[go: up one dir, main page]

CN119060177A - 单结构域血清白蛋白结合蛋白质 - Google Patents

单结构域血清白蛋白结合蛋白质 Download PDF

Info

Publication number
CN119060177A
CN119060177A CN202410731815.0A CN202410731815A CN119060177A CN 119060177 A CN119060177 A CN 119060177A CN 202410731815 A CN202410731815 A CN 202410731815A CN 119060177 A CN119060177 A CN 119060177A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serum albumin
amino acid
single domain
seq
albumin binding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202410731815.0A
Other languages
English (en)
Inventor
罗伯特·B·杜布里奇
布莱恩·D·莱蒙
理查德·J·奥斯汀
卢克·伊弗宁
吉恩玛丽·盖诺
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harpoon Therapeutics Inc
Original Assignee
Harpoon Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harpoon Therapeutics Inc filed Critical Harpoon Therapeutics Inc
Publication of CN119060177A publication Critical patent/CN119060177A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/005—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies constructed by phage libraries
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本文公开了具有改善的热稳定性、结合亲和力和稳健的聚集特性的单结构域血清白蛋白结合蛋白质。本文还描述了包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。提供了包含本文公开的结合蛋白质的药物组合物和使用这样的制剂的方法。

Description

单结构域血清白蛋白结合蛋白质
申请是申请日为2017年5月19日、申请号为201780045208.7、发明名称为“单结构域血清白蛋白结合蛋白质”的中国专利申请(其对应PCT申请的申请日为2017年5月19日、申请号为(PCT/US2017/033665)的分案申请。
交叉引用
本申请要求于2016年5月20日提交的美国临时申请号62/339,682的权益，该临时申请通过引用以其全文并入本文。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式以电子方式提交，并且通过引用以其全文并入本文。所述ASCII副本于2017年5月18日创建，命名为47517-703_601_SEQ.txt，并且大小为22,218字节。
援引并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入，并且如同以其全文进行说明。
背景技术
白蛋白是最丰富的血浆蛋白质，其高度可溶，非常稳定，并且具有极长的循环半衰期。白蛋白可以以多种方式使用以延长治疗分子的循环半衰期。本公开内容提供了单结构域白蛋白结合蛋白质，其可用于延长治疗分子的半衰期。
发明内容
在一个实施方案中，本文提供了单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中(a)CDR1的氨基酸序列如GFX1X2X3X4FGMS(SEQ ID NO.1)所示，X1是苏氨酸、精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸，X2是苯丙氨酸或酪氨酸，X3是丝氨酸、精氨酸或赖氨酸，X4是丝氨酸、赖氨酸、精氨酸或丙氨酸；(b)CDR2的氨基酸序列如SISGSGX5X6TLYAX7SX8K(SEQ ID NO.2)所示，X5是丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或丙氨酸，X6是天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸或苏氨酸，X7是天冬氨酸、组氨酸、精氨酸或丝氨酸，X8是缬氨酸或亮氨酸；并且(c)CDR3的氨基酸序列如GGSLX9X10(SEQ ID NO.3)所示，X9是丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或赖氨酸，并且X10是精氨酸、赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和X10不同时分别是苏氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、丝氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、丝氨酸和精氨酸。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含下式：f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4，其中r1是SEQ ID NO.1；r2是SEQ ID NO.2，并且r3是SEQID NO.3；并且其中f1、f2、f3和f4是选定的框架残基，使得所述蛋白质与SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列至少80％相同。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15或SEQ ID NO.16。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r2包含SEQID NO.17、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r3包含SEQ ID NO.23或SEQ ID NO.24。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.14。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.15，r2包含SEQ IDNO.17，并且r3包含SEQ ID NO.23。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.16，并且r3包含SEQ ID NO.23。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQID NO.15，并且r2包含SEQ ID NO.18。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.14，并且r3包含SEQ ID NO.23。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQID NO.15，r2包含SEQ ID NO.19，并且r3包含SEQ ID NO.24。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.14，并且r2包含SEQ ID NO.20。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.15，并且r2包含SEQ ID NO.21。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中r1包含SEQ ID NO.15，r2包含SEQ ID NO.22，并且r3包含SEQ ID NO.24。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有选自SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ IDNO.8、SEQ ID NO.9、SEQ IN NO.25、SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.27的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ IDNO.26所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质与选自人血清白蛋白、食蟹猴血清白蛋白和小鼠血清白蛋白的血清白蛋白结合。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人血清白蛋白和食蟹猴血清白蛋白结合。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质与小鼠血清白蛋白结合的结合亲和力(Kd)比所述蛋白质对人和食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力(Kd)弱约1.5倍至约20倍。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质以约1nM至约100nM的人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以1nM至100nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为1nM至约5nM或约5nM至约10nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约2nM、约2nM至约3nM、约3nM至约4nM、约4nM至约5nM、约5nM至约6nM、约6nM至约7nM、约7nM至约8nM、约8nM至约9nM或约9nM至约10nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd与cKd之比(hKd:cKd)在约20:1至约1:2的范围内。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约5nM至约10nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.22所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含如SEQ ID NO.24所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时的消除半衰期。
在另一个实施方案中，提供了包含CDR1、CDR2和CDR3的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含如SEQ ID NO.10所示的序列，其中选自CDR1的氨基酸位置28、29、30或31，CDR2的位置56、57、62或64，以及CDR3的位置103和104的一个或多个氨基酸残基被置换，其中氨基酸位置28被精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸置换，氨基酸位置29被酪氨酸置换，氨基酸位置30被精氨酸或赖氨酸置换，氨基酸位置31被赖氨酸、精氨酸或丙氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸、苏氨酸或丙氨酸置换，氨基酸位置57被组氨酸、缬氨酸或苏氨酸置换，氨基酸位置62被组氨酸、精氨酸、谷氨酸或丝氨酸置换，氨基酸位置64被亮氨酸置换，氨基酸位置103被精氨酸、苏氨酸或赖氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在除位置28、29、30、31、56、57、62、64、103和104之外的氨基酸位置处包含一个或多个另外的置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在位置29处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在位置31处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在位置56处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在位置62处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在位置64处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在位置104处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31和62处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中位置31被精氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中位置31被精氨酸置换，并且氨基酸位置62被谷氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31、56、64和104处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被丙氨酸置换，氨基酸位置64被亮氨酸置换，并且氨基酸位置104被赖氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置29和104处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置29被酪氨酸置换，并且氨基酸位置104被赖氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31和56处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，并且氨基酸位置56被苏氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31、56和62处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被苏氨酸置换，并且氨基酸位置62被谷氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31和104处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，并且氨基酸位置104被赖氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31、56和104处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，并且氨基酸位置104被缬氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在氨基酸位置31、56、62和104处包含置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且氨基酸位置104被缬氨酸置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，并且所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被丙氨酸置换，氨基酸位置64被亮氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸置换，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置29被酪氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸置换，并且其中hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被苏氨酸置换，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被苏氨酸置换，并且氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸置换，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约5nM至约10nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，氨基酸位置104被缬氨酸置换，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且氨基酸位置104被缬氨酸置换，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。
在另一个实施方案中，本文提供了单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1、CDR2或CDR3处包含至少一个突变，其中CDR1包含如SEQ ID NO:11所示的序列，CDR2包含如SEQ ID NO:12所示的序列，CDR3包含如SEQ ID NO.13所示的序列，并且其中所述至少一个突变不在SEQ ID NO:11的氨基酸位置1、2、7、8、9或10，SEQ ID NO:12的位置1、3、6、10或11，或者SEQ ID NO:13的位置1或2处。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在选自CDR1(SEQ ID NO:11)的位置3、4、5和6，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7、8、13和15，以及CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置5和6的氨基酸位置处包含至少一个突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在除CDR1(SEQ ID NO:11)的3、4、5和6，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7、8、13和15，以及CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置5和6之外的氨基酸位置处包含一个或多个另外的置换。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6和CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置13处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6、CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和15以及CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置4和CDR3(SEQ IDNO:13)的氨基酸位置6处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6和CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6以及CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6和CDR3(SEQID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6、CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7以及CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6、CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13以及CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为精氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为精氨酸，并且CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置13被突变为谷氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和15分别被突变为丙氨酸和亮氨酸，CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置4被突变为酪氨酸，并且CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7被突变为苏氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13分别被突变为苏氨酸和谷氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为精氨酸，CDR3(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约5nM至约10nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7被突变为精氨酸，CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为缬氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含这样的氨基酸序列，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13分别被突变为精氨酸和谷氨酸，并且CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为缬氨酸，并且其中所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的hKd和cKd为约1nM至约5nM。
在另一个实施方案中，本文提供了编码根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多核苷酸。进一步的实施方案描述了包含如本文所公开的多核苷酸的载体。另一个实施方案描述了用根据本公开内容的载体转化的宿主细胞。在一个实施方案中提供了药物组合物，其包含(i)根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质、根据本公开内容的多核苷酸、根据本公开内容的载体或根据本公开内容的宿主细胞，和(ii)药学上可接受的载体。
在另一个实施方案中，本文描述了用于产生根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的方法，所述方法包括在允许所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质表达的条件下培养用包含编码如本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白的核酸序列的载体转化或转染的宿主，以及从培养物中回收并纯化所产生的蛋白质。
进一步描述了用于治疗或改善增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病的方法，其包括向有需要的受试者施用根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述方法进一步包括与根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质联合施用药剂。
在另一个实施方案中，描述了包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。在另一个实施方案中，描述了包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的抗体。
进一步的实施方案描述了包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性抗体、双特异性抗体、sdAb、重链可变域、肽或配体。在一个实施方案中，提供了包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的抗体，其中所述抗体是单结构域抗体。在一些实施方案中，所述单结构域抗体衍生自IgG的重链可变区。
一个实施方案描述了多特异性结合蛋白质或抗体，其包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质以及CD3结合域。在一个实施方案中，描述了用于治疗或改善增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病的方法，其包括向有需要的受试者施用根据本公开内容的多特异性抗体。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求中具体阐述。通过参考以下对利用了本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述及其附图，将会获得对本发明特征和优点的更好的理解，在这些附图中：
图1图示了通过ELISA滴定测定的亲本抗HSA噬菌体与HSA抗原和CD3抗原的特异性结合。
图2图示了通过ELISA滴定测定的抗HSA噬菌体与人、食蟹猴和小鼠血清白蛋白的交叉反应性。
图3提供了使用纯化的sdAb，为了更精确的Kd测定而选择的9个克隆的结合亲和力概况。
图4图示了几种抗HSA sdAb变体的疏水暴露温度(Th℃)。
图5图示了几种抗HSA sdAb变体在低pH下形成二聚体与单体的倾向。
具体实施方式
虽然本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替换。应当理解，本文所述的本发明实施方案的各种替代方案均可用于实施本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并且由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
某些定义
本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的，而非限制性的。如本文所用，除非上下文另有明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”也旨在包括复数形式。此外，就具体实施方式和/或权利要求书中使用的术语“包括”、“包含”、“具有”或其变化形式而言，这些术语旨在以与术语“包含”类似的方式为包含性的。
术语“约”或“大约”意指在本领域普通技术人员测定的特定值的可接受误差范围内，所述可接受误差范围将部分取决于该值如何测量或测定，例如，测量系统的局限性。例如，根据给定值的实践，“约”可以表示在1个或大于1个标准差内。在本申请和权利要求书中描述特定值的情况下，除非另有说明，否则术语“约”应被认为意指该特定值的可接受误差范围。
