CN116327917A - 高度浓缩的低粘度masp-2抑制性抗体制剂、试剂盒和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及高度浓缩的低粘度MASP‑2抑制性抗体制剂、试剂盒和方法。本发明涉及MASP‑2抑制性抗体的稳定的、高浓度低粘度制剂、包含所述制剂的试剂盒和使用所述制剂和试剂盒用于抑制MASP‑2依赖性补体活化的不良反应的治疗方法。

Description

高度浓缩的低粘度MASP-2抑制性抗体制剂、试剂盒和方法

相关申请的交叉引用

本申请是国际申请日为2017年8月30日的国际申请PCT/US2017/049415进入中国、申请号为201780051640.7的题为“高度浓缩的低粘度MASP-2抑制性抗体制剂、试剂盒和方法”的发明专利申请的分案申请。本申请要求于2016年8月31日提交的美国临时申请号62/382,156的权益，所述申请由此以其整体通过引用并入。

技术领域

本发明涉及MASP-2抑制性抗体的稳定的、高浓度低粘度制剂、包含所述制剂的试剂盒和使用所述制剂和试剂盒用于抑制MASP-2依赖性补体活化的不良反应的治疗方法。

关于序列表的声明

与本申请相关的序列表以文本格式代替纸印本提供并由此通过引用并入说明书中。含有序列表的文本文件的名称是MP_1_0261_US_20170809_ST25.txt。文本文件为17KB；创建于2017年8月9日；且随说明书的申请经EFS-Web提交。

背景技术

基于抗体的疗法通常定期施用并经常需要通过注射的若干mg/kg的给药。用于治疗慢性病况的递送的优选形式是经皮下(SC)注射的高剂量单克隆抗体(若干mg/kg)的门诊施用(Stockwin和Holmes，Expert Opin Biol Ther 3：1133-1152(2003)；Shire等人，JPharm Sci 93：1390-1402(2004))。治疗抗体的高度浓缩的药物制剂是期望的，因为它们允许较小体积施用和/或较少施用，这因此意味着对于患者较低不适。此外，此类较小体积允许将治疗剂量的单克隆抗体包装在单独的单剂量、预填充注射器用于自施用。经预填充注射器或自动注射器技术的SC递送允许家庭施用和药物施用改善的患者依从性。

然而，开发高蛋白浓度的制剂带来与蛋白的物理和化学稳定性相关的挑战以及制备、存储和递送蛋白制剂难度(参见例如，Wang等人，J of Pharm Sci vol 96(1)：1-26，(2007))。开发高蛋白浓度制剂的挑战是浓度依赖性的溶液粘度。在给定蛋白浓度下，粘度作为制剂函数变化显著。尤其是，已知单克隆抗体展示出独特且不同的粘度-浓度概况，其随着单克隆抗体浓度增加显示出溶液粘度的急剧的指数增加(参见例如，Connolly B.D.等人，Biophysical Journal vol 103：69-78，(2012))。高单克隆抗体浓度的液体制剂的另一个挑战是蛋白的物理稳定性(Alford等人，J.Pharm Sci 97：3005-3021(2008)；Salinas等人，J Pharm Sci 99：82-93(2010)；Sukumar等人，Pharm Res 21：1087-1093(2004))。因此，高浓度下单克隆抗体药物制剂的高粘度连同稳定性降低的可能性可能阻碍其作为适合于皮下和/或静脉内递送的产品的开发。

补体系统在炎症应答中起作用并且由于组织损伤或微生物感染而被活化。补体活化必须被密切调节以确保选择性靶向入侵微生物并避免自体损伤(Ricklin等人，Nat.Immunol.11：785-797，2010)。目前，广泛接受的是补体系统可以经三种不同途径来活化：经典途径、凝集素途径和替代途径。经典途径通常通过由结合于外源颗粒(即抗原)的宿主抗体构成的复合体引发并且通常需要前期暴露于抗原以产生特异性抗体应答。由于经典途径的活化依赖于通过宿主的前期适应性免疫应答，因此经典途径是获得性免疫系统的一部分。相反，凝集素和替代途径不依赖于适应性免疫且是先天免疫系统的一部分。

甘露聚糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)已显示是凝集素途径(主要补体活化途径之一)的功能所必需的(Vorup-Jensen等人，J.Immunol 165：2093-2100，2000；Ambrus等人，J Immunol.170：1374-1382，2003；Schwaeble等人，PNAS 108：7523-7528，2011)。重要的是，MASP-2的抑制似乎不妨碍抗体依赖性经典补体活化途径，其是对于感染的获得性免疫应答的关键组分。如美国专利号9,011,860(归属于Omeros公司)中所述，所述专利通过引用并入，已生成OMS646(靶向人MASP-2的完全人单克隆抗体)，其以高亲和力结合人MASP-2并且阻断凝集素途径补体活性，因此可用于治疗多种凝集素补体途径相关的疾病和病症。

如美国专利号7,919,094、美国专利号8,840,893、美国专利号8,652,477、美国专利号8,951,522、美国专利号9,011,860；美国专利号9,644,035、美国专利申请公开号US2013/0344073、US2013/0266560、US 2015/0166675；US2017/0189525；和共同在审的美国专利申请系列号15/476,154、15/347,434、15/470,647、62/315,857、62/275,025和62/527,926(其各自归属于Omeros Corporation，本申请的受让人，其由此各自通过引用并入)中进一步所述，MASP-2依赖性补体活化已涉及有助于大量急性和慢性疾病状态的发病机理。因此，存在对于MASP-2单克隆抗体的稳定的、高浓度、低粘度制剂的需求，所述制剂适合于肠胃外(例如皮下)施用、用于治疗患有MASP-2补体途径相关的疾病和病症的主体。

发明内容

在一方面，本公开提供适合于肠胃外施用于哺乳动物主体的稳定的药物制剂，其包含：(a)包含具有5.0-7.0的pH的缓冲系统的水溶液；和(b)以约50mg/mL至约250mg/mL的浓度的特异性结合人MASP-2的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含(i)含有SEQ ID NO：2的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的轻链可变区，或包含具有与SEQ ID NO：2的至少95％同一性的重链可变区和具有与SEQ ID NO：3的至少95％同一性的轻链可变区的其变体；其中所述制剂具有2-50厘泊(cP)的粘度，且其中所述制剂当存储在2℃-8℃下至少一个月是稳定的。在一些实施方案中，制剂中抗体的浓度为约150mg/mL至约200mg/mL。在一些实施方案中，制剂的粘度小于25cP。在一些实施方案中，缓冲系统包含组氨酸。在一些实施方案中，缓冲系统包含柠檬酸盐。在一些实施方案中，制剂进一步包含赋形剂，诸如以足够量以使制剂为高渗的张力调节剂。在一些实施方案中，制剂还包含表面活性剂。在一些实施方案中，制剂还包含以皮下施用后有效增加抗体的分散和/或吸收的量的透明质酸酶。

在另一方面，制剂包含在皮下施用装置诸如预填充的注射器内。

在另一方面，本公开提供包含含有所述制剂的预填充容器的试剂盒。

在另一方面，本公开提供用于治疗患有MASP-2依赖性疾病或病况或处于发生MASP-2依赖性疾病或病况的风险中的患者的药物组合物，其中所述组合物为无菌、单次使用剂型，其包含约350mg至约400mg(即350mg、360mg、370mg、380mg、390mg或400mg)MASP-2抑制性抗体，其中所述组合物包含约1.8mL至约2.2mL(即1.8mL、1.9mL、2.0mL、2.1mL或2.2mL)的185mg/mL抗体制剂，诸如本文所公开的，其中所述抗体或其片段包含(i)含有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂当存储在2℃至8℃下至少六个月是稳定的。在一些实施方案中，MASP-2依赖性疾病或病况选自aHUS、HSCT-TMA、IgAN和狼疮性肾炎(LN)。

在另一方面，本公开提供治疗患有顺从于用MASP-2抑制性抗体治疗的疾病或病症的主体的方法，其包括施用如本文所公开的包含MASP-2抗体的制剂。

附图说明

本发明的前述方面和许多伴随的优点将变得更容易理解，因为当结合附图时参考以下详述，本发明的前述方面和许多伴随的优点变得更好理解，其中：

图1A图示说明在不同量的人MASP-2单克隆抗体(OMS646)存在的情况下凝集素途径依赖性膜攻击复合物(MAC)沉积的量，表明OMS646以约1nM的IC₅₀值抑制凝集素介导的MAC沉积，如实施例1中所述；

图1B图示说明在不同量的人MASP-2单克隆抗体(OMS646)存在的情况下经典途径依赖性MAC沉积的量，表明OMS646不抑制经典途径介导的MAC沉积，如实施例1中所述；

图1C图示说明在人MASP-2单克隆抗体(OMS646)存在的情况下替代途径依赖性MAC沉积的量，表明OMS646不抑制替代途径介导的MAC沉积，如实施例1中所述；

图2A图示说明OMS646制剂赋形剂筛选的动态光散射(DLS)分析的结果，显示对于含有不同候选赋形剂的制剂所观察到的总体粒径，如实施例2中所述；

图2B图示说明OMS646制剂赋形剂筛选的DLS分析的结果，显示对于含有不同候选赋形剂的制剂所观察到的总体多分散性，如实施例2中所述；

图3图示说明如在pH 5.0和pH 6.0测量的在不同制剂中一定范围的OMS646浓度的粘度分析结果，如实施例2中所述；

图4图示说明用不同候选制剂的OMS646溶解度/粘度研究的缓冲液交换后的百分比蛋白回收，如实施例2中所述；

图5图示说明用不同候选制剂的OMS646溶解度/粘度研究的粘度(如通过粘度数据的指数拟合所测定)相对于蛋白浓度，如实施例2中所述；

图6图示说明用不同候选OMS646制剂的粘度研究的蛋白浓度均一化的粘度数据，如实施例2中所述；

图7A图示说明使用27GA(1.25″)、25GA(1″)和25GA薄壁(1″)针的可注射性研究中三种候选OMS646制剂的平均载荷(lbf)，如实施例3中所述；和

图7B图示说明使用27GA(1.25″)、25GA(1″)和25GA薄壁(1″)针的可灌注性研究中三种候选OMS646制剂的最大载荷(1bf)，如实施例3中所述。

序列表的描述

SEQ ID NO：1人MASP-2蛋白(成熟)

SEQ ID NO：2：OMS646重链可变区(VH)多肽

SEQ ID NO：3：OMS646轻链可变区(VL)多肽

SEQ ID NO：4：OMS646重链IgG4突变的重链全长多肽

SEQ ID NO：5：OMS646轻链全长多肽

SEQ ID NO：6：编码OMS646全长重链多肽的DNA

SEQ ID NO：7：编码OMS646全长轻链多肽的DNA。

具体实施方式

I.定义

除非本文明确定义，否则本文使用的所有术语具有如本发明的领域中普通技术人员所理解的相同含义。提供以下定义以使得术语变得清楚，因为它们用于说明书和权利要求书中来描述本发明。

可以使用标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如，电穿孔、脂转染)。酶反应和纯化技术根据制造商说明书进行，或如同本领域中通常进行的或如本文所描述的。这些及相关技术和程序可以通常根据本领域中众所周知的和如描述于多个一般性的和在整个本说明书中引用并讨论的更具体的参考文献中的常规方法进行。参见，例如，Sambrook等人，2001，MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，第3版，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.；Current Protocols inMolecular Biology(Greene Publ.Assoc.Inc.&John Wiley&Sons，Inc.，NY，NY)；CurrentProtocols in Immunology(编辑：John E.Coligan，Ada M.Kruisbeek，DavidH.Margulies，Ethan M.Shevach，Warren Strober2001John Wiley&Sons，NY，NY)；或其他相关的Current Protocol出版物及其他类似文献。除非提供明确定义，否则本文描述的与分子生物学、分析化学、合成有机化学和医学和药物化学相关使用的术语学及其实验室程序及技术是众所周知的且在本领域中通常使用。标准技术可用于重组技术、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送以及患者的治疗。

术语“药物制剂”指这样的制剂，其为这样的形式以使得活性剂(例如MASP-2抑制性抗体)的生物活性对于治疗是有效的，并且其不含有对于所述制剂将施用的主体具有不可接受的毒性的其他组分。此类制剂是无菌的。在一个实施方案中，药物制剂适合于肠胃外施用，诸如皮下施用。

术语“MASP-2”指甘露聚糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶-2。人MASP-2蛋白(成熟)描述于SEQ ID NO：1。

术语“MASP2依赖性补体活化”包括凝集素途径的MASP2依赖性活化，其在生理条件(即，存在Ca⁺⁺的情况下)发生，导致形成凝集素途径C3转变酶C4b2a并且在积累C3切割产物C3b后随后形成C5转变酶C4b2a(C3b)n。

术语“凝集素途径”指这样的补体活化，其经血清和非血清碳水化合物结合蛋白包括甘露聚糖结合凝集素(MBL)、CL-11和纤维胶原素(H-纤维胶原素、M-纤维胶原素或L-纤维胶原素)的特异性结合发生。

术语“经典途径”指这样的补体活化，其通过结合至外源颗粒的抗体引发并需要结合识别分子C1q。

术语“MASP2抑制性抗体”指抗体或其抗原结合片段，其结合MASP2并有效地抑制MASP2依赖性补体活化(例如，OMS646)。可用于本发明的方法中的MASP2抑制性抗体可以降低MASP2依赖性补体活化大于20％，诸如大于30％、或大于40％、或大于50％、或大于60％、或大于70％、或大于80％、或大于90％、或大于95％。

术语“OMS646单克隆抗体”指包含SEQ ID NO：2中所示的重链可变区氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3并包含SEQ ID NO：3中所示的轻链可变区氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的单克隆抗体。该特定抗体是特异性结合MASP-2并抑制MASP-2依赖性补体活化的MASP-2抑制性抗体的实例。

“单克隆抗体”指同质抗体群，其中单克隆抗体包含涉及选择性结合表位的氨基酸(天然存在的和非天然存在的)。单克隆抗体对于靶抗原是高度特异的。术语“单克隆抗体”涵盖不仅完整单克隆抗体和全长单克隆抗体，还包括其片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)₂、Fv)、单链(scFv)、其变体、包含抗原结合部分的融合蛋白、人源化单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和包含结合表位所需的特异性和能力的抗原结合片段(表位识别位点)的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型。不旨在关于抗体来源或其制备的方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组体表达、转基因动物等)有任何限制。术语包括在“抗体”定义下的上述完整免疫球蛋白以及片段等。

术语“抗体片段”指衍生自全长抗体诸如例如MASP-2抑制性抗体或与其相关的部分，通常包括其抗原结合或可变区。抗体片段的说明性实例包括由抗体片段形成的Fab、Fab′、F(ab)₂、F(ab′)₂和Fv片段、scFv片段、双体、直链抗体、单链抗体分子和多特异性抗体。

如本文所用，“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的V_H和V_L结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。通常，Fv多肽进一步包含V_H和V_L结构域之间的多肽接头，其使得scFv形成用于抗原结合的期望结构。

术语“CDR区”或“CDR”旨在说明如Kabat等人，1991(Kabat，E.A.等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest第五版及新版所定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高变区。抗体通常包含3个重链CDR和3个轻链CDR。本文使用术语CDR或CDRs来根据情况说明这些区域之一或这些区域中的若干或甚至全部，所述这些区域包含负责通过抗体对其所识别的表位的抗原的亲和力的结合的大部分氨基酸残基。

术语“特异性结合”指抗体优先结合存在于不同分析物的均匀混合物中的特定分析物的能力。在某些实施方案中，特异性结合相互作用将区分样品中期望和不期望的分析物，在一些实施方案中，大于约10-100倍或更多(例如，大于约1000或10000倍)。在某些实施方案中，当其特异性在捕获剂/分析物复合物中结合时，捕获剂和分析物之间的亲和力的特征在于小于约100nM、或小于约50nM、或小于约25nM、或小于约10nM、或小于约5nM或小于约1nM的K_D(解离常数)。

术语“分离的抗体”指已从其天然环境或细胞培养表达系统的组分中鉴定并分离和/或回收和/或纯化的抗体。在优选的实施方案中，抗体将被纯化至(1)如通过测量蛋白浓度的合适方法诸如例如Lowry方法或在OD280处的吸光度所测定的大于95重量％的抗体且最优选大于99重量％，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)通过在还原性或非还原性条件下使用考马斯亮蓝或优选银染的SDS-PAGE的同质性。通常，用于本文公开的制剂中的分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。

如本文所用，氨基酸残基缩写如下：丙氨酸(Ala；A)，天冬酰胺(Asn；N)，天冬氨酸(Asp；D)，精氨酸(Arg；R)，半胱氨酸(Cys；C)，谷氨酸(Glu；E)，谷氨酰胺(Gln；Q)，甘氨酸(Gly；G)，组氨酸(Hush)，异亮氨酸(IIia)，亮氨酸(Lull)，赖氨酸(Lys；K)，甲硫氨酸(Met；M)，苯丙氨酸(Phe；F)，脯氨酸(Pro；P)，丝氨酸(Ser；S)，苏氨酸(Thr；T)，色氨酸(Trp；W)，酪氨酸(Tyr；Y)和缬氨酸(Val；V)。

在最宽泛的意义上，天然存在的氨基酸可以根据各个氨基酸的侧链的化学特征分入组中。“疏水性”氨基酸意指Ile、Leu、Met、Phe、Trp、Tyr、Val、Ala、Cys或Pro。“亲水性”氨基酸意指Gly、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、Lys、Arg或His。氨基酸的这一分组可以进一步如下再分类。“不带电荷的亲水性”氨基酸意指Ser、Thr、Asn或Gln。“酸性”氨基酸意指Glu或Asp。“碱性”氨基酸意指Lys、Arg或His。

如本文所用，术语“保守氨基酸取代”通过以下各组内的氨基酸之间的取代来说明：(1)甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，(2)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，(3)丝氨酸和苏氨酸，(4)天冬氨酸和谷氨酸，(5)谷氨酰胺和天冬酰胺，和(6)赖氨酸、精氨酸和组氨酸。

如本文所用，“主体”包括所有哺乳动物，包括而不限于，人、非人灵长类动物、犬、猫、马、绵羊、山羊、牛、兔、猪和啮齿类动物。

关于药物制剂中的赋形剂的术语“药学上可接受的”意指所述赋形剂适合于施用于人主体。

术语“皮下施用”指在主体皮肤的所有层下施用制剂。

术语“缓冲液”指通过其酸-碱共轭组分的作用抵抗pH改变的缓冲溶液。本发明的缓冲液具有约4至约8的范围的pH；优选约5至约7；且最优选具有约5.5至约6.5范围的pH。将在该范围内控制pH的缓冲液的实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(诸如琥珀酸钠)、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲液。“缓冲剂”是用于产生缓冲溶液的化合物。

术语“组氨酸”具体包括L组氨酸，除非另有说明。

术语“等渗的”指具有基本上与人血液相同的渗透压的制剂。等渗制剂通常具有约250至约350mOsmol/KgH₂0的渗透压。等渗性例如使用蒸气压或凝固点降低渗压计(freezing point depression osmometer)来测量。

