 575

137 His Tyr Leu Phe Gly Pro Pro Lys Leu His Gln Arg Leu Arg Glu Glu 152

576 AGG GAC TTG GTC CTG ACC ATT GCT CAG TGA GCG AAT CCA GCC ACA GAC 623

153 Arg Asp Leu Val Leu Thr Ile Ala Gln *** 162

624 CTG AGA GGC GCA GGC TTC CTT GCC CTC CTG CAT CTG CTC TAC CTG GTG 671

672 ATG GAC TCA AAG ACC TTG CCG ATG GCG CAG GAG ATT TTC CGC CTG TCT 719

720 CGT CAC CAC ATC CAG CAA TTC CCT TTC TGT TTG ATG TCC GTG AAC ATC 767

768 ACC CAC ATT GCC ATC CAG GCC TTG AGA GAG GAG TGT CTC TCC AGA GAG 815

816 TGT AAT CGG CAG CAG AAG GTC ATC CCC GTG GTG AAC AGC TTC TAT GCC 863

864 GCC ACA TTC CTC CAC CTC GCA CAT GTC TGG AGG ACA CAG CGG AAG ACC 911

912 ATC TCA GAC TCG GGC TTT GTC CTC AAA GAG TTG GAA GTA TTG GCC AAG 959

960 AAG AGC CCA CGG CGG CTG CTC AAG ACC CTG GAG CTG TAC TTG GCC AGG 1007

1008 GTG TCA AAG GGA CAG GCC TCC TTG TTG GGA GCA CAG AAG TGC TAT GGG 1055

1056 CCA GAA GCC CCT CCC TTC AAG GAT CTC ACC TTC ACA GGT GAG AGT GAC 1103

1104 CTG CAG TCT CAC TCA TCC GAA GGC GTA TGG CTG ATC TGA CCT CCG AGA 1151

1152 TGA ATG GAG GCT TAA AGG CTG AGC TGC AGG GGC TTT CAG GGG GTC AGT 1199

1200 GGA GCC ATG TCA GGA GCC TGG CCA GGC CGC ACC CCT TGC TGT CTC AGC 1247

1248 AGA TGG GAT ATA GGA AGC TCC TGG GCT TAG CTG TGG GAA GCC AAG TAC 1295

1296 CCT CAC CGG CAT GGG ACA TGA GGG GCA GCT AGA CTT CAC CCC CTT CCC 1343

1344 GCA GAC CTG CCT CCA GAG CAA GGA GAA TTC TGC CTT AAT CTG TTG GGC 1391

1392 TCC AGT CTC CGG GTT GAA TTC CAG TGT ATC CCA CTG GGA GTG AAT GGA 1439

1440 TCA TGA GGT GGG ATG GCC CCA TCT GGA TGT TCT GCA GAT CCC CAC ATG 1487

1488 GGA GGA GAT TCC CAA GTA GAG GCA GCC AGA ATT CTG ACT CCC TGG CAG 1535

1536 CAG CAG GGC TTT CAG GCA CCA GTG TCT GTG TTG TTA GAA CTC AGA GGA 1583

1584 AGA GGC AGG GGC AGC AGC CGA CAG GGG GCA GCA TGA CCC AAG CAA GGG 1631

1632 GCC TGA GGC CTC AGT GGG GGT AGG GCA AGG AGG TAC CTC ACA GGT GGG 1679

1680 TGT GAG GCC CCC TCT GGA GTT TCT GGC CAT TCA CTT ACC CAC TCT CTT 1727

1728 CTC CCC CTG ACC CCC GCT CCA TTG TTT ATG ATG GAA AAA CGG ACA TTT 1775

1776 GGC TAG GTG TCT CTC ACG GCT GCT CCA TCC TAG CCC CCA CAA GCT GGG 1823

1824 GCT TCC TCC TGT AGA TGC TGT GCA TGC CCC ATG ATG AGT TTC TGG CCT 1871

1872 AAT TGA GGG AAG GAG GAA ATT CAT ACC AGC AGT TTT CAA ATA AAA GAA 1919

1920 TTG TTC TAA TTA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1949

5.PP4135蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：13)长度：1585bp

1 CATACTTGGT CTATCTTCTA CTTTGTCTTC TCTTAGGACC CAAGGTCTCT

51 TAGCACAAAC ACTGCCTCTT GAGTTCCCAG TGCATCTGTA TCAATCTGGA

101 GATTACGTCC TCATCAAAAG CTGGAAAGAA GAAAAACTCG AACCAACCTG

151 GGAGACCTTA TCTAGTGCCC CTAACCACTG AGACAGCAGT CTGGACCGTT

201 AAGAAAGGGT AGACCCATCA CACTCAGGTG AAAAAGGCAT GACCCCCTTT

251 GGAGGCATAG GTTGTCACTC CCGGGCCAAC ACCTTCCAAA CTAATATTCA

301 AAAAAACTTA ACCTGTCTAA TTTGCTTCCT CTTTCTTTCG TTAGCTACCC

351 AGGAACATTT TATTTTATCA ATGTAACCTG ATCATCGTTT CCTCAAACAA

401 TTACATTTGA TGCTTGTCTT GTTATGCCCT GTGGGGACCT ACAAACCCAA

451 AGGCAACTAG CCTCTTCAGG CAATAACATA CAGGACATAG GAATGGGCAA

501 AGACTTCATG ACTAAAACAC CAAAAGCAAC AGCAACAAAA GCCAAAATTG

551 ACAAATGGGA TCTAATTAAA CTAAAGAGAT TCTGCGCAGC AAAGGAAACT

601 ATCATCAGAG TGAACAGGCA ACCTACAGAA TGGGAGAAAA TTTTTGCAAT

651 CTATCCATTT GACAAAGGGC TAATATCCAG AATCTATAAA GAACTTAAAT

701 TTACAAGAAA AAAACAACCC CATCAAAAAG CGGGCGAAGG ATATGAACAG

751 ACACTTCTCC AAAGAAGACA TTTATGCAGC CAACAAACAT GAAAAATAGC

801 TGATCATCAC TGGTCATTAT AGAAATGCAA ATCAAAACCA CAGTAAGATA

851 CTAACTCATG CCAGTTAGAA TGGCGATCAT TAAAAAGTCA GGAAACAACA

901 GATGCTGGAG AGGATGTGCA GAAATAGGAA TGCTTTTTAT ACTGTTGGTG

951 AAAGTGTAAA TTAGTTCAAC CATTGTGGAA GACAGTGTGG CGATTCCTCA

1001 AGGATCTATA GAACCAGAAC TACCACATGA CCCAGCAATC CCATTACTGG

1051 GTATATACCC AAAGGATTAT ACATCATTCT GCTATAAAGA CACATGCACA

1101 CGTACGTTTA TTGCAGCACT ATTTACAATA GCAAAGACTT GGAATCAACC

1151 CAAATCCCCG TCAATGATAG ACTGGATAAA GACAATGTGG CACTTATACA

1201 CCATGGAATA CTATGCAGCC AAAAAAAGGA TGAATTCATG TCCTTTGCAG

1251 CGACATGGAT GAAGCTGAAA ACCATCATTC TCAGCAAACT AACACGAGAA

1301 CAGAAAACCA AACACTACAT GTTCTCACTC ATAAGTGGGA GTTGAACAAT

1351 GAGAACACAT GGACACACGG AGGGGAACAC CACACACCAG GGCCTGTCGG

1401 CGGGTGGGGA GGCTAGGGGA GGGATAGCAT TAGGAGAAAT ACCTAATGTA

1451 GATGACAGGT TGATGGGTCT GACAAACCAC CATGACACGT GTATACCTAT

1501 GTAATGCAAC TGCACATTTT GCTCATGTAC CCCAGAACTT AAACTATAAT

1551 TAAAAACACA TAATTTCAAA AAAAAAAAAA AAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：14)长度：122个氨基酸

1 MPCGDLQTQR QLASSGNNIQ DIGMGKDFMT KTPKATATKA KIDKWDLIKL KRFCAAKETI

61 IRVNRQPTEW EKIFAIYPFD KGLISRIYKE LKFTRKKQPH QKAGEGYEQT LLQRRHLCSQ

121 QT

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：15)