术语“个体”、“患者”或“受试者”可互换使用。这些术语均不要求或不限于以医疗保健工作者(例如，医生、注册护士、护士执业者、医师助理、护理员或临终关怀工作者)的监督(例如，持续或间歇的)为特征的情况。
术语“框架”或“FR”残基(或区)是指除如本文定义的CDR或高变区残基之外的可变域残基。“人共有框架”是代表在选择人免疫球蛋白VL或VH框架序列中最常出现的氨基酸残基的框架。
如本文所用，“可变区”或“可变域”是指以下情况：可变域的某些部分在抗体之间在序列上广泛不同，并且在每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中使用。然而，变异性并非均匀地分布在抗体的整个可变域中。其集中在轻链和重链可变域中称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中。可变域更高度保守的部分被称为框架(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，其主要采取β-折叠构型，且通过三个CDR连接，所述三个CDR形成连接β折叠结构的环，并且在一些情况下形成β折叠结构的一部分。每条链中的CDR通过FR区紧密靠近保持在一起，并且与来自另一条链的CDR一起有助于形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,National Institute ofHealth,Bethesda,Md.(1991))。恒定域虽然不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应物功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。“按照Kabat的可变域残基编号”或“按照Kabat的氨基酸位置编号”及其变化形式是指在Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中用于抗体编译的重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用该编号系统，实际的线性氨基酸序列可含有减少或添加的氨基酸，其对应于可变域的FR或CDR的缩短或插入。例如，重链可变域可包含在H2的残基52之后的单氨基酸插入(根据Kabat为残基52a)和在重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat为残基82a、82b和82c等)。可通过将抗体序列在同源性区域与“标准”Kabat编号的序列进行比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。这并不意味着本公开内容的CDR必然对应于Kabat编号约定。
如本文所用，相对于序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定义为在将序列进行比对并引入缺口(如果需要)以达到最大序列同一性百分比之后，候选序列中的氨基酸残基与特定序列中的氨基酸残基相同的百分比，并且不认为任何保守置换是序列同一性的一部分。为了确定氨基酸序列同一性百分比目的的比对可通过本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
如本文所用，“消除半衰期”以其普通意义使用，如在Goodman和Gillman的ThePharmaceutical Basis of Therapeutics 21-25(Alfred Goodman Gilman、LouisS.Goodman和Alfred Gilman编著，第六版1980)中所述。简言之，该术语意在包括药物消除的时间过程的定量量度。大多数药物的消除是指数性的(即，遵循一级动力学)，因为药物浓度通常并未接近消除过程的饱和所需的浓度。指数过程的速率可由其速率常数k或由其半衰期t1/2表示，速率常数k表示每单位时间的分数变化，半衰期t1/2表示该过程完成50％所需的时间。这两个常数的单位分别是时间-1和时间。反应的一级速率常数和半衰期简单相关(k×t1/2＝0.693)并且可以相应地互换。由于一级消除动力学指示每单位时间损失恒定分数的药物，因此药物浓度的对数相对于时间的图形在初始分布阶段之后(即在药物吸收和分布完成之后)一直是线性的。可从这样的图形准确地确定药物消除的半衰期。
如本文所用，术语“结合亲和力”是指本公开内容中描述的蛋白质与其结合靶标的亲和力，并且使用“Kd”值以数字表示。如果表明两种或更多种蛋白质对其结合靶标具有相当的结合亲和力，那么各蛋白质对其结合靶标结合的Kd值在彼此的±2倍之内。如果表明两种或更多种蛋白质对单一结合靶标具有相当的结合亲和力，那么各蛋白质与所述单一结合靶标结合的Kd值在彼此的±2倍之内。如果表明蛋白质以相当的结合亲和力结合两种或更多种靶标，那么所述蛋白质与该两种或更多种靶标结合的Kd值在彼此的±2倍之内。通常，较高的Kd值对应于较弱的结合。在一些实施方案中，使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,N.J.)通过放射性标记的抗原结合测定(RIA)或表面等离子体共振测定来测量“Kd”。在某些实施方案中，还使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,N.J.)通过表面等离子体共振技术来测定“缔合率”或“缔合的速率”或“缔合速率”或“kon”以及“解离率”或“解离的速率”或“解离速率”或“koff”。在其他实施方案中，使用Systems(Pall Life Sciences)来测定“Kd”、“kon”和“koff”。
本文描述了单结构域血清白蛋白结合蛋白质、药物组合物以及用于制备这样的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的核酸、重组表达载体和宿主细胞。还提供了使用所公开的单结构域血清白蛋白结合蛋白质预防和/或治疗疾病、病况和病症的方法。该单结构域血清白蛋白结合蛋白质能够特异性结合血清白蛋白。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质包含其他结构域，诸如CD3结合域以及针对其他靶抗原的结合域。
单结构域血清白蛋白结合蛋白质
本文考虑了单结构域血清白蛋白结合蛋白质。血清白蛋白由肝脏产生，以溶于血浆中的形式存在，并且是哺乳动物中最丰富的血液蛋白质。白蛋白对于维持体液在血管与身体组织之间的适当分布所需的膨胀压至关重要；在没有白蛋白的情况下，血管中的高压会迫使更多流体流出并进入组织。其还通过与几种疏水性类固醇激素非特异性结合而充当血浆载体，以及充当氯高铁血红素和脂肪酸的转运蛋白。人血清白蛋白(HSA)(分子量～67kDa)是血浆中最丰富的蛋白质，以约50mg/ml(600μM)存在，并且在人体内具有约20天的半衰期。HSA用于维持血浆pH，对胶体血压有贡献，起到许多代谢物和脂肪酸的载体的作用，并且充当血浆中的主要药物转运蛋白。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质与HSA结合。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质与来自食蟹猴的血清白蛋白结合。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质与HSA和来自食蟹猴的血清白蛋白结合。在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质还与小鼠血清白蛋白结合。在一些实施方案中，对小鼠血清白蛋白的结合亲和力比对人或食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力弱约1.5倍至约20倍。
与白蛋白的非共价缔合延长了短寿命蛋白质的消除半衰期。例如，与单独施用Fab片段相比，分别向小鼠和兔静脉内施用白蛋白结合域与Fab片段的重组融合物导致体内清除率降低了25倍和58倍，并且半衰期延长26倍和37倍。在另一个实例中，在用脂肪酸对胰岛素进行酰化以促进与白蛋白缔合的情况下，当在兔或猪中皮下注射时观察到持久的效果。总之，这些研究证明白蛋白结合与延长的作用/血清半衰期之间存在联系。
在一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质是单结构域抗体，诸如对血清白蛋白具有特异性的重链可变域(VH)、骆驼科来源的sdAb的可变域(VHH)、肽、配体或小分子实体。在一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质是单结构域抗体，诸如对HSA具有特异性的重链可变域(VH)、骆驼科来源的sdAb的可变域(VHH)、肽、配体或小分子实体。在一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的血清白蛋白结合域是与血清白蛋白结合的任何结构域，包括但不限于来自单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体的结构域。在某些实施方案中，该血清白蛋白结合域是单结构域抗体。在其他实施方案中，该血清白蛋白结合域是肽。在进一步的实施方案中，该血清白蛋白结合域是小分子。考虑到该单结构域血清白蛋白结合蛋白质相当小，并且在一些实施方案中不大于25kD、不大于20kD、不大于15kD或不大于10kD。在某些情况下中，如果该单结构域血清白蛋白结合蛋白质是肽或小分子实体，则其为5kD或更小。
在一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质是半衰期延长结构域，其对单结构域血清白蛋白结合蛋白质自身提供改变的药效学和药代动力学。如上所述，半衰期延长结构域延长了消除半衰期。半衰期延长结构域还改变药效学性质，包括改变单结构域血清白蛋白结合蛋白的组织分布、渗透和扩散。在一些实施方案中，与没有半衰期延长结构域的蛋白质相比，半衰期延长结构域提供改善的组织(包括肿瘤)靶向、组织分布、组织穿透、在组织内的扩散和增强的疗效。在一个实施方案中，治疗方法有效且高效地利用较少量的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，导致副作用降低，如非肿瘤细胞的细胞毒性降低。
此外，可选择单结构域血清白蛋白结合蛋白质对其结合靶标的结合亲和力，以便在特定的单结构域血清白蛋白结合蛋白质中指向特定的消除半衰期。因此，在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质对其结合靶标具有高结合亲和力。在其他实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质对其结合靶标具有中等结合亲和力。在其他实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质对其结合靶标具有低的或微小的结合亲和力。示例性的结合亲和力包括10nM或更小(高)、10nM至100nM(中等)和大于100nM(低)的KD。如上所述，通过诸如表面等离子体共振(SPR)等已知方法来测定单结构域血清白蛋白结合蛋白质对结合靶标的结合亲和力。
在某些实施方案中，本文公开的单结构域血清白蛋白结合蛋白质以人Kd(hKd)与HSA结合。在某些实施方案中，本文公开的单结构域血清白蛋白结合蛋白质以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合。在某些实施方案中，本文公开的单结构域血清白蛋白结合蛋白质以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合并以人Kd(hKd)与HSA结合。在一些实施方案中，hKd的范围在1nM至100nM之间。在一些实施方案中，hKd的范围在1nM至10nM之间。在一些实施方案中，cKd的范围在1nM至100nM之间。在一些实施方案中，cKd的范围在1nM至10nM之间。在一些实施方案中，hKd和cKd的范围在约1nM至约5nM或约5nM至10nM之间。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质与选自人血清白蛋白、食蟹猴血清白蛋白和小鼠血清白蛋白的血清白蛋白结合。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人血清白蛋白、食蟹猴血清白蛋白和小鼠血清白蛋白结合。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质以约1nM至约10nM的人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以1nM至10nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质以约10nM至约50nM的小鼠Kd(mKd)与小鼠血清白蛋白结合。
在一些实施方案中，hKd为约1.5nM、约1.6nM、约1.7nM、约1.8nM、约1.9nM、约2nM、约2.1nM、约2.2nM、约2.3nM、约2.4nM、约2.5nM、约2.6nM、约2.7nM、约2.8nM、约2.9nM、约3nM、3.1nM、约3.2nM、约3.3nM、约3.4nM、约3.5nM、约3.6nM、约3.7nM、约3.8nM、约3.9nM、约4nM、约4.5nM、约5nM、约6、约6.5nM、约7nM、约7.5nM、约8nM、约8.5nM、约9.0nM、约9.5nM或约10nM。
在一些实施方案中，cKd为约1.5nM、约1.6nM、约1.7nM、约1.8nM、约1.9nM、约2nM、约2.1nM、约2.2nM、约2.3nM、约2.4nM、约2.5nM、约2.6nM、约2.7nM、约2.8nM、约2.9nM、约3nM、3.1nM、约3.2nM、约3.3nM、约3.4nM、约3.5nM、约3.6nM、约3.7nM、约3.8nM、约3.9nM、约4nM、约4.5nM、约5nM、约6、约6.5nM、约7nM、约7.5nM、约8nM、约8.5nM、约9.0nM、约9.5nM或约10nM。
在一些实施方案中，mKd为约10nM、约11nM、约12nM、约13nM、约14nM、约15nM、约16nM、约17nM、约18nM、约19nM、约20nM、约21nM、约22nM、约23nM、约24nM、约25nM、约26nM、约27nM、约28nM、约29nM、约30nM、约31nM、约32nM、约33nM、约34nM、约35nM、约36nM、约37、约38nM、约39nM、约40nM、约41nM、约42nM、约43nM、约44nM、约45nM、约46nM、约47nM、约48nM或约50nM。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有选自SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ IN NO.25、SEQID NO.26和SEQ ID NO.27的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，并且hKd为约2.3nM且cKd为约2.4nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列，并且hKd为约2.1nM且cKd为约2.2nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，并且hKd为约1.9nM且cKd为约1.7nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ IDNO.6所示的氨基酸序列，并且hKd为约3.2nM且cKd为约3.6nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，并且hKd为约2.7nM且cKd为约2.6nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列，并且hKd为约2.1nM且cKd为约2nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，并且hKd和cKd为约5nM至约10nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，并且hKd为约6nM且cKd为约7.5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，并且其中hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，并且其中hKd为约2.2nM且cKd为约2.3nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列，并且其中hKd和cKd为约1nM至约5nM。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列，并且其中hKd为约1.6nM且cKd为约1.6nM。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，并且具有约17nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，并且具有约12nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，并且具有约33nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，并且具有约14nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，并且具有约16nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列，并且具有约17nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列，并且具有约17nM的mKd。在一些实施方案中，该单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有如SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列，并且具有约16nM的mKd。
在一些实施方案中，hKd与cKd之比(hKd:cKd)在约20:1至约1:2的范围内。
在一些实施方案中，所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质具有至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少6小时、至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时的消除半衰期。
CD3结合域
通过T细胞受体复合物对抗原(在主要组织相容性复合物MHC的背景下展示)的识别来介导T细胞应答的特异性。作为T细胞受体复合物的一部分，CD3是包含CD3γ(gamma)链、CD3δ(delta)链和存在于细胞表面上的两条CD3ε(epsilon)链的蛋白质复合物。CD3与T细胞受体(TCR)的α(alpha)和β(beta)链缔合并与CD3ζ(zeta)一起构成T细胞受体复合物。CD3在T细胞上的群集(如通过固定的抗CD3抗体)导致T细胞活化，这类似于T细胞受体的接合，但不依赖于其克隆特有的特异性。
在一方面，本文描述了包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与CD3特异性结合的结构域。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与人CD3特异性结合的结构域。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与CD3γ特异性结合的结构域。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与CD3δ特异性结合的结构域。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与CD3ε特异性结合的结构域。
在另外的实施方案中，所述多特异性蛋白质进一步包含与T细胞受体(TCR)特异性结合的结构域。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与TCR的α链特异性结合的结构域。在一些实施方案中，该多特异性蛋白质进一步包含与TCR的β链特异性结合的结构域。
在某些实施方案中，包含本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质的CD3结合域不仅表现出强力的与人CD3的CD3结合亲和力，而且还显示出与相应的食蟹猴CD3蛋白质极好的交叉反应性。在一些情况下，该多特异性蛋白质的CD3结合域与来自食蟹猴的CD3是交叉反应性的。在某些情况下，关于CD3结合的人:食蟹猴KD(hKd:cKd)之比为20:1至1:2。
在一些实施方案中，包含本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质的CD3结合域可以是与CD3结合的任何结构域，包括但不限于来自单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体的结构域，或者CD3结合抗体的抗原结合片段，诸如单结构域抗体(sdAb)、Fab、Fab'、F(ab)2和Fv片段、由一个或多个CDR组成的片段、单链抗体(例如，单链Fv片段(scFv))、二硫键稳定的(dsFv)Fv片段、异缀合抗体(例如，双特异性抗体)、pFv片段、重链单体或二聚体、轻链单体或二聚体以及由一条重链和一条轻链组成的二聚体。在一些情况下，CD3结合域来源于包含本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质最终将在其中使用的相同物种是有益的。例如，对于在人类中使用，包含本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质的CD3结合域包含来自抗体或抗体片段的抗原结合域的人或人源化残基可能是有益的。
因此，在一方面，所述抗原结合域包含人源化或人抗体或抗体片段或者鼠抗体或抗体片段。在一个实施方案中，人源化或人抗CD3结合域包含本文所述的人源化或人抗CD3结合域的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LCCDR3)中的一个或多个(例如，全部三个)，和/或本文所述的人源化或人抗CD3结合域的重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)中的一个或多个(例如，全部三个)，例如，人源化或人抗CD3结合域包含一个或多个，例如全部三个LC CDR，以及一个或多个，例如全部三个HC CDR。
在一些实施方案中，人源化或人抗CD3结合域包含对CD3具有特异性的人源化或人轻链可变区，其中对CD3具有特异性的轻链可变区包含人轻链框架区中的人或非人轻链CDR。在某些情况下，该轻链框架区为λ(lambda)轻链框架。在其他情况下，该轻链框架区为κ(kappa)轻链框架。
在一些实施方案中，人源化或人抗CD3结合域包含对CD3具有特异性的人源化或人重链可变区，其中对CD3具有特异性的重链可变区包含人重链框架区中的人或非人重链CDR。
在某些情况下，重链和/或轻链的互补决定区衍生自已知的抗CD3抗体，例如，莫罗单抗-CD3(OKT3)、奥昔珠单抗(TRX4)、替利珠单抗(MGA031)、维西珠单抗(Nuvion)、SP34、TR-66或X35-3、VIT3、BMA030(BW264/56)、CLB-T3/3、CRIS7、YTH12.5、F111-409、CLB-T3.4.2、TR-66、WT32、SPv-T3b、11D8、XIII-141、XIII-46、XIII-87、12F6、T3/RW2-8C8、T3/RW2-4B6、OKT3D、M-T301、SMC2、F101.01、UCHT-1和WT-31。
与CD3结合的亲和力可通过例如包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质自身或其CD3结合域与测定板上涂覆的CD3、微生物细胞表面上展示的CD3、溶液中的CD3等结合的能力来测定。根据本公开内容的包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性蛋白质自身或其CD3结构域与CD3的结合活性可如下测定：将配体(例如，CD3)或所述多特异性蛋白质自身或其CD3结合域固定至珠子、基底、细胞等。可将试剂添加至合适的缓冲液中并将结合配偶体在给定的温度下温育一段时间。洗涤以去除未结合的物质后，可采用例如SDS、高pH缓冲液等释放结合的蛋白质，并通过例如表面等离子体共振(SPR)进行分析。
靶抗原结合域
在某些实施方案中，除了所述血清白蛋白结合域和CD3结构域之外，本文所述的包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质还包含与靶抗原结合的结构域。靶抗原参与疾病、病症或病况和/或与疾病、病症或病况有关。特别地，靶抗原与增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病有关。在一些实施方案中，靶抗原是肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原。或者，在一些实施方案中，靶抗原与病原体如病毒或细菌有关。
在一些实施方案中，靶抗原是细胞表面分子，如蛋白质、脂质或多糖。在一些实施方案中，靶抗原在肿瘤细胞、病毒感染的细胞、细菌感染的细胞、受损红细胞、动脉斑块细胞或纤维化组织细胞上。
包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质的设计允许靶抗原的结合域为柔性的，因为靶抗原的结合域可以是任何类型的结合域，包括但不限于来自单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体的结构域。在一些实施方案中，靶抗原的结合域为单链可变片段(scFv)、单结构域抗体如重链可变域(VH)、轻链可变域(VL)和骆驼科来源的sdAb的可变域(VHH)。在其他实施方案中，靶抗原的结合域为非Ig结合域，即，抗体模拟物，如anticalin、affilin、affibody分子、affimer、affitin、alphabody、avimer、DARPin、fynomer、kunitz结构域肽和单抗体(monobody)。在进一步的实施方案中，靶抗原的结合域为与靶抗原结合或缔合的配体或肽。在进一步的实施方案中，靶抗原的结合域为knottin。在进一步的实施方案中，靶抗原的结合域为小分子实体。
单结构域血清白蛋白结合蛋白质修饰
本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质包括衍生物或类似物，其中(i)氨基酸被不是由遗传密码编码的氨基酸残基置换，(ii)成熟多肽与另一化合物如聚乙二醇融合，或(iii)附加的氨基酸与该蛋白质融合，如前导序列或分泌序列或阻断免疫原性结构域的序列和/或用于纯化蛋白质的序列。
典型的修饰包括但不限于乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价附接、血红素部分的共价附接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价附接、脂质或脂质衍生物的共价附接、磷脂酰肌醇的共价附接、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联形成、胱氨酸形成、焦谷氨酸形成、甲酰化、γ羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、十四烷基化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、转移RNA介导的氨基酸向蛋白质的添加，如精氨酰化，和泛素化。