术语“高渗的”指具有高于人的渗透压的渗透压(即，大于350mOsm/KgH₂0)的制剂。

术语“张力调节剂”指适合于提供等渗的或在一些实施方案中高渗的制剂的药学上可接受的试剂。

术语“无菌的(sterile)”指药品，其为无菌的(asceptic)或无活的细菌、真菌或其他微生物，其可以通过任何合适的手段获得，例如诸如，已经无菌加工并填装或在制备之前或之后经无菌滤膜过滤并填装的制剂。

术语“稳定制剂”指经一段时间维持制剂纯度的起始水平。换言之，如果制剂在时间0时关于给定抗体种类(例如，MASP-2抑制性抗体)为至少95％纯，诸如至少96％纯、至少97％纯、至少98％纯或至少99％纯，则稳定性是该制剂在多大程度上实质上保持该纯度水平(例如，不形成其他种类，诸如片段化的部分(LMW)或纯种类的聚集体(HMW))或保持所述纯度水平多久的量度。如果当在约2-8℃下储存给定时期诸如至少6个月、至少9个月、至少12个月或至少24个月，纯度水平没有实质上降低，则制剂是稳定的。“没有实质上降低”意指经时期(例如，经6个月、经9个月或经12个月或经24个月)制剂的纯度水平变化低于5％、诸如低于4％、或低于3％、或低于2％或低于1％。在一个实施方案中，稳定制剂在2-8℃的温度下至少6个月的时期是稳定的。在一个优选的实施方案中，稳定制剂在2-8℃的温度下至少一年的时期或至少两年的时期是稳定的。在一个实施方案中，如果MASP-2抑制性抗体在2℃-8℃下存储至少一个月、或至少六个月或至少12个月保持至少95％为单体，如通过SEC-HPLC所测定的，则所述制剂是稳定的。

术语“防腐剂”指可以包含在制剂中以基本上降低细菌生长或污染的化合物。可能的防腐剂的非限制性实例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六甲双铵(hexamethoniumchloride)、苯扎氯铵(其中烷基是长链化合物的烷基苄基二甲基氯化铵的混合物)和苄索氯铵。其他类型的防腐剂包括芳香醇诸如苯酚、丁醇和苄醇，对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、邻苯二酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚。

术语“赋形剂”是指制剂中的惰性物质，其赋予制剂有益的物理性质，例如增加的蛋白稳定性和/或降低的粘度。合适的赋形剂的实例包括但不限于蛋白(例如血清白蛋白)、氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸，赖氨酸、精氨酸、甘氨酸和组氨酸)、糖(例如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖)、多元醇(例如甘露醇和山梨醇)、脂肪酸和磷脂(例如烷基磺酸酯和辛酸酯)。

术语“基本上不含”是指不存在任何物质或仅存在最小的、痕量的物质，其对组合物的性质没有任何实质性影响。如果不提及物质的量，应理解为“无可检测的量”。

术语“粘度”是指通过剪切应力或拉伸应力变形的流体的阻力的量度；其可以使用粘度计(例如滚球粘度计)或流变仪来评价。除非另有说明，粘度测量值(厘泊，cP)是约25℃下剪切速率在100,000至250,0001/秒的范围内的测量值。

术语“肠胃外施用”是指借助于肠道之外的施用途径，且包括通过注射器或诸如输注泵的其他机械装置将剂型注射到体内。肠胃外途径可以包括静脉内、肌内、皮下和腹膜内施用途径。皮下注射是优选的施用途径。

术语“治疗”是指治疗性治疗和/或预防或防止性措施。需要治疗的患者包括已经患有该疾病的主体以及其中预防该疾病的主体。因此，本文待治疗的患者可能已被诊断为具有疾病或可能易患或易感该疾病。

术语“有效量”是指提供期望效果的物质的量。在药品物质的情况下，其是有效治疗患者中的疾病的活性成分的量。在制剂成分例如透明质酸酶的情况下，有效量是增加共施用的MASP-2抑制性抗体的分散和吸收以使得MASP-2抑制性抗体可以以如上所述的治疗有效的方式起作用的所需量。

如本文所用，本文所用的术语“约”意在规定提供的具体值可以在一定程度上变化，例如在±10％、优选±5％、最优选±2％的范围内的变化包含在给定值中。例如，短语“具有约200mg/mL MASP-2抑制性抗体的药物制剂”应理解为意指该制剂可具有180mg/mL至220mg/mL MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646)。当说明范围时，端点包括在范围之内，除非另有说明或另外从上下文是显而易见的。

如本文所用，除非上下文明确另有说明，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“所述(the)”包括复数方面。因此，例如，提及“赋形剂”包括多种此类赋形剂及其本领域技术人员已知的等同物，提及“试剂”包括一种试剂以及两种或多种试剂；提及“抗体”包括多种此类抗体并且提及“框架区”包括提及一个或多个框架区及其本领域技术人员已知的等同物，等等。

本说明书中的每一实施方案将根据实际情况修改而应用于每个其他实施方案，除非另有明确说明。应理解本说明书中讨论的任何实施方案可以就本发明的任何方法、试剂盒、试剂或组合物进行实施，且反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。

II.发明概述

本公开提供适合于肠胃外施用(例如，皮下施用)且还适合于在静脉内施用前稀释的稳定的、高浓度低粘度MASP-2抑制性抗体药物制剂。治疗抗体的高度浓缩的药物制剂是期望的，因为它们允许较小体积施用和/或较少施用，这因此意味着对于患者较低不适。此外，此类较小体积允许将治疗剂量的MASP-2抑制性抗体包装在单独的单剂量、预填充注射器或小瓶中用于自施用。本公开的高浓度、低粘度制剂包含水溶液和浓度为约50mg/mL至约250mg/mL的MASP-2抑制性单克隆抗体(例如OMS646)或其抗原结合片段，所述水溶液包含具有pH为4.0至8.0、更优选具有pH为约5.0至约7.0的缓冲系统。在优选的实施方案中，MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646)存在于适合于以约100mg/mL至约250mg/mL的浓度皮下施用的高浓度制剂中。在具体实施方案中，MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646)以约150mg/mL至约200mg/mL的浓度，诸如约175mg/mL至约195mg/mL、诸如约185mg/mL存在于高浓度制剂中。

在各种实施方案中，除了高浓度MASP-2抑制性抗体和缓冲系统之外，药物制剂还包含一种或多种赋形剂，例如张力调节剂(例如具有带电侧链的氨基酸)和任选非离子表面活性剂。在一些实施方案中，根据本公开的药物制剂进一步包含透明质酸酶。

本发明的MASP-2抑制性抗体的高度浓缩的药物制剂的显著优点是其在高蛋白浓度下的低粘度。如本领域技术人员已知，在浓度≥100mg/mL下单克隆抗体药物制剂的高粘度可能妨碍其开发作为适合于皮下和/或静脉内递送的产品。因此，具有较低粘度的药物制剂是高度期望的，因为其易于可制造性，诸如但不限于加工、过滤和填充。如本文实施例2和3中所述，包含100mg/mL-200mg/mL MASP-2抑制性抗体OMS646的本公开的制剂具有令人惊奇的低粘度，诸如低于约50cP的粘度，诸如2cP-50cP、诸如2cP-40cP、诸如2cP-30cP、或2cP-25cP、或2cP-20cP、或2cP-18cP。

此外，本发明的低粘度、高度浓缩的MASP-2抑制性抗体药物制剂允许所述药物制剂经本领域已知的标准针筒和针、自动注射器装置和微输注装置来施用。如实施例3中所述，如本文公开的MASP-2抑制性抗体药物制剂的高浓度低粘度被确定为具有适合于皮下施用的可灌注性(syringeability)和可注射性(injectability)。可灌注性和可注射性是旨在用于任何肠胃外施用(例如肌内或皮下)的药物制剂的关键产品性能参数，并且允许经通常用于这种注射的小孔针，诸如例如，29GA常规或薄壁针、27GA(1.25″)常规或薄壁针或25GA(1″)常规或薄壁针通过肌内或皮下注射来施用此类制剂。在一些情况下，如本文公开的MASP-2抑制性抗体药物制剂的低粘度允许施用可接受的(例如，1-3cc)注射体积，同时将有效量的MASP-2抑制性抗体OMS646以在单一注射部位单次注射进行递送。

本公开的制剂的进一步的显著优点是当在2℃至8℃下储存至少30天、高至至少9个月或高至至少12个月或更长时(如实施例2和4中的稳定性研究中所述)，MASP-2抑制性抗体的高浓度低粘度制剂(即≥100mg/mL至200mg/mL)是稳定的。

本公开还提供了制备高浓度低粘度MASP-2抑制性抗体制剂的方法、包含所述制剂的容器、包含所述制剂的治疗试剂盒；以及使用这样的制剂、容器和试剂盒用于治疗患有与MASP-2依赖性补体活化相关的疾病或病况或处于发生所述疾病或病况的风险中的主体的治疗方法。

MASP-2抑制性抗体

如本文所详述，本发明涉及包含特异性结合MASP-2且抑制MASP-2依赖性补体活化的单克隆抗体及其抗原结合片段的制剂。在某些实施方案中，用于要求保护的制剂中的MASP-2抑制性抗体或其抗原结合片段是称为如WO2012/151481(由此通过引用并入本文)中所述的“OMS646”的MASP-2抑制性抗体，其包含含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链多肽和含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的轻链多肽。如WO2012/151481中所述和实施例1中所述，OMS646以高亲和力特异性结合人MASP-2并且具有阻断凝集素途径补体活性的能力。在某些实施方案中，用于要求保护的制剂中的MASP-2抑制性抗体或其抗原结合片段是包含重链可变区和(b)轻链可变区的MASP-2抑制性抗体，所述重链可变区包含(i)含有来自SEQ ID NO：2的31-35的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有来自SEQ ID NO：2的50-65的氨基酸序列的CDR-H2，和iii)含有来自SEQ ID NO：2的95-107的氨基酸序列的CDR-H3；所述轻链可变区包含：i)含有来自SEQ ID NO：3的24-34的氨基酸序列的CDR-L1，ii)含有来自SEQ ID NO：3的50-56的氨基酸序列的CDR-L2，和iii)含有来自SEQ ID NO：3的89-97的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，用于要求保护的制剂中的MASP-2抑制性抗体包含OMS646的变体，其包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同一性的重链可变区且包含与SEQ ID NO：3具有至少95％同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，用于要求保护的制剂中的MASP-2抑制性抗体包含OMS646的变体，所述变体包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同一性的氨基酸序列，其中残基31为R，残基32为G，残基33为K，残基34为M，残基35为G，残基36为V，残基37为S，残基50为L，残基51为A，残基52为H，残基53是I，残基54是F，残基55是S，残基56是S，残基57是D，残基58是E，残基59是K，残基60是S，残基61是Y，残基62是R，残基63是T，残基64是S，残基65是L，残基66是K，残基67是S，残基95是Y，残基96是Y，残基97为C，残基98为A，残基99为R，残基100为I，残基101为R，残基102为R或A，残基103为G，残基104为G，残基105是I，残基106是D，残基107是Y；和b)包含与SEQ ID NO：3具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区，其中残基23是S，残基24是G，残基25是E或D，残基26是K，残基27为L，残基28为G，残基29为D，残基30为K，残基31为Y或F，残基32为A，残基33为Y，残基49为Q，残基50为D，残基51为K或N，残基52为Q或K，残基53为R，残基54为P，残基55为S，残基56为G，残基88为Q，残基89为A，残基90为W，残基91为D，残基92为S，残基93为S，残基94为T，残基95为A，残基96为V和残基97是F。

在一些实施方案中，用于要求保护的制剂中的单克隆MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646或其变体)是全长单克隆抗体。在一些实施方案中，单克隆MASP-2抑制性抗体是人IgG4全长抗体。在一些实施方案中，IgG4包含在铰链区中的点突变以增强抗体的稳定性。

在一些实施方案中，MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646或其变体)包含与人IgG4重链和λ轻链恒定区融合的人来源的可变区，其中所述重链包含在铰链区中的点突变(例如，其中IgG4分子包含S228P突变)以增强抗体的稳定性。在一些实施方案中，MASP-2抑制性抗体是由具有SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列的两条相同重链和具有SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列的两条相同轻链组成的四聚体。

在一些实施方案中，制剂中的MASP-2抑制性抗体的浓度为约100mg/mL至约250mg/mL、诸如约150mg/ml至约220mg/mL、诸如约175mg/mL至约200mg/mL或约175mg/mL至约195mg/mL。在某些实施方案中，MASP-2抑制性抗体以约175mg/ml至约195mg/ml、诸如约180mg/mL至约190mg/mL、诸如约175mg/mL、诸如约180mg/mL、约181mg/mL、约182mg/mL、约183mg/mL、约184mg/mL、约185mg/mL、约186mg/mL、约187mg/mL、约188mg/mL、约189mg/mL或诸如约190mg/mL的浓度存在于制剂中。

在一些实施方案中，将MASP-2抑制性抗体或其片段的氨基酸序列中的微小改变理解为涵盖在要求保护的制剂中，条件是氨基酸序列中的改变维持与本文所述的MASP-2抑制性抗体或其抗原结合片段至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性(即，与SEQ ID NO：2的至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性和/或与SEQ ID NO：3的至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)并且保持抑制MASP-2依赖性补体活化的能力。

如将理解的，在本公开的上下文中配制的MASP-2抑制性抗体或其抗原结合片段可以使用本领域中公知的技术(例如，重组体技术、噬菌体展示技术、合成技术或此类技术或本领域中容易已知的其他技术的组合)来产生。产生并纯化抗体和抗原结合片段的方法是本领域熟知的，并且可见于例如Harlow和Lane(1988)Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，第5-8和15章。

例如，MASP-2抑制性抗体诸如OMS646可以表达于合适的哺乳动物细胞系中。编码目标特定抗体诸如OMS646的重链可变区和轻链可变区的序列(例如SEQ ID NO：6和SEQ IDNO：7)可以用于转化合适的哺乳动物宿主细胞。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞的方法是本领域所熟知的且包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸在脂质体中的包封、以及将DNA直接显微注射入细胞核。

可用作宿主用于表达的哺乳动物细胞系是本领域所熟知的且包括许多可获自American Type Culture Collection(ATCC)的永生化细胞系，包括但不限于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BNK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞瘤细胞(例如HepG2)、人上皮肾293细胞(HEK293)和许多其他细胞系。

在细胞培养方法的蛋白生产阶段之后，使用本领域技术人员理解的技术从细胞培养基中回收MASP-2抑制性抗体。特别地，在一些实施方案中，从培养基中回收作为分泌多肽的MASP-2抑制性抗体重链和轻链多肽。

MASP-2抑制性抗体可以使用例如羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析以及已知的或仍待发现的纯化技术的任何组合进行纯化，所述纯化技术包括但不限于蛋白A层析、离子交换柱上的分级、乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶层析、肝素上层析

阴离子或阳离子交换树脂层析(如聚天冬氨酸柱)、层析聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。纯化方法可以进一步包括灭活和/或去除可能潜在地存在于哺乳动物细胞系的细胞培养基中的病毒和/或逆转录病毒的其它步骤。大量的病毒清除步骤是可行的，包括但不限于用离液剂诸如尿素或胍、去污剂的处理、附加的超滤/渗滤步骤、常规分离，例如离子交换或尺寸排阻层析、pH极限、热、蛋白酶、有机溶剂或其任何组合。

纯化的MASP-2抑制性抗体通常需要在储存或进一步加工之前进行浓缩和缓冲液交换。作为非限制性实例，可以使用切向流过滤(TFF)系统来浓缩并且用药物所需的最终缓冲液从先前的纯化柱中交换洗脱缓冲液。

本文配制的单克隆MASP-2抑制性抗体优选是基本上纯的，且期望地是基本上同质的(即，不含污染蛋白等)。“基本上纯的”抗体是指基于组合物的总重量，包含至少90重量％抗体的组合物，优选至少95重量％。“基本上同质的”抗体是指基于组合物的总重量，包含至少约99重量％抗体的组合物。

水溶液

本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂包含含有具有4.0-8.0的pH(例如，具有约5.0至约7.0的pH，或具有约5.5至6.5的pH)的缓冲系统的水溶液和浓度为约50mg/mL至约250mg/mL(例如，约100mg/mL至约250mg/mL)的MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646或其变体)或其抗原结合片段。用于本公开的制剂的水溶液是药学上可接受的(对于施用于人安全且无毒的)且可用于制备液体制剂的水溶液。在一些实施方案中，水溶液是水，诸如注射用无菌水(WFI)，其为蒸馏水的无菌的、无溶质的制备物。可选地，可以使用适合于治疗施用且不会不利地影响制剂的稳定性的其他水溶液，诸如去离子水。其他合适的水溶液包括注射用抑菌水(BWFI)、无菌盐溶液、林格氏溶液或用于药物溶液的其他类似的水溶液。

缓冲系统

本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂调节为4.0-8.0的pH，优选pH5.0-7.0。通过使用缓冲系统合适地保持期望的pH。在一些实施方案中，缓冲系统包含具有在制剂pH的2个pH单位内的酸离解常数的至少一种药学上可接受的缓冲剂。用于根据本发明的制剂中的缓冲系统具有范围为约4.0至约8.0的pH。各种缓冲剂是本领域技术人员已知的。将在该范围内控制pH的缓冲剂的实例包括乙酸盐、琥珀酸盐、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲液。在一些实施方案中，缓冲剂选自琥珀酸盐、组氨酸和柠檬酸盐。在一些实施方案中，药物制剂包含具有浓度为1-50mM、诸如10-40mM、或诸如10-30mM、或20-30mM、或约20mM的缓冲剂的缓冲系统。

在一些实施方案中，缓冲剂是组氨酸缓冲液。“组氨酸缓冲液”是包含氨基酸组氨酸的缓冲液。组氨酸缓冲液的实例包括组氨酸或任何组氨酸盐，包括组氨酸盐酸盐、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐和组氨酸硫酸盐，包括任何这些盐与组氨酸或不与组氨酸的组合。在一个实施方案中，缓冲系统包含组氨酸盐酸盐缓冲液(L-组氨酸/HCL)。此类组氨酸盐酸盐缓冲液可以通过用稀释的盐酸滴定L-组氨酸(游离碱，固体)或通过使用组氨酸和组氨酸盐酸盐的合适混合物来制备。在一些实施方案中，L-组氨酸/HCl缓冲液的pH为约5.0-约7.0，诸如约5.5-约6.0，例如约5.8或约5.9。

在一些实施方案中，缓冲剂是柠檬酸盐缓冲液。此类柠檬酸盐缓冲液可以通过用稀释的氢氧化钠溶液滴定柠檬酸、柠檬酸的单钠盐和/或柠檬酸的二钠盐至合适的pH或通过使用柠檬酸和盐的合适的混合物以实现该相同的pH来制备。在另一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液可以通过用稀释的盐酸溶液滴定柠檬酸三钠溶液至合适的pH来制备。在这种情况下，离子强度可以比柠檬酸开始时略高一些，这是由于溶液中额外的钠和氯离子的产生。在某些实施方案中，柠檬酸盐缓冲液的pH为约5.0-约7.0，诸如约5.5-约6.0，例如约5.8或约5.9。在一些实施方案中，缓冲剂是琥珀酸盐缓冲液。在某些实施方案中，琥珀酸盐缓冲液的pH为约5.5-约6.0，例如约5.8或约5.9。