克隆号：PP424

起始编码子：424 ATG 终止编码子：792 TGA

蛋白质分子量：14172

1 CAT ACT TGG TCT ATC TTC TAC TTT GTC TTC TCT TAG GAC CCA AGG TCT 48

49 CTT AGC ACA AAC ACT GCC TCT TGA GTT CCC AGT GCA TCT GTA TCA ATC 96

97 TGG AGA TTA CGT CCT CAT CAA AAG CTG GAA AGA AGA AAA ACT CGA ACC 144

145 AAC CTG GGA GAC CTT ATC TAG TGC CCC TAA CCA CTG AGA CAG CAG TCT 192

193 GGA CCG TTA AGA AAG GGT AGA CCC ATC ACA CTC AGG TGA AAA AGG CAT 240

241 GAC CCC CTT TGG AGG CAT AGG TTG TCA CTC CCG GGC CAA CAC CTT CCA 288

289 AAC TAA TAT TCA AAA AAA CTT AAC CTG TCT AAT TTG CTT CCT CTT TCT 336

337 TTC GTT AGC TAC CCA GGA ACA TTT TAT TTT ATC AAT GTA ACC TGA TCA 384

385 TCG TTT CCT CAA ACA ATT ACA TTT GAT GCT TGT CTT GTT ATG CCC TGT 432

1 Met Pro Cys 3

433 GGG GAC CTA CAA ACC CAA AGG CAA CTA GCC TCT TCA GGC AAT AAC ATA 480

4 Gly Asp Leu Gln Thr Gln Arg Gln Leu Ala Ser Ser Gly Asn Asn Ile 19

481 CAG GAC ATA GGA ATG GGC AAA GAC TTC ATG ACT AAA ACA CCA AAA GCA 528

20 Gln Asp Ile Gly Met Gly Lys Asp Phe Met Thr Lys Thr Pro Lys Ala 35

529 ACA GCA ACA AAA GCC AAA ATT GAC AAA TGG GAT CTA ATT AAA CTA AAG 576

36 Thr Ala Thr Lys Ala Lys Ile Asp Lys Trp Asp Leu Ile Lys Leu Lys 51

577 AGA TTC TGC GCA GCA AAG GAA ACT ATC ATC AGA GTG AAC AGG CAA CCT 624

52 Arg Phe Cys Ala Ala Lys Glu Thr Ile Ile Arg Val Asn Arg Gln Pro 67

625 ACA GAA TGG GAG AAA ATT TTT GCA ATC TAT CCA TTT GAC AAA GGG CTA 672

68 Thr Glu Trp Glu Lys Ile Phe Ala Ile Tyr Pro Phe Asp Lys Gly Leu 83

673 ATA TCC AGA ATC TAT AAA GAA CTT AAA TTT ACA AGA AAA AAA CAA CCC 720

84 Ile Ser Arg Ile Tyr Lys Glu Leu Lys Phe Thr Arg Lys Lys Gln Pro 99

721 CAT CAA AAA GCG GGC GAA GGA TAT GAA CAG ACA CTT CTC CAA AGA AGA 768

100 His Gln Lys Ala Gly Glu Gly Tyr Glu Gln Thr Leu Leu Gln Arg Arg 115

769 CAT TTA TGC AGC CAA CAA ACA TGA AAA ATA GCT GAT CAT CAC TGG TCA 816

116 His Leu Cys Ser Gln Gln Thr *** 123

817 TTA TAG AAA TGC AAA TCA AAA CCA CAG TAA GAT ACT AAC TCA TGC CAG 864

865 TTA GAA TGG CGA TCA TTA AAA AGT CAG GAA ACA ACA GAT GCT GGA GAG 912

913 GAT GTG CAG AAA TAG GAA TGC TTT TTA TAC TGT TGG TGA AAG TGT AAA 960

961 TTA GTT CAA CCA TTG TGG AAG ACA GTG TGG CGA TTC CTC AAG GAT CTA 1008

1009 TAG AAC CAG AAC TAC CAC ATG ACC CAG CAA TCC CAT TAC TGG GTA TAT 1056

1057 ACC CAA AGG ATT ATA CAT CAT TCT GCT ATA AAG ACA CAT GCA CAC GTA 1104

1105 CGT TTA TTG CAG CAC TAT TTA CAA TAG CAA AGA CTT GGA ATC AAC CCA 1152

1153 AAT CCC CGT CAA TGA TAG ACT GGA TAA AGA CAA TGT GGC ACT TAT ACA 1200

1201 CCA TGG AAT ACT ATG CAG CCA AAA AAA GGA TGA ATT CAT GTC CTT TGC 1248

1249 AGC GAC ATG GAT GAA GCT GAA AAC CAT CAT TCT CAG CAA ACT AAC ACG 1296

1297 AGA ACA GAA AAC CAA ACA CTA CAT GTT CTC ACT CAT AAG TGG GAG TTG 1344

1345 AAC AAT GAG AAC ACA TGG ACA CAC GGA GGG GAA CAC CAC ACA CCA GGG 1392

1393 CCT GTC GGC GGG TGG GGA GGC TAG GGG AGG GAT AGC ATT AGG AGA AAT 1440