在本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质中的任何位置进行修饰，该位置包括肽骨架、氨基酸侧链以及氨基或羧基末端。可用于修饰单结构域血清白蛋白结合蛋白质的某些常见肽修饰包括糖基化、脂质附接、硫酸化、谷氨酸残基的γ-羧化、羟基化、多肽中的氨基或羧基基团或两者被共价修饰的阻断，以及ADP-核糖基化。
编码单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多核苷酸
在一些实施方案中，还提供了编码本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多核苷酸分子。在一些实施方案中，该多核苷酸分子以DNA构建体的形式提供。在其他实施方案中，该多核苷酸分子以信使RNA转录物的形式提供。
通过已知方法构建多核苷酸分子，例如通过将编码由肽接头隔开，或在其他实施方案中通过肽键直接连接的三个结合域的基因合并为单个基因构建体，该单个基因构建体与合适的启动子以及可选的合适的转录终止子可操作地连接，并且将其在细菌或其他合适的表达系统例如CHO细胞中表达。
在一些实施方案中，还提供了编码包含根据本公开内容的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白的多核苷酸分子。在一些实施方案中，编码所述多特异性结合蛋白质的多核苷酸还包括CD3结合域的编码序列。在一些实施方案中，编码所述多特异性结合蛋白质的多核苷酸还包括靶抗原结合域的编码序列。在一些实施方案中，编码所述多特异性结合蛋白质的多核苷酸还包括CD3结合域和靶抗原结合域的编码序列。在一些实施方案中，该多核苷酸分子以DNA构建体的形式提供。在其他实施方案中，该多核苷酸分子以信使RNA转录物的形式提供。在靶抗原结合域为小分子的实施方案中，该多核苷酸含有编码血清白蛋白结合域和CD3结合域的基因。在半衰期延长结构域为小分子的实施方案中，该多核苷酸含有编码与CD3和靶抗原结合的结构域的基因。根据所采用的载体系统和宿主，可使用任何数目的合适的转录和翻译元件，包括组成型和诱导型启动子。选择启动子使得其驱动多核苷酸在相应宿主细胞中的表达。
在一些实施方案中，将多核苷酸插入载体中，优选表达载体中，这代表进一步的实施方案。该重组载体可根据已知方法来构建。特别感兴趣的载体包括质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、病毒(virii)(例如，逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、慢病毒等)和粘粒。
可利用多种表达载体/宿主系统，以包含并表达编码所述单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多肽的多核苷酸。用于在大肠杆菌(E.coli)中表达的表达载体的实例为pSKK(Le Gall等人,J Immunol Methods.(2004)285(1):111-27)，用于在哺乳动物细胞中表达的pcDNA5(Invitrogen)，PICHIAPINKTM酵母表达系统(Invitrogen)，BACUVANCETM杆状病毒表达系统(GenScript)。
因此，在一些实施方案中，如本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质通过以下步骤产生：将编码如上所述的蛋白质的载体引入宿主细胞中，并在蛋白质结构域借以表达的条件下培养所述宿主细胞，该宿主细胞可进行分离并任选地进一步纯化。
单结构域血清白蛋白结合蛋白质的产生
在一些实施方案中，本文公开了用于产生单结构域血清白蛋白结合蛋白质的方法。在一些实施方案中，该方法包括在允许单结构域血清白蛋白结合蛋白质表达的条件下培养用包含编码单结构域血清白蛋白结合蛋白质的核酸序列的载体转化或转染的宿主，并从培养物中回收并纯化所产生的蛋白质。
在另外的实施方案中，提供了针对与参考结合化合物相比改善本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质和/或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质的一种或多种性质的方法，所述性质例如是亲和力、稳定性、耐热性、交叉反应性等。在一些实施方案中，提供了多个单置换文库，每个文库对应于单结构域血清白蛋白结合蛋白质或参考结合化合物的不同结构域或氨基酸区段，使得单置换文库的每个成员仅编码在其相应的结构域或氨基酸区段中的单氨基酸变化(这允许用少量小文库探测大的蛋白质或蛋白质结合位点中的所有潜在置换)。在一些实施方案中，多个结构域形成或覆盖单结构域血清白蛋白结合蛋白质或参考结合化合物的氨基酸连续序列。不同单置换文库的核苷酸序列与至少一个其他单置换文库的核苷酸序列重叠。在一些实施方案中，设计多个单置换文库，使得每个成员与编码相邻结构域的每个单置换文库的每个成员重叠。
单独选择由这样的单置换文库表达的结合化合物以获得每个文库的变体子集，所述变体子集具有与参考结合化合物的性质至少一样好的性质，并且其得到的文库大小减小(即，编码结合化合物的选定组的核酸数目小于编码原始单置换文库的成员的核酸数目)。这样的性质包括但不限于对靶标化合物的亲和力，在诸如加热、高pH或低pH、酶促降解等各种条件下的稳定性，与其他蛋白质的交叉反应性，等等。来自每个单置换文库的选定化合物在本文可互换地称为“预候选化合物”或“预候选蛋白质”。然后使用基于PCR的基因改组技术，将编码来自单独的单置换文库的预候选化合物的核酸序列在PCR中改组以产生改组文库。
本文描述了筛选过程的示例性工作流程。从单置换文库产生预候选化合物的文库并针对与靶蛋白质的结合进行选择，之后将预候选文库改组以产生编码候选化合物的核酸文库，继而将该核酸文库依次克隆到适宜的表达载体如噬菌粒表达系统中。然后使表达候选化合物的噬菌体经历一轮或多轮选择以改善所需性质，如对靶分子的结合亲和力。靶分子可被吸附或以其他方式附着到孔或其他反应容器的表面，或者靶分子可用结合部分如生物素进行衍生化，该结合部分在与候选结合化合物一起温育后可用与珠子如磁珠结合的互补部分如链霉素捕获，以供洗涤。在示例性选择方案中，候选结合化合物经受延长的洗涤步骤，使得仅与靶分子具有非常低的解离速率的候选化合物得以选择。这样的实施方案的示例性洗涤时间为至少8小时；或者在其他实施方案中为至少24小时；或者在其他实施方案中为至少48小时；或者在其他实施方案中为至少72小时。在选择后，将分离的克隆扩增并使其进行另外的选择循环或分析，例如通过测序和通过对结合亲和力的比较测量，例如通过ELISA、表面等离子体共振结合、生物膜干涉法(例如，Octet system,ForteBio,MenloPark,CA)等。在一些实施方案中，实施该过程以鉴别与参考血清白蛋白结合蛋白质(如具有SEQ ID NO.10的氨基酸序列的蛋白质)相比具有改善的热稳定性、改善的与选定组的结合靶标的交叉反应性的一种或多种单结构域血清白蛋白结合蛋白质和/或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。通过改变参考血清白蛋白结合蛋白质的VH区中的密码子来制备单置换文库，该密码子包括框架区和CDR中的密码子；在另一个实施方案中，密码子发生改变的位置包括参考血清白蛋白结合蛋白质的重链的CDR，或者此类CDR的子集，如仅CDR1、仅CDR2、仅CDR3或CDR对。在另一个实施方案中，密码子发生改变的位置仅在框架区中出现。在一些实施方案中，文库仅包含相对于参考血清白蛋白结合蛋白质的单密码子变化，该变化仅在编号范围为10至250的VH的框架区中。在另一个实施方案中，密码子发生改变的位置包括参考血清白蛋白结合蛋白质的重链的CDR3或此类CDR3的子集。在另一个实施方案中，VH编码区密码子发生改变的位置的数目在10至250的范围内，使得至多100个位置在框架区中。在如上所述制备单置换文库后进行以下步骤：(a)单独表达每个单置换文库的每个成员作为预候选蛋白质；(b)选择编码与结合配偶体结合的预候选蛋白质的每个单置换文库的成员，该结合配偶体可与原始结合靶标[例如，所需的交叉反应靶标]不同或相同；(c)在PCR中改组选定文库的成员以产生组合的改组文库；(d)表达该改组文库的成员作为候选血清白蛋白结合蛋白质；以及(e)对该改组文库的成员进行一次或多次选择以获得与原始结合配偶体结合的候选血清白蛋白结合蛋白质，并且可能(f)针对与所需交叉反应性靶标的结合进一步选择候选蛋白质，从而提供核酸编码的血清白蛋白结合蛋白质，其相对于参考血清白蛋白结合蛋白质对一种或多种物质具有增加的交叉反应性，而不丧失对原始配体的亲和力。在另外的实施方案中，可通过用以下步骤代替步骤(f)来实现该方法，以获得对选定的交叉反应性物质或化合物或表位具有降低的反应性的血清白蛋白结合蛋白质：从候选血清白蛋白结合蛋白质的子集中一次或多次排除与不需要的交叉反应性化合物结合的候选结合化合物。
最近的研究已经报道，在制备、储存和体内使用的过程中，治疗性抗体有通过许多途径降解的风险。蛋白质中最常发生的化学降解反应包括天冬酰胺(N)的脱酰胺作用和天冬氨酸(D)残基的异构化。特别地，假设如果N和D残基参与抗原识别，则它们的化学改变可导致严重的效力损失。已知天冬酰胺和天冬氨酸残基共享通过形成环状琥珀酰亚胺中间体而进行的降解途径。在抗体的天冬氨酸位点形成琥珀酰亚胺中间体及其水解产物(天冬氨酸盐和异天冬氨酸盐)代表着稳定性问题。当发生异构化时，抗体的化学结构改变，这可能导致较差的稳定性，例如通过聚集、较短的保质期所表现出来的。因此，在本公开内容的一些实施方案中，提供了单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中一个或多个天冬氨酸残基发生突变，从而降低了单结构域血清白蛋白结合蛋白质的异构化可能。在一些实施方案中，天冬氨酸残基在单结构域血清白蛋白结合蛋白质的CDR2中，并且天冬氨酸残基被突变为谷氨酸。在某些实施方案中，由SEQ ID NO.10定义的蛋白质的位置62处的天冬氨酸残基被突变为谷氨酸(D62E)。在一些实施方案中，含有D62E突变的单结构域血清白蛋白蛋白的血清白蛋白结合亲和力不受突变影响。在一些实施方案中，具有和不具有D62E突变的单结构域血清白蛋白结合蛋白质对血清白蛋白具有相当的结合亲和力。
药物组合物
在一些实施方案中，还提供了药物组合物，其包含本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质、包含编码单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多肽的多核苷酸的载体或被该载体转化的宿主细胞，以及至少一种药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的载体”包括但不限于不干扰成分的生物活性的有效性且对所施用的患者无毒的任何载体。合适的药物载体的实例是本领域公知的，且包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液如水包油乳液、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。这样的载体可通过常规方法配制，并且可以以合适的剂量施用于受试者。优选地，该组合物是无菌的。这些组合物还可含有佐剂如防腐剂、乳化剂和分散剂。可通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂来确保阻止微生物的作用。
在药物组合物的一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质被包封在纳米颗粒中。在一些实施方案中，该纳米颗粒是富勒烯、液晶、脂质体、量子点、超顺磁纳米颗粒、树状聚体或纳米棒。在药物组合物的其他实施方案中，将单结构域血清白蛋白结合蛋白质附着至脂质体。在一些情况下，单结构域血清白蛋白结合蛋白质与脂质体表面缀合。在一些情况下，单结构域血清白蛋白结合蛋白质被包封在脂质体的壳内。在一些情况下，该脂质体为阳离子脂质体。
本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质被考虑用作药物。施用通过不同方式实现，例如，通过静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部或真皮内施用。在一些实施方案中，施用途径取决于疗法的种类和药物组合物中包含的化合物的种类。给药方案将由主治医师根据其他临床因素来确定。对于任何一名患者的剂量依赖于许多因素，包括患者体型、体表面积、年龄、性别、待施用的具体化合物、施用的时间和途径、疗法的种类、总体健康和其他同时施用的药物。“有效剂量”是指活性成分的量，该量足以影响疾病的过程和严重程度，从而导致这种病理学的减轻或缓解，并且可使用已知方法来确定。
治疗方法
在一些实施方案中，本文还提供了用于刺激有需要的个体的免疫系统的方法和用途，其包括施用本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。在一些情况下，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的施用诱导和/或保持对表达靶抗原的细胞的细胞毒性。在一些情况下，表达靶抗原的细胞是癌细胞或肿瘤细胞、病毒感染的细胞、细菌感染的细胞、自身反应性T细胞或B细胞、受损的红细胞、动脉斑块或纤维化组织。
本文还提供了用于治疗与靶抗原有关的疾病、病症或病况的方法和用途，其包括向有需要的个体施用本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。与靶抗原有关的疾病、病症或病况包括但不限于病毒感染、细菌感染、自身免疫病、移植排斥、动脉粥样硬化或纤维化。在其他实施方案中，与靶抗原有关的疾病、病症或病况为增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病。在一个实施方案中，与靶抗原有关的疾病、病症或病况为癌症。在一种情况下，该癌症为血液系统癌症。在另一种情况下，该癌症为实体瘤癌症。
在一些实施方案中，如本文所用，“治疗”或“处理”是指治疗性处理，其中目的是减缓(减轻)不期望的生理病况、病症或疾病，或是获得有益或期望的临床结果。对于本文所述的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于症状的减轻；病况、病症或疾病程度的减小；病况、病症或疾病状态的稳定(即不恶化)；病况、病症或疾病的延迟发作或进展减缓；病况、病症或疾病状态的改善；以及可检测的或不可检测的缓解(部分或全部的)，或者病况、病症或疾病的增强或改善。治疗包括引发临床上显著的反应，而没有过多的副作用。治疗还包括与不接受治疗的情况下预期的生存期相比延长生存期。在其他实施方案中，“治疗”或“处理”是指预防性措施，其中目的是例如在易患疾病的人(例如，携带疾病如乳腺癌的遗传标志物的个体)中，延迟不期望的生理病况、病症或疾病的发作或者减小其严重程度。
在本文所述的方法的一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质与用于治疗特定疾病、病症或病况的药剂联合施用。药剂包括但不限于涉及抗体、小分子(例如，化疗药物)、激素(甾体、肽等)的疗法、放疗(γ射线、X射线和/或放射性同位素的定向递送、微波、UV辐射等)、基因疗法(例如，反义疗法(antisense)、逆转录病毒疗法等)和其他免疫疗法。在一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质与止泻剂、止吐剂、镇痛药、阿片类药物和/或非甾体抗炎剂联合施用。在一些实施方案中，本文所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质或包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质在手术之前、期间或之后施用。
本发明提供了包括但不限于以下实施方式：
1.一种单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中
(a)CDR1的氨基酸序列如GFX1X2X3X4FGMS(SEQ ID NO.1)所示，X1是苏氨酸、精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸，X2是苯丙氨酸或酪氨酸，X3是丝氨酸、精氨酸或赖氨酸，X4是丝氨酸、赖氨酸、精氨酸或丙氨酸；
(b)CDR2的氨基酸序列如SISGSGX5X6TLYAX7SX8K(SEQ ID NO.2)所示，X5是丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或丙氨酸，X6是天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸或苏氨酸，X7是天冬氨酸、组氨酸、精氨酸或丝氨酸，X8是缬氨酸或亮氨酸；并且
(c)CDR3的氨基酸序列如GGSLX9X10(SEQ ID NO.3)所示，X9是丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或赖氨酸，并且X10是精氨酸、赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和X10不同时分别是苏氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、丝氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、丝氨酸和精氨酸。
2.如实施方式1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含下式：
f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4
其中r1是SEQ ID NO.1；r2是SEQ ID NO.2；并且r3是SEQ ID NO.3；并且其中f1、f2、f3和f4是选定的框架残基，使得所述蛋白质与SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列至少80％相同。
3.如实施方式2所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ IDNO.14、SEQ ID NO.15或SEQ ID NO.16。
4.如实施方式2所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r2包含SEQ IDNO.17、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22。
5.如实施方式2所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r3包含SEQ IDNO.23或SEQ ID NO.24。
6.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.14。
7.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.15，r2为SEQ ID NO.17，并且r3为SEQ ID NO.23。
8.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.16，r3包含SEQ ID NO.23。
9.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.15，并且r2包含SEQ ID NO.18。
10.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.14，并且r3包含SEQ ID NO.23。
11.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.15，r2包含SEQ ID NO.19，并且r3包含SEQ ID NO.24。
12.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.14，并且r2包含SEQ ID NO.20。
13.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.15，并且r2包含SEQ ID NO.21。
14.如实施方式2-5中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中r1包含SEQ ID NO.15，r2包含SEQ ID NO.22，并且r3包含SEQ ID NO.24。
15.如实施方式1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质具有选自SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQIN NO.25、SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.27的氨基酸序列。
16.如实施方式1-15中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质与选自人血清白蛋白、食蟹猴血清白蛋白和小鼠血清白蛋白的血清白蛋白结合。
17.如实施方式1-16中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人血清白蛋白和食蟹猴血清白蛋白结合。
18.如实施方式1-17中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质与小鼠血清白蛋白结合的结合亲和力(Kd)比所述蛋白质对人和食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力(Kd)弱约1.5倍至约20倍。
19.如实施方式1-18中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以约1nM至约100nM的人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以1nM至100nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合。
20.如实施方式19所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为1nM至约5nM或约5nM至约10nM。
21.如实施方式20所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约2nM、约2nM至约3nM、约3nM至约4nM、约4nM至约5nM、约5nM至约6nM、约6nM至约7nM、约7nM至约8nM、约8nM至约9nM或约9nM至约10nM。
22.如实施方式16-21中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd与所述cKd之比(hKd:cKd)在约20:1至约1:2的范围内。
23.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
24.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
25.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
26.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
27.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约5nM至约10nM。
28.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
29.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
30.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
31.如实施方式1-22中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
32.如实施方式1-31中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质具有至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时的消除半衰期。
33.一种包含CDR1、CDR2和CDR3的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含如SEQID NO.10(野生型抗HSA)所示的序列，其中选自CDR1的氨基酸位置28、29、30或31，CDR2的位置56、57、62或64，以及CDR3的位置103和104的一个或多个氨基酸残基被置换，其中
氨基酸位置28被精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸置换，
氨基酸位置29被酪氨酸置换，
氨基酸位置30被精氨酸或赖氨酸置换，
氨基酸位置31被赖氨酸、精氨酸或丙氨酸置换，
氨基酸位置56被精氨酸、苏氨酸或丙氨酸置换，
氨基酸位置57被组氨酸、缬氨酸或苏氨酸置换，
氨基酸位置62被组氨酸、精氨酸、谷氨酸或丝氨酸置换，
氨基酸位置64被亮氨酸置换，
氨基酸位置103被精氨酸、苏氨酸或赖氨酸置换，
氨基酸位置104被赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺置换。
34.如实施方式33所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在除位置28、29、30、31、56、57、62、64、103和104之外的氨基酸位置处包含一个或多个另外的置换。
35.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在位置29处包含置换。
36.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在位置31处包含置换。
37.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在位置56处包含置换。
38.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在位置62处包含置换。
39.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在位置64处包含置换。
40.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在位置104处包含置换。
41.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在氨基酸位置31和62处包含置换。
42.如实施方式36所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被精氨酸置换。
43.如实施方式41所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，并且氨基酸位置62被谷氨酸置换。
44.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在氨基酸位置31、56、64和104处包含置换。
45.如实施方式44所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被丙氨酸置换，氨基酸位置64被亮氨酸置换，并且氨基酸位置104被赖氨酸置换。