在一些实施方案中，缓冲剂是柠檬酸钠缓冲液，其中柠檬酸钠以约10mM至约50mM、诸如约10mM至约25mM、诸如约20mM的浓度存在于制剂中。在一些实施方案中，缓冲剂是L-组氨酸缓冲液，其中L-组氨酸以约10mM至约50mM、诸如约10mM至约25mM、诸如约20mM的浓度存在于制剂中。在一些实施方案中，制剂包含约20mM柠檬酸钠并具有约5.0-约7.0的pH。在一些实施方案中，制剂包含约20mM L-组氨酸并具有约5.0-约7.0的pH。

赋形剂

在一些实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂进一步包含至少一种赋形剂。合适的赋形剂的实例包括但不限于蛋白(例如血清白蛋白)、氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸，赖氨酸、精氨酸、甘氨酸和组氨酸)、糖(例如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖)、多元醇(例如甘露醇和山梨醇)、脂肪酸和磷脂(例如烷基磺酸酯和辛酸酯)。

在一些实施方案中，制剂包含选自具有带电荷的侧链的氨基酸、糖或其他多元醇和盐的赋形剂。在一些实施方案中，制剂包含糖或其他多元醇，诸如例如，蔗糖、海藻糖、甘露糖醇或山梨醇。在一些实施方案中，制剂包含盐，诸如例如NaCl或氨基酸的盐。

在一些实施方案中，制剂包含作为张力调节剂的赋形剂。在一些实施方案中，张力调节剂以适合于提供等渗制剂的浓度包含在制剂中。在一些实施方案中，张力调节剂以适合于提供高渗制剂的浓度包含在制剂中。在一些实施方案中，用于制剂的张力调节剂选自具有带电荷的侧链的氨基酸、糖或其他多元醇和盐。在一些实施方案中，张力调节剂是浓度为约50mM至约300mM具有带电荷的侧链(即，带负电荷的侧链或带正电荷的侧链)的氨基酸。在一些实施方案中，张力调节剂是具有带负电荷的侧链的氨基酸，诸如谷氨酸。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约50mM至约300mM的谷氨酸。在一些实施方案中，张力调节剂是具有带正电荷的侧链的氨基酸，诸如精氨酸。在一些实施方案中，制剂包含精氨酸(例如，精氨酸HCL)，浓度为约50mM至约300mM，诸如约150mM至约225mM。

优选地，如本文所公开的药物制剂是高渗的(即，具有高于人血液的渗透压)。如本文所述，出人意料地观察到高渗性导致降低的样品粘度，其例如用适度增加精氨酸浓度来实现。如实施例2中所述，出人意料地观察到在不存在CaCl₂的情况下用包含200mM或更高的精氨酸浓度的柠檬酸盐/精氨酸和组氨酸/精氨酸高浓度MASP-2抑制性抗体制剂实现低粘度(例如，低于25cP)。因此，在一些实施方案中，制剂包含以约200mM至约300mM的高渗水平的精氨酸(例如，精氨酸HCL)。

如实施例2中进一步所述，还观察到包含二价阳离子(CaCl₂或MgCl₂)的制剂相比于不包含CaCl₂或MgCl₂添加剂的制剂具有升高的高分子量物质。因此，在一个实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂实质上无CaCl₂添加剂。在一个实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂实质上无MgCl₂添加剂。

如实施例2中进一步所述，对于高浓度MASP-2抗体制剂，确定包含蔗糖与所有测试的缓冲系统中的多分散性升高相关。因此，在一个实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂实质上无蔗糖。

如实施例2中所述，对于高浓度MASP-2抗体制剂，确定包含山梨醇与所有测试的缓冲系统中的多分散性升高相关。因此，在一个实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂实质上无山梨醇。

表面活性剂

任选地，在一些实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂进一步包含药学上可接受的表面活性剂。合适的药学上可接受的表面活性剂的非限制性实例包括聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯(例如吐温)、聚乙烯-聚丙二醇、聚氧乙烯-硬脂酸酯、聚氧乙烯烷基醚(例如聚氧乙烯单月桂醚)、烷基苯基聚氧乙烯醚(例如，Triton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(例如，泊洛沙姆和普朗尼克)和十二烷基硫酸钠(SDS)。在某些实施方案中，药学上可接受的表面活性剂为聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯(聚山梨酯)，诸如聚山梨酯20(以商标Tween20^TM销售)和聚山梨酯80(以商标Tween 80^TM销售)。在一些实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂包含非离子表面活性剂。非离子表面活性剂可以为聚山梨酯(例如，选自聚山梨酯20、聚山梨酯80和聚乙烯-聚丙烯共聚物)。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.001-0.1％(w/v)、或0.005％-0.1％(w/v)、或0.01-0.1％(w/v)、或0.01-0.08％(w/v)、或0.025-0.075％(w/v)、或更具体地约0.01％(w/v)、约0.02％(w/v)、约0.04％(w/v)、或约0.06％(w/v)、或约0.08％(w/v)、或约0.10％(w/v)。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约0.001-0.1％(w/v)、或0.005％-0.1％(w/v)、或0.01-0.1％(w/v)、或0.01-0.08％(w/v)、或0.025-0.075％(w/v)、或更具体地约0.01％(w/v)、约0.02％(w/v)、约0.04％(w/v)、或约0.06％(w/v)、或约0.08％(w/v)、或约0.10％(w/v)的非离子表面活性剂(例如，聚山梨酯80)。如实施例2中所述，出人意料地观察到包含非离子表面活性剂聚山梨酯80(PS-80)导致粘度进一步降低，同时还保留蛋白回收，由此允许高浓度的OMS646抗体，同时维持适合用于注射装置诸如自动注射器的低粘度。

稳定剂

任选地，在一些实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂进一步包含稳定剂。稳定剂(stabilizer)(与术语“稳定剂(stabilizing agent)”本文中同义使用)可以是监管机构许可作为药物制剂中的合适的添加剂或赋形剂的碳水化合物或糖类或糖，例如海藻糖或蔗糖。稳定剂的典型浓度为15-250mM、或150-250mM、或约210mM。制剂可以包含第二稳定剂，诸如甲硫氨酸，例如浓度为5-25mM或浓度为5-15mM(例如，浓度为约5mM、约10mM或约15mM的甲硫氨酸)。

防腐剂

任选地，在一些实施方案中，本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂进一步包含防腐剂(例如，抗微生物剂)。抗微生物剂通常对于旨在多次给药的肠胃外产品是必需的。类似地，如果活性成分不具有杀菌或抑菌特性或者是促进生长的，则将防腐剂添加至无菌包装在单一剂量小瓶中的药物制剂中。使用的一些典型防腐剂是苄醇(0.9％-1.5％)、对羟基苯甲酸甲酯(0.18％-0.2％)、对羟基苯甲酸丙酯(0.02％)、苯扎氯铵(0.01％-0.02％)和硫柳汞(0.001％-0.01％)。

可灌注性

施用的皮下途径需要使用注射装置诸如注射器、自动注射器、可佩带泵或其他装置(其在注射体积和溶液粘度方面制约产品制剂)的注射。此外，产品制剂必须在注射递送所需的注射力和时间方面适合用于注射装置。如本文所用的“可灌注性(Syringeablity)”指注射之前可注射治疗剂在从小瓶转移中容易地经过皮下针头的能力。如本文所用的“可注射性(Injectability)”指注射过程中制剂的性能(参见例如，Cilurzo F，Selmin F，Minghetti P，等人Injectability Evaluation：An Open Issue.AAPSPharmSciTech.2011；12(2)：604-609)。可灌注性包括此类因素如易于抽取(withdrawal)、堵塞和起泡倾向和剂量测量的准确性。可注射性包括注射所需的压力或力、流动均匀性和免于堵塞(即，注射器针头无堵塞)。可灌注性和可注射性可能受针几何形状的影响，即内径、长度、开口形状以及注射器的表面光洁度，特别是在自注射装置如笔式和自动注射器(例如，装备有29-31GA针头)和用于皮下给药的预装注射器(例如，配备24-27GA针头)中。注射力(或滑行力(glide force))是受溶液粘度、针的尺寸(即针规)以及容器/闭合件的表面张力影响的复杂因素。较小的针，例如≥规，会给患者带来较少的疼痛感。Overcashier及同事根据Hagen-Poiseuille方程建立了作为针规函数的粘度-滑行力关系(Overcashier等人，Am Pharm Rev 9(6)：77-83(2006)。例如，使用27号薄壁针，液体粘度应保持在或低于20cP，从而不超过25牛顿(N)的滑行力。

在某些实施方案中，本发明的药物制剂的特征在于在室温下通过27GA(1.25″)针注射时具有约25N或更小的注射滑行力。

在某些实施方案中，本发明的药物制剂的特征在于在室温下通过25GA(1″)针注射时具有约20N或更小的注射滑行力。

如实施例3所示例，本公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体(例如OMS646)制剂具有令人惊讶地好的可灌注性和可注射性。本文公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂允许经通常用于这种注射的小孔针，例如27G(1.25″)、27G薄壁、25G薄壁(1″)或25G(1″)针通过肌内或皮下注射来施用此类制剂。在一些情况下，如本文公开的MASP-2抑制性抗体制剂的低粘度允许施用可耐受的(例如，1-3cc)注射体积，同时将有效量的MASP-2抑制性抗体以在单一注射部位单次注射进行递送。

稳定性

对于任何上述内容，应当注意，制剂中的MASP-2抑制性抗体或其抗原结合片段保留抑制MASP-2依赖性补体活化的能力。例如，如WO2012/151481中所述，MASP-2抑制性抗体保留如实施例1或其它凝集素途径测定中所述的结合MASP-2并抑制凝血素途径活性的能力。除了效力测定之外，可以使用各种物理化学测定来评估稳定性，包括等电聚焦、聚丙烯酰胺凝胶电泳、尺寸排阻层析以及可见和显微镜可见(subvisible)的颗粒评估。

在某些实施方案中，本公开的制剂在-20℃至8℃的温度范围下持续至少30天、高至至少9个月或更长、或高至至少12个月或更长显示稳定性，如实施例2和4的稳定性研究中所述。另外或可选地，在某些实施方案中，制剂在-20℃至8℃、例如2℃至8℃的温度下持续至少6个月、至少1年或至少2年或更长是稳定的。在某些实施方案中，可以例如通过随时间维持纯度水平来评估稳定性。例如，在某些实施方案中，如通过尺寸排阻层析(SEC)测定的(其监测片段(LMW)和/或聚集物种类(HMW)的存在或不存在)，在2℃至8℃下储存时，本公开的制剂的纯度经一个月、6个月、9个月或一年具有小于5％的降低，例如小于4％的降低，例如小于3％的降低，例如小于2％，例如小于1％的降低。

在某些实施方案中，本公开的制剂促进低的直至不可检测的聚集和/或片段化水平，并在储存一定时期后保持效力。换言之，本文公开的制剂能够保持在溶液中以高浓度(例如以浓度大于150mg/mL、或大于175mg/mL、或至少185mg/mL)存在的MASP-2抑制性抗体OMS646的结构完整性，使得MASP-2抑制性抗体在约2℃至8℃下储存规定的时期后可以主要保持单体(即至少95％或更高)。优选地，在约2℃至8℃下储存规定的时期后如通过SEC测量的，不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％、不超过1％、且最优选不超过0.5％的抗体形成片段(LMW)或聚集体形式(HMW)。

如本文所述的实施例4中所示例，本发明人提供了适合于在约2℃至8℃下维持以约185mg/mL且呈主要为单体形式持续至少12个月的MASP-2抑制性抗体OMS646的制剂。

组织透性调节剂

在另一个实施方案中，本公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂进一步包含组织渗透性调节剂，其在肠胃外施用(例如皮下注射)后增加MASP-2抑制性抗体的吸收或分散。在一些实施方案中，组织渗透性调节剂是透明质酸酶，其作为组织渗透性调节剂起作用并增加注射的MASP-2抑制性抗体的分散和吸收。特别有用的组织渗透性调节剂是透明质酸酶(例如，重组人透明质酸酶)。透明质酸酶通过临时分解透明质酸屏障以开放进入淋巴管和毛细血管的入口，使注射的药物和流体被快速吸收到全身循环中，来作为组织渗透性调节剂起作用。透明质酸自然重建，且屏障完全恢复，例如在48小时内。在可注射药物制剂中添加透明质酸酶在肠胃外施用特别是皮下施用后增加MASP-2抑制性抗体的生物利用度。它还允许更大的注射部位体积(即，大于1mL)，具有更少的疼痛和不适，并且使注射部位反应的发生率降到最低(例如使注射部位凸起变平)。

在一些实施方案中，本公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646)制剂包含约1O0U/mL至约20,000U/mL的透明质酸酶。透明质酸酶的实际浓度取决于制备本发明的MASP-2抑制性抗体制剂中所用的透明质酸酶的类型。有效量的透明质酸酶可以由本领域技术人员确定。应以足够的量提供使得共同施用或依次施用的MASP-2抑制性抗体的分散和吸收增加是可能的。最小量的透明质酸酶大于100U/mL。更具体地，透明质酸酶的有效量为约150U/mL至约20,000U/mL，其中所述量基于假定100,000U/mg的比活对应于约0.01mg至0.16mg蛋白。在一些实施方案中，药物制剂包含浓度为约1,000至约20,000U/ml，例如约1,000至约16,000U/ml的透明质酸酶。可选地，透明质酸酶的浓度为约1,500至约12,000U/mL，或更具体地约2,000U/mL至约12,000U/mL。本文规定的量对应于最初加入到药物制剂中的透明质酸酶的量。在一些实施方案中，透明质酸酶与MASP-2抑制性抗体的比率(w/w)在1∶1,000至1∶8,000的范围内，或在1∶4,000至1∶6,000的范围内或在约1∶4,000至1∶5000的范围内。

透明质酸酶可以作为本公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂的组分存在，或者其可以作为多部分试剂盒(kit-of-parts)中的单独溶液提供。因此，在一个实施方案中，MASP-2抑制性抗体与透明质酸酶共配制。在另一个实施方案中，MASP-2抑制性抗体和透明质酸酶单独配制并在将要皮下施用之前混合。在仍另一个实施方案中，分别配制和施用MASP-2抑制性抗体和透明质酸酶，例如，在施用包含MASP-2抑制性抗体的制剂之前或之后直接将透明质酸酶作为单独注射施用。在一些情况下，在将包含本公开的MASP-2抑制性抗体的药物制剂注射到相同的注射部位区域之前约5秒至约30分钟皮下施用透明质酸酶。在某些实施方案中，MASP-2抑制性抗体和透明质酸酶溶液的药物制剂包含在药物装置的分开的室中，所述药物装置同时(例如，使用双筒注射器)或依次自动递送。

预填充容器

在本公开的另一方面，本文公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂以足以施用于哺乳动物主体的量包含在预填充的密封容器中。因此，足量的根据本公开配制的药物组合物(其等于期望施用于哺乳动物主体的MASP-2抑制性抗体的量或比其稍多(即不超过25％过量，例如不超过10％过量))包含在预填充的容器中，其有助于分配抗体制剂用于肠胃外施用(即，注射或输注)。在一些实施方案中，预填充容器包含MASP-2抑制性抗体的至少一种药物单位剂型。

例如，可以将期望的一次性使用量的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂包装在预填充的容器中，例如，用塞子封闭的玻璃小瓶或包括可以经其插入皮下针头以抽取制剂的隔膜的其他闭合件，或者可以包装在预填充的注射器或适合于注射(例如皮下注射)或输注的其它预填充容器中。此类容器的实例包括但不限于小瓶、注射器、安瓿、瓶、药筒和小袋。优选地，容器是各自单次使用的预填充注射器，其可以适当地由玻璃或聚合物材料例如环烯烃聚合物或丙烯腈丁二烯苯乙烯(ABS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲醛(POM)、聚苯乙烯(PS)、聚对苯二甲酸丁二酯(PBT)、聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、聚酰胺(PA)、热塑性弹性体(TPE)及其组合形成。此类注射器的桶用弹性体柱塞操作，所述弹性体柱塞可以沿着筒被推动以经由连接到其上的针喷射液体内容物。在本发明的一些实施例中，每个注射器包括固定在其上的针。

在一些实施方案中，本文公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂包含选自以下的在预填充容器中：注射器(例如，单筒或双筒注射器)、笔式注射器、密封小瓶(例如，双室小瓶)、自动注射器、盒和泵装置(例如，体表(on-body)贴片泵、系留泵(tetheredpump)或渗透泵)。对于皮下递送，制剂可以包含在适合于皮下递送的预填充装置内，诸如例如预填充的注射器、自动注射器、注射装置(例如，INJECT-EASE^TM或GENJECT^TM装置)、注射器笔(如GENPEN^TM)或适用于皮下施用的其他装置。

本公开的制剂可以作为预填充容器中的单位剂型制备，其可以特别适合于自施用。例如，每小瓶、药筒或其他预填充的容器(例如，预填充的注射器或一次性笔)的单位剂量可以包含约0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL、1mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL、2.0mL、2.1mL、2.2mL、2.3mL、2.4mL、2.5mL、2.6mL、2.7mL、2.8mL、2.9mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL、5.5mL、6.0mL、6.5mL、7.0mL、7.5mL、8.0mL、8.5mL、9.0mL、9.5mL或约10.0mL或更大体积的含有范围为约100mg/mL-约250mg/mL、约150mg/mL-约200mg/mL、约175mg/mL-约200mg/mL、诸如约185mg/mL的各种浓度的MASP-2抑制性抗体(例如OMS646)的高浓度制剂，导致每容器范围约20mg至约1000mg或更高的总单位剂量的OMS646。

在一些实施方案中，本公开的制剂以约350mg-400mg、诸如约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg或约400mg的单位剂量作为预填充容器诸如小瓶或注射器中的单位剂量进行制备。

在一些实施方案中，本公开的制剂以包含约20mg至750mg的MASP-2抑制性抗体(例如OMS646)的0.1mL-3.0mL、诸如约0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL、1mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL、2.0mL、2.1mL、2.2mL、2.3mL、2.4mL、2.5mL、2.6mL、2.7mL、2.8mL、2.9mL或约3.0mL的体积作为预填充注射器中的剂型进行制备。如本文所述，作为单位剂量制备的稳定制剂可以直接(例如，经皮下注射)施用于主体，或者可选地制备以适合于在静脉内施用前稀释。

本公开的制剂可以通过适合抗体制剂的各种灭菌方法例如无菌过滤进行灭菌。在某些实施方案中，将抗体制剂过滤灭菌，例如用预灭菌的0.2微米过滤器。可将本公开的灭菌制剂施用于主体以预防、治疗或改善与MASP-2依赖性补体活化相关的疾病或病症。

在相关方面，本公开提供了制备制品的方法，其包括用本公开的高浓度MASP-2抑制性抗体制剂填充容器。

在一个实施方案中，本公开提供用于治疗患有MASP-2依赖性疾病或病况或处于发生MASP-2依赖性疾病或病况的风险中的患者的药物组合物，其中所述组合物为无菌、单次使用剂型，其包含约350mg至约400mg(即350mg、360mg、370mg、380mg、390mg或400mg)MASP-2抑制性抗体，其中所述组合物包含约1.8mL至约2.2mL(即1.8mL、1.9mL、2.0mL、2.1mL或2.2mL)的185mg/mL抗体制剂，诸如本文所公开的，其中所述抗体或其片段包含(i)含有SEQID NO：2中所示的氨基酸序列的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂当存储在2℃至8℃下至少六个月是稳定的。在一些实施方案中，MASP-2依赖性疾病或病况选自aHUS、HSCT-TMA、IgAN和狼疮性肾炎(LN)。