1441 ACC TAA TGT AGA TGA CAG GTT GAT GGG TCT GAC AAA CCA CCA TGA CAC 1488

1489 GTG TAT ACC TAT GTA ATG CAA CTG CAC ATT TTG CTC ATG TAC CCC AGA 1536

1537 ACT TAA ACT ATA ATT AAA AAC ACA TTT TTT CAA AAA AAA AAA AAA AAA 1584

1585 A 1585

6.PP4189蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：16)长度：1762bp

1 GAAAAAGGTA GAATTCTTAT GAATGTTTCA TGATCATGTA TGTGTGGTTA

51 ACGCAGATAC ATTTGGAAGT CGGTTATCAA GGTTGCTCTC CAGCTCAAGG

101 CCTTTGCCCT TTTTGTCAAA ACCAAAGAAG TTCCAACAAA AAGGAGTTTT

151 GAATGTAAAG AAAAATTGTG GAAATGCTGT CAGCAGCTAT TCACAGACCA

201 AACCAGCATC CATAGACATG TGGCAACACA ACATGCTGAT GAAATTTATC

251 ACCAGACAGC TTCTATTTTA AAGCAACTGG CTGTGACATT GAGCACCTCA

301 AAGAGTCTTT CGTCTGCAGA TGAAAAGAAC CCTTTAAAAG AGTGCCTTCC

351 ACATAGCCAT GACGTGTCTG CTTGGCTCCC TGATATAAGC TGCTTTAACC

401 CTGATGAGCT GATAAGTGGC CAGGGCAGTG AAGAAGGGGA GGTGCTCCTT

451 TATTACTGCT ACCATGACCT GGAGGATCCC CAATGGATCT GTGCCTGGCA

501 GACAGCTCTG TGTCAGCACC TGCACCTCAC AGGCAAGGAA TCCATTTATC

551 CCCAGGTGAA TTTCATAAAG AAGTAGAAAA GTTTTTATCT CAGGCAAATC

601 AAGAACAAAG TGATACTATC CTTCTTGATT GCAGAAACTT CTATGAAAGC

651 AAAATAGGAC GATTCCAAGG CTGCTTAGCC CCAGACATCA GGAAATTCAG

701 TTACTTCCCT AGCTACGTTG ACAAAAATCTAGAACTTTTC AGAGAGAAGA

751 GAGTGCTGAT GTACTGTACC GGGGGCATCC GCTGTGAGCG GGGTTCAGCC

801 TACCTCAAAG CCAAGGGAGT GTGCAAGGAG GTGTTCCAGC TCAAGGGTGG

851 CATCCACAAG TACCTGGAAG AGTTTCCTGA TGGCTTTTAC AAAGGGAAGT

901 TGTTTGTTTT TGATGAACGC TATGCTCTGT CCTACAACAG TGATGTGGTG

951 TCAGGTAGGT CAGCACAGGC TCAGAGCCCA AACTGAAATG AAGCACATTG

1001 TCAGTTCACC ATTCTAGAAA AATGACACAG GGAAGACAGG CCAGTGCTCA

1051 TTACTGAGCA CTGAATAAGC AGGGAAAATA AGTACATTGT GCCACCATTT

1101 TCCCAGCTGT GGAGCTGAGA GAACCCTAGC CCAGGAGTCA GGAGGCCTGG

1151 GTTGGGATCC TGGCTTCACC ATTGCTAGCT GGACAAGCCC ATTAACATGG

1201 GGATCATCTC ACCTGCCCTG CCTGCCTGTC TACCTGCCAA GAGCTGTACT

1251 ACTGGGCTAA TTCAGGGCTC TTAACCTGGA ATTGGTACAT AGATTTCAGG

1301 GATTCTGTGA ATTTGGATGG AAAAATAATT GTATCTTTGT TTTCAATAAC

1351 ACCTCACTAA AATGAAGCAT TTCCTTTAGT TATGAATGTA GGCAACAAAG

1401 TACCAGTTGT ATTAATGTAC CTGTGACTTT GTCTTCAGTA GGATTCACAA

1451 TACTTTCATA TCATGTTCTA GTTGCCTCAG ATATCTCAAA ATAGTATTTA

1501 TACTCATCAC TGCTTCAAAA TGAAAATAGT TATTAGGCCC ACCACTAAGA

1551 GTTGATATAT AATGTGTTAA TAAATGGCAC GTCTTATTAT ATATTACAGA

1601 TTTTGAAAAA GAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAACAAAAAA

1651 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1701 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1751 AAAAAAAAAA AA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：17)长度：167个氨基酸

1 MDLCLADSSV SAPAPHRQGI HLSPGEFHKE VEKFLSQANQ EQSDTILLDC RNFYESKIGR

61 FQGCLAPDIR KFSYFPSYVD KNLELFREKR VLMYCTGGIR CERGSAYLKA KGVCKEVFQL

121 KGGIHKYLEE FPDGFYKGKL FVFDERYALS YNSDVVSGRS AQAQSPN

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：18)