46.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置29和104被置换。
47.如实施方式46所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置29被酪氨酸置换，并且氨基酸位置104被赖氨酸置换。
48.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31和56被置换。
49.如实施方式48所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，并且氨基酸位置56被苏氨酸置换。
50.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31、56和62被置换。
51.如实施方式50所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被苏氨酸置换，并且氨基酸位置62被谷氨酸置换。
52.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31和104被置换。
53.如实施方式52所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，并且氨基酸位置104被赖氨酸置换。
54.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31、56和104被置换。
55.如实施方式54所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，并且氨基酸位置104被缬氨酸置换。
56.如实施方式33或34所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31、56、62和104被置换。
57.如实施方式56所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且氨基酸位置104被缬氨酸置换。
58.如实施方式33-57中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人血清白蛋白、食蟹猴血清白蛋白结合。
59.如实施方式33-58中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质与小鼠血清白蛋白结合的结合亲和力(Kd)比所述蛋白质对人和食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力(Kd)弱约1.5倍至约20倍。
60.如实施方式33-59中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以约1nM至约100nM的人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以1nM至100nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合。
61.如实施方式33-60所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为1nM至约5nM或约5nM至约10nM。
62.如实施方式33-61中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约2nM、约2nM至约3nM、约3nM至约4nM、约4nM至约5nM、约5nM至约6nM、约6nM至约7nM、约7nM至约8nM、约8nM至约9nM或约9nM至约10nM。
63.如实施方式33-62中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合，并且其中hKd与cKd之比(hKd:cKd)为20:1至1:2。
64.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
65.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，并且氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
66.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被丙氨酸置换，氨基酸位置64被亮氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
67.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置29被酪氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
68.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被苏氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
69.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被苏氨酸置换，氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
70.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被精氨酸置换，氨基酸位置104被赖氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约5nM至约10nM。
71.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，氨基酸位置104被缬氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
72.如实施方式33-63中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中氨基酸位置31被赖氨酸置换，氨基酸位置56被精氨酸置换，氨基酸位置62被谷氨酸置换，并且氨基酸位置104被缬氨酸置换，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
73.如实施方式33-72中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质具有至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时的消除半衰期。
74.一种单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1、CDR2或CDR3中包含至少一个突变，其中CDR1具有如SEQ ID NO:11所示的序列，CDR2具有如SEQ ID NO:12所示的序列，CDR3具有如SEQ ID NO.13所示的序列，并且其中所述至少一个突变不在SEQ ID NO:11的氨基酸位置1、2、7、8、9或10，SEQ ID NO:12的位置1、3、6、10或11，或者SEQ ID NO:13的位置1或2处。
75.如实施方式74所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在选自CDR1(SEQ IDNO:11)的位置3、4、5和6，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7、8、13和15，以及CDR3(SEQ IDNO:13)的氨基酸位置5和6的氨基酸位置处包含至少一个突变。
76.如实施方式75所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在除CDR1(SEQ IDNO:11)的氨基酸位置3、4、5和6，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7、8、13和15，以及CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置5和6之外的氨基酸位置处包含一个或多个另外的置换。
77.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6处包含突变。
78.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6和CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置13处包含突变。
79.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6、CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和15以及CDR3(SEQID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。
80.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置4和CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。
81.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6和CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7处包含突变。
82.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6以及CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13处包含突变。
83.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6和CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。
84.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6、CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7以及CDR3(SEQ IDNO:13)的氨基酸位置6处包含突变。
85.如实施方式74-76中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其在CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6、CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13以及CDR3(SEQID NO:13)的氨基酸位置6处包含突变。
86.如实施方式74-85中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人血清白蛋白和食蟹猴血清白蛋白结合。
87.如实施方式74-86中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质与小鼠血清白蛋白结合的结合亲和力(Kd)比所述蛋白质对人和食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力(Kd)弱约1.5倍至约20倍。
88.如实施方式74-87中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以约1nM至约100nM的人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以1nM至100nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合。
89.如实施方式74-88中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为1nM至约5nM或约5nM至约10nM。
90.如实施方式74-89中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约2nM、约2nM至约3nM、约3nM至约4nM、约4nM至约5nM、约5nM至约6nM、约6nM至约7nM、约7nM至约8nM、约8nM至约9nM或约9nM至约10nM。
91.如实施方式74-90中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，并且以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合，并且其中hKd与cKd之比(hKd:cKd)为20:1至1:2。
92.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为精氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
93.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为精氨酸，并且CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置13被突变为谷氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
94.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和15分别被突变为丙氨酸和亮氨酸，CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
95.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置4被突变为酪氨酸，并且CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
96.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7被突变为苏氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
97.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13分别被突变为苏氨酸和谷氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
98.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为精氨酸，CDR3(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约5nM至约10nM。
99.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7被突变为精氨酸，CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为缬氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
100.如实施方式74-91中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中CDR1(SEQ ID NO:11)的氨基酸位置6被突变为赖氨酸，CDR2(SEQ ID NO:12)的氨基酸位置7和13分别被突变为精氨酸和谷氨酸，并且CDR3(SEQ ID NO:13)的氨基酸位置6被突变为缬氨酸，并且其中所述hKd和所述cKd为约1nM至约5nM。
101.如实施方式74-100中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质具有至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时的消除半衰期。
102.一种编码根据实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多核苷酸。
103.一种包含如实施方式102所述的多核苷酸的载体。
104.一种用根据实施方式103所述的载体转化的宿主细胞。
105.一种药物组合物，其包含(i)根据实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质、根据实施方式102所述的多核苷酸、根据实施方式103所述的载体或根据实施方式104所述的宿主细胞，和(ii)药学上可接受的载体。
106.一种用于产生根据实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的方法，所述方法包括在允许所述血清白蛋白结合蛋白质表达的条件下培养用包含编码根据实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的核酸序列的载体转化或转染的宿主，以及从培养物中回收并纯化所产生的蛋白质。
107.一种用于治疗或改善增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病的方法，其包括向有需要的受试者施用根据实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质。
108.根据实施方式107所述的方法，其中所述受试者是人。
109.如实施方式108所述的方法，其中所述方法进一步包括与根据实施方式1-100中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质联合施用药剂。
110.一种多特异性结合蛋白质，其包含根据实施方式1、实施方式33或实施方式74中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质。
111.一种抗体，其包含根据实施方式1、实施方式33或实施方式74所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质。
112.一种多特异性抗体、双特异性抗体、sdAb、重链可变域、肽或配体，其包含根据实施方式1、实施方式33或实施方式74所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质。
113.一种抗体，其包含根据实施方式1、实施方式33或实施方式74所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述抗体为单结构域抗体。
114.如实施方式113所述的单结构域抗体，其中所述抗体衍生自IgG的重链可变区。
115.一种多特异性结合蛋白质或抗体，其包含根据实施方式1、实施方式33或实施方式74中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质以及CD3结合域。
116.一种用于治疗或改善增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病的方法，其包括向有需要的受试者施用根据实施方式111-115中任一项所述的多特异性抗体。
117.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。
118.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。
119.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。
120.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列。
121.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列。
122.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。
123.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
124.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
125.如实施方式1-101中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质包含如SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列。
实施例
实施例1：与亲本抗HSA单结构域抗体具有等效的结合性质的抗HSA单结构域抗体 变体的产生
亲本抗HSA噬菌体的表征
使用CD3作为阴性对照测定亲本抗HSA噬菌体与HSA抗原的特异性结合(图1)，并测定抗HSA噬菌体与人、食蟹猴和小鼠血清白蛋白的交叉反应性(图2)。
单置换HSA sdAb噬菌体文库
对于三个CDR结构域中的每一个提供了单置换文库。单置换文库与HSA结合，然后在含有各种水平的HSA的缓冲液中洗涤。获得在第0小时和第24小时结合的噬菌体并计数。通过用缓冲液中的2.5mg/ml HSA洗涤24小时而选择的噬菌体用来产生两个独立的组合噬菌体文库。
组合抗HSA文库
在第一轮使用MSA作为选择靶标。在来自两个独立文库的组合噬菌体结合后，将孔洗涤24小时。在第二轮使用HSA作为选择靶标。在两个文库结合后，将孔在1mg/ml HSA中洗涤24小时。将通过PCR从第二轮选择获得的插入物亚克隆到ME10 His6表达载体中(6XHis序列被公开为SEQ ID NO:38)。挑选96个克隆，将DNA进行纯化、测序并转染到Expi293细胞中。
结合亲和力测定
使用上清液来使用Octet平台估计对HSA和CSA的Kd。基于相比于亲本sdAb的结合亲和力以及稳健的产生、聚集和稳定性特性，选择9个克隆用于进一步表征(图3)。
实施例2：包含抗HSA单结构域抗体的三特异性抗体的药代动力学
使用实施例1的抗HSA单结构域抗体制备三特异性抗体，在动物研究中评估该三特异性抗体的消除半衰期。
将所述三特异性抗体以0.5mg/kg团注肌肉内施用于食蟹猴。另一个食蟹猴组接受具有CD3和CD20结合域但缺乏HSA结合域的在大小上相当的蛋白质。第三组和第四组分别接受具有CD3和HSA结合域的抗体和具有CD20和HSA结合域的蛋白质，并且两者的大小都与所述三特异性抗体相当。每个测试组由5只猴子组成。在指定的时间点采取血清样品，连续稀释，并且使用与CD3和/或CD20的结合ELISA来确定蛋白质的浓度。
使用试验品血浆浓度进行药代动力学分析。当针对给药后时间绘图时，每个试验品的组平均血浆数据符合多指数曲线。利用团注输入以及分布和消除阶段的一级速率常数，按照标准的二室模型拟合这些数据。对于静脉内给药的数据的最佳拟合的一般方程是：c(t)＝Ae-αt+Be-βt，其中c(t)是在时间t时的血浆浓度，A和B是Y轴上的截距，而α和β分别是分布和消除阶段的表观一级速率常数。α阶段是清除的初始阶段，并且反映蛋白质向动物的所有细胞外液中的分布，而衰变曲线的第二或β阶段部分代表真实的血浆清除。拟合这样的方程的方法是本领域公知的。例如，A＝D/V(α-k21)/(α-β)，B＝D/V(β-k21)/(α-β)，并且α和β(对于α>β)是二次方程r2+(k12+k21+k10)r+k21k10＝0的根，使用以下估计参数：V＝分布体积，k10＝消除速率，k12＝从隔室1到隔室2的转移速率，k21＝从隔室2到隔室1的转移速率，并且D＝施用剂量。
数据分析：使用KaleidaGraph(KaleidaGraphTMV.3.09Copyright1986-1997.Synergy Software.Reading,Pa.)制作浓度相对于时间的曲线图。报告为小于可报告值(LTR)的值不包括在PK分析中，并且不以图形方式表示。使用WinNonlin软件(Professional V.3.1 WinNonlinTMCopyright 1998-1999.PharsightCorporation.Mountain View,Calif.)通过隔室分析确定药代动力学参数。如在RitschelW A和Kearns G L,1999,IN:Handbook Of Basic Pharmacokinetics Including ClinicalApplications,第5版,American Pharmaceutical Assoc.,Washington,D.C.中所述计算药代动力学参数。
与缺乏HSA结合域的蛋白质相比，预计实施例1的包含抗HSA单结构域抗体的三特异性抗体具有改善的药代动力学参数，如消除半衰期增加。
实施例3：抗HSA单结构域抗体变体的热稳定性
蛋白质的疏水暴露温度(Th)对应于峰值染料荧光的拐点的导数，并且已知与熔解温度(Tm)—蛋白质稳定性的量度—相关。该研究的目的是评估几种抗HSA单结构域抗体变体的Th。
蛋白质产生
将抗huALB单结构域抗体的序列克隆到pcDNA3.4(Invitrogen)中，前方是前导序列，后方是6x组氨酸标签(SEQ ID NO:38)。将Expi293F细胞(Life Technologies A14527)悬浮保持在最佳生长瓶(Optimum Growth Flasks)(Thomson)中，密度为在Expi 293培养基中0.2-8x 1e6个细胞/ml。根据Expi293表达系统试剂盒(Life Technologies，A14635)方案，将纯化的质粒DNA转染到Expi293F细胞中，并在转染后保持4-6天。通过亲和色谱法和脱盐色谱法部分纯化条件培养基。用Amicon Ultra离心过滤单元(EMD Millipore)浓缩抗huCD3e scFv蛋白质，将其施加到Superdex 200尺寸排阻培养基(GE Healthcare)中并溶解在含有赋形剂的中性缓冲液中。通过SDS-PAGE和分析尺寸排阻色谱法(SEC)评估级分合并和最终纯度。使用SpectraMax M2(Molecular Devices)和UV透明的96孔板(Corning3635)在280nm处测定纯化的蛋白质溶液的吸光度，并从摩尔消光系数计算它们的浓度。
差示扫描荧光法
将纯化的抗HSA单结构域抗体蛋白质稀释到0.2至0.25mg/ml，连同含有赋形剂的中性缓冲液中0.15％ DMSO终浓度的5x SYPRO橙染料(Life Technologies S6651)一起放入MicroAmp EnduraPlate光学微板和胶膜(Applied Biosystems 4483485和4311971)中。将含有稀释的蛋白质和染料混合物的板装载到ABI 7500快速实时PCR仪(AppliedBiosytems)中，并使其经受25℃至95℃的多步热梯度。热梯度包括在每一摄氏度保持两分钟，在500nm处激发并用ROX过滤器收集发射。图4中呈现了纯化的抗HSA单结构域抗体蛋白质的Th(以摄氏度为单位)。
实施例4：抗HSA单结构域抗体变体在暴露于低pH时的二聚化相对倾向
如上所述，在Expi293-F细胞中表达抗HSA单结构域抗体蛋白。将每种变体的条件培养基施加到填充在柱中的蛋白A琼脂糖(GE Healthcare，17519901)中，用TRIS缓冲盐水充分洗涤，用pH 3的0.05％(体积/体积)乙酸洗脱，在室温下保持至多10分钟，然后部分中和至pH 5，随后使用Sephadex G25柱(GE Healthcare 17058401)脱盐至含有赋形剂的中性缓冲液中。
如实施例3中所述，通过280nm处的吸光度确定纯化的抗HSA单结构域抗体变体的浓度。通过SDS-PAGE和分析SEC评价纯化的蛋白质，该分析SEC使用溶于含有溶剂的磷酸盐缓冲液中的Yarra2000SEC柱(Phenomenex 00H-4512-E0)在具有Chemstation软件(Agilent)的1200LC上进行。将对应于二聚体和单体的峰进行手动积分，并且将值呈现于图5中。