包含高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂的试剂盒

本公开的特征还在于包含至少一个含有如本文公开的高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂的容器的治疗试剂盒。

在一些实施方案中，本公开提供了试剂盒，其包含(i)含有任何包含本文所述的MASP-2抑制性抗体的制剂的容器；和(ii)用于将制剂递送至有需要的患者的合适工具。在本文所述的任何试剂盒的一些实施方案中，所述工具适于将制剂皮下递送至患者。

各种类型的容器适合于容纳包含在本发明试剂盒中的MASP-2抑制性抗体的药物制剂。在本发明的试剂盒的某些实施方案中，容器是预填充的注射器(例如，单筒或双筒注射器)或预填充的密封小瓶。

在一些实施方案中，包含含有MASP-2抑制性抗体制剂的容器是选自以下的预填充容器：注射器(例如，单筒或双筒注射器)、笔式注射器、密封小瓶(例如，双室小瓶)、自动注射器、盒和泵装置(例如，体表(on-body)贴片泵、系留泵(tethered pump)或渗透泵)。对于皮下递送，制剂可以包含在适合于皮下递送的预填充装置内，诸如例如预填充的注射器、自动注射器、注射装置(例如，INJECT-EASE^TM和GENJECT^TM装置)、注射器笔(如GENPEN^TM)或适用于皮下施用的其他装置。

除了预填充单剂量的药物制剂的容器之外，本发明的试剂盒还可以包含这种预填充的容器放置其中的外部容器。例如，外部容器可以包括塑料或纸板托盘，在其中形成有凹部，所述凹部容纳预填充的容器并且在使用前的运输和处理过程中将其固定。在一些实施方案中，外部容器适当地是不透明的，并且用于屏蔽预填充的容器免受光线以防止光诱导的药物制剂组分的降解。例如，容纳预填充容器的塑料或纸板托盘可以进一步包装在提供遮光的纸板箱内。本发明的试剂盒还可以包括用于施用和使用根据本发明的MASP-2抑制性抗体制剂的一套说明书，其可以印刷在外部容器上或印刷在包含于外容器内的纸张上。

在一些实施方案中，试剂盒包含含有有效剂量的透明质酸酶的第二容器(例如预填充的注射器)。

试剂盒还可以包含从商业和用户立场所需的其它材料，包括针、注射器、包装说明书等。

示例性制剂

如上所述，本公开的稳定的、高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂包含在含有具有pH 4.0-8.0的含有缓冲剂的水溶液中的浓度为50mg/mL-250mg/mL的MASP-2抑制性抗体。

缓冲系统，例如组氨酸、柠檬酸盐或琥珀酸盐，以约10mM至约50mM、且优选约20mM的浓度适当地包括。在一些优选的实施方案中，制剂还包含浓度为50mM至300mM的具有带电荷侧链的氨基酸。在一些实施方案中，制剂包含浓度为50mM至300mM的具有带正电荷侧链的氨基酸，例如精氨酸。在一些优选的实施方案中，制剂还包含以0.001％(w/v)至0.1％(w/v)，例如约0.05％(w/v)至约0.1％(w/v)的量的非离子表面活性剂，例如聚山梨酯80。在一些实施方案中，制剂还包含以皮下施用后有效增加MASP-2抑制性抗体的分散和/或吸收的量的透明质酸酶。

在一些实施方案中，本公开的稳定的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂包含以下组合物之一，由以下组合物之一组成，或基本上由以下组合物之一组成：

a)100-200mg/mL MASP-2抑制性抗体；10-50mM的pH为约5.0-约7.0的组氨酸缓冲液；100mM-225mM精氨酸；和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

b)100-200mg/mL MASP-2抑制性抗体；10-50mM的pH为约5.0-约7.0的组氨酸缓冲液；100mM-225mM精氨酸，约0.01％-0.08％(w/v)的非离子表面活性剂；和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

c)100-200mg/mL MASP-2抑制性抗体；10-50mM的pH为约5.0-约7.0的柠檬酸盐缓冲液；100mM-225mM精氨酸，和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

d)100-200mg/mL MASP-2抑制性抗体；10-50mM的pH为约5.0-约7.0的柠檬酸盐缓冲液；100mM-225mM精氨酸，约0.01％-0.08％(w/v)的非离子表面活性剂；和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

e)100-200mg/mL MASP-2抑制性抗体；10-50mM的pH为约5.0-约7.0的琥珀酸盐缓冲液；100mM-225mM精氨酸，和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

f)100-200mg/mL MASP-2抑制性抗体；10-50mM的pH为约5.0-约7.0的琥珀酸盐缓冲液；100mM-225mM精氨酸，约0.01％-0.08％(w/v)的非离子表面活性剂；和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

在某些实施方案中，本公开的稳定的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂包含以下组合物之一，由以下组合物之一组成，或基本上由以下组合物之一组成：

g)185+18.5mg/mL MASP-2抑制性抗体；20±2mM的pH为约5.8的柠檬酸盐缓冲液；200±20mM精氨酸，和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

h)185+18.5mg/mL MASP-2抑制性抗体；20±2mM的pH为约5.8的柠檬酸盐缓冲液；200±20mM精氨酸，约0.01％(w/v)聚山梨酯80，和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

i)185+18.5mg/mL MASP-2抑制性抗体；20±2mM的pH为约5.9的组氨酸缓冲液；200±20mM精氨酸，和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

j)185+18.5mg/mL MASP-2抑制性抗体；20±2mM的pH为约5.9的组氨酸缓冲液；200±20mM精氨酸，约0.01％(w/v)聚山梨酯80，和任选100-20,000U/mL的透明质酸酶。

生产高浓度、低粘度MASP-2抑制性抗体制剂的方法

在另一方面，本公开提供用于生产含有100mg/mL或更多的MASP-2抑制性抗体的制剂的方法，所述方法包括：(a)提供包含纯化的OMS646的第一药物制剂，所述第一药物制剂具有第一制剂并且包含不超过50mg/mL的OMS646蛋白；(b)使第一药物制剂过滤，从而产生第二药物制剂，其中第二药物制剂具有作为过滤的结果的第二制剂；和(c)浓缩第二药物制剂以产生包含100mg/mL或更多的OMS646的浓缩抗体溶液。配制的本体溶液通常设定为固定的蛋白浓度，使得期望的填充体积可以保持恒定。液体药物产品制造过程通常包括将MASP-2抑制性抗体与缓冲系统、赋形剂和任选表面活性剂混合，然后无菌过滤并填充在小瓶(或其他容器，例如注射器)中并密封(例如，封塞、封盖，等等)。

表1：实施例制剂1

加入到注射用水中的组分(USP)	浓度
		OMS646抗体	185mg/mL
柠檬酸钠	20mM
		L-精氨酸HCL	200mM
聚山梨酯80	0.01％

表2：实施例制剂2

加入到注射用水中的组分(USP)	浓度
		OMS646抗体	185mg/mL
L-组氨酸	20mM
		L-精氨酸HCL	200mM
聚山梨酯80	0.01％

治疗方法

在另一方面，本公开提供了治疗患有或处于发生MASP-2依赖性补体相关疾病或病症的风险中的患者的方法，其包括施用如本文公开的含有MASP-2抑制性抗体(例如，OMS646)的高浓度低粘度制剂。

如美国专利号7,919,094、美国专利号8,840,893、美国专利号8,652,477、美国专利号8,951,522、美国专利号9,011,860、美国专利号9,644,035、美国专利申请公开号US2013/0344073、US2013/0266560、US 2015/0166675、US2017/0137537、US2017/0189525和共同在审的美国专利申请系列号15/476,154、15/347,434、15/470,647、62/315,857、62/275,025和62/527,926(其各自归属于Omeros Corporation，本申请的受让人，其由此各自通过引用并入)中所述，MASP-2依赖性补体活化已涉及有助于大量急性和慢性疾病状态的发病机理。例如，如美国专利号8,951,522所述，补体系统作为先天免疫系统的一部分，其主要功能是保护宿主免受感染因子，然而，补体系统的不适当或过度活化可导致严重的疾病，例如血栓性微血管病(TMA，包括aHUS、TTP和HUS)，在所述血栓性微血管病中内皮损伤以及微血管中的纤维蛋白和血小板富集血栓导致器官损伤。凝集素途径在内皮细胞应激或损伤环境中的活化补体中起着主导作用，并且阻止MASP-2和凝集素途径的活化停止导致膜攻击复合物形成、血小板活化和白细胞募集的酶反应顺序。如美国专利号8,652,477所述，除了起始凝集素途径之外，MASP-2还可以活化凝血系统并且能够将凝血酶原切割成凝血酶。

如实施例1和美国专利号9,011,860中所述，OMS646是凝集素依赖性补体活化的有效抑制剂。该抗体对其他补体途径丝氨酸蛋白酶C1r、C1s、MASP-1和MASP-3没有显示出显著结合(至少低5000倍的亲和力)，并且不抑制经典途径依赖性补体活化。

因此，在一些实施方案中，该方法包括向患有或处于发生MASP-2依赖性补体相关疾病或病症风险中的患者施用一定量的任何本文公开的高浓度、低粘度的MASP-2抑制性抗体制剂，所述量足以抑制所述哺乳动物主体中的MASP-2依赖性补体活化，从而治疗疾病或病症。在一些实施方案中，可以使用本文所述的任何试剂盒或预填充的容器(例如预填充的注射器或小瓶)来进行该方法。在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括在将所述制剂施用于患者之前确定患者患有凝集素补体相关的疾病或病症。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在肠胃外施用后施用增加MASP-2抑制性抗体的吸收或分散的组织渗透性调节剂(例如透明质酸酶)。组织渗透性调节剂可以与MASP-2抑制性抗体制剂共同施用或依次施用(例如，在相同注射部位处或附近在施用MASP-2抑制性抗体制剂的5分钟内)。

在一些实施方案中，该方法包括从含有包含MASP-2抑制性抗体(例如OMS646)的高浓度低粘度制剂的第一预填充注射器向有需要的主体注射以抑制MASP-2依赖性补体活化。在一些实施方案中，所述方法还包括从含有组织渗透性调节剂的第二预填充注射器向主体注射，其中所述注射处于或接近注射MASP-2抑制性抗体的部位。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是血栓性微血管病(TMA)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、难治性TTP、Upshaw-Schulman综合征(USS)、溶血性尿毒综合征(HUS)、非典型溶血综合征(aHUS)、非因子H依赖性非典型溶血综合征、感染继发的aHUS、血浆治疗抗性aHUS、癌症继发的TMA、化疗继发的TMA、移植继发的TMA或与造血干细胞移植相关的TMA。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是肾脏病况，包括但不限于系膜增生性肾小球肾炎、膜性肾小球性肾炎、膜增生性肾小球肾炎(肾小球膜毛细血管性肾小球性肾炎)、急性感染后肾小球性肾炎(链球菌感染后肾小球性肾炎)、C3肾小球病、冷球蛋白血症肾小球性肾炎(cryoglobulinemic glomerulonephritis)、寡免疫坏死性新月体性肾小球性肾炎(pauci-immune necrotizing crescentic glomerulonephritis)、狼疮性肾炎、过敏性紫癜性肾炎和IgA肾病。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是主体中的肾纤维化(例如、肾小管间质性纤维化)和/或蛋白尿，所述主体患有以下疾病或处于发生以下疾病的风险中：慢性肾脏疾病、慢性肾功能衰竭、肾小球疾病(例如，局灶性节段性肾小球硬化)、免疫复合物病(例如，IgA肾病、膜性肾病)、狼疮性肾炎、肾病综合征、糖尿病性肾病、肾小管间质性损伤和肾小球性肾炎(例如C3肾小球病)，或与蛋白尿有关的疾病或病症，包括但不限于肾病综合征、先兆子痫、子痫、肾脏的毒性损伤、淀粉样变性、胶原血管病(例如系统性红斑狼疮)、脱水、肾小球疾病(例如膜性肾小球性肾炎、局灶性节段性肾小球性肾炎、C3肾小球病、微小病变肾病、脂性肾病)、剧烈运动、压力、良性原发性(姿势性)蛋白尿(benignorthostatis(postural)proteinuria)、局灶性节段性肾小球硬化、IgA肾病(即Berger氏病)、IgM肾病、膜性增生性肾小球肾炎、膜性肾病、微小病变肾病、结节病、Alport综合征、糖尿病(糖尿病性肾病)、药物诱导毒性(如NSAIDS、尼古丁、青霉胺、碳酸锂、金等其他重金属、ACE抑制剂、抗生素(如阿霉素)或阿片类(如海洛因)或其他肾毒素)；法布里病、感染(如HIV、梅毒、甲型肝炎、乙型肝炎或丙型肝炎、链球菌后感染(poststreptococcalinfection)、尿路血吸虫病)；氨基酸尿、Fanconi综合征、高血压性肾硬化、间质性肾炎、镰状细胞病、血红蛋白尿、多发性骨髓瘤、肌红蛋白尿、器官排斥(例如肾移植排斥)、埃博拉出血热、指(趾)甲-髌骨综合征、家族性地中海热、HELLP综合征、系统性红斑狼疮、韦格纳肉芽肿病、类风湿性关节炎、1型糖原贮积病、古德帕斯彻综合征、

紫癜、已扩散到肾脏的尿路感染、

综合征和感染后肾小球肾炎。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是由组织或实体器官移植引起的炎症反应，包括但不限于完整器官(例如肾脏、心脏、肝脏、胰、肺、角膜等)或组织移植物(例如，瓣膜、肌腱、骨髓等)的同种异体移植或异种移植。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关病症是缺血再灌注损伤(I/R)，包括但不限于心肌I/R、胃肠I/R、肾I/R和主动脉瘤修复术后I/R、与心肺转流术相关的I/R、脑I/R、中风、器官移植或重新连接切断或创伤的肢体或指(趾)；对移植物和/或移植体的血管重建，以及休克和/或外科手术后的血液动力学复苏。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是与非肥胖性糖尿病(1型糖尿病或胰岛素依赖性糖尿病)相关的并发症和/或与1型或2型(成人发病)糖尿病相关的并发症，包括但不限于糖尿病性血管病、糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病变或糖尿病性黄斑水肿。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是心血管疾病或病症，包括但不限于过敏性紫癜性肾炎、系统性红斑狼疮相关性血管炎、与类风湿性关节炎相关的血管炎(也称为恶性类风湿性关节炎)、免疫复合物血管炎和高安氏症；扩张性心肌病；糖尿病性血管病；川崎病(动脉炎)；静脉气栓(VGE)；和在支架置入、冠状动脉内旋磨术和/或经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄的抑制。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关的疾病或病症是炎性胃肠道疾病，包括但不限于胰腺炎、憩室炎和肠病，包括克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征和炎症性肠病(IBD)。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是肺部病症，包括但不限于急性呼吸窘迫综合征、输血相关急性肺损伤、缺血/再灌注急性肺损伤、慢性阻塞性肺病、哮喘、韦格纳肉芽肿病、抗肾小球基底膜疾病(古德帕斯彻病)、胎粪吸入综合征、吸入性肺炎、闭塞性细支气管综合征、特发性肺纤维化、烧伤继发的急性肺损伤、非心源性肺水肿、输血相关性呼吸抑制和肺气肿。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是体外暴露引发的炎症反应，并且该方法包括治疗经历体外循环程序的主体，包括但不限于血液透析、血浆取出法、白细胞分离术、体外膜氧合(ECMO)、肝素诱导的体外膜氧合LDL沉淀(HELP)和心肺转流术(CPB)。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是炎性或非炎性关节炎和其他肌肉骨骼疾病，包括但不限于骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风、神经性关节病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎或其他脊柱关节病和结晶性关节病、肌营养不良症和系统性红斑狼疮(SLE)。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是皮肤病症，包括但不限于牛皮癣、自身免疫性大疱性皮肤病、嗜酸性海绵状血症、大疱性类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症、异位性皮肤炎、妊娠疱疹和其他皮肤疾病、以及用于治疗热和化学灼伤包括由此引起的毛细血管渗漏。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是周围神经系统(PNS)和/或中枢神经系统(CNS)病症或损伤，包括但不限于多发性硬化(MS)、重症肌无力(MG)、亨廷顿病(HD)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、吉兰-巴雷综合征、卒中后再灌注、退行性椎间盘、脑创伤、帕金森病(PD)、阿尔茨海默病(AD)、米费综合征、脑创伤和/或出血、创伤性脑损伤、脱髓鞘和脑膜炎。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是败血症或由败血症引起的病症，包括但不限于严重败血症、败血性休克、败血症引起的急性呼吸窘迫综合征、溶血性贫血、全身炎症反应综合征或出血性休克。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是泌尿生殖障碍，包括但不限于：疼痛性膀胱疾病、知觉性膀胱疾病、慢性非细菌性膀胱炎和间质性膀胱炎、男性和女性不育症、胎盘功能障碍和流产和先兆子痫。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是在用化学治疗剂和/或放射疗法治疗的主体中的炎症反应，包括但不限于用于治疗癌症。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是血管发生依赖性癌症，包括但不限于实体瘤、血源性肿瘤、高风险类癌肿瘤和肿瘤转移。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是血管发生依赖性良性肿瘤，包括但不限于血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼瘤、类癌肿瘤和化脓性肉芽肿。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是内分泌障碍，包括但不限于桥本氏甲状腺炎、压力、焦虑和其他涉及调节释放催乳素、生长或胰岛素样生长因子和来自垂体的促肾上腺皮质激素的潜在激素失调。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是眼科疾病或病症，包括但不限于年龄相关性黄斑变性、青光眼和眼内炎。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是眼血管生成疾病或病症，包括但不限于年龄相关性黄斑变性、葡萄膜炎、眼黑素瘤、角膜新生血管形成、原发性翼状胬肉、HSV基质性角膜炎、HSV-1诱导的角膜淋巴管生成、增殖性糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、角膜移植物排斥反应、新生血管性青光眼、继发于增生性糖尿病视网膜病变的玻璃体出血、视神经脊髓炎和虹膜发红。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是弥散性血管内凝血(DIC)或其他补体介导的凝血障碍，包括继发于败血症的DIC、严重创伤、包括神经损伤(例如急性头部损伤，见Kumura等人，Acta Neurochirurgica 85：23-28(1987)、感染(细菌、病毒、真菌、寄生虫)、癌症、产科并发症、肝病、严重的毒性反应(例如蛇咬、昆虫咬、输血反应)、休克、中暑、移植排斥、血管动脉瘤、肝功能衰竭、通过化疗或放射治疗的癌症治疗、烧伤或意外辐射暴露。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症选自急性放射综合征、致密物沉积病、Degos病、灾难性抗磷脂综合征(CAPS)、白塞病、冷球蛋白血症；阵发性夜间血红蛋白尿(“PNH”)和冷凝集素病。

在一些实施方案中，MASP-2依赖性补体相关疾病或病症选自aHUS、HSCT-TMA、IgAN和狼疮性肾炎(LN)。

非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)

非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)是称为“血栓性微血管病”的一组病况。在HUS(aHUS)的非典型形式中，该疾病与补体调节缺陷相关，并且可以是偶发性的或家族性的。aHUS的家族性病例与编码补体活化或补体调节蛋白的基因中的突变相关，包括补体因子H，因子I、因子B、膜辅因子CD46以及补体因子H相关蛋白1(CFHR1)和补体因子H相关蛋白3(CFHR3)。(Zipfel，P.F.，等人，PloS Genetics 3(3)：e41(2007))。与aHUS相关的这种多样性遗传突变的统一特征是增强细胞或组织表面上的补体活化的倾向。在发生指示aHUS的至少一种或多种症状(例如，存在贫血、血小板减少症和/或肾功能不全)和/或在获自主体的活检样品中存在血栓性微血管病变时，所述主体处于发生aHUS的风险中。确定主体是否处于发生aHUS的风险中包括确定主体是否具有发生aHUS的遗传易感性，其可以通过以下来进行：评估遗传信息(例如，从含有主体的基因型的数据库)或对主体进行至少一种遗传筛选测试以确定与aHUS相关的遗传标记物的存在或不存在(即，确定在编码补体因子H(CFH)、因子I、因子B(CFB)、膜辅因子CD46、C3、补体因子H相关蛋白1(CFHR1)或THBD(编码抗凝血蛋白血栓调节蛋白)或补体因子H相关蛋白3(CFHR3)或补体因子H相关蛋白4(CFHR4)的基因中与aHUS相关的遗传突变的存在或不存在)，其经基因组测序或基因特异性分析(例如，PCR分析)和/或确定主体是否具有aHUS家族史。用于与aHUS相关的遗传突变存在或不存在的遗传筛选的方法是充分建立的，例如，参见Noris M等人“Atypical Hemolytic-UremicSyndrome，”2007年11月16日[2011年3月10日更新]。In：Pagon RA，Bird TD，Dolan CR，等人，编辑。GeneReviews，Seattle(WA)：University of Washington，Seattle.