克隆号：PP4198

起始编码子：483 ATG 终止编码子：986 TGA

蛋白质分子量：19000

1 GA AAA AGG TAG AAT TCT TAT GAA TGT TTC ATG ATC ATG TAT GTG TGG 47

48 TTA ACG CAG ATA CAT TTG GAA GTC GGT TAT CAA GGT TGC TCT CCA GCT 95

96 CAA GGC CTT TGC CCT TTT TGT CAA AAC CAA AGA AGT TCC AAC AAA AAG 143

144 GAG TTT TGA ATG TAA AGA AAA ATT GTG GAA ATG CTG TCA GCA GCT ATT 191

192 CAC AGA CCA AAC CAG CAT CCA TAG ACA TGT GGC AAC ACA ACA TGC TGA 239

240 TGA AAT TTA TCA CCA GAC AGC TTC TAT TTT AAA GCA ACT GGC TGT GAC 287

288 ATT GAG CAC CTC AAA GAG TCT TTC GTC TGC AGA TGA AAA GAA CCC TTT 335

336 AAA AGA GTG CCT TCC ACA TAG CCA TGA CGT GTC TGC TTG GCT CCC TGA 383

384 TAT AAG CTG CTT TAA CCC TGA TGA GCT GAT AAG TGG CCA GGG CAG TGA 431

432 AGA AGG GGA GGT GCT CCT TTA TTA CTG CTA CCA TGA CCT GGA GGA TCC 479

480 CCA ATG GAT CTG TGC CTG GCA GAC AGC TCT GTG TCA GCA CCT GCA CCT 527

1 Met Asp Leu Cys Leu Ala Asp Ser Ser Val Ser Ala Pro Ala Pro 15

528 CAC AGG CAA GGA ATC CAT TTA TCC CCA GGT GAA TTT CAT AAA GAA GTA 575

16 His Arg Gln Gly Ile His Leu Ser Pro Gly Glu Phe His Lys Glu Val 31

576 GAA AAG TTT TTA TCT CAG GCA AAT CAA GAA CAA AGT GAT ACT ATC CTT 623

32 Glu Lys Phe Leu Ser Gln Ala Ash Gln Glu Gln Ser Asp Thr Ile Leu 47

624 CTT GAT TGC AGA AAC TTC TAT GAA AGC AAA ATA GGA CGA TTC CAA GGC 671

48 Leu Asp Cys Arg Asn Phe Tyr Glu Ser Lys Ile Gly Arg Phe Gln Gly 63

672 TGC TTA GCC CCA GAC ATC AGG AAA TTC AGT TAG TTC CCT AGC TAC GTT 719

64 Cys Leu Ala Pro Asp Ile Arg Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Ser Tyr Val 79

720 GAC AAA AAT CTA GAA CTT TTC AGA GAG AAG AGA GTG CTG ATG TAC TGT 767

80 Asp Lys Asn Leu Glu Leu Phe Arg Glu Lys Arg Val Leu Met Tyr Cys 95

768 ACC GGG GGC ATC CGC TGT GAG CGG GGT TCA GCC TAC CTC AAA GCC AAG 815

96 Thr Gly Gly Ile Arg Cys Glu Arg Gly Ser Ala Tyr Leu Lys Ala Lys 111

816 GGA GTG TGC AAG GAG GTG TTC CAG CTC AAG GGT GGC ATC CAC AAG TAC 863

112 Gly Val Cys Lys Glu Val Phe Gln Leu Lys Gly Gly Ile His Lys Tyr 127

864 CTG GAA GAG TTT CCT GAT GGC TTT TAC AAA GGG AAG TTG TTT GTT TTT 911

128 Leu Glu Glu Phe Pro Asp Gly Phe Tyr Lys Gly Lys Leu Phe Val Phe 143

912 GAT GAA CGC TAT GCT CTG TCC TAC AAC AGT GAT GTG GTG TCA GGT AGG 959

144 Asp Glu Arg Tyr Ala Leu Ser Tyr Asn Ser Asp Val Val Ser Gly Arg 159

960 TCA GCA CAG GCT CAG AGC CCA AAC TGA AAT GAA GCA CAT TGT CAG TTC 1007

160 Ser Ala Gln Ala Gln Ser Pro Asn *** 168

1008 ACC ATT CTA GAA AAA TGA CAC AGG GAA GAC AGG CCA GTG CTC ATT ACT 1055

1056 GAG CAC TGA ATA AGC AGG GAA AAT AAG TAC ATT GTG CCA CCA TTT TCC 1103

1104 CAG CTG TGG AGC TGA GAG AAC CCT AGC CCA GGA GTC AGG AGG CCT GGG 1151

1152 TTG GGA TCC TGG CTT CAC CAT TGC TAG CTG GAC AAG CCC ATT AAC ATG 1199

1200 GGG ATC ATC TCA CCT GCC CTG CCT GCC TGT CTA CCT GCC AAG AGC TGT 1247

1248 ACT ACT GGG CTA ATT CAG GGC TCT TAA CCT GGA ATT GGT ACA TAG ATT 1295

1296 TCA GGG ATT CTG TGA ATT TGG ATG GAA AAA TAA TTG TAT CTT TGT TTT 1343

1344 CAA TAA CAC CTC ACT AAA ATG AAG CAT TTC CTT TAG TTA TGA ATG TAG 1391

1392 GCA ACA AAG TAC CAG TTG TAT TAA TGT ACC TGT GAC TTT GTC TTC AGT 1439

1440 AGG ATT CAC AAT ACT TTC ATA TCA TGT TCT AGT TGC CTC AGA TAT CTC 1487

1488 AAA ATA GTA TTT ATA CTC ATC ACT GCT TCA AAA TGA AAA TAG TTA TTA 1535

1536 GGC CCA CCA CTA AGA GTT GAT ATA TAA TGT GTT AAT AAA TGG CAC GTC 1583

1584 TTA TTA TAT ATT ACA GAT TTT GAA AAA GAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1631

1632 AAA AAA AAA AAA CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1679

1680 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1727

1728 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 1762