Claims (26)

1.单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含SEQ ID NO.9的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质与小鼠血清白蛋白的结合亲和力(Kd)比所述蛋白质与人和食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力(Kd)弱约1.5倍至约20倍。
3.根据权利要求2所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴血清白蛋白结合，其中hKd与cKd(hKd:cKd)之间的比例范围为约20:1至约1:2。
4.根据权利要求1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质的消除半衰期为至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时。
5.单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含SEQ ID NO.10的氨基酸序列。
6.根据权利要求5所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质与小鼠血清白蛋白的结合亲和力(Kd)比所述蛋白质对人和食蟹猴血清白蛋白的结合亲和力(Kd)弱约1.5倍至约20倍。
7.根据权利要求6所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人血清白蛋白结合，一与食蟹猴Kd(cKd)食蟹猴血清白蛋白结合，与食蟹猴血清白蛋白结合，其中hKd与cKd(hKd:cKd)之间的比例范围为约20:1至约1:2。
8.根据权利要求5所述的血清白蛋白结合蛋白结构域，其中所述蛋白质的消除半衰期为至少12小时、至少20小时、至少25小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少50小时或至少100小时。
9.编码根据权利要求1-8中任一项的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多核苷酸。
10.编码根据权利要求1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多核苷酸。
11.包含根据权利要求9所述的多核苷酸的载体。
12.包含根据权利要求10所述的多核苷酸的载体。
13.包含根据权利要求9所述的多核苷酸的宿主细胞。
14.包含根据权利要求10所述的多核苷酸的宿主细胞。
15.包含根据权利要求11所述的载体的宿主细胞。
16.包含根据权利要求12所述的载体的宿主细胞。
17.根据权利要求1-8中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质在制备用于治疗或改善增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病的药物中的用途。
18.根据权利要求1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质在制备用于治疗或改善增生性疾病、肿瘤疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、感染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病的药物中的用途。
19.包含根据权利要求1-8中任一项所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。
20.包含根据权利要求1所述的单结构域血清白蛋白结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。
21.单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中
(a)CDR1的氨基酸序列如GFX1X2X3X4FGMS(SEQ ID NO.1)所示，X1为苏氨酸、精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸，X2为苯丙氨酸或酪氨酸，X3为丝氨酸、精氨酸或赖氨酸，X4为丝氨酸、赖氨酸、精氨酸或丙氨酸；
(b)CDR2的氨基酸序列如SISGSGX5X6TLYAX7SX8K(SEQ ID NO.2)所示，X5为丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或丙氨酸，X6为天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸或苏氨酸，X7为天冬氨酸、组氨酸、精氨酸或丝氨酸，X8为缬氨酸或亮氨酸；和
(c)CDR3的氨基酸序列如GGSLX9X10(SEQ ID NO.3)所示，X9为丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或赖氨酸，X10为精氨酸、赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和X10不同时分别是苏氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、丝氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、丝氨酸和精氨酸。
22.包含CDR1、CDR2和CDR3的单结构域血清白蛋白结合蛋白质，其包含SEQ ID NO.10所示的序列，其中选自CDR1的氨基酸位置28、29、30或31，CDR2的位置56、57、62或64，以及CDR3的位置103和104的一个或多个氨基酸残基被置换，其中
氨基酸位置28被精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸置换，
氨基酸位置29被酪氨酸置换，
氨基酸位置30被精氨酸或赖氨酸置换，
氨基酸位置31被赖氨酸、精氨酸或丙氨酸置换，
氨基酸位置56被精氨酸、苏氨酸或丙氨酸置换，
氨基酸位置57被组氨酸、缬氨酸或苏氨酸置换，
氨基酸位置62被组氨酸、精氨酸、谷氨酸或丝氨酸置换，
氨基酸位置64被亮氨酸置换，
氨基酸位置103被精氨酸、苏氨酸或赖氨酸置换，
氨基酸位置104被赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺置换。
23.包含单结构域血清白蛋白结合蛋白质的组合物，其包括互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中
a.CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；
b.CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.22所示；并且
c.CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.24中所示。
24.包含血清白蛋白结合域、靶抗原结合域和与T细胞受体复合物(TCR)内的蛋白质结合的结构域的多特异性蛋白质，其中所述血清白蛋白结合域包括互补性决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中
(a)CDR1的氨基酸序列如GFX1X2X3X4FGMS(SEQ ID NO.1)所示，X1为苏氨酸、精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸，X2为苯丙氨酸或酪氨酸，X3为丝氨酸、精氨酸或赖氨酸，X4为丝氨酸、赖氨酸、精氨酸或丙氨酸；
(b)CDR2的氨基酸序列如SISGSGX5X6TLYAX7SX8K(SEQ ID NO.2)所示，X5为丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或丙氨酸，X6为天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸或苏氨酸，X7为天冬氨酸、组氨酸、精氨酸或丝氨酸，X8为缬氨酸或亮氨酸；和
(c)CDR3的氨基酸序列如GGSLX9X10(SEQ ID NO.3)所示，X9为丝氨酸、精氨酸、苏氨酸或赖氨酸，X10为精氨酸、赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和X10不同时分别是苏氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、丝氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、丝氨酸和精氨酸。
25.包含血清白蛋白结合域、靶抗原结合域和与T细胞受体复合物(TCR)内的蛋白质结合的结构域的多特异性蛋白质，其中所述血清白蛋白结合域包括如SEQ ID NO.10所示的序列内的互补性决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中选自CDR1的氨基酸位置28、29、30或31；CDR2位置56、57、62或64位，CDR3的位置103和104的一个或多个氨基酸残基被置换，其中
氨基酸位置28被精氨酸、赖氨酸、丝氨酸或脯氨酸置换，
氨基酸位置29被酪氨酸置换，
氨基酸位置30被精氨酸或赖氨酸置换，
氨基酸位置31被赖氨酸、精氨酸或丙氨酸置换，
氨基酸位置56被精氨酸、苏氨酸或丙氨酸置换，
氨基酸位置57被组氨酸、缬氨酸或苏氨酸置换，
氨基酸位置62被组氨酸、精氨酸、谷氨酸或丝氨酸置换，
氨基酸位置64被亮氨酸置换，
氨基酸位置103被精氨酸、苏氨酸或赖氨酸置换，
氨基酸位置104被赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸或天冬酰胺置换。
26.包含血清白蛋白结合域、靶抗原结合域和与T细胞受体复合物(TCR)内的蛋白质结合的结构域的多特异性蛋白质，其中所述血清白蛋白包含CDR1、CDR2或CDR3中的至少一个突变，其中CDR1具有如SEQ ID NO.11所示的序列，CDR2具有如SEQ ID NO.12所示的序列，CDR3具有如SEQ ID NO.13所示的序列，其中至少一个突变不在SEQ ID NO.11的氨基酸位置1、2、7、8、9或10，SEQ ID NO.12的位置1、3、6、10或11位，或SEQ ID NO.13的位置1或2上。
CN202410731815.0A 2016-05-20 2017-05-19 单结构域血清白蛋白结合蛋白质 Pending CN119060177A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662339682P 2016-05-20 2016-05-20
US62/339,682 2016-05-20
PCT/US2017/033665 WO2017201488A1 (en) 2016-05-20 2017-05-19 Single domain serum albumin binding protein
CN201780045208.7A CN109641047A (zh) 2016-05-20 2017-05-19 单结构域血清白蛋白结合蛋白质