如US2015/0166675中所述，在血栓性微血管病(TMA)的人类离体实验模型中，OMS646抑制暴露于来自急性期和缓解期的aHUS患者的血清样品的微血管内皮细胞上的补体活化和血栓形成。如US2017/0137537中在开放标签2期临床试验(静脉内施用2-4mg/kgMASP-2抑制性抗体OMS646，每周一次，连续4周)中获得的数据进一步描述的，用OMS646治疗在aHUS患者中显示出效力。中剂量和高剂量组中所有三位aHUS患者血小板计数(中剂量组中两位和高剂量组中一位)均恢复正常，且自基线的统计学上显著的平均值增加为约68,000血小板/mL(p值＝0.0055)。

造血干细胞移植物相关的TMA(HSCT-TMA)

造血干细胞移植物相关的TMA(HSCT-TMA)是由内皮损伤引发的危及生命的并发症。肾脏是通常受影响最大的器官，尽管HSCT-TMA可能是也涉及肺、肠、心脏和脑多系统疾病。即使轻度TMA的发生与长期肾损害有关。后同种异体HSCT相关TMA的发生基于不同的诊断标准和调理和移植物抗宿主病预防方案而在频率上有所不同，其中钙调神经磷酸酶抑制剂是相关的最常见的药物(Ho VT等人，Biol Blood Marrow Transplant，11(8)：571-5，2005)。

如US2017/0137537所述，在2期临床试验(静脉内施用4mg/kg MASP-2抑制性抗体OMS646，每周一次，连续4-8周)中，使用OMS646治疗改善患有HSCT-TMA的患者中的TMA标志物，包括LDH和触珠蛋白水平的统计学显着改善。用OMS646治疗的HSCT-TMA患者代表了最难治疗的一些，从而证明了OMS646在HSCT-TMA患者中具有治疗作用的临床证据。

免疫球蛋白A型肾病(IgAN)

免疫球蛋白A型肾病(IgAN)是导致肾内炎症和肾损伤的自免疫性肾病。IgAN是全球最常见的原发性肾小球疾病。具有每100,000大约2.5的年发病率，估计在美国1400人中有一人将发生IgAN。多至40％的IgAN患者将发生晚期肾病(ESRD)。患者通常呈现具有轻度至中度蛋白尿和不同水平的肾功能不全的镜下血尿(Wyatt R.J.，等人，N Engl J Med 368(25)：2402-14，2013)。临床标志物诸如肾功能受损、持续性高血压和重度蛋白尿(每天超过1g)与不良预后相关(Goto M等人，Nephrol Dial Transplant 24(10)：3068-74，2009；Berthoux F.等人，J Am Soc Nephrol 22(4)：752-61，2011)。蛋白尿是多个大型观察性研究和前瞻性试验中独立于其他风险因素的最强预后因素(Coppo R.等人，J Nephrol 18(5)：503-12，2005；Reich H.N.，等人，J Am Soc Nephrol 18(12)：3177-83，2007)。估计15-20％的患者如果不治疗的话在发病10年内达到ESRD(D’Amico G.，Am J Kidney Dis 36(2)：227-37，2000)。IgAN的诊断标志是IgA沉积物单独或与IgG、IgM或两者在肾小球膜中的优势。

如US2017/0189525中所述，在2期开放标记的肾脏试验(静脉内施用4mg/kg MASP-2抑制性抗体OMS646，每周一次，连续12周)中，用OMS646治疗的IgA肾病患者证实了在整个试验中尿白蛋白比肌酸酐比率(uACR)的临床上有意义的和统计学上显着的降低和24小时尿蛋白水平自基线到治疗结束时的降低。

狼疮性肾炎(LN)

系统性红斑狼疮(SLE)的主要并发症是肾炎，也称为狼疮性肾炎，其被分类为肾小球性肾炎的继发性形式。高达60％的患有SLE的成人在疾病过程中的晚期有某种形式的肾脏受累(Koda-Kimble等人，Koda-Kimble and Young′s Applied Therapeutics：theclinical use of drugs，第10版，Lippincott Williams&Wilkins：第792-9页，2012)，且患病率为在美国每100,000人中20-70人。狼疮性肾炎经常出现在具有其他活动性SLE症状的患者中，所述症状包括疲劳、发烧、皮疹、关节炎、浆膜炎或中枢神经系统疾病(Pisetsky DS等人，Med Clin North Am 81(1)：113-28，1997)。一些患者具有无症状性狼疮性肾炎；然而，在定期随访期间，实验室异常诸如升高的血清肌酸酐水平、低白蛋白水平或尿蛋白或沉积物表明活动性狼疮性肾炎。

如美国专利申请号15/470,647中所述，在2期开放标记的肾脏试验中(静脉内施用4mg/kg MASP-2抑制性抗体OMS646，每周一次，连续12周)，5位用抗MASP-2抗体治疗的患有狼疮性肾炎(LN)的患者中的4位显示从基线到治疗结束的24小时尿蛋白水平的临床上有意义的降低。

施用

本文所述的高浓度低粘度MASP-2抑制性抗体制剂可以使用本领域已知的方法施用于需要治疗的主体，例如通过单次或以合适的方式在一段时间内多次注射或输注，例如，通过皮下、静脉内、腹膜内、肌内注射或输注。如本文所述，肠胃外制剂可以以剂量单位形式制备，以便于施用和剂量的均匀性。如本文所用，术语“单位剂型”是指适合作为待治疗主体的单位剂量的物理上不连续的单位；每个单位含有预定量的活性化合物，其经计算以产生与选择的药物水溶液相关的所需治疗效果。

为了预防或治疗疾病，MASP-2抑制性抗体的合适剂量将取决于待治疗的疾病的类型、疾病的严重性和病程。抗体一次或经一系列治疗而合适地施用于患者。根据疾病的类型和严重程度，MASP-2抑制性抗体可以以固定剂量或以毫克/千克(mg/kg)剂量施用。包含在本文所述制剂中的MASP-2抑制性抗体的示例性剂量包括例如约0.05mg/kg至约20mg/kg，例如约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/mg/kg、14mg/mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg，其可以每天、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。

MASP-2抑制性抗体例如本文所述的制剂的示例性固定剂量包括例如约10mg至约1000mg、例如约50mg至约750mg、例如约100mg至约500mg、例如约200mg至约400mg、例如约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、或约400mg，其可以是每天、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。

关于制剂的递送体积，用于治疗应用的制剂中抗体的浓度是基于以患者耐受的且对于患者有治疗价值的剂量和体积提供抗体来确定。对于待通过注射施用的治疗性抗体制剂，抗体浓度将取决于注射体积(通常为0.5mL至3mL)。基于抗体的疗法可能需要每天、每周、每月或每几个月的若干mg/kg的给药。因此，如果以1mg/kg至5mg/kg患者体重(例如1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg或5mg/kg)提供MASP-2抑制性抗体，且平均患者体重为75公斤，则75mg-375mg的抗体需要以0.5mL-3.0mL的注射体积递送。或者，该制剂以适合于每次治疗在多于一个注射部位递送的浓度提供。

在其中制剂中OMS646抗体的浓度为约185mg/mL的优选实施方案中，对于剂量为1mg/kg至5mg/kg的患者体重(假设为75kg)，制剂将以约0.40mL至约2.0mL的注射体积皮下递送。

如本文所述，本公开的制剂适合于静脉内(i.v.)给药和皮下(s.c)施用。

根据疾病的类型和严重程度，MASP-2抑制性抗体可以以固定剂量或以毫克/千克(mg/kg)剂量静脉内施用。包含在本文所述制剂中的MASP-2抑制性抗体的示例性剂量可以在施用之前通过用药学上可接受的稀释剂稀释适量的本文所述的高浓度制剂来静脉内递送，使得将MASP-2抑制性抗体以剂量例如约0.05mg/kg至约20mg/kg，例如约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/mg/kg、15mg/kg、16mg/mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg施用于人主体，其可以每天、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。

MASP-2抑制性抗体也可以以固定剂量静脉内递送，其在施用之前用药学上可接受的稀释剂稀释适量的本文所述的高浓度制剂，使得MASP-2抑制性抗体以剂量约10mg至约1000mg，例如约50mg至约750mg、例如约100mg至约500mg、例如约200mg至约400mg、例如约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、诸如约300mgv约400mg、诸如约310mg、约320mg、约325mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约375mg、约380mg、约390mg或约400mg施用于人主体，其可以每天、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。

在一些实施方案中，包含MASP-2抑制性抗体的制剂在全身(例如静脉内)递送之前被稀释入药学上可接受的稀释剂中。可以使用的示例性稀释剂包括注射用水、5％右旋糖、0.9％盐水、林格氏溶液和适用于静脉内递送的其它药学上可接受的稀释剂。尽管不以任何方式旨在限制，待静脉内施用以治疗患有MASP-2依赖性补体疾病或病症的主体的MASP-2抑制性抗体的示例性剂量包括例如约0.05mg/kg至约20mg/kg，例如约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg，其可以每天、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。待静脉内递送以治疗患有MASP-2依赖性补体疾病或病症的主体的MASP-2抑制性抗体的示例性固定剂量包括例如约10mg至约1000mg、例如约50mg至约750mg、例如约100mg至约500mg、例如约200mg至约400mg、例如约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、或约400mg，其可以是每天、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。

在一些实施方案中，将制剂稀释入药学上可接受的稀释剂并以初始静脉内负荷剂量(例如约300mg至约750mg、例如约400mg至约750mg、例如约300mg至约500mg、例如约300mg至约400mg、例如约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg或约400mg)施用至有需要的主体，随后进行一次或多次皮下注射制剂，剂量为1mg/kg至5mg/kg体重，或固定剂量为约100mg至约400mg，例如约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg或约400mg。例如，初始静脉内负荷剂量在特定情况下可以是优选的给药途径，例如当患者在医院或诊所中并且患有需要初始负荷剂量随后用皮下注射制剂的维持剂量的急性病况(例如，aHUS)时。

实施例

本发明在以下实施例中进一步说明，所述实施例不应该解释为进一步限定。本文的所有文献引用明确地通过引用并入。

实施例1

本实施例说明靶向人MASP-2的单克隆抗体OMS646以高亲和力结合人MASP-2并且阻断凝集素途径补体活性。

背景

如WO2012/151481(其由此通过引用并入本文)中所述，产生称为“OMS646”的靶向人MASP-2的完全人单克隆抗体(如SEQ ID NO：1所示)。OMS646单克隆抗体包含如SEQ IDNO：2中所示的重链可变区(VH)和如SEQ ID NO：3中所示的轻链可变区(VL)。OMS646包含与人IgG4重链和λ轻链恒定区融合的人源可变区，并且分泌为由两条相同的重链(具有如4中所示的氨基酸序列)和两条相同的λ轻链(具有如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列)组成的二硫键连接的糖基化四聚体。重链(SEQ ID NO：4)的295位的天冬酰胺残基(N)被糖基化，并以粗体和下划线文本表示。

重链可变区

下文呈现的是OMS646的重链可变区(VH)序列。将Kabat CDRs(31-35(H1)、50-65(H2)和95-107(H3))粗体显示；并将Chothia CDRs(26-32(H1)、52-56(H2)和95-101(H3))下划线显示。

OMS646重链可变区(VH)(SEQ ID NO：2)

轻链可变区

下文呈现的是OMS646的轻链可变区(VL)序列。将Kabat CDRs(24-34(L1)；50-56(L2)和89-97(L3)下划线显示。无论由Kabat或Chothia系统编号，这些区域是相同的。

OMS646轻链可变区(VL)(SEQ ID NO：3)

OMS646重链IgG4突变的重链全长多肽(445 aa)(SEQ ID NO：4)

OMS646轻链全长多肽(212 aa)(SEQ ID NO：5)

如WO2012/151481中所述，OMS646结合MASP-2并且选择性抑制凝集素途径，并且不实质上抑制经典途径(即，抑制凝集素途径而保持经典补体途径不受影响)，并且还展示以下特征中的至少一个或多个：所述抗体以10nM或更低的K_D结合人MASP-2，所述抗体结合MASP-2的CCP1结构域中的表位，所述抗体在体外测定中以10nM或更低的IC₅₀抑制1％人血清中的C3b沉积，所述抗体以30nM或更低的IC₅₀抑制90％人血清中的C3b沉积，其中所述抗体是选自Fv、Fab、Fab′、F(ab)₂和F(ab′)₂的抗体片段，其中所述抗体是单链分子，其中所述抗体是IgG2分子，其中所述抗体是IgG1分子，其中所述抗体是IgG4分子，其中所述IgG4分子包含S228P突变。

如如O2012/151481中所述，当相比于C1s、C1r、MASP-1或MASP-3时，测定OMS646以＞5000倍选择性显著结合人MASP-2(SEQ ID NO：1)。如该实施例中所显示，OMS646以高亲和力特异性结合人MASP-2并且具有阻断凝集素途径补体活性的能力。

如上所示，OMS646包含(a)重链可变区和(b)轻链可变区，所述重链可变区包含：(i)含有来自SEQ ID NO：2的31-35的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有来自SEQ ID NO：2的50-65的氨基酸序列的CDR-H2，和iii)含有来自SEQ ID NO：2的95-107的氨基酸序列的CDR-H3；所述轻链可变区包含：i)含有来自SEQ ID NO：3的24-34的氨基酸序列的CDR-L1，ii)含有来自SEQ ID NO：3的50-56的氨基酸序列的CDR-L2，和iii)含有来自SEQ ID NO：3的89-97的氨基酸序列的CDR-L3。

如WO2012/151481中进一步描述的，具有与SEQ ID NO：2具有至少95％同一性的重链可变区和与SEQ ID NO：3具有至少95％同一性的轻链可变区的OMS646的变体证明具有类似于OMS646的功能活性。WO2012/151481中所述的OMS646变体包含a)重链可变区，所述重链可变区包含：SEQ ID NO：2或其包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同一性的氨基酸序列的变体，其中残基31是R，残基32是G，残基33是K，残基34是M，残基35为G，残基36为V，残基37为S，残基50为L，残基51为A，残基52为H，残基53为I，残基54为F，残基55为S，残基56为S，残基57为D，残基58为E，残基59为K，残基60为S，残基61为Y，残基62为R，残基63为T，残基64为S，残基65为L，残基66为K，残基67为S，残基95为Y，残基96为Y，残基97为C，残基98为A，残基99是R，残基100是I，残基101是R，残基102是R或A，残基103是G，残基104是G，残基105是I，残基106是D和残基107是Y；和b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：3或其包含与SEQID NO：3具有至少95％同一性的氨基酸序列的变体，其中残基23为S，残基24为G，残基25为E或D，残基26为K，残基27为L，残基28为G，残基29为D，残基30为K，残基31为Y或F，残基32为A，残基33为Y，残基49为Q，残基50为D，残基51为K或N，残基52为Q或K，残基53为R，残基54为P，残基55为S，残基56为G，残基88为Q，残基89为A，残基90为W，残基91为D，残基92为S，残基93为S，残基94为T，残基95为A，残基96为V和残基97为F。

1.OMS646特异性阻断末端补体组分的凝集素依赖性活化

方法：

使用凝集素途径、经典途径和替代途径的途径特异性条件，分析OMS646对膜攻击复合物(MAC)沉积的影响。为此目的，按照制造商的说明书使用Wieslab Comp300补充筛选试剂盒(Wieslab，Lund，Sweden)。

结果：

图1A图示说明了在存在不同量的人MASP-2抑制性抗体(OMS646)的情况下凝集素途径依赖性MAC沉积的量。图1B图示说明了在存在人MASP-2抑制性抗体(OMS646)的情况下经典途径依赖性MAC沉积的量。图1C图示说明了在存在不同量的人MASP-2抑制性抗体(OMS646)的情况下替代途径依赖性MAC沉积的量。如图1A所示，OMS646以约1nM的IC₅₀值阻断凝集素途径介导的MAC沉积的活化。然而，OMS646对从经典途径介导的活化(图1B)或从替代途径介导的活化(图1C)产生的MAC沉积没有影响。

实施例2

OMS646预配制研究

背景/原理：

通过考虑以下几个因素来确定降低粘度的蛋白制剂的组成，包括但不限于：蛋白的性质、蛋白的浓度、所需的pH范围、蛋白制剂将储存的温度、蛋白制剂将存储的时间段以及该制剂如何施用于患者。对于通过注射施用的降低粘度的制剂，蛋白浓度取决于注射体积(通常为1.0mL至2.25mL)。如果蛋白要以2至4mg/kg患者体重提供，并且平均患者体重为75kg，那么150mg-300mg的蛋白将需要在1.0mL至1.62mL注射体积中递送。粘度理想地保持在约25cP以下，以确保实际可注射的皮下治疗产品。在一些实施方案中，将粘度保持在约20cP以下以允许用注射装置递送治疗产品，并且还允许各种类型的生物处理，例如切向流过滤。

这些研究的主要目的是鉴定将导致OMS646抗体在液体制剂中的最佳化学、物理和结构稳定性的制剂组分，从而得到粘度小于25cP(如小于20cP)的稳定制剂，且具有适合于皮下注射入人主体的高浓度OMS646(100mg/mL或更大)。

分析方法：

为了测试各种缓冲液和赋形剂组合，将所选制剂溶液中的OMS646抗体的纯化制剂(102mg/mL于20mM乙酸钠、50mg/mL山梨醇，pH5.0)稀释至～1mg/mL，并将4mL体积放置在用适当的缓冲液预冲洗的浓缩器中。将每个单元以3200xg离心至～1mL。将这个过程重复总计三轮缓冲液交换。