7.PP2500蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：19)长度：2153bp

1 CTGGGACGGG GGAAAGGAGA CGCTTCTTCC TCTTGCTGCT CTTCTCGTTC

51 CCGAGATCAG CGGCGGCGGT GACCGCGAGT GGGTCGGCAC CGTCTCCGGC

101 TCCGGGTGCG AACAATGCTG ACTGATAGCG GAGGCGGCGG CACCTCCTTT

151 GAGGAGGACC TGGACTCTGT GGCTCCGCGA TCCGCCCCAG CTGGGGCCTC

201 GGAGCCGCCT CCGCCGGGAG GGGTCGGTCT GGGGATCCGC ACCGTGAGGC

251 TCTTTGGGGA GGCCGGGCCA GCGTCGGGAG TCGGCAGCAG CGGCGGCGGC

301 GGCAGCGGCA GCGGTACGGG CGGAGGGGAC GCGGCGCTGG ATTTCAAGTT

351 GGCGGCTGCC GTGCTGAGGA CCGGGGGTGG AGGTGGTGCC TCTGGCAGTG

401 ACGAGGACGA AGTGTCCGAG GTTGAATCAT TTATTTTGGA CCAAGAAGAT

451 CTGGATAACC CAGTGCTTAA AACAACATCA GAGATATTCT TATCAAGTAC

501 TGCAGAAGGA GCAGACTTAC GCACTGTGGA TCCAGAGACA CAGGCACGAC

551 TAGAAGCATT GCTAGAAGCA GCAGGAATTG GCAAATTGTC AACTGCTGAT

601 GGTAAAGCTT TTGCAGATCC TGAGGTACTC CGGAGACTGA CATCCTCAGT

651 TAGTTGTGCA CTGGATGAAG CTGCTGCTGC ACTGACACGG ATGAAAGCAG

701 AAAACAGCCA CAATGCAGGA CAAGTGGACA CTCGCAGTCT AGCAGAAGCT

751 TGTTCAGATG GGGATGTTAA TGCTGTTCGT AAATTGCTAG ATGAAGGCAG

801 AAGTGTAAAT GAACATACAG AAGAAGGAGA AAGCCTGCTG TGTTTGGCTT

851 GTTCAGCAGG GTATTATGAA TTAGCACAAG TATTGCTTGC TATGCATGCT

901 AATGTTGAAG ATCGAGGGAA TAAAGGAGAC ATAACTCCCC TGATGGCAGC

951 TTCCAGTGGA GGTTACTTAG ATATTGTGAA ATTATTACTT CTTCATGATG

1001 CTGATGTCAA CTCCCAGTCT GCAACAGGAA ACACTGCGCT AACTTATGCA

1051 TGTGCTGGAG GATTTGTTGA CATTGTTAAA GTGCTCCTTA ATGAAGGTGC

1101 AAATATAGAA GATCATAATG AAAATGGACA TACTCCCTTA ATGGAAGCAG

1151 CCAGTGCAGG TCATGTGGAA GTTGCAAGAG TTCTTTTAGA TCATGGTGCA

1201 GGCATCAACA CTCATTCTAA TGAATTCAAA GAAAGTGCTC TAACACTTGC

1251 TTGCTACAAA GGCCATTTGG ATATGGTTCG CTTTCTACTT GAAGCTGGTG

1301 GAGATCAAGA GCACAAAACA GATGAGATGC ACACTGCCTT AATGGAGGCC

1351 TGCATGGATG GACATGTAGA GGTGGCACGT TTGCTTTTGG ATAGTGGTGC

1401 TCAAGTGAAC ATGCCTGCAG ATTCATTTGA ATCTCCATTG ACGCTAGCTG

1451 CCTGTGGAGG ACATGTTGAA TTGGCAGCTC TACTTATTGA AAGGGGAGCA

1501 AATCTTGAAG AAGTTAATGA TGAAGGATAC AGTCCCTTGA TGGAAGCTGC

1551 CCGGGAAGGA CATGAAGAAA TGGTGGCACT ACTCTTAGCA CAAGGAGCAA

1601 ATATAAATGC CCAGACAGAA GAAACTCAAG AAACTGCTCT TACCTTGGCT

1651 TGCTGTGGAG GATTTTCTGA AGTTGCAGAC TTTCTTATTA AGGCAGGGGC

1701 TGATATAGAA CTTGGCTGCT CCACACCTCT GATGGAGGCA TCTCAGGAGG

1751 GACACCTGGA ATTGGTTAAA TATTTGCTGG CTTCTGGCGC TAATGTGCAT

1801 GCTACAACAG CAACAGGAGA CACAGCCTTA ACCTATGCTT GTGAAAATGG

1851 ACATACGGAT GTTGCAGATG TTTTACTTCA AGCAGGGGCT GATTTAGACA

1901 AGCAGGAGGA CATGAAGACT ATTTTGGAGG GCATAGATCC GGCCAAGCAT

1951 CAGGTGAGGG TGGCCTTTGA TGCTTGTAAG CTACTACGTA AAGAATAGAT

2001 GTTGTAGGTA ACCAGAACTC TGGATATCTG AATTCCAGCC AAGAAGTTCC

2051 AGGACCCTGC TGGGTGACAA AGGAAATCCT CTTCAATTGA AAAAGATTAT

2101 GAAGTCCCAA TAAAAAGAGA TTTGTATTGC TAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

2151 AAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：20)长度：627个氨基酸

1 MLTDSGGGGT SFEEDLDSVA PRSAPAGASE PPPPGGVGLG IRTVRLFGEA GPASGVGSSG

61 GGGSGSGTGG GDAALDFKLA AAVLRTGGGG GASGSDEDEV SEVESFILDQ EDLDNPVLKT

121 TSEIFLSSTA EGADLRTVDP ETQARLEALL EAAGIGKLST ADGKAFADPE VLRRLTSSVS

181 CALDEAAAAL TRMKAENSHN AGQVDTRSLA EACSDGDVNA VRKLLDEGRS VNEHTEEGES

241 LLCLACSAGY YELAQVLLAM HANVEDRGNK GDITPLMAAS SGGYLDIVKL LLLHDADVNS

301 QSATGNTALT YACAGGFVDI VKVLLNEGAN IEDHNENGHT PLMEAASAGH VEVARVLLDH

361 GAGINTHSNE FKESALTLAC YKGHLDMVRF LLEAGADQEH KTDEMHTALM EACMDGHVEV

421 ARLLLDSGAQ VNMPADSFES PLTLAACGGH VELAALLIER GANLEEVNDE GYTPLMEAAR

481 EGHEEMVALL LAQGANINAQ TEETQETALT LACCGGFSEV ADFLIKAGAD IELGCSTPLM

541 EASQEGHLEL VKYLLASGAN VHATTATGDT ALTYACENGH TDVADVLLQA GADLDKQEDM

601 KTILEGIDPA KHQVRVAFDA CKLLRKE

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：21)