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780045208.7A Division CN109641047A (zh) 2016-05-20 2017-05-19 单结构域血清白蛋白结合蛋白质

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN119060177A true CN119060177A (zh) 2024-12-03

Family

ID=60326635

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410731815.0A Pending CN119060177A (zh) 2016-05-20 2017-05-19 单结构域血清白蛋白结合蛋白质
CN201780045208.7A Pending CN109641047A (zh) 2016-05-20 2017-05-19 单结构域血清白蛋白结合蛋白质

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780045208.7A Pending CN109641047A (zh) 2016-05-20 2017-05-19 单结构域血清白蛋白结合蛋白质

Country Status (13)

Country Link
US (4) US10100106B2 (zh)
EP (1) EP3493844A4 (zh)
JP (3) JP7101621B2 (zh)
KR (1) KR102530742B1 (zh)
CN (2) CN119060177A (zh)
AU (2) AU2017268460B2 (zh)
BR (1) BR112018073739A2 (zh)
CA (1) CA3024723A1 (zh)
EA (1) EA201892691A1 (zh)
IL (1) IL263102B2 (zh)
MX (1) MX2018014228A (zh)
SG (1) SG11201810327XA (zh)
WO (1) WO2017201488A1 (zh)

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6688551B2 (ja) 2015-05-21 2020-04-28 ハープーン セラピューティクス，インク． 三重特異性結合タンパク質と使用方法
US12128102B2 (en) 2016-03-08 2024-10-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
MX2018014227A (es) 2016-05-20 2019-08-22 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union de cadena unica de fragmento variable cd3.
CN119060177A (zh) * 2016-05-20 2024-12-03 哈普恩治疗公司 单结构域血清白蛋白结合蛋白质
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
AU2017363300A1 (en) 2016-11-23 2019-06-20 Harpoon Therapeutics, Inc. Prostate specific membrane antigen binding protein
BR112019010602A2 (pt) 2016-11-23 2019-12-17 Harpoon Therapeutics Inc proteínas trispecíficas para psma e métodos de uso
WO2018127711A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Crescendo Biologics Limited Single Domain Antibodies to Programmed Cell Death (PD-1)
US11028166B2 (en) 2017-02-16 2021-06-08 Sonnet Bio Therapeutics Albumin binding domain fusion proteins
US11535668B2 (en) 2017-02-28 2022-12-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
WO2018209298A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
CA3063362A1 (en) * 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Msln targeting trispecific proteins and methods of use
IL273119B2 (en) 2017-09-08 2023-10-01 Maverick Therapeutics Inc Constrained conditionally activated binding proteins
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
EP4435007A3 (en) 2017-10-13 2024-12-25 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific proteins and methods of use
EP3710477A1 (en) 2017-11-13 2020-09-23 Crescendo Biologics Limited Single domain antibodies that bind to cd137
GB201802573D0 (en) 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
SG11202011309SA (en) 2018-05-14 2020-12-30 Werewolf Therapeutics Inc Activatable interleukin 12 polypeptides and methods of use thereof
AU2019271148B2 (en) 2018-05-14 2023-07-06 Werewolf Therapeutics, Inc. Activatable interleukin-2 polypeptides and methods of use thereof
SG11202011330PA (en) * 2018-05-14 2020-12-30 Harpoon Therapeutics Inc Binding moiety for conditional activation of immunoglobulin molecules
US20210130430A1 (en) * 2018-05-14 2021-05-06 Werewolf Therapeutics, Inc. Activatable cytokine polypeptides and methods of use thereof
WO2020061482A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Egfr binding proteins and methods of use
CN113286817B (zh) 2018-09-25 2025-01-28 哈普恩治疗公司 Dll3结合蛋白及使用方法
WO2020076977A2 (en) 2018-10-11 2020-04-16 Inhibrx, Inc. Dll3 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
EP3864049A1 (en) 2018-10-11 2021-08-18 Inhibrx, Inc. Pd-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
EP3863721A1 (en) 2018-10-11 2021-08-18 Inhibrx, Inc. 5t4 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
CN113166261A (zh) 2018-10-11 2021-07-23 印希比股份有限公司 B7h3单域抗体及其治疗性组合物
GB201818460D0 (en) * 2018-11-13 2018-12-26 Crescendo Biologics Ltd Single domain antibodies that bind human serum albumin
EP3927740A4 (en) * 2019-02-22 2023-03-01 Anwita Biosciences, Inc. ALBUMIN-BINDING ANTIBODIES AND THEIR USE
WO2020181140A1 (en) 2019-03-05 2020-09-10 Maverick Therapeutics, Inc. Constrained conditionally activated binding proteins
JP2022532217A (ja) 2019-05-14 2022-07-13 ウェアウルフ セラピューティクス， インコーポレイテッド 分離部分及びその使用方法
JP7507790B2 (ja) 2019-05-14 2024-06-28 ハープーン セラピューティクス，インク． ＥｐＣＡＭ結合タンパク質および使用方法
EP3969473A1 (en) * 2019-05-15 2022-03-23 Crescendo Biologics Limited Binding molecules
US20230220105A1 (en) * 2019-06-06 2023-07-13 Janux Therapeutics, Inc. Tumor activated t cell engagers and methods of use thereof
CN110708481B (zh) * 2019-09-16 2021-09-14 上海集成电路研发中心有限公司 一种基于差异复位的去除固定模式噪声方法
CN110677603B (zh) * 2019-09-16 2021-09-14 上海集成电路研发中心有限公司 一种用于单帧分段曝光的图像传感器和数据采集方法
CA3155981A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 William Winston Activatable cytokine polypeptides and methods of use thereof
US11692020B2 (en) 2019-11-20 2023-07-04 Anwita Biosciences, Inc. Cytokine fusion proteins, and their pharmaceutical compositions and therapeutic applications
JP2023527609A (ja) 2020-02-21 2023-06-30 ハープーン セラピューティクス，インク． Ｆｌｔ３結合タンパク質および使用方法
EP4143329A4 (en) 2020-04-28 2024-10-16 Anwita Biosciences, Inc. Interleukin-2 polypeptides and fusion proteins thereof, and their pharmaceutical compositions and therapeutic applications
KR20230080399A (ko) 2020-08-11 2023-06-07 재눅스 테라퓨틱스 인크. 절단 가능한 링커 조성물 및 방법
AU2021345124A1 (en) 2020-09-16 2023-03-30 Amgen Inc. Methods for administering therapeutic doses of bispecific T-cell engaging molecules for the treatment of cancer
WO2022098743A1 (en) 2020-11-03 2022-05-12 Indi Molecular, Inc. Compositions, imaging, and therapeutic methods targeting folate receptor 1 (folr1)
WO2022098745A1 (en) 2020-11-03 2022-05-12 Indi Molecular, Inc. Compositions, delivery systems, and methods useful in tumor therapy
KR20230135575A (ko) 2020-12-09 2023-09-25 재눅스 테라퓨틱스 인크. Psma 및 이펙터 세포 항원을 표적화하는 종양 활성화항체와 관련된 조성물 및 방법
TW202313685A (zh) * 2021-06-07 2023-04-01 大陸商上海濟煜醫藥科技有限公司 抗人血清白蛋白的抗原結合蛋白
WO2024077044A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Amgen Inc. Combination therapies comprising t-cell redirecting therapies and agonistic anti-il-2r antibodies or fragments thereof
US20240368250A1 (en) 2023-02-17 2024-11-07 Ablynx N.V. Polypeptides binding to the neonatal fc receptor
WO2025029975A1 (en) * 2023-07-31 2025-02-06 Jibe Therapeutics, Inc. Compositions for redirecting immunoglobulins to immune cells
US12134635B1 (en) 2023-12-29 2024-11-05 Sonnet BioTherapeutics, Inc. Interleukin 18 (IL-18) variants and fusion proteins comprising same