使用Eisai机械观察灯，型号MIH-DX针对水使用白色和黑色背景评估制剂外观。测试每种制剂样品的颜色、透明度(乳光)和颗粒物质的存在。

使用1.49mL/mg*cm的消光系数测定OMS646制剂的蛋白含量。使用一次性UVette和0.2cm的路径长度进行280nm处的吸光度的测量，并且对320nm处的吸光度进行校正。通过用1×Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)稀释～2mg/mL的终浓度一式两份制备样品。对于高浓度样品，首先在制剂缓冲液中以1：1稀释纯净溶液，然后在1xDPBS中稀释至～2mg/mL。对每个样品的重复测量值进行平均，并计算百分比相对标准偏差(RSD)。对于显示＞5％RSD的任何重复样品，制备并测量额外的稀释组。

蛋白浓度计算如下：

校正的A280＝A280-A320

蛋白浓度(mg/mL)＝(校正的A280*稀释因子)/1.49mL/mg*cm

为了评估样品浊度/光散射，在320nm处使用1cm路径长度在一次性UVette中测量100μL未稀释的样品。对于每个样品，将分光光度计用合适的缓冲液交换溶液在不存在蛋白的情况下设定空白。测量后，回收样品并用于pH分析。为了对于样品浓度将浊度测量值标准化，将A320除以以mg/mL计的浓度并报告得到的以mAU*mL/mg计的值。

使用具有自动温度补偿电极的校准的SevenMulti Meter(Mettler Toledo)在室温下进行所有制剂和溶液的pH测量。

通过差示扫描量热法(DSC)监测OMS646制剂的热稳定性。使用MicroCal毛细管DSC收集mAb的熔解温度(T_m)数据。蛋白样品在适当的缓冲液交换溶液中稀释至～2mg/ml的终浓度。通过DSC对样品的评价通过以1℃/分钟或2℃/分钟从20-110℃扫描来进行。预扫描恒温器设置为10分钟，扫描后恒温器设置为0分钟，且循环后恒温器设定为25℃。对于T_m数据分析，从缓冲液-样品扫描中减去缓冲液-缓冲液扫描，然后使用150kDa的分子量估计值将热谱图对蛋白浓度(摩尔)归一化。产生渐进基线并将其从数据中减去以便于Tm测定。熔解温度使用相关的

科学软件的采样峰函数确定。

动态光散射(DLS)测量样品中来自颗粒的散射光强度的时间依赖性波动，其中斯托克斯爱因斯坦方程用于计算溶液中颗粒的流体动力学半径。使用DynaPro^TMPlate ReaderII仪器(Wyatt)，用一式两份未稀释的样品(30-40μL)进行OMS646制剂的DLS实验。在25℃下进行了总计10次单次扫描，采集时间为5秒。粘度设定为磷酸缓冲盐溶液的粘度，1.019cP。比较所得强度分布图，以评估各种制剂组分对通过强度的平均粒度(总体直径)、全局尺寸分布宽度参数(总百分比多分散性或％Pd)、OMS646单体的平均峰直径(峰2直径)和该峰宽度参数(峰2％Pd)的影响。百分比多分散性(总体或峰2)是反映在强度分布图中检测到的异质性的宽度参数，其中％Pd＜20％表示近单分散溶液和/或种类构象。

使用AVIA等温化学变性系统(Model 2304)评估针对化学变性的稳定性，该系统在环境条件下以自动方式测试化学稳定性，其通过经将恒定体积的配制的蛋白与制剂缓冲液和含有尿素的制剂缓冲液混合而产生变性剂梯度。简言之，将配制的蛋白在制剂缓冲液中稀释至0.33mg/mL。对于给定制剂，还制备含有10M尿素的第二制剂缓冲液。由于溶解性问题，制备9M尿素溶液用于含蔗糖和含山梨醇的制剂。在均一孵育时间(～30分钟)后，测量每个数据点的固有蛋白荧光(即色氨酸荧光)，其中蛋白的化学解折叠导致掩藏的色氨酸暴露于溶剂中，伴随着荧光信号中的相关红移。对于每种制剂，获得总共24个尿素浓度(10M尿素原液0-9.0M，和9M尿素原液0-8.1M)的数据，并且将Abs350/Abs330的比率用于背景荧光改变的基线扣除，并使用2态或3态模型来进行对解折叠的转变数据的非线性最小二乘拟合。

使用滚球粘度计或电流计测定制剂粘度。所有粘度测量在25℃下进行，且剪切速率范围为0.5s^-1-1000s^-1。使用Anton Paar AMVn粘度计进行滚球测量。对于滚球粘度测量，在将毛细管倾斜到预定角度(80度)后测量金球在填充有样品的毛细管中通过距离的所花时间。将毛细管共倾斜三次，并将结果取平均值，以确定最终的动态粘度，即不依赖于样品密度的值。对于滚球测量，首先使用DI水和甲醇清洗毛细管。通过测量10cP、50cP和/或100cP Brookfield粘度标准品来确定仪器/毛细管的校准。每次样品测量前和之间将毛细管用DI水和甲醇再次清洁。

使用用Brookfield粘度标准品流体#10和#50校准的DV-III Ultra ProgrammableRheometer进行基于电流计的粘度测量。以不同轴转速(剪切速率)测量0.5mL的各样品。将对于所有剪切速率展示具有＜10％RSD的粘度(cP)读数的样品认为是在该范围符合牛顿学说的(Newtonian)，而将具有剪切速率依赖性粘度的样品认为是非符合牛顿学说的。

使用Anton Paar DMA 4500M Densitometer进行密度测量。简言之，用DI水冲洗仪器若干次，随后用甲醇冲洗。在测量作为样品的水的密度之前，将仪器对空气和水进行校准。再次用水和甲醇洗涤该仪器，并对从几种制剂合并的～175mg/mL的材料进行单次样品测量。报告的值被用作高浓度OMS646制剂的合理密度近似值以用于重量含量测量。

使用凝固点抑制渗透计(Multi-Osmette Osmometer，Precision Systems型号2430)进行重量摩尔渗透压浓度测量，其测量随溶质浓度增加溶液凝固点的降低。

使用液体颗粒计数系统(Hach型号9703，Sensor型号：HRLD-150)来测定OMS646制剂样品中的颗粒大小和丰度。使用单一500μL样品抽取(draw of sample)(200μL皮重体积)获得样品数据。简言之，使仪器升温～30分钟，使用前将注射器(1mL)和系统用去离子水冲洗至少10个循环。通过显示25mL去离子水含有不超过25个大小≥10μm的颗粒来测试环境适用性。通过使用适当的通道尺寸分析单一500μL抽取的2、5、10和15μM标准品来确认系统适用性。如果检测的累计计数/mL落入对于标准品给定的说明，则认为该系统适合于样品测试。在第一样品测量之前，将系统用1x磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗一次，以确保样品在与去离子水接触时不会沉淀。使用单次500μL抽取分析样品，并将2μm、5μm、10μm和25μm通道的累积计数/mL确定为最接近的整数。

尺寸排阻层析(SEC)用于评估OMS646制剂中存在的聚集体和降解产物的量。简言之，Agilent 1100HPLC系统配有G3000SWxl SEC柱(Tosoh，7.8x 300mm，5μm粒径)。在SEC流动相(140mM磷酸钾，75mM氯化钾，pH7.0)中将OMS646制剂样品稀释至2.5mg/mL，并将20μL样品注入HPLC柱。该系统使用0.4mL/min的流速运行，通过在280nm(带宽4nm)的吸收检测洗脱蛋白，且无参考校正。为了评估系统的适用性，所有样品都被流动相空白和凝胶过滤标准品注射包围(bracketed)，且参考材料在序列开始时一式两份注射。除单体百分比和总积分峰面积外，还测定个别和总高分子量(HMW)种类和低分子量(LMW)种类的丰度百分比。

使用SDS-MW分析试剂盒，使用Beckman Coulter PA 800Plus毛细管电泳系统和PDA检测模块进行还原SDS毛细管凝胶(SDS-CE)电泳分析。样品和参照首先在SDS-MW样品缓冲液中稀释至1.0mg/mL。向95μL该工作溶液中加入5μL的β-巯基乙醇和2μL的内标(10kDa)。将所有样品以300×g离心1分钟，在70±2℃下加热～10分钟，并转移到PCR小瓶中并保持在25℃直到分析。通过在毛细管上施加15kV(反极性)30分钟并在入口和出口处施加20.0psi的压力进行分离。在220nm采集数据，采集速率为4Hz。参考(未处理的OMS646)在每个序列的开头注射两次。报告了LC、HC和IgG百分比。

如对于还原CE-SDS所述，进行非还原SDS毛细管凝胶电泳分析，例外是使用新鲜制备的250mM碘乙酰胺代替还原剂，并进行分离35分钟。报告了总电泳图面积和％IgG。

使用如WO2012/151481中所述的重组方法产生OMS646抗体(102mg/mL)的纯化制剂，其由此通过引用并入本文。简要描述，在含有编码OMS646的重链和轻链多肽的表达构建体的CHO细胞中产生OMS646抗体，并使用标准技术纯化。

1.候选缓冲系统的比较：

方法：

在预配制研究中，首先针对一组候选缓冲液(包括通常用于治疗性抗体制剂(柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐)以及更多非常规缓冲液(乙酸盐、琥珀酸盐))以覆盖宽pH范围(pH4.0-pH 8.0)评估MASP-2抑制性抗体OMS646的稳定性。对于此研究，使用Amicon Ultra-4(10kDa MWCO)浓缩器将蛋白交换入20mM琥珀酸盐(pH 4.0、5.0和5.5)、乙酸盐(pH 4.0、5.0和5.5)、柠檬酸盐(pH 5.0、6.0和7.0)、组氨酸(pH 6.0和7.0)和磷酸盐(pH 6.0、7.0和8.0)缓冲液。OMS646抗体的纯化制剂(102mg/mL于20mM乙酸钠、50mg/mL山梨醇，pH5.0)在14种制剂溶液的每一种中稀释至～1mg/mL，并将4.0mL体积置于用适当的缓冲液预冲洗的浓缩器中。每单位以3200×g离心至～1mL。重复该过程总共三轮缓冲液交换。在最后一轮浓缩期间，将蛋白过浓缩至＜1mL。在每个循环后记录每种溶液的近似体积和离心时间。

结果：总体而言，关于缓冲液交换速率、蛋白含量回收率、差示扫描比色法(DSC)、动态光散射(DLS)和化学稳定性，五种缓冲液类型产生的数据是相当的(数据未显示)。选择乙酸盐、柠檬酸盐和组氨酸用于基于在5.5-6.0的pH范围内的表观总体最佳热和构象OMS646性质的进一步评估。主要由于优异的热稳定性，相对于琥珀酸盐在pH 5.5选择乙酸盐，而基于DLS数据在pH 6.0相对于磷酸盐选择组氨酸和柠檬酸盐。

2.赋形剂筛选

使用在基线缓冲液筛选(20mM乙酸盐，pH 5.5；柠檬酸盐，pH6.0和组氨酸，pH6.0)过程中鉴定的缓冲系统，在存在具有报道的抗体稳定性质的各种赋形剂的情况下，评价OMS646的稳定性。对于该研究，使用Amicon Ultra-4(10kDa MWCO)浓缩器将OMS646缓冲液交换到含有150mM NaCl、250mM山梨醇、250mM蔗糖、150mM L-精氨酸、150mM L-谷氨酸或250mM L-脯氨酸的每种候选缓冲液中。样品制备按照缓冲系统比较中所述进行，其中目标蛋白浓度为2.0mg/mL。

结果：

关于蛋白回收率，估计的蛋白回收率范围为～72-106％，这代表相对于没有赋形剂的情况下的回收率的适度改善。对于大多数赋形剂，组氨酸缓冲液似乎是优选的，且乙酸盐和柠檬酸盐显示出混合结果。

关于DSC，观察到柠檬酸盐缓冲液导致对于所测试的所有赋形剂的OMS646热稳定性。图2A图示说明了OMS646制剂赋形剂筛选的动态光散射(DLS)分析的结果，显示了对含有各种候选赋形剂的制剂观察到的总体颗粒直径。图2B图示说明了OMS646制剂赋形剂筛选的DLS分析的结果，显示了对含有各种候选赋形剂的制剂观察到的总体多分散性。如图2A和2B所示，关于DLS，大多数制剂产生可比较的结果。然而，对于所有缓冲系统，蔗糖与升高的多分散性和最大的总体和单体直径相关。在蔗糖之后，山梨醇通过DLS最不优选的，其显示较大的平均尺寸和增加的多分散性。其余制剂通过DLS一般是相当的，单体直径为10-12nm(参见图2A)，且多分散性＜20％，表示单分散群体(参见图2B)。关于针对化学变性的稳定性，如使用AVIA等温化学变性系统所评估的，清楚地观察到缓冲液/pH趋势，其中对于所有测试的赋形剂，乙酸盐pH 5.5制剂在低于柠檬酸盐和组氨酸pH 6.0制剂的尿素浓度～0.5M下变性。柠檬酸盐和组氨酸对于所有赋形剂是相当的。

总而言之，数据支持柠檬酸盐在约6.0的pH下作为最佳缓冲液/pH组合，将其随后进行溶解度筛选研究。鉴于用所有缓冲液类型观察到的差DLS数据，蔗糖被排除在进一步考虑之外。

3.溶解度/粘度筛选

第一粘度研究：

方法：

为了建立最大OMS646溶解度的条件，在NaCl、山梨醇、精氨酸、谷氨酸和脯氨酸的几种等渗组合的存在下，使用20mM柠檬酸盐(pH5.0和6.0)和20mM琥珀酸盐(pH4.0)。使用Amicon 15浓缩器单元以多个循环将OMS646缓冲液交换，并且在最终循环将每一溶液的体积减少至～1mL。记录并分析所有制剂和交换循环的缓冲液交换速率。在缓冲液交换后，测量蛋白含量，计算回收百分比，并将样品在5℃下储存过夜。储存期间，观察到琥珀酸盐/谷氨酸制剂沉淀，其不进一步评估。将剩余制剂加入到Amicon 4浓缩器单元中，并浓缩直至达到目标浓度～200mg/mL，或者直到离心不再导致体积减少和/或样品粘度(通过样品操作)被认为是难以处理的。

结果：

关于缓冲液交换速率，在pH 4.0样品中清楚地观察到最高的交换速率，且琥珀酸盐/山梨醇呈现总体最快的交换速率。在pH 5.0和6.0下的交换速率是相当的，其中仅含有带电荷的氨基酸赋形剂的制剂显示比其他制剂更高的速率。在pH 6.0下观察到柠檬酸盐/山梨醇制剂的最慢交换速率。该制剂是具有pH≥5.0和不带电荷的赋形剂组分的单独样品。假定交换速率是OMS646自缔合的替代指标，似乎带电荷种类对于在更中性的pH下减轻该行为是重要的。关于DLS，除了琥珀酸盐/精氨酸pH 4.0之外(其显示在＞18nM下升高的总体大小分布)，所有高浓度制剂都显示相当的～12nm的总体直径。

将缓冲液交换的样品浓缩，直到溶液由于高粘度而变得物理上不可行。对于两种pH4.0制剂，达到超过225mg/mL的最大浓度。对于在较高pH值的制剂，最大OMS646蛋白浓度范围为160.5-207.6mg/mL。如上所述的使用滚球粘度计用剪切速率为0.5s^-1至1000s^-1评估大多数制剂的粘度。图3图示说明了如在pH 5.0和pH 6.0所测量的在各种制剂中一定范围的蛋白浓度下的OMS646溶解度筛选的粘度分析结果。如图3所示，当对蛋白浓度作图时，在制剂上观察到粘度中的指数增加，且对于柠檬酸盐/精氨酸/谷氨酸pH 5.0记录到最高粘度(对于196.6mg/mL溶液为161.1cP)。在pH 6.0和相当的OMS646蛋白浓度下，柠檬酸盐/山梨醇制剂显示出比山梨醇/谷氨酸或脯氨酸/谷氨酸制剂高得多的粘度。柠檬酸盐/精氨酸/谷氨酸pH 6.0制剂(95.3mg/mL)显示出在较高蛋白含量的柠檬酸盐/NaCl pH6.0样品(87.5mg/mL)的约一半粘度(5.8相对于9.3cP)，表明带电氨基酸相对于离子赋形剂的重要性。

重要的是要注意，在给定的浓度(即125mg/mL)下，粘度作为制剂的函数显著变化。粘度理想地保持在～25cP以下以确保实际可注射的皮下治疗产品。在一些OMS646制剂的实施方案中，粘度保持在约20cP以下，以允许用注射装置递送治疗产品，并且还允许各种类型的生物处理，例如切向流过滤。

第二粘度研究

为了减少OMS646制剂粘度，并从而使给定制剂中的OMS646浓度最大化，进行了另外的研究。根据初步结果，选择最有可能在高浓度下产生降低粘度的制剂的制剂，即：琥珀酸盐/山梨醇pH 4.0和含谷氨酸和精氨酸的柠檬酸盐制剂pH 6.0。根据以前的研究，带电荷的氨基酸在中性pH下与几个有益的性质相关，包括缓冲液交换速率增加、样品处理回收率增加和粘度降低。在一定范围的浓度(50mM至150mM)中评价具有带正电荷侧链氨基酸(例如精氨酸)或带负电荷侧链氨基酸(例如谷氨酸)的影响，以测量对于粘度的赋形剂电荷和浓度。最后，由于如美国专利号7,390,786中所述的CaCl₂的可能的粘度降低特性，将CaCl₂用作等渗和高渗柠檬酸盐/谷氨酸溶液中的添加剂。

将样品进行缓冲液交换并如上所述进行浓缩。缓冲液交换后，计算所有制剂的蛋白含量。例外是含有50mM谷氨酸和50mM CaCl₂的制剂，其在缓冲液交换后沉淀，并且未进一步评价。这可能部分是由于柠檬酸盐和二价阳离子如Ca²⁺的溶解度有限。

结果：

图4图示说明了使用各种候选制剂的OMS646溶解度/粘度研究的缓冲液交换后的蛋白回收百分比。如图4所示，观察到随着精氨酸浓度的增加而回收率增加的趋势，其中150mM精氨酸制剂显示出最高的蛋白回收率为85％。剩余制剂的回收率相当，范围为64-75％。然后如上所述浓缩样品，直到它们变得手工无法操作。如上所述评估所有制剂的粘度，结果如下所示在表3中。

表3：预配制研究的粘度数据概述

如上表3所示，所有制剂的粘度＞70cP，尽管最终浓度范围宽，但观察到明显的趋势。从该初步数据中明显的是精氨酸或谷氨酸浓度增加导致粘度降低。琥珀酸/山梨醇制剂的粘度似乎与150mM氨基酸制剂相当。包含CaCl₂显示粘度降低，其中该制剂的粘度与10％较低蛋白含量样品的相当。