克隆号：PP2500

起始编码子：115 ATG 终止编码子：1998 TAG

蛋白质分子量：64908

1 CTG GGA CGG GGG AAA GGA GAC GCT TCT TCC TCT TGC TGC TCT TCT CGT 48

49 TCC CGA GAT CAG CGG CGG CGG TGA CCG CGA GTG GGT CGG CAC CGT CTC 96

97 CGG CTC CGG GTG CGA ACA ATG CTG ACT GAT AGC GGA GGC GGC GGC ACC 144

1 Met Leu Thr Asp Ser Gly Gly Gly Gly Thr 10

145 TCC TTT GAG GAG GAC CTG GAC TCT GTG GCT CCG CGA TCC GCC CCA GCT 192

11 Ser Phe Glu Glu Asp Leu Asp Ser Val Ala Pro Arg Ser Ala Pro Ala 26

193 GGG GCC TCG GAG CCG CCT CCG CCG GGA GGG GTC GGT CTG GGG ATC CGC 240

27 Gly Ala Ser Glu Pro Pro Pro Pro Gly Gly Val Gly Leu Gly Ile Arg 42

241 ACC GTG AGG CTC TTT GGG GAG GCC GGG CCA GCG TCG GGA GTC GGC AGC 288

43 Thr Val Arg Leu Phe Gly Glu Ala Gly Pro Ala Ser Gly Val Gly Ser 58

289 AGC GGC GGC GGC GGC AGC GGC AGC GGT ACG GGC GGA GGG GAC GCG GCG 336

59 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Gly Gly Asp Ala Ala 74

337 CTG GAT TTC AAG TTG GCG GCT GCC GTG CTG AGG ACC GGG GGT GGA GGT 384

75 Leu Asp Phe Lys Leu Ala Ala Ala Val Leu Arg Thr Gly Gly Gly Gly 90

385 GGT GCC TCT GGC AGT GAC GAG GAC GAA GTG TCC GAG GTT GAA TCA TTT 432

91 Gly Ala Ser Gly Ser Asp Glu Asp Glu Val Ser Glu Val Glu Ser Phe 106

433 ATT TTG GAC CAA GAA GAT CTG GAT AAC CCA GTG CTT AAA ACA ACA TCA 480

107 Ile Leu Asp Gln Glu Asp Leu Asp Asn Pro Val Leu Lys Thr Thr Ser 122

481 GAG ATA TTC TTA TCA AGT ACT GCA GAA GGA GCA GAC TTA CGC ACT GTG 528

123 Glu Ile Phe Leu Ser Ser Thr Ala Glu Gly Ala Asp Leu Arg Thr Val 138

529 GAT CCA GAG ACA CAG GCA CGA CTA GAA GCA TTG CTA GAA GCA GCA GGA 576

139 Asp Pro Glu Thr Gln Ala Arg Leu Glu Ala Leu Leu Glu Ala Ala Gly 154

577 ATT GGC AAA TTG TCA ACT GCT GAT GGT AAA GCT TTT GCA GAT CCT GAG 624

155 Ile Gly Lys Leu Ser Thr Ala Asp Gly Lys Ala Phe ALa Asp Pro Glu 170

625 GTA CTC CGG AGA CTG ACA TCC TCA GTT AGT TGT GCA CTG GAT GAA GCT 672

171 Val Leu Arg Arg Leu Thr Ser Ser Val Ser Cys Ala Leu Asp Glu Ala 186

573 GCT GCT GCA CTG ACA CGG ATG AAA GCA GAA AAC AGC CAC AAT GCA GGA 720

187 Ala Ala Ala Leu Thr Arg Met Lys Ala Glu Asn Ser His Asn Ala Gly 202

721 CAA GTG GAC ACT CGC AGT CTA GCA GAA GCT TGT TCA GAT GGG GAT GTT 768

203 Gln Val Asp Thr Arg Ser Leu Ala Glu Ala Cys Ser Asp Gly Asp Val 218

769 AAT GCT GTT CGT AAA TTG CTA GAT GAA GGC AGA AGT GTA AAT GAA CAT 816

219 Asn Ala Val Arg Lys Leu Leu Asp Glu Gly Arg Ser Val Asn Glu His 234

817 ACA GAA GAA GGA GAA AGC CTG CTG TGT TTG GCT TGT TCA GCA GGG TAT 864

235 Thr Glu Glu Gly Glu Ser Leu Leu Cys Leu Ala Cys Ser Ala Gly Tyr 250

865 TAT GAA TTA GCA CAA GTA TTG CTT GCT ATG CAT GCT AAT GTT GAA GAT 912

251 Tyr Glu Leu Ala Gln Val Leu Leu Ala Met His Ala Asn Val Glu Asp 266

913 CGA GGG AAT AAA GGA GAC ATA ACT CCC CTG ATG GCA GCT TCC AGT GGA 960

267 Arg Gly Asn Lys Gly Asp Ile Thr Pro Leu Met Ala Ala Ser Ser Gly 282

961 GGT TAC TTA GAT ATT GTG AAA TTA TTA CTT CTT CAT GAT GCT GAT GTC 1008

283 Gly Tyr Leu Asp Ile Val Lys Leu Leu Leu Leu His Asp Ala Asp Val 298

1009 AAC TCC CAG TCT GCA ACA GGA AAC ACT GCG CTA ACT TAT GCA TGT GCT 1056

299 Asn Ser Gln Ser Ala Thr Gly Asn Thr Ala Leu Thr Tyr Ala Cys Ala 314

1057 GGA GGA TTT GTT GAC ATT GTT AAA GTG CTC CTT AAT GAA GGT GCA AAT 1104

315 Gly Gly Phe Val Asp Ile Val Lys Val Leu Leu Asn Glu Gly Ala Asn 330

1105 ATA GAA GAT CAT AAT GAA AAT GGA CAT ACT CCC TTA ATG GAA GCA GCC 1152

331 Ile Glu Asp His Asn Glu Asn Gly His Thr Pro Leu Met Glu Ala Ala 346

1153 AGT GCA GGT CAT GTG GAA GTT GCA AGA GTT CTT TTA GAT CAT GGT GCA 1200

347 Ser Ala Gly His Val Glu Val Ala Arg Val Leu Leu Asp His Gly Ala 362

1201 GGC ATC AAC ACT CAT TCT AAT GAA TTC AAA GAA AGT GCT CTA ACA CTT 1248

363 Gly Ile Asn Thr His Ser Asn Glu Phe Lys Glu Ser Ala Leu Thr Leu 378

1249 GCT TGC TAC AAA GGC CAT TTG GAT ATG GTT CGC TTT CTA CTT GAA GCT 1296

379 Ala Cys Tyr Lys Gly His Leu Asp Met Val Arg Phe Leu Leu Glu Ala 394