Family Cites Families (246)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5061620A (en) 1990-03-30 1991-10-29 Systemix, Inc. Human hematopoietic stem cell
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US5199942A (en) 1991-06-07 1993-04-06 Immunex Corporation Method for improving autologous transplantation
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
WO1993007105A1 (en) 1991-10-04 1993-04-15 Iit Research Institute Conversion of plastic waste to useful oils
GB9125768D0 (en) 1991-12-04 1992-02-05 Hale Geoffrey Therapeutic method
US5766886A (en) 1991-12-13 1998-06-16 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
EP0656946B2 (en) 1992-08-21 2010-03-31 Vrije Universiteit Brussel Immunoglobulins devoid of light chains
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
US5350674A (en) 1992-09-04 1994-09-27 Becton, Dickinson And Company Intrinsic factor - horse peroxidase conjugates and a method for increasing the stability thereof
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
JPH08510922A (ja) 1994-03-17 1996-11-19 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング 抗ＥＧＦＲ一本鎖Ｆｖおよび抗ＥＧＦＲ抗体
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US5773292A (en) 1995-06-05 1998-06-30 Cornell University Antibodies binding portions, and probes recognizing an antigen of prostate epithelial cells but not antigens circulating in the blood
US7060808B1 (en) 1995-06-07 2006-06-13 Imclone Systems Incorporated Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody
US6107090A (en) 1996-05-06 2000-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of prostate cancer with antibodies to extracellur PSMA domains
US6136311A (en) 1996-05-06 2000-10-24 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of cancer
DK0826696T3 (da) 1996-09-03 2002-09-23 Gsf Forschungszentrum Umwelt Anvendelse af bi- og trispecifikke antistoffer til inducering af en tumorimmunitet
DE69841562D1 (de) 1997-10-27 2010-04-29 Bac Ip Bv Multivalente antigenbindende proteine
BR9907241A (pt) 1998-01-26 2000-10-17 Unilever Nv Biblioteca de expressão, processo para preparar a mesma, uso de uma fonte não imunizada de sequências de ácido nucleico, e, processos para preparar fragmentos de anticorpos e, para preparar um anticorpo
HUP9900956A2 (hu) 1998-04-09 2002-04-29 Aventis Pharma Deutschland Gmbh. Egyláncú, több antigéntkötőhely kialakítására képes molekulák, előállításuk és alkalmazásuk
WO2000043507A1 (en) 1999-01-19 2000-07-27 Unilever Plc Method for producing antibody fragments
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
US20060228364A1 (en) 1999-12-24 2006-10-12 Genentech, Inc. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
EP1257632B1 (en) 2000-02-24 2007-09-12 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
AU2001268855A1 (en) 2000-05-26 2001-12-03 National Research Council Of Canada Single-domain antigen-binding antibody fragments derived from llama antibodies
AU2001275474A1 (en) 2000-06-12 2001-12-24 Akkadix Corporation Materials and methods for the control of nematodes
CN1294148C (zh) 2001-04-11 2007-01-10 中国科学院遗传与发育生物学研究所 环状单链三特异抗体
GB0110029D0 (en) 2001-04-24 2001-06-13 Grosveld Frank Transgenic animal
CN1195779C (zh) 2001-05-24 2005-04-06 中国科学院遗传与发育生物学研究所 抗人卵巢癌抗人cd3双特异性抗体
US7666414B2 (en) 2001-06-01 2010-02-23 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for treating prostate cancer using modified antibodies to prostate-specific membrane antigen
CZ200438A3 (cs) 2001-06-13 2004-06-16 Genmab A/S Název neuveden
US7595378B2 (en) 2001-06-13 2009-09-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR)
EP1433793A4 (en) 2001-09-13 2006-01-25 Inst Antibodies Co Ltd METHOD FOR CREATING A CAMEL ANTIBODY LIBRARY
ES2559002T3 (es) 2001-10-23 2016-02-10 Psma Development Company, L.L.C. Anticuerpos contra PSMA
US20050215472A1 (en) 2001-10-23 2005-09-29 Psma Development Company, Llc PSMA formulations and uses thereof
JP2005289809A (ja) 2001-10-24 2005-10-20 Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) 突然変異重鎖抗体
US7745140B2 (en) 2002-01-03 2010-06-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool
CN1652821A (zh) 2002-01-28 2005-08-10 米德列斯公司 抗前列腺特异性膜抗原(psma)的人单克隆抗体
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US9321832B2 (en) * 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
SI1517921T1 (sl) 2002-06-28 2006-10-31 Domantis Ltd Dvojno-specificni ligandi z zvisano serumsko razpolovno dobo
AU2003283860B2 (en) 2002-11-07 2009-09-17 Erasmus Universiteit Rotterdam Fret probes and methods for detecting interacting molecules
DK2316852T3 (da) 2002-11-08 2014-06-16 Ablynx Nv Stabiliserede enkeltdomæne-antistoffer
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
EP1900753B1 (en) 2002-11-08 2017-08-09 Ablynx N.V. Method of administering therapeutic polypeptides, and polypeptides therefor
AU2003283137B8 (en) 2002-11-08 2010-07-29 Ablynx N.V. Camelidae antibodies against immunoglobulin E and use thereof for the treatment of allergic disorders
GB0228210D0 (en) 2002-12-03 2003-01-08 Babraham Inst Single chain antibodies
ATE455127T1 (de) 2003-05-31 2010-01-15 Micromet Ag Humane anti-humane cd3-bindungsmoleküle
WO2005004809A2 (en) 2003-07-01 2005-01-20 Immunomedics, Inc. Multivalent carriers of bi-specific antibodies
US20050048617A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
US20050042664A1 (en) 2003-08-22 2005-02-24 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
CN100376599C (zh) 2004-04-01 2008-03-26 北京安波特基因工程技术有限公司 基因工程重组抗cea抗cd3抗cd28线性单链三特异抗体
CA2568344C (en) 2004-05-27 2016-01-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel artificial antigen presenting cells and uses therefor
JP2008500830A (ja) 2004-06-01 2008-01-17 ドマンティス リミテッド 増加した血清半減期を有する二重特異性融合抗体
JP2008512352A (ja) 2004-07-17 2008-04-24 イムクローン システムズ インコーポレイティド 新規な四価の二重特異性抗体
EP1634603A1 (de) 2004-08-26 2006-03-15 Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum Behandlung von transformierten oder infizierten biologischen Zellen
US20080069772A1 (en) 2004-08-26 2008-03-20 Eberhard-Karls-Universitaet Tuebingen Universitaetsklinikum Treatment of transformed or infected biological cells
FR2879605B1 (fr) 2004-12-16 2008-10-17 Centre Nat Rech Scient Cnrse Production de formats d'anticorps et applications immunologiques de ces formats
DK1772465T3 (da) 2005-01-05 2009-05-25 F Star Biotech Forsch & Entw Syntetiske immunoglobulindomæner med modificerede bindingsegenskaber i områder af molekylet, der ikke er komplementaritetsbestemmende regioner
US7833979B2 (en) 2005-04-22 2010-11-16 Amgen Inc. Toxin peptide therapeutic agents
US20060252096A1 (en) 2005-04-26 2006-11-09 Glycofi, Inc. Single chain antibody with cleavable linker
RU2464276C2 (ru) 2005-05-18 2012-10-20 Аблинкс Н.В. Улучшенные нанотела против фактора некроза опухоли-альфа
CA2608873C (en) * 2005-05-20 2017-04-25 Ablynx Nv Single domain vhh antibodies against von willebrand factor
EP1726650A1 (en) 2005-05-27 2006-11-29 Universitätsklinikum Freiburg Monoclonal antibodies and single chain antibody fragments against cell-surface prostate specific membrane antigen
SG2014010029A (en) 2005-08-19 2014-08-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
DK1940881T3 (en) 2005-10-11 2017-02-20 Amgen Res (Munich) Gmbh COMPOSITIONS WITH ARTICLE CROSS-SPECIFIC ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
ES2340205T3 (es) 2005-11-12 2010-05-31 Eli Lilly And Company Anticuerpos anti-egfr.
WO2007062466A1 (en) 2005-11-29 2007-06-07 The University Of Sydney Demibodies: dimerisation-activated therapeutic agents
US7498142B2 (en) 2006-01-31 2009-03-03 Yeda Research And Development Co., Ltd. Methods of identifying combinations of antibodies with an improved anti-tumor activity and compositions and methods using the antibodies
WO2007115230A2 (en) 2006-03-30 2007-10-11 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey A strategy for homo- or hetero-dimerization of various proteins in solutions and in cells
US20070269422A1 (en) 2006-05-17 2007-11-22 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
AU2007285695B2 (en) 2006-08-18 2012-05-24 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with IL-6-mediated signalling
CN101646689A (zh) * 2006-09-08 2010-02-10 埃博灵克斯股份有限公司 具有长半衰期的血清清蛋白结合蛋白
US20100166734A1 (en) 2006-12-20 2010-07-01 Edward Dolk Oral delivery of polypeptides
WO2008119565A2 (en) 2007-04-03 2008-10-09 Micromet Ag Cross-species-specific binding domain
ES2663512T3 (es) 2007-05-24 2018-04-13 Ablynx N.V. Secuencias de aminoácidos dirigidas contra RANK-L y polipéptidos que comprenden las mismas para el tratamiento de enfermedades y trastornos óseos
EP2014680A1 (en) 2007-07-10 2009-01-14 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Recombinant, single-chain, trivalent tri-specific or bi-specific antibody derivatives
US9040666B2 (en) 2007-07-13 2015-05-26 Bac Ip B.V. Single-domain antigen-binding proteins that bind mammalian IgG
JP6035009B2 (ja) 2007-08-22 2016-11-30 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 活性化可能な結合ポリペプチドおよびその同定方法ならびに使用
AU2007358569B2 (en) 2007-09-07 2014-09-04 Ablynx N.V. Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
ES2622460T3 (es) 2007-09-26 2017-07-06 Ucb Biopharma Sprl Fusiones de anticuerpos con doble especificidad
CN102112155B (zh) 2008-06-05 2016-08-10 埃博灵克斯股份有限公司 针对病毒包膜蛋白的氨基酸序列和用于治疗病毒疾病的包含其的多肽
US20100122358A1 (en) 2008-06-06 2010-05-13 Crescendo Biologics Limited H-Chain-only antibodies
EA201170031A1 (ru) 2008-07-02 2011-08-30 Эмерджент Продакт Дивелопмент Сиэтл, Ллс СВЯЗЫВАЮЩИЕ НЕСКОЛЬКО МИШЕНЕЙ БЕЛКИ, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТАГОНИСТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ ПО ОТНОШЕНИЮ К TGF-β
US8444976B2 (en) 2008-07-02 2013-05-21 Argen-X B.V. Antigen binding polypeptides
PT2356153T (pt) 2008-10-01 2016-07-15 Amgen Res (Munich) Gmbh Anticorpo biespecífico, de cadeia única, amepxcd3, específico interespécies
WO2010037837A2 (en) 2008-10-01 2010-04-08 Micromet Ag Bispecific single chain antibodies with specificity for high molecular weight target antigens
EP3375790A1 (en) 2008-10-01 2018-09-19 Amgen Research (Munich) GmbH Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
US9327022B2 (en) 2008-10-14 2016-05-03 National Research Council Of Canada BSA-specific antibodies
WO2010077643A1 (en) 2008-12-08 2010-07-08 Tegopharm Corporation Masking ligands for reversible inhibition of multivalent compounds
JP5851842B2 (ja) 2009-01-12 2016-02-03 サイトムエックス セラピューティクス, インク.CytomX Therapeutics, Inc. 改変した抗体組成物、それを作製および使用する方法
EP2210902A1 (en) 2009-01-14 2010-07-28 TcL Pharma Recombinant monovalent antibodies
EP2403531A4 (en) 2009-03-05 2013-02-27 Abbott Lab IL-17 BINDING PROTEINS
US20110195494A1 (en) 2009-10-02 2011-08-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Dll4-binging molecules
WO2011051327A2 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Novartis Ag Small antibody-like single chain proteins
WO2011069104A2 (en) 2009-12-04 2011-06-09 Genentech, Inc. Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods
EP2332994A1 (en) 2009-12-09 2011-06-15 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Trispecific therapeutics against acute myeloid leukaemia
US20130089554A1 (en) 2009-12-29 2013-04-11 Emergent Product Development Seattle, Llc RON Binding Constructs and Methods of Use Thereof
GB2476681B (en) 2010-01-04 2012-04-04 Argen X Bv Humanized camelid VH, VK and VL immunoglobulin domains
EP4012714A1 (en) 2010-03-23 2022-06-15 Iogenetics, LLC. Bioinformatic processes for determination of peptide binding
US8937164B2 (en) 2010-03-26 2015-01-20 Ablynx N.V. Biological materials related to CXCR7
US9556273B2 (en) 2010-03-29 2017-01-31 Vib Vzw Anti-macrophage mannose receptor single variable domains for targeting and in vivo imaging of tumor-associated macrophages
EP3336225B1 (en) 2010-07-16 2020-02-19 Adimab, LLC Antibody libraries
WO2012021786A2 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Theraclone Sciences, Inc. Anti-hemagglutinin antibody compositions and methods of use thereof
MX340556B (es) 2010-08-24 2016-07-14 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos activables.
JP5758004B2 (ja) 2010-08-24 2015-08-05 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ジスルフィドによって安定化されたＦｖ断片を含む二重特異性抗体
EP2621953B1 (en) 2010-09-30 2017-04-05 Ablynx N.V. Biological materials related to c-met
JP2014500879A (ja) 2010-11-16 2014-01-16 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｂｃｍａ発現に相関性を有する疾患を治療する因子及び方法
MX361242B (es) 2011-03-30 2018-11-30 Ablynx Nv Anticuerpos de dominio sencillo contra tnf-alfa y usos de los mismos.
WO2012138475A1 (en) 2011-04-08 2012-10-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-epidermal growth factor receptor variant iii chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer
WO2012158818A2 (en) 2011-05-16 2012-11-22 Fabion Pharmaceuticals, Inc. Multi-specific fab fusion proteins and methods of use