选择四种制剂(表3中显示的S1、S2、S5和S8)进行更详细的粘度分析，其中回收的纯样品在25mg/mL的制剂缓冲液中渐增稀释。图5图示说明了用各种候选制剂的OMS646溶解度/粘度研究的粘度(如由粘度数据的指数拟合测定)相对于蛋白浓度。粘度数据的指数拟合根据Connolly B.等人，Biophysical Journal vol 103：69-78，2012所述方法测定。如图5中所示，150mM谷氨酸和精氨酸制剂显示几乎相同的曲线，其显示出每单位浓度最高的粘度-25cP的粘度等于～150mg/mL OMS646。琥珀酸盐山梨醇制剂表现略好一些，且25cP对应于～160mg/mL的估计OMS646含量。在含CaCl₂的制剂中观察到最低的总粘度，其中25cP的估计含量为～175mg/mL。该分析的最有趣的结果是含有150mM谷氨酸和50mM CaCl₂的高渗制剂显著降低了样品粘度。由于可能的对最高浓度液体制剂的需求，对于二价阳离子的应用和高渗性对粘度降低随后进行了另外的粘度研究。

第三粘度研究

基于上述初始粘度研究的结果，进行另外的研究以确定CaCl₂的表观粘度降低性质是否与二价Ca²⁺或高渗性相关。由于对含有精氨酸制剂观察到的改进的缓冲液交换速率，将主要赋形剂从谷氨酸改变为精氨酸。由于Ca²⁺被柠檬酸盐螯合(其可能导致沉淀)的可能性，进行组氨酸的引入。还评估了样品亚组的pH和表面活性剂对样品粘度的影响，以及CaCl₂和高渗性对琥珀酸盐/山梨醇pH 4.0制剂的影响。如对先前的粘度研究所述，对样品进行缓冲液交换和浓缩。使用如上所述的滚球仪器测量所有制剂的粘度。粘度数据对170mg/mL的样品蛋白浓度进行归一化。这通过首先使用指数回归计算来自测量的蛋白含量的理论粘度对来自柠檬酸盐/精氨酸pH 6.0制剂的之前计算的粘度/溶解度粘度数据(y＝0.0917^e0.0361x)来进行。通过将在170mg/mL的柠檬酸盐/精氨酸pH 6.0的理论粘度(42.4cP)乘以测量的粘度/理论粘度来计算归一化的粘度(参见表4，脚注b)。通过平滑浓度相关变异性，所得到的归一化的粘度显示出更清楚的趋势(参见表4和图6)。

表4.OMS646(170mg/mL)制剂的粘度数据概述

^a使用对测量的含量柠檬酸盐/精氨酸pH 6.0粘度曲线回归计算理论粘度(y＝0.0917^e0.0361x)

^b170mg/mL柠檬酸盐/精氨酸pH 6.0的理论粘度(42.4cP)*(测量粘度/理论粘度)

图6图示说明了基于表4的数据的用各种候选OMS646制剂的粘度研究的浓度归一化粘度数据。如图6和表4所示，对于柠檬酸盐和组氨酸制剂，对归一化数据集的检查清楚地显示高渗性导致样品粘度降低，其中多数影响用仅适度增加精氨酸浓度观察到。例如，制剂12(20mM组氨酸与150mM精氨酸)的归一化粘度为57.7cP，相比于分别含有200和225mM精氨酸的组氨酸制剂的22.3和22.0cP的粘度。对于柠檬酸盐/精氨酸制剂，观察到类似的趋势。包含CaCl₂没有明显的益处。相反，令人惊讶地发现在不存在CaCl₂的情况下，用具有200mM或更高的精氨酸浓度的柠檬酸盐/精氨酸和组氨酸/精氨酸制剂实现低粘度(例如小于25cP)。包含0.05％PS-80导致在pH≥5.0下评估的三种制剂的两种中的实质性粘度降低。最终，pH5.0下的粘度似乎略低于相当的制剂在pH6.0下的粘度。

鉴于从粘度研究获得的结果，高渗精氨酸、存在或不存在二价阳离子和琥珀酸盐/山梨醇pH 4.0制剂随后进入表面活性剂筛选研究以进一步评估对OMS646物理、构象和化学稳定性的影响。

4.表面活性剂筛选

使用本文所述的先前研究中鉴定的候选制剂评价表面活性剂对OMS646稳定性的影响。对于表面活性剂筛选研究，分析如下六种制剂：

20mM柠檬酸盐，200mM精氨酸，pH 5.0

20mM柠檬酸盐，200mM精氨酸，pH 6.0；

20mM琥珀酸盐，250mM山梨醇，pH 4.0；

20mM组氨酸，200mM精氨酸，pH 6.0；

20mM组氨酸，75mM精氨酸/50mM CaCl₂，pH6.0；

20mM组氨酸，75mM精氨酸/50mM MgCl₂，pH6.0

评估上述六种制剂中的每一种，不具有表面活性剂或存在0.01％PS-80，总计十二种独特的制剂条件。对于每种制剂，将OMS646交换入缓冲液交换溶液(无PS-80)，浓缩，测定含量，并将样品归一化至175mg/mL蛋白。然后将每一制剂分开，并将PS-80加入到合适的样品中至终浓度为0.01％(w/v)。

配制的样品各自经受通过搅拌的机械应力和冷冻/融解循环。对于两种类型的应力，将0.5mL样品转移到四个1型硼硅酸盐玻璃小瓶(2.0mL)中并用

塞子密封。对于搅拌应力，将样品在室温下放置在微孔板振荡器中以600rpm持续～60小时。在搅拌应力的持续期间，将搅拌对照样品放置在振荡器旁边。对于冷冻/融解循环，将样品冷冻至-80℃持续≥60分钟，然后在室温下解冻，总共5次冻融循环。施加应力后，将样品保存在2-8℃直到分析。剩余样品保持在2-8℃作为无应力对照。进行外观、A280测量、DLS和SEC以评估表面活性剂对OMS646聚集和稳定性的影响。

结果：

在对六种OMS646制剂施加应力后，没有样品显示与产品相关的颗粒物质的证据。对于给定制剂的所有样品，蛋白含量基本上是恒定的。冷冻/融解和搅拌样品的DLS数据的分析显示，制剂和应力类型之间仅存在细微差别，且关于包含PS-80没有观察到明显的整体趋势。一个例外是琥珀酸盐/山梨醇pH 4.0制剂，其中对于冷冻/融解和5℃对照样品，包含PS-80导致高的整体多分散性(即多峰)。该酸性制剂还通过DLS显示在不存在PS-80的情况下搅拌后的聚集/自缔合的证据。

进行SEC数据分析，以评估在样品施加应力过程中产生的任何聚集和/或降解产物。结果总结在表5A-5D中。

表5A：OMS646制剂表面活性剂筛选的SEC数据概述(2-8℃)

表5B：OMS646制剂表面活性剂筛选的SEC数据概述(冷冻/融解)

表5C：OMS646制剂表面活性剂筛选的SEC数据概述(25℃)

表5D：OMS646制剂表面活性剂筛选的SEC数据概述(搅拌)

如上表5A-5D所示，总体而言，SEC数据表明，OMS646分子通常对包含PS-80以及冷冻/融解(表5B)和搅拌应力(表5D)都不敏感，不管表面活性剂如何。观察到表现最差的OMS646制剂是含有二价阳离子添加剂(CaCl₂和MgCl₂)的那些，其中用于这些样品的高分子量(HMW)材料相对于其他样品明显升高，并且观察到最低水平的单体。

5.施加应力和未施加应力条件下28天的稳定性分析

在通过上述预配制研究缩小可能缓冲液、赋形剂和表面活性剂组合之后，配制柠檬酸盐和组氨酸缓冲液(使用200mM精氨酸在175mg/mL和200mg/mL OMS646的高浓度下在pH范围5.5-6.5下)以鉴定在施加应力(40℃)和未施加应力(5℃)条件下最合适的制剂。由于在该升高的浓度下的粘度降低性质，精氨酸以高渗水平(200mM)包含在内。基于预配制数据的统计学数值优化，最合适的OMS646制剂被确定为20mM柠檬酸盐和200mM精氨酸。还制备了一组样品以评估0.01％PS-80对柠檬酸盐和组氨酸制剂的影响。

如上所述进行缓冲液交换，将样品浓缩并稀释以达到175或200mg/mL OMS646的目标浓度。在该最终归一化过程中，对于适当的制剂将PS-80加入至0.01％。将制剂使用Millipore Ultrafree-CL GV 0.22μM无菌浓缩器进行无菌过滤。将一小瓶的每一制剂放置在5℃，一小瓶放置在40℃持续28天的孵育期。在To和28天时分析样品的浓度、外观、浊度、重量摩尔渗透压浓度、pH、DLS、DSC和粘度。在28天孵育后，观察到在40℃下储存的175和200mg/mL OMS646琥珀酸盐/山梨醇制剂发展为凝胶状稠度，因此没有分析。

结果：

关于稳定性分析，pH值在研究期间保持稳定，无论制剂和储存条件如何。28天后，SEC和SDS-CE分析表明酸性pH 5.0和pH 4.0制剂的LMW含量实质性增加，将这些制剂排除在进一步考虑之外。对于配制有0.01％PS-80的pH 6.0柠檬酸盐/精氨酸和组氨酸/精氨酸，大多数反应与相关的无表面活性剂样品几乎无法区分。然而，SEC显示相对于不含表面活性剂的对应制剂0.2％-0.6％的HMW含量降低。加上表面活性剂的表观降粘特性，选择聚山梨酯-80(PS-80)包含在进一步制剂研究中。

在5℃下28天后测试总共10种制剂的浓度和粘度。代表性结果显示在表6中。

表6.在5℃下28天后的制剂粘度。

如上表6所示，较高浓度制剂显示较高的粘度。相当值得注意的是观察到包含PS-80导致柠檬酸盐(10.6相对于9.0cP)和组氨酸(12.7相对于7.8cP)制剂的粘度降低，同时也保留了蛋白回收。包含PS-80后这种粘度降低是有益的，允许更高浓度的OMS646，同时保持在临床环境中被认为是可灌注的并且也适用于自动注射器和其他注射装置的低粘度。

结果概述

这些研究的主要目的是鉴定将导致液体制剂中高浓度OMS646抗体的最佳化学、物理和结构稳定性的制剂组分。此外，进行了几项粘度特异性研究，目的是获得可通过皮下施用方便递送的具有最大OMS646抗体浓度的最终制剂。

在针对缓冲系统、赋形剂、溶解度、粘度和表面活性剂筛选研究的评估研究过程中，以迭代方式评估了几种缓冲液类型、pH条件、赋形剂和表面活性剂浓度。初始基线缓冲液评估研究测试了5不同的缓冲液类型(乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、组氨酸和磷酸盐)，pH范围为4.0-8.0。通过DSC、DLS和AVIA化学变性体系的分析表明，更酸性和碱性的条件对OMS646抗体的稳定性最不适合。基于该结果，选择乙酸盐、柠檬酸盐和组氨酸缓冲系统进行进一步评价。

赋形剂筛选评估了NaCl、L-精氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸、蔗糖和山梨醇对三种选择的缓冲系统的每一种中OMS646抗体稳定性的影响。柠檬酸盐(pH 6.0)单独进行进一步研究以最大化设计空间进行额外的赋形剂评估。由于光散射数据差，仅淘汰了作为潜在赋形剂的蔗糖。溶解性筛选评估了含有NaCl、山梨醇、精氨酸、谷氨酸和脯氨酸的等渗组合的柠檬酸盐(pH 5.0和pH 6.0)制剂支持高溶液浓度的OMS646抗体的能力。所有制剂浓缩超过150mg/mL OMS646，没有聚集迹象。然而，琥珀酸盐/精氨酸和琥珀酸盐/谷氨酸制剂显示短期储存后的沉淀/聚集迹象并没有进一步评估。柠檬酸盐制剂的生物物理分析显示在pH6.0下的赋形剂之间仅有微小的差异并且在对应pH 5.0制剂中的HMW含量的仅适度降低。

有趣的数据来自这个样品亚组的粘度测量，其表明柠檬酸盐/谷氨酸和琥珀酸盐/山梨醇赋予了最低的粘度。由于在赋形剂之间观察到的类似生物物理稳定性和获得具有最大OMS646含量的制剂的重要性，进行另外的粘度研究。这些粘度研究鉴定了二价阳离子和/或适度的高渗性作为在更中性pH下降低OMS646抗体制剂粘度的重要因素。在200mM精氨酸存在下评价柠檬酸盐(pH5.0和6.0)和组氨酸(pH6.0)。还在75mM精氨酸和50mM CaCl₂或50mM MgCl₂的存在下评价组氨酸pH 6.0。最后，测试琥珀酸盐/山梨醇pH 4.0。所有缓冲液/赋形剂组合在不存在或存在0.01％PS-80下测试，以确定表面活性剂是否在搅拌和冷冻/融解应力条件下促进OMS646抗体的稳定性。所有制剂对施加的环境应力表现出稳定，而不管表面活性剂如何。一个引人注目的观察结果是通过SEC对于含有二价阳离子的制剂观察到的OMS646HMW含量的增加。因此，排除CaCl₂和MgCl₂作为赋形剂来进一步考虑。琥珀酸盐/山梨醇还显示降低OMS646抗体纯度，主要是由于LMW杂质明显增加。尽管在含有0.01％PS-80和不含有0.01％PS-80的制剂之间的差异较小，但含有表面活性剂的样品的确似乎显示出相对于其无表面活性剂的对应样品的适度增加的HMW含量(～0.1％)。

实施例3

该实施例描述了一项研究，其中将根据实施例2中所述的预配制研究鉴定的三种候选高度浓缩、低粘度OMS646制剂就可灌注性进行比较。

背景/原理：

手动注射所需的时间和力量(或使用自动注射器进行注射所需的时间)是重要的，并可能会影响终端用户对产品的易用性，从而影响到依从性。溶液通过预定规格和长度的针以给定的注射速率进行注射所需的力被称为“可灌注性”(参见例如，Burckbuchler，V.；等人，Eur.J.Pharm.Biopharm.76(3)，351-356，2010)。关于向人主体施用的可灌注性，通常不希望超过25N的力(尽管有市售的制剂比这更粘稠)。一般认为27GA针或27GA薄壁针是用于皮下注射单克隆抗体的标准针。27GA薄壁针具有大致等于25GA针的ID(较小的G数直径较大)。

进行以下研究以确定三种候选高浓度低粘度OMS646制剂的可灌注性。

方法：

基于实施例2中描述的预配制研究，选择以下三种候选高浓度OMS646制剂并进一步研究，如表7所示。在该实施例中，使用精氨酸盐酸盐、聚山梨酯80(如果说明)和柠檬酸三钠或组氨酸制备制剂，且使用盐酸将pH调节至约5.8至6.0。

表7：候选高浓度OMS646制剂

1.OMS646候选制剂的重量摩尔渗透压浓度和粘度

使用实施例2中所述的方法测定如表7所示产生的三种候选制剂的重量摩尔渗透压浓度和粘度。如果测试到相对于剪切速率％RSD＞10，则该制剂的流体行为被认为是不符合牛顿学说的。结果呈现在表8中。

表8.重量摩尔渗透压浓度和粘度

2.OMS646候选制剂的可灌注性

方法：

使用27GA(1.25″)、25GA(1″)和25GA薄壁(1″)针进行三种OMS646制剂关于平均载荷和最大载荷的可灌注性分析。每个制剂的一式三份重复一次注射一份。可灌注性样品的结果是三次重复的平均值。

结果：

使用27GA(1.25″)、25GA薄壁(1″)和25GA(1″)针来评估表7所示的三种制剂(含有185mg/mL的OMS646)的可灌注性。报告结果是一式三份重复的平均值。结果示于表9中，并在图7A和7B中图示显示。图7A图示说明了使用27GA、25GA和25GA薄壁针的三种候选OMS646制剂的平均载荷(lbf)。图7B图示说明了使用27GA、25GA和25GA薄壁针的三种候选OMS646制剂的最大载荷(lbf)。

表9.候选高浓度OMS646制剂的可灌注性

如上所述，关于向人主体施用的可灌注性，通常不希望超过25N的力。如上表9所示，所有三种候选高浓度OMS646制剂当通过25G或25GA薄壁注射器注射时，都具有可接受的可灌注性(即，不超过25N的力)。当通过27G针注射时，制剂#2也具有可接受的可灌注性。加入PS-800.01％引起可灌注性的意想不到的改善。

3.注射后OMS646候选制剂的SEC分析

尺寸排阻层析(SEC)用于评估注射后三种OMS646候选制剂中存在的聚集体和降解产物的量。简言之，Agilent 1100 HPLC系统配有G3000SWxl SEC柱(Tosoh，7.8x300mm，5μm粒径)。在SEC流动相(140mM磷酸钾，75mM氯化钾，pH7.0)中将OMS646样品稀释至2.5mg/mL，并将20μL样品注射入HPLC柱。该系统使用0.4mL/min的流速运行，和通过在280nm(带宽4nm)的吸收检测洗脱的蛋白，无参考校正。为了评估系统的适用性，所有样品都被流动相空白和凝胶过滤标准品注射包围，且参考材料在序列开始时一式两份注射。除单体百分比和总积分峰面积外，还报道了个别和总高分子量(HMW)种类和低分子量(LMW)种类的百分比丰度。

结果：

注射后高浓度OMS646候选制剂的SEC分析结果显示于表10中。

表10.注射后高浓度OMS646制剂的SEC分析

这些结果显示在经针排出后通过SEC的纯度几乎没有变化或无变化。

结果概述：可灌注性分析结果表明，所有三种候选高浓度OMS646制剂在使用适合于皮下施用的针进行测试时均具有可接受的可灌注性，并且经针排出后OMS646的纯度几乎没有变化或无变化。添加PS-800.01％提供了含柠檬酸盐精氨酸制剂的可灌注性的意想不到的改善。

实施例4

本实施例描述了在长期储存期间进行的以评估候选高浓度低粘度OMS646抗体制剂的稳定性的研究。

方法：

进行这项研究以评估用于皮下注射的高浓度OMS646抗体制剂在长期储存后的稳定性。

两种候选制剂如下评估：

A)20mM柠檬酸盐，200mM精氨酸，0.01％PS-80，pH5.8(185mg/mL OMS646)

B)20mM组氨酸，200mM精氨酸，0.01％PS-80，pH 5.9(185mg/mL OMS646)

将样品装入13mm、2mL尺寸的USP Type I Schott Glass Tubing Vials(WestPharmaceuticals)中，用1.0mL样品填充，用13mm Fluorotec塞子(West Pharmaceuticals)密封，并用带有纽扣的13FO铝盖(West Pharmaceuticals或等同的)盖上。样品瓶在储存-75±10℃、-20±5℃、5±3℃、25±2℃/60±5％RH和40±2℃/75±5％RH下的控温大型稳定室(controlled temperature reach-in stability chambers)中。本研究中存储每种制剂至少40个样品瓶的目标物。作为液体储存的样品以倒置方式储存，而冷冻样品直立储存。在相关的时间点和条件下拉出所需数量的小瓶，并通过以下方法对样品进行表征：通过目视检查的外观、通过A280的蛋白含量、重量摩尔渗透压浓度、SEC-HPLC、pH和MASP-2ELISA。示例性的SEC-HPLC数据总结在表11中，并且表明OMS646抗体在5℃下储存6个、9个和12个月后保持其完整性。ELISA数据证实，该抗体在5℃下储存6个、9个和12个月后保留其功能性。

结果：本研究的结果总结在下表11中。

表11.如通过SEC分析的制剂稳定性

如表11所示，在-20℃下储存高至9个月的样品中或在5℃下储存高至12个月(预期的储存温度)的样品中观察到纯度几乎没有变化或没有变化。在25℃下储存的样品的纯度经2个月还保持，然而，在25℃下9个月的储存后观察到纯度的略微变化。

实施例5

通过将OMS646(185mg/mL)与柠檬酸盐(20mM)、精氨酸(200mM)和聚山梨酯80(0.01％)组合，制备pH5.8下含有MASP-2抑制性抗体OMS646的示例性制剂。将柠檬酸钠二水合物(4.89mg/mL)和柠檬酸一水合物(0.71mg/mL)用于制备柠檬酸盐缓冲液，使用盐酸和/或氢氧化钠根据需要调节pH。

用毛细管粘度计测定该制剂的粘度，结果如表12所示。在较高的剪切速率下粘度略有降低，且所有值均低于13cP。

表12：在不同剪切速率下测量的示例性OMS646制剂的粘度

尽管已经说明和描述了本发明的优选实施方案，但是应当理解，可以对其中所公开的制剂和方法进行各种改变，而不会背离本发明的精神和范围。因此，旨在在此承认的专利文本的范围仅受所附权利要求的定义的限制。

根据前述内容，本发明的特征在于以下实施方案。

1.适合于肠胃外施用至哺乳动物主体的稳定的药物制剂，其包含：

(a)包含具有5.0-7.0的pH的缓冲系统的水溶液；和

(b)以约50mg/mL至约250mg/mL的浓度的特异性结合人MASP-2的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含(i)含有SEQ ID NO：2的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的轻链可变区，或其包含具有与SEQ ID NO：2的至少95％同一性的重链可变区和具有与SEQ ID NO：3的至少95％同一性的轻链可变区的变体；

其中所述制剂具有2-50厘泊(cP)的粘度，且其中所述制剂当存储在2℃-8℃下至少一个月是稳定的。

2.段落1的药物制剂，其中所述制剂中抗体的浓度为约100mg/mL至约225mg/mL。

3.段落1的药物制剂，其中所述制剂中抗体的浓度为约150mg/mL至约200mg/mL。

4.段落1的药物制剂，其中所述制剂中抗体的浓度为约或约175mg/mL至约195mg/mL。

5.段落1或段落2的药物制剂，其中所述制剂的粘度为约2cP至约40cP。

6.段落1或段落2的药物制剂，其中所述制剂的粘度为约2cP至约30cP。

7.段落1或段落2的药物制剂，其中所述制剂的粘度为约2cP至约25cP。

8.段落1或段落2的药物制剂，其中所述制剂的粘度为约2cP至约20cP。

9.段落1或段落2的药物制剂，其中所述制剂的粘度为约2cP至约18cP。

10.段落1-9中任一段的药物制剂，其中所述缓冲系统包含具有在制剂pH的2个pH单位内的酸离解常数的至少一种药学上可接受的缓冲剂。

11.段落1-10中任一段的药物制剂，其中所述缓冲系统包含选自琥珀酸盐、组氨酸和柠檬酸盐的至少一种缓冲剂。

12.段落11的药物制剂，其中所述至少一种缓冲剂是组氨酸或柠檬酸盐。

13.段落1-12中任一段的药物制剂，其中所述至少一种缓冲剂是柠檬酸盐。

14.段落13的药物制剂，其中所述至少一种缓冲剂是柠檬酸钠。

15.段落1-12中任一段的药物制剂，其中所述至少一种缓冲剂是组氨酸。

16.段落15的药物制剂，其中所述至少一种缓冲剂是L-组氨酸。

17.段落13的药物制剂，其中柠檬酸盐以10mM-50mM的浓度存在于所述溶液中。

18.段落15的药物制剂，其中组氨酸以10mM-50mM的浓度存在于所述溶液中。

19.段落1-18中任一段的药物制剂，其中所述药物制剂进一步包含选自蛋白、氨基酸、糖、多元醇、盐、脂肪酸和磷脂的至少一种赋形剂。

20.段落19的药物制剂，其中所述至少一种赋形剂是以足以使所述制剂为高渗的量的张力调节剂。

21.段落20的药物制剂，其中所述张力调节剂选自具有带电荷的侧链的氨基酸、糖或其他多元醇和盐。

22.段落21的药物制剂，其中所述张力调节剂为糖或其他多元醇并且选自蔗糖、海藻糖、甘露醇和山梨醇。

23.段落21的药物制剂，其中所述张力调节剂为选自NaCl或氨基酸的盐的盐。

24.段落21的药物制剂，其中所述张力调节剂是具有带电荷的侧链的氨基酸。

25.段落24的药物制剂，其中所述具有带电荷的侧链的氨基酸以约150mM至约300mM的浓度存在于所述制剂中。

26.段落24或25的药物制剂，其中所述张力调节剂是具有带负电荷的侧链的氨基酸。

27.段落24或25的药物制剂，其中所述张力调节剂赋形剂是具有带正电荷的侧链的氨基酸。

28.段落26的药物制剂，其中所述张力调节剂是谷氨酸。

29.段落27的药物制剂，其中所述张力调节剂是精氨酸。

30.段落29的药物制剂，其中所述张力剂是L-精氨酸HCl。

31.段落29的药物制剂，其中精氨酸以200mM-300mM的高渗水平存在于所述溶液中。

32.段落17的药物制剂，其中所述溶液包含约20mM柠檬酸盐并具有约5.5至约6.5的pH。

33.段落32的药物制剂，其中所述溶液进一步包含约200mM浓度的精氨酸。

34.段落18的药物制剂，其中所述溶液包含约20mM组氨酸并具有约5.5至约6.5的pH。

35.段落34的药物制剂，其中所述溶液进一步包含约200mM浓度的精氨酸。

36.段落1-35中任一段的药物制剂，其中所述溶液进一步包含约0.001％(w/v)至约0.1％(w/v)的浓度的表面活性剂。

37.段落36的药物制剂，其中所述表面活性剂是非离子表面活性剂。

38.段落37的药物制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨酯或泊洛沙姆。

39.段落38的药物制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨酯80。

40.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述制剂当储存在2℃-8℃下至少6个月是稳定的。

41.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述制剂当储存在2℃-8℃下至少12个月是稳定的。

42.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述粘度小于约25cP。

43.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述粘度小于约20cP。

44.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述粘度小于约18cP。

45.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述制剂当在室温下经27GA 1.25″针注射时的注射滑行力为约25牛顿或更低。

46.段落1-39中任一段的药物制剂，其中所述制剂当在室温下经25GA1″针注射时的注射滑行力为约20牛顿或更低。

47.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

约20mM柠檬酸钠、约200mM L-精氨酸HCl，其中所述制剂中抗体的浓度为约175mg/mL至约195mg/mL，并且其中所述粘度小于约25cP。

48.段落47的药物制剂，其中所述制剂进一步包含0.001％w/v-0.05％w/v聚山梨酯80。

49.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

约20mM L-组氨酸、约200mM L-精氨酸HCl，其中所述制剂中抗体的浓度为约175mg/mL至约195mg/mL，并且其中所述粘度小于约25cP。

50.段落49的药物制剂，其中所述制剂进一步包含0.001％w/v-0.05％w/v聚山梨酯80。

51.段落1-50中任一段的药物制剂，其中所述制剂是无菌的。

52.段落1-50中任一段的药物制剂，其中所述单克隆抗体是全长单克隆抗体。

53.段落52的药物制剂，其中所述抗体是人IgG4全长抗体。

54.段落53的药物制剂，其中所述IgG4包含铰链区中的突变。

55.段落1-54中任一段的药物制剂，其中所述制剂不包含蔗糖或山梨醇。

56.段落1-54中任一段的药物制剂，其中所述制剂不包含CaCl₂。

57.段落1-54中任一段的药物制剂，其中所述制剂不包含MgCl₂。

58.段落1-54中任一段的药物制剂，其中所述制剂不包含CaCl₂且其中所述制剂不包含MgCl₂。

59.段落1-54中任一段的药物制剂，其中所述制剂不包含二价阳离子添加剂。

60.段落1-59中任一段的药物制剂，其中所述抗体浓度是约185mg/mL。

61.段落1-60中任一段的药物制剂，其中所述制剂进一步包含以皮下施用后有效增加抗体的分散和/或吸收的量的透明质酸酶。

62.段落61的药物制剂，其中所述制剂包含约100U/mL至约20,000U/mL的所述透明质酸酶。

63.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

(a)浓度为约0.01-约0.08％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约150mM至约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约10mM至约50mM的柠檬酸钠；和

(d)约150mg/mL至约200mg/mL的所述抗体。

64.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

(a)浓度为约0.01-约0.08％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约150mM至约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约10mM至约50mM的L-组氨酸；和

(d)约150mg/mL至约200mg/mL的所述抗体。

65.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

(a)浓度为约0.01w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约20mM的柠檬酸钠；和

(d)约175mg/mL至约195mg/mL的所述抗体。

66.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

(a)浓度为约0.01％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约20mM的L-组氨酸；和

(d)约175mg/mL至约195mg/mL的所述抗体。

67.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

(a)浓度为约0.01％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约20mM的柠檬酸钠；和

(d)约175mg/mL至约195mg/mL的所述抗体。

68.段落1的药物制剂，其中所述制剂包含：

(a)浓度为约0.01％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约20mM的L-组氨酸；和

(d)约175mg/mL至约195mg/mL的所述抗体。

69.段落63-68中任一段的药物制剂，其中所述制剂进一步包含皮下施用后有效增加抗体的分散和/或吸收的约100U/mL至约20,000U/mL的透明质酸酶。

70.适合于肠胃外施用至哺乳动物主体的稳定的含水药物制剂，所述制剂基本上由以下组成：

(a)浓度为约0.01-约0.08％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约150mM至约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约10mM至约50mM的柠檬酸钠；和

(d)以约150mg/mL至约200mg/mL的浓度的特异性结合人MASP-2的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含(i)含有SEQ ID NO：2的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的轻链可变区，或其包含具有与SEQ ID NO：2的至少95％同一性的重链可变区和具有与SEQ ID NO：3的至少95％同一性的轻链可变区的变体；

其中所述制剂具有约5.0至约7.0的pH、2-50厘泊(cP)的粘度，且其中所述制剂当存储在2℃-8℃下至少一个月是稳定的。

71.适合于肠胃外施用至哺乳动物主体的稳定的含水药物制剂，所述制剂基本上由以下组成：

(a)浓度为约0.01-约0.08％w/v的聚山梨酯80；

(b)浓度为约150mM至约200mM的L-精氨酸HCl；

(c)浓度为约10mM至约50mM的L-组氨酸；和

(d)以约150mg/mL至约200mg/mL的浓度的特异性结合人MASP-2的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含(i)含有SEQ ID NO：2的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的轻链可变区，或其包含具有与SEQ ID NO：2的至少95％同一性的重链可变区和具有与SEQ ID NO：3的至少95％同一性的轻链可变区的变体；

其中所述制剂具有约5.0至约7.0的pH、2-50厘泊(cP)的粘度，且其中所述制剂当存储在2℃-8℃下至少一个月是稳定的。

72.段落1-71中任一段的制剂，其中所述抗体或其片段包含含有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的轻链可变区。

73.密封的容器，其包含段落1-72中任一段的制剂。

74.皮下施用装置，其在其中包含段落1-72中任一段的制剂。

75.试剂盒，其包含：含有段落1-72中任一段的包含MASP-2抗体的药物制剂的预填充容器和用于使用所述制剂的说明书。

76.段落75的试剂盒，其中所述预填充容器选自：注射器、笔式注射器、密封小瓶、自动注射器和泵装置(例如，体表贴片泵或系留泵)。

77.试剂盒，其包含：

(a)含有段落1-60或段落63-72中任一段的包含MASP-2抗体的药物制剂的第一预填充容器；

(b)含有皮下施用后有效增加所述MASP-2抗体的分散和/或吸收的量的透明质酸酶的第二预填充容器；和

(c)使用说明书。

78.段落77的试剂盒，其中所述第一或第二预填充容器的至少一种选自：注射器、笔式注射器、密封小瓶、自动注射器和泵装置(例如，体表贴片泵或系留泵)。

79.适合于肠胃外施用于人的药物单位剂型，其包含在合适容器中的根据段落1-72中任一段的制剂。

80.治疗患有顺从于用MASP-2抑制性抗体治疗的疾病或病症的主体的方法，其包括向有需要的主体施用段落1-72中任一段的制剂。

81.段落80的方法，其中所述制剂皮下施用于所述主体。

82.段落80的方法，其中所述方法进一步包括向所述主体施用有效增加抗体的分散和/或吸收的量的透明质酸酶。

83.段落82的方法，其中将所述透明质酸酶与包含MASP-2抑制性抗体的制剂同时施用。

84.段落82或83的方法，其中所述制剂包含MASP-2抑制性抗体和透明质酸酶。

85.段落82的方法，其中将所述透明质酸酶在包含MASP-2抑制性抗体的制剂之前施用于主体。

86.段落82的方法，其中将所述透明质酸酶在包含MASP-2抑制性抗体的制剂之后施用于主体。

87.段落80的方法，其中所述制剂经其中含有所述制剂的预填充注射器施用。

88.抑制患有补体相关疾病或病症或处于发生补体相关疾病或病症的风险中的主体中的MASP-2依赖性补体活化的方法，其包括向有需要的主体施用段落1-72中任一段的制剂。

89.段落88的方法，其中所述制剂皮下施用于所述主体。

90.段落79的方法，其中所述制剂经其中含有所述制剂的预填充注射器施用。

91.段落88的方法，其中所述主体患有选自以下的补体相关疾病或病症或者处于发生选自以下的补体相关疾病或病症的风险中：血栓性微血管病(TMA)、肾脏疾病、组织或器官移植引起的炎症反应、缺血再灌注损伤、与糖尿病相关的并发症、心血管疾病或病症、炎症性胃肠失调、肺部病症、眼科疾病或病症以及弥散性血管内凝血。

92.段落91的方法，其中所述血栓性微血管病是非典型溶血综合征(aHUS)。

93.段落91的方法，其中所述血栓性微血管病与造血干细胞移植物相关。

94.段落91的方法，其中所述肾脏疾病是IgA肾病。

95.段落91的方法，其中所述肾脏疾病是狼疮性肾炎。

96.抑制患有补体相关疾病或病症或处于发生补体相关疾病或病症的风险中的主体中的MASP-2依赖性补体活化的方法，其包括将段落1-72中任一段的制剂稀释到药学上可接受的稀释剂中并将稀释后的制剂全身施用于有需要的主体。

97.段落96的方法，其中将所述稀释的制剂静脉内施用于所述主体。

98.段落96的方法，其中所述主体患有选自以下的补体相关疾病或病症或者处于发生选自以下的补体相关疾病或病症的风险中：血栓性微血管病(TMA)、肾脏疾病、组织或器官移植引起的炎症反应、缺血再灌注损伤、与糖尿病相关的并发症、心血管疾病或病症、炎症性胃肠失调、肺部病症、眼科疾病或病症以及弥散性血管内凝血。

99.段落98的方法，其中所述血栓性微血管病是非典型溶血综合征(aHUS)。

100.段落98的方法，其中所述血栓性微血管病与造血干细胞移植物相关。

101.段落98的方法，其中所述肾脏疾病是IgA肾病。

102.段落98的方法，其中所述肾脏疾病是狼疮性肾炎。

103.药物组合物，其用于治疗患有MASP-2依赖性补体相关疾病或病症或处于发生MASP-2依赖性补体相关疾病或病症的风险中的患者，其中所述组合物为无菌、单次使用剂型，其包含约350mg至约400mg的MASP-2抑制性抗体，其中所述组合物包含约1.8mL至约2.2mL的185mg/mL抗体制剂，其中所述抗体包含(i)含有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的重链可变区和(ii)含有SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的轻链可变区，且其中所述组合物当存储在2℃-8℃下至少六个月是稳定的。

104.段落103的组合物，其中所述组合物包含具有5.0-7.0的pH的缓冲系统。

105.段落104的组合物，其中所述缓冲系统包含选自琥珀酸盐、组氨酸和柠檬酸盐的至少一种药学上可接受的缓冲剂。

106.段落103的组合物，其中所述组合物包含1.8mL-2.2mL的185mg/mL段落1-72中任一段的MASP-2抑制性抗体制剂。

107.段落103-107中任一段的组合物，其中所述MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是aHUS。

108.段落103-107中任一段的组合物，其中所述MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是HSCT-TMA。

109.段落103-107中任一段的组合物，其中所述MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是IgAN。

110.段落103-107中任一段的组合物，其中所述MASP-2依赖性补体相关疾病或病症是狼疮性肾炎(LN)。

尽管已经说明和描述了本发明的优选实施方案，但应理解可以对其进行各种改变而不背离本发明的精神和范围。

其中要求保护专有所有权或特权的本发明的实施方案限定如下：

Claims (10)

1.适合于通过注射施用至哺乳动物主体的稳定的药物制剂，其包含：

(a)包含具有5.0-7.0的pH的缓冲系统的水溶液，其中所述缓冲系统包含选自浓度为10mM-50mM的柠檬酸盐或浓度为10mM-50mM的组氨酸的至少一种缓冲剂；

(b)特异性结合人MASP-2且是由两个具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的相同重链和两个具有SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的相同轻链组成的四聚体的单克隆抗体，且所述抗体的浓度为50mg/mL-250mg/mL；和

(c)以足以使所述制剂为高渗的量的张力调节剂，其中所述张力调节剂为浓度为200mM-300mM的精氨酸；

(d)0.001％(w/v)至0.1％(w/v)的浓度的选自聚山梨酯或泊洛沙姆的非离子表面活性剂；

其中所述制剂具有25℃下剪切速率在100,000至250,0001/秒的范围内测量的2-50厘泊(cP)的粘度，且其中所述制剂当存储在2℃-8℃下至少六个月是稳定的。

2.权利要求1的药物制剂，其中所述制剂不包含蔗糖、山梨醇或二价阳离子添加剂。

3.权利要求1的药物制剂，其中所述制剂中抗体的浓度为175mg/mL至195mg/mL。

4.权利要求1的药物制剂，其中所述至少一种缓冲剂为以10mM-50mM的浓度存在于所述溶液中的柠檬酸钠。

5.权利要求4的药物制剂，其中所述溶液包含20mM柠檬酸盐并具有5.5至6.5的pH，且其中所述溶液进一步包含200mM浓度的精氨酸。

6.权利要求1的药物制剂，其中所述聚山梨酯是聚山梨酯80。

7.权利要求1的药物制剂，其中所述制剂包含：

20mM柠檬酸钠、200mM L-精氨酸HCl，其中所述制剂中抗体的浓度为175mg/mL至195mg/mL，并且其中所述粘度小于25cP。

8.权利要求7的药物制剂，其中所述制剂进一步包含0.001％w/v-0.05％w/v聚山梨酯80。

9.权利要求1的药物制剂，其中所述制剂是无菌的。

10.权利要求1的药物制剂，其中适用以下的一种或多种：

(a)其中所述制剂不包含蔗糖或山梨醇；

(b)其中所述制剂不包含CaCl₂；

(c)其中所述制剂不包含MgCl₂；

(d)其中所述制剂不包含CaCl₂且其中所述制剂不包含MgCl₂；和/或

(e)其中所述制剂不包含二价阳离子添加剂。

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