1297 GGT GCA GAT CAA GAG CAC AAA ACA GAT GAG ATG CAC ACT GCC TTA ATG 1344

395 Gly Ala Asp Gln Glu His Lys Thr Asp Glu Met His Thr Ala Leu Met 410

1345 GAG GCC TGC ATG GAT GGA CAT GTA GAG GTG GCA CGT TTG CTT TTG GAT 1392

411 Glu Ala Cys Met Asp Gly His Val Glu Val Ala Arg Leu Leu Leu Asp 426

1393 AGT GGT GCT CAA GTG AAC ATG CCT GCA GAT TCA TTT GAA TCT CCA TTG 1440

427 Ser Gly Ala Gln Val Asn Met Pro Ala Asp Ser Phe Glu Ser Pro Leu 442

1441 ACG CTA GCT GCC TGT GGA GGA CAT GTT GAA TTG GCA GCT CTA CTT ATT 1488

443 Thr Leu Ala Ala Cys Gly Gly His Val Glu Leu Ala Ala Leu Leu Ile 458

1489 GAA AGG GGA GCA AAT CTT GAA GAA GTT AAT GAT GAA GGA TAC ACT CCC 1536

459 Glu Arg Gly Ala Asn Leu Glu Glu Val Asn Asp Glu Gly Tyr Thr Pro 474

1537 TTG ATG GAA GCT GCC CGG GAA GGA CAT GAA GAA ATG GTG GCA CTA CTC 1584

475 Leu Met Glu Ala Ala Arg Glu Gly His Glu Glu Met Val Ala Leu Leu 490

1585 TTA GCA CAA GGA GCA AAT ATA AAT GCC CAG ACA GAA GAA ACT CAA GAA 1632

491 Leu Ala Gln Gly Ala Asn Ile Asn Ala Gln Thr Glu Glu Thr Gln Glu 506

1633 ACT GCT CTT ACT TTG GCT TGC TGT GGA GGA TTT TCT GAA GTT GCA GAC 1680

507 Thr Ala Leu Thr Leu Ala Cys Cys Gly Gly Phe Ser Glu Val Ala Asp 522

1681 TTT CTT ATT AAG GCA GGG GCT GAT ATA GAA CTT GGC TGC TCC ACA CCT 1728

523 Phe Leu Ile Lys Ala Gly Ala Asp Ile Glu Leu Gly Cys Ser Thr Pro 538

1729 CTG ATG GAG GCA TCT CAG GAG GGA CAC CTG GAA TTG GTT AAA TAT TTG 1776

539 Leu Met Glu Ala Ser Gln Glu Gly His Leu Glu Leu Val Lys Tyr Leu 554

1777 CTG GCT TCT GGC GCT AAT GTG CAT GCT ACA ACA GCA ACA GGA GAC ACA 1824

555 Leu Ala Ser Gly Ala Asn Val His Ala Thr Thr Ala Thr Gly Asp Thr 570

1825 GCC TTA ACC TAT GCT TGT GAA AAT GGA CAT ACG GAT GTT GCA GAT GTT 1872

571 Ala Leu Thr Tyr Ala Cys Glu Asn Gly His Thr Asp Val Ala Asp Val 586

1873 TTA CTT CAA GCA GGG GCT GAT TTA GAC AAG CAG GAG GAC ATG AAG ACT 1920

587 Leu Leu Gln AAa Gly Ala Asp Leu Asp Lys Gln Glu Asp Met Lys Thr 602

1921 ATT TTG GAG GGC ATA GAT CCG GCC AAG CAT CAG GTG AGG GTG GCC TTT 1968

603 Ile Leu Glu Gly Ile Asp Pro Ala Lys His Gln Val Arg Val Ala Phe 618

1969 GAT GCT TGT AAG CTA CTA CGT AAA GAA TAG ATG TTG TAG GTA ACC AGA 2016

619 Asp Ala Cys Lys Leu Leu Arg Lys Glu *** 628

2017 ACT CTG GAT ATC TGA ATT CCA GCC AAG AAG TTC CAG GAC CCT GCT GGG 2064

2065 TGA CAA AGG AAA TCC TCT TCA ATT GAA AAA GAT TAT GAA GTC CCA ATA 2112

2113 AAA AGA GAT TTG TAT TGC TAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 2153

D.Blastp结果

Query＝PP2500(627个氨基酸)

>SP_IN：Q21920 Q21920 caenorhabditis elegans.r11a8.7 protein.11/1999

长度＝2606个氨基酸

分值＝184bits(462)，预计值＝1e-45

相同性＝115/306(37％)，相似性＝168/306(54％)，缺口＝9/306(2％)

Query：304 TGNTALTYACAGGFVDIVKVLLNEGANIEDHNENGHTPLMEAASAGHVEVARVLLDHGAG 363

T T LT ACA G DIV++LL EGANIE ++ G +PL+ AA+AGH V VLL + A

Sbjct：1220 TLETPLTIACANGHKDIVELLLKEGANIEHRDKKGFSPLIIAATAGHSSVVEVLLKNHAA 1279

Query：364 INTHSNEFKESALTLACYKGHLDMVRFLLEAGADQEHKTDEMHTALMEACMDGHVEVARL 423

I S+ K++AL+LAC G D+V LL GA++EH+ +T L A G++E+ +

Sbjct：1280 IEAQSDRTKDTALSLACSGGRKDVVELLLAHGANKEHRNVSDYTPLSLASSGGYIEIVNM 1339

Query：424 LLDSGAQVNMPADS--FESPLTLAACGGHVELAALLIERGANLE-EVNDEGYTPLMEAAR 480

LL +G+++N S SPL LA+ GH E +L+E+G+++ ++ T L A+

Sbjct：1340 LLTAGSEINSRTGSKLGISPLMLASMNGHREATRVLLEKGSDINAQIETNRNTALTLASF 1399

Query：481 EGHEEMVALLLAQGANINXXXXXXXXXXXXXXCCGGFSEVADFLIKAGAD-----IELGC 535

+G E+V LLLA AN+ GG+ +V +LI AGAD ++

Sbjct：1400 QGRTEVVKLLLAYNANVE-HRAKTGLTPLMECASGGYVDVGNLLIAAGADTNASPVQQTK 1458

Query：536 STPLMEASQEGHLELVKYLLASGANVHATTATGDTALTYACENGHTDVADVLLQAGADLD 595

T L ++++GH + V+ LL A V G TAL AC G+ A LL+GAD D

Sbjct：1459 DTALTISAEKGHEKFVRMLLNGDAAVDVRNKKGCTALWLACNGGYLSTAQALLEKGADPD 1518

Query：596 KQEDMK 601

++ K

Sbjct：1519 MFDNRK 1524

分值＝183bits(460)，预计值＝2e-45

相同性＝129/397(32％)，相似性＝214/397(53％)，缺口＝18/397(4％)

Query：170 EVLRRLTSSVSCALDEAAAALTRMKAENSHNAGQVDTRSLAEACSDGDVNAVRKLLDEGR 229

E+++ +S + ++ +L ++ GQ L S+GD +

Sbjct：1159 EIQKKGKTSSGTLISTSSKSLMAKSVQSQQQQGQ-----LRRTHSEGD--GAERAKSRSN 1211

Query：230 SVNEHTEEG-ESLLCLACSAGYYELAQVLLAMHANVEDRGNKGDITPLMAASSGGYLDIV 288

++++ TE E+ L +AC+ G+ ++ ++LL AN+E R KG +PL+ A++ G+ +V

Sbjct：1212 AIDKATETTLETPLTIACANGHKDIVELLLKEGANIEHRDKKG-FSPLIIAATAGHSSVV 1270

Query：289 KLLLLHDADVNSQS-ATGNTALTYACAGGFVDIVKVLLNEGANIEDHNENGHTPLMEAAS 347

++LL +A + +QS T +TAL+ AC+GG D+V++LL GAN E N+ +TPL A+S

Sbjct：1271 EVLLKNHAAIEAQSDRTKDTALSLACSGGRKDVVELLLAHGANKEHRNVSDYTPLSLASS 1330

Query：348 AGHVEVARVLLDHGAGINTHS-NEFKESALTLACYKGHLDMVRFLLEAGADQEHKTD-EM 405

G++E+ +LL G+ IN+ + ++ S L LA GH + R LLE G+D + +

Sbjct：1331 GGYIEIVNMLLTAGSEINSRTGSKLGISPLMLASMNGHREATRVLLEKGSDINAQIETNR 1390

Query：406 HTALMEACMDGHVEVARLLLDSGAQVNMPADSFESPLTLAACGGHVELAALLIERGA--N 463

+TAL A G EV+LLL A V A + +PL A GG+V++ LLI GA N

Sbjct：1391 NTALTLASFQGRTEVVKLLLAYNANVEHRAKTGLTPLMECASGGYVDVGNLLIAAGADTN 1450

Query：464 LEEVNDEGYTPLMEAAREGHEEMVALLLAQGANINXXXXXXXXXXXXXXCCGGFSEVADF 523

V T L +A +GHE+ V +LL A ++ C GG+ A

Sbjct：1451 ASPVQQTKDTALTISAEKGHEKFVRMLLNGDAAVD-VRNKKGCTALWLACNGGYLSTAQA 1509

Query：524 LIKAGADIELGCS---TPLMEASQEGHLELVKYLLAS 557

L++ GAD ++ + +P+M A ++GH+E+VKY++ S

Sbjct：1510 LLEKGADPDMFDNRKISPMMAAFRKGHVEIVKYMVNS 1546

分值＝160bits(400)，预计值＝3e-38

相同性＝120/400(30％)，相似性＝206/400(51％)，缺口＝32/400(8％)

Query：230 SVNEHTEEGESLLCLACSAGYYELAQVLLAMHANVEDRGNK-GDITPLMAASSGGYLDIV 288

S++ + ++L LA G + + + ++ RG+K ITPLM A++ IV

Sbjct：199 SIDSQIVQQNAMLLLAARVGIEQFVEYSHEIGV-MQFRGDKLSKITPLMEAAASSSETIV 257

Query：289 KLLLLHDADVNSQSATG-NTALTYACAGGFVDIVK-VLLNEGANIEDH---NENGHTPLM 343

+LL AD N S NTAL YA+ D+V+ +L +EG D N + H +M

Sbjct：258 RRLLELGADPNVASIPNCNTALIYAASTDGRDVVREILMTEGPKKPDVYLINNHYHDAMM 317

Query：344 EAASAGHVEVARVLLDHGAG---INTHSNEFKESALTLACYKGHLDMVRFLLEAGADQEH 400

E A G + + L+ G +N E ++SALTL+ KGH+ +V +++

Sbjct：318 EVALVGGTDTLKEFLEMGYRPRFLNLRQQE-RDSALTLSAQKGHIKIVTAIMDYYEKNPP 376

Query：401 KTDE--------MHTALMEACMDGHVEVARLLLDSGAQVNMPADSF--ESPLTLAACGGH 450

+T+E ++ALMEA M+GH++V +L+L G ++ + SPL +A+ GG+

Sbjct：377 QTEEEKQELCLERYSALMEAAMEGHIDVCKLMLSRGTPADLCTEVTIEPSPLIVASAGGY 436

Query：451 VELAALLIERGANLEEVNDEGYTPLMEAAREGHEE---MVALLLAQGANINXXXXXXXXX 507

E+ +L+ GA +EE++++ TPLMEA + +V LLL++ A ++

Sbjct：437 PEVVEVLLAAGAKIEELSNKKNTPLMEACAGDQGDQAGVVKLLLSKHAEVDVSNPDTGDT 496

Query：508 XXXXXCCGGFSEVADFLIKAGADIELGCSTPLMEASQEGHLELVKYLLASGANVHATTAT 567

G+ + LI+ G D+ G++P++EA++ GHLE ++++LA H T

Sbjct：497 PLSLAARNGYIAIMKMLIEKGGDLTAGKTSPIVEAARNGHLECIQFILA-----HCKTIP 551

Query：568 GD---TALTYACENGHTDVADVLLQAGADLDKQEDMKTIL 604

D AL A+G + + +++AGADL+ ++D +T L

Sbjct：552 QDQLSRALVSAADFGSLLIVEEVIRAGADLNFEQDERTAL 591

Claims

1.一种分离的具有抑癌功能的人多肽，其特征在于，它含有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：17、SEQ ID NO：20，所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽的氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：20。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它选自下组：

(a)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：17、SEQ IDNO：20。

5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组：

SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQID NO：18、SEQ ID NO：21的编码区序列或全长序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；

(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽，所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人多肽特异性结合的抗体，其中所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

10.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。