CN103562225B (zh) 2011-05-27 2016-09-28 葛兰素集团有限公司 Bcma（cd269/tnfrsf17）结合蛋白
PL2723771T3 (pl) * 2011-06-23 2020-04-30 Ablynx Nv Białka wiążące albuminy surowicy
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
US20150158934A1 (en) 2011-09-09 2015-06-11 Ucl Business Plc Broadly neutralizing vhh against hiv-1
AU2012311451B2 (en) 2011-09-23 2017-08-10 Universitat Stuttgart Serum half-life extension using immunoglobulin binding domains
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
JP6408915B2 (ja) 2012-01-13 2018-10-17 ユリウス−マクシミリアンズ−ウニヴェルジテート ウュルツブルグ 二重抗原誘導型の二部分機能相補
WO2013110531A1 (en) 2012-01-23 2013-08-01 Ablynx Nv Sequences directed against hepatocyte growth factor (hgf) and polypeptides comprising the same for the treatment of cancers and/or tumors
SG11201404285VA (en) 2012-02-22 2014-10-30 Univ Pennsylvania Compositions and methods for generating a persisting population of t cells useful for the treatment of cancer
EP3093294A1 (en) 2012-02-24 2016-11-16 Stemcentrx, Inc. Dll3 modulators and methods of use
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
EP2820047B1 (en) 2012-03-01 2018-04-25 Amgen Research (Munich) GmbH Long life polypeptide binding molecules
CN104185474B (zh) 2012-03-30 2017-08-25 拜尔健康护理有限责任公司 蛋白酶调节的抗体
CN104487587A (zh) 2012-04-20 2015-04-01 新兴产品开发西雅图有限公司 Cd3结合多肽
WO2013192546A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies having non-binding steric moieties and mehtods of using the same
WO2014004549A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
CN112587671A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
CA2879834A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 arGEN-X BV Highly diverse combinatorial antibody libraries
KR101963231B1 (ko) 2012-09-11 2019-03-28 삼성전자주식회사 이중특이 항체의 제작을 위한 단백질 복합체 및 이를 이용한 이중특이 항체 제조 방법
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
ES2666131T3 (es) 2012-09-27 2018-05-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anticuerpos de mesotelina y métodos para provocar una potente actividad antitumoral
JO3519B1 (ar) 2013-01-25 2020-07-05 Amgen Inc تركيبات أجسام مضادة لأجل cdh19 و cd3
JP6420776B2 (ja) 2013-03-05 2018-11-07 ベイラー カレッジ オブ メディスンＢａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 免疫療法のためのエンゲージャー細胞
EP2971045B1 (en) 2013-03-13 2019-06-19 Health Research, Inc. Compositions and methods for use of recombinant t cell receptors for direct recognition of tumor antigen
CN105283201B (zh) 2013-03-14 2019-08-02 斯克利普斯研究所 靶向剂抗体偶联物及其用途
CN105209493B (zh) 2013-03-14 2019-05-03 德克萨斯州大学系统董事会 用于诊断和治疗用途的her3特异性单克隆抗体
AU2014236769B2 (en) 2013-03-15 2018-09-27 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
JP2016514687A (ja) 2013-03-15 2016-05-23 バイエル・ヘルスケア・エルエルシーＢａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ ＬＬＣ 組織因子経路インヒビターに対するプロドラッグ抗体
AR095596A1 (es) 2013-03-15 2015-10-28 Amgen Res (Munich) Gmbh Moléculas de unión de cadena única comprendiendo n-terminal abp
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
CA2918795A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Cytomx Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies, multispecific activatable antibodies and methods of using the same
WO2015048081A1 (en) 2013-09-24 2015-04-02 Andre Lieber Desmoglein 2 (dsg2) binding proteins and uses therefor
PT3049439T (pt) 2013-09-26 2020-03-31 Ablynx Nv Nanocorpos biespecíficos
WO2015103072A1 (en) 2013-12-30 2015-07-09 Epimab Biotherapeutics Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
CN113912723A (zh) 2014-03-24 2022-01-11 癌症研究技术有限公司 含有修饰IgG2结构域的引起激动或拮抗特性的修饰抗体及其用途
US20170183410A1 (en) 2014-03-25 2017-06-29 Tohoku University HIGHLY-FUNCTIONAL IgG2 BISPECIFIC ANTIBODY
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
EP3137506B1 (en) 2014-05-02 2023-08-30 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods related to engineered fc constructs
KR20220025917A (ko) 2014-05-29 2022-03-03 마크로제닉스, 인크. 삼중-특이적 결합 분자 및 그것의 사용 방법
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
AR101669A1 (es) 2014-07-31 2017-01-04 Amgen Res (Munich) Gmbh Constructos de anticuerpos para cdh19 y cd3
US20170275373A1 (en) 2014-07-31 2017-09-28 Amgen Research (Munich) Gmbh Bispecific single chain antibody construct with enhanced tissue distribution
PT3189081T (pt) 2014-09-05 2020-05-25 Janssen Pharmaceutica Nv Agentes de ligação a cd123 e seus usos
CN105471609B (zh) 2014-09-05 2019-04-05 华为技术有限公司 一种用于配置业务的方法和装置
EP3197916A2 (en) 2014-09-25 2017-08-02 Amgen Inc. Protease-activatable bispecific proteins
MX2017004603A (es) 2014-10-07 2017-06-30 Cellectis Metodo para modular actividad de celulas inmunes inducidas por car.
TN2017000222A1 (en) 2014-11-26 2018-10-19 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
EP3029068A1 (en) 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
US11001625B2 (en) 2014-12-10 2021-05-11 Tufts University VHH based binding antibodies for anthrax and botulinum toxins and methods of making and using therefor
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
US10370435B2 (en) 2015-02-05 2019-08-06 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Binding molecules directed against influenza hemagglutinin and uses thereof
EP3256495A4 (en) 2015-02-11 2018-09-19 Aptevo Research and Development LLC Compositions and methods for combination therapy with prostate-specific membrane antigen binding proteins
UA126058C2 (uk) 2015-04-22 2022-08-10 Аґбайомі, Інк. Інсектицидний ген і спосіб його застосування
EP3288981A1 (en) 2015-05-01 2018-03-07 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
JP6841754B2 (ja) 2015-05-13 2021-03-10 中外製薬株式会社 多重抗原結合分子融合体、医薬組成物、線状エピトープの同定方法、および多重抗原結合分子融合体の製造方法
ES2881683T3 (es) 2015-05-21 2021-11-30 Full Spectrum Genetics Inc Procedimiento para mejorar las características de las proteínas
JP6688551B2 (ja) 2015-05-21 2020-04-28 ハープーン セラピューティクス，インク． 三重特異性結合タンパク質と使用方法
CA2987598A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
US10822419B2 (en) 2015-06-26 2020-11-03 University Of Southern California Masking chimeric antigen receptor T cells for tumor-specific activation
TWI829617B (zh) 2015-07-31 2024-01-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｆｌｔ３及ｃｄ３抗體構築體
TWI796283B (zh) 2015-07-31 2023-03-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｍｓｌｎ及ｃｄ３抗體構築體
WO2017027392A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric cd3 receptor proteins
WO2017025698A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Queen Mary University Of London Bispecific, cleavable antibodies
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
AU2016308567B2 (en) 2015-08-17 2022-10-27 Janssen Biotech, Inc. Anti-BCMA antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind BCMA and CD3, and uses thereof
CN106519037B (zh) 2015-09-11 2019-07-23 科济生物医药（上海）有限公司 可活化的嵌合受体
EP3370743A4 (en) 2015-11-05 2019-04-24 City of Hope METHOD FOR PRODUCING CELLS FOR ADOPTIVE T CELL THERAPY
EP3377103B2 (en) 2015-11-19 2025-03-12 Revitope Limited Functional antibody fragment complementation for a two-components system for redirected killing of unwanted cells
CN105968201A (zh) 2016-02-03 2016-09-28 南昌大学 针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体
CN108884126B (zh) 2016-02-03 2022-03-18 广州康睿生物医药科技股份有限公司 用于治疗眼睛病症或疾病的化合物
CN109219617A (zh) 2016-02-03 2019-01-15 安进研发（慕尼黑）股份有限公司 Bcma和cd3双特异性t细胞接合抗体构建体
CN105968204B (zh) 2016-02-03 2020-01-21 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 一种抗前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体
TW201808990A (zh) * 2016-03-08 2018-03-16 馬弗瑞克療法公司 可誘導性結合蛋白和使用方法
CN109476756B (zh) 2016-03-15 2022-05-31 埃泰美德(香港)有限公司 一种多特异性Fab融合蛋白及其用途
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
CN119060177A (zh) * 2016-05-20 2024-12-03 哈普恩治疗公司 单结构域血清白蛋白结合蛋白质
MX2018014227A (es) 2016-05-20 2019-08-22 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union de cadena unica de fragmento variable cd3.
JP2019528051A (ja) 2016-07-21 2019-10-10 ディヴェロップメント センター フォー バイオテクノロジー 修飾抗原結合Ｆａｂ断片及びこれを含む抗原結合分子
WO2018026953A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
EP3445787B1 (en) 2016-10-07 2020-12-02 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for t-cell receptors reprogramming using fusion proteins
WO2018071777A1 (en) 2016-10-14 2018-04-19 Harpoon Therapeutics, Inc. Innate immune cell trispecific binding proteins and methods of use
US11124577B2 (en) 2016-11-02 2021-09-21 Engmab Sàrl Bispecific antibody against BCMA and CD3 and an immunological drug for combined use in treating multiple myeloma
AU2017363300A1 (en) 2016-11-23 2019-06-20 Harpoon Therapeutics, Inc. Prostate specific membrane antigen binding protein
BR112019010602A2 (pt) 2016-11-23 2019-12-17 Harpoon Therapeutics Inc proteínas trispecíficas para psma e métodos de uso
WO2018136725A1 (en) 2017-01-19 2018-07-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Innate immune cell inducible binding proteins and methods of use
AU2018209012B2 (en) 2017-01-23 2024-10-03 Crage Medical Co., Limited BCMA-targeting antibody and use thereof
WO2018160671A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Harpoon Therapeutics, Inc. Targeted checkpoint inhibitors and methods of use
US11535668B2 (en) 2017-02-28 2022-12-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
CN110662766A (zh) 2017-03-09 2020-01-07 赛托姆克斯治疗学股份有限公司 Cd147抗体、可激活cd147抗体及其制备和使用方法
EP3619234A4 (en) 2017-05-03 2021-05-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Compositions and methods for adoptive cell therapies
CA3063362A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Msln targeting trispecific proteins and methods of use
WO2018209298A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
EP3630841A1 (en) 2017-06-02 2020-04-08 Pfizer Inc. Antibodies specific for flt3 and their uses
WO2018232020A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
CA3070539A1 (en) 2017-08-01 2019-02-07 Medimmune, Llc Bcma monoclonal antibody-drug conjugate
JP2019052752A (ja) 2017-09-15 2019-04-04 日本電産株式会社 変速機及びアクチュエータ
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
EP4435007A3 (en) 2017-10-13 2024-12-25 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific proteins and methods of use
US20210284728A1 (en) 2018-05-14 2021-09-16 Harpoon Therapeutics, Inc. Dual binding moiety
SG11202011330PA (en) 2018-05-14 2020-12-30 Harpoon Therapeutics Inc Binding moiety for conditional activation of immunoglobulin molecules
WO2019222282A1 (en) 2018-05-14 2019-11-21 Harpoon Therapeutics, Inc. Conditionally activated binding protein comprising a sterically occluded target binding domain
EP3802611A2 (en) 2018-06-01 2021-04-14 Novartis AG Binding molecules against bcma and uses thereof
WO2020061482A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Egfr binding proteins and methods of use
WO2020061526A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Conditionally activated target-binding molecules
US20220054544A1 (en) 2018-09-21 2022-02-24 Harpoon Therapeutics, Inc. Conditionally active receptors
CN113286817B (zh) 2018-09-25 2025-01-28 哈普恩治疗公司 Dll3结合蛋白及使用方法
CN109593786A (zh) 2019-01-09 2019-04-09 上海怡豪生物科技有限公司 联合EpCAM和MSLN单链抗体的双靶点CAR载体及其构建方法和在乳腺癌应用
JP7507790B2 (ja) 2019-05-14 2024-06-28 ハープーン セラピューティクス，インク． ＥｐＣＡＭ結合タンパク質および使用方法
WO2021097060A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Harpoon Therapeutics, Inc. Pro immune modulating molecule comprising a clustering moiety
JP2023527609A (ja) 2020-02-21 2023-06-30 ハープーン セラピューティクス，インク． Ｆｌｔ３結合タンパク質および使用方法
WO2021231434A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 Harpoon Therapeutics, Inc. Psma targeting tritacs and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
EP3493844A4 (en) 2021-03-24
AU2017268460B2 (en) 2023-12-14
JP2022119835A (ja) 2022-08-17
JP7101621B2 (ja) 2022-07-15
CA3024723A1 (en) 2017-11-23
US20170369563A1 (en) 2017-12-28
WO2017201488A1 (en) 2017-11-23
AU2024201624A1 (en) 2024-04-18
EA201892691A1 (ru) 2019-04-30
MX2018014228A (es) 2019-08-12
AU2017268460A1 (en) 2018-12-13
US20190031749A1 (en) 2019-01-31
CN109641047A (zh) 2019-04-16
US11453716B2 (en) 2022-09-27
KR20190008372A (ko) 2019-01-23
IL263102B1 (en) 2023-07-01
US9920115B2 (en) 2018-03-20
KR102530742B1 (ko) 2023-05-09
US10100106B2 (en) 2018-10-16
US20230257451A1 (en) 2023-08-17
US20170334979A1 (en) 2017-11-23
JP2024095692A (ja) 2024-07-10
EP3493844A1 (en) 2019-06-12
SG11201810327XA (en) 2018-12-28
IL263102A (en) 2018-12-31
BR112018073739A2 (pt) 2019-02-26
JP2019519216A (ja) 2019-07-11
IL263102B2 (en) 2023-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230257451A1 (en) Single domain serum albumin binding protein
JP7337204B2 (ja) 単鎖可変フラグメントｃｄ３結合タンパク質
AU2008206555B2 (en) Pegylated Abeta Fab
US11623958B2 (en) Single chain variable fragment CD3 binding proteins
BR122024005612A2 (pt) Proteínas de ligação a albumina sérica de domínio único
EA043032B1 (ru) Однодоменный белок, связывающий сывороточный альбумин

